CN117203231B

CN117203231B - 一种抗il-8的抗体

Info

Publication number: CN117203231B
Application number: CN202280008469.2A
Authority: CN
Inventors: 姚瑛英; 陈琳; 唐亮
Original assignee: Suzhou Kaijian Biotechnology Co ltd
Current assignee: Suzhou Kaijian Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-11-28
Filing date: 2022-11-28
Publication date: 2025-09-16
Anticipated expiration: 2042-11-28
Also published as: CN117203231A; WO2024113122A1

Abstract

本发明涉及一种抗IL‑8抗体。具体地，本发明提供一种抗体的重链可变区，所述重链可变区域包括以下三个互补决定区(CDRs)：如SEQ ID NO:1所示的CDR1，如SEQ ID NO:2所示的CDR2，和如SEQ ID NO:3所示的CDR3。本发明的抗体能够以高亲和力与IL‑8结合，并阻断或抑制IL‑8诱导的活性，例如促炎活性、趋化活性和血管生成，以治疗与IL‑8相关的免疫性、自身免疫性、炎症性或感染性疾病和癌症。

Description

一种抗IL-8的抗体

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种抗IL-8的抗体。

背景技术

白细胞介素8(IL-8，也称为CXCL8)，先前称为单核细胞衍生的中性粒细胞趋化因子(MDNCF)或中性粒细胞诱导/活化蛋白-1(NAP-1)，是一种ELR⁺趋化因子，在炎症性疾病中对特定类型的白细胞显示趋化活性。

IL-8是一种多肽，IL-8可由成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、树状细胞(DC)、淋巴细胞、角质形成细胞、黑色素细胞、肝细胞和各种肿瘤细胞分泌。已知IL-8刺激中性粒细胞趋化，并通过与中性粒细胞表面的高亲和力受体(CXCR1和CXCR2)结合，参与中性粒细胞向炎症部位的迁移。IL-8通过加速脱颗粒、活性氧(ROS)的产生和破坏浸润组织来激活中性粒细胞。

尽管中性粒细胞炎症反应对于破坏入侵体内的病原体至关重要，但不适当的中性粒细胞激活和浸润可能会导致许多疾病。据推测，IL-8的长时间高表达可能与自身免疫、炎症或感染性疾病以及癌症等疾病的发生有关。IL-8与类风湿性关节炎、哮喘、痛风、炎症性肠病(IBD)和败血症有关，这些疾病的特征为伴有中性粒细胞浸润和组织损伤的炎症。

已知IL-8可促进肿瘤的血管生成和生长。IL-8还可以吸引骨髓来源的抑制细胞(MDSCs)进入肿瘤微环境(TME)，并有助于肿瘤免疫逃避。

人肿瘤细胞如黑色素瘤、乳腺癌症、肝细胞癌、去势抵抗的前列腺癌症、结直肠癌、胶质瘤表达IL-8，其在肿瘤的侵袭和转移中发挥作用。IL-8的抑制可以防止炎症细胞浸润组织，减少血管生成，减少MDSCs的运输，改善疾病。

因此，本领域需要开发一种能够结合IL-8的抗体，用于诊断和治疗IL-8介导的疾病。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以高亲和力结合IL-8的抗体及其在阻断或抑制IL-8诱导的活性中的用途。

本发明的第一方面提供一种抗体的重链可变区，所述重链可变区域包括以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:1所示的CDR1，

如SEQ ID NO:2所示的CDR2，和

如SEQ ID NO:3所示的CDR3。

在另一优选例中，所述抗体为抗IL-8的抗体。

在另一优选例中，所述IL-8为人IL-8。

在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少1个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸的衍生序列。

在另一优选例中，所述衍生序列保留IL-8的结合亲和力。

在另一优选例中，所述衍生序抗IL-8。

在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在另一优选例中，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

本发明第二方面提供一种抗体的重链，所述的重链包括如本发明第一方面所述的重链可变区。

在另一优选例中，所述的抗体的重链还还包括重链恒定区。

在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的。

本发明的第三方面提供一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区域包括以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:4所示的CDR1'，

如SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和

如SEQ ID NO:6所示的CDR3'。

在另一优选例中，所述衍生序列保留IL-8的结合亲和力。

在另一优选例中，所述衍生序抗IL-8。

在另一优选例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在另一优选例中，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

本发明第四方面提供一种抗体的轻链，所述的轻链包括如本发明第三方面所述的轻链可变区。

在另一优选例中，所述的抗体的轻链还还包括轻链恒定区。

在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的。

本发明第五方面提供一种抗体，所述抗体包括：

(1)如本发明第一方面所述的重链可变区；和/或

(2)如本发明第三方面所述的轻链可变区。

在另一优选例中，所述抗体包括如本发明第二方面所述的重链；和/或如本发明第四方面所述的轻链。

在另一优选例中，所述抗体为抗IL-8的抗体。

在另一优选例中，所述IL-8为人IL-8。

在另一优选例中，所述抗体选自下组：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，或其组合。

在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体或单链抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的抗体是部分或全人源化的单克隆抗体。

在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示；和/或

所述的抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。

在另一优选例中，所述的抗体为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE类型。

在另一优选例中，所述的抗体为药物偶联物形式。

本发明第六方面提供一种重组蛋白，所述的重组蛋白包括：

(i)如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或本发明第五方面所述的抗体；和

(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签。

在另一优选例中，所述的重组蛋白包括融合蛋白。

在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。

本发明第七方面提供一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物包括：

(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体，或其组合；和

(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶，或其组合。

在另一优选例中，所述的抗体部分与所述的偶联部分通过化学键或接头进行偶联。

本发明第八方面提供一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：

(1)如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体；或

(3)如本发明第六方面所述的重组蛋白。

本发明第九方面提供一种载体，所述的载体含有如本发明第八方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒，或其他载体。

本发明第十方面提供一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞包括本发明第九方面所述的载体或所述宿主细胞的基因组中整合有本发明第八方面所述的多核苷酸。

本发明第十一方面提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括：

如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第七方面所述的抗体药物偶联物、如本发明第八方面所述的多核苷酸、如本发明第九方面所述的载体和/或如本发明第十方面所述的遗传工程化的宿主细胞。

在另一优选例中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在另一优选例中，所述药物组合物是液态制剂。

在另一优选例中，所述药物组合物的剂型是注射剂。

在另一优选例中，所述注射剂为静脉注射剂。

本发明第十二方面提供一种如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、如本发明第五方面所述的抗体、和/或如本发明第六方面所述的重组蛋白的用途，用于(i)制备用于阻断或抑制IL-8诱导的活性的药物或制剂；(ii)制备用于预防和/或治疗与IL-8相关的疾病的药物或制剂；和/或(iii)制备检测试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述IL-8诱导的活性包括促炎活性、趋化活性和/或血管生成。

在另一优选例中，与IL-8相关的疾病包括自身免疫性、炎症、感染性疾病和/或肿瘤。

在另一优选例中，与IL-8相关的疾病为与IL-8水平升高或失衡相关的疾病。

在另一优选例中，与IL-8相关的疾病为免疫性、自身免疫性、炎症性、感染性疾病或以人IL-8水平升高或失衡为特征的疾病，尤其是类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、痛风、癌症、流感、痤疮、炎症性肠病(IBD)、牛皮癣、败血症、骨关节炎、侵蚀性关节炎、动脉粥样硬化、移植排斥反应、急性肺病、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、克罗恩病、外周动脉疾病、系统性硬化症、深静脉血栓形成、脑膜炎、脑炎、葡萄膜炎、子宫内膜异位症、囊性纤维化、弥漫性泛细支气管炎、再灌注损伤、囊性纤维变性、血管炎、家族性地中海热、肾炎、慢性肾功能衰竭、青少年糖尿病、紫癜、急性胰腺炎。

在另一优选例中，与IL-8相关的疾病为炎症性或皮肤疾病，例如银屑病、掌跖脓疱病(PPP)、大疱性类天疱疮、天疱疮，接触性皮炎、湿疹、红斑狼疮和特应性皮炎。

在另一优选例中，与IL-8相关的疾病为人类病毒相关的疾病或感染，例如由人类鼻病毒、冠状病毒、其它肠道病毒、疱疹病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒或腺病毒感染和丙型肝炎引起的普通感冒。

在另一优选例中，检测试剂或试剂盒用于检测样品中的IL-8。

在另一优选例中，检测试剂是测试芯片。

本发明第十三方面提供一种体外检测样品中IL-8的方法，所述方法包括步骤：

(1)在体外，将所述样品与如本发明第五方面所述的抗体接触；

(2)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物表示样品中存在IL-8。

在另一优选例中，所述方法是非诊断和非治疗的。

本发明第十四方面提供一种检测板，所述的检测板包括：基片(支撑板)和测试条，所述的测试条包括如本发明第五方面所述的抗体或如本发明第七方面所述的抗体药物偶联物。

本发明第十五方面提供一种阻断或抑制IL-8诱导的活性；和/或预防和/或治疗与IL-8相关的疾病的方法，所述的方法包括给予所述对象如本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第七方面所述的抗体药物偶联物、如本发明第八方面所述的多核苷酸、如本发明第九方面所述的载体、如本发明第十方面所述的遗传工程化的宿主细胞、和/或本发明第十一方面所述的药物组合物，从而阻断或抑制IL-8诱导的活性；和/或预防和/或治疗与IL-8相关的疾病。

在另一优选例中，所述的对象包括人和非人类哺乳动物。

在另一优选例中，所述非人类哺乳动物包括牛、马、羊、狗、猫或小鼠。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为本发明的抗IL-8的抗体与人IL-8结合的ELISA分析实验结果。

图2为使用GATOR仪器进行的生物层干涉测定(BLI)结合分析实验结果。使用GATOR软件获得解离(KD或kd)和结合(ka)速率常数。平衡解离常数(K_D)由kd与ka的比值计算得出。

图3为在ABI7500快速实时PCR仪器中进行的差示扫描荧光法(DSF)分析结果。

图4为通过使用Boyden室的迁移分析测定抗IL-8的抗体对IL-8介导的CXCR1+细胞趋化性的抑制结果，其中，“B30”是指抗体LJH001-B30，“阳性”是指单克隆小鼠IgG1克隆#6217。

具体实施方式

本发明提供一种与IL-8高亲和力结合的抗体，及其用于阻断或抑制IL-8诱导的活性，例如促炎活性、趋化活性和血管生成，以治疗与IL-8相关的免疫性、自身免疫性、炎症性或感染性疾病和癌症。

术语

如本文所用，术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用，不仅包括开放式定义，还包括半封闭式、和封闭式定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。

如本文所用，术语“白细胞介素8”缩写为IL-8。

如本文所用，“结构域”是指多肽中独立于其它区域且折叠成特异结构的区域。

如本文所用，"单链可变区片段(ScFv)"是指衍生自抗体的单链多肽，其保留结合抗原的能力。ScFv的实例包括经重组DNA技术形成的抗体多肽，并且其中免疫球蛋白重链(H链)和轻链(L链)片段的Fv区经由间隔序列连接。各种改进ScFv的方法是本领域技术人员已知的。

如本文所用，术语“给予”是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物应用于动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体。“给予”可以指治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触、以及试剂与流体的接触、流体与细胞的接触。“给予”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理。“给予”当应用于人、动物或研究受试者时，是指治疗、预防或预防性措施，研究和诊断；包括抗人IL-8的抗体与人或动物、受试者、细胞、组织、生理区室或生理流体的接触。

如本文所用，术语“治疗”指给予患者内用或外用治疗剂，包含本发明的任何一种抗人IL-8的抗体及其组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，以有效缓解一种或多种疾病症状的治疗剂的量(治疗有效量)给予患者。

如本文所用，术语“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或情况可以发生但不是必须发生。例如，“任选包含1-3个抗体重链可变区”是指特定序列的抗体重链可变区可以有但不是必须有，可以是1个、2个或3个。

本发明所述的“序列同一性”表示当具有适当的替换、插入或缺失等突变的情况下进行最佳比对和比较时，两个核酸或两个氨基酸序列之间的同一性程度。本发明中所述的序列和其具有同一性的序列之间的序列同一性可以至少为85％、90％或95％，优选至少为95％。非限制性实施例包括85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％。

在本发明中，氨基酸序列是从N末端到C末端。

IL-8

IL-8是一种多肽，IL-8可由成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、树状细胞(DC)、淋巴细胞、角质形成细胞、黑色素细胞、肝细胞和各种肿瘤细胞分泌。

抗体

如本文所用，术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其较链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1，IgG2、IgG3，IgG4。轻链根据恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。

本发明所述的抗体轻链可进一步包含轻链恒定区，所述的轻链恒定区包含人源或鼠源的κ、λ链或其变体。

在本发明中，本发明所述的抗体重链可进一步包含重链恒定区，所述的重链恒定区包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区和4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序序为:FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。轻链的3个CDR区指CDR1'、CDR2'和CDR3'；重链的3个CDR区指CDR1，CDR2和CDR3。

本发明的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。术语“鼠源抗体”在本发明中为根据本领域知识和技能制备的抗人IL-8的单克隆抗体。制备时用IL-8抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本发明一个优选的实施方案中，所述的鼠源IL-8抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。

术语“嵌合抗体”是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。

术语“人源化抗体”，也称为CDR移植抗体，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。人源化抗体可以克服嵌合抗体由于携带大量鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。

术语“抗体的抗原结合片段”(或简称“抗体片段”)是指抗体的保持特异性结合抗原(例如，IL-8)的能力的一个或多个片段。己显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语“抗体的抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括

(i)Fab片段，由V_L、V_H、CL和CH1结构域组成的单价片段；

(ii)F(ab')₂片段，包含通过较链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；

(iii)由V_H和CH1结构域组成的Fd片段；

(iv)由抗体的单臂的V_H和V_L结构域组成的Fv片段。

Fv抗体含有抗体重链可变区、轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般的，Fv抗体还包含V_H和V_L结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。

术语“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位(例如，IL-8分子上的特定部位)。表位通常以独特的空间构象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续或非连续的氨基酸。

术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。

术语“竞争结合”是指与本发明的单克隆抗体识别人IL-8的胞外区上的相同表位(也称为抗原决定簇)或相同表位的一部分并与所述抗原结合的抗体。与本发明的单克隆抗体结合相同表位的抗体是指识别并结合于本发明的单克隆抗体所识别的人IL-8的氨基酸序列的抗体。

术语“KD”或“Kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。

如本文所用，术语“抗原决定簇”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

本发明不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。

在本发明中，抗体包括用本领域技术人员熟知技术所制备的鼠的、嵌合的、人源化的或者全人的抗体。重组抗体，例如嵌合的和人源化的单克隆抗体，包括人的和非人的部分，可以采用本领域熟知的DNA重组技术制备。

如本文所用，术语“单克隆抗体”指得自单个细胞来源的克隆分泌的抗体。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原表位。所述的细胞可能是真核的、原核的或噬菌体的克隆细胞株。

在本发明中，抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性、或者更多的多重特异性。

在本发明中，本发明的抗体还包括其保守性变异体，指与本发明抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。

表A

IL-8特异性抗体

本发明提供抗人IL-8抗体(以下简称IL-8抗体)。具体地，本发明提供一种针对IL-8的高特异性和高亲和力的抗体，其包括重链和轻链，所述重链含有重链可变区(V_H)氨基酸序列，所述轻链含有轻链可变区(V_L)氨基酸序列。

在本发明的一种优选实施例中，所述重链可变区域包括以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:1所示的CDR1，

如SEQ ID NO:2所示的CDR2，和

如SEQ ID NO:3所示的CDR3。

优选地，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

在本发明的一种优选实施例中，所述轻链可变区域包括以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:4所示的CDR1'，

如SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和

如SEQ ID NO:6所示的CDR3'。

优选地，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列包括经过添加、缺失、修饰和/或取代至少1个(如1-5、1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸的具有IL-8结合亲和力的序列。

在另一优选例中，所述经过添加、缺失、修饰和/或取代至少1个(如1-5、1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸序列所形成的序列优选为同源性为至少80％，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

本发明的抗体可以是双链或单链抗体，并且可以是选自动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，更优选为人源化抗体、人-动物嵌合抗体，更优选为全人源化抗体。

本发明所述抗体衍生物可以是单链抗体、和/或抗体片段，如：Fab、Fab'、(Fab')₂、或该领域内其他已知的抗体衍生物等，以及IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM抗体或其他亚型的抗体中的任意一种或几种。

其中，所述动物优选为哺乳动物，如鼠。

本发明抗体可以是靶向人IL-8的鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、CDR嫁接和/或修饰的抗体。

在本发明的一种优选实施例中，上述SEQ ID NO:1、2和3中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有IL-8结合亲和力的序列，位于重链可变区(V_H)的CDR区。

在本发明的一种优选实施例中，上述SEQ ID NO:4、5和6中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有IL-8结合亲和力的序列，位于轻链可变区(V_L)的CDR区。

在本发明的一种优选实施例中，V_H CDR1、CDR2、CDR3分别独立地选自SEQ ID NO:1、2和3中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有IL-8结合亲和力的序列；V_L CDR1'、CDR2'、CDR3'分别独立地选自SEQ ID NO:4、5和6中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有IL-8结合亲和力的序列。

本发明上述内容中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量，优选为不超过初始氨基酸序列总氨基酸数量的40％，更优选为不超过35％，更优选为1-33％，更优选为5-30％，更优选为10-25％，更优选为15-20％。

在本发明中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量通常是1、2、3、4或5个，较佳地为1-3个，更佳地为1-2个，最佳地为1个。

在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区序列，其包含选自SEQ ID NO:7的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO：7具有超过80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区序列，其包含选自SEQ ID NO:8的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO：8具有超过80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，重链可变区序列包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，轻链可变区序列包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列。

抗体的制备

任何适于制备单克隆抗体的方法都可用于产生本发明的IL-8抗体。例如，可以用连接或天然存在的IL-8蛋白或其片段免疫动物。可以使用合适的免疫接种方法，包括佐剂、免疫刺激剂、重复加强免疫接种，可以使用一种或多种途径。

任何合适形式的IL-8都可以作为免疫原(抗原)，用于产生对IL-8特异的非人抗体，筛选所述抗体的生物学活性。免疫原可以单独使用，或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强剂组合使用。免疫原可以由天然来源纯化，或者在遗传修饰的细胞中产生。编码免疫原的DNA在来源上可以是基因组或非基因组的(例如cDNA)。可以使用合适的遗传载体表达编码免疫原的DNA，所述载体包括但不限于腺病毒载体、杆状病毒载体、质粒和非病毒载体。

人源化抗体可以选自任何种类的免疫球蛋白，包括IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在本发明中，抗体是IgG抗体，使用IgG1或IgG4亚型。

同样，任一类轻链都可以在本文的化合物和方法中使用。具体地说，κ、λ链或其变体在本发明的化合物和方法中是可以用的。

本发明抗体或其片段的DNA分子的序列可以用常规技术，比如利用PCR扩增或基因组文库筛选等方法获得。此外，还可将不同轻链和重链的编码序列，以不同的组合形式融合在一起，形成单链抗体。并通过对不同组合或不同链接修饰的单链抗体的功能进行检测分析，获得优化的单链抗体。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。

术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但优选是双链DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。

术语“载体”是指能够运输己与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。

本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如植物或动物细胞(如哺乳动物细胞)。

本发明中所述的用重组DNA转化宿主细胞的步骤可用本领域熟知的技术进行。获得的转化子可用常规方法培养，转化子表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，用常规培养基在合适的条件下培养。

通常，在适合本发明抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞。然后用常规的免疫球蛋白纯化步骤，如蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析或亲和层析等本领域技术人员熟知的常规分离纯化手段纯化得到本发明的抗体。

所得单克隆抗体可用常规手段来鉴定。比如，单克隆抗体的结合特异性可用免疫沉淀或体外结合试验(如放射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定。

载体

编码期望分子的核酸序列可利用在本领域中已知的重组方法获得，诸如例如通过从表达基因的细胞中筛选文库，通过从已知包括该基因的载体中得到该基因，或通过利用标准的技术，从包含该基因的细胞和组织中直接分离。可选地，感兴趣的基因可被合成生产。

本发明也提供了其中插入本发明的表达盒的载体。源于逆转录病毒诸如慢病毒的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为它们允许转基因长期、稳定的整合并且其在子细胞中增殖。慢病毒载体具有超过源自致癌逆转录病毒诸如鼠科白血病病毒的载体的优点，因为它们可转导非增殖的细胞，诸如肝细胞。它们也具有低免疫原性的优点。

简单概括，通常可操作地连接本发明的表达盒或核酸序列至启动子，并将其并入表达载体。该载体适合于复制和整合真核细胞。典型的克隆载体包含可用于调节期望核酸序列表达的转录和翻译终止子、初始序列和启动子。

本发明的表达构建体也可利用标准的基因传递方案，用于核酸免疫和基因疗法。基因传递的方法在本领域中是已知的。在另一个实施方式中，本发明提供了基因疗法载体。

该核酸可被克隆入许多类型的载体。例如，该核酸可被克隆入如此载体，其包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特定的感兴趣载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。

进一步地，表达载体可以以病毒载体形式提供给细胞。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包含在至少一种有机体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制酶位点和一个或多个可选择的标记。

已经开发许多基于病毒的系统，用于将基因转移入哺乳动物细胞。例如，逆转录病毒提供了用于基因传递系统的方便的平台。可利用在本领域中已知的技术将选择的基因插入载体并包装入逆转录病毒颗粒。该重组病毒可随后被分离和传递至体内或离体的对象细胞。许多逆转录病毒系统在本领域中是已知的。在一些实施方式中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体在本领域中是已知的。在一个实施方式中，使用慢病毒载体。

额外的启动子元件，例如增强子，可以调节转录开始的频率。通常地，这些位于起始位点上游的30-110bp区域中，尽管最近已经显示许多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔经常是柔性的，以便当元件相对于另一个被倒置或移动时，保持启动子功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可被增加隔开50bp，活性才开始下降。取决于启动子，表现出单个元件可合作或独立地起作用，以起动转录。

合适的启动子的一个例子为即时早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列为能够驱动可操作地连接至其上的任何多核苷酸序列高水平表达的强组成型启动子序列。合适的启动子的另一个例子为延伸生长因子-1α(EF-1α)。然而，也可使用其他组成型启动子序列，包括但不限于类人猿病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳癌病毒(MMTV)、人免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、鸟类白血病病毒启动子、艾伯斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒即时早期启动子、鲁斯氏肉瘤病毒启动子、以及人基因启动子，诸如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红素启动子和肌酸激酶启动子。进一步地，本发明不应被限于组成型启动子的应用。诱导型启动子也被考虑为本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供了分子开关，其能够当这样的表达是期望的时，打开可操作地连接诱导型启动子的多核苷酸序列的表达，或当表达是不期望的时关闭表达。诱导型启动子的例子包括但不限于金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。

将基因引入细胞和将基因表达入细胞的方法在本领域中是已知的。在表达载体的内容中，载体可通过在本领域中的任何方法容易地引入宿主细胞，例如，哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞。例如，表达载体可通过物理、化学或生物学手段转移入宿主细胞。

将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染法、粒子轰击、微注射、电穿孔等等。生产包括载体和/或外源核酸的细胞的方法在本领域中是公知的。将多核苷酸引入宿主细胞的优选方法为磷酸钙转染。

将感兴趣的多核苷酸引入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，特别是逆转录病毒载体，已经成为最广泛使用的将基因插入哺乳动物例如人细胞的方法。其他病毒载体可源自慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺伴随病毒等等。

将多核苷酸引入宿主细胞的化学手段包括胶体分散系统，诸如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠；和基于脂质的系统，包括水包油乳剂、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内传递工具的示例性胶体系统为脂质体(例如，人造膜囊)。

在使用非病毒传递系统的情况下，示例性传递工具为脂质体。考虑使用脂质制剂，以将核酸引入宿主细胞(体外、离体或体内)。在另一方面，该核酸可与脂质相关联。与脂质相关联的核酸可被封装入脂质体的水性内部中，散布在脂质体的脂双层内，经与脂质体和寡核苷酸两者都相关联的连接分子附接至脂质体，陷入脂质体，与脂质体复合，分散在包含脂质的溶液中，与脂质混合，与脂质联合，作为悬浮液包含在脂质中，包含在胶束中或与胶束复合，或以其他方式与脂质相关联。与组合物相关联的脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体不限于溶液中的任何具体结构。例如，它们可存在于双分子层结构中，作为胶束或具有“坍缩的”结构。它们也可简单地被散布在溶液中，可能形成大小或形状不均一的聚集体。脂质为脂肪物质，其可为天然发生或合成的脂质。例如，脂质包括脂肪小滴，其天然发生在细胞质以及包含长链脂肪族烃和它们的衍生物诸如脂肪酸、醇类、胺类、氨基醇类和醛类的该类化合物中。

在本发明的一个优选地实施方式中，所述载体为慢病毒载体。

制剂

本发明提供一种含有本发明第一方面所述的重链可变区、本发明第二方面所述的重链、本发明第三方面所述的轻链可变区、本发明第四方面所述的轻链、第五方面所述的抗体、本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第七方面所述的抗体药物偶联物、如本发明第八方面所述的多核苷酸、如本发明第九方面所述的载体和/或如本发明第十方面所述的遗传工程化的宿主细胞，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一个实施方式中，所述制剂为液态制剂。优选地，所述制剂为注射剂。

在一个实施方式中，所述制剂可包括缓冲液诸如中性缓冲盐水、硫酸盐缓冲盐水等等；碳水化合物诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸诸如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂诸如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。本发明的制剂优选配制用于静脉或腹腔内施用。

检测用途和试剂盒

本发明的抗体可用于检测应用，例如用于检测样本，从而提供诊断信息。

本发明中，所采用的样本(样品)包括细胞、组织样本和活检标本。本发明使用的术语“活检”应包括本领域技术人员已知的所有种类的活检。因此本发明中使用的活检可以包括例如通过内窥镜方法或器官的穿刺或针刺活检制备的组织样本。

本发明中使用的样本包括固定的或保存的细胞或组织样本。

本发明还提供一种指含有本发明的抗体(或其片段)、scFv、的试剂盒，在本发明的一个优选例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、缓冲剂等。在优选例中，本发明的抗体可以固定于检测板。

本发明的主要优点包括：

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

1.1噬菌体抗体Fab文库的筛选

从三优生物医药有限公司创建的组合噬菌体Fab展示文库中获得特异性噬菌体人抗IL-8Fab的抗体。通过噬菌体展示法对人IL-8进行筛选[Science.1985年06月14；228(4705):1315-7；Nature.1991年08月15；352(6336):624-8]，使用磁性粒子、KingFisher仪器以及基于免疫管的筛选方法。

在生物筛选中，通过将蛋白与颗粒在室温下和在旋转器上孵育1h将抗原(生物素化的IL-8)固定在链霉亲和素磁性颗粒的表面。然后用PBS(pH 7.4)洗涤颗粒，然后用2.5％BSA PBS(pH7.4)溶液封闭颗粒1h。然后将含有2.5％BSA的噬菌体PBS(pH 7.4)溶液加入到抗原结合的磁性颗粒中。将混合物在室温下搅拌孵育40min。用PBST(含0.05％吐温-20的PBS)洗涤磁性颗粒数次，以去除未结合的噬菌体。在搅拌下，用胰蛋白酶溶液在15min内洗脱与磁性颗粒表面上的抗原保持结合的噬菌体。用获得的噬菌体感染大肠杆菌(SS320)；噬菌体在感染的大肠杆菌中产生并分离用于下一轮筛选。三轮筛选后，从噬菌体中分离DNAs(噬菌粒)，并将抗体可变结构域基因克隆到表达载体中，用于在大肠杆菌细胞中产生Fab。除非另有说明，噬菌体展示法衍生的抗IL-8抗体用于以下实施例中。

1.2.特异性结合人IL-8的Fab筛选

ELISA用于筛选与人IL-8的结合的Fab。所有后续步骤均根据标准ELISA方案进行。ELISA板孔涂有30μl人IL-8(2μg/ml)，密封并在4℃下孵育过夜。用PBST(含0.05％吐温-20的PBS)洗涤板孔三次。为了阻断非特异性结合，加入20μL PMSM的阻断缓冲液(含5％脱脂牛奶的PBS)。将平板在摇床上室温孵育1h。用PBST(含0.05％吐温-20的PBS)洗涤三次后，每孔加入30μl含有与等体积PMSM(含5％脱脂牛奶的PBS)混合的待测Fab的测试细胞上清液。再次对孔板孵育，在室温下振荡1h，然后用PBST(含0.05％吐温-20的PBS)缓冲液洗涤每个板孔6次。然后在PBST(含0.05％吐温-20的PBS)中以1:8000的比例加入抗M13-HRP偶联的二抗(30μL/孔)。将孔板在旋转振荡器上振荡(50min，室温)，并用PBST缓冲液(含0.05％吐温-20的PBS)洗涤9次。通过加入TMB(30μL/孔)直到饱和(平均5-10min)来显示色度信号，然后通过加入终止溶液(30μL/孔，2M硫酸)终止显色。使用读板器(Molecular Device)在450nm的波长下测量色度信号。

1.3.抗IL-8的抗体的亲和力分析

将来自“1.1噬菌体抗体Fab文库的筛选”中Fab序列的克隆的V_L和V_H区亚克隆到免疫球蛋白表达载体(pcDNA3.4)的表达盒中。将表达载体转染到中国仓鼠卵巢(CHO-s)细胞中。将培养物在以135rpm旋转的轨道振荡平台上孵育。在4-7天后收集培养基。在通过蛋白-A亲和层析纯化后，通过ELISA和在GATOR仪器中使用生物层干涉测定(BLI)技术的动力学分析来评估从CHO细胞产生的重组抗体的亲和力。

ELISA用于筛选与人IL-8结合的抗IL-8的抗体。ELISA板孔涂有30μl人IL-8(2μg/ml)，密封并在4℃下孵育过夜。用PBST洗涤板孔三次。加入20μL PMSM的阻断缓冲液，将平板在摇床上室温孵育1h。用PBST洗涤三次后，每孔加入30μl含有与等体积PMSM混合的待测抗IL-8的单克隆抗体。再次对孔板孵育，在室温下振荡1h，然后用PBST缓冲液洗涤每个板孔3次以去除未结合的抗体。然后在PBST中以1:5000的比例加入抗人Kappa+Lambda HRP(30μL/孔)，孵育1h。用PBST缓冲液洗涤6次。通过加入TMB(30μL/孔)用于显色，然后通过加入终止溶液(30μL/孔，2M硫酸)来终止显色。使用合适的读板器(Molecular Device)在450nm的波长下测量光密度。如图1所示，抗体以高亲和力与人IL-8结合。

BLI是一种无标记的生物分子检测方法，通过测量生物传感器表面反射的白光的干涉图案来检测生物分子相互作用。使用GATOR软件获得解离(kd)和结合(ka)速率常数的数据。平衡解离常数(K_D)由kd与ka的比值计算得出。如图2和表1所示，所有抗IL-8的单克隆抗体以高亲和力与IL-8结合。

表1筛选的抗IL-8的单克隆抗体的动力学数据

备注：“E”是科学记数法的表达方式，例如，“1.93E-09”表示1.93×10^-9，“2.41E-10”表示2.41×10^-10；“1.70E+06”表示1.70×10⁶，“8.67E+05”表示8.67×10⁵，以此类推。

其中，抗体LJH001-B30的重链可变区具有以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:1所示的CDR1(GGTFSSYAIS)，

如SEQ ID NO:2所示的CDR2(GIIPIFGTANYAQKFQG)，和

如SEQ ID NO:3所示的CDR3(PRYFDWSEDHYDAFDI)；

抗体LJH001-B30的重链可变区具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列(QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQ KFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASPRYFDWSEDHYDAFDIWGQGTMVTVSS)；

抗体LJH001-B30的轻链可变区具有以下三个互补决定区(CDRs)：

如SEQ ID NO:4所示的CDR1'(SGSSSNIGSYTVN)，

如SEQ ID NO:5所示的CDR2'(SNTQRPS)，和

如SEQ ID NO:6所示的CDR3'(AAWDDSLHGAV)；

抗体LJH001-B30的轻链可变区具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列(QSALTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSYTVNWFQQLPGTAPKLLIYSNTQRPSGVPDRFSG SKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLHGAVFGGGTQLAVL)。

1.4抗IL-8抗体稳定性测定

在ABI7500快速实时PCR仪器中，通过差示扫描荧光法(DSF)技术测定抗IL-8的抗体的热稳定性。DSF可以方便地用于确定蛋白质的融解温度(Tm)。

DSF(也称为蛋白质热位移测定)通过测量优先结合未折叠蛋白质(如Sypro橙染，其结合到通过展开暴露的蛋白质的疏水区域)的染料的荧光变化来测定热诱导的蛋白质变性，这通常通过使用实时PCR仪来进行。蛋白质的稳定性与其未折叠的吉布斯自由能有关，其具有温度依赖性。简言之，在ABI7500快速实时PCR中，将20μl 0.2mg/ml抗IL-8的抗体样品PBS(pH 7.4)(含有100×SYPRO橙染)以1℃递增方式从25℃加热至99℃，激发波长为492nm，发射波长为580nm。使用如玻尔兹曼方程之类的简单方程来计算过渡曲线的拐点(Tm)，结果如图3所示。

1.5抑制IL-8介导的CXCR1/2+细胞趋化

通过Boyden室的迁移分析测定IL-8抗体LJH001-B30对IL-8诱导的Jurkat-CXCR1(过度表达人CXCR1的Jurkat细胞)迁移能力的抑制。将人IL-8(20ng/ml)与不同浓度的抗IL-8的抗体LJH001-B30在Boyden室的下隔室中孵育。Jurkat-CXCR1(4×10⁵个细胞)在上隔室中孵育，在37℃下孵育4-6h测定。图4所示的数据显示抗IL-8的抗体以剂量依赖性方式抑制Jurkat-CXCR1的趋化性。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种抗IL-8的抗体，其特征在于，所述抗体包括：

(1)重链可变区；和

(2)轻链可变区；

所述重链可变区域包括以下三个互补决定区（CDRs）：

如SEQ ID NO:1所示的CDR1，

如SEQ ID NO:2所示的CDR2，和

如SEQ ID NO:3所示的CDR3；

所述轻链可变区域包括以下三个互补决定区（CDRs）：

如SEQ ID NO:4所示的CDR1'，

如SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和

如SEQ ID NO:6所示的CDR3'。

2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；和

所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

3.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白由以下组分组成：

(i)权利要求1所述的抗体；和

(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

4.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：

(1)如权利要求1所述的抗体；或

(2) 如权利要求3所述的重组蛋白。

5.一种载体，其特征在于，所述的载体含有如权利要求4所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的载体，其特征在于，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒、逆转录病毒，或其他载体。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包括如权利要求6所述的载体或所述宿主细胞的基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。

8.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：

如权利要求1所述的抗体、如权利要求3所述的重组蛋白、如权利要求4所述的多核苷酸、如权利要求5所述的载体和/或如权利要求7所述的遗传工程化的宿主细胞。

9.一种检测板，其特征在于，所述的检测板包括：基片和测试条，所述的测试条包括如权利要求1所述的抗体。