CN103622902A

CN103622902A - 一种温敏凝胶药物制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN103622902A
Application number: CN201210305356.7A
Authority: CN
Inventors: 李坤; 陈庆华; 刘晓君; 包泳初; 潘峰; 韩蕾; 房超
Original assignee: Shanghai Advanced Pharmaceutical Engineering Research Center Ltd
Current assignee: Shanghai Advanced Pharmaceutical Engineering Research Center Ltd
Priority date: 2012-08-24
Filing date: 2012-08-24
Publication date: 2014-03-12
Anticipated expiration: 2032-08-24
Also published as: CN103622902B

Abstract

本发明公开了一种温敏凝胶药物制剂及其制备方法。该温敏凝胶药物制剂原料配方含有药物，温敏凝胶组合物，以及辅料C；所述的辅料C为金属盐、糖类物质、以及注射药用的亲水性聚合物中的一种或多种；所述的金属盐为药学上可接受的且水溶液中离解二价金属阳离子的金属盐；所述的药物为在水溶液中以阴离子形态存在的物质A，所述的物质A为蛋白类药物、多肽类药物和糖肽类抗生素中的一种或多种。该制备方法包括如下步骤：按原料配方，将药物溶解于以溶液形式存在的温敏凝胶组合物即可。该温敏凝胶药物制剂特别适合水溶性药物，减低突释作用，缓慢地释放药物，达到缓释目的。

Description

一种温敏凝胶药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种温敏凝胶药物制剂及其制备方法。

背景技术

艾赛那肽(又称exenatide或exendin-4)最先从大毒蜥(Helodermsuspectum)的唾液分泌物中分离而出，是含有39个氨基酸的多肽(Eng，J.等，J.Biol.Chem.，1990(265)：20259-20262；或者J.Biol.Chem.，1992(267)：7402-7405)，其氨基酸序列与类胰高血糖素(glucagon-like peptide-1，GLP-1)有约53％的相同组分。药理学研究发现，艾赛那肽具有和GLP-1相似的作用，即能刺激胰腺β细胞分泌胰岛素。艾赛那肽可以在体外作用于某些分泌胰岛素的细胞上的GLP-1受体、作用于来自豚鼠胰脏的散布腺泡细胞或者作用于来自胃的壁细胞；还有报道称艾赛那肽能刺激促生长素抑制素释放并且抑制分离的胃中的胃泌素释放(Goke等，J.Biol.Chem.，1993(268)：19650-19655；Schepp7，Eur.J.PharrrLacol.，1994(69)：183-191；Eissele等，Life Sci.，1994(55)：629-634)。艾赛那肽在人类和大鼠的基础受体系统中诱导cAMP产生的作用与GLP-1基本相同，最显著的受体结合部位在胰腺胰岛部位。

药物艾赛那肽由美国Amylin公司和礼来公司合作开发，FDA已批准其上市，商品名Byetta，用于对单独使用二甲双胍、磺脲类药物、或二甲双胍和磺脲类药物联用治疗未能获得良好控制的II型糖尿病患者的辅助治疗。艾赛那肽注射液临床用于II型糖尿病的治疗，现有的方案是每次给药5-10微克，每天给药2-3次，使用周期长达半年以上。因此，制备一种缓释、方便病人给药的长效注射剂对于艾赛那肽的临床应用是极其重要的。

微球是一种将药物均匀分散于可生物降解材料为骨架的球形或类球形的实体，使用前加入助悬剂后，可以顺利注射如皮下或肌内，微球注射剂有以下优点：(1)可以通过普通注射器注射至患者皮下或肌内，用药方便；(2)药物在体内以恒速缓慢释放，维持体内持久的药效；(3)微球骨架材料具有生物可降解和生物相容性质，在体内，药物可以从微球缓慢释放，而骨架材料可不断为机体吸收，由于材料具有良好的生物相容性，不至于产生毒副作用等优点(李坤，刘晓君，陈庆华，可生物降解长效注射剂给药系统的研究进展，中国工业杂志，2012，43(3)：34)。

在已上市的微球注射剂品种中，以聚酯类材料的微球注射剂占主导地位，其中人工合成多肽——黄体激素释放激素(luteinisin hormone releasinghormones，LHRH)类似物微球是上世纪90年代开发并获得了成功一类多肽长效注射剂产品。2011年7月份欧盟批准礼来公司的

(艾赛那肽微球注射剂)上市(中国专利，CN200580019229.9)，目前

是首个也是唯一一个用于II型糖尿病治疗的长效注射剂，一周注射一次。临床数据显示，使用

6个月后，糖化血红蛋白指标与基线相比下降1.5％-1.9％，患者血糖可以得到很好的控制。

但是，微球作为长效注射剂载体仍然存在以下缺点：(1)制备工艺复杂，存在驱除有机溶剂的复杂工序，生产周期较长，成本较高；(2)微球制备中往往有药物包封率的问题，药物含量很难提高；(3)灭菌的处理非常困难等。

近年来，温度敏感型生物可降解聚合物作为注射给药系统的载体受到了越来越多的关注。该类聚合物对环境温度十分敏感，当环境温度低于最低临界相变温度(LCST)时，聚合物可溶于水形成自由流动的液体，而当环境温度大于LCST时，聚合物水溶液形成半固体状态的物理交联凝胶，完成从溶胶到凝胶的相变。聚酯(缩写记为A)/聚乙二醇(缩写记为B)三嵌段共聚物是最常用的一种温度敏感型聚合物，按聚合方式分为ABA和BAB两种类型；将亲水性的聚乙二醇(PEG)插入到可生物降解的聚酯链中可调节共聚物的亲水性和降解速率。在特定比例的条件下，这类共聚物可溶于水，当浓度大于临界胶束浓度时，共聚物在水中以核-壳结构的胶束状态存在，即疏水性嵌段A形成内核，而亲水性B嵌段则分布在水分子界面形成胶束的外壳；当环境温度＞LCST时，胶束聚集形成物理交联的水凝胶。由此，药物从生物可降解的温度敏感型ABA或BAB三嵌段共聚物中的释放主要由药物扩散，以及聚合物的降解和溶蚀(两者统称为降解行为)这两种机制或两者结合控制。释放速度是评价凝胶注射剂质量的关键指标之一。因此温敏凝胶可作为长效注射剂的载体，有望可以很好的解决微球作为给药系统载体的上述缺点，所以它的成功研发，受到化工，药学等领域的普遍重视。

是MacroMed公司作为第一家专有拥有的温敏型原位凝胶产品。这种未载药的凝胶是由低分子量的ABA型PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物溶解在pH7.4的磷酸盐缓冲液制成的，此处PLGA是指聚乳酸-羟基乙酸共聚物。该凝胶系统有以下特点：①

从聚合物的合成到产品的制备均无需采用有机溶剂，在低温下可以过滤除菌，由此保证了产品的安全性。②“低温溶胶，高温凝胶”的反相温敏凝胶特性方便了制剂的制备，提高了贮存和运输时药物的化学稳定性。③良好的生物降解性和生物相容性，避免了手术植入，改善了用药的安全性和顺应性。④两亲性聚合物水溶液提高了很多疏水性药物的溶解性，不仅能传递水溶性药物，也可应用于小剂量的水难溶性药物，拓宽了传递药物的范围。⑤以核-壳结构的胶束状态温和的内部环境提高了很多药物的化学稳定性，更适合传递日益增加的多肽蛋白类药物。⑥具有1～6周的缓释能力和2年的产品有效期，具备了开发成长效注射剂的基础。除了上述优点，系统内药物的释放速率可通过改变三嵌段聚合物的疏水/亲水组分含量、聚合物浓度、分子量和多分散性调节，在设计处方时可根据不同的应用要求制成适合的处方，具有广泛的应用空间。

OncoGel^TM是将紫杉醇溶于

中制成剂量为2mg/g的长效注射剂，该制剂可用于治疗食道癌，目前在美国处于II期临床研究中，也是第一个温敏凝胶注射剂的品种。根据该载体的优点，可以看出作为治疗的剂型，有着很好的研究开发空间和应用前景。然而经过研究发现，

存在的缺点如下：①聚合物材料超出一定嵌段组成(如GA/LA中的乳酸和羟基乙酸单元摩尔比超过一定比值、或者PLGA/PEG中聚合物单元ABA中的A/B比例超过一定比值)，以及超出一定的嵌段共聚物分子量大小，就只能完全溶于水或部分甚至完全变为沉淀，从而丧失了溶胶-凝胶转变性能，以及温敏胶凝化的性能；②部分聚合物即使出现热敏特性，但其胶凝化温度不适合人体应用；③该凝胶的降解速率的调节范围和动力学过程有一定局限性，限制了其在医药领域的应用。

中国专利申请号为200910049664.6报道由两种或两种以上PLGA-PEG-PLGA嵌段聚合物组成的混合凝胶具有单一聚合物凝胶所不具有温敏的特性。这种混合聚合物凝胶具有灵敏、可逆、合适的胶凝化温度，突破了

专利的桎梏，通过调整各聚合物的比例可更灵活地调节凝胶的胶凝化温度、降解速度等性质，有应用潜力。然而，由于温敏凝胶的水性环境，制备的水溶性药物温敏凝胶时，水溶性药物很容易通过凝胶内部水溶性通道扩散出去，造成用药初期释放大部分的药物，用药后开始一段时间会出现严重的药物突释效应(Burst effect)，并且达不到制剂的缓释效果，或缓释效果不明显，限制了水溶性药物温敏凝胶的应用。现阶段有通过增加温敏聚合物浓度来降低药物的突释效应，但效果不明显，至今很少见到有研究成功解决该问题的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了水溶性药物温敏凝胶中的水溶性药物很容易通过凝胶内部水溶性通道扩散出去，造成用药初期释放大部分药物，用药后开始一段时间会出现严重的药物突释效应，达不到制剂的缓释效果等缺陷，而提供了一种特别适合水溶性药物，减低突释作用，能缓慢地释放药物的温敏凝胶药物制剂及其制备方法。

本发明的温敏凝胶药物制剂，其原料配方含有药物，温敏凝胶组合物，以及辅料C；所述的辅料C为金属盐、糖类物质、以及注射药用的亲水性聚合物中的一种或多种；所述的金属盐为药学上可接受的且水溶液中离解二价金属阳离子的金属盐；所述的药物为在水溶液中以阴离子形态存在的物质A，所述的物质A为蛋白类药物、多肽类药物和糖肽类抗生素中的一种或多种。

本发明中，所述的药物较佳的为胰高血糖素样肽-1(GLP-1类似物)、促黄体激素释放激素(LHRH类似物)、生长激素类物质，更佳的为利拉鲁肽、艾赛那肽、GLP-1(7-37)、亮丙瑞林、组胺瑞林、戈舍瑞林、重组人生长激素、重组牛生长激素、重组猪生长激素、人生长抑素、奥曲肽、C肽(又称连接肽)、降钙素、万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁中的一种或多种，进一步更佳的为艾赛那肽。

本发明中，所述的药物的含量可按本领域常规用量，较佳的为占温敏凝胶药物制剂重量0.01％～5％，更佳的为0.2％～2％。当所述的药物为艾赛那肽时，所述的药物的用量较佳的为按温敏凝胶药物制剂重量计为0.01％～2％，更佳的为0.05％～0.5％，进一步更佳的为0.2％～0.5％。

本发明中，所述的温敏凝胶组合物为本领域常规使用的温敏凝胶组合物，较佳的为按照中国专利申请，申请号为200910049664.6所说的温敏凝胶组合物。所述的温敏凝胶组合物较佳的含有聚合物；所述的聚合物包括疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物；其中，所述的疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物各自均包括聚乙二醇亲水嵌段A和聚酯疏水嵌段B(此处将嵌段引入A和B标识以便于为后文引用)。本领域技术人员均知道根据本领域常识，调整聚乙二醇亲水嵌段A和聚酯疏水嵌段B之间的比例来分别获得疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物。

其中，所述的疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物的总量较佳的为占温敏凝胶组合物总量的重量百分含量3％～50％；所述的疏水性嵌段聚合物与亲水性嵌段聚合物的用量重量比较佳的为0.5∶1～3∶1，更佳的为1∶1。

其中，所述的聚乙二醇亲水嵌段A的重量百分比较佳的为10wt％～90wt％。所述的聚乙二醇亲水嵌段A较佳的为具有400至8000的数均分子量的聚乙二醇嵌段。

其中，所述的聚酯疏水嵌段B的重量百分比较佳的为10wt％～90wt％。所述的聚酯疏水嵌段B较佳的为具有500～40000的数均分子量的聚酯嵌段。

其中，所述的聚酯疏水嵌段B中的聚酯较佳的为聚DL-丙交酯、聚D-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、聚原酸酯、聚己内酯、聚烷基取代己内酯、聚δ-戊内酯、聚酰胺酯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯或聚醚酯，以及上述各类聚酯中的两种以上的聚酯所形成的共聚物。

本发明中，所述的聚合物较佳的为ABA嵌段构型的三嵌段共聚物、BAB嵌段构型的三嵌段共聚物、BA嵌段构型的二嵌段共聚物、A(BA)n嵌段构型的多嵌段共聚物或B(AB)n嵌段构型的多嵌段共聚物，其中n为2至10的整数。所述的聚合物较佳的至少一种聚合物不具有热可逆凝胶化的性质。

本发明中，所述的疏水性嵌段聚合物较佳的为PLGA-PEG-PLGA共聚物；其中PLGA嵌段的数均分子量为1000～2000，更佳的为1571；PLGA嵌段中乳酸单元与羟基乙酸单元的摩尔比为1～10，更佳的为4；PEG嵌段的数均分子量为1400～1600，更佳的为1500。所述的疏水性嵌段聚合物的分子量分布系数为1.01～1.40，更佳的为1.23。

本发明中，所述的亲水性嵌段聚合物较佳的为PLGA-PEG-PLGA共聚物，其中PLGA嵌段的数均分子量为800～1600，更佳的为1255；PLGA嵌段中乳酸单元与羟基乙酸单元的摩尔比为1～10，更佳的为4；PEG嵌段的数均分子量为1000～2000，更佳的为1500。所述的亲水性嵌段聚合物的分子量分布系数较佳的为1.01～1.50，更佳的为1.15。

本发明中，所述的温敏凝胶组合物中的溶剂按本领域常规，一般为纯水、生理盐水、缓冲溶液、动植物或人体的体液、组织培养液或细胞培养液，以及其它水溶液和不以有机溶剂为主体的介质，较佳的为水、等渗生理盐水或等渗的pH为7.4的PBS溶液。

如前所述，本发明中所述的温敏凝胶药物制剂中的辅料C为金属盐、糖类物质、以及注射药用的亲水性聚合物中的一种或多种；所述的金属盐为药学上可接受的且水溶液中离解二价金属阳离子的金属盐。

本发明中，所述的二价金属阳离子较佳的为锌离子，钙离子或镁离子。所述的金属盐更佳的为乙酸锌。

本发明中，所述的金属盐的用量较佳的为占温敏凝胶组合物重量百分比0.1％～10％，更佳的为1％～3％，进一步更佳的为0.5％～2.5％。

本发明中，所述的糖类物质为本领域常规使用的药学可接受的糖类物质，较佳的为蔗糖、乳糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖和海藻糖中的一种或多种；所述的糖类物质的用量为本领域常规用量，较佳的为占温敏凝胶组合物重量的0.1％～20％，更佳的为2％～5％，进一步更佳的为2.5％～5％。

本发明中，所述的注射药用的亲水性聚合物为本领域常规使用，其生物相容性良好且在水凝胶中具有增稠作用；较佳的为聚乙二醇，更佳的为聚乙二醇数均分子量200～6000，进一步更佳的为PEG数均分子量200。所述的注射药用的亲水性聚合物的用量较佳的为占温敏凝胶组合物重量的0.1％～20％，更佳的为2％～5％，更佳的为2.5％～5％。

本发明中，一较佳实例，所述的辅料C为1.25％的乙酸锌、5％的蔗糖、以及5％的PEG数均分子量200，百分比为占温敏凝胶组合物重量计。

本发明还提供一种前述的温敏凝胶药物制剂的制备方法，其包括如下步骤：按原料配方，将各成分溶解于以溶液形式存在的温敏凝胶组合物即可；

当所述的辅料C含有金属盐时，将金属盐与药物在水溶液中溶解均匀混合，然后冷冻干燥，之后再与温敏凝胶组合物均匀混合；

当所述的辅料C含有糖类物质时，将糖类物质直接溶解于温敏凝胶组合物；或者与药物在水溶液中溶解均匀混合，然后冷冻干燥，之后再与温敏凝胶组合物均匀混合。

本发明的温敏凝胶药物制剂较佳的用于注射于人体皮下或肌内，控制水溶性药物以恒定的速率，缓慢持续释放的生物可降解的温敏凝胶药物制剂。如艾赛那肽温敏凝胶药物制剂治疗II型糖尿病效果极好。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征的优选条件可以任意组合得到本发明较佳实例。

本发明的积极进步效果在于：本发明的温敏凝胶药物制剂能较好地改善多肽、蛋白类水溶性药物和糖肽类抗生素的突释问题，缓慢地释放药物，以达到缓释药物的目的；特别是治疗II型糖尿病药物GLP-1类似物的温敏凝胶药物制剂能够在体外均匀释放9天，小鼠体内有效降糖5至9天，从而改善了糖尿病病人的用药顺应性；这对多肽、蛋白类大分子药物的长效注射剂的研究和开发，将具有很好的参考价值和应用意义。

附图说明

图1为对比例1-7制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图2为对比例8-9制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图3为实施例1-2制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图4为实施例3-4制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图5为实施例5-6制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图6为实施例7制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图7为实施例8制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图8为实施例9制得的温敏凝胶药物制剂的药物体外释放曲线图。

图9为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图。

图10为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图11为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图12为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图13为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图14为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图15为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图16为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图17为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图；***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05vs NaCl。

图18为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图。

图19为效果实施例1艾赛那肽凝胶制剂对ICR小鼠血糖的影响关系图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

对比例1-7

1.1对比例1-7温敏凝胶药物制剂(不含有辅料C)的制备

表1～3中的嵌段聚合物分别按照中国专利申请，申请号为200910049664.6实施例1～3中方法合成，具体配比记录于表1和2。

其中表1的嵌段共聚物为亲水性嵌段聚合物(只是能够在水中溶解)，表2的嵌段共聚物为疏水性嵌段聚合物(不能够溶解在水中或不能够完全溶解在水中)；而表3的嵌段共聚物本身就具有热可逆胶凝化的性能。

对比例1-7为从表1中选取一种或一种以上嵌段共聚物，结合从表2和/或表3中选取一种或一种以上嵌段共聚物以按比例混合，按照一定浓度溶解在去离子水中，获得具有热可逆胶凝化的凝胶水溶液。

对比例1-7的具体的原料配比如表4所述。将艾赛那肽药物溶解在凝胶溶液中，搅拌使药物溶解，0.22μm滤膜过滤灭菌，制成温敏凝胶药物制剂。

1.2对比例1-7温敏凝胶药物制剂的药物体外释放实验

将对比例1-7制得的温敏凝胶药物制剂各约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温磷酸盐缓冲液(PBS)溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图1。

测定艾赛那肽的HPLC方法如下：色谱柱：Sepax Technologies Inc.C₄键合硅胶色谱柱(4.6*150mm，5um)，流动相A：pH＝1.9(磷酸二氢钾11.58g，85％磷酸10.9g，加水至1000ml)的PBS-乙腈(468∶26，w/w)，流动相B：pH＝1.9(磷酸二氢钾11.58g，85％磷酸10.9g，加水至1000ml)的PBS-乙腈(536∶338，w/w)，洗脱程序：0～6min，流动相A从35％降至28％，6～33min，流动相A比例保持28％不变，检测波长：214nm，柱温，55℃，流速1.0ml/min，进样量50μl。

由图1可知，对比例1-7的温敏凝胶药物制剂，药物在水凝胶基质中首日突释均比较严重，前5天基本上药物的累积释放量均超过80％，第24小时的累积释药已超过60％，药物释放速率过快，药物突释的数据很明显。

表1

表2

表3

表4

编号	聚合物比例(w/w)	聚合物百分比(wt％)	载药量(wt％)
				对比例1	聚合物1/2/8＝1/1/2	25	0.2
对比例2	聚合物3/9＝1/1	25	0.2
				对比例3	聚合物4/9＝1/2	25	0.2
对比例4	聚合物5/10＝1/1	25	0.2
				对比例5	聚合物6/11＝1/1	25	0.2
对比例6	聚合物3/8/12＝4/5/1	25	0.2
				对比例7	聚合物2/7/12/13＝3/5/1/1	25	0.2

对比例8-9

1、对比例8-9温敏凝胶药物制剂(不含有辅料C)的制备

对比例8-9的聚合物A、B的合成工艺参考中国专利申请，申请号为200910049664.6所说的实施例1与3中方法。

取亲水性PLGA-PEG-PLGA共聚物(聚合物A，1571-1500-1571，嵌段的分子量是数均分子量，嵌段摩尔比LA/GA＝4，分子量分布系数为1.15)和疏水性PLGA-PEG-PLAG共聚物适量(聚合物B，1255-1500-1255，嵌段的分子量是数均分子量，嵌段摩尔比LA/GA＝4，分子量分布系数为1.23)，加入去离子水，磁力搅拌下溶解，配置成聚合物A/B重量比例分别为1/1(对比例8)和1/2(对比例9)的25％(w/w)的溶液，过0.22um滤膜后备用。精密称量艾赛那肽15mg，分别溶解于7.5g上述聚合物溶液，搅拌使药物溶解，制成载药凝胶溶液。

2、对比例8-9温敏凝胶药物制剂的药物体外释放实验

将对比例8-9制得的温敏凝胶药物制剂约0.5g置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10mlpH＝7.4的同温磷酸盐缓冲液(PBS)溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图2。

从图2可知，对比例8温敏凝胶药物制剂，药物在水凝胶基质中首日突释均比较严重，前5天基本上药物的累积释放量均超过80％，药物释放速率过快。虽然对比例9制备的凝胶释放速率缓慢，但是实验发现，其凝胶溶液胶凝温度较低，在室温(25℃)时已经胶凝，不利凝胶制备工艺的操作。

实施例1-2

聚合物A：亲水性PLGA-PEG-PLGA共聚物(聚合物A，1571-1500-1571，嵌段的分子量是数均分子量，嵌段摩尔比LA/GA＝4，分子量分布系数为1.15)；聚合物B：疏水性PLGA-PEG-PLAG共聚物适量(聚合物B，1255-1500-1255，嵌段的分子量是数均分子量，嵌段摩尔比LA/GA＝4，分子量分布系数为1.23)。

其中，聚合物A、B的合成工艺参考中国专利申请，申请号为200910049664.6所说的实施例1与3中方法合成。

取聚合物A和聚合物B，加入去离子水，磁力搅拌下溶解，配置成聚合物，聚合物A/聚合物B重量比例均为1/1，总的聚合物浓度为25％(w/w)的水溶液，过0.22μm滤膜后备用，记为聚合物溶液1(即温敏凝胶组合物)。

之后，精密称量艾赛那肽15mg，溶解于7.5g聚合物溶液1，分别加入相对于聚合物溶液1的2.5％(w/w)(实施例1)和5％(w/w)(实施例2)的蔗糖，搅拌使药物和蔗糖溶解，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例1-2制得的温敏凝胶药物制剂各自约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量(同对比例1-7中的1.2)，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图3。

由图3可知，本发明的实施例1-2的产品艾赛那肽温敏凝胶组合物中分别2.5％和5.0％的蔗糖，均能降低艾赛那肽药物的首日突释，药物释药速率有所下降，蔗糖5.0％的组比2.5％的组下降较多，第24小时分别为57.57％和54.00％。

实施例3-4

取聚合物A和聚合物B，加入去离子水，磁力搅拌下溶解，配置成聚合物，聚合物A/聚合物B重量比例分别为1/1，总的聚合物浓度为25％(w/w)的水溶液，过0.22μm滤膜后备用，记为聚合物溶液1(即温敏凝胶组合物)。

之后，精密称量艾赛那肽15mg，溶解于7.5g聚合物溶液1，分别加入相对于聚合物溶液2.5％(w/w)(实施例3)和5％(w/w)(实施例4)的PEG200(数均分子量)，搅拌使药物和PEG200溶解，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例3-4制得的温敏凝胶药物制剂各自约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量(同对比例1-7中的1.2)，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图4。

由图4可知，本发明的实施例3-4的产品艾赛那肽温敏凝胶药物制剂中分别加入2.5％(w/w)和5％(w/w)的PEG200(数均分子量)均能降低艾赛那肽药物的首日突释，并且对药物的后期释放影响不大。

实施例5-6

之后，精密称量艾赛那肽15mg，溶解于0.5ml水溶液中，分别加入相对于聚合物溶液1的1.25％(w/w)(实施例5)和2.5％(w/w)(实施例6)的乙酸锌，调节pH至7.4，4℃条件下放置24h，分别冷冻干燥得到药物锌复合物。将药物锌复合物各自分别加入7.5g聚合物溶液1，搅拌使药物锌复合物混匀，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例5-6制得的温敏凝胶药物制剂各自约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量(同对比例1-7中的1.2)，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图5。

由图5可知，本发明的实施例5-6的产品艾赛那肽温敏凝胶药物制剂中分别加入1.25％(w/w)和2.5％(w/w)的乙酸锌，使药物的突释现象明显下降，其24小时的释放分别从不加Zn的大于60％下降至29.32％和11.57％，药物的后期释放略有不均匀，但已显然优于对比例。

实施例7

之后，精密称量艾赛那肽15mg，加入相对于聚合物溶液1的1.25％(w/w)的乙酸锌，调节pH至7.4，4℃条件下放置24h，冷冻干燥成药物锌复合物。将药物锌复合物加入7.5g聚合物溶液1，搅拌使药物锌复合物混匀，再加入相对于聚合物溶液1的5％(w/w)的蔗糖、5％(w/w)PEG200(数均分子量)，搅拌溶液均匀，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例7制得的温敏凝胶药物制剂约0.5g置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10mlpH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的1、3、5、7和9天分别取出全部的释放介质，测量底部残余凝胶中的药物含量，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图6。

由图6可知，本发明的实施例7的产品艾赛那肽温敏凝胶药物制剂在蔗糖、PEG200和乙酸锌三者的协调作用下艾赛那肽首日突释更低，释放速率变得规律，后期释放更均匀，第24小时的药物释放量约为20％，第5日为60％至70％，第9日为80％以上；药物突释效应小，释放速率均匀，特别符合一周缓释的传递多肽和蛋白类药物的要求。

实施例8

取表3中所列聚合物12，加入去离子水，磁力搅拌下溶解，配置成25％(w/w)聚合物溶液，过0.22μm滤膜后备用，记为聚合物溶液2(即温敏凝胶组合物)。

之后，精密称量醋酸亮丙瑞林(上海丽珠制药有限公司，纯度＞98％)45mg，溶解于1.5ml水溶液中，加入相对于聚合物溶液2的1％(w/w)的乙酸锌，调节pH至7.4，4℃条件下放置24h，冷冻干燥得到药物锌复合物。将药物锌复合物加入7.5g聚合物溶液2，搅拌使药物锌复合物混匀，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例8制得的温敏凝胶药物制剂各约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的一定间隔内分别取出全部的释放介质(同对比例1-7中的1.2)，测量底部残余凝胶中的药物含量，间接计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图7。

测定醋酸亮丙瑞林的HPLC方法如下：色谱柱：C₁₈键合硅胶色谱柱(4.6*150mm，5um)，流动相：100mmol/L磷酸三乙胺溶液∶乙腈＝78∶22。检测波长：225nm，柱温，35℃，流速1.0ml/min，进样量20μl。

由图7可知，醋酸亮丙瑞林温敏凝胶药物制剂中分别加入1％(w/w)的乙酸锌锌，药物能缓慢均匀的释放3周左右。

实施例9

取表1中聚合物1和表2中聚合物8，加入去离子水，磁力搅拌下溶解，配置成聚合物1/聚合物8重量比例为1/1.5，总的聚合物浓度为25％(w/w)的水溶液，过0.22μm滤膜后备用，记为聚合物溶液3(即温敏凝胶组合物)。

之后，精密称量重组牛生长激素40mg(上海市农业科学院畜牧兽医研究所合成，纯度＞90％)，溶解于1ml水溶液中，加入相对于聚合物溶液3的0.5％(w/w)的乙酸锌，调节pH至7.4，4℃条件下放置24h，冷冻干燥得到药物锌复合物。将药物锌复合物加入2g聚合物溶液3，搅拌使药物锌复合物混匀，制成温敏凝胶药物制剂。

将实施例9制得的温敏凝胶药物制剂约0.5g分别置于10ml具塞刻度试管中，于37。℃恒温空气摇床中放置15min待聚合物溶液完全胶凝后，加入10ml pH＝7.4的同温PBS溶液作为释放介质，释放面积为0.18cm²，转速为50rpm。释放开始后的一定间隔内取出一定量的释放介质，BSA法测量药物含量，计算药物释放量，平行操作3份。以累计药物释放量对时间作图，得到释放曲线，结果见图8。

由图8可知，重组牛生长激素温敏凝胶药物制剂中分别加入0.5％(w/w)的乙酸锌，药物能缓慢均匀的释放3～4周左右。

效果实施例

1、实验原理及目的

由于GLP-1类药物的降糖作用具有显著的葡萄糖依赖性，所以采用正常ICR小鼠灌胃给予葡萄糖，考察艾赛那肽温敏凝胶药物制剂的药理活性和作用时间，从而评价其体内降糖效果(李仪奎，金若敏，王钦茂.中药药理实验方法学，1版，上海：上海科学技术出版社，2006：608-610页)

2、实验动物

正常ICR小鼠，雄性，体重20～30g。实验前所有动物按照体重随机分为4组(n＝6)，分别为正常对照组(Nor)、空白对照生理盐水组(NaCl)、阳性对照艾赛那肽水溶液(Sol)、凝胶组(Gel)。

3、药物配制

1)凝胶组(Gel)：实施例7产品。

2)阳性对照艾赛那肽水溶液(Sol)：将艾赛那肽溶液与pH4.5的醋酸盐缓冲液中，制成1mg/ml标准母液，临用前用冰冷生理盐水稀释5倍，待用。

3)葡萄糖：2g/kg。

4、实验方法

各组动物禁食过夜(自由饮水)，次日尾尖采血后皮下注射给药(0.1ml/10g，正常对照组给予生理盐水)，15min后灌胃给予葡萄糖(2g/kg，0.1ml/10g)，并分别于糖负荷后30、60、120min尾尖采血，测定血糖。给药后4h再次灌胃给予葡萄糖(同上)，同样分别在糖负荷后30、60、120min尾尖采血，测定血糖(血糖测定采用葡萄糖氧化酶法，下同)。

之后，各组动物分别在给药后第2、3、4、5、6、7、8、9、10和11天9:00am开始禁食(自由饮水)4h，然后尾尖采血，并灌胃给予葡萄糖(同上)，分别在糖负荷后30、60min尾尖采血，测定血糖。

5、试验结果，记录于图9至19。

从小鼠的耐糖试验来看，最终处方在5mg/kg剂量下，单次给药后第1至5天(图9-图13)都能够显著降低正常ICR小鼠口服葡萄糖负荷后的血糖，且有良好的降糖效果。在单次给药后第6至9天(图14-图17)对小鼠口服葡萄糖负荷后的降糖作用减弱，第10至11天(图18-图19)对小鼠口服葡萄糖负荷后的血糖已没有明显影响，提示艾赛那肽最终处方单次给药后体内降糖作用能够持续5-9天；试验期间小鼠无任何异常现象，由此可见该温敏凝胶药物制剂长效、安全性良好。

Claims

1.一种温敏凝胶药物制剂，其特征在于，其原料配方含有药物，温敏凝胶组合物，以及辅料C；所述的辅料C为金属盐、糖类物质、以及注射药用的亲水性聚合物中的一种或多种；所述的金属盐为药学上可接受的且水溶液中离解二价金属阳离子的金属盐；所述的药物为在水溶液中以阴离子形态存在的物质A，所述的物质A为蛋白类药物、多肽类药物和糖肽类抗生素中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的二价金属阳离子为锌离子，钙离子或镁离子；所述的金属盐较佳的为乙酸锌；所述的金属盐的用量为占温敏凝胶组合物重量百分比0.1％～10％，较佳的为1％～3％，更佳的为0.5％～2.5％。

3.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的糖类物质为蔗糖、乳糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖和海藻糖中的一种或多种；所述的糖类物质的用量为占温敏凝胶组合物重量的0.1％～20％，较佳的为2％～5％，更佳的为2.5％～5％。

4.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的注射药用的亲水性聚合物为聚乙二醇，较佳的为聚乙二醇数均分子量200～6000，更佳的为PEG数均分子量200；所述的注射药用的亲水性聚合物的用量为占温敏凝胶组合物重量的0.1％～20％，较佳的为2％～5％，更佳的为2.5％～5％。

5.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的药物的含量为占温敏凝胶药物制剂重量0.01％～5％，较佳的为0.2％～2％；当所述的药物为艾赛那肽时，所述的药物的用量为按温敏凝胶药物制剂重量计为0.01％～2％，较佳的为0.05％～0.5％，更佳的为0.2％～0.5％。

6.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的药物为胰高血糖素样肽-1、促黄体激素释放激素或者生长激素类物质，较佳的为利拉鲁肽、艾赛那肽、GLP-1(7-37)、亮丙瑞林、组胺瑞林、戈舍瑞林、重组人生长激素、重组牛生长激素、重组猪生长激素、人生长抑素、奥曲肽、C肽、降钙素、万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁中的一种或多种；所述的辅料C较佳的为1.25％的乙酸锌、5％的蔗糖、以及5％的PEG数均分子量200，百分比为占温敏凝胶组合物重量计。

7.如权利要求1所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的温敏凝胶组合物含有聚合物；所述的聚合物包括疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物；其中，所述的疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物各自均包括聚乙二醇亲水嵌段A和聚酯疏水嵌段B。

8.如权利要求7所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的疏水性嵌段聚合物和亲水性嵌段聚合物的总量为占温敏凝胶组合物总量的重量百分含量3％～50％；所述的疏水性嵌段聚合物与亲水性嵌段聚合物的用量重量比为0.5∶1～3∶1，较佳的为1∶1；

所述的聚乙二醇亲水嵌段A的重量百分比为10wt％～90wt％；所述的聚乙二醇亲水嵌段A为具有400至8000的数均分子量的聚乙二醇嵌段；

所述的聚酯疏水嵌段B的重量百分比为10wt％～90wt％；所述的聚酯疏水嵌段B为具有500～40000的数均分子量的聚酯嵌段；

所述的聚酯疏水嵌段B中的聚酯为聚DL-丙交酯、聚D-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、聚原酸酯、聚己内酯、聚烷基取代己内酯、聚δ-戊内酯、聚酰胺酯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯或聚醚酯，以及上述各类聚酯中的两种以上的聚酯所形成的共聚物。

9.如权利要求7所述的温敏凝胶药物制剂，其特征在于，所述的聚合物较佳的为ABA嵌段构型的三嵌段共聚物、BAB嵌段构型的三嵌段共聚物、BA嵌段构型的二嵌段共聚物、A(BA)n嵌段构型的多嵌段共聚物或B(AB)n嵌段构型的多嵌段共聚物，其中n为2至10的整数；所述的聚合物至少一种聚合物不具有热可逆凝胶化的性质；

所述的疏水性嵌段聚合物较佳的为PLGA-PEG-PLGA共聚物；其中PLGA嵌段的数均分子量为1000～2000，更佳的为1571；PLGA嵌段中乳酸单元与羟基乙酸单元的摩尔比为1～10，更佳的为4；PEG嵌段的数均分子量为1400～1600，更佳的为1500；所述的疏水性嵌段聚合物的分子量分布系数为1.01～1.40，更佳的为1.23；

所述的亲水性嵌段聚合物较佳的为PLGA-PEG-PLGA共聚物，其中PLGA嵌段的数均分子量为800～1600，更佳的为1255；PLGA嵌段中乳酸单元与羟基乙酸单元的摩尔比为1～10，更佳的为4；PEG嵌段的数均分子量为1000～2000，更佳的为1500；所述的亲水性嵌段聚合物的分子量分布系数为1.01～1.50，更佳的为1.15。

10.一种如权利要求1-9任一项所述的温敏凝胶药物制剂的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：按原料配方，将各成分溶解于以溶液形式存在的温敏凝胶组合物即可；