CN115287247A - 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法 - Google Patents

一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115287247A
CN115287247A CN202211081805.4A CN202211081805A CN115287247A CN 115287247 A CN115287247 A CN 115287247A CN 202211081805 A CN202211081805 A CN 202211081805A CN 115287247 A CN115287247 A CN 115287247A
Authority
CN
China
Prior art keywords
temperature
screening
aureobasidium pullulans
medium
strains
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211081805.4A
Other languages
English (en)
Inventor
刘欣
孔燕琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changchun University of Technology
Original Assignee
Changchun University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Changchun University of Technology filed Critical Changchun University of Technology
Priority to CN202211081805.4A priority Critical patent/CN115287247A/zh
Publication of CN115287247A publication Critical patent/CN115287247A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明的目的在于提供一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法，属于微生物发酵培养技术领域和微生物菌种选育技术领域。本发明通过在35至40℃进行高温驯化与复合函数筛选方法，获得优质出芽短梗霉NRRL62031菌株，以期提高重油的产量，缩短发酵周期，提高发酵效益。本发明中利用马来酰肼平板培养基和浅蓝菌素平板培养基作为初筛培养基，再进行两次复筛淘汰产油量低于14.57g/L的菌株，产量提高62%的为优选菌株，产油量为69.34g/L。

Description

一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵培养技术领域和微生物菌种选育技术领域，特指高温驯化与筛选优质的出芽短梗霉NRRL62031菌株的方法。
背景技术
微生物菌株的驯化和筛选是发酵培养微生物领域的一种十分关键的选育技术，因为自然选育需要花费大量的时间，育种工作效率也不理想，所以驯化与筛选生长优良且活性较高的诱变菌株对微生物领域的发展非常有意义。微生物高温驯化与筛选方法是一个很值得关注的研究方向，在不同的微生物发酵培养的过程中，都会涉及到菌株生长和代谢的问题，我们要想通过不同条件的驯化与筛选得到目标产物，且需要保证得到的目标产物产量高，此时需要筛选出优良的菌株进行发酵培养。不同的发酵条件对微生物发酵的影响不同，发酵机理也十分复杂，因为高温驯化育种具有速度快、价格低廉、操作简单等优点，是当前菌种选育的一种常用的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法。
为实现上述目的，本发明采用的具体方法如下所示：
（1）将甘油保藏的原始出芽短梗霉菌种常温解冻后，取2mL接种于种子培养基中进行复壮，复壮后的种子液用0.3g/L的氯化锂辅助诱变，将原始出芽短梗霉菌液置于30W的紫外灯下照射5至8min，再加入0.3至0.5mL的硫酸二乙酯溶液，然后振荡20至30min，加入18%至23%的Na2S2O3溶液终止诱变，培养条件：26至28℃、160至180r/min，诱变后的出芽短梗霉种子液用甘油低温保藏备用；
（2）将甘油低温保藏的诱变菌种常温解冻后进行菌种活化得到出芽短梗霉菌液，取一环出芽短梗霉菌液接于斜面培养基中进行复壮，将复壮后的孢子液取5%接于50ml的种子培养基中制备一级种子培养基，再从一级种子培养基中取5%的种子液接种在50ml的种子培养基中制备二级种子培养基进行高温驯化；
（3）将高温驯化后的出芽短梗霉种子液用无菌水按1:10的比例进行稀释，稀释后的种子液用三角棒涂布到用来筛选的马来酰肼平板培养基中，进行初筛培养46.5h，培养结束后挑取出芽短梗霉直径在40至43mm的菌落，用苏丹黑染色两次制成样本进行显微镜观察；
（4）用0.9%的生理盐水将马来酰肼筛选平板中直径在40至43mm的出芽短梗霉菌落洗脱，用取样枪取2ml洗脱后的菌液，接种量8%接于50ml的一级种子培养基中进行扩大培养，培养10.5至16.5h后，转接至二级种子培养基中进行一次传代培养，培养10.5至16.5h然后将传代培养的种子液1:10进行稀释，用取样针取稀释后的菌液画S形涂布于用来筛选的浅蓝菌素平板培养基中培养50.5h，挑取菌落厚度为0.3mm的出芽短梗霉菌落，接种于发酵培养基中进行初次复筛；
（5）初次复筛发酵培养结束后，将初次复筛后油脂产量排名前三的菌株制成孢子悬浮液，用取样针从浅蓝菌素平板上挑取厚度0.8mm的菌落，接种于发酵培养基中进行再次复筛培养；
（6）再次复筛发酵培养结束后，将发酵液于6500rpm转速下离心10min，除去上清液并加入等体积的乙酸乙酯和少量去离子水，混合均匀后进行离心，离心后萃取的含有重油的有机层转移到新的刻度管中，然后将有机层用减压蒸馏法提取重油，并称重计算产量，淘汰产油量低于14.57g/L的菌株，，将产油量排名前三的菌株制成孢子悬浮液，然后按
Figure 287808DEST_PATH_IMAGE001
关系进行优筛发酵培养发酵培养与原始菌株产油量作对照，其中
Figure 753424DEST_PATH_IMAGE002
，产量提高62%的为优选菌株；
（7）发酵培养基配方为葡萄糖80至120g/L、酵母粉0.5g/L、硝酸钠1.06g/L、氯化铵0.67g/L、氯化钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L、磷酸二氢钾0.1g/L，原始菌株为出芽短梗霉NRRL62031，pH4.5~7.0；
（8）用来筛选的马来酰肼平板培养基和浅蓝菌素平板培养基，从筛选平板致死率在70至80 %之间的平板挑取出芽短梗霉菌落，马来酰肼浓度1.0至3.0 g/L，浅蓝菌素浓度10-5至10-6 mol/L，
（9）初次复筛和再次复筛的菌株在高温培养结束后测定OD600值，选取OD600值高的菌液继续培养至OD600值不再上升时再提高驯化温度1至5 ℃，高温驯化12至24h，传代培养2至3次，传代培养OD600的值控制在0.95；将出芽短梗霉菌液接种在新的发酵培养基中进行摇瓶优筛，与原始菌株产油量进行对照，淘汰产油量低于14.57g/L的菌株，摇床培养3次；
（10）该菌株为原始菌株经紫外-硫酸二乙酯复合诱变，筛选出一株高产油的目的菌株，目的菌株产量较原始菌株提升38.47%以上为有效诱变结果；紫外灯的紫外线的波长是252.9nm，紫外辐射剂量是323.7J/m2；
本发明的优点：通过出芽短梗霉进行高温驯化与筛选，通过高温驯化筛选出耐高温，产油率高，转化率优良的出芽短梗霉菌株，提高了出芽短梗霉菌株的油脂产量，同时提高了碳源的利用率，缩短发酵周期。
具体实施方式：
以下所述仅为本发明实施较佳的案例，并不局限于本发明，凡在本发明精神和原则之内所做的任何修饰，等同替换及改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案进行进一步的说明。
下列所用的出发菌种为出芽短梗霉NRRL62031，购自美国农业部菌种保藏中心，所述培养基为通用的安全培养基。
实施例1
（1）菌株诱变：将甘油保藏的原始出芽短梗霉菌种常温解冻后，取2mL接种于种子培养基中进行复壮，复壮后的种子液用0.3g/L的氯化锂辅助诱变，将原始出芽短梗霉菌液置于30W的紫外灯下照射5至8min，再加入0.3至0.5mL的硫酸二乙酯溶液，然后振荡20至30min，加入18%至23%的Na2S2O3溶液终止诱变，培养条件：26至28℃、160至180r/min，诱变后的出芽短梗霉种子液用甘油低温保藏备用；
（2）斜面培养基复壮：将甘油保藏的出芽短梗霉诱变菌种常温解冻后，在超净台中用接种针接种于斜面培养基中，于28℃的恒温培养箱中培养14小时；
（3）种子液制备：将复壮后斜面培养基中的出芽短梗霉菌株用生理盐水洗脱，制成孢子悬浮液，取5%的悬浮液接于50ml的种子培养基中，制备一级种子培养基，取8%的一级种子培养基中的种子液接种于新的种子培养基中制备二级种子培养基，二级种子培养基在35℃进行驯化，培养16.5小时；
（4）初筛培养：35℃驯化后的二级种子培养基中的种子液用无菌水按1:10稀释，用三角棒取稀释后的种子液涂布到用来筛选的马来酰肼平板培养基中进行初筛培养46.5h，选取马来酰肼平板培养基中直径在40至43mm的出芽短梗霉菌落，用苏丹黑染色后进行显微镜观察；
（5）初次复筛培养：用生理盐水将马来酰肼平板中的出芽短梗霉菌落洗脱，取2ml菌悬液接种至一级种子培养基中，培养10.5至16.5h后转接至二级种子培养基中，培养10.5至16.5h后将二级种子培养基中的种子液按1:10稀释，并画S形涂布于用于筛选的浅蓝菌素平板培养基，培养50.5h；
（6）再次复筛培养：从浅蓝菌素平板上挑取厚度0.3mm的出芽短梗霉菌落，将初次复筛后油脂产量排名前三的菌株制成孢子悬浮液接种于6个发酵培养基中，进行再次复筛培养，培养6至9天；
（7）重油提取：将再次复筛培养的发酵液转移至50mL的离心管中，于6500rpm转速下离心10min，除去上清液，加入等体积的乙酸乙酯和少量去离子水均匀混合，将含有重油的有机层移至圆底烧瓶中，重复此操作三次，然后将含有重油的有机层进行减压蒸馏，得到重油的产量为69.34g/L。
实施例2
（1）菌株诱变：将甘油保藏的原始出芽短梗霉菌种常温解冻后，取2mL接种于种子培养基中进行复壮，复壮后的种子液用0.3g/L的氯化锂辅助诱变，将原始出芽短梗霉菌液置于30W的紫外灯下照射5至8min，再加入0.3至0.5mL的硫酸二乙酯溶液，然后振荡20至30min，加入18%至23%的Na2S2O3溶液终止诱变，培养条件：26至28℃、160至180r/min，诱变后的出芽短梗霉种子液用甘油低温保藏备用；
（2）斜面培养基复壮：将甘油保藏的出芽短梗霉诱变菌种常温解冻后，在超净台中用接种针接种于斜面培养基中，于28℃的恒温培养箱中培养14小时；
（3）种子液制备：将复壮后斜面培养基中的出芽短梗霉菌株用生理盐水洗脱，制成孢子悬浮液，取5%的悬浮液接于50ml的种子培养基中，制备一级种子培养基，取8%的一级种子培养基中的种子液接种于新的种子培养基中制备二级种子培养基，二级种子培养基在35℃进行驯化，培养16.5小时；
（4）初筛培养：37℃驯化后的二级种子培养基中的种子液用无菌水按1:10稀释，用三角棒取稀释后的种子液涂布到用来筛选的马来酰肼平板培养基中进行初筛培养46.5h，选取马来酰肼平板培养基中直径在40至43mm的出芽短梗霉菌落，用苏丹黑染色后进行显微镜观察；
（5）初次复筛培养：用生理盐水将马来酰肼平板中的出芽短梗霉菌落洗脱，取2ml菌悬液接种至一级种子培养基中，培养10.5至16.5h后转接至二级种子培养基中，培养10.5至16.5h后将二级种子培养基中的种子液按1:10稀释，并画S形涂布于用于筛选的浅蓝菌素平板培养基，培养50.5h；
（6）再次复筛培养：从浅蓝菌素平板上挑取厚度0.3mm的出芽短梗霉菌落，将初次复筛后油脂产量排名前三的菌株制成孢子悬浮液接种于6个发酵培养基中，进行再次复筛培养，培养6至9天；
（7）重油提取：将再次复筛培养的发酵液转移至50mL的离心管中，于6500rpm转速下离心10min，除去上清液，加入等体积的乙酸乙酯和少量去离子水均匀混合，将含有重油的有机层移至圆底烧瓶中，重复此操作三次，然后将含有重油的有机层进行减压蒸馏，得到重油的产量为67.62g/L。
实施例3
（1）菌株诱变：将甘油保藏的原始出芽短梗霉菌种常温解冻后，取2mL接种于种子培养基中进行复壮，复壮后的种子液用0.3g/L的氯化锂辅助诱变，将原始出芽短梗霉菌液置于30W的紫外灯下照射5至8min，再加入0.3至0.5mL的硫酸二乙酯溶液，然后振荡20至30min，加入18%至23%的Na2S2O3溶液终止诱变，培养条件：26至28℃、160至180r/min，诱变后的出芽短梗霉种子液用甘油低温保藏备用；
（2）斜面培养基复壮：将甘油保藏的出芽短梗霉诱变菌种常温解冻后，在超净台中用接种针接种于斜面培养基中，于28℃的恒温培养箱中培养14小时；
（3）种子液制备：将复壮后斜面培养基中的出芽短梗霉菌株用生理盐水洗脱，制成孢子悬浮液，取5%的悬浮液接于50ml的种子培养基中，制备一级种子培养基，取8%的一级种子培养基中的种子液接种于新的种子培养基中制备二级种子培养基，二级种子培养基在35℃进行驯化，培养16.5小时；
（4）初筛培养：40℃驯化后的二级种子培养基中的种子液用无菌水按1:10稀释，用三角棒取稀释后的种子液涂布到用来筛选的马来酰肼平板培养基中进行初筛培养46.5h，选取马来酰肼平板培养基中直径在40至43mm的出芽短梗霉菌落，用苏丹黑染色后进行显微镜观察；
（5）初次复筛培养：用生理盐水将马来酰肼平板中的出芽短梗霉菌落洗脱，取2ml菌悬液接种至一级种子培养基中，培养10.5至16.5h后转接至二级种子培养基中，培养10.5至16.5h后将二级种子培养基中的种子液按1:10稀释，并画S形涂布于用于筛选的浅蓝菌素平板培养基，培养50.5h；
（6）再次复筛培养：从浅蓝菌素平板上挑取厚度0.3mm的出芽短梗霉菌落，将初次复筛后油脂产量排名前三的菌株制成孢子悬浮液接种于6个发酵培养基中，进行再次复筛培养，培养6至9天；
（7）重油提取：将再次复筛培养的发酵液转移至50mL的离心管中，于6500rpm转速下离心10min，除去上清液，加入等体积的乙酸乙酯和少量去离子水均匀混合，将含有重油的有机层移至圆底烧瓶中，重复此操作三次，然后将含有重油的有机层进行减压蒸馏，得到重油的产量为66.34g/L。

Claims (10)

1.一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于，步骤一：取一环出芽短梗霉菌液，按斜面培养基倾斜面与倾斜角度特定的函数关系进行斜面培养基复壮，取孢子液接于一级种子培养基中，再转接至二级种子培养基进行高温驯化，一级种子培养基和二级种子培养基的接种量与发酵温度满足特定的函数关系，发酵培养时间与高温驯化温度也满足特定的函数关系；步骤二：取高温驯化后的二级种子液用无菌水1:10稀释，涂布到用于筛选的马来酰肼平板培养基中进行初筛培养46.5h；步骤三：挑取直径在40至43mm的出芽短梗霉菌落进行显微镜观察，再用生理盐水洗脱后，取2ml菌悬液接种至一级种子培养基中，培养10.5至16.5h后转接至二级种子培养基中；步骤四，将二级种子培养基中的种子液用无菌水稀释10倍，并S型划线涂布于用于筛选的浅蓝菌素平板培养基，培养50.5h后，挑取厚度0.3mm的菌落，于发酵培养基中进行初次复筛；步骤五：将初次复筛后油脂产量排名前三的菌株制成孢子悬浮液接种于发酵培养基中进行再次复筛，其中，初次复筛排名n与其应重复培养次数N满足特定函数关系：N=(3-n)×2+3关系，1≤n≤3，再次复筛的菌株去掉较对照菌株产量低于62%的菌株，产量提高62%的为优选菌株。
2.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：所用的菌株为诱变菌株，原始菌株为出芽短梗霉NRRL62031；斜面培养基的倾斜液面与倾斜角度存在y= -0.06x+3.5的一次函数关系，所述的y为倾斜液面的长度cm，x为倾斜角度对应的液面高度cm，2.3≤x≤4.1；所述的发酵培养基配方为葡萄糖80至120g/L、酵母粉0.5g/L、硝酸钠1.06g/L、氯化铵0.67g/L、氯化钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L、磷酸二氢钾0.1g/L，pH4.5~7.0。
3.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：一级种子培养基和二级种子培养基的接种量与发酵温度存在y= -0.5x+16.5的一次函数关系，所述的y为接种量mL，x为种子液发酵温度℃，2.5≤x≤5。
4.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：用于筛选的马来酰肼平板培养基和浅蓝菌素平板培养基，其致死率在70至80 %之间，所用的马来酰肼浓度为1.0至3.0 g/L，浅蓝菌素浓度为10-5至10-6 mol/L，马来酰肼筛和浅蓝菌素与诱变温度均分别存在特定的函数关系。
5.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：所述的出芽短梗霉菌落进行显微镜观察时，用苏丹黑染色两次，第一次染色时间为7min，第二次染色时间为5min；所示的2ml菌悬液，菌体浓度介于2.06×1010个cell/L至2.25×1010个cell/L之间。
6.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：初次复筛的菌株在高温培养结束后测定OD600值，选取OD600值高的菌液继续培养至OD600值不再上升时再提高驯化温度1至5 ℃，高温驯化12至24h，传代培养2至3次；传代培养OD600的值控制在0.95；在发酵培养基中进行发酵后测定油脂产量，淘汰产油量低于14.57g/L的菌株。
7.根据权利要求1所述的一种适用于出芽短梗霉菌株的高温驯化与筛选方法，其特征在于：发酵培养时间与高温驯化温度存在y= -1.2x+58.8的一次函数关系，所述的y为发酵培养时间h，x为高温驯化温度℃，35≤x≤40；转速为160至220 r/min；传代次数为5至9代。
8.根据权利要求2所述的诱变菌株，其特征在于，该菌株为原始菌株经紫外-硫酸二乙酯复合诱变，筛选出一株高产油脂的目的菌株，目的菌株产量较原始菌株提升38.47%以上为有效诱变结果；所述的紫外诱变特征是用0.3g/L的氯化锂辅助诱变，然后将出芽短梗霉菌液置于30W的紫外灯下照射5至8min，紫外灯的紫外线波长为252.9nm，紫外辐射剂量为323.7J/m2；所述的硫酸二乙酯诱变特征是加入0.3至0.5mL的硫酸二乙酯溶液，然后振荡20至30min，加入18%至23%的Na2S2O3溶液终止诱变，培养条件：26至28℃、160至180r/min；其中紫外灯照射时间与硫酸二乙酯用量存在特定的函数关系。
9.根据权利要求4所述的筛选条件，其特征在于：马来酰肼筛与诱变温度存在y=7.5x+27.5的一次函数关系，所述的y为诱变温度℃，x为马来酰肼筛的浓度g/L，1≤x≤3；浅蓝菌素与诱变温度存在y=16.7×106-132，所述的y为诱变温度℃，x浅蓝菌素的浓度mol/L，10-6≤x≤10-5。
10.根据权利要求8所述的原始菌株紫外-硫酸二乙酯复合诱变，其特征在于：紫外灯照射时间与硫酸二乙酯用量存在y= -0.067x+0.536的一次函数关系，所述的y为硫酸二乙酯用量mL，x为紫外灯照射时间min，5≤x≤8。
CN202211081805.4A 2022-09-06 2022-09-06 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法 Pending CN115287247A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211081805.4A CN115287247A (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211081805.4A CN115287247A (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115287247A true CN115287247A (zh) 2022-11-04

Family

ID=83834544

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211081805.4A Pending CN115287247A (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115287247A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116240142A (zh) * 2023-03-16 2023-06-09 中国科学院植物研究所 一种产l-乳酸的凝结芽孢杆菌及菌株突变筛选方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1653932A (zh) * 2004-12-10 2005-08-17 宝鸡市星星协力生物有限公司 无公害高效能寡聚糖高产酶复合动物微生态制剂及其制备方法
US20140187829A1 (en) * 2011-05-20 2014-07-03 Zhejiang Medicine Co., Ltd. Xinchang Pharmaceutic- al Factory Method of Producing Natural B Carotene By Fermentation And Use Thereof
CN108753676A (zh) * 2018-07-20 2018-11-06 山东农业大学 一种大球盖菇耐高温菌株的选育方法
CN109136109A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 浙江科技学院 一种出芽短梗霉菌株及其应用
JP2020031580A (ja) * 2018-08-30 2020-03-05 株式会社アウレオ β−グルカン高産生菌株、β−グルカンの製造方法、及びβ−グルカン高産生菌株のスクリーニング方法
CN113774095A (zh) * 2021-10-25 2021-12-10 长春工业大学 一种提高出芽短梗霉菌株发酵产重油能力的方法
CN114015579A (zh) * 2021-08-24 2022-02-08 天津科技大学 一种高产β-葡聚糖的出芽短梗霉及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1653932A (zh) * 2004-12-10 2005-08-17 宝鸡市星星协力生物有限公司 无公害高效能寡聚糖高产酶复合动物微生态制剂及其制备方法
US20140187829A1 (en) * 2011-05-20 2014-07-03 Zhejiang Medicine Co., Ltd. Xinchang Pharmaceutic- al Factory Method of Producing Natural B Carotene By Fermentation And Use Thereof
CN108753676A (zh) * 2018-07-20 2018-11-06 山东农业大学 一种大球盖菇耐高温菌株的选育方法
JP2020031580A (ja) * 2018-08-30 2020-03-05 株式会社アウレオ β−グルカン高産生菌株、β−グルカンの製造方法、及びβ−グルカン高産生菌株のスクリーニング方法
CN109136109A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 浙江科技学院 一种出芽短梗霉菌株及其应用
CN114015579A (zh) * 2021-08-24 2022-02-08 天津科技大学 一种高产β-葡聚糖的出芽短梗霉及其应用
CN113774095A (zh) * 2021-10-25 2021-12-10 长春工业大学 一种提高出芽短梗霉菌株发酵产重油能力的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何黎黎: "药学综合实验教程", 30 November 2021, 四川科学技术出版社, pages: 107 *
顾方舟: "生物技术的现状与未来", 30 November 1990, 北京医科大学出版社, pages: 205 *
马贵民: "细胞工程", 31 August 2007, 中国农业出版社, pages: 88 - 89 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116240142A (zh) * 2023-03-16 2023-06-09 中国科学院植物研究所 一种产l-乳酸的凝结芽孢杆菌及菌株突变筛选方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102174461A (zh) 一种基于液体深层发酵的樟芝无性孢子的制备方法及应用
CN115287247A (zh) 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法
CN112680395B (zh) 诱导新疆细虫草的无性型羽束梗孢进行微循环产孢的培养基和高效发酵方法
CN102352317B (zh) 截短侧耳素产生菌的微量培养方法和其高产菌的高通量筛选方法
CN114517158A (zh) 一种正常培养条件下高产油及淀粉的工程藻及其构建方法与应用
CN119931846A (zh) 一株耐低温的木质素降解菌及其应用
CN117904002A (zh) 一株野尻链霉菌zzl-3d及其应用
CN115287200B (zh) 一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法
CN110894512A (zh) 一种利用微藻直接生产乙醇的方法
CN118995517A (zh) 一种青枯雷尔氏菌及高产青枯雷尔氏菌噬菌体的发酵方法
CN107400673B (zh) 一种集胞藻pcc6803的突变株及其应用
CN102174427B (zh) 一种防治油茶软腐病的内生拮抗菌株及其应用
CN116590153A (zh) 球孢白僵菌zjb23323及其在合成r-2-(4羟基苯氧基)丙酸中的应用
CN110305879A (zh) 一种玉米小斑病菌ChCDC3基因及其应用
CN110846232B (zh) 一株可高温发酵生产dha的菌株及其应用
CN106479895A (zh) 一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法
Mundkur Long term adaptation to galactose by yeast
CN116656511A (zh) 一株化学诱变嘴突凸脐蠕孢菌q06及其应用
CN110643525B (zh) 一种生产1,3-丙二醇用的酪酸梭菌菌株及其筛选方法和应用
US7846699B2 (en) Process for gibberellic acid production with “Fusarium moniliforme” strains
CN115820440A (zh) 一株四乙酰植物鞘氨醇高产诱变菌株及其应用
CN114891637A (zh) 一株高产虾青素的小球藻Chlorella zofingiensis突变体及其应用
CN104630355B (zh) 一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法
KR0136438B1 (ko) 고온 에탄올 발효에 유용한 신규 효모 균주 및 이를 이용한 에탄올 제조방법
CN113046270A (zh) 一种提高灵菌红素发酵水平的方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20221104