CN112972769B - 一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，该方法包括：一、将硝酸银粉末和抗菌肽粉末加入到丝素蛋白溶液中混合得到混合溶液A；二、将混合溶液A进行紫外照射还原得到混合溶液B；三、将Tris溶液标定后加入盐酸多巴胺并浸泡金属，得到表面具有聚多巴胺辅助层的金属；四、将表面具有聚多巴胺辅助层的金属浸入混合溶液B中浸泡，在金属表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层。本发明采用紫外照射法利用丝素蛋白将银离子还原成纳米银，有效控制了纳米银粒子的粒径大小和形貌，且抗菌肽与纳米银之间形成配位键，促进抗菌肽在纳米银颗粒表面富集，并在含纳米银抗菌肽功能涂层内呈现纳米级分散态，实现低抗菌剂用量下长期高效杀菌。

Description

一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法。
背景技术
医用纯钛以其优异的生物相容性已经被广泛应用于临床医学领域中。早在20世纪50年代，纯钛就被加工成骨板、骨钉、股骨头等植入医疗器械用于骨科修复手术中。然而，作为常见的术后并发症，有关医用医疗器械引发的细菌感染已经成为21世纪医学领域内亟待解决的重要问题之一。据报道，美国骨科植入物相关感染的年发病率就达到4.3％左右。根据世界卫生组织(WHO)颁布的《院内感染防治实用手册》中的有关数据，每天全世界有超过1400万人在遭受院内感染的痛苦，其中60％的细菌感染与使用的医疗器械有关。骨科等术后感染会直接造成患者伤口经久不愈，经常会导致手术失败，甚至导致慢性骨髓炎等并发症，不仅给患者带来了巨大的身心痛苦和沉重的经济负担，也会对医院和社会等造成不同程度的负面影响。因此，在医用钛合金表面构建载抗菌剂(抗生素、抗菌肽、纳米银等)的功能涂层，对于消除或减少相关医疗器械引发的细菌感染性疾病具有重大的社会和经济意义。
目前，得益于高效可靠的杀菌能力，抗生素仍是使用最为广泛的传统抗菌剂，但是抗生素容易引起细菌的耐药性，导致更为严重的耐药菌感染问题。相比之下，纳米银与抗菌肽不易引起细菌的耐药性，且能广谱抗菌和长期有效抑制生物膜，因此有很大的潜力取代抗生素。与其他的存在形式相比，由于金属离子的洗脱作用和纳米颗粒的杀菌性质的综合作用，纳米银具有更高的抗菌活性。目前普遍认为纳米银具有复杂的抗菌机理：其可以粘附在细菌表面上，从而改变细菌细胞膜通透性；其可以通过与含硫醇的蛋白质相互作用来杀菌；其可以与细菌DNA结合并破坏其功能；特别的，纳米银可以释放出具有杀菌能力的银离子。由于具有多种生物活性，目前抗菌肽己成为生物分子与生物材料的研究热点。在直接针对细菌与真菌引起的感染时，抗菌肽的抗菌效率较高。目前在生物医用材料中，抗菌肽受到越来越多的关注，主要作为表面修饰抗菌成分或作为被运载的抗菌药物用于局部释放。
丝素蛋白是蚕丝的主体，是一种无生理活性的天然生物大分子。丝素蛋白质与其他天然高分子相比有明显的优越性，研究表明它具有良好的生物相容性、无毒、无污染、无刺激性、可生物降解。近年来，丝素蛋白由于其良好的生物相容性逐渐应用于生物传感、生物医学材料、软组织相容材料、组织工程等领域。特别的，丝素蛋白具有还原性，可以原位还原得到纳米银和抗菌肽颗粒，避免了有毒的还原剂的使用。
目前，常见的载抗生素的涂层容易引起细菌的耐药性，不能应对更高细菌浓度或更强细菌活性的细菌感染环境，且高浓度的抗菌剂会产生潜在的生物毒性，如何在低浓度用量下达到长期高效的抗菌效果成为挑战。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法。该方法采用紫外照射法利用丝素蛋白将银离子还原成纳米银，有效控制了纳米银粒子的粒径大小和形貌，且抗菌肽与纳米银之间形成配位键，促进抗菌肽在纳米银颗粒表面富集，使得表面富集抗菌肽的纳米银在含纳米银抗菌肽功能涂层内呈现纳米级分散态，有利于实现低抗菌剂用量下长期高效杀菌。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤一、将硝酸银粉末和抗菌肽粉末加入到丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白、银离子和抗菌肽的混合溶液A；所述混合溶液A中丝素蛋白的质量浓度为2％～5％，银离子的浓度为1mg/mL～20mg/mL，抗菌肽的浓度为0.4mg/mL～1mg/mL；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于紫外灯下进行照射还原，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白、纳米银和抗菌肽的混合溶液B；所述照射还原的时间为0.5h～2h；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，再将金属浸入工作液中在避光条件下浸泡12h～24h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的金属；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的金属浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，在金属表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层。
本发明首先采用紫外照射的还原方法，使得丝素蛋白对银离子进行还原，通过控制关键工艺参数包括丝素蛋白的浓度、银离子浓度、照射还原时间，有效控制纳米银粒子的粒径大小和形貌，得到分散良好粒径均一的纳米银颗粒，且抗菌肽与纳米银之间形成配位键，促进抗菌肽在纳米银颗粒表面富集，从而使得表面富集抗菌肽的纳米银在丝素蛋白基含纳米银抗菌肽功能涂层内呈现纳米级分散态，提高了杀菌效率，大大缩短了制备时间，实现了低抗菌剂用量即低抗菌肽和低纳米银用量下长期高效杀菌；然后在金属基底表面引入聚多巴胺辅助层，并采用浸泡的方法使得载纳米银(表面富集抗菌肽)的丝素蛋白基含纳米银抗菌肽功能涂层通过聚多巴胺辅助层结合在金属基底表面，在金属表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层，解决了含纳米银抗菌肽功能涂层与金属基底之间结合性差的问题，提高了纳米银抗菌肽功能涂层与金属表面的结合效果。同时，由于含纳米银抗菌肽功能涂层中的纳米银与抗菌肽均具有高效的杀菌能力，尤其是抗菌肽具有独特的杀菌机理，通常会破坏微生物细胞膜的完整性，在不激活适应性免疫的情况下迅速杀死入侵的微生物，有效避开了细菌的遗传适应机制，从而不引起耐药性，且纳米银与抗菌肽两者之间存在协同效应，并在植入位置长期可控释放，赋予了含纳米银抗菌肽功能涂层长期高效杀菌的能力，有效地解决了植入物相关的细菌感染问题，且不会引起细菌的耐药性，降低了抗菌肽的浓度；另外，由于丝素蛋白具有良好的人体亲和性、生物相容性、无毒、且利于细胞粘附，而低浓度纳米银粒子的骨诱导性提供了优异的成骨诱导能力，因此，本发明在金属(尤其是钛金属)表面制备的含纳米银抗菌肽功能涂层具有良好的生物相容性和骨诱导性，适用性好，应用价值高。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤二中所述混合溶液B中纳米银的粒径为20nm～500nm，混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为15％～30％。该优选粒径保证了纳米银的最佳抗菌效果；优选的具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量提高了混合溶液B的稳定性，进而保证了在金属表面形成的含纳米银抗菌肽功能涂层的稳定性。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤二中所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度大于99％。该优选的抗菌肽具有特异性高效杀菌性，不易引起细菌的耐药性。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述金属为钛、钛合金或不锈钢。本发明的制备方法应用范围广泛，适用于多种常见医用金属。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为1mg/mL～4mg/mL。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述金属浸入工作液前先进行清洗预处理：将金属依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min。该优选的清洗工艺去除了金属表面杂质和污染物，有利于多巴胺在金属表面聚合形成聚多巴胺辅助层。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述聚多巴胺辅助层的厚度为200nm～500nm。该优选厚度的聚多巴胺辅助层保证了金属与含纳米银抗菌肽功能涂层之间的结合效果。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤四中所述表面具有聚多巴胺辅助层的金属浸入步骤二中得到的混合溶液B中浸泡后取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥10min～30min。通过该干燥工艺促进了丝素蛋白形成稳定结构，有利于提高金属与含纳米银抗菌肽功能涂层的结合性能。
上述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤四中所述含纳米银抗菌肽功能涂层的厚度为1μm～20μm。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用紫外照射法利用丝素蛋白将银离子还原成纳米银，有效控制了纳米银粒子的粒径大小和形貌，且抗菌肽与纳米银之间形成配位键，促进抗菌肽在纳米银颗粒表面富集，使得表面富集抗菌肽的纳米银在含纳米银抗菌肽功能涂层内呈现纳米级分散态，有利于实现低抗菌剂用量下长期高效杀菌。
2、本发明通过在金属基底表面引入聚多巴胺辅助层，提高了纳米银抗菌肽功能涂层与金属表面的结合效果，解决了含纳米银抗菌肽功能涂层与金属基底之间结合性差的问题，有利于发挥其作为金属植入体长期高效的协同杀菌作用。
3、本发明金属表面形成的含纳米银抗菌肽功能涂层中的纳米银与抗菌肽均具有高效的杀菌能力，且两者之间存在协同效应，并在植入位置长期可控释放，达到降低抗菌肽用量(远低于其生物毒性临界浓度)和长期高效杀菌的目的，解决了细菌耐药性的问题。
4、本发明在金属表面制备的含纳米银抗菌肽功能涂层具有良好的生物相容性和骨诱导性，植入生物体后抑制了原有骨的吸收过程并促进新骨生成，实现矫形移植器件(假体)与周围骨组织快而好的整合目的，且有效防止了细菌引起的植入感染，增长其服役期，尤其适用于具有病理诱发骨吸收及骨折患者的治疗，适用性好，应用价值高。
下面通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步的详细描述。
附图说明
图1为本发明实施例1的混合溶液B中纳米银的透射电镜图。
图2为本发明实施例1和对比例1～对比例2形成的各涂层及钛片中不同部位的抗菌效果对比图。
具体实施方式
实施例1
本实施例包括以下步骤：
步骤一、将蚕丝放置于0.02M的Na2CO3溶液中煮沸40min，取出后采用去离子水冲洗，然后加入到60℃的9.3M的LiBr溶液中溶解4h，得到丝素蛋白原液；
将丝素蛋白原液采用去离子水稀释成质量浓度2％的丝素蛋白溶液，然后将17mg硝酸银粉末和4mg抗菌肽粉末加入到10mL质量浓度2％的丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白、银离子和抗菌肽且pH为8.5的混合溶液A；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于40W紫外灯下进行照射还原0.5h，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白、纳米银和抗菌肽的混合溶液B；所述混合溶液B中纳米银的粒径为20nm，混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为15％；所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度为99.99％；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，将钛片依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min，再浸入工作液中在避光条件下浸泡12h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的钛片；所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为2mg/mL；所述聚多巴胺辅助层的厚度为200nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的钛片浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥10min，在钛片表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层；所述含纳米银抗菌肽功能涂层的厚度为1μm。
图1为本实施例的混合溶液B中纳米银的透射电镜图，图中黑色圆形颗粒为纳米银颗粒，直径约为20nm，黑色圆形颗粒周围的阴影部分为抗菌肽，从图1可以看出，抗菌肽在纳米银颗粒表面富集。
对比例1
本对比例包括以下步骤：
步骤一、将蚕丝放置于0.02M的Na2CO3溶液中煮沸40min，取出后采用去离子水冲洗，然后加入到60℃的9.3M的LiBr溶液中溶解4h，得到丝素蛋白原液；
将丝素蛋白原液采用去离子水稀释成质量浓度2％的丝素蛋白溶液，然后将17mg硝酸银粉末加入到10mL质量浓度2％的丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白和银离子且pH为8.5的混合溶液A；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于40W紫外灯下进行照射还原0.5h，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白和纳米银的混合溶液B；所述混合溶液B中纳米银的粒径为20nm，混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为15％；所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，将钛片依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min，再浸入工作液中在避光条件下浸泡12h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的钛片；所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为2mg/mL；所述聚多巴胺辅助层的厚度为200nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的钛片浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥30min，在钛片表面形成含纳米银功能涂层；所述含纳米银功能涂层的厚度为1μm。
对比例2
本对比例包括以下步骤：
步骤一、将蚕丝放置于0.02M的Na2CO3溶液中煮沸40min，取出后采用去离子水冲洗，然后加入到60℃的9.3M的LiBr溶液中溶解4h，得到丝素蛋白原液；
将丝素蛋白原液采用去离子水稀释成质量浓度2％的丝素蛋白溶液，然后将4mg抗菌肽粉末加入到10mL质量浓度2％的丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白和抗菌肽且pH为8.5的混合溶液A；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于40W紫外灯下进行照射0.5h，得到含有丝素蛋白和抗菌肽的混合溶液B；所述混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为15％，所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度为99.99％；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，将钛片依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min，再浸入工作液中在避光条件下浸泡12h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的钛片；所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为2mg/mL；所述聚多巴胺辅助层的厚度为200nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的钛片浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥30min，在钛片表面形成含抗菌肽功能涂层；所述抗菌肽功能涂层的厚度为1μm。
将钛片、实施例1在钛片表面形成的含纳米银抗菌肽功能涂层、对比例1在钛片表面形成的含纳米银功能涂层、对比例2在钛片表面形成的含抗菌肽功能涂层分别与金黄色葡萄球菌(1×108CFU)在37℃恒温箱中共培养24h，然后采用涂板法计数，分别统计共培养后的金黄色葡萄球菌数量，且钛片和每组涂层均分别对应选取两个不同部位即部位1和部位2进行抗菌效果观察。
图2为本发明实施例1和对比例1～对比例2形成的各涂层及钛片中不同部位的抗菌效果对比图，图中的绿色点代表活细菌，红色点代表死细菌，从图2可看出，相较于对比例1～对比例2形成的各涂层及钛片，本发明实施例1中在钛片表面形成的含纳米银抗菌肽功能涂层共培养后的金黄色葡萄球菌数量最少，说明该含纳米银抗菌肽功能涂层具有优异的协同抗菌效果，且优于含纳米银功能涂层和含抗菌肽功能涂层。
实施例2
本实施例包括以下步骤：
步骤一、将蚕丝放置于0.02M的Na2CO3溶液中煮沸40min，取出后采用去离子水冲洗，然后加入到60℃的9.3M的LiBr溶液中溶解4h，得到丝素蛋白原液；
将丝素蛋白原液采用去离子水稀释成质量浓度3％的丝素蛋白溶液，然后将10mg硝酸银粉末和8mg抗菌肽粉末加入到10mL质量浓度3％的丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白、银离子和抗菌肽且pH为8的混合溶液A；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于40W紫外灯下进行照射还原1h，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白、纳米银和抗菌肽的混合溶液B；所述混合溶液B中纳米银的粒径为300nm，混合溶液A中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为20％；所述混合溶液B中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度为99.99％；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，将钛合金依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min，再浸入工作液中在避光条件下浸泡18h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的钛合金；所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为2mg/mL；所述聚多巴胺辅助层的厚度为300nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的钛合金浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥30min，在钛合金表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层；所述含纳米银抗菌肽功能涂层的厚度为15μm。
实施例3
本实施例包括以下步骤：
步骤一、将蚕丝放置于0.02M的Na2CO3溶液中煮沸40min，取出后采用去离子水冲洗，然后加入到60℃的9.3M的LiBr溶液中溶解4h，得到丝素蛋白原液；
将丝素蛋白原液采用去离子水稀释成质量浓度5％的丝素蛋白溶液，然后将200mg硝酸银粉末和10mg抗菌肽粉末加入到10mL质量浓度5％的丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白、银离子和抗菌肽且pH为10的混合溶液A；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于40W紫外灯下进行照射还原2h，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白、纳米银和抗菌肽的混合溶液B；所述混合溶液B中纳米银的粒径为500nm，混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为30％；所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度为99.99％；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，将不锈钢依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min，再浸入工作液中在避光条件下浸泡24h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的不锈钢；所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为2mg/mL；所述聚多巴胺辅助层的厚度为500nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的不锈钢浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥30min，在不锈钢表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层；所述含纳米银抗菌肽功能涂层的厚度为20μm。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (6)

1.一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤一、将硝酸银粉末和抗菌肽粉末加入到丝素蛋白溶液中混合，得到含有丝素蛋白、银离子和抗菌肽的混合溶液A；所述混合溶液A中丝素蛋白的质量浓度为2%~5%，银离子的浓度为1mg/mL~20mg/mL，抗菌肽的浓度为0.4mg/mL~1mg/mL；
步骤二、将步骤一中得到的混合溶液A放置于紫外灯下进行照射还原，使得混合溶液A的颜色逐渐由乳白色变为深棕色，得到含有丝素蛋白、纳米银和抗菌肽的混合溶液B；所述照射还原的时间为0.5h~2h；所述混合溶液A中抗菌肽的氨基酸序列为(NH2)-NGIVKAGPAIAVLGEAAL-CONH2，抗菌肽的质量纯度大于99%；
步骤三、采用标准NaOH溶液将10mM的Tris溶液标定至pH为8.5，然后加入盐酸多巴胺得到工作液，再将金属浸入工作液中在避光条件下浸泡12h~24h，得到表面具有聚多巴胺辅助层的金属；所述聚多巴胺辅助层的厚度为200nm~500nm；
步骤四、将步骤三中得到的表面具有聚多巴胺辅助层的金属浸入步骤二中得到的混合溶液B中进行浸泡，在金属表面形成含纳米银抗菌肽功能涂层；所述含纳米银抗菌肽功能涂层的厚度为1μm~20μm。
2.根据权利要求1所述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤二中所述混合溶液B中纳米银的粒径为20nm~500nm，混合溶液B中具有β折叠结构的丝素蛋白的质量含量为15%~30%。
3.根据权利要求1所述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述金属为钛、钛合金或不锈钢。
4.根据权利要求1所述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述工作液中盐酸多巴胺的浓度为1mg/mL~4mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤三中所述金属浸入工作液前先进行清洗预处理：将金属依次浸入丙酮、乙醇和去离子水中超声清洗15min。
6.根据权利要求1所述的一种金属表面制备含纳米银抗菌肽功能涂层的方法，其特征在于，步骤四中所述表面具有聚多巴胺辅助层的金属浸入步骤二中得到的混合溶液B中浸泡后取出放置于恒温干燥箱中，在60℃下干燥10min~30min。
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