CN108671237A - 一种增强药物靶向递送的载体及其获得方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种增强药物靶向递送的载体及其获得方法与应用，增强药物靶向递送的载体为取自经预免疫接种的同源异体的白细胞，所述增强药物靶向递送的载体的获得方法包括以下步骤：(1)制备预免疫制剂，对同源异体进行预免疫接种1～3次；(2)分离提取同源异体体内的白细胞；(3)分离白细胞中目标细胞，即为增强药物靶向递送的载体。与现有技术相比，本发明为增强肿瘤靶向提供一种全新的思路，不仅可为解决肿瘤靶向瓶颈提供一种有潜力的细胞载体平台，还能更进一步在此基础上探索免疫细胞平台在抗肿瘤靶向治疗、靶向机制等方面的潜在应用。

Description

一种增强药物靶向递送的载体及其获得方法与应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种增强药物靶向递送的载体及其获得方法与应用。
背景技术
传统纳米药物在人体的靶向性可行性已遭遇挑战。目前纳米药物系统的作用仅局限于提高药物的稳定性、降低毒副作用、延长循环时间等方面，靶向作用甚微。临床研究显示纳米药物与裸阿霉素药物相比无明显肿瘤富集优势。2016年紫杉醇类纳米药物NK105及BIND-014、CRLX-101[6]临床三期均宣布失败，被寄予厚望成为全球首例靶向纳米药物Bind Therapeutics公司同年也宣布破产。靶向效率的低下已被认为是众多纳米药物临床转化失败的重要原因。越来越多的数据表明，即使在纳米药物系统表面连接上能主动识别肿瘤组织或细胞的靶向性配体，如抗体、多肽、叶酸等，也并不能改变药物在肿瘤组织的丰度。甚至有报道指出，靶向配体的引入反而可能会引起反作用，比如引起纳米粒子尺寸变大，从而更容易被RES系统捕获，或者改变了纳米粒子表面性质，使得纳米粒子不容易进入肿瘤组织、细胞。
关于肿瘤靶向增强策略，目前除了改善肿瘤微环境，如肿瘤血管正常化，以及细胞膜工程外，活细胞载体(Live cell carrier)因具有非EPR依赖性而备受青睐。白细胞具有免疫响应、细胞相互作用、细胞粘附、穿越生理屏障到达非血管区域等特殊功能，在cellcarrier肿瘤靶向应用中被视为重要的新生力量。过去几年，研究者们利用免疫细胞固有的肿瘤趋化性将其作为“特洛伊木马”药物递送系统进行靶向肿瘤递送研究，然而，尽管理论上白细胞如单核细胞对炎症部位有精确靶向能力(定向迁移)，但在实际应用中靶向效果差强人意。如何增强白细胞肿瘤靶向性对于肿瘤治疗极为重要。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述靶向瓶颈问题而提供一种增强药物靶向递送的载体及其获得方法与应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种增强药物靶向递送的载体，其为取自经预免疫接种的同源异体的白细胞。
所述白细胞包括中性粒细胞、单核/巨噬细胞或NK细胞等中一种或多种的组合。
所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，包括以下步骤：
(1)制备预免疫制剂，对同源异体进行预免疫接种1～3次；
(2)分离提取同源异体体内的白细胞；
(3)分离白细胞中目标细胞，即为增强药物靶向递送的载体。
由于白细胞包括性粒细胞、单核/巨噬细胞或NK细胞，属于混合细胞，因此根据需要，需要分离里面的目标细胞，比如粒细胞或者NK细胞。
所述预免疫制剂为含有免疫激动剂的纳米化制剂，或具有缓释免疫激动剂功能的其它剂型。
所述免疫激动剂，包括脂多糖类受体激动剂或Toll样类受体激动剂，所述Toll样类受体激动剂选自未甲基化的胞嘧啶核苷酸-鸟嘌呤核苷酸(CpG)或瑞喹莫德(Resiquimod,R848)等)中一种或者两种组合。
接种间隔周期为一周。
步骤(2)所述分离提取同源异体体内的白细胞的方法为：可以从骨髓中提取，或可以通过腹腔无菌刺激数小时后，灌洗法收集获取白细胞。
所述增强药物靶向递送的载体作为治疗性物质的载体，用于肿瘤部位的靶向递送，所述治疗性载体包括抗肿瘤药物或肿瘤药物纳米药剂。
所述抗肿瘤药物，可以选自多柔比星、柔红霉素、戊柔比星、表柔比星、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂、奥沙利铂、喜树碱、长春新碱、长春碱、5一氟尿嚓咤(5一FU)、丝裂霉素、环磷酞胺、甲氨蝶吟、米托葱醒、拓扑替康、卡培他滨、去氧氟尿普、伊立替康、替加氟、苯丁酸氮芥、贝洛替康、阿那曲哩、他莫昔芬、格列卫、氟尿普、亮丙瑞林、氟他胺、哩来嶙酸、链佐星、长春瑞滨、轻基脉、视黄酸、氮芥、白消安、强的松、翠酮、阿司匹林、水杨酸盐、布洛芬、茶普生、非诺洛芬、叫睬美辛、苯基丁氮酮、氮芥、地塞米松、泼尼松龙、塞来昔布、伐地考昔、尼美舒利、可的松、皮质类固醇、吉西他滨、雪松醇，或它们的任意组合，或它们的衍生物中的至少一种，或它们的纳米药物新剂型。
将增强药物靶向递送的载体注射体内后，具有较强的肿瘤富集效果。
与现有肿瘤靶向效率相比，肿瘤/肝脏，肿瘤/脾及肿瘤/肾脏富集比例较常规未进行预免疫的对象获取的白细胞2～3倍。本发明为增强肿瘤靶向提供一种全新的思路，不仅可为解决肿瘤靶向瓶颈提供一种有潜力的细胞载体平台，还能更进一步在此基础上探索免疫细胞平台在抗肿瘤靶向治疗、靶向机制等方面的潜在应用。
附图说明
图1为实施案例中所使用纳米化CpG透射电镜图片及分散液实物图。
图2为案例中活体成像对比图片：(A)非免疫正常小鼠获取粒细胞的肿瘤富集情况(B)接受免疫的小鼠获取粒细胞在肿瘤部位富集情况。
具体实施方式
一种增强药物靶向递送的载体，其为取自经预免疫接种的同源异体的白细胞。
所述白细胞包括中性粒细胞、单核/巨噬细胞或NK细胞等中一种或多种的组合。
所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，包括以下步骤：
(1)制备预免疫制剂，对同源异体进行预免疫接种1～3次；
(2)分离提取同源异体体内的白细胞；
(3)分离白细胞中目标细胞，即为增强药物靶向递送的载体。
所述预免疫制剂为含有免疫激动剂的纳米化制剂，或具有缓释免疫激动剂功能的其它剂型。
所述免疫激动剂，包括脂多糖类受体激动剂或Toll样类受体激动剂，所述Toll样类受体激动剂选自未甲基化的胞嘧啶核苷酸-鸟嘌呤核苷酸(CpG)或瑞喹莫德(Resiquimod,R848)等)中一种或者两种组合。
接种间隔周期为一周。
步骤(2)所述分离提取同源异体体内的白细胞的方法为：可以从骨髓中提取，或可以通过腹腔无菌刺激数小时后，灌洗法收集获取白细胞。
所述增强药物靶向递送的载体作为治疗性物质的载体，用于肿瘤部位的靶向递送，所述治疗性载体包括抗肿瘤药物或肿瘤药物纳米药剂。
所述抗肿瘤药物，可以选自多柔比星、柔红霉素、戊柔比星、表柔比星、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂、奥沙利铂、喜树碱、长春新碱、长春碱、5一氟尿嚓咤(5一FU)、丝裂霉素、环磷酞胺、甲氨蝶吟、米托葱醒、拓扑替康、卡培他滨、去氧氟尿普、伊立替康、替加氟、苯丁酸氮芥、贝洛替康、阿那曲哩、他莫昔芬、格列卫、氟尿普、亮丙瑞林、氟他胺、哩来嶙酸、链佐星、长春瑞滨、轻基脉、视黄酸、氮芥、白消安、强的松、翠酮、阿司匹林、水杨酸盐、布洛芬、茶普生、非诺洛芬、叫睬美辛、苯基丁氮酮、氮芥、地塞米松、泼尼松龙、塞来昔布、伐地考昔、尼美舒利、可的松、皮质类固醇、吉西他滨、雪松醇，或它们的任意组合，或它们的衍生物中的至少一种，或它们的纳米药物新剂型。
将增强药物靶向递送的载体注射体内后，具有较强的肿瘤富集效果。
以小鼠为例，提供增强实验小鼠白细胞肿瘤靶向新方法，该方法包括以下几个步骤：
(1)制备合适的预免疫制剂，对4～13周青壮年期小鼠进行预免疫接种1～3次，接种间隔周期为一周，其中预免疫制剂为含有免疫激动剂的纳米化制剂或具有缓释激动剂功能的其它剂型，激动剂，包括脂多糖类、Toll样类受体激动剂(例如未甲基化的胞嘧啶核苷酸-鸟嘌呤核苷酸(CpG)、瑞喹莫德(Resiquimod,R848)等)一种或者两种组合；
(2)将步骤(1)小鼠腹腔通过无菌刺激数小时后，灌洗收集获取白细胞。其中无菌刺激物包括各种无菌制剂，如常见的一定浓度巯基醋酸盐。
(3)分离白细胞中目标细胞(中性粒细胞、单核/巨噬细胞或NK细胞等)，注射同源异体荷瘤小鼠体内，具有较强的肿瘤富集效果。
以小鼠为例，涉及到的靶向增强的可能机制：cell carrier领域研究中使用的实验室小鼠通常也是在无菌环境里生活，实验小鼠的免疫系统未经病原刺激训练，免疫系统难以发育成熟，从其体内分离的免疫细胞趋化性及靶向性不理想是可以理解的。而对小鼠进行免疫刺激后，可明显提高了小鼠的免疫系统对炎症信号的响应性，因而大大提高了对肿瘤的靶向能力。
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例
1、将7～8w的bable/c小鼠经皮下注射纳米化CpG，所使用纳米化CpG透射电镜图片及分散液实物图如图1所示，注射1次或者每周1次，累计注射3次后。通过腹腔灌洗法收集其体内的白细胞，分离提取其中性粒细胞。
2、对中性粒细胞进行荧光标记(Dir标记)
3、荷4T1肿瘤的小鼠，肿瘤尺寸5～8mm左右时，注射5×106～107个/200uL左右的荧光标记的中性粒细胞。
4、中性粒细胞注射同源异体荷瘤小鼠体内，间隔不同时间进行活体成像，对比非免疫组小鼠获取的粒细胞。靶向效果详见图2，图2(A)非免疫正常小鼠获取粒细胞的肿瘤富集情况，图2(B)接受免疫的小鼠获取粒细胞在肿瘤部位富集情况。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种增强药物靶向递送的载体，其特征在于，其为取自经预免疫接种的同源异体的白细胞。
2.根据权利要求1所述的一种增强药物靶向递送的载体，其特征在于，所述白细胞包括中性粒细胞、单核/巨噬细胞或NK细胞中一种或多种的组合。
3.如权利要求1或2所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备预免疫制剂，对同源异体进行预免疫接种1～3次；
(2)分离提取同源异体体内的白细胞；
(3)分离白细胞中目标细胞，即为增强药物靶向递送的载体。
4.根据权利要求3所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，其特征在于，所述预免疫制剂为含有免疫激动剂的纳米化制剂，或具有缓释免疫激动剂功能的其它剂型。
5.根据权利要求4所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，其特征在于，所述免疫激动剂，包括脂多糖类受体激动剂或Toll样类受体激动剂，所述Toll样类受体激动剂选自未甲基化的胞嘧啶核苷酸-鸟嘌呤核苷酸或瑞喹莫德中一种或者两种组合。
6.根据权利要求3所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，其特征在于，接种间隔周期为一周。
7.根据权利要求3所述增强药物靶向递送的载体的获得方法，其特征在于，步骤(2)所述分离提取同源异体体内的白细胞的方法为：从骨髓中提取，或通过腹腔无菌刺激后，灌洗法收集获取白细胞。
8.如权利要求1所述增强药物靶向递送的载体的应用，其特征在于，所述增强药物靶向递送的载体作为治疗性物质的载体，所述治疗性物质包括抗肿瘤药物或肿瘤药物纳米药剂。
9.根据权利要求8所述增强药物靶向递送的载体的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物，选自多柔比星、柔红霉素、戊柔比星、表柔比星、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂、奥沙利铂、喜树碱、长春新碱、长春碱、5一氟尿嚓咤、丝裂霉素、环磷酞胺、甲氨蝶吟、米托葱醒、拓扑替康、卡培他滨、去氧氟尿普、伊立替康、替加氟、苯丁酸氮芥、贝洛替康、阿那曲哩、他莫昔芬、格列卫、氟尿普、亮丙瑞林、氟他胺、哩来嶙酸、链佐星、长春瑞滨、轻基脉、视黄酸、氮芥、白消安、强的松、翠酮、阿司匹林、水杨酸盐、布洛芬、茶普生、非诺洛芬、叫睬美辛、苯基丁氮酮、氮芥、地塞米松、泼尼松龙、塞来昔布、伐地考昔、尼美舒利、可的松、皮质类固醇、吉西他滨、雪松醇，或它们的任意组合，或它们的衍生物中的至少一种，或它们的纳米药物剂型。
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