CN110870880B - 包含异常毕赤酵母和视黄醇的局部用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明题为“包含异常毕赤酵母和视黄醇的局部用组合物”。本发明提供了一种局部用组合物，该局部用组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇。

Description

包含异常毕赤酵母和视黄醇的局部用组合物
技术领域
本发明提供了一种处理皮肤的方法，该方法通过向皮肤局部施用异常毕赤酵母的提取物和视黄醇的组合来处理皮肤。另外，本发明提供了一种局部用组合物，该组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇的组合。
背景技术
透明质酸存在于胶原蛋白和弹性蛋白纤维的周边以及这些纤维相交位置处的皮肤中。透明质酸不仅位于真皮中，而且也位于表皮细胞间隙中，尤其位于中间的棘层中，但并不位于角质层(SC)或颗粒层中。在老化的皮肤中，透明质酸的水平降低并且其与胶原和弹性蛋白分离。含有降低的透明质酸水平的皮肤还表现出减少的水结合，这可涉及老化皮肤中注意到的变化，包括起皱、改变的弹性、减少的浮肿和缩减的支撑皮肤微脉管系统的能力。作为主要的GAG之一，透明质酸可结合其重量1000倍的水，并且可帮助皮肤保留且保持水。它存在于所有结缔组织中，并且主要由皮肤中的成纤维细胞和角质细胞产生。
已经提出了用于抵抗皱纹和细纹的不同方法，包括透明质酸的注射。外源透明质酸的注射被用作软组织扩增手术中的临时皮肤填充剂。然而，注射的透明质酸具有有限的寿命。另一方面，已经证实难以通过局部施用将外源透明质酸渗透到皮肤中。
毕赤酵母为酵母科中的酵母属。该属中超过100个菌种是已知的。最熟知的菌种包括异常毕赤酵母、季也蒙毕赤酵母、挪威毕赤酵母和奥默毕赤酵母。
异常毕赤酵母(之前名为异常汉逊酵母)可存在于原料乳和奶酪中。毕赤酵母属的酵母提取物富含甘露聚糖(由甘露糖单体构成的多糖)。已知异常毕赤酵母和甘露聚糖用于治疗皮肤老化。参见例如，FR 2938768、FR 2906719、FR 2897266和FR 2976490。
Figure BDA0002184002400000021
为可商购获得的含有异常毕赤酵母的提取物的美容成分。它是由从甘蔗分离的毕赤酵母菌株产生的。它购自Silab-France公司。
US 2017/0172913A1涉及局部用组合物，以及处理皮肤老化的迹象和改善皮肤屏障保护和皮肤保湿性的方法，该组合物包含提供增加的透明质酸产生的异常毕赤酵母提取物和菊苣根提取物的组合。
类视色素(包括视黄醇)是熟知的抗老化活性物质。它们用于多种用于局部施用的美容产品中。视黄醇用于例如可从Johnson&Johnson Consumer Inc.商购获得的
Figure BDA0002184002400000022
Rapid Wrinkle
Figure BDA0002184002400000023
Rapid Wrinkle
Figure BDA0002184002400000024
用于淡化皮肤皱纹的外观，抚平细纹，改善肤质和提亮肤色尤其是视黄醇已被证明是高效且具有成本效益的美容成分。
异常毕赤酵母提取物和视黄醇通过不同的生物学机制起作用并导致不同临床有益效果的改善。视黄醇被称为抗衰老有益效果的黄金标准，并且已知其通过包括标记CRABP2&HBEGF的生物途径起作用。异常毕赤酵母提取物通过增加透明质酸合酶2酶的活性通过水合途径起作用，转化为包括水合作用、改善的皮肤屏障、紧致等的临床益处。
虽然本领域分别提供了异常毕赤酵母的提取物和视黄醇的局部用途，但申请人现已发现，局部施用这两种成分的组合有利地提高视黄醇的活性和异常毕赤酵母提取物的活性。这出乎意料地为皮肤提供显著有益效果，包括改善、减少、抑制或延缓皮肤中至少一种老化的迹象的出现、以及增强皮肤屏障保护和皮肤保湿性。因此，现在可得到例如处理皮肤老化的迹象的新方法。
发明内容
本发明涉及一种局部用组合物，该组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇。
本发明还涉及处理皮肤老化的迹象的方法，该方法包括向需要处理皮肤老化的皮肤局部施用局部用组合物，该组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇。
本发明还提供了一种改善皮肤屏障功能和保湿性的方法，该方法包括向需要改善皮肤屏障功能和保湿性的皮肤局部施用局部用组合物，该组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇。
具体实施方式
本发明的局部用组合物通过异常毕赤酵母提取物和视黄醇的协同作用，改善了透明质酸在皮肤中的产生。
据信，本领域中技术人员可基于本文说明书充分利用本发明。以下具体实施方案应被理解为仅是说明性的，并且无论如何都不会以任何方式限制本公开的其余部分。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。另外，本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献以引用方式并入本文。除非另外指明，否则用于表达成分的量的百分比为重量百分比(即，％(W/W))。类似地，用于表达成分的相对比例的重量比也使用重量百分比来确定(即，通过将一种成分与另一种成分的重量百分比相除来计算重量比)。除非另外阐明，否则所有范围均包括端值，例如，“4至9”包括端值4和9。
如本文所用，“产品”任选地为成品包装的形式。在一个实施方案中，包装为容纳该组合物的容器，诸如塑料、金属或玻璃管或罐。产品还可含有另外的包装，诸如用于储存此类容器的塑料或硬纸板盒。在一个实施方案中，产品包含本发明的组合物并且含有指导使用者向皮肤或毛发施用组合物的说明书。
如本文所用，“局部地施用”意指例如用手或涂敷器(诸如擦拭物、滚筒或喷雾器)直接涂抹在或铺展在外层皮肤、头皮或毛发上。
如本文所用，“美容品”是指能保留、恢复、给予、刺激或增强体美外观或似乎能增进美貌或年轻的美化物质或制品，尤其是涉及组织或皮肤的外观时。
如本文所用，“美容上可接受的”意指该术语描述的成分适于与组织(例如，皮肤或毛发)接触使用而不会引起不适当的毒性、不相容性、不稳定性、剌激性、变应性应答等。
在某些实施方案中，本发明的组合物适用于治疗皮肤老化的迹象。如本文所用，“皮肤老化的迹象”包括存在细纹和皱纹、弹性损失、肤色不均和斑疤。在特别优选的实施方案中，老化的迹象为存在细纹和皱纹和/或弹性损失。
如本文所用，“治疗皮肤老化的迹象”是指缓和、减轻、预防、改善或消除上述皮肤老化的存在或迹象。
如本文所用，“皱纹”包括微细纹、微皱纹或粗皱纹。皱纹的示例包括但不限于眼睛周围的微细纹(例如“鱼尾纹”)、前额和颊皱纹、眉心纹和嘴部周围的笑纹。
如本文所用，“弹性损失”包括皮肤或组织的弹性或结构完整性的损失，包括但不限于松垂、松弛和松散的组织。弹性或组织结构完整性的损失可由多种因素所致，包括但不限于疾病、衰老、激素变化、机械创伤、环境损害，或者是向组织施用产品诸如美容品或药物的结果。
如本文所用，“肤色不均”意指与弥漫状或斑驳状色素沉着相关的皮肤状况，色素沉着可分类为色素沉着过度，诸如发炎后色素沉着过度。
如本文所用，“斑疤”意指与发红或红斑相关的皮肤状况。
如本文所用，“改善皮肤的紧致度”意指增强皮肤的紧致度或弹性、预防皮肤的紧致度或弹性损失、或者预防或治疗松垂、松弛和松散的皮肤。皮肤的紧致度或弹性可通过使用皮肤弹性测试仪(cutometer)测量。参见J.Serup、G.Jemec与G.Grove编辑的Handbook OfNon-Invasive Methods And The Skin，第66.1章(2006年)。皮肤弹性或紧致度的损失可由多种因素所致，包括但不限于老化、环境损害或向皮肤施用美容品的结果。
如本文所用，“改善皮肤的肌理”意指使皮肤表面平滑以去除皮肤表面上的隆起块或裂隙。
如本文所用，“改善皮肤中皱纹的外观”意指预防、延缓、停止或逆转皮肤上皱纹和微细纹形成的过程。
如本文所用，术语“安全有效量”意指足以引起所需效果但低至足以避免严重副作用的量。化合物、提取物或组合物的安全有效量将随着例如最终使用者的年龄、健康和环境暴露，治疗的持续时间和性质，采用的特定提取物、成分或组合物，以及所用的具体载体等因素而变化。
如本文所用，“需要改善皮肤屏障功能和保湿性的皮肤”意指但不限于缺乏水分、缺乏皮脂、破裂、干燥、发痒、鳞屑、干皮、脱水、缺乏柔韧性、缺乏光彩、无光泽或缺乏脂质的皮肤。
如本文所述，申请人已发现，局部施用异常毕赤酵母的提取物和视黄醇的组合提供出乎意料的良好皮肤屏障功能、皮肤保湿性和皮肤抗老化有益效果。
申请人还特别发现，局部施用含有异常毕赤酵母的提取物和视黄醇的组合的组合物增强了皮肤中的内源透明质酸(“HA”)水平，从而使水合和至少一种皮肤老化的迹象的出现得到改善。局部施用此类组合物可将透明质酸水平增加至更年轻皮肤中发现的方向，由此提供对皮肤的结构支撑，以减少皮肤老化的迹象的出现。
异常毕赤酵母
局部用组合物包含一种或多种异常毕赤酵母的提取物。具体地，此类提取物可为利用从果实或植物的其它地上部分分离的各种异常毕赤酵母的菌株之一产生的提取物。可使用任何美容上可接受的异常毕赤酵母的提取物。
合适的异常毕赤酵母的提取物的一个示例为可从Silab-France公司商购获得的PRO-LIPISKIN。它是由存在于甘蔗上的异常毕赤酵母的菌株产生的。
合适的异常毕赤酵母的提取物的另一个示例是由存在于猕猴桃植物的果实或叶上的异常毕赤酵母的菌株产生的。
异常毕赤酵母的提取物可提供为含有在约20重量％、更具体地2至10重量％、最具体地3至7重量％范围内的干物质(提取物)的溶液。
此类溶液的溶剂包括水、醇、二元醇等。在一个实施方案中，溶剂为至少约90重量％的水，或至少约95重量％的水。
视黄醇
局部用组合物还含有视黄醇。具有下式的视黄醇：
Figure BDA0002184002400000061
其中R为CH2OH。
量
任何合适量的异常毕赤酵母提取物和视黄醇均可用在本发明的组合物中。优选地，该组合物包含安全且有效量的两种成分。具体地，所使用的异常毕赤酵母提取物和视黄醇的量是美容上可接受的，并且被选择为针对特定条件实现所期望的皮肤处理，诸如老化的迹象、减少的屏障功能或降低的保湿性。
在某些优选的实施方案中，组合物包含从约0.01至约1重量％的异常毕赤酵母提取物，更优选约0.065至约0.26重量％的异常毕赤酵母提取物。在一个实施方案中，组合物包含约0.13重量％异常毕赤酵母提取物。
在某些优选的实施方案中，组合物包含从约0.01至约10重量％，更优选约0.05至约1重量％的视黄醇。在一个实施方案中，组合物包含约0.1重量％的视黄醇。
在某些实施方案中，组合物中的异常毕赤酵母提取物与视黄醇的重量比为从约0.5至约2。在一个实施方案中，组合物中的异常毕赤酵母提取物与视黄醇的重量比为约1.3。
局部用组合物
可将本发明的组合物局部地施用于人的皮肤或毛发。因此，组合物还可包含美容上可接受的局部用载体，该局部用载体可为组合物的约50％至约99.99重量％(如组合物的约80％至约99重量％)。在本发明的优选实施方案中，美容上可接受的局部用载体包括水。
可将组合物制备成多种产品类型，包括但不限于洗剂、霜剂、凝胶剂、棒剂、喷雾剂、油膏剂、清洁液体洗剂和固体皂剂、洗发剂和毛发调理剂、毛发固定剂、糊剂、泡沫剂、粉末剂、摩丝、剃须膏、擦拭物、贴剂、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤膜剂、膜剂和化妆品如粉底以及睫毛膏。这些产品类型可含有几种类型的美容上可接受的局部用载体，包括(但不限于)溶液、悬浮液、乳状液(如微乳液和纳米乳液)、凝胶、固体和脂质体。下面为此类载体的非限制性示例。其它载体可由本领域中普通技术人员进行配制。
可用于本发明的组合物可被配制为溶液。溶液通常包含水性溶剂或有机溶剂(例如，约50％至约99.99％或约90％至约99％的美容上可接受的水性溶剂或有机溶剂)。合适的有机溶剂的示例包括：丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油、1,2,4-丁三醇、山梨醇酯、1,2,6-己三醇、乙醇以及它们的混合物。
可用于本主题发明的组合物可配制为包含润肤剂的溶液。此类组合物优选含有约2％至约50％的一种或多种润肤剂。如本文所用，“润肤剂”是指用于诸如通过预防水经表皮从皮肤流失来预防或缓解干燥的物质。润肤剂的示例包括本领域中已知的那些。特别合适的润肤剂的示例包括植物油、矿物油、脂肪酸酯等。
可由此类溶液制备洗剂。洗剂通常含有约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的一种或多种润肤剂和约50％至约90％(例如，约60％至约80％)的水。
可由溶液配制的另一类产品为霜膏。霜膏通常含有约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的一种或多种润肤剂和约45％至约85％(例如，约50％至约75％)的水。
本发明的组合物可包含水，或者另选地为无水的或为不包含水而是包含有机溶剂和/或有机硅溶剂、油、脂质和蜡的膏剂。膏剂可含有简单的动物油或植物油或半固体烃类的底料。膏剂可含有约2％至约10％的一种或多种润肤剂和约0.1％至约2％的一种或多种增稠剂。
组合物可被配制为乳液。如果局部用载体为乳液，则约1％至约10％(例如约2％至约5％)的该局部用载体含有一种或多种乳化剂。乳化剂可为非离子的、阴离子的或阳离子的。乳化剂的示例是本领域中所熟知的。
洗剂和霜膏可被配制为乳液。通常，此类洗剂含有0.5％至约5％的一种或多种乳化剂。此类霜剂通常含有约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的润肤剂；约20％至约80％(例如30％至约70％)的水；以及约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的乳化剂。
水包油型和油包水型的单乳液皮肤护理制剂诸如洗剂和霜膏是化妆品领域熟知的并且可用于本主题发明。多相乳液组合物，诸如水包油包水型或油包水包油型，也可用于本主题发明。通常，此类单乳液或多相乳液含有水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。
本发明的组合物也可被配制为凝胶(例如，水性凝胶、醇凝胶、醇/水凝胶或油凝胶，使用合适的一种或多种胶凝剂)。用于水性凝胶和/或醇凝胶的合适胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。适用于油(诸如矿物油)的胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常含有约0.1重量％至5重量％的此类胶凝剂。
在一个实施方案中，组合物为凝胶霜。凝胶霜美感的特征在于阻水、半透明方面和光后感觉。如本文所用，术语“凝胶霜”意指具有低含量的油滴悬浮在水性凝胶基质中的制剂。
本发明的组合物也可被配制为固体制剂(例如蜡基棒、条皂组合物、粉末或含有粉末的擦拭物)。
除了上述组分外，组合物还可含有各种各样的另外的油溶性物质和/或水溶性物质，这些物质通常用于组合物中，按本领域既定的水平施用于皮肤和毛发上。
另外的美容活性剂
本发明的组合物还可包含多种另外的美容活性剂中的任一种。合适的另外的活性剂的示例包括：亮肤剂、深色剂、另外的抗老化剂、弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、抗痤疮剂、控油光剂、抗微生物剂(诸如抗酵母剂、抗真菌剂和抗细菌剂)、抗炎剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光照保护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、洗涤剂/表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、能量增强剂、止汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长增强剂、毛发生长延缓剂、固化剂、补水剂、增效剂、抗硬结剂、皮肤调理剂、抗蜂窝炎剂、气味控制剂诸如气味遮盖剂或pH调节剂等。
各种合适的另外的化妆品可接受的活性物质的示例包括羟基酸；过氧化苯甲酰；D-泛醇；紫外线过滤例如但不限于阿伏苯宗(Parsol 1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol 5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol 507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(TinosorbS)、二苯酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex 4360)、舒利苯酮、亚甲基二苯并三唑四甲基丁酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌；类胡萝卜素；自由基清除剂；自旋捕捉剂；其它类视色素和类视色素前体，如视黄酸和棕榈酸视黄酯；神经酰胺；多不饱和脂肪酸；必需脂肪酸；酶；酶抑制剂；矿物质；激素，诸如雌激素；类固醇，例如氢化可的松；2-二甲氨基乙醇；铜盐如氯化铜；含有铜的肽，辅酶Q10；氨基酸如脯氨酸；维生素；乳糖酸；乙酰辅酶A；烟酸；核黄素；硫胺；核糖；电子传输体如NADH和FADH2；以及其它植物提取物，如燕麦、芦荟、龙牙草、大豆、香菇提取物、以及它们的衍生物和混合物。
在某些优选的实施方案中，组合物包含异常毕赤酵母提取物、视黄醇以及至少一种另外的皮肤保湿活性剂的组合。
在某些优选的实施方案中，组合物包含异常毕赤酵母提取物、视黄醇以及用于改善至少一种皮肤老化的迹象出现的至少一种另外的试剂的组合。合适的改善至少一种皮肤老化的迹象出现的另外的试剂的示例包括但不限于弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、类视色素、透明质酸(包括交联的透明质酸)、硫酸软骨素(包括交联的硫酸软骨素)、二甲氨基乙醇、N,N,N',N'-四(2-羟丙基)乙二胺、α羟基酸、多羟基酸、糖胺以及它们中的两种或更多种的组合。
如本文所用，“弹性蛋白原促进剂”是指具有增强弹性蛋白原产生的生物活性的一类化合物。根据本发明，弹性蛋白原促进剂包括所有能够增强人体中弹性蛋白原的产生的天然或合成化合物。
合适的弹性蛋白原促进剂的示例包括但不限于黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物以及具有铜和/或锌组分的双金属络合物。具有铜和/或锌组分的双金属络合物可为例如柠檬酸铜-锌、草酸铜-锌、酒石酸铜-锌、苹果酸铜-锌、琥珀酸铜-锌、丙二酸铜-锌、马来酸铜-锌、天冬氨酸铜-锌、谷氨酸铜-锌、戊二酸铜-锌、延胡索酸铜-锌、葡糖二酸铜-锌、聚丙烯酸铜-锌、已二酸铜-锌、庚二酸铜-锌、辛二酸铜-锌、壬二酸铜-锌、癸二酸铜-锌、十二酸铜-锌或它们的组合。在一个优选的实施方案中，弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物以及它们的组合。在一个特别优选的实施方案中，弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、小白菊提取物以及它们的组合。
所谓“黑莓提取物”意指从悬钩子(Rubus)属植物且优选越南悬钩子(Rubusfruticosus)分离的化合物的共混物。在一个实施方案中，化合物分离自该植物的花。在另一个实施方案中，化合物分离自该植物的干燥花。此类化合物可分离自植物的一个或多个部分(例如，整株植物、植物的花、种子、根、根茎、茎、果实和/或叶)。在一个优选的实施方案中，黑莓提取物为黑莓叶提取物。一种特别合适的黑莓提取物通过用水和乙醇的混合物提取越南悬钩子叶，用麦芽糖糊精基质(可从Symrise Inc.(Teterboro，NJ)商购获得并以名称SymMatrix出售)配混成活性为约5％至约10％而制备。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种弹性蛋白原促进剂，诸如上文所述的那些。基于活性物质计，组合物优选包含约0.1％至约10％的弹性蛋白原促进剂，更优选约0.5％至约5％的弹性蛋白原促进剂，并且最优选约0.5％至约2％的弹性蛋白原促进剂。
如本文所用，“胶原促进剂”是指具有增强胶原产生的生物活性的化合物。根据本发明，“非类视色素胶原促进剂”包括不是类视色素或衍生自类视色素，并且能够增强人体中胶原产生的所有天然或合成化合物。
合适的胶原促进剂的示例包括但不限于下述：类视色素、小白菊(野甘菊(Tanacetum parthenium))提取物、积雪草(Centella asiatica)提取物和豨莶(Siegesbeckia orientalis)提取物；大豆的提取物；胶原促进肽；乌索酸；和积雪草苷。
积雪草，在留尼汪岛上也称为紫箩(Violette marronne)，在印度称为购土可乐(Gotu Kola)或印度天胡葵(Indian pennywort)，在北美称为积雪草R.(Centellarepanda)，而在马达加斯加称为他乐婆(Talapetraka)，为多形态草药，属于伞形科(Umbelliferae，Apiaceae)，具体地属于天胡荽(Hydrocotyle)亚科。其在整个热带野生生长，并且喜好海拔高度约600米至1200米的潮湿阴暗区域。积雪草具有三个品种：迪比卡型、阿比西尼亚型和佛罗里达型。该草药是已知的并因其愈合、镇静、止痛、抗抑郁、抗病毒和抗微生物特性而被使用。该草药的生物活性看起来是由于该草药中存在三萜烯分子。合适的积雪草提取物以TECA购自Bayer Consumer HealthCare(Basel,Switzerland)。
所谓“豨莶草提取物”意指植物豨莶草的各种提取物中的任一种，包括购自Sederma公司(Croda International Group,Edison,NJ)的豨莶苷。
合适的胶原促进肽包括以下苦参碱肽(即，衍生自细胞外基质蛋白降解的肽-胶原蛋白、弹性蛋白或蛋白多糖)，包括棕榈酰五肽，例如来自Sederma(Croda InternationalGroup of Edison，NJ)的MATRIXYL；以PROCYTE购自Photomedex of Montgomeryville(PA)的GHK铜肽；以Biopoeptide CL购自Sederma(Croda International Group of Edison,NJ)的棕榈酰GHK肽；仿生四肽，诸如以Chronoline Tri Peptide购自Unipex,Québec,Canada的那些；以及以Syn-Coll购自DSM,Basel,Switzerland的棕榈酰三肽。
乌索酸也称为五环三萜酸、乌苏酸、熊果酸、Urson、β-乌索酸和3-β-羟基-乌索-12-烯-28-羧酸。其可例如从Sigma-Aldrich,St.Louis,MO商购获得。
积雪草苷，在化学上也称为：[6-[[3,4-二羟基-6-(羟甲基)-5-(3,4,5-三羟基-6-甲基四氢吡喃-2-基)氧基四氢吡喃-2-基]氧基甲基]-3,4,5-三羟基四氢吡喃-2-基]10,11-二羟基-9-(羟甲基)-1,2,6a,6b,9,12a-六甲基-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-十四氢-1H-苉-4a-甲酸酯)，可例如从Bayer Sant é Familiale Division Serdex,69,Boulevard Victor Hugo 93400SAINT-OUEN France商购获得。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种胶原促进剂。基于活性物质计，组合物优选包含约0.1％至约10％的胶原促进剂，更优选约0.5％至约5％的胶原促进剂，并且最优选约0.5％至约2％的胶原促进剂。
本发明的组合物可另外包含至少一种亮肤活性剂。合适的亮肤活性剂的示例包括但不限于酪氨酸酶抑制剂、黑素降解剂、包括PAR-2拮抗剂的黑素体转移抑制剂、剥脱剂、防晒剂、类视色素、抗氧化剂、氨甲环酸、氨甲环酸十六烷酯盐酸盐、皮肤漂白剂、亚油酸、腺苷单磷酸二钠盐、洋甘菊提取物、尿囊素、遮光剂、滑石和二氧化硅、锌盐等，以及如在Solano等人，Pigment Cell Res.19(550-571)和Ando等人，Int J Mol Sci 11(2566-2575)中所述的其它试剂。
合适的酪氨酸酶抑制剂的示例包括但不限于维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物、曲酸、熊果苷、间苯二酚、对苯二酚、黄酮例如甘草类黄酮、甘草根提取物、桑树根提取物、菊叶薯蓣根提取物、虎耳草提取物等、鞣花酸、水杨酸盐及衍生物、葡糖胺及衍生物、富勒烯、扁柏酚、双酸、乙酰葡糖胺、5,5'-二丙基-联苯-2,2'-二醇(厚朴木酚素)、4-(4-羟基苯基)-2-丁醇(4-HPB)以及它们中的两种或更多种的组合等。维生素C衍生物的示例包括但不限于抗坏血酸和盐、抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸磷酸钠、抗坏血酸磷酸镁以及富含维生素C的天然提取物。维生素E衍生物的示例包括但不限于α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚以及它们的混合物、生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯以及富含维生素E衍生物的天然提取物。间苯二酚衍生物的示例包括但不限于间苯二酚、4-取代的间苯二酚，如4-烷基间苯二酚，诸如4-丁基间苯二酚(噜忻喏)、4-己基间苯二酚(Synovea HR，Sytheon公司)、苯乙基间苯二酚(Symwhite，Symrise公司)、1-(2,4-二羟苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲基苯基)-丙烷(nivitol，Unigen公司)等，以及富含间苯二酚的天然提取物。水杨酸盐的示例包括但不限于4-甲氧基水杨酸钾、水杨酸、乙酰水杨酸、4-甲氧基水杨酸以及它们的盐。在某些优选的实施方案中，酪氨酸酶抑制剂包括4-取代的间苯二酚、维生素C衍生物或维生素E衍生物。在更优选的实施方案中，酪氨酸酶抑制剂包含苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚或抗坏血酸-2-葡糖苷。
合适的黑素降解剂的示例包括但不限于过氧化物和酶，诸如过氧化物酶和木质素酶。在某些优选的实施方案中，黑素抑制剂包括过氧化物或木质素酶。
合适的黑素体转移抑制剂的示例包括PAR-2拮抗剂，诸如大豆胰蛋白酶抑制剂或Bowman-Birk抑制剂、维生素B3和衍生物诸如烟酰胺、大豆精华、全大豆、大豆提取物。在某些优选的实施方案中，黑素体转移抑制剂包括大豆提取物或烟酰胺。
剥脱剂的示例包括但不限于α-羟基酸诸如乳酸、乙醇酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或任何前述物质的任何组合、β-羟基酸诸如水杨酸、多羟基酸诸如乳糖酸和葡糖酸，以及机械剥落诸如微晶换肤术。在某些优选的实施方案中，剥脱剂包括乙醇酸或水杨酸。
视黄醇之外的类视色素的示例包括但不限于视黄醛(维生素A醛)、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯、视黄酸、视黄醇棕榈酸酯、异维甲酸、他佐罗汀、蓓萨罗丁、阿达帕林、它们中的两种或更多种的组合等。在某些优选的实施方案中，类视色素选自：视黄醛、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯、以及它们中的两种或更多种的组合。
抗氧化剂的示例包括但不限于水溶性抗氧化剂诸如巯基化合物及其衍生物(例如，焦亚硫酸钠和N-乙酰基半胱氨酸、谷胱甘肽)、硫辛酸和二氢硫辛酸、茋类化合物诸如白藜芦醇及衍生物、乳铁蛋白、铁和铜螯合剂以及抗坏血酸及抗坏血酸衍生物(例如，抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明的组合物中的油溶性抗氧化剂包括但不限于丁基化羟基甲苯、类视色素、生育酚类(例如，生育酚乙酸酯)、生育三烯酚类和泛醌。含有适用于本发明的组合物中的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：含有类黄酮和异黄酮以及它们的衍生物(例如，染料木黄酮和木质素异黄酮(diadzein))的提取物、含有白藜芦醇的提取物等等。此类天然提取物的示例包括葡萄籽、绿茶、红茶、白茶、松树树皮、小白菊、不含小白菊内酯的小白菊、燕麦提取物、黑莓提取物、黄栌提取物、大豆提取物、柚提取物、麦芽精提取物、橙皮素、葡萄提取物、马齿苋提取物、甘草查耳酮、查耳酮、2,2'-二羟查耳酮、报春花提取物、蜂胶等。
另外的美容活性剂可以任何合适的量存在于组合物中，例如按组合物的重量计，以约0.0001％至约20％，例如约0.001％至约10％诸如约0.01％至约5％的量存在于组合物中。在某些优选的实施方案中，该量为0.1％至5％，而在其它优选的实施方案中，该量为1％至2％。
本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种抗炎剂化合物。
合适的抗炎剂的示例包括取代的间苯二酚、(E)-3-(4-甲基苯基磺酰基)-2-丙烯腈(例如从美国密苏里州圣路易的西格玛奥德里奇公司商购可得的“Bay 11-7082”)、四氢姜黄素(例如四氢姜黄素CG，可得自新泽西州皮斯卡特维的萨宾莎公司(SabinsaCorporation of Piscataway,NJ))，来自下述的提取物和材料：黄檗(Phellodendronamurense)外皮提取物(PCE)、非变性大豆(黄豆(Glycine max))、小白菊(甘菊(Tanacetumparthenium))、姜(生姜(Zingiber officinale))、银杏(银杏(Ginkgo biloba))、羟基积雪草苷(积雪草提取物成分)、黄栌(黄栌)、蜂斗菜提取物(紫蜂斗菜(Petasites hybridus))、枸杞(宁夏枸杞(Lycium barbarum))、奶蓟提取物(水飞蓟(Silybum marianum))、忍冬(金银花(Lonicera japonica))、秘鲁香脂(秘鲁香树(Myroxylon pereirae))、鼠尾草(药用鼠尾草(Salvia officinalis))、酸果蔓提取物(红莓苔子(Vaccinium oxycoccos))、苋菜油(籽粒苋(Amaranthus cruentus))、石榴(石榴(Punica granatum))、马黛茶(巴拉圭茶(Ilex paraguariensis)叶提取物)、白百合花提取物(圣母百合(Lilium candidum))、橄榄叶提取物(橄榄(Olea europaea))、根皮素(苹果提取物)、燕麦粉(燕麦(Aveena sativa))、Lifenol(蛇麻草：啤酒花(Humulus lupulus)提取物)、芒柄花P(红芒柄花(Ononisspinosa))、甘草查耳酮(甘草：胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)提取物成分)、馨敏舒(红没药醇和姜提取物)、它们的两种或更多种的组合等等。
在一个实施方案中，抗炎剂为间苯二酚。特别合适的取代的间苯二酚包括4-己基间苯二酚和4-辛基间苯二酚，特别是4-己基间苯二酚。4-己基间苯二酚以SYNOVEA HR可从Sytheon公司(Lincoln Park，NJ)商购获得。4-辛基间苯二酚可从City Chemical LLC(WestHaven,Connecticut)商购获得。
所谓“小白菊的提取物”意指植物“解热菊”的提取物，诸如可根据标题为“PARTHENOLIDE FREE BIOACTIVE INGREDIENTS FROM FEVERFEW(TANACETUM PARTHENIUM)AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION”的美国专利申请公布2007/0196523中列出的详细内容制备。一种特别合适的小白菊提取物可以约20％活性小白菊从Integrated BotanicalTechnologies公司(Ossining,NY)商购获得。
在本发明的护肤组合物中，异常毕赤酵母提取物和视黄醇的组合与抗炎化合物的量的比可改变。例如，提取物和抗炎化合物可以约0.001至约100、优选约0.01至约10，更优选约0.25至约2的重量比(其通过将按干燥提取物重量计的量除以按抗炎化合物重量计的量来确定)存在。
许多其它物质也可存在于本发明的组合物中。在某些优选的实施方案中，组合物包含一种或多种选自以下的局部用成分：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂等。
润肤剂意指帮助维持皮肤的柔软、光滑和柔韧外观的化合物(例如，通过保留在皮肤表面上或角质层中以充当润滑剂)。合适的润肤剂的示例包括在Handbook of CosmeticScience and Technology，A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑，由Marcel Dekker,Inc(NewYork,NY)于2001年出版)中的第35章，第399-415页(G Zocchi的Skin Feel Agent)中所见的润肤剂，并且其包括但不限于凡士林、己基癸醇硬脂酸酯以及植物、坚果和植物油，诸如澳洲坚果油、米糠油、葡萄籽油、棕榈油、月见草油、氢化花生油和鳄梨油。
湿润剂意指旨在提高皮肤顶层的水含量的化合物(例如，吸湿化合物)。合适的湿润剂的示例包括在Handbook of Cosmetic Science and Technology(由A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑，由Marcel Dekker，Inc(New York，NY)于2001年出版)中的第35章，第399-415页(G Zocchi的Skin Feel Agent)中所见的那些，并且包括但不限于甘油、山梨糖醇或海藻糖(例如，α,α-海藻糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖)或它们的盐或酯(例如，海藻糖6-磷酸酯)。
在一个实施方案中，组合物含有甘油。例如，组合物含有至少10重量％的甘油。组合物可含有至少12重量％的甘油。
在另一个实施方案中，组合物包含0.5至25重量％的甘油。在一个实施方案中，组合物包含1重量％至6重量％的甘油。
在另一个实施方案中，组合物具有6.5或更小的pH。例如，组合物可具有5.5或更小的pH。
在一个具体的实施方案中，组合物含有至少10重量％的甘油，并且具有6.5或更小的pH。
在另一个实施方案中，组合物包含0.1至5重量％的橄榄油鲸蜡醇酯。在一个实施方案中，组合物包含0.1重量％至2重量％的橄榄油鲸蜡醇酯。
在另一个实施方案中，组合物也包含0.1至5重量％的橄榄油山梨糖醇酯。在一个实施方案中，组合物包含0.1重量％至2重量％的橄榄油山梨糖醇酯。
橄榄油鲸蜡醇酯和橄榄油山梨糖醇酯的便利来源为可从Hallstar Itali公司商购获得的Olivem 1000。
表面活性剂意指旨在进行清洗或乳化的表面活性剂。合适的表面活性剂的示例包括存在于Handbook of Cosmetic Science and Technology(由A.Barel,M.Paye和H.Maibach编辑，由Marcel Dekker,Inc.(New York,NY)于2001年出版)中的第37章，第431-450页(L.Oldenhove de Guertechin的表面活性剂分类(Classification ofsurfactants))中所见的那些，并且包括但不限于阴离子表面活性剂诸如硫酸酯、阳离子表面活性剂诸如甜菜碱、两性表面活性剂诸如椰油酰甘氨酸钠、非离子表面活性剂诸如烷基聚葡糖苷。
合适的螯合剂的示例包括能够保护和保留本发明的组合物的那些。优选地，螯合剂为乙二胺四乙酸(“EDTA”)，并且更优选为乙二胺四乙酸四钠，其可以商品名VERSENE100XL从Dow Chemical公司(Midland,Michigan)商购获得。
合适的防腐剂包括例如，对羟基苯甲酸酯、季铵类物质、苯氧基乙醇、苯甲酸盐、DMDM乙内酰脲、有机酸，并且基于组合物的总重量，以约0％至约1％，或约0.05％至约0.5％的量存在于组合物中。
赋予毛发另外的属性诸如光泽的多种调理剂中的任一种适用于本发明中。示例包括但不限于挥发性有机硅调理剂，其在大气压下具有小于约220℃的沸点。合适的挥发性有机硅的示例非排它性地包括聚二甲基硅氧烷、聚二甲基环硅氧烷、六甲基二硅氧烷、环聚甲基硅氧烷流体、诸如以商品名“DC-345”从Dow Corning Corporation(Midland，Michigan)商购获得的聚二甲基环硅氧烷、以及它们的混合物，并且优选包括环聚甲基硅氧烷流体。其它合适的调理剂包括阳离子聚合物，该阳离子聚合物包括聚季铵盐、阳离子瓜尔胶等。
多种可商购获得的珠光剂或遮光剂中的任一种适用于组合物。适用的珠光剂或遮光剂的示例包括但不限于(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)乙烯或丙二醇的单酯或二酯；(a)具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和(b)式HO-(JO)a-H的聚亚烷基二醇的单酯或二酯，其中J为具有约2至约3个碳原子的亚烷基基团；并且a为2或3；含有约16至约22个碳原子的脂肪醇；式KCOOCH2L的脂肪酸酯，其中K和L独立地含有约15至约21个碳原子；不溶于洗发剂组合物中的无机固体、以及它们的混合物。
适于在皮肤上使用的任何芳香剂组合物均可根据本发明使用。
在某些优选的实施方案中，本发明的形式为包含本发明组合物的基材。可使用任何合适的基材。例如，在美国已公布的专利申请号2005/0226834和2009/0241242中公开了合适的基材和基材材料的示例，其全文以引用的方式并入本文中。
在某些优选的实施方案中，基材为擦拭物、手套或面膜。优选地，此类实施方案包含水不溶性基材，此类基材如上文引用的文献中所定义。对于某些实施方案，水不溶性基材可具有一定的尺寸和形状，使得它覆盖个人使用者的面部，从而有利于将水不溶性基材作为面膜基材围绕使用者的面部放置。例如，水不溶性面膜基材可具有用于使用者的嘴部、鼻部和/或眼睛配置的开口。作为另外一种选择，水不溶性基材可不具此类开口。此类无开口的构造可用于本发明的实施方案，其中水不溶性基材旨在覆盖在皮肤的非面部的大片区域或如果水不溶性基材旨在用作擦拭物。水不溶性基材可具有各种形状，诸如有角形状(例如矩形)或弧形形状诸如圆形或椭圆形。对于某些实施方案，基材为手套，诸如描述于美国已公布的专利申请号2006/0141014的手套，其全文以引用的方式并入本文中。在本发明的一个实施方案中，产品包括多个具有不同形状的水不溶性基材。
本发明还包括通过向需要改善皮肤屏障功能和/或保湿性的皮肤施用异常毕赤酵母提取物和视黄醇的组合来改善皮肤的屏障功能和/或保湿性的方法。该方法包括，例如将包含组合的异常毕赤酵母提取物和视黄醇的本发明的组合物局部施用至需要改善皮肤屏障功能和保湿性的皮肤。此类局部施用可应用至身体上需要处理的任何皮肤，例如面部、唇部、颈部、胸部、背部、臂部、腋窝、手部、足部和/或腿部的皮肤。组合的异常毕赤酵母提取物和视黄醇优选以致使获得所期望的皮肤屏障功能改善的有效量施用。
本发明还包括通过向需要改善至少一种皮肤老化的迹象出现的皮肤施用异常毕赤酵母提取物和视黄醇的组合来改善至少一种皮肤老化的迹象出现的方法。该方法包括，例如将包含异常毕赤酵母提取物和视黄醇的本发明的组合物局部施用至需要处理至少一种皮肤老化的迹象的皮肤。此类局部施用可针对身体上需要治疗的任何皮肤，例如面部、唇部、颈部、胸部、背部、臂部、腋窝、手部、足部和/或腿部的皮肤。优选以这样的有效量来施用组合的异常毕赤酵母提取物和视黄醇：致使实现至少一种皮肤老化的迹象出现的期望改善的有效量。
可使用向有需要的皮肤施用组合物的任何合适方法。例如，可通过用手将组合物从包装直接施用于有需要的皮肤而施用于有需要的皮肤，或可从基材诸如擦拭物或面膜处转移，或它们中的两种或更多种的组合。在其它的实施方案中，组合物可经由点滴器、管、滚筒、喷雾器和贴片来施用，或添加到浴缸中或者以其它方式添加到水中以施用于皮肤等。组合物可以多种方式/形式施用，包括但不限于作为免洗型霜、面膜和/或精华素。
在某些优选的实施方案中，本发明的方法包括向皮肤施用至少两种不同的包含异常毕赤酵母提取物和视黄醇的组合物或产品。例如，该方法可包括向需要处理的皮肤施用包含异常毕赤酵母的提取物的第一组合物，随后向需要处理的皮肤施用不同于第一组合物的包含视黄醇的第二组合物。
在某些优选的实施方案中，第一和第二组合物可独立地选自洗剂、清洁剂、面膜、擦拭物、霜膏、精华素、凝胶等等。在某些优选的实施方案中，第一和第二组合物中的至少一者为清洁剂、洗剂、霜膏、精华液或精华素，而另一种为面膜或擦拭物。在某些其它优选实施方案中，第一种和第二组合物中的至少一者为清洁剂，而另一种为洗剂或霜膏。
含有本发明的此类组合物的组合物和制剂以及产品可以利用本领域普通技术人员熟知的方法来制备。这些组合物可用于处理老化的皮肤，诸如皱纹、弹性损失、肤色不均，包括减少斑点。组合物可基于常规使用且基本上无皮肤刺激。
以下非限制性实施例另外说明本发明。
实施例1
在用含有不同量的异常毕赤酵母提取物的测试组合物1-4处理它们之后，如下测定人皮肤外植体产生的透明质酸(HA)。
首先，制备含有以下成分的凝胶：
Figure BDA0002184002400000191
通过将2重量％的凝胶与不同量的5％的异常毕赤酵母提取物的水性溶液连同另外的成分组合来制备组合物1-4。异常毕赤酵母已经生长在猕猴桃植物上。将5％的水性溶液作为100％的原液处理。
组合物1-4含有表1中所示的成分。
表1
Figure BDA0002184002400000192
使用免疫组织学对来自三个供体(29、30、55岁)的人皮肤正常外植体测定组合物1-4的HA产生。从外植体切下八毫米直径的冲头并将其沉积在无菌纱布片上，并以每孔一个外植体的方式放置在具有3mL培养基的六个孔板中。培养基以商品名GIBCO DMEM/F-12(ThermoFisher Scientific(Waltham,MA)，目录号11514436)出售，其具有1％的GIBCO青霉素-链霉素(ThermoFisher Scientific，目录号11528876)和以商品名FUNGIZONE(ThermoFisher Scientific，目录号11510496)出售的0.1％的两性霉素B。
对于每个测试组合物，将5μL的测试组合物每天一次施用到外植体，施用5天。使用未处理的外植体样品作为对照物。在第7天，回收外植体，用无菌纱布擦拭，然后垂直切成两半并固定在4％的多聚甲醛(V/V)中。在第8天，将外植体脱水并包埋在石蜡中。每种测试组合物以一式三份进行测试。
用二甲苯剥离石蜡切片，并且用PT link(Agilent,Santa Clara,CA)和目标修复溶液进行表位修复，该目标修复溶液以商品名ENVISION Flex,High pH(Dako,DM828,Agilent,Santa Clara,CA)出售。然后用以商品名ENVISION(Dako,DM831,Agilent,SantaClara,CA)出售的洗涤缓冲液冲洗切片一次，持续10分钟。用PBS 0.3％Triton/5％山羊血清(Dako,Santa Clara,CA，目录号CP3418/X090710-8)进行渗透和饱和30分钟，然后用透明质酸结合蛋白(“HAPB”，得自Calbiochem，目录号385911,Millipore Sigma,St.Louis,NJ)在4℃下过夜。第二天用PBS冲切片三次，每次持续5分钟。使用生物素结合蛋白揭示抗体，该生物素结合蛋白共价连接到以商品名ALEXA FLUOR 488链霉亲和素(InvitrogenTM，目录号S11223)出售的荧光标记物，并且用DAPI溶液(Dako,Santa Clara,CA)在环境温度下以5μg/ml进行细胞核染色30分钟。然后用PBS冲洗切片并用Fluoprep封固剂(bioMerieux UKLtd.,UK目录号75521)固定。
用与图像分析系统(NIS-Elements AR software,Nikon Instruments,Melville,NY)连接的Olympus IX70荧光显微镜(Olympus Corporation,Japan)拍摄皮肤切片的图片。使用ImageJ软件对图像进行定量分析。
结果如表2所示。结果表示为真皮的平均荧光强度(以任意单位(AU)表示)。荧光强度(绿色)与HABP的合成成比例。
表2
Figure BDA0002184002400000211
这些结果表明，使用约0.13重量％的异常毕赤酵母提取物获得皮肤产生的最大HA。超过该量，HA的产生趋于平稳。
实施例2
在用四种测试组合物处理它们之后测定人皮肤外植体的透明质酸(HA)产生：根据本发明的实施例1中描述的组合物2(含有异常毕赤酵母提取物)、组合物5(含有视黄醇)和组合物6和7(含有两者)。
组合物5含有0.1重量％的视黄醇和表3中所示的其它成分。
表3：组合物5
Figure BDA0002184002400000212
Figure BDA0002184002400000221
组合物5按照如下方式制备。去除聚山梨酸酯20；取出冷藏的视黄醇。将其置于50℃烘箱中直至融化。抗坏血酸预混物：使抗坏血酸与2％水混合，并调节至pH约5。将其置于一边以在40℃下进行后添加。主相：添加水(对于抗坏血酸预混物-2％)并开始混合直至均匀。然后加入乙二胺四乙酸二钠。在高混合下加入丙烯酰二甲基牛磺酸钠/VP交联聚合物。在继续之前，确保均匀/完全水合。开始加热至目标73℃。加入甘油和丁二醇。在65℃以上加入辛乙二醇、氯苯甘油醚、苯氧基乙醇和透明质酸钠。油相：添加了异十六烷、PPG 15硬脂基醚、季戊四醇四乙基己酸酯、聚二甲基硅氧烷；聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚二甲基硅氧烷；三硅氧烷；聚二甲基硅氧烷；聚二甲基硅氧烷硬脂醇；鲸蜡硬脂醇聚醚-20和鲸蜡醇；鲸蜡硬脂醇聚醚-20。混合时加热至目标73℃。乳化前5分钟加入BHT。乳化：当主相和油相为约73℃时，将油相缓慢加入水相中。混合10-15分钟，然后加入聚丙烯酰胺；月桂基聚氧乙烯醚-7；C13-14异链烷烃。匀化(Silverson，4000RPM)1分钟。在持续混合下开始冷却。后加入：在40℃或更低温度下加入聚乙烯；PTFE和预混物1(抗坏血酸)。测得pH，并且调节至6.5-6.8的目标pH。在黄光和氩气下，在50℃下加入视黄醇，并且充分混合10-15分钟。允许冷却至30-35℃。
以与组合物5相同的方式制备组合物6和7，不同的是在预混合抗坏血酸之后分别加入2.5重量％或5重量％的实施例1中所述的5％异常毕赤酵母提取物的溶液，以及调节了QS的水量。
使用免疫组织学以如下方式测定HA产生。腹部皮肤样本得自经历腹部整形手术的成人。从每位患者获得了知情同意，并且所有实验步骤均得到了机构审查委员会(IRB)的批准。小心地去除皮下脂肪，在无菌条件下制备0.93cm2的皮肤活组织检查物，并在培养基DMEM/F12(1:1)(Thermofisher Scientific,Bridgewater,NJ，目录号11320082)中适应，用2％热灭活的胎牛血清(Thermofisher Scientific,Bridgewater,NJ，目录号A3840202)、10μg/mL胰岛素(Sigma Aldrich,Allentown,PA，目录号I0516-5ML)、10ng/mL氢化可的松(Sigma Aldrich,Allentown,PA，目录号H 0135)、10ng/mL EGF(Sigma Aldrich,Allentown,PA，目录号11376454001)、1x ABAM(Thermofisher Scientific,Bridgewater,NJ，目录号15240062)，在5％CO2湿润气氛下过夜。
每天用4μl测试组合物局部处理外植体5天。使用未处理的外植体样品作为对照物。在第6天，收集组织。将收集的组织在缓冲的福尔马林中固定24小时。固定后，使用LeicaTP 1020脱水自动机(Leica Biosystems,Buffalo Grove,IL)将样品脱水并浸渍在石蜡中。使用Leica EG 1160包埋站(Leica Biosystems)包埋样品。使用Leica RM 2125Minot型切片机(Leica Biosystems)实现5μm厚的切片，并将切片安装在以商品名SUPERFROST销售的组织玻璃载玻片上。使用Leica DMLB(Leica Biosystems)或Olympus BX43显微镜(OlympusCorporation,Japan)实现显微镜观察。使用具有CellD存储软件的数字DP72 Olympus相机(Olympus Corporation,Japan)将图片数字化。使用在PBS-BSA 0.3％中以1:100在室温下稀释1小时的生物素酰化HABP(AMS Biotechnology Limited,Abingdon,UK，产品代码AMS.HKD.BC41)在石蜡化切片上进行透明质酸染色，使用链霉亲和素/生物素系统进行增强并且使用以商标Vector VIP(Vector Laboratories,Burlingame CA，目录号SK-4600)销售的过氧化物酶底物进行显示。通过显微镜观察来评估染色。
结果如表4所示。
表4
Figure BDA0002184002400000231
与仅含有视黄醇的组合物5或仅含有异常毕赤酵母提取物的组合物2相比，用含有根据本发明的异常毕赤酵母提取物和视黄醇的组合的组合物6和7处理组织外植体提供了增加的HA产生。
此外，含有0.1％视黄醇和0.13重量％异常毕赤酵母提取物的组合物7提供的HAPB增加百分比比未处理的高72.39，而含有0.13重量％异常毕赤酵母提取物的组合物2提供的增加百分比仅比未处理的高40.90，并且含有0.1重量％视黄醇的组合物5提供的增加百分比仅比未处理的高42.48。
实施例3
测定以下物质中肝素结合表皮生长因子(HBEGF)、透明质酸合成酶2(HAS 2)和CD44的基因表达：组合物5(0.1重量％视黄醇)、实施例1中描述的5％异常毕赤酵母的提取物的溶液、以及组合物5和5％异常毕赤酵母的提取物的溶液的组合施用。
首先，腹部皮肤样本得自经历腹部整形手术的成人。从每位患者获得了知情同意，并且所有实验步骤均得到了机构审查委员会(IRB)的批准。小心地去除皮下脂肪，在无菌条件下制备0.93cm2的皮肤活组织检查物，并在以商品名KGM-GOLD BULLETKIT(Lonza,Walkersville,MD)销售的角质细胞生长培养基中适应，用10％抗生素在5％CO2湿润气氛下过夜。
用4μL各种制剂局部处理皮肤外植体并孵育48小时。使用未处理的外植体样品作为对照物。在组合施用组合物5和5％异常毕赤酵母提取物的溶液的情况下，施用4μL的每一种。在48小时结束时，通过加热分离表皮和真皮。将它们各自在400μL裂解缓冲液中裂解，该缓冲液由100份RLT缓冲液(RNeasy Mini kit,Qiagen,Valencia,CA)组成，然后将其放入具有螺帽和O形环封闭物的加强管内，管中具有单组分2-巯基乙醇和用于组织研磨的陶瓷小珠(以商品名PRECELLYS CKMix50-R销售，Bertin Corp,Rockville,MD)。将管以6300rpm摇动40秒。使用RNeasy Mini Kit(Qiagen,Valencia,CA)根据制造商的说明从溶液中提取RNA，并在25μL不含RNase的水中洗脱RNA。使用Applied Biosystems High CapacityReverse Transcription Kit(ThermoFisher Scientific,Bridgewater,NJ)进行逆转录(RT)。
基于SyBR green方法，通过实时定量聚合酶链反应(PCR)进行基因表达测定。qPCR在以商品名CFX96 TOUCH(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA)销售的实时PCR系统上运行。将这些基因的表达相对于人RNA 18S管家基因的表达进行归一化。与未处理的对照物进行比较来计算倍数变化，并进行ANOVA统计测试。
结果示于表5、6和7中。
表5
Figure BDA0002184002400000251
与单独施用视黄醇(291)导致的HBEGF表达相比，施用视黄醇和异常毕赤酵母提取物的组合导致HBEGF表达(494)的意外提高。这几乎增加了70％。
表6
Figure BDA0002184002400000252
与单独施用视黄醇和单独施用异常毕赤酵母提取物的预期添加结果(22)相比，施用视黄醇和异常毕赤酵母提取物的组合导致HAS 2表达的刺激(37)意外增加几乎70％。
表7
Figure BDA0002184002400000261
与单独施用视黄醇和单独施用异常毕赤酵母提取物的预期添加结果(20)相比，施用视黄醇和异常毕赤酵母提取物的组合导致CD44表达的意外刺激(65)。这增加了225％。

Claims (11)

1.一种局部用组合物，所述局部用组合物包含异常毕赤酵母的提取物和视黄醇，其中所述局部用组合物中的所述异常毕赤酵母的提取物与视黄醇的重量比为约1.3。
2.根据权利要求1所述的局部用组合物，其中所述异常毕赤酵母的提取物由存在于猕猴桃果实或叶上的异常毕赤酵母的菌株制备。
3.根据权利要求1所述的局部用组合物，其中所述异常毕赤酵母的提取物由存在于甘蔗上的异常毕赤酵母的菌株制备。
4.根据权利要求1所述的局部用组合物，所述局部用组合物还包含至少10重量％的甘油。
5.根据权利要求1所述的局部用组合物，所述局部用组合物具有6.5或更小的pH。
6.一种非治疗目的的处理皮肤老化的迹象的方法，所述方法包括向需要处理皮肤老化的皮肤局部施用如权利要求1所述的局部用组合物。
7.一种非治疗目的的改善皮肤屏障功能和保湿性的方法，所述方法包括向需要改善皮肤屏障功能和保湿性的皮肤局部施用如权利要求1所述的局部用组合物。
8.一种非治疗目的的当与异常毕赤酵母的提取物接触时增加由皮肤产生的透明质酸的量的方法，所述方法包括使所述皮肤与如权利要求1所述的局部组合物接触。
9.根据权利要求1所述的组合物在制备用于处理皮肤老化的迹象的药物中的应用。
10.根据权利要求1所述的组合物在制备用于改善皮肤屏障功能和保湿性的药物中的应用。
11.根据权利要求1所述的组合物在制备用于当与异常毕赤酵母的提取物接触时增加由皮肤产生的透明质酸的量的药物中的应用。
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