CN100363384C - 草栽灵芝多糖肽及其提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种多糖类及制备，特别涉及一种草栽灵芝多糖肽，用于提取的原料是草栽灵芝，提取方法的具体步骤为：1.利用菌草栽培灵芝产生子实体，洗清、干燥、破碎；2.用乙醇回流后热水提取；3.将水提取液浓缩；4.用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物；5.用95%乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第一多糖肽沉淀物3次；6.离心，去上清液；7.沉淀物低温干燥得粗多糖肽。采用草栽灵芝提取灵芝多糖肽，成本低，提取率高，同时避免了大量砍伐树木而导致的生态平衡的破坏，且经本方法提取的灵芝多糖纯度也很高。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖类及制备，特别涉及一种草栽灵芝多糖肽及其提取方法。
背景技术
现有技术普遍认为草栽灵芝的药理活性与化学成分不如段木灵芝，特别是具有药用价值的多糖活性成分含量低，无实际提取价值，因此现有技术只采用段木灵芝提取灵芝多糖，而排斥使用草栽灵芝，我国每年栽培段木灵芝要消耗11多万立方米的木材，显然对生态环境的影响是很大的，栽培灵芝成本也较高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，而提供一种成本低，提取率高的草栽灵芝多糖肽及其提取方法。
本发明的目的可以经如下途径来实现。
草栽灵芝多糖肽，其要点在于，用于提取的原料是草栽灵芝，且该草栽灵芝多糖肽重均分子量(MW)为45万～54万，其可由如下提取方法获得：利用菌草栽培灵芝产生子实体，洗清、干燥、破碎，用乙醇回流后热水提取，将水提取液浓缩，用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物，用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第一多糖肽沉淀物3次，离心，去上清液，沉淀物低温干燥得粗多糖肽，将粗多糖溶于蒸馏水，放置于透析袋内，逆流透析48小时得透析液，用乙醇沉淀透析液得第二多糖肽沉淀物，用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第二多糖肽沉淀物3次，离心，去上清液，沉淀物低温干燥得多糖肽。
本发明采用草栽灵芝提取灵芝多糖肽，是因为采用草栽灵芝提取灵芝多糖肽比段木灵芝提取灵芝多糖肽的提取率要提高2倍多，而其余的成分，如蛋白质，多肽，氨基酸的含量几乎一致，这显然可以提高灵芝的药用价值，在相同提取工艺的条件下，成本大为下降，故而可以具有更高的社会经济效益，这是现有技术的一大改进，现有思维定势的一大突破，是克服技术偏见的发明。
栽培草栽灵芝所采用的培养物是采用野生的或人工栽培的禾本科或草本植物，而段木灵芝则需消耗大量的木材，这同我国乃至整个世界提倡保护环境，保持生态平衡的原意是格格不入的。
同时采用草栽灵芝提取的灵芝多糖肽中具有清除氧自由基、抗脂质过氧化作用及增强机体免疫功能等作用。
经研究表明灵芝多糖肽中起药理活性的主要是大分子多糖，故而可以得出结论，草栽灵芝的药理活性不会比段木灵芝差，甚至会更强。
草栽灵芝多糖肽中的多糖组成为鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，上述各糖的摩尔比为0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
草栽灵芝多糖肽中不含有小分子糖(单糖)甘露糖，而段木灵芝多糖肽中糖组分除了含有上述五种糖类外，还多含了甘露糖。
可采用如下提取方法来提取草栽灵芝多糖肽，具有如下步骤，
1.利用菌草栽培灵芝产生子实体，洗清、干燥、破碎，
2.用乙醇回流后热水提取，
3.将水提取液浓缩，
4.用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物，
5.用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第一多糖肽沉淀物3次，
6.离心，去上清液，
7.沉淀物低温干燥得粗多糖肽，
8.将粗多糖溶于蒸馏水，
9.放置于透析袋内，
10.逆流透析48小时得透析液，
11.用乙醇沉淀透析液得第二多糖肽沉淀物，
12.用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第二多糖肽沉淀物3次，
13.离心，去上清液，
14.沉淀物低温干燥得多糖肽。
本发明改变传统的某些工艺步骤，增加了透析这道工艺以除去低分子量多糖和杂质。一般认为灵芝多糖的药理活性来自于所含的大分子多糖，所以提取时所采用的工艺就必需满足尽量留住大分子多糖，去除了不具有药理活性的小分子多糖及杂质，而透析则刚好可以满足此项要求，提高大分子多糖的提取率。
将粗多糖肽提取纯化可以得到纯度高的多糖肽，因此，服用时可以减少用量。
本发明进一步讲还在于破碎步骤具体为：将草栽灵芝破碎成烟丝状。
显然成烟丝状的破碎物要比段木灵芝破碎后成块状更细、更容易提取，提取率自然就可以高些。
本发明用乙醇回流后热水提取的具体步骤为，
1.用95％的乙醇回流3小时，
2.回收乙醇，
3.灵芝粉碎物用热水提取3次。
用乙醇回流的目的是先去除部分的脂肪和小分子多糖及杂质。乙醇的体积(毫升)同灵芝粉碎物质量(克)的比例为(10～13)∶1。
而热水提取的具体方法为用15倍于灵芝粉碎物的水加热提取3次，提取3次的时间分别为2.5小时、2小时、1小时，然后将过滤后的水提取液合并备用。
将水提取液浓缩的具体步骤为，
1.在90℃的温度下浓缩至原体积的十分之一，
2.再离心分离，
3.将上清液浓缩。
离心的速度为3000r/min，时间为15min；上清液浓缩至相当于每毫克含灵芝生药量1克为标准。
用乙醇沉淀第一多糖肽及第二多糖肽的具体步骤为，
1.加入三倍量于浓缩液的95％沉淀，
2.搅拌，5℃左右静置得第一沉淀物，
3.将第一沉淀物再离心得第二沉淀物。
灵芝多糖的分离纯化采用的是乙醇沉淀法，本发明采取的两次纯化都是乙醇沉淀法。离心的速度为3000r/min，时间为15min。第一次纯化时必需反复采用上述步骤两次，也就是提纯两次得第一多糖肽即粗多糖肽。而第二次纯化只采用一次即可得第二多糖肽即多糖肽，本方法在利用现有技术的基础上，采用了两次提纯的方法，从而大大提高了灵芝多糖的纯度。
本发明进一步讲还在于低温干燥的温度为5℃。
采用低温干燥是为了避免高温干燥所引起的灵芝有效成分结构的破坏而导致的药理活性的大幅度降低。
灵芝既可以是灵芝鲜品，也可是灵芝干品。
本发明较之现有技术具有如下优点：采用草栽灵芝代替段木灵芝提取灵芝多糖肽，成本低，提取率高，同时避免了大量砍伐树木而导致的生态平衡的破坏，且经本方法提取的灵芝多糖纯度也很高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的描述。
最佳实施例：
1.挑选草栽灵芝，清洁、干燥、破碎，
将灵芝干品子实体清洁后，烘干，用粗颗粒粉碎机破碎成20目左右的烟丝状物质。
2.用乙醇回流后热水提取，
称取300克的已经粉碎的灵芝，
1)用95％的乙醇3000～4000毫升回流3小时，
2)回收乙醇，干燥灵芝醇及丝状物，
3)灵芝醇及粉碎物用其15倍量的热水回流提取3次，时间分别为2.5小时、2小时、1小时，并合并过滤后的水提取液。
3.将水提取液浓缩，
1)在90℃的温度下浓缩至原体积的十分之一，
2)再用速度为3000r/min，时间为1 5min的离心机进行离心分离，
3)将上清液浓缩至相当于每毫升含灵芝生药量1克为标准。
4.用乙醇沉淀粗多糖肽，
1)用三倍量于浓缩液的95％乙醇沉淀，
2)搅拌，恒温5℃静置得第一沉淀物，
3)将第一沉淀物再离心得第二沉淀物，
4)将第二沉淀物溶于适量的蒸馏水，
5)将此溶液用2～3倍量的95％乙醇沉淀，
6)搅拌，5℃左右静置24小时得第三沉淀物，
7)将第三沉淀物再离心得第一多糖肽沉淀。
5.将第一多糖肽沉淀用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤3次，
6.用速度为3000r/min，时间为15min的离心机进行离心分离，去上清液，
7.沉淀物低温5℃干燥得第一多糖肽，
8.将第一多糖肽溶于水，透析，
1)将第一多糖肽溶于蒸馏水，
2)放置于透析袋内，
3)逆流透析48小时得透析液。
9.将透析液在90℃下浓缩，
10.用乙醇沉淀多糖肽，
1)用三倍量于浓缩液的95％乙醇沉淀，
2)搅拌，恒温5℃静置得第一沉淀物，
3)将第一沉淀物再离心得第二多糖肽沉淀。
11.将第二多糖肽沉淀用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤3次，
12.用速度为3000r/min，时间为15min的离心机进行离心分离，去上清液，
13.沉淀物低温5℃干燥即得灵芝多糖肽。
将段木灵芝同样采用上述方法制备灵芝多糖。
下面将采用草栽灵芝和段木灵芝提取第一多糖肽的结果对比如下表：
表1：
上表表明草栽灵芝提取第一多糖肽的得率平均为6.48％；段木灵芝第一多糖肽的得率为2.34％，草栽灵芝比段木灵芝高2.8倍。
采用草栽灵芝和段木灵芝提取第二多糖肽(即多糖肽)的结果对比如下表：
表2：
上表表明，用草栽灵芝提取的多糖肽约占粗多糖的36％，用段木灵芝提取的多糖肽约占粗多糖的35.33％，两者的得率相当，从而说明两者多糖肽中低分子量糖肽含量是基本一致的。
采用草栽灵芝和段木灵芝提取多糖肽氨基酸分析的结果对比如下表：
表3：
此表表明，草栽灵芝多糖肽中所含氨基酸组成与段木灵芝多糖肽中的相同，而氨基酸总量也基本一致。
Claims (7)
1.草栽灵芝多糖肽，其特征在于，用于提取的原料是草栽灵芝，且该草栽灵芝多糖肽重均分子量(MW)为45万～54万，其可由如下提取方法获得：利用菌草栽培灵芝产生子实体，洗清、干燥、破碎，用乙醇回流后热水提取，将水提取液浓缩，用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物，用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第一多糖肽沉淀物3次，离心，去上清液，沉淀物低温干燥得粗多糖肽，将粗多糖溶于蒸馏水，放置于透析袋内，逆流透析48小时得透析液，用乙醇沉淀透析液得第二多糖肽沉淀物，用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第二多糖肽沉淀物3次，离心，去上清液，沉淀物低温干燥得多糖肽。
2.根据权利要求1所述的草栽灵芝多糖肽，其特征在于，多糖组成为鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，上述各糖摩尔比为0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
3.草栽灵芝多糖肽的提取方法，其特征在于，具有如下步骤，
1)利用菌草栽培灵芝产生子实体，洗清、干燥、破碎，
2)用乙醇回流后热水提取，
3)将水提取液浓缩，
4)用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物，
5)用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第一多糖肽沉淀物3次，
6)离心，去上清液，
7)沉淀物低温干燥得粗多糖肽，
8)将粗多糖溶于蒸馏水，
9)放置于透析袋内，
10)逆流透析48小时得透析液，
11)用乙醇沉淀透析液得第二多糖肽沉淀物，
12)用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗涤第二多糖肽沉淀物3次，
13)离心，去上清液，
14)沉淀物低温干燥得多糖肽。
4.根据权利要求3所述的草栽灵芝多糖肽的提取方法，其特征在于，破碎步骤具体为：将草栽灵芝破碎成烟丝状。
5.根据权利要求3所述的草栽灵芝多糖肽的提取方法，其特征在于，用乙醇回流后热水提取的具体步骤为，
1)用95％的乙醇回流3小时，
2)回收乙醇，
3)灵芝粉碎物用热水提取3次。
6.根据权利要求3所述的草载灵芝多糖肽的提取方法，其特征在于，用乙醇沉淀浓缩液得第一多糖肽沉淀物及第二多糖肽沉淀物的具体步骤为，
1)用三倍量于浓缩液的95％乙醇沉淀，
2)搅拌，5℃左右静置得第一沉淀物，
3)将第一沉淀物再离心得第二沉淀物。
7.根据权利要求3所述的草栽灵芝多糖肽的提取方法，其特征在于，低温干燥的温度为5℃。
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