CN104906112B - 一种促进蛋白质合成的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及生物技术领域，特别涉及一种组合物、用途及制备方法。该组合物中含有提取自酸浆宿萼的β‑隐黄质浓缩物和胆汁盐，以及DL‑ALPHA‑生育酚和/或抗坏血酸钠，可有效促进人类和动物组织中蛋白质的合成，预防衰老或治疗过程中肌肉减少。本发明的组合物原料易得，制备工艺简单，所得产品质量高，综合成本可控，适合于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种促进和/或提高生物体内蛋白质合成的含有β-隐黄质的药物组合物，属于医药生物技术领域。
背景技术
β-隐黄质是一种类胡萝卜素，其分子中由中央共轭多烯链和末端六元环组成，且其中一个末端六元环上存在单个羟基，分子呈非对称型，其中以全反式异构体最稳定。β-隐黄质通常呈单体或酯的形式存在于橘子、红辣椒、酸浆等高等植物的花或果实组织中。研究表明，β隐黄质可以增强和提高人类动物组织，例如肝、皮肤、肌肉等中的蛋白质的合成，也可以用于在运动及训练、康复过程中一般性强化生长和发育，以及用于预防和治疗肌肉减少。有研究表明，当胆汁中存在胆汁盐时，β-隐黄质促进的蛋白形成更为有效。
酸浆为茄科酸浆属的一种多年生草本植物，在我国大部分地区均有分布，又名“红姑娘”、“红灯笼”、“洛神珠”等。酸浆膨大的宿萼可入药，具有化痰、镇咳、明目等功效。酸浆中含有丰富的类胡萝卜素，主要组分为玉米黄质、叶黄素、β-隐黄质等，其中β-隐黄质(cryptoxantin)的含量较为丰富，主要以酯的形式存在。虽然现在市面上已售有含有β-隐黄质的产品，但其含量均较低，例如COTION公司销售的β-隐黄质产品，其含量仅为0.2%，且其成分较为单一，实际药用效果也并不理想。
发明内容
针对现有技术存在的诸多缺陷，本发明人经过大量的深入研究，在付出了充分的创造性劳动后，提供一种含有更高含量的β-隐黄质的药物组合物及其制备方法和制药用途。
具体而言，本发明是通过如下技术方案实现的：
步骤一、处理原料
取酸浆宿萼原药，清洗，避光干燥，粉碎，混匀，过20-200目筛，得到酸浆宿萼粉末。
步骤二、酶处理
在惰性气体氛围下，按照酸浆宿萼与水的质量比1:10-60，生物酶的用量占酸浆宿萼粉末总重量的0.1-5%的比例，配制酶解溶液，搅拌，利用无机酸或者无机碱调节酶解溶液的pH为3-7，放入恒温摇床中，摇床转速为100~120rpm，在30-70℃下进行保温酶解60-180min。
根据本发明的一种优选方式，为了保证生物酶的活力，所述步骤B中pH5-7，最优选5-6。反应液的pH过高或过低，都会影响酶的稳定性，从而使酶催化遭受不可逆破坏。
根据本发明的一种优选方式，所述步骤二中的生物酶为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶或上述酶的混合物，优选纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶或其混合物，最优选纤维素酶和果胶酶的混合物，两者的质量比优选为1:1-10，优选1:3-8，更优选1:6-8。
根据本发明的一种优选方式，所述步骤二中酶与酸浆宿萼粉末的质量比优选为0.1-6:100；随着反应体系中酶用量的增加，酶与底物接触机会增加，但当酶用量达到一定比例后，再增加酶的用量，β-隐黄质的提取率增加不明显，从节约成本、提高提取率的角度考虑，酶与酸浆宿萼的质量比更优选为2-5:100。
根据本发明的一种优选方式，所述步骤二中的酶解保温温度优选35-65℃，酶解温度过高或过低均会使酶的活力降低，从而导致酶解效率降低，本发明中的酶解温度更优选35-50℃，最优选40-45℃。
根据本发明的一种优选方式，所述步骤二中酶解时间优选90-180min。酶解反应时间与酶解进行程度密切相关，酶解时间太短，酶解不充分，但当反应进行到一定程度以后，延长酶促反应时间并不能显著增加提取率，综合考虑，酶解时间更优选90-120min。
根据本发明的一种优选方式，所述步骤二中的无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸，无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。
步骤三、超临界CO2萃取
称取步骤二得到的干燥后的酶处理酸浆宿萼粉末，利用超临界CO2萃取法超临界萃取得到β-隐黄质浓缩物，其中，超临界CO2萃取的温度为40-70℃，优选40-55℃，更优选45℃。萃取压力为10-50MPa，优选20-45MPa，更优选25-35MPa。萃取时间为0.5-6h，优选1-3h，更优选2h。
步骤四、复配
称取适量步骤三所得的浓缩物，根据β-隐黄质的含量，按比例加入适量胆汁盐，混合、搅拌均匀，得到本发明所述的含有β-隐黄质的组合物。
根据本发明的一种优选方式，β-隐黄质与胆汁盐的质量比为1：(0.5-8)，优选1：(0.5-6)，更优选1：(3-6)，即为1:3、1:4、1:5、1:6。
根据本发明的一种优选方式，所述胆汁盐为胆酸钠、甘胆酸盐、牛黄胆酸盐、甘氨脱氧胆酸盐，优选甘胆酸钠或钾、甘氨脱氧胆酸钠或钾，更优选甘胆酸钠。
根据本发明的一种优选方式，组合物中还含有DL-ALPHA-生育酚和/或抗坏血酸钠。其中，β-隐黄质与DL-ALPHA-生育酚的质量比为1：(0.01-0.1)，优选1：(0.03-0.08)，更优选1：(0.05-0.08)，即为1：0.05、1：0.06、1：0.07、1:0.08。
根据本发明的一种优选方式，β-隐黄质与抗坏血酸钠的质量比为1：(3-10)，优选1：(5-10)，即为1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10。
根据本发明的一种优选方式，复配所得的组合物中还包括食用纤维质，包括可溶性非淀粉多糖如阿拉伯胶或果胶，不溶性非淀粉多糖如纤维素、半纤维素和木素，低聚糖如菊粉或半乳低聚糖。
根据实际生产需要，可向本发明所得组合物中加入适应的赋形剂、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂，并按照本领域常规制剂方法制备呈任意一种临床上可接受的适宜药物制剂，优选的，可加工成胶囊、粉剂、片剂或颗粒剂。
有益效果：
相对于市售的类胡萝卜素类药物制品，本发明的药用组合物中不仅含有含量较高、纯度更好的β-隐黄质，还存在胆汁盐等物质进行复配，其显著地增加了蛋白形成，有效预防了蛋白损失，提高了β-隐黄质的药物利用效果。本发明的组合物中的β-隐黄质提取自酸浆宿萼，根据本发明所述的组合物的制备方法得到的β-隐黄质，其提取率较高，为酸浆的进一步开发利用提供了一条新的途径。本发明原料易得，提取工艺简单，所得产品质量高，综合成本可控，适合于工业化生产。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。
实施例1：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备
取酸浆宿萼原药，清洗，避光干燥，粉碎，混匀，过20-200目筛，得到酸浆宿萼粉末。在惰性气体氛围下，按照酸浆宿萼与水的质量比1:30，纤维素酶和果胶酶的混合酶的用量占酸浆宿萼粉末总重量的3%的比例，配制酶解溶液，其中，纤维素酶和果胶酶的质量比为1:7。搅拌，利用盐酸或者氢氧化钠溶液调节酶解溶液的pH为6，放入恒温摇床中，摇床转速为100~120rpm，在45℃下进行保温酶解100min。过滤，干燥，称取干燥后的酶处理酸浆宿萼粉末，利用超临界CO2萃取法，在45℃、35MPa的条件下，超临界萃取2h，得到β-隐黄质浓缩物。经HPLC检测，所得浓缩物种β-隐黄质含量为15.68%。
实施例2：本发明的组合物的制备
根据实施例1中所得的浓缩物中的β-隐黄质的质量，分别按照1:1的质量比加入胆酸钠、甘胆酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钾，混合、搅拌均匀，得到本发明所述的组合物。
参考例1：促进蛋白形成能力表征
由于鱼类的生长实际上是通过蛋白质合成完成的，白肌又是鱼类蛋白质合成沉积最高的组织，是代表鱼体生长最优代表性的组织。因此选择市售的鲤鱼苗为实验对象，评价本发明所述的药物组合物对蛋白质合成的影响。
按照20mg/Kg的添加量，将实施例1中所得的浓缩物、实施例2中所得的组合物分别添加至市售鱼饲料中，混合均匀，粉碎至1.5mm，干燥后备用。市场上购买100尾规格整齐的鲤鱼苗，置于网箱中进行驯养，其间从市售饲料逐渐过渡到上述复配饲料。待全部摄食复配饲料后，试验开始前先停食24h，称重，随后从驯养鱼苗中随机取30尾鱼，喂饲复配饲料，持续饲养一周。实验结束前停食24h。从30尾鱼中随机取10尾，吸干体表水分，存在背鳍基部取白肌和肝胰脏作为待测样品，于-20℃保存待测DNA、RNA含量。配制RNA、DNA标准液，绘制标准曲线，分别在260nm和265nm处测定RNA和DNA的吸收值(OD)，换算确定RNA和DNA含量(μg/mL)。RNA/DNA比率表示核糖体的数量或蛋白质的合成潜力或RNA的转录效率，是衡量组织蛋白质合成能力的指标。实验结果见表1：
表1
| 饲料 | RNA/DNA比率 |
| 市售饲料 | 1.22±0.03 |
| 市售饲料+实施例1浓缩物 | 1.48±0.1 |
| 市售饲料+浓缩物+胆酸钠 | 1.68±0.05 |
| 市售饲料+浓缩物+甘胆酸钠 | 2.13±0.21 |
| 市售饲料+浓缩物+牛黄胆酸钠 | 1.94±0.11 |
| 市售饲料+浓缩物+甘氨脱氧胆酸钾 | 2.05±0.07 |
实施例3：本发明的组合物的制备
根据实施例1中所得的浓缩物中的β-隐黄质的质量，分别按照1:0.5、1:1、1:2、1:3、1:5、1:7、1:8的质量比加入甘胆酸钠，混合、搅拌均匀，得到本发明所述的组合物。
参考例2：促进蛋白形成能力表征
参照参考例1的表征方法，测定实施例3的组合物的RNA/DNA比值，结果见表2：
| 饲料 | RNA/DNA比率 |
| 市售饲料+1:0.5 浓缩物/甘胆酸钠 | 1.85±0.01 |
| 市售饲料+1:1 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.13±0.21 |
| 市售饲料+1:3 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.44±0.13 |
| 市售饲料+1:4 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.62±0.24 |
| 市售饲料+1:5 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.75±0.04 |
| 市售饲料+1:6 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.69±0.1 |
| 市售饲料+1:8 浓缩物/甘胆酸钠 | 2.70±0.08 |
由参考例1和2的实验结果可知，当饲料中加入本发明的组合物，鱼苗体内的RNA/DNA比率得到了显著的提高。其中，当胆汁盐为甘胆酸钠、β-隐黄质与甘胆酸钠的质量比为1:5时，RNA/DNA比率值最高，取得了预料不到的技术效果。
应当理解，这些实施例的用途仅用于说明本发明而非意欲限制本发明的保护范围。此外，也应理解，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改和/或变型，所有的这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种促进和/或提高生物体内蛋白质合成的组合物，其特征在于，包括提取自酸浆宿萼的、含有β-隐黄质的浓缩物，和胆汁盐；其中，所述胆汁盐选自甘胆酸钠、甘胆酸钾、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钾、牛黄胆酸钠；所述β-隐黄质与胆汁盐的质量比为1：(3-6)；所述浓缩物按如下方法制备：
步骤一、处理原料
取酸浆宿萼原药，清洗，避光干燥，粉碎，混匀，过20-200目筛，得到酸浆宿萼粉末；
步骤二、酶处理
在惰性气体氛围下，按照酸浆宿萼与水的质量比1:10-60，生物酶的用量占酸浆宿萼粉末总重量的0.1-5%的比例，配制酶解溶液，搅拌，利用无机酸或者无机碱调节酶解溶液的pH为3-7，放入恒温摇床中，摇床转速为100~120rpm，在30-70℃下进行保温酶解60-180min；
步骤三、超临界CO2萃取
称取步骤二得到的干燥后的酶处理酸浆宿萼粉末，利用超临界CO2萃取法超临界萃取得到β-隐黄质浓缩物，其中，超临界CO2萃取的温度为40-70℃，萃取压力为10-50MPa，萃取时间为0.5-6h。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述胆汁盐为甘胆酸钠或甘胆酸钾、甘氨脱氧胆酸钠或甘氨脱氧胆酸钾，牛黄胆酸钠。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的组合物，其特征在于，组合物中还含有DL-ALPHA-生育酚和/或抗坏血酸钠。
4.根据权利要求1-2中任一项所述的组合物，其特征在于，组合物中还包括食用纤维质。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述食用纤维质选自阿拉伯胶、果胶、纤维素、木素、菊粉、半乳低聚糖。
6.权利要求1-5中任一项所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备促进和/或提高生物体内蛋白质合成的药物。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |