CN108055893A - 一种提高种子活力的处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高种子活力的处理方法，包括以下步骤：1)人工合成miR168a，其核苷酸序列如SEQ ID 1所示；接着将合成的miR168a溶解于无菌纯净水中，得到外源miR168a溶液；2)将种子采用miR168a溶液进行浸泡处理，提高种子的活力。本发明主要是采用了外源的miR168a对种子进行萌发前处理，提高种子的活力，促进低活力种子的萌发，提高种子的发芽率，促进种子的根和芽的生长。
Description
技术领域
本发明属于农业技术领域，具体涉及一种提高种子活力的处理方法。
背景技术
目前，大部分种子的萌发处理都是将种子灭菌消毒后，在适宜的温度下，将种子以水浸泡吸涨后，再进行萌发处理。但是种子在贮藏过程中，由于内外因素的影响，会导致种子的活力降低甚至失活，因而种子批中总会存在一些仍有一定活力但又不能发芽的种子。因此，如何促进低活力种子的发芽，是提高种子发芽率的关键。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高种子活力的处理方法，以解决低活力种子难以萌发的缺陷。
本发明这种提高种子活力的处理方法，包括以下步骤：
1)人工合成miR168a，其核苷酸序列如SEQ ID 1所示；接着将合成的miR168a溶解于无菌纯净水中，得到外源miR168a溶液；
2)将种子采用miR168a溶液进行浸泡，提高种子的活力。
所述步骤1)中，外源miR168a溶液的浓度为0.5-1.5μg/ml。
所述步骤2)中，miR168a溶液浸泡处理种子的具体步骤为：将待萌发的种子灭菌消毒、清洗干净后，置于外源miR168a溶液浸泡处理1d，接着取出种子，然后以水为萌发基质，在设定温度下，对种子进行萌发。
所述步骤2)中，miR168a溶液浸泡处理种子的具体步骤为：将种子完全浸泡于外源miR168a溶液中2～3h后，将种子风干，并密封包装进行贮藏；贮藏至种子待萌发处理时，将种子灭菌消毒、清洗干净后，置于外源miR168a溶液浸泡处理1d，接着取出种子，然后以水为萌发基质，在设定温度下，对种子进行萌发。
所述的萌发时，种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:(1.5-2)；设定温度为27～30℃；萌发时间为3-7d。
miR168a属于miRNA中的一种。miRNA是一类非编码蛋白的单链短RNA序列；植物的miRNA可调控植物生长发育的整个生命过程。有研究表明，种子活力与miR168a的表达相关，miR168a表达上调，种子活力就越高。因此推测外源miR168a也能促进种子活力的提升。
本发明的有益效果：本发明主要是采用了外源的miR168a对种子进行处理，提高种子的活力，促进低活力种子的萌发，提高种子的发芽率，促进种子的根和芽的生长。
附图说明
图1实施例6(A，miR168a处理)与对比例6(B，水处理)的水稻五优308种子(2015年采收，贮藏2年)发芽后的幼苗形态比较。
图2实施例7(A，miR168a处理)与对比例7(B，水处理)的水稻五优308种子(2016年采收，贮藏1年)发芽后的幼苗形态比较。
图3实施例8(A，miR168a处理)与对比例8(B，水处理)的水稻凤两优丝苗种子(2015年采收，贮藏2年)发芽后的幼苗形态比较。
图4实施例9-13和对比例9-13中种子萌发后，以幼苗的DNA为模板，以ISSR UBC-808序列(5'-AGAGAGAGAGAGAGAGC-3')为引物的PCR产物的比较；1：H2O处理；2：外源miR168a溶液处理。
具体实施方式
实施例1
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2013年采收、贮藏了4年的水稻凤两优丝苗种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min；倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以外源miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验。萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表1所示。
萌发率＝(萌发种子数/试验种子总数)×100％；
活力指数＝萌发率(％)×根长(cm)。
对比例1
将实施例1中对水稻凤两优丝苗种子进行浸泡处理时的miR168a溶液用水取代，其他操作和条件不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表1所示。
表1外源miR168a对自然贮藏4年的水稻凤两优丝苗种子萌发的影响
*：括号中数字为种子采收年份，下同。
由表1可知，与对比例1相比，实施例1中凤两优丝苗的发芽率由74％提高至80％，其根长、芽长和活力指数也大于对比例1，说明miR168a溶液浸泡可提高种子的活力水平，促进种子发芽，提高种子的发芽率，加快其根和芽的生长。
实施例2
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2013年采收、贮藏了4年的水稻凤两优丝苗种子完全浸泡于外源miR168a溶液中，浸泡2h后，将种子吹风凉干，使种子含水量降至安全贮藏含水量10～12％后，装入牛皮纸袋中；密封保存3个月。
将保存了3个月后的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min；倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以外源miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验。萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表2所示。
对比例2
将2013年采收、贮藏了4年的水稻凤两优丝苗种子完全浸泡于水中2～3h后，吹风凉干，使种子含水量降至安全贮藏含水量10～12％后，装入牛皮纸袋中；密封保存3个月。
保存了3个月后的种子的萌发试验按对比例1的方法进行，种子萌发的结果如表2所示。
表2外源miR168a浸泡贮藏和萌发前浸泡处理对水稻凤两优丝苗种子萌发的影响
由表2可知，与对比例2相比，实施例2中凤两优丝苗的萌芽率由82％提高至97％，其根长和芽长也长于对比例2，说明种子用miR168a溶液浸泡后贮藏，以及在萌发前再用miR168a溶液浸泡处理可进一步促进低活力种子的萌发(与实施例1相比较)，提高种子的发芽率，也可加快其根和芽的生长。
实施例3
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.5μg/ml的水溶液。
将2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以外源miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:2]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理6d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表3所示。
对比例3
将实施例3中对水稻凤两优丝苗种子进行浸泡处理时的miR168a溶液用水取代，其他操作和条件不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表3所示。
表3外源miR168a对自然贮藏2年的水稻凤两优丝苗种子萌发的影响
由对比例1和对比例3可知，水稻凤两优丝苗的2015年采收后贮藏2年的种子活力高于2013年采收后贮藏4年的种子活力，说明水稻种子的贮藏时间越长，种子活力越低。由表3可知，与对比例3相比，实施例3中凤两优丝苗的发芽率由93.0％提高至95.0％，其根长和芽长也优于对比例3，说明对于贮藏2年的高活力的凤两优丝苗种子，采用miR168a溶液进行浸泡处理(实施例3)，仍可进一步提高种子活力水平。
实施例4
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗种子完全浸泡于外源miR168a溶液中，浸泡2～3h后，将种子吹风凉干，使种子含水量降至安全贮藏含水量10～12％后，装入牛皮纸袋中；密封保存4个月。
将保存了4个月的水稻凤两优丝苗的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以外源miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:2]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表4所示。
对比例4
将2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗种子完全浸泡于水中，浸泡3h后，将种子吹风凉干，使种子含水量降至安全贮藏含水量10～12％后，装入牛皮纸袋中；密封保存4个月。
保存了4个月的水稻凤两优丝苗种子萌发处理按对比例3的方法进行，种子萌发的结果如表4所示。
表4外源miR168a浸泡贮藏和萌发前浸泡处理对水稻凤两优丝苗种子萌发的影响
由表4可知，与对比例4相比，实施例4处理的2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗种子的发芽率由93.5％提高至97.5％，其芽长与根长也明显优于对比例4，说明外源miR168a浸泡后贮藏，以及在萌发前再用miR168a溶液浸泡处理，可维持高活力水稻种子的活力水平，确保种子的高发芽率和种子萌发后幼苗的芽和根的正常生长。
实施例5
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2016年采收、贮藏了1年的水稻中两优2727种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以外源miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:2]，浸泡完后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于27±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理6d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表5所示。
对比例5
将实施例5中对种子进行浸泡处理时的miR168a溶液用水取代，其他操作和条件不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表5所示。
表5外源miR168a对自然贮藏1年的水稻中两优2727种子萌发的影响
表5结果表明，水稻中两优2727的种子是典型的不耐贮藏的种子，2016年采收、贮藏1年后，种子的萌芽率降低至68％；但采用miR168a溶液(实施例5)对种子进行浸泡处理，可使种子的发芽率提高至80％，种子的根长和芽长也有明显的增长，种子的活力指数明显提高。
实施例6
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成0.5μg/ml的水溶液。
将2015年采收、贮藏了2年的水稻五优308种子，在42℃和100％RH的条件下，人工老化处理8d。将老化后的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理6d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表6所示；发芽后的幼苗形态如图1-A所示。
对比例6
将实施例6中对种子进行浸泡处理时的miR168a溶液用水取代，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表6所示；发芽后的幼苗形态如图1-B所示。
表6外源miR168a对人工老化的水稻五优308种子萌发的影响
人工老化处理后，2015年采收、贮藏了2年的水稻五优308种子的活力大幅度降低，常规的萌发处理(对比例6)时发芽率仅为10％；采用miR168a溶液浸泡处理(实施例6)，可使其发芽率大幅提高至40％，且芽长、根长和活力指数均显著高于对比例6(表6、图1)。
实施例7
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2016年采收、贮藏了1年的水稻五优308种子，在42℃和100％RH的条件下，人工老化处理8d。将老化后的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:2]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于在28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验。萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表7所示；发芽后幼苗的形态如图2-A所示。
对比例7
将实施例7中对种子进行浸泡处理的miR168a溶液用水取代，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表7所示；发芽后幼苗的形态如图2-B所示。
表7外源miR168a对人工老化的水稻五优308种子萌发的影响
老化处理后，2016年采收、贮藏了1年的水稻五优308种子的活力大幅度降低，常规的萌发处理(对比例7)时发芽率仅为22％；采用miR168a溶液浸泡处理(实施例7)，可使种子发芽率提高至32％；根长、芽长和活力指数也有所提高(表7、图2)。
实施例8
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗的种子，在42℃和100％RH的条件下，人工老化处理8d。将老化后的种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡完后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验。萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表8所示，种子发芽后幼苗的形态如图3-A所示。
对比例8
将实施例8中对种子进行浸泡处理的miR168a溶液用水取代，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表8所示；种子发芽后幼苗的形态如图3-B所示。
表8外源miR168a对人工老化的水稻凤两优丝苗的种子萌发的影响
种子老化处理后，2015年采收、贮藏了2年的水稻凤两优丝苗种子的活力大幅度降低，常规的萌发处理(对比例8)时发芽率仅为18％；采用miR168a溶液浸泡处理(实施例8)可使其发芽率提高至34％，芽长、根长和活力指数也明显提高(表8、图3)。
实施例9
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将购自种子公司的番茄(厚皮早丰)种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，并计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表9所示。
对比例9
将实施例9中对番茄(厚皮早丰)种子进行浸泡处理的外源miR168a溶液替换成水，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表9所示。
表9外源miR168a对番茄(厚皮早丰)种子萌发的影响
由表9可知，与对比例9相比，实施例9中番茄种子的发芽率由40％提高至46％，种子的活力指数由0.95提升至1.50，说明miR168a溶液浸泡可提高番茄种子的活力水平。
实施例10
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将购自种子公司的黄瓜(津优)种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于27±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表10所示。
对比例10
将实施例10中对黄瓜(津优)种子进行浸泡处理的外源miR168a溶液替换成水，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表10所示。
表10外源miR168a对黄瓜(津优)种子萌发的影响
本试验中的黄瓜(津优)种子的发芽率相对较高，说明其种子活力原本就高；但是采用本发明miR168a溶液浸泡处理(实施例10)，仍有提高其种子活力的效果。
实施例11
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将购自种子公司的绿豆(绿宝)种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表11所示。
对比例11
将实施例11中对绿豆(绿宝)种子进行浸泡处理的外源miR168a溶液替换成水，其他条件和操作不变。计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表11所示。
表11外源miR168a对绿豆(绿宝)种子萌发的影响
本试验中的绿豆(绿宝)种子的发芽率相对较高，说明其种子活力原本就高；但是采用本发明miR168a溶液浸泡处理(实施例11)，仍可提高绿豆种子的活力水平。
实施例12
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将购自种子公司的小白菜(536)种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡完后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于28±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表12所示。
对比例12
将实施例12中对小白菜(536)种子进行浸泡处理的外源miR168a溶液替换成水，其他条件和操作不变。种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数的结果如表12所示。
表12外源miR168a对小白菜(536)种子萌发的影响
本试验中的小白菜(536)种子的发芽率相对较高，表明其种子活力水平较高；但是采用本发明miR168a溶液浸泡处理(实施例12)仍可提高小白菜种子的活力水平。
实施例13
人工合成miR168a的核苷酸序列(外源miR168a)，接着将外源miR168a溶解于无菌纯净水中，配制成1.0μg/ml的水溶液。
将本实验室2016年生产、贮藏1年的常规水稻(ZR02)种子先用无菌纯净水洗3～4遍，再用75％的酒精浸泡1min，倒干酒精后，用3％的次氯酸钠浸泡，180rpm振摇30min，弃溶液，种子用无菌纯净水清洗4～5遍，放滤纸上吸干表面水分。消毒后的种子置于Φ11.0cm培养皿中，以miR168a溶液浸泡种子1d[种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5]，浸泡后，倒掉残留的外源miR168a溶液，然后以纯净水为萌发基质，将其置于30±1℃的恒温培养箱中进行萌发试验，萌发处理7d后，并计算种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数，结果如表13所示。
对比例13
将实施例13中对常规水稻ZR02种子进行浸泡处理的外源miR168a溶液替换成水，其他条件和操作不变。种子发芽率、幼苗根长和芽长、种子的活力指数的结果如表13所示。
表13外源miR168a对常规水稻(ZR02)种子萌发的影响
ZR02是常规水稻，其种子贮藏1年后，发芽率仍有96％(对比例13)，说明其活力水平高。因此，相比杂交水稻种子，常规水稻ZR02的种子有良好的耐贮藏性。但是采用本发明miR168a溶液浸泡处理(实施例13)仍可进一步提高ZR02种子的活力水平。
外源miR168a与水处理的种子萌发后幼苗的DNA遗传多样性比较
运用ISSR技术，对实施例9-13处理和对比例9-13处理的番茄、黄瓜、绿豆、小白菜和常规水稻种子萌发后幼苗的DNA进行遗传多态性比对分析，其结果如图4所示。由图4可知，不同作物种子采用miR168a溶液进行浸泡处理，萌发后幼苗的DNA序列与采用水进行萌发处理的萌发后幼苗的DNA序列是完全一致的，说明外源miR168a不会改变种子的遗传物质结构组成，不存转基因的风险。
序列表
<110> 湖南师范大学
<120> 一种提高种子活力的处理方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> miR168a
<400> 1
ucgcuuggug cagaucggga c 21
Claims (7)
1.一种提高种子活力的处理方法，包括以下步骤：
1)人工合成miR168a，其核苷酸序列如SEQ ID 1所示；接着将合成的miR168a溶解于无菌纯净水中，得到外源miR168a溶液；
2)将种子采用miR168a溶液进行浸泡处理，提高种子的活力。
2.根据权利要求1所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述步骤1)中，外源miR168a溶液的浓度为0.5-1.5μg/ml。
3.根据权利要求1或2所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述步骤2)中，miR168a溶液浸泡处理种子的具体步骤为：将待萌发的种子灭菌消毒、清洗干净后，置于外源miR168a溶液浸泡处理1d，接着取出种子，然后以水为萌发基质，在设定温度下，对种子进行萌发。
4.根据权利要求1或2所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述步骤2)中，miR168a溶液浸泡处理种子的具体步骤为：将种子完全浸泡于外源miR168a溶液中2～3h后，将种子风干至安全含水量后，密封包装进行贮藏；贮藏至种子待萌发处理时，将种子灭菌消毒、清洗干净后，置于外源miR168a溶液浸泡处理1d，接着取出种子，然后以水为萌发基质，在设定温度下，对种子进行萌发。
5.根据权利要求3或4所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述的萌发时种子与外源miR168a溶液的质量体积比(W:V＝g/ml)为1:1.5-2。
6.根据权利要求3或4所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述的萌发时，设定温度为27～30℃。
7.根据权利要求3或4所述的提高种子活力的处理方法，其特征在于，所述的萌发时，萌发处理时间为3-7d。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113444741A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-09-28 | 西南大学 | 下调表达Bna-miR168a在改良油菜性状中应用 |
| CN114350673A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-15 | 湖南师范大学 | 一种调控种子活力的水稻kob1基因及其调控方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014106837A2 (en) * | 2013-01-01 | 2014-07-10 | A. B. Seeds Ltd. | ISOLATED dsRNA MOLECULES AND METHODS OF USING SAME FOR SILENCING TARGET MOLECULES OF INTEREST |
| CN108243655A (zh) * | 2017-12-30 | 2018-07-06 | 青岛袁策生物科技有限公司 | 一种提高稻谷发芽率的贮藏方法 |
-
2018
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014106837A2 (en) * | 2013-01-01 | 2014-07-10 | A. B. Seeds Ltd. | ISOLATED dsRNA MOLECULES AND METHODS OF USING SAME FOR SILENCING TARGET MOLECULES OF INTEREST |
| CN105358695A (zh) * | 2013-01-01 | 2016-02-24 | A.B.种子有限公司 | 将dsRNA引入植物种子以调节基因表达的方法 |
| CN108243655A (zh) * | 2017-12-30 | 2018-07-06 | 青岛袁策生物科技有限公司 | 一种提高稻谷发芽率的贮藏方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 吴多: "miR164c和miR168a调控种子活力的分子机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
| 邱林森: "干湿交替处理对种子活力的影响与分析", 《种子科技》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113444741A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-09-28 | 西南大学 | 下调表达Bna-miR168a在改良油菜性状中应用 |
| CN113444741B (zh) * | 2021-06-30 | 2022-05-20 | 西南大学 | 下调表达Bna-miR168a在改良油菜性状中应用 |
| CN114350673A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-15 | 湖南师范大学 | 一种调控种子活力的水稻kob1基因及其调控方法 |
| CN114350673B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-10-20 | 湖南师范大学 | 一种调控种子活力的水稻kob1基因及其调控方法 |
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