CN101113473A - 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法 - Google Patents

运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101113473A
CN101113473A CNA2007100575808A CN200710057580A CN101113473A CN 101113473 A CN101113473 A CN 101113473A CN A2007100575808 A CNA2007100575808 A CN A2007100575808A CN 200710057580 A CN200710057580 A CN 200710057580A CN 101113473 A CN101113473 A CN 101113473A
Authority
CN
China
Prior art keywords
vibrio
primer sequence
food
sample
fluorescent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2007100575808A
Other languages
English (en)
Inventor
郑文杰
黄熙泰
叶露萌
张宏伟
唐丹舟
于佳
李永君
魏亚东
刘寅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nankai University
Tianjin Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau of Animals Plants and Food Inspection Center
Original Assignee
Nankai University
Tianjin Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau of Animals Plants and Food Inspection Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nankai University, Tianjin Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau of Animals Plants and Food Inspection Center filed Critical Nankai University
Priority to CNA2007100575808A priority Critical patent/CN101113473A/zh
Publication of CN101113473A publication Critical patent/CN101113473A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法，属于细菌检验技术领域，主要的技术方案是设计了引物组序列。致病弧菌是食品中常见的致病菌，感染弧菌后影响十分严重。快速、准确的检测食品中的致病弧菌是有效预防和控制病原菌感染的重要条件。需要检测的食源性致病弧菌主要包括以下几种：副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌。针对上述目标菌，本发明克服了现有技术中的缺点，提供一种运用复合荧光PCR技术快速低成本的检测副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌的方法。该方法可以使用一管PCR反应，能够初筛出上述几种病原微生物。

Description

运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法
技术领域
本发明涉及细菌检验技术，具体地说是运用荧光PCR反应来检测致病弧菌，特别是食源性致病弧菌的技术。
背景技术
食品中常见的致病菌是引起食物中毒的主要原因之一，可导致多种疾病发生，严重威胁着人们的健康，其中弧菌是危害较为严重的食源菌。快速、准确的检测食品中的致病菌是有效预防和控制病原菌感染的前提条件。随着分子生物学的发展，食品检验检疫工作中的细菌鉴定方法已经从传统的简单生化实验水平上向分子生物学的方法如PCR、探针杂交等技术发展，但是分子生物学的检测方法在短期内仍然难以代替传统的生化鉴定，目前分子生物学方法主要用于大量样品的初筛。需要检测的食源性弧菌主要包括以下几种：副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌。
发明内容
针对上述目标菌，本发明克服了现有技术中的缺点，提供一种运用复合荧光PCR技术快速低成本的检测副溶血弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的方法。
该方法包括：应用该方法检测食源性病原微生物的所使用的引物组和与之配套的PCR反应条件。其中引物、探针的全部序列如下：
引物：
引物序列一：5’CAACAATAAATTGTTGTTTTGTCAGCT
引物序列二：5’GGGCTATAGCTCAGCTGGGAGA
引物序列三：5’GAAAGATAAACACCAACAACACATT
引物序列四：5’CGATTAGCTCCACCACTGACTTC
引物序列五：5’CGAAGTCAGTGGTGGAGCTAATC
引物序列六：5’TGGTTTAGAAAGTTTAGAGTATCTTAGTGT
本发明提供了更加快速和低成本通过荧光PCR方法检测食源性致病弧菌的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
(1)设计特异性寡核苷酸引物用于荧光染料嵌合荧光PCR技术检测；
(2)整合各引物使之不相互干扰。
(3)以引物序列组，扩增待测样品模板，进行目的基因的特异性扩增；
(4)扩增过程中使用荧光PCR仪进行实时荧光光强度测量并在PCR反应结束后进行所合成DNA片段的熔解曲线的测定，并将数据传输至电脑通过配套软件进行分析可以观察到各种病原微生物的特异性熔解曲线的峰值。
本发明用特异性的引物组扩增金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌、15种肠杆菌和5种弧菌的基因组均产生荧光信号，并生成相应的熔解曲线峰值，均未发现假阳性和假阴性的结果。
本发明中荧光PCR反应体系中各组分构成比例如下：
成分                      浓度        加样量
PCR体系预混合物           2倍         12.5μL
荧光嵌合法所用引物序列一：10μmol/L   0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列二：10μmol/L   0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列三：10μmol/L   0.6μL
荧光嵌合法所用引物序列四：10μmol/L   0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列五：10μmol/L   0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列六：10μmol/L   0.6μL
DNA样品                               1μL
双蒸水                                9.1μL
总体积                                25μL
荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：
(1)95℃  10分钟；
(2)95℃  15秒；
(3)65℃  30秒；
(4)回到第2步，重复40次；
(5)95℃  2分；
(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。
荧光PCR结果在扩增过程中使用荧光PCR仪进行实时荧光光强度测量，并在PCR扩增程序结束后进行梯度升温测定扩增片段的熔解温度。将数据传输至电脑通过配套软件进行分析可以观察到进行特异性扩增产生的荧光，得到对副溶血弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线双峰值(主峰85℃±0.3℃和次峰76℃±0.3℃)；创伤弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线双峰值(主峰76℃±0.3℃和次峰84℃±0.3℃)；霍乱弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线三峰值(主峰74℃±0.3℃、第一次峰77℃±0.3℃和第二次峰84℃±0.3℃)。
如果得到对副溶血弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线双峰值(主峰85℃±0.3℃和次峰76℃±0.3℃)；则证明待测样品中含有副溶血弧菌，如果得到对创伤弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线双峰值(主峰76℃±0.3℃和次峰84℃±0.3℃)则证明待测样品中含有创伤弧菌；如果得到对霍乱弧菌的特异性片段所特有的熔解曲线三峰值(主峰74℃±0.3℃、第一次峰77℃±0.3℃和第二次峰84℃±0.3℃)则说明待测样品中含有霍乱弧菌。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：基于荧光PCR的鉴定方法适用于直接从患者含菌体液、食品和体液培养物等临床样品中扩增靶基因，从而细菌，而且使用本方法只需要一次一管荧光PCR反应就能够检测出副溶血弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌是否存在，能够节约检测成本和时间。荧光PCR方法具有检测准确、特异性强、灵敏度高的特点，可以快速、准确地鉴定特异的目标细菌。它用PCR的方法扩增细菌靶基因，避免了反复培养，节约时间；PCR鉴定方法不受培养条件和细菌生理状态的影响，较生理生化鉴定方法更为准确。
附图说明
图1某待测带鱼样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，SYBR Green荧光信号强度。
图2某待测带鱼样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，扩增产物熔解温度峰值。
图3某待测鱼丸样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，SYBR Green荧光信号强度。
图4某待测鱼丸样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，扩增产物熔解温度峰值。
图5某待测海带样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，SYBR Green荧光信号强度。
图6某待测海带样品中复合荧光PCR技术检测待测样品DNA，扩增产物熔解温度峰值。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细描述。
实施例1
样本：某处出口带鱼。
用常规生理、生化方法检测出副溶血弧菌疑似菌落，然后进行如下复合荧光PCR技术检测食源性致病菌的检测：
1.样品处理
(1)取100克待检样品，粉碎。
(2)溶解于1升营养肉汤中37℃培养8小时。
2.DNA抽提
取营养肉汤1mL在冰浴中静置5分钟，然后在室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清液，加入100μL溶菌酶溶液，37℃保温10分钟，补加TE缓冲液500μL，振荡混匀。加同体积Tris饱和酚(pH8.0)，强烈振荡，12000转/分钟离心3分钟，取上清液，重复酚抽提。取上清液，加入0.1倍体积的乙酸钠(2mol/L)，混匀，再加等体积的冰乙醇，混匀后低温静置30分钟，12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加70％冷乙醇洗涤一次，室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加入50μL TE溶液，置-20℃保存。
3.PCR扩增
PCR反应体系中各组分构成比例如下：
成分                      浓度       加样量
PCR体系预混合物           2倍        12.5μL
荧光嵌合法所用引物序列一：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列二：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列三：10μmol/L  0.6μL
荧光嵌合法所用引物序列四：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列五：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列六：10μmol/L  0.6μL
DNA样品                              1μL
双蒸水                               9.1μL
总体积                               25μL
荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：
(1)95℃  10分钟；
(2)95℃  15秒；
(3)65℃  30秒；
(4)回到第2步，重复40次；
(5)95℃  2分；
(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。
PCR共进行2管PCR实验，其中DNA样品所加入的分别为：本待测样品DNA；无样品的阴性对照。
4.被检测样品荧光PCR图谱观察
荧光PCR过程中可以观察到本待测样品产生了明显的SYBR Green荧光，结果如图1。阴性对照在PCR过程中没有产生SYBR Green荧光结果，在通过观测扩增产物熔解温度的荧光曲线，可以发现副溶血弧菌的特征双峰值(主峰85℃±0.3℃和次峰76℃±0.3℃)如图2。
图1中的曲线所代表的SYBR Green荧光强度信号是样品中DNA扩增结果。
图2中的曲线所代表的熔解温度峰值是样品中副溶血弧菌的特征峰值(主峰85℃±0.3℃和次峰76℃±0.3℃)。
实验表明样品中含有副溶血弧菌。
3天后，通过常规微生物培养和生化检测证明，所检验的目的菌落为副溶血弧菌，将其中一个菌株命名为CIQV6。荧光PCR检验结果与生化检测结果一致。
实施例2
样本：某处出口鱼丸。
用常规生理、生化方法检测出创伤弧菌疑似菌落，然后进行如下复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的检测：
1.样品处理
(1)取100克待检样品，粉碎。
(2)溶解于1升营养肉汤中37℃培养8小时。
2.DNA抽提
取营养肉汤1mL在冰浴中静置5分钟，然后在室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清液，加入100μL溶菌酶溶液，37℃保温10分钟，补加TE缓冲液500μL，振荡混匀。加同体积Tris饱和酚(pH8.0)，强烈振荡，12000转/分钟 离心3分钟，取上清液，重复酚抽提。取上清液，加入0.1倍体积的乙酸钠(2mol/L)，混匀，再加等体积的冰乙醇，混匀后低温静置30分钟，12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加70％冷乙醇洗涤一次，室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加入50μLTE溶液，置-20℃保存。
3.PCR扩增
PCR反应体系中各组分构成比例如下：
成分                      浓度       加样量
PCR体系预混合物           2倍        12.5μL
荧光嵌合法所用引物序列一：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列二：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列三：10μmol/L  0.6μL
荧光嵌合法所用引物序列四：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列五：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列六：10μmol/L  0.6μL
DNA样品                              1μL
双蒸水                          9.1μL
总体积                          25μL
荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：
(1)95℃  10分钟；
(2)95℃  15秒；
(3)65℃  30秒；
(4)回到第2步，重复40次；
(5)95℃  2分；
(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。
PCR共进行2管PCR实验，其中DNA样品所加入的分别为：本待测样品DNA；无样品的阴性对照。
4.被检测样品荧光PCR图谱观察
荧光PCR过程中可以观察到本待测样品产生了明显的SYBR Green荧光，结果如图3。阴性对照在PCR过程中没有产生SYBR Green荧光结果，在通过观测扩增产物熔解温度的荧光曲线，可以发现创伤弧菌(主峰76℃±0.3℃和次峰84℃±0.3℃)如图4。
图3中的曲线所代表的SYBR Green荧光强度信号是样品中DNA扩增结果。
图4中的曲线所代表的熔解温度峰值是样品中创伤弧菌的特征峰值(主峰76℃±0.3℃和次峰84℃±0.3℃)℃。
实验表明样品中含有创伤弧菌。
3天后，通过常规微生物培养和生化检测证明，所检验的目的菌落为创伤弧菌，将其中一个菌株命名为CIQV11。荧光PCR检验结果与生化检测结果一致。
实施例3
样本：某处出口海带。
用常规生理、生化方法检测出霍乱弧菌疑似菌落，然后进行如下复合荧光PCR技术检测食源性致病菌的检测：
1.样品处理
(1)取100克待检样品，粉碎。
(2)溶解于1升营养肉汤中37℃培养8小时。
  2.DNA抽提
  取营养肉汤1mL在冰浴中静置5分钟，然后在室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清液，加入100μL溶菌酶溶液，37℃保温10分钟，补加TE缓冲液500μL，振荡混匀。加同体积Tris饱和酚(pH8.0)，强烈振荡，12000转/分钟离心3分钟，取上清液，重复酚抽提。取上清液，加入0.1倍体积的乙酸钠(2mol/L)，混匀，再加等体积的冰乙醇，混匀后低温静置30分钟，12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加70％冷乙醇洗涤一次，室温下12000转/分钟，离心5分钟，弃上清，加入50μL TE溶液，置-20℃保存。
3.PCR扩增
PCR反应体系中各组分构成比例如下：
成分                      浓度       加样量
PCR体系预混合物           2倍        12.5μL
荧光嵌合法所用引物序列一：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列二：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列三：10μmol/L  0.6μL
荧光嵌合法所用引物序列四：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列五：10μmol/L  0.3μL
荧光嵌合法所用引物序列六：10μmol/L  0.6μL
DNA样品                              1μL
双蒸水                               9.1μL
总体积                               25μL
荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：
(1)95℃  10分钟；
(2)95℃  15秒；
(3)65℃  30秒；
(4)回到第2步，重复40次：
(5)95℃  2分；
(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。
PCR共进行2管PCR实验，其中DNA样品所加入的分别为：本待测样品DNA；无样品的阴性对照。
4.被检测样品荧光PCR图谱观察
荧光PCR过程中可以观察到本待测样品产生了明显的SYBR Green荧光，结果如图5。阴性对照在PCR过程中没有产生SYBR Green荧光结果，在通过观测扩增产物熔解温度的荧光曲线，可以发现霍乱弧菌的特征峰值(主峰74℃±0.3℃、第一次峰77℃±0.3℃和第二次峰84℃±0.3℃)。
图5中的曲线所代表的SYBR Green荧光强度信号是样品中DNA扩增结果。
图6中的曲线所代表的熔解温度峰值是样品中霍乱弧菌的特征峰值(主峰74℃±0.3℃、第一次峰77℃±0.3℃和第二次峰84℃±0.3℃)℃。
实验表明样品中含有霍乱弧菌。
5天后，通过常规微生物培养和生化检测证明，所检验的目的菌落为霍乱弧菌，将其中一个菌株命名为CIQV30。荧光PCR检验结果与生化检测结果一致。
序列列表
SEQUENCE LISTING
<110>中华人民共和国天津出入境检验检疫局
<120>运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法
<130>2007118
<160>6
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>27
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(27)
<400>1
caacaataaa ttgttgtttt gtcagct                                   27
<210>2
<211>22
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(22)
<400>2
gggctatagc tcagctggga ga                                    22
<210>3
<211>25
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(25)
<400>3
gaaagataaa caccaacaac acatt                                 25
<210>4
<211>23
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(23)
<400>4
cgattagctc caccactgac ttc                                   23
<210>5
<211>23
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(23)
<400>5
cgaagtcagt ggtggagcta atc                                   23
<210>6
<211>30
<212>DNA
<213>人工合成
<220>
<221>primer_bind
<222>(1)..(30)
<400>6
tggtttagaa agtttagagt atcttagtgt                                30

Claims (4)

1.一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法，其特征在于，所使用的引物组序列如下：
引物：
引物序列一：5’CAACAATAAATTGTTGTTTTGTCAGCT
引物序列二：5’GGGCTATAGCTCAGCTGGGAGA
引物序列三：5’GAAAGATAAACACCAACAACACATT
引物序列四：5’CGATTAGCTCCACCACTGACTTC
引物序列五：5’CGAAGTCAGTGGTGGAGCTAATC
引物序列六：5’TGGTTTAGAAAGTTTAGAGTATCTTAGTGT。
2.根据权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法，其特征在于，PCR反应体系1中各组分构成比例如下：
成分                浓度          加样量
PCR体系预混合物     2倍           12.5μL
引物序列一：        10μmol/L     0.3μL
引物序列二：        10μmol/L     0.3μL
引物序列三：        10μmol/L     0.6μL
引物序列四：        10μmol/L     0.3μL
引物序列五：        10μmol/L     0.3μL
引物序列六：        10μmol/L     0.6μL
DNA样品                           1μL
双蒸水                            9.1μL
总体积                            25μL。
3.根据权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病弧菌的方法，其特征在于，荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：
(1)95℃  10分钟；
(2)95℃  15秒：
(3)65℃  30秒；
(4)回到第(2)步，重复40次；
(5)95℃  2分；
(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。
4.权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术在检测食源性致病弧菌方面的应用。
CNA2007100575808A 2007-06-07 2007-06-07 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法 Pending CN101113473A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2007100575808A CN101113473A (zh) 2007-06-07 2007-06-07 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2007100575808A CN101113473A (zh) 2007-06-07 2007-06-07 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101113473A true CN101113473A (zh) 2008-01-30

Family

ID=39022002

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2007100575808A Pending CN101113473A (zh) 2007-06-07 2007-06-07 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101113473A (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101805788A (zh) * 2009-12-31 2010-08-18 大连水产学院 基于scar分子标记快速检测副溶血弧菌的pcr特异扩增引物及检测试剂盒
CN102242182A (zh) * 2011-04-07 2011-11-16 中华人民共和国舟山出入境检验检疫局 一种食品中副溶血弧菌和霍乱弧菌的合检方法
CN101768634B (zh) * 2008-12-31 2012-07-04 蔡剑平 O1群霍乱弧菌检测用组合物、试剂盒和检测方法
CN101768636B (zh) * 2009-01-06 2012-08-15 蔡剑平 检测霍乱弧菌的组合物、试剂盒和检测方法
CN102643919A (zh) * 2012-05-03 2012-08-22 湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种食品中副溶血弧菌活菌的检测试剂盒及检测方法
CN102653786A (zh) * 2011-12-27 2012-09-05 杭州师范大学 一种创伤弧菌pcr检测试剂盒及检测方法
CN102732599A (zh) * 2011-04-12 2012-10-17 南开大学 双重聚合酶链反应方法检测海水样品中的创伤弧菌和副溶血弧菌
CN102816841A (zh) * 2012-07-19 2012-12-12 宁波检验检疫科学技术研究院 一种检测水体中弧菌的四色荧光pcr试剂盒及检测方法
CN103255202A (zh) * 2012-02-20 2013-08-21 南开大学 霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌的三重pcr检测方法
US11965216B2 (en) 2015-04-07 2024-04-23 Polyskope Labs Detection of one or more pathogens

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101768634B (zh) * 2008-12-31 2012-07-04 蔡剑平 O1群霍乱弧菌检测用组合物、试剂盒和检测方法
CN101768636B (zh) * 2009-01-06 2012-08-15 蔡剑平 检测霍乱弧菌的组合物、试剂盒和检测方法
CN101805788A (zh) * 2009-12-31 2010-08-18 大连水产学院 基于scar分子标记快速检测副溶血弧菌的pcr特异扩增引物及检测试剂盒
CN102242182A (zh) * 2011-04-07 2011-11-16 中华人民共和国舟山出入境检验检疫局 一种食品中副溶血弧菌和霍乱弧菌的合检方法
CN102732599A (zh) * 2011-04-12 2012-10-17 南开大学 双重聚合酶链反应方法检测海水样品中的创伤弧菌和副溶血弧菌
CN102653786A (zh) * 2011-12-27 2012-09-05 杭州师范大学 一种创伤弧菌pcr检测试剂盒及检测方法
CN102653786B (zh) * 2011-12-27 2014-04-09 杭州师范大学 一种创伤弧菌pcr检测试剂盒及检测方法
CN103255202A (zh) * 2012-02-20 2013-08-21 南开大学 霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌的三重pcr检测方法
CN102643919A (zh) * 2012-05-03 2012-08-22 湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种食品中副溶血弧菌活菌的检测试剂盒及检测方法
CN102816841A (zh) * 2012-07-19 2012-12-12 宁波检验检疫科学技术研究院 一种检测水体中弧菌的四色荧光pcr试剂盒及检测方法
CN102816841B (zh) * 2012-07-19 2014-01-29 宁波检验检疫科学技术研究院 一种检测水体中弧菌的四色荧光pcr试剂盒及检测方法
US11965216B2 (en) 2015-04-07 2024-04-23 Polyskope Labs Detection of one or more pathogens

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101113473A (zh) 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病弧菌的方法
CN113249499B (zh) 一种伤寒沙门氏菌的检测试剂盒、其制备方法及其应用
CN102559861B (zh) 沙眼衣原体核酸快速检测试剂盒
CA2596059C (en) Method of quantitatively analysing microorganism targeting rrna
CN102363815A (zh) 运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂及其扩增方法和检测方法
US12325882B2 (en) Fast and portable microfluidic detection system as an alternative to Salmonella&#39;s classical culture method
CN101113471A (zh) 运用复合荧光pcr技术检测食源性致病肠杆菌的方法
CN112359125A (zh) 一种快速检测格特隐球菌的方法
Wang et al. Detection of Vibrio parahaemolyticus by one-pot LAMP-CRISPR/Cas12b combined with immunomagnetic beads
CN107523619A (zh) 包含mcr基因的耐药菌的PCR检测试剂盒及其应用
CN110241239A (zh) 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒
CN110734988B (zh) 一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）核酸恒温扩增方法
CN101182574B (zh) 运用环介导恒温扩增技术检测食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法
CN115612749A (zh) 表皮葡萄球菌rpa-lfs检测引物探针组合及其应用
CN110241237A (zh) 一种用于产气肠杆菌检测的试剂盒
CN105567802A (zh) 肺炎衣原体荧光pcr检测试剂盒
CN101235411A (zh) 一种利用环介导等温扩增技术检测豚鼠气单胞菌的试剂盒
CN106086206A (zh) 绿色魏斯氏菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒及检测方法
CN113621719B (zh) 杀鱼爱德华氏菌的快速检测方法及应用
CN106048051B (zh) 一种克柔念珠菌荧光pcr检测试剂盒
CN115852004A (zh) 一种表皮葡萄球菌的病原体特异性核酸基因及检测方法
CN116024371A (zh) 一种多重qPCR检测病原菌的引物探针组、试剂盒和检测方法
CN101113472A (zh) 运用复合荧光pcr技术检测食源性病原微生物的方法
CN106755411A (zh) 海产品副溶血性弧菌toxR基因的实时荧光定量PCR快速检测引物及其试剂盒
CN101182575A (zh) 运用环介导恒温扩增技术检测食源性假结核耶尔森氏菌的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20080130