CN112760194B - 一种封闭式简易rna核酸提取装置及其制备方法和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置,包括内层结构和外层结构,所述内层结构包括提取仓、单向进液管、单向排液管、多个试剂的储存管和放置于提取仓内的磁珠,所述外层结构包括装置外壳。本发明设计一种封闭的简易核酸提取装置,使得提取反应体系与外环境完全隔离。本发明还提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置的制备方法和使用方法。本发明将封闭式的核酸提取设备,使得核酸提取能完全脱离大型仪器设备,实现边采样边提取的现场检测目标。
Description
技术领域
本发明涉及环境中RNA核酸提取与现场检测领域,具体涉及一种封闭式简易RNA核酸提取装置。本发明还涉及一种封闭式简易RNA核酸提取装置的制备方法。本发明还涉及一种封闭式简易RNA核酸提取装置的使用方法。
技术背景
由于新型冠状病毒的高度传染性,样品采集、运输、前处理、提取和核酸检测过程都极易污染环境,导致工作人员感染,因此对于新型冠状病毒的疫情防控和检测工作要求依照三级防护标准进行。对于样本采集、运输、提取和检测制定了相关规范和实施细则。因此新冠核酸检测对于实验室要求较高,且要求采用全自动仪器进行提取,避免人为提取导致的意外感染。PCR检测的靶基因为新冠病毒的ORF1ab基因及核衣壳蛋白N,当出现双基因阳性后判断样本检出新冠病毒。但是实际检测过程中患者病程具有不可预测性,一旦采样时间段不在病人的病毒排毒期就可能导致采集不到病毒样本。此外样本采集管的质量将影响病毒采样管缓冲液对病毒保护效果,导致病毒运输过程中出现部分降解。同时样本运输条件比较苛刻,病毒采集管需要放置在较低温度下以便保证样本中病毒的完整性。最后样本的提取和检测过程中存在的操作不规范和试剂不稳定也直接影响检测结果。
综上所述,采用常规PCR法检测新型冠状病毒,受到大量客观因素的影响制约,必须进行反复复检并辅助以抗体检测等方式来确诊新冠。然而抗体检测的敏感度较低,只有较高浓度抗体才能与检测试剂结合,出现阳性反应。相比之下,核酸检测具有其高灵敏度的特征,但常规的PCR检测方法高度依赖实验室大型仪器设备,且需要对核酸进行高纯度提取,无法满足现场检测需要。
现有核酸检测在对核酸进行提取时,设备较为复杂,且无法确保在核酸提取过程中的生物安全问题。
发明内容
针对现有的技术问题,本发明拟希望解决RPA现场检测新型冠状病毒的技术难关。设计一种封闭的简易核酸提取装置及其制备方法和使用方法,使得提取反应体系与外环境完全隔离,同时该装置结构简单便于携带,可进行随地采样提取。
本发明提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置,包括提取结构、存储结构、磁性结构和驱动结构,
所述提取结构包括提取仓、与所述提取仓连通的单向进液管、与所述提取仓连通的单向排液管以及与单向进液管、单向排液管远离提取仓的一端均连通的吸取口;
所述存储结构包括多个与所述提取仓连通且用于存储反应试剂的储存管;
所述磁性结构包括置于所述提取仓内的磁珠和用于控制所述磁珠的磁性环;
所述驱动结构包括驱动所述提取结构通过所述吸取口提取液体或排除液体的第一驱动组件、驱动所述存储结构将反应试剂送入所述提取仓内的第二驱动组件;
其中,所述磁珠的直径大于所述单向进液管、所述单向排液管的直径,所述提取结构的吸取口设有密封件,所述封闭式简易RNA核酸提取装置呈针筒状。
进一步的,所述封闭式简易RNA核酸提取装置包括外层结构和内层结构;
所述内层结构包括所述提取结构、设于所述提取仓的尾端的所述第一驱动组件、环绕布置在所述提取仓外的多个储存管、以及设于所述储存管尾端的所述第二驱动组件;
所述外层结构包括套设在所述内层结构外的装置外壳、用于可拆卸设置在所述吸取口处的密封件、以及可滑动套设在所述装置外壳上用于控制所述提取仓内的所述磁珠的所述磁性环,其中,所述装置外壳的下端与所述提取结构固定连接。
进一步的,所述提取仓呈U型,所述单向排液管设于所述提取仓下方且与其底端连通,所述单向排液管的出液口与所述单向进液管的进液口连通,所述单向进液管倾斜设于所述单向排液管一侧,且所述单向进液管的出液口延伸至所述提取仓内并高于所述单向出液管的进液口。
进一步的,所述提取结构还包括包裹在所述单向排液管和所述单向进液管外的倒锥形,所述倒锥形的宽端与所述提取仓的底端外表面连接,所述倒锥形的窄端与所述吸取口固定连接。
进一步的,所述单向进液管、所述单向排液管内分别设置有三个单向阀。
进一步的,所述提取结构还包括设于所述单向排液管的进液口处且用于控制所述进液口开启或闭合的锁扣结构。
进一步的,所述锁扣结构包括中心轴、阀门和拉环,所述阀门为圆片状结构,其尺寸与单向排液管内径匹配,所述中心轴一端穿过单向排液管与单向排液管内的阀门固定连接,另一端固定连接单向排液管外的拉环,旋转拉环通过中心轴带动阀门旋转,实现单向排液管的启闭。
进一步的,所述存储结构包括四个轴向与所述提取仓平行且连通的储存管,分别为裂解液储存管、RNA保护液储存管、中和液储存管和洗脱液储存管,所述储存管的出口处设有单向硅胶阀门;所述第二驱动组件包括四个与所述储存管一一对应设置的储存管活塞,所述储存管在所述储存管活塞的作用下将存储的试剂排入所述提取仓内。
进一步的,所述磁性结构还包括对所述磁性环的滑动进行导向的导向结构;所述导向结构包括至少两个在所述装置外壳的外表面均布的移动导轨,所述移动导轨的长度方向与所述装置外壳的轴向一致。
进一步的,所述第一驱动组件包括主活塞、活塞杆和活塞帽,所述活塞杆一端与主活塞固定连接,另一端与活塞帽固定连接。
本发明还提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置的使用方法,包括以下步骤:
A1、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓通过吸取口提取样本后,密封件密封吸取口;
A2、通过移动磁性环解除磁珠吸附状态,磁珠沉于提取仓底部,通过第二驱动组件将储存管内的裂解液和RNA保护液送入提取仓内,充分震荡后垂直静置裂解;
A3、通过移动磁性环吸附磁珠并置于提取仓中部,通过第二驱动组件将储存管内的中和液送入提取仓内,并混合均匀;
A4、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓通过吸取口排出混合液,提取仓在第一驱动组件的作用下通过吸取口吸取70%乙醇,至确保乙醇浸没磁珠,密封件密封吸取口后振摇或晃动;
A5、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓通过吸取口排出乙醇洗涤液,密封件密封吸取口;
A6、通过移动磁性环解除磁珠吸附状态,磁珠沉于提取仓底部,通过第二驱动组件将储存管内的洗脱液送入提取仓内,振摇或震荡后静置,即完成核酸提取工作。
进一步的,步骤A2中充分振荡的时间为1-3分钟,垂直静置的时间为10min;步骤A4中振摇或晃动的时间为1-3分钟;步骤A5中需重复操作确保乙醇洗涤液排尽,每次操作间隔时间为5分钟;步骤A6中振摇或震荡时间为1-3分钟,静置时间为1分钟。
本发明还提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置的制备方法,包括以下步骤:
S1、制备两根玻璃管,分别为单向进液管和单向排液管,单向进液管比单向排液管长3cm,单向进液管和单向排液管中分别放置3个单向阀,在单向排液管上安装一个锁扣结构;
S2、制备提取仓,制作圆柱瓶状的提取仓,安装单向进液管和单向排液管,单向进液管和单向排液管一端与提取仓下端连通,另一端两者汇合连通吸取口,单向进液管伸入圆柱瓶状的提取仓3cm,且紧贴圆柱瓶状的瓶壁,安装时确保单向进液管内单向阀的开启方向为由外至提取仓内,单向排液管内单向阀的开启方向为由提取仓内至外,圆柱瓶状的瓶外制备4个存储反应试剂的储存管,储存管下端弯曲与圆柱瓶状的提取仓烧制并连通,4个储存管内分别放置裂解液、RNA保护液、中和液和洗脱液,试剂参数如下:
裂解液:0.1M NaOH,50μL CHCl3,50μL异硫氰酸胍,总体积为500μL;
RNA保护液:200μL纯度为100%的RNAstable LD;
中和液:0.1M NaAC 500μL;
洗脱液:含RNA酶抑制剂Murine 1~3U/μL的超纯水50μL;
S3、安装磁珠、第一驱动组件和储存管活塞,磁珠放置于提取仓内,储存管活塞安装于储存管上端,第一驱动组件安装于提取仓上端,其中第一驱动组件包括主活塞、与主活塞中心连接的活塞杆以及与活塞杆连接的活塞帽;
S4、制备装置外壳和安装磁性环,将装置外壳按照上部分圆柱形和下部分圆锥形拼接起来,将提取仓、储存管、单向进液管和单向排液管包裹起来,装置外壳上端与提取仓上缘固定,根据第一驱动组件和储存管活塞位置打孔,将圆环状的磁性环滑动套接在装置外壳外侧,在吸取口上套上密封件,完全包裹尖端,以保证体系密封。
本发明的有益效果是:
1、本发明通过提取结构、存储结构、磁性结构和驱动结构的设置,使得提取装置结构简单,使用简便,无污染,能与三级生物安全防护管理有效结合起来,可以简化RNA核酸提取方法,另外通过相互之间密封连接的设置,能够避免生物安全问题,实现随采随提取的目标,同时可以满足没有大型设备支持的隔离区环境或野外样本的现场提取工作。
2、本发明通过内、外两层结构的设置,能够确保提取装置的密封性能,确保提取过程中的安全。
3、本发明通过单向进液管高于单向排液管的设置,有助于避免提取过程中洗液生物污染;通过单向阀的设置,可以保证装置的密封性;通过分开设置的多个储存管,能够确保反应试剂的安全;通过导向结构的设置,可以方便磁性环的滑动,使得提取过程更加便捷。
附图说明
图1为本发明简易RNA核酸提取装置结构透视图。
图2为本发明储存管安装示意图。
图3为本发明储存管活塞下滑运动示意图。
图4为本发明锁扣结构开启和封闭单向排液管的示意图。
图5为本发明单向排液管和单向进液管内单向阀剖面图。
图6为图1中不带活塞帽的俯视图。
图7为本发明导向结构结构示意图。
附图标记:1、吸取口;2、装置外壳;3、单向进液管;4、单向排液管;5、单向阀;6、锁扣结构;7、提取仓;8、磁珠;9、储存管;10、主活塞;11、磁性环;12、储存管活塞;13、活塞杆;14、活塞帽;15、移动导轨;16、磁铁卡口;17、固定线圈;18、外壳卡槽。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域的技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明的保护范围。
实施例1
本发明提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置,如图1所示,因此装置设计为多层结构,包括内层结构和外层结构,内层结构分为上中下三个部分:中层为圆柱状的提取仓7和提取仓7外侧设计4个小圆柱体的储存管9,从上往下看4个储存管9沿顺时针方向依次标记为A、B、C、D,如图6所示,其中A储存管9内放置裂解液,B储存管9内放置RNA保护液,C储存管9内放置中和液,D储存管9内放置洗脱液,储存管9下缘设计有一处平滑颈部,在平滑颈部狭窄处设有单向硅胶阀门,保证试剂无法自然流动,储存管9下端与提取仓7直接连通;上层为位于中央的第一驱动组件和第二驱动组件,第二驱动组件包括分散在周围4个方向的储存管活塞12,所述第一驱动组件滑动安装于提取仓7上端,所述第一驱动组件沿提取仓7内壁自由移动,所述储存管活塞12滑动安装于储存管9上端,且沿储存管9内壁自由移动,通过下滑第一驱动组件和储存管活塞12可以控制提取仓7内液体的排放和储存管9内试剂的加入,如图2、图3所示;下层为吸取和排出液体的2根玻璃管及其他开关,2根玻璃管为单向进液管3和单向排液管4,所述单向排液管4、单向进液管3一端连通提取仓7,另一端连通吸取口1,具体为单向排液管4的进液口与提取仓7连通,出液口与吸取口1连通,单向进液管3的进液口与吸取口1连通,出液口与提取仓7连通,在吸取口1上套设有密封件,当安装密封件时,提取仓7内的液体无法排除,反之则可以排除,设置2根独立管道有助于避免提取过程中洗液生物污染,单向进液管3和单向排液管4内均设置有3个简易的单向阀5,单向阀5为漏斗式的硅胶毛细管,使得单向进液管3的液体只能由外向提取仓7内流动,单向排液管4的液体只能由提取仓7内向外流动,保证了装置的密封性,如图5所示。此外,在单向排液管4的进液口处还设计有用于启闭单向排液管4的锁扣结构6,如图4所示。外层结构为装置外壳2,主要成分为聚碳酸酯PC,厚度0.15cm,所述装置外壳2包裹提取仓7、储存管9、单向进液管3和单向排液管4,所述装置外壳2上端设有用于储存管活塞12和第一驱动组件通过的孔。如图7所示,所述装置外壳2外侧设有导向结构,所述导向结构包括至少两个在所述装置外壳2的外表面均布的移动导轨15,所述移动导轨15的长度方向与所述装置外壳2的轴向一致,所述导向结构还包括外壳卡槽18、磁铁卡口16和固定线圈17,所述移动导轨15安装于外壳卡槽18内,所述固定线圈17安装于移动导轨15上端,所述磁铁卡口16设置在移动导轨15上,所述磁性环11滑动套设在移动导轨15上,通过固定线圈17可以控制磁性环11沿提取仓7中轴线上下移动,通过磁铁卡口16可以限制磁性环11滑动位置,使得提取仓7能够在不同高度位置固定停留,满足实验需求,磁性环11优选为圆环状的磁铁。
在本实施例中,依靠封闭式提取装置能够尽可能简化RNA核酸提取方法,同时能够有效避免生物安全问题;另外可以实现随采随提取的目标,可以满足没有大型设备支持的隔离区环境或野外样本的现场提取工作。
在本实施例中,优选的,如图4所示,所述锁扣结构6包括中心轴、阀门和拉环,所述阀门为圆片状结构,其尺寸与单向排液管4内径匹配,所述中心轴一端穿过单向排液管4与单向排液管4内的阀门固定连接,另一端固定连接单向排液管4外的拉环,旋转拉环通过中心轴带动阀门旋转,实现单向排液管4的启闭,具体为当拉环处于水平状态时,阀门封闭单向排液管4,当拉环处于竖直状态时,阀门开启单向排液管4。
在本实施例中,优选的,如图1所示,所述第一驱动组件包括主活塞10、活塞杆13和活塞帽14,所述活塞杆13一端与主活塞10固定连接,另一端与活塞帽14固定连接,通过活塞帽14的活塞杆13的设置,可以方便提取仓7液体的吸入和排除。
实施例2
本发明还提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置的制备方法,如图1至6所示,包括以下步骤:
S1、制备两根玻璃管,分别为单向进液管3和单向排液管4,材质均为聚丙烯PP,直径均为0.5cm,单向进液管3长度为10cm,单向排液管4为7cm,单向进液管3和单向排液管4中分别放置3个单向阀5,在单向排液管4的进液口处安装一个锁扣结构6;锁扣结构6由中心轴、锁环和圆片状的阀门组成,旋转锁环能通过中心轴带动阀门旋转,达到开启和封闭单向排液管4的作用;
S2、制备提取仓7,制作圆柱瓶状的提取仓7,材质为聚丙烯PP,直径3.0cm,高8.0cm,安装单向进液管3和单向排液管4,单向进液管3和单向排液管4一端与提取仓7下端连通,另一端两者汇合连通吸取口1,单向进液管3伸入圆柱瓶状的提取仓7 3cm,且紧贴圆柱瓶状的瓶壁,安装时确保单向进液管3内的单向阀5的开启方向为由外至提取仓7内,单向排液管4内的单向阀5的开启方向为由提取仓7内至外,圆柱瓶状的瓶外制备4个储存管9,材质为聚丙烯,直径1.5cm,高5cm,下口略收缩成1cm,随后膨大并弯曲与提取仓7瓶烧制并连通,4个储存管9依照图6所示,依次标记为ABCD,分别放置裂解液、RNA保护液、中和液和洗脱液,试剂参数如下:
裂解液:0.1M NaOH,50μL CHCl3,50μL异硫氰酸胍,总体积为500μL;
RNA保护液:200μL RNAstable LD(100%);
中和液:0.1M NaAC 500μL;
洗脱液:含RNA酶抑制剂Murine(1~3U/μL)的超纯水50μL;
S3、安装第一驱动组件和储存管活塞12,储存管活塞12安装于储存管9上端,第一驱动组件安装于提取仓7上端,其中第一驱动组件包括主活塞10、与主活塞10中心连接的活塞杆13以及与活塞杆13连接的活塞帽14,其中主活塞10为圆柱形橡胶制,直径2.8cm,高1.5cm;活塞杆13长6cm;储存管活塞12亦为圆柱形橡胶制,直径1.3cm,高1cm。
S4、制备装置外壳2和安装磁性环11,磁性环11可选用圆环状的磁铁,装置外壳2材质为PC,将装置外壳2按照上部分圆柱形和下部分圆锥形拼接起来,其中圆柱形直径4.8cm,高5.2cm,厚0.15cm;圆锥形底部直径4.8cm,高7.5cm,将提取仓7、储存管9、单向进液管3和单向排液管4包裹起来,装置外壳2上端与提取仓7上缘固定,根据第一驱动组件和储存管活塞12位置打孔,设置外壳卡槽18、固定线圈17、磁铁卡口16和移动导轨15等结构,将移动导轨15安装在外壳卡槽18内,将圆环状的磁铁滑动套接在移动导轨15上,并通过移动导轨15上的磁铁卡口16限制位置,其中圆环状外径5.5cm,内径5.2cm,高1.0cm,在装置下端的吸取口1上套上密封件,密封件可选用硅胶制的封口帽,完全包裹尖端,以保证体系密封。
在本实施例中,通过该制备方法制备的提取装置,能够尽可能简化RNA核酸提取方法,同时能够有效避免生物安全问题;另外可以实现随采随提取的目标,可以满足没有大型设备支持的隔离区环境或野外样本的现场提取工作。
实施例3
本发明还提供一种封闭式简易RNA核酸提取装置的使用方法,如图1至6所示,包括以下步骤:
A1、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓7通过吸取口1提取样本后,密封件密封吸取口1;
A2、通过移动磁性环11解除磁珠8吸附状态,磁珠8沉于提取仓7底部,通过第二驱动组件将储存管9内的裂解液和RNA保护液送入提取仓7内,充分震荡后垂直静置裂解;
A3、通过移动磁性环11吸附磁珠8并置于提取仓7中部,通过第二驱动组件将储存管9内的中和液送入提取仓7内,并混合均匀;
A4、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓7通过吸取口1排出混合液,提取仓7在第一驱动组件的作用下通过吸取口1吸取70%乙醇(无具体体积要求),至确保乙醇浸没磁珠8,密封件密封吸取口1后振摇或晃动;
A5、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓7通过吸取口1排出乙醇洗涤液,密封件密封吸取口1;
A6、通过移动磁性环11解除磁珠8吸附状态,磁珠8沉于提取仓7底部,通过第二驱动组件将储存管9内的洗脱液送入提取仓7内,振摇或震荡后静置,即完成核酸提取工作。
在本实施例中,该提取装置在进行核酸提取使用时,能够尽可能简化RNA核酸提取方法,同时能够有效避免生物安全问题;另外可以实现随采随提取的目标,可以满足没有大型设备支持的隔离区环境或野外样本的现场提取工作。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (8)
1.一种封闭式简易RNA核酸提取装置,包括提取结构、存储结构、磁性结构和驱动结构,且分为内层结构和外层结构,其特征在于:
所述提取结构包括提取仓(7)、与所述提取仓(7)连通的单向进液管(3)、与所述提取仓(7)连通的单向排液管(4)以及与单向进液管(3)、单向排液管(4)远离提取仓(7)的一端均连通的吸取口(1),所述提取仓(7)呈U型,所述单向排液管(4)设于所述提取仓(7)下方且与其底端连通,所述单向排液管(4)的出液口与所述单向进液管(3)的进液口连通,所述单向进液管(3)倾斜设于所述单向排液管(4)一侧,且所述单向进液管(3)的出液口延伸至所述提取仓(7)内并高于所述单向排液管(4)的进液口,所述单向进液管(3)、所述单向排液管(4)内分别设置有三个单向阀(5),所述提取结构还包括设于所述单向排液管(4)的进液口处且用于控制所述进液口开启或闭合的锁扣结构(6);
所述存储结构包括多个与所述提取仓(7)连通且用于存储反应试剂的储存管(9);
所述磁性结构包括置于所述提取仓(7)内的磁珠(8)和用于控制所述磁珠(8)的磁性环(11);
所述驱动结构包括驱动所述提取结构通过所述吸取口(1)提取液体或排除液体的第一驱动组件、驱动所述存储结构将反应试剂送入所述提取仓(7)内的第二驱动组件;
其中,所述磁珠(8)的直径大于所述单向进液管(3)、所述单向排液管(4)的直径,所述提取结构的吸取口(1)设有密封件,所述封闭式简易RNA核酸提取装置呈针筒状;
所述内层结构包括所述提取结构、设于所述提取仓(7)的尾端的所述第一驱动组件、环绕布置在所述提取仓(7)外的多个储存管(9)、以及设于所述储存管(9)尾端的所述第二驱动组件;
所述外层结构包括套设在所述内层结构外的装置外壳(2)、用于可拆卸设置在所述吸取口(1)处的密封件、以及可滑动套设在所述装置外壳(2)上的所述磁性环(11),其中,所述装置外壳(2)的下端与所述提取结构固定连接。
2.根据权利要求1所述的一种封闭式简易RNA核酸提取装置,其特征在于:所述提取结构还包括包裹在所述单向排液管(4)和所述单向进液管(3)外的倒锥形,所述倒锥形的宽端与所述提取仓(7)的底端外表面连接,所述倒锥形的窄端与所述吸取口(1)固定连接。
3.根据权利要求1所述的一种封闭式简易RNA核酸提取装置,其特征在于:所述锁扣结构(6)包括中心轴、阀门和拉环,所述阀门为圆片状结构,其尺寸与单向排液管(4)内径匹配,所述中心轴一端穿过单向排液管(4)与单向排液管(4)内的阀门固定连接,另一端固定连接单向排液管(4)外的拉环,旋转拉环通过中心轴带动阀门旋转,实现单向排液管(4)的启闭。
4.根据权利要求1所述的一种封闭式简易RNA核酸提取装置,其特征在于:所述存储结构包括四个轴向与所述提取仓(7)平行且连通的储存管(9),分别为裂解液储存管、RNA保护液储存管、中和液储存管和洗脱液储存管,所述储存管的出口处设有单向硅胶阀门;所述第二驱动组件包括四个与所述储存管(9)一一对应设置的储存管活塞(12),所述储存管(9)在所述储存管活塞(12)的作用下将存储的试剂排入所述提取仓(7)内。
5.根据权利要求1所述的一种封闭式简易RNA核酸提取装置,其特征在于:所述磁性结构还包括对所述磁性环(11)的滑动进行导向的导向结构;所述导向结构包括至少两个在所述装置外壳(2)的外表面均布的移动导轨(15),所述移动导轨(15)的长度方向与所述装置外壳(2)的轴向一致。
6.一种如权利要求1至5任一项所述的封闭式简易RNA核酸提取装置的使用方法,其特征在于:包括以下步骤:
A1、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓(7)通过吸取口(1)提取样本后,密封件密封吸取口(1);
A2、通过移动磁性环(11)解除磁珠(8)吸附状态,磁珠(8)沉于提取仓(7)底部,通过第二驱动组件将储存管(9)内的裂解液和RNA保护液送入提取仓(7)内,充分震荡后垂直静置裂解;
A3、通过移动磁性环(11)吸附磁珠(8)并置于提取仓(7)中部,通过第二驱动组件将储存管(9)内的中和液送入提取仓(7)内,并混合均匀;
A4、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓(7)通过吸取口(1)排出混合液,提取仓(7)在第一驱动组件的作用下通过吸取口(1)吸取70%乙醇,至确保乙醇浸没磁珠(8),密封件密封吸取口(1)后振摇或晃动;
A5、取下密封件,在第一驱动组件的作用下提取仓(7)通过吸取口(1)排出乙醇洗涤液,密封件密封吸取口(1);
A6、通过移动磁性环(11)解除磁珠(8)吸附状态,磁珠(8)沉于提取仓(7)底部,通过第二驱动组件将储存管(9)内的洗脱液送入提取仓(7)内,振摇或震荡后静置,即完成核酸提取工作。
7.根据权利要求6所述的一种封闭式简易RNA核酸提取装置的使用方法,其特征在于:步骤A2中充分振荡的时间为1-3分钟,垂直静置的时间为10min;步骤A4中振摇或晃动的时间为1-3分钟;步骤A5中需重复操作确保乙醇洗涤液排尽,每次操作间隔时间为5分钟;步骤A6中振摇或震荡时间为1-3分钟,静置时间为1分钟。
8.一种如权利要求1至5任一项所述的封闭式简易RNA核酸提取装置的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1、制备两根玻璃管,分别为单向进液管(3)和单向排液管(4),单向进液管(3)比单向排液管(4)长3cm,单向进液管(3)和单向排液管(4)中分别放置3个单向阀(5),在单向排液管(4)上安装一个锁扣结构(6);
S2、制备提取仓(7),制作圆柱瓶状的提取仓(7),安装单向进液管(3)和单向排液管(4),单向进液管(3)和单向排液管(4)一端与提取仓(7)下端连通,另一端两者汇合连通吸取口(1),单向进液管(3)伸入圆柱瓶状的提取仓(7)3cm,且紧贴圆柱瓶状的瓶壁,安装时确保单向进液管(3)内单向阀(5)的开启方向为由外至提取仓(7)内,单向排液管(4)内单向阀(5)的开启方向为由提取仓(7)内至外,圆柱瓶状的瓶外制备4个存储反应试剂的储存管(9),储存管(9)下端弯曲与圆柱瓶状的提取仓(7)烧制并连通,4个储存管(9)内分别放置裂解液、RNA保护液、中和液和洗脱液,试剂参数如下:
裂解液:0.1M NaOH,50μL CHCl3,50μL异硫氰酸胍,总体积为500μL;
RNA保护液:200μL 纯度为100%的RNAstable LD;
中和液:0.1M NaAC 500μL;
洗脱液:含RNA酶抑制剂Murine 1~3U/μL的超纯水50μL;
S3、安装磁珠(8)、第一驱动组件和储存管活塞(12),磁珠(8)放置于提取仓(7)内,储存管活塞(12)安装于储存管(9)上端,第一驱动组件安装于提取仓(7)上端,其中第一驱动组件包括主活塞(10)、与主活塞(10)中心连接的活塞杆(13)以及与活塞杆(13)连接的活塞帽(14);
S4、制备装置外壳(2)和安装磁性环(11),将装置外壳(2)按照上部分圆柱形和下部分圆锥形拼接起来,将提取仓(7)、储存管(9)、单向进液管(3)和单向排液管(4)包裹起来,装置外壳(2)上端与提取仓(7)上缘固定,根据第一驱动组件和储存管活塞(12)位置打孔,将圆环状的磁性环(11)滑动套接在装置外壳(2)外侧,在吸取口(1)上套上密封件,完全包裹尖端,以保证体系密封。
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