CN112210552B - 一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球及其制备方法，配方按照质量份数包括：明胶26‑42份，季铵化壳聚糖18‑34份，卵磷脂2‑6份，海藻酸钠16‑28份，磁性纳米粒子0.6‑1.2份，无水乙醇80‑160份，葡萄糖氧化酶20‑30份，脱氢酶10‑20份，邻联苯甲胺10‑20份，表面活性剂9‑15份，Tris缓冲液60‑120份；制备方法将每个试剂都单独用微球聚合物壳层基材进行包裹，这样试剂即使运输条件多么的苛刻都能够维持试剂的稳定性，和酶的活性，延长检测试剂的存放时间，提高检测准确率。

Description

一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球及其制备方法
技术领域
本发明涉及检测试剂领域，特别是一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球及其制备方法。
背景技术
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。
市场上检测糖尿病的方式一般有九种，1，血糖；2，尿糖；3尿酮体；4糖基化血红蛋白(HbA1c)；5糖化血清蛋白；6血清胰岛素和C肽水平；7血脂；8免疫指标；9尿白蛋白排泄量，放免或酶联方法。
其中第九种方法尿白蛋白排泄量，用酶联的方法可灵敏地检出尿白蛋白排出量，尿糖检测法是最为方便，成本最为低廉；但是尿检的准确性不高，因为试剂在传输过程中稳定性低，市场上的检测试剂存放时间越长，颜色变化不明显，准确性越低，这样就需要检测机构不停的购入新的检测试剂用于检测，提高成本，降低检测质量；市场需要一种能增强检测试剂稳定性的方法，提高检测试剂的保存时限，降低保存要求。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球及其制备方法，能够提高检测试剂稳定性，延长检测试剂的存放时间，提高检测准确率。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，包括：配方包括：
明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，磁性纳米粒子0.6-1.2份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份。
前述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，表面活性剂包括：吐温80，吐温20。
前述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，磁性纳米粒子包括：氧化铁纳米粒子，超顺磁氧化铁纳米颗粒。
一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，包括如下步骤：
按照配方准备材料；
配方包括：明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，浓度为100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份；
制作葡萄糖氧化酶磁性纳米微球：
步骤1，微球聚合物壳层基材：
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤2，微球聚合物芯层溶液：
将葡萄糖氧化酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤3，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到葡萄糖氧化酶磁性纳米微球；
制作脱氢酶磁性纳米微球：
步骤a，微球聚合物壳层基材：
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤b，微球聚合物芯层溶液：
将脱氢酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤c，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到脱氢酶氧化酶磁性纳米微球；
制作邻联苯甲胺磁性纳米微球：
步骤A，
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤B，微球聚合物芯层溶液：
将邻联苯甲胺和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤C，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到邻联苯甲胺氧化酶磁性纳米微球；
将葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球按照4-6:2-4:4-6的体积比混合得到葡萄糖检测试剂磁性纳米微球。
前述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，
微球聚合物壳层基材的具体制备方法为：将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌，将季铵化壳聚糖加入明胶溶液中搅拌，再搅拌加入卵磷脂，再搅拌加入海藻酸钠，再加入磁性纳米粒子搅拌均匀，最后加入无水乙醇，在温度20～70℃的温度下搅拌溶解，在0.08～0.10MPa的真空度下脱泡，熟化，得到聚合物壳层基材。
前述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球按照5:3:5的体积比混合得到葡萄糖检测试剂磁性纳米微球。
前述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括：将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内，放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.2-1.4mm，溶液流速为7-12ml/h，放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.5～0.7mm，溶液流速为1.2～2.8ml/h，喷注电压为18-26kv，喷涂距离为3-12cm；喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。
本发明的有益之处在于：
本发明将每个试剂都单独用微球聚合物壳层基材进行包裹，这样试剂即使运输条件多么的苛刻都能够维持试剂的稳定性，和酶的活性，延长检测试剂的存放时间，提高检测准确率；
本发明的微球聚合物壳层基材采用的配方搭配磁性纳米粒子，这样使得搭载各个试剂的微球在使用时能够快速的凝聚在一起，提高溶解速度，提高检测速度。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，包括：配方包括：
明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，磁性纳米粒子0.6-1.2份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份。作为一种实施例，表面活性剂包括：吐温80，吐温20。作为一种实施例，磁性纳米粒子包括：氧化铁纳米粒子，超顺磁氧化铁纳米颗粒；需要说明的是磁性纳米粒子的种类不受限制，都可以应用于本配方。
一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，包括如下步骤：
按照配方准备材料；
配方包括：明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，浓度为100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份；
制作葡萄糖氧化酶磁性纳米微球：
步骤1，微球聚合物壳层基材：
将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌，将季铵化壳聚糖加入明胶溶液中搅拌，再搅拌加入卵磷脂，再搅拌加入海藻酸钠，再加入磁性纳米粒子搅拌均匀，最后加入无水乙醇，在温度20～70℃的温度下搅拌溶解，在0.08～0.10MPa的真空度下脱泡，熟化，得到聚合物壳层基材。
步骤2，微球聚合物芯层溶液：
将葡萄糖氧化酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤3，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到葡萄糖氧化酶磁性纳米微球；使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括：将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内，放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.2-1.4mm，溶液流速为7-12ml/h，放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.5～0.7mm，溶液流速为1.2～2.8ml/h，喷注电压为18-26kv，喷涂距离为3-12cm；喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。
制作脱氢酶磁性纳米微球：
步骤a，微球聚合物壳层基材：
微球聚合物壳层基材的具体制备方法为：将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌，将季铵化壳聚糖加入明胶溶液中搅拌，再搅拌加入卵磷脂，再搅拌加入海藻酸钠，再加入磁性纳米粒子搅拌均匀，最后加入无水乙醇，在温度20～70℃的温度下搅拌溶解，在0.08～0.10MPa的真空度下脱泡，熟化，得到聚合物壳层基材。
步骤b，微球聚合物芯层溶液：
将脱氢酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤c，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到脱氢酶氧化酶磁性纳米微球；使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括：将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内，放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.2-1.4mm，溶液流速为7-12ml/h，放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.5～0.7mm，溶液流速为1.2～2.8ml/h，喷注电压为18-26kv，喷涂距离为3-12cm；喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。
制作邻联苯甲胺磁性纳米微球：
步骤A，
微球聚合物壳层基材的具体制备方法为：将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌，将季铵化壳聚糖加入明胶溶液中搅拌，再搅拌加入卵磷脂，再搅拌加入海藻酸钠，再加入磁性纳米粒子搅拌均匀，最后加入无水乙醇，在温度20～70℃的温度下搅拌溶解，在0.08～0.10MPa的真空度下脱泡，熟化，得到聚合物壳层基材。
步骤B，微球聚合物芯层溶液：
将邻联苯甲胺和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤C，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到邻联苯甲胺氧化酶磁性纳米微球；使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括：将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内，放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.2-1.4mm，溶液流速为7-12ml/h，放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.5～0.7mm，溶液流速为1.2～2.8ml/h，喷注电压为18-26kv，喷涂距离为3-12cm；喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。
将葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球按照4-6:2-4:4-6的体积比混合得到葡萄糖检测试剂磁性纳米微球。作为一种优选，葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球混合的体积比为5:3:5。
以下进行实验验证本发明的检测试剂经过苛刻的环境也能维持试剂的稳定性，和酶的活性，延长检测试剂的存放时间，提高检测准确率。
实施例1：明胶26g，季铵化壳聚糖22g，卵磷脂2g，海藻酸钠16g，氧化铁纳米粒子0.6g，无水乙醇90g，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶24g，浓度为300-400U/L的脱氢酶14g，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺16g，吐温80 11g，100-140mmol/L Tris缓冲液60g。
实施例2：明胶34g，季铵化壳聚糖34g，卵磷脂6g，海藻酸钠28g，氧化铁纳米粒子0.9g，无水乙醇120g，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20g，浓度为300-400U/L的脱氢酶15g，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺15g，吐温80 12g，100-140mmol/L Tris缓冲液80g。
实施例3：明胶42g，季铵化壳聚糖18g，卵磷脂4g，海藻酸钠22g，氧化铁纳米粒子1.2g，无水乙醇160g，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶30g，浓度为300-400U/L的脱氢酶20g，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺20g，吐温80 15g，100-140mmol/L Tris缓冲液120g。
对比实施例配方包括：使用浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30g，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20g，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20g，表面活性剂9-15g，100-140mmol/L Tris缓冲液60-120g。配置成对比样品1。
将实施例1-3按照如上的方法葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球混合的体积比为5:3:5制成样品1-3。
实验一：环境耐受实验：
取6g样品1-3放入密封试管内经过30天模拟日晒实验，摇晃实验；
取对比样品1放入密封试管内经过相同的30天模拟日晒实验，摇晃实验；
30天后，将6g实施例2样品标为样品4；取用对比实施例的配方配制的作为对比样品2；
样品1-4用58摄氏度的乙醇溶液溶解待用；
将两滴葡萄糖溶液分别滴入样品1-4和对比样品1-2中观察变色情况；
变色速度 变色明显程度
试验样品1 快 明显
试验样品2 快 明显
试验样品3 快 明显
试验样品4 快 明显
对比样品1 慢 不明显
对比样品2 快 明显
由样品1-3和样品4对比可知：本发明采用的方式经过苛刻的环境后依然能够保持检测活性，无论是变色速度还是变色的明显程度都很好，对比对比样品1和对比样品2可知，新配置的对比样品的灵敏度很好，而对比样品1经过长时间苛刻的环境灵敏程度已经降低；本发明的产品具有环境耐受能力，经过长时间的苛刻环境也能保持稳定性和灵敏性。本发明的微球聚合物壳层基材采用的配方搭配磁性纳米粒子，这样使得搭载各个试剂的微球在使用时能够快速的凝聚在一起，提高了溶解速度，不会影响检测速度。
实验二：精确度实验；
取合作医院的患者尿液和健康者尿液；
取实验一的试验样品1-4和对比样品1-2分别检测微量超标患者尿液，大量超标患者尿液和健康者尿液，实验结果如下：
Figure BDA0002703936330000061
Figure BDA0002703936330000071
由以上结果可知，只有对比样品1的结果与医院检查结果不一致，所以本发明的方法在经过长时间苛刻的环境后仍然能够保持检测的精确度。
本发明将每个试剂都单独用微球聚合物壳层基材进行包裹，这样试剂即使运输条件多么的苛刻都能够维持试剂的稳定性，和酶的活性，延长检测试剂的存放时间，提高检测准确率；本发明的微球聚合物壳层基材采用的配方搭配磁性纳米粒子，这样使得搭载各个试剂的微球在使用时能够快速的凝聚在一起，提高溶解速度，提高检测速度。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，其特征在于，包括：按重量计配方包括：
明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，磁性纳米粒子0.6-1.2份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份。
2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，其特征在于，所述表面活性剂包括：吐温80，吐温20。
3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球，其特征在于，所述磁性纳米粒子包括：氧化铁纳米粒子，超顺磁氧化铁纳米颗粒。
4.一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
按照配方准备材料；
配方按重量计包括：明胶26-42份，季铵化壳聚糖18-34份，卵磷脂2-6份，海藻酸钠16-28份，无水乙醇80-160份，浓度为7000-8000U/L的葡萄糖氧化酶20-30份，浓度为300-400U/L的脱氢酶10-20份，浓度为6-8.0mmol/L的邻联苯甲胺10-20份，表面活性剂9-15份，浓度为100-140mmol/L Tris缓冲液60-120份；
制作葡萄糖氧化酶磁性纳米微球：
步骤1，微球聚合物壳层基材：
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤2，微球聚合物芯层溶液：
将葡萄糖氧化酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤3，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到葡萄糖氧化酶磁性纳米微球；
制作脱氢酶磁性纳米微球：
步骤a，微球聚合物壳层基材：
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤b，微球聚合物芯层溶液：
将脱氢酶和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤c，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到脱氢酶氧化酶磁性纳米微球；
制作邻联苯甲胺磁性纳米微球：
步骤A，
将明胶、季铵化壳聚糖、卵磷脂、海藻酸钠、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌，脱泡，熟化后得到聚合物壳层基材；
步骤B，微球聚合物芯层溶液：
将邻联苯甲胺和3-5份表面活性剂，20-60份100-140mmol/L Tris缓冲液混合；
步骤C，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到邻联苯甲胺氧化酶磁性纳米微球；
将葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球按照4-6:2-4:4-6的体积比混合得到葡萄糖检测试剂磁性纳米微球。
5.根据权利要求4所述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，其特征在于，
微球聚合物壳层基材的具体制备方法为：将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌，将季铵化壳聚糖加入明胶溶液中搅拌，再搅拌加入卵磷脂，在搅拌加入海藻酸钠，再加入磁性纳米粒子搅拌均匀，最后加入无水乙醇，在温度20～70℃的温度下搅拌溶解，在0.08～0.10MPa的真空度下脱泡，熟化，得到聚合物壳层基材。
6.根据权利要求4所述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶磁性纳米微球，脱氢酶磁性纳米微球，邻联苯甲胺磁性纳米微球按照5:3:5的体积比混合得到葡萄糖检测试剂磁性纳米微球。
7.根据权利要求4所述的一种葡萄糖检测试剂磁性纳米微球的制备方法，其特征在于，使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括：将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内，放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.2-1.4mm，溶液流速为7-12ml/h，放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.5～0.7mm，溶液流速为1.2～2.8ml/h，喷注电压为18-26kv，喷涂距离为3-12cm；喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。
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CN105950606B (zh) * 2016-07-13 2019-03-01 北京化工大学 一种温控型相变材料微胶囊载体固定化酶及其制备方法
CN107855080B (zh) * 2017-10-30 2020-09-08 中国科学院过程工程研究所 高分子凝胶颗粒、其制备方法、包含其的复合凝胶颗粒及用途

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