CN106924271A - 人参皂苷c-k用于制备治疗银屑病药物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了人参皂苷C-K及其药学上可接受的溶剂合物或水合物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途，用于治疗银屑病的含有所述人参皂苷C-K的药盒、药物组合物，以及制备所述药物组合物的方法。

Description

人参皂苷C-K用于制备治疗银屑病药物

技术领域：

本发明提供了人参皂苷C-K及其药学上可接受的溶剂合物或水合物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途，用于治疗银屑病的含有所述人参皂苷C-K的药盒、药物组合物，以及制备所述药物组合物的方法。

背景技术：

“银屑病”，又称牛皮鲜，是一种边缘清晰、红斑、皮肤增厚、表面覆盖有鳞屑的慢性、复发性、皮肤炎症性疾病；顽固、容易复发。银屑病在患者全身均可发病，而在头皮、四肢伸侧以及背部较为常见。临床症状显示为患者出现红斑，红斑上反复出现干燥的鳞屑，鳞屑脱落后有出现出血点。

银屑病在世界各地发病率差异很大，美洲安第斯山印第安人和澳洲原住居民发病率为0％，而北欧及俄罗斯部分人群发病率为11％，在美国有2.2-2.6％人患有该疾病，中国尚缺乏精确的统计，目前有报道称为0.2-1.5％。全世界总发病率约为3％。由于银屑病患者生活质量受到严重影响，甚至连就业和收入也成问题。

皮肤是预防侵入物或损伤最前端的防卫线，它由许多上皮和免疫成分组成，而这些免疫成分构成了皮肤相关的淋巴组织(SALT)，病理情况下或是外界刺激强或慢性反复刺激，或者是由于机体遗传缺陷，就会产生异常反应。普通型银屑病是目前认识较清楚且为大家所认可的由T细胞和树突状细胞所介导的皮肤慢性炎症性疾病。

研究证明银屑病不仅仅是受基因所影响，而是也与环境因素相关，已知的能够引起银屑病发病的环境因素有感染、应激、过度肥胖、一些药品、抽烟、过度饮酒，甚至气候、天气都可以在一部分病人身上诱发或加重病情。

上述诸多因素形成了银屑病患者皮肤的典型的病理变化，角朊细胞增殖加速导致皮肤增厚，角朊细胞正常分化过程不能发生，正常的颗粒层丢失，细胞核在表层上皮仍保留角蛋白，在整个表皮都存在16型角蛋白，真皮层存在着大量的角蛋白。中性粒细胞聚集在表皮中，在真皮有大量的单核细胞，主要是髓性来源的树突状细胞和T细胞，而银屑病患者局部皮肤的红斑是由于大量的扩张了的皮肤血管。

目前常用的治疗银屑病的药可分为全身系统用药和局部外用药，一般来说对于中、重度银屑病患者常采用全身用药，而轻度或者部分中度患者常采用外用药物全身系统用药， 绝大多数临床医师都习惯用甲氨喋呤(MTX)，用于银屑病患者的第一线全身治疗银屑病或者银屑病性关节炎，而另一个常用的药物为环孢菌素A，因为它可以通过预防T细胞活化和细胞因子的表达。这两个药几乎成了银屑病治疗药物的金标准，但是该类药物，由于原属细胞毒类抗癌药或免疫抑制剂，长期应用必然会产生严重的毒副作用。

近几年来由于许多研究者和临床医师的共同努力，出现了许多新的治疗用的生物制剂和口服全身性靶向小分子药物等。其中以TNF拮抗剂最为突出，例如Etanercept和抗TNF抗体aldalimumab、infliximab等生物制品给中重型银屑病患者带来了福音；新的口服抗银屑病的小分子药物例如：二甲基反丁烯二酸酯(二甲基延胡索酸)和4型磷酸二酯酶的抑制剂apremilast，可以减少致炎因子的释放(例如IL-12、IL-23和TNF)，诱导抗炎细胞因子(例如IL-10)的产生。

临床上Tofacitinib可以作为口服制剂用于中度和重度银屑病患者。

对于轻度银屑病患者，即皮损面积小于10％的患者，通常采用外用局部给药。对于中重度患者，在采用紫外光和全身治疗的同时，外用药也可以作为辅助治疗。目前的银屑病局部用药有：

糖皮质激素类：是目前银屑病患者最常使用的外用制剂，可以根据皮损大小部位及病情的进展情况选用不同强度和剂型。糖皮质激素类药物可以产生抗炎、抗增殖、免疫抑制及血管收缩的作用而治疗银屑病，但是局部使用可以导致糖皮质激素产生副作用，而且长期使用会产生耐受，停药后会产生反跳。

维生素D3类似物：其代表性药物为卡泊三醇，是目前常用的银屑病外用药，其主要的作用是与维生素D受体结合，抑制了角质形成细胞增殖，并诱导其分化，是目前治疗银屑病的金标准。该药较糖皮质激素类药物起效慢，但是较糖皮质激素类间歇期更长，但是该药对皮损周边有一过性刺激和便血清肠一过性增高。

维生素A酸类衍生物，例如他扎罗汀。它可以刺激角质形成细胞正常化，减少过度增殖，降低炎症标记物的表达。该药为常用银屑病的局部用药疗效是很好的，但是对于皮损及周边地区有刺激作用，该药严禁使用于妊娠期，对儿童患者慎用。

免疫抑制剂他克莫司和吡美莫司，均属于钙调磷酸酯酶，可有效治疗面部和屈侧部位的银屑病。该药的副作用是皮肤刺激和瘙痒，而且FDA发布了有争议的淋巴病的黑箱报告，所以慎用。

焦油类药物：本品确实对某些银屑病患者有效，但是会使衣服着色和煤焦油气味，动物试验有致癌风险，尽管在人体未能证实。儿童用药应谨慎。

蒽林类：无煤焦油类难闻的气味和衣服着色。

水杨酸类：有一定疗效，且无FDA规定的禁忌症使用剂量，但是大面积使用，特别是肝肾功能不全者应谨慎。

上述药物联合使用或间歇使用，但必须考虑到它们的理化性质和作用机制的前提下，可能取得更好的疗效。

发明简述

本申请提供了一种用人参皂苷C-K用于治疗银屑病的用途。使用人参皂苷C-K治疗银屑病的优点在于：

人参皂苷C-K有抗炎作用，该作用对于银屑病和类风湿性关节炎都是有效的；

人参皂苷C-K可以抑制角质形成细胞的过度增殖，并诱导其分化；

人参皂苷C-K可以抑制血管增生和扩张；

人参皂苷C-K可以抑制一些炎症细胞聚集和炎症因子的释放；

人参皂苷C-K副作用极小，即便远超过银屑病外用剂量下也无副作用。

因此，对于银屑病的治疗，本发明方法是非常有效且无副作用的。

根据本申请的一个发明，本申请提供了人参皂苷C-K及其药学上可接受的溶剂合物或水合物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。

根据本申请的优选实施方式，所述银屑病包含寻常型银屑病。

根据本申请的一个发明，本申请提供了一种药盒，其特征在于，所述药盒包含人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物，所述药盒用于治疗银屑病。

根据本申请的一个发明，本申请提供了一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物，以及药学上可接受的载体，所述药物组合物用于治疗银屑病。

根据本申请的一个发明，本申请提供了一种含有人参皂苷C-K的药物组合物的制备方法，其特征在于，将根据人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物与药学上可接受的载体混合来制备，所述药物组合物用于治疗银屑病。

附图说明

在本文中附带并且形成本说明书的一部分的附图例示性的显示了本发明，并且与说明书一起进一步用于说明本发明的原理并且使得相关领域的技术人员能够做出并且使用本发明。本发明的实施例仅作为例子来参照附图进行描述。

图1和图2显示了人参皂苷C-K和空白对照对于HaCaT细胞分化的免疫组化染色 的结果；图1显示了在使用20μg/ml的人参皂苷C-K处理48小时后，细胞的染色结果；图2显示了48小时后空白对照的细胞的染色结果。

发明详述

定义

“人参皂苷”(Ginsenoside)是一种固醇类化合物三萜皂苷，是人参中的活性成分。人参皂苷具有相似的基本结构，基本结构是含有由30个碳原子排列而成四个环的甾烷类固醇。人参皂苷在结构上分成达玛烷型和齐墩果烷型(C型)。达玛烷型人参皂苷又分成两类人参二醇型(A型)和人参三醇型(B型)。人参二醇型(A型)和人参三醇型(B型)的皂苷元属于四环三萜，而墩果烷型(C型)皂苷元属于五环三萜。

“人参皂苷C-K”(20(S)-Ginsenoside C-K)，属于皂苷类化合物，是二醇型(A型)人参皂苷在人肠道内的代谢产物。人参皂苷C-K的分子式为C₃₆H₆₂O₈，分子量为622.87，在本申请中也简称CK。CK分子结构如下式所示：

人参皂苷C-K现代研究表明人参皂苷C-K具有抗癌、保肝、调节免疫系统等多种活性。

本申请所述的化合物包含该化合物的无水物形式和非溶剂合物形式，也包含该化合物的水合物和溶剂合物形式。本申请中术语“溶剂合物”是指包含所述化合物和一个或多个药学上可接受溶剂分子(如乙醇)的分子。当其中溶剂是水时，所述溶剂合物是水合物。

术语“药物组合物”表示含有治疗有效量的一种或多种所述化合物及其药学上可接受的溶剂合物或水合物，与其他药学上可接受的载体的混合物。将所述化合物制备成药物组合物的目的是为了更方便地向对象给药。

本申请所述药物组合物可以为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、栓剂、散剂、膏剂、贴剂、注射液、溶液、混悬液、喷雾剂、洗剂、滴剂、擦剂。

本申请中术语“药盒”，可与“试剂盒”互换使用。本申请公开了包含治疗有效量 的所述治疗剂或药物组合物的药盒。根据本申请的某些实施方式，所述药盒还包含一种或多种其他的治疗剂。

术语“给药”，可与“给予”或“施予”互换使用，是指将一定剂量的化合物或药物组合物通过合适的给药方式给予对象。

所述“给药方式”包括但不限于口服给药、静脉内给药、呼吸道内给药、舌下给药、局部给药、肌肉内给药、眼内给药、透皮吸收、胃肠外给药、腹膜内给药、阴道给药、颊部给药、经直肠给药等本领域已知的任何给药方式。本领域技术人员应该了解对象的给药方式取决于多个因素，所述因素包括疾病的位置、对象的年龄、疾病的严重程度、以及药物组合物的成分等。

本申请所述化合物或药物组合物可以在任意时间给药。例如所述化合物或药物组合物可以在对象疾病发作前、发作时或者发作后给药。

本申请所述化合物或药物组合物可以一次给药，也可以多次给药。当多次给药时，可以以间隔任意时间的方式。

本申请所述化合物或药物组合物可以单独给药，也可以与其他合适的药物联合给药。所述联合给药可以是例如与其他药物同时给药或先后给药。当先后给药时，可以以间隔任意时间的方式。

术语“有效量”或“治疗有效量”的所述化合物是指向对象给药后足以获得所需的治疗效果的量。所述治疗效果如有效抑制银屑病的病症。本领域技术人员应该了解所述化合物的合适的剂量取决于多个因素，所述因素包括但不限于要治疗对象的体重、年龄和性别、给药时间、要治疗的疾病的严重程度等。

术语“治疗”或“处理”指向对象给药之后，可以“预防”、“防治”、“抑制”、“改善”或“治愈”对象的疾病、紊乱或疾病状况。

本申请中术语“对象”、“受试者”或“患者”可以互换使用，并且具有广泛的含义，包括人或非人哺乳动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、绵羊、猪、山羊、奶牛、非人灵长类动物；或者禽类，例如鸡、鸭、鹅；包括其他脊椎动物、非脊椎动物，也包括体外的组织、原核细胞或真核细胞等。根据本申请的某些实施方式，所述对象是哺乳动物。根据本申请的某些实施方式，所述对象是灵长类动物。根据本申请的某些实施方式，所述对象是人。

术语“药学上可接受的载体”是药学上可接受的成分或者介质，包括但不限于溶剂、赋形剂、稀释剂、佐剂、填充剂等。常见的药学上可接受的载体包括生理盐水，缓 冲剂、糖类、明胶、淀粉、林格氏溶液、纤维素等。所述载体的pH通常为3-11，优选5-9，更优选7-8。

术语“半数抑制浓度(IC₅₀)”，或称“半抑制率”，是指抑制剂在抑制靶标物质过程中，当靶标物质的活性被抑制到一半时，抑制剂的浓度。通常，抑制剂的抑制能力越强，IC₅₀越低。根据本申请的某些实施方式，本申请所述化合物的IC₅₀是当11β-HSD1活性被抑制50％时，该化合物的浓度。

除非在本申请中另有说明或与上下文明显矛盾，本申请所述的所有方法可以根据本领域技术人员的理解，以任何合适的顺序进行。

本申请中引用的所有专利、专利申请和参考文献均通过引用的方式全文并入本申请，其并入程度就如同每一篇文献单独引用作为参考。如果本申请和本文提供的文献之间存在冲突，应以本申请中的内容为准。

具体实施方式

本申请描述了优选的实施方式和实施例，本领域技术人员在阅读本申请的基础上，可以对本申请所述的实施方式和实施例进行适当的改变。因此，本申请请求保护的内容包括法律允许范围内对本申请权利要求书中主题的所有等同的修改和变化。

实施例 1 ： CK 对人表皮细胞的体外抑制增殖作用

本实施例说明人参皂苷C-K(本文中也简称为CK)对人表皮细胞具有体外抑制增殖的作用。在本实施例中，所述CK通过溶解在二甲亚砜中给予细胞，所述人表皮细胞是人永生化表皮细胞(HaCat细胞)，使用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝)方法来检测细胞的存活和生长。

将CK样品(市售，Shanghai Standard Biotech Co.,Ltd.纯度92％，Lot3690/20548)溶解于二甲亚砜中，得到浓度为10mg/ml的溶液。再用PBS作梯度稀释，得到浓度分别为1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml的稀释样品。将注射用顺铂(冻干型)(市售，齐鲁制药有限公司，批号1WA2A1411073B)作为阳性对照药，并配置成与样品一样的浓度。将稀释好的样品加入平底96孔板中，并加入对数生长期的人永生化表皮细胞(HaCat细胞，由上海医药工业研究院传代培养)，培养48小时。用MTT法检测细胞相对存活率，且根据在492nm处的光吸收值并基于以下公式计算。

表1：体外对HaCat细胞株的生长抑制作用

化合物	HaCaT细胞IC50(μg/ml)
		CK	＞100
顺铂	3.12

表1的实验结果证明人参皂苷CK对于HaCat细胞无明显的细胞毒作用，即：无明显的抑制HaCat细胞增殖的作用。

实施例 2 ： CK 对人表皮细胞分化的影响

本实施例说明人参皂苷C-K(CK)对人表皮细胞分化的影响。在本实施例中，所述CK通过溶解在二甲亚砜中给予细胞，所述人表皮细胞是人永生化表皮细胞(HaCat细胞)，使用免疫组化染色方法来检测细胞的分化。

HaCat细胞培养于DMEM培养基(含10％FBS)，至80％的培养瓶面积时，经0.25％胰蛋白酶消化后，调整细胞浓度为8×10⁴/ml并分别移入6孔板中(板中加有已灭菌的玻片)，并将人参皂苷CK浓度设为20μg/ml，分别加入相应的孔中，并设空白对照，置37℃细胞培养箱内，分别在培养0h、48h应用抗角蛋白18/19抗体(由解放军第二军医大学病理解剖教研室提供)进行免疫组化染色。

染色结果如图1和图2所示，图1显示了在使用20μg/ml的人参皂苷C-K处理48小时后，细胞的染色结果；图2显示了48小时后空白对照的细胞的染色结果。由图可以看出，图1中用人参皂苷C-K处理的HaCat细胞内出现棕色颗粒，表明HaCat细胞分化形成了角蛋白，而图2的空白对照处理中却没有角蛋白形成。

实施例 3 ： CK 对鸡胚新生血管 ( 鸡胚尿囊膜血管生成 ) 具有抑制作用

本实施例说明人参皂苷C-K对鸡胚新生血管(鸡胚尿囊膜血管生成)具有抑制作用。在本实施例中，阴性对照品-缓冲盐水(简称PBS)、阳性对照品-盐酸索拉非尼(简称索拉非尼)、人参皂苷C-K分别给予鸡胚。

将使用的手术器械以及滤纸灭菌。取新鲜种蛋，在37℃、50％湿度的条件下连续孵育6天。在第6天，鉴定鸡胚是否存活，取出存活的鸡蛋进行开窗。先用光照定位尿囊膜所在位置，做好标记，然后将鸡蛋气囊所在一端扎一个小孔，将鸡蛋的尿囊膜朝上放置，用吸耳球轻吸气囊，使尿囊膜塌陷与蛋壳分开，然后用刀片在尿囊膜上方开一个1cm² 的小窗。将浓度为1μg/μl、2μg/μl的缓冲盐水(简称PBS)、索拉非尼(4μg/μl，DMSO为溶剂)、人参皂苷C-K(20μg/μl，DMSO为溶剂)滴在滤纸上，风干，避开大血管，轻轻地将滤纸放置在尿囊膜上。用透明胶布封好小窗，继续孵育48小时，揭开透明胶带，将窗口扩大用相机拍照。新生血管根据每张照片的血管的分枝点来计数。结果如表2所示。

相对抑制率计算方法：

在上述相对抑制率计算公式中，对照组是阴性对照组(或称为PBS组)的简称。

表2：CK对鸡胚新生血管生成的抑制作用

阳性对照品-索拉非尼是众所周知的靶向性抗癌药，对血管增生有明显的抑制作用；由表2的结果可以看出，人参皂苷C-K的抗血管增生作用也是非常明显的，其效果几乎与索拉非尼相当。

实施例 4 ： CK 对小鼠尾部鳞片表皮细胞的影响

本实施例说明人参皂苷C-K可以促进小鼠尾部细胞颗粒层的形成，并且有一定剂量依赖关系。

采用70只小鼠，随机分成7组，即正常对照组、空白乳膏组、阳性对照-卡泊三醇组(市售，爱尔兰利奥制药有限公司，生产批号EH8304，15g：0.75mg，即15g乳膏中含0.75mg卡泊三醇)、受试乳膏人参皂苷C-K 0.5％、1％、2％、4％四个剂量组。除正常对照组，给药前各组动物均用尼龙刷子轻刷尾根0.5cm处100次，然后在同一部位涂抹给药(100μl)，每天给药1次，连续给药7天，正常对照组给予生理盐水。最后一次给药后1小时杀死小鼠，取给药部位皮肤一长条，用10％甲醛溶液固定。石蜡包埋，HE染色，在光学显微镜下观察每个小鼠的尾部鳞片。凡两个毛囊口之间的鳞片表皮有排列 成行的颗粒层者，称为有颗粒层的鳞片，计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数，结果用百分数表示。结果示于表3,采用t检验，并计算代表统计学上的显著性的P值。

表3：人参皂苷C-K对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的作用(n＝10，)

注：与正常对照组比较，P*<0.05,P**<0.01；与空白乳膏组比较P#<0.05,P##<0.01。

表3显示，本试验条件下，与正常对照组相比，空白乳膏组、卡泊三醇组和不同剂量人参皂苷C-K乳膏的给药组连续给药7天后，有颗粒层鳞片数极其明显增加。而且卡泊三醇组和不同剂量人参皂苷C-K乳膏的给药组与空白乳膏组相比，有颗粒层鳞片数也极明显增加。这一结果说明人参皂苷C-K乳膏可以促进小鼠尾部细胞颗粒层的形成，并且有一定剂量依赖关系。

实施例 5 ： CK 对盐酸普萘洛尔诱发豚鼠银屑病模型的影响

采用豚鼠70只，除正常对照组，其余动物均用5％盐酸普萘洛尔乳剂(约200μl)均匀涂抹于双耳背皮肤，每天两次，连续涂抹四周，获得盐酸普萘洛尔诱发豚鼠银屑病模型。四周后分为空白乳膏组、卡泊三醇(同上)组、受试乳膏-人参皂苷C-K0.5％、1％、2％、4％四个剂量(同上)组。正常对照组，为正常豚鼠耳朵，涂抹生理盐水；其他组将不同药物(约200μl)涂抹于豚鼠双侧耳背，每天2次，连续给药7天。实验期间对动物状态进行观察，最后一次给药后1小时处死豚鼠。结果示于表4,采用t检验，并计算代表统计学上的显著性的P值。

表4：人参皂苷C-K对盐酸普萘洛尔诱发豚鼠银屑病模型给药7天的耳部表皮厚度(n＝10)

注：采用One-Way ANOVA统计方法进行方差分析，与正常对照组比较，P*<0.05，P**<0.01；与空白乳膏组比较P^#<0.05，P^##<0.01。

从表4的表皮厚度数据可知，本实验条件下，空白乳膏组表皮厚度高达221.65μm，与正常对照组有非常显著的差异，提示本批动物造模是成功的。与空白乳膏组相比，人参皂苷C-K各剂量组对盐酸普萘洛尔诱发豚鼠银屑病模型给药7天的耳部表皮厚度有明显的抑制作用。

Claims (5)

1.人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述银屑病包含寻常型银屑病。

3.一种药盒，其特征在于，所述药盒包含人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物，所述药盒用于治疗银屑病。

4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物，以及药学上可接受的载体，所述药物组合物用于治疗银屑病。

5.一种含有人参皂苷C-K的药物组合物的制备方法，其特征在于，将根据人参皂苷C-K或其药学上可接受的溶剂合物或水合物与药学上可接受的载体混合来制备，所述药物组合物用于治疗银屑病。