CN102827770A - 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法 - Google Patents

一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102827770A
CN102827770A CN2012102962416A CN201210296241A CN102827770A CN 102827770 A CN102827770 A CN 102827770A CN 2012102962416 A CN2012102962416 A CN 2012102962416A CN 201210296241 A CN201210296241 A CN 201210296241A CN 102827770 A CN102827770 A CN 102827770A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amylase
screening
producing bacteria
producing
color development
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2012102962416A
Other languages
English (en)
Inventor
陈芳清
陈国华
江玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Three Gorges University CTGU
Original Assignee
China Three Gorges University CTGU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Three Gorges University CTGU filed Critical China Three Gorges University CTGU
Priority to CN2012102962416A priority Critical patent/CN102827770A/zh
Publication of CN102827770A publication Critical patent/CN102827770A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，该方法包括以下步骤：1）从自然环境中采集样本；2）培养：样本接种于含有淀粉酶产生菌筛选培养基的培养皿里，培养3－4天；3）显色：揭开培养皿上盖，将络合碘快速而均匀地喷雾到长出菌落的淀粉酶产生菌筛选培养基上，静置2－4分钟，观察透明圈的形成；4）转接：将步骤3）产生透明圈的菌落立即转接至新的淀粉酶产生菌筛选培养基上；5）筛选：筛选产酶活性高的菌落，得到淀粉酶产生菌。本发明提供的一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，采用络合碘喷雾的方式初步筛选产酶微生物，能方便、快捷地初步筛选产胞外淀粉酶菌株,替代碘液显色法和碘熏蒸法推广使用。

Description

一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法
技术领域
本发明涉及一种微生物显色方法，尤其是一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法。 
背景技术
淀粉酶已经成为工业应用中最为重要的酶之一，并且大量的微生物可以产生高活性的淀粉酶，但是酶的大规模商业化生产仍然局限于几种特定的真菌和细菌，从自然界中筛选新型的高活性目的淀粉酶产生微生物显得尤为重要。利用淀粉平板透明圈法从自然环境中分离筛选淀粉酶生产菌，以淀粉指示剂进行初步判断，可以快速发现淀粉酶产生微生物，目前采用的淀粉显色指示剂是碘液或者固体碘。碘液，组成成分是碘、碘化钾和蒸馏水。碘液显色剂需要自己配制并且保存时间短暂；使用时往往采用滴加到培养基上的方式，导致碘液分布不均匀，影响显色的一致性，从而延长了部分区域的显色时间，对菌落杀伤力增强。
固体碘利用碘升华法显色,省去了碘液显色法配制溶液的过程，然而不同产酶菌株,对于升华碘的用量、耐受时间及显色时间具有差异[唐嘉, 陈朝银, 赵声兰, 夏静, 张涛. 一种初筛产胞外淀粉酶菌株的简化方法. 生物加工过程, 2008, 6 (1): 37-40]，并且不同的培养皿的密封程度差异，也会影响熏蒸过程显色效果。
虽然淀粉酶产生菌筛选研究意义重大，但是淀粉酶活性初筛过程中的显色剂有效期短暂、配制复杂、用量及显色时间等问题制约了该领域的研究工作广泛开展。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种采用络合碘筛选淀粉酶产生菌的显色方法，初步筛选产酶微生物，能方便、快捷地初步筛选产胞外淀粉酶菌株,可替代碘液显色法和碘熏蒸法推广使用。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，该方法包括以下步骤：
1）从自然环境（土壤和水体）中采集样本；
2）培养：将步骤1）采集的样本采用稀释或快速划线的方法，接种于含有淀粉酶产生菌筛选培养基的培养皿里，培养3－4天；
3）显色：将络合碘装入30－50毫升塑料喷瓶中，揭开培养皿上盖，将络合碘快速而均匀地喷雾到长出菌落的淀粉酶产生菌筛选培养基上，静置2－4分钟，观察透明圈的形成，显色时间不能太长（不超过4分钟），以免碘挥发影响观察；
4）转接：将步骤3）产生透明圈的菌落立即转接至新的淀粉酶产生菌筛选培养基上，培养3-4天，重复步骤3）显色，用透明圈直径/菌落直径的比值，计算产酶活性；
5）筛选：将产酶活性高的的菌落划线培养3－4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，筛选产酶活性高的菌落，得到淀粉酶产生菌。
将步骤5）筛选得到的产酶活性高的淀粉酶产生菌，采用4℃试管斜面和–20℃甘油保存。
步骤3）中，喷雾到淀粉酶产生菌筛选培养基的络合碘体积为1－2毫升。 
步骤5）中，透明圈直径/菌落直径的比值大于1.7的菌落，为产酶活性高的菌落。
本发明提供的一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，由于采用将络合碘均匀喷雾的方式，初步筛选产酶微生物，具有显色时间短、试剂保存期长、操作方便方便、显色效果稳定的优势，能方便、快捷地初步筛选产胞外淀粉酶菌株,可替代碘液显色法和碘熏蒸法推广使用。 
具体实施方式
实施例一
一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，该方法包括以下步骤：
1）采集样本：从三峡大学南苑学生食堂附近采集土壤样本（5克），立即将样本带回实验室；
2）培养：
培养基组成（w/v）：2% 可溶性淀粉，0.5% 蛋白胨，0.5% NaCl，0.05% MgSO4·7H2O，0.05% KH2PO4，1.5% 琼脂，pH 7.0-7.2；
将步骤1）采集的样本混合均匀后，取约0.5克快速划线接种于淀粉酶产生菌筛选培养基上，于28℃培养4天；
3）显色：将1-2毫升络合碘快速而均匀地喷雾于培养基上，静置2分钟后可见明显的淀粉水解透明圈；
4）转接：将产生透明圈的菌落转接到新的筛选培养基上，培养4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，用透明圈直径/菌落直径的比值评价产酶活性；
5）筛选：将透明圈直径/菌落直径的比值大于1.7的菌落再次划线培养4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，获得透明圈直径/菌落直径的比值达2.2的产淀粉酶的细菌。
实施例二
一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，该方法包括以下步骤：
1）采集样本：从三峡大学欣苑学生食堂附近采集土壤样本（4克），立即将样本带回实验室；
2）培养：
培养基组成（w/v）：1.5% 可溶性淀粉，0.5% 蛋白胨，0.5% NaCl，0.05% MgSO4·7H2O，0.05% KH2PO4，1.5% 琼脂，pH 7.0-7.2；
将步骤1）采集的样本梯度稀释后，涂布于淀粉酶产生菌筛选培养基上，于38℃培养3天；
3）显色：将1-2毫升络合碘快速而均匀地喷雾于培养基上，静置3分钟后可见明显的淀粉水解透明圈；
4）转接：将产生透明圈的菌落转接到新的筛选培养基上，培养3天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，用透明圈直径/菌落直径的比值评价产酶活性；
5）筛选：将透明圈直径/菌落直径的比值大于1.7的菌落再次划线培养3天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，获得透明圈直径/菌落直径的比值达1.9的产淀粉酶的细菌。
实施例三
一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，该方法包括以下步骤：
1）采集样本：从三峡大学东苑学生食堂附近采集水样（5毫升），立即将样本带回实验室；
2）培养：
培养基组成（w/v）：可溶性淀粉 2.5%，蛋白胨 0.5%， NaCl 0.5%，MgSO4·7H2O 0.05%， KH2PO4 0.05%，琼脂 1.5%，pH 6.0-7.0；
将步骤1）采集的样本划线接种于淀粉酶产生菌筛选培养基上，于30℃培养4天；
3）显色：将1-2毫升络合碘快速而均匀地喷雾于培养基上，静置4分钟后可见明显的淀粉水解透明圈；
4）转接：将产生透明圈的菌落转接到新的筛选培养基上，培养4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，用透明圈直径/菌落直径的比值评价产酶活性；
5）筛选：将透明圈直径/菌落直径的比值大于1.7的菌落再次划线培养4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，获得透明圈直径/菌落直径的比值达2.3的产淀粉酶的细菌。

Claims (4)

1. 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1）从自然环境中采集样本；
2）培养：将步骤1）采集的样本接种于含有淀粉酶产生菌筛选培养基的培养皿里，培养3－4天；
3）显色：揭开培养皿上盖，将络合碘快速而均匀地喷雾到长出菌落的淀粉酶产生菌筛选培养基上，静置2－4分钟，观察透明圈的形成；
4）转接：将步骤3）产生透明圈的菌落立即转接至新的淀粉酶产生菌筛选培养基上，培养3-4天，重复步骤3），用透明圈直径/菌落直径的比值，计算产酶活性；
5）筛选：将产酶活性高的的菌落划线培养3－4天，重复步骤3）检测淀粉酶产生情况，筛选产酶活性高的菌落，得到淀粉酶产生菌。
2.根据权利要求1所述的一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，其特征在于：步骤1）中，从自然环境的土壤和水体中采集样品。
3.根据权利要求1所述的一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，其特征在于：步骤3）中，喷雾到淀粉酶产生菌筛选培养基的络合碘体积为1－2毫升。
4.根据权利要求1所述的一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法，其特征在于：步骤5）中，透明圈直径/菌落直径的比值大于1.7的菌落，为产酶活性高的菌落。
CN2012102962416A 2012-08-20 2012-08-20 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法 Pending CN102827770A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102962416A CN102827770A (zh) 2012-08-20 2012-08-20 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102962416A CN102827770A (zh) 2012-08-20 2012-08-20 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102827770A true CN102827770A (zh) 2012-12-19

Family

ID=47331084

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012102962416A Pending CN102827770A (zh) 2012-08-20 2012-08-20 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102827770A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104458607A (zh) * 2014-11-24 2015-03-25 广东省生态环境与土壤研究所 一种快速检测微生物胞外呼吸活性的方法
CN114480566A (zh) * 2022-03-04 2022-05-13 河南金百合生物科技股份有限公司 一种检测菌株是否产酶的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1377584A (zh) * 2002-02-28 2002-11-06 周颖 原子碘水溶液及其配制方法
CN101300036A (zh) * 2005-09-21 2008-11-05 苏尔莫迪克斯公司 包含天然生物可降解的多糖的涂层和物品

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1377584A (zh) * 2002-02-28 2002-11-06 周颖 原子碘水溶液及其配制方法
CN101300036A (zh) * 2005-09-21 2008-11-05 苏尔莫迪克斯公司 包含天然生物可降解的多糖的涂层和物品

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
卢福芝等: "淀粉酶产生菌的分离筛选", 《河池学院学报》, 30 April 2012 (2012-04-30), pages 26 - 28 *
雷晓燕: "土壤中淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化", 《沈阳化工大学学报》, 30 September 2010 (2010-09-30), pages 203 - 207 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104458607A (zh) * 2014-11-24 2015-03-25 广东省生态环境与土壤研究所 一种快速检测微生物胞外呼吸活性的方法
CN114480566A (zh) * 2022-03-04 2022-05-13 河南金百合生物科技股份有限公司 一种检测菌株是否产酶的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114591855A (zh) 一株运动芽孢杆菌Bacillus mobilis在增强油菜耐盐促生中的应用
CN105052498B (zh) 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法
CN103468588B (zh) 胶膜菌菌株及其在促进兜唇石斛种子萌发中的应用
CN105861412A (zh) 一种稻瘟病菌分生孢子的培养制备方法
Uppuluri et al. Optimization of L-asparaginase production by isolated Aspergillus niger C4 from sesame (black) oil cake under SSF using Box–Behnken design in column bioreactor
CN113502250A (zh) 一种雷尔氏菌菌株及应用、获取和防效评价方法
CN102827770A (zh) 一种筛选淀粉酶产生菌的显色方法
CN103667095B (zh) 一种α-淀粉酶高产菌株及其发酵生产淀粉酶的方法
CN112226380A (zh) 一株降解纤维素生防芽孢杆菌及其应用和制剂
CN106483173A (zh) 一种细菌纤维素石墨烯复合物修饰玻碳电极的制备方法及其在检测亚硝酸盐中的应用
CN105154353A (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在温室大棚土壤修复中的应用
CN114591823A (zh) 一种展示微生物的培养皿及其制作方法
CN109516869A (zh) 复合功能微生物制剂及其制备方法和应用
CN110218677B (zh) 短小芽孢杆菌s1419及其在解钾上的应用
CN105420167B (zh) 一种蜡状芽孢杆菌及其应用
CN104745522B (zh) 一种诱导丝孢真菌产孢的方法
Ruginescu et al. Preliminary characterization of a cellulase producing bacterial strain isolated from a Romanian hypersaline lake
CN102757914A (zh) 一株解木聚糖类芽孢杆菌及用其制备木葡聚糖酶的方法
CN103509746B (zh) 一种天然l-(+)-酒石酸的发酵生产方法
CN102352322B (zh) 一株耐高温柠檬酸生产菌株
CN111254097A (zh) 一种土壤中放线菌原位培养的方法
CN105385608A (zh) 一种香菇液体菌种深层发酵工艺
CN105647812A (zh) 一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用
CN105950504B (zh) 阿特拉津降解菌zxy-2的培养基
CN101497864B (zh) 一种提高烟叶质量的生物菌剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20121219