CN118956830B - 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用 - Google Patents

一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用

Info

Publication number
CN118956830B
CN118956830B CN202411358848.1A CN202411358848A CN118956830B CN 118956830 B CN118956830 B CN 118956830B CN 202411358848 A CN202411358848 A CN 202411358848A CN 118956830 B CN118956830 B CN 118956830B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mutant
beta
glucosidase
enzyme
hydrolyzing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202411358848.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN118956830A (zh
Inventor
张学成
董庆莲
洪登望
房伟
肖亚中
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui University
Original Assignee
Anhui University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui University filed Critical Anhui University
Priority to CN202411358848.1A priority Critical patent/CN118956830B/zh
Publication of CN118956830A publication Critical patent/CN118956830A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN118956830B publication Critical patent/CN118956830B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/101—Plasmid DNA for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种β‑葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用。本发明以来自海洋未培养微生物的β‑葡萄糖苷酶为基础，通过同源建模和分子对接进行设计改造，获得了水解丙二酰染料木苷效率和稳定性提升的突变酶。在相同质量酶蛋白条件下，突变酶水解丙二酰染料木苷的比率较出发酶提高了1.5倍；30‑45℃条件下，突变酶的半衰期较出发酶提高了3.7倍。该突变体在水解大豆异黄酮生产苷元中具有潜在的应用价值。

Description

一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用。
背景技术
β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)属于糖苷水解酶类，由Liebig和Wohler于19世纪30年代在苦杏仁中首次发现，它可水解末端、非还原性的烃基-β-葡萄糖苷或芳香基-β-葡萄糖苷的β-D-糖苷键，同时释放葡萄糖和相应的配基。β-葡萄糖苷酶对多种底物都有活性，在生物燃料生产、食品加工、制药等行业中起到非常重要的作用。
大豆异黄酮是一种多酚类混合物，在预防和治疗癌症、心血管疾病及骨质疏松症等方面有着重要作用。自然界中的异黄酮有12种单体形式，分为糖苷和苷元两种形式，苷元活性远远大于糖苷且异黄酮苷元易被人体吸收。因此，将异黄酮糖苷转化成苷元，增加大豆制品中异黄酮苷元的含量引起人们兴趣。丙二酰染料木苷是大豆异黄酮中的一种，其染料木苷第6’位的羟基被丙二酰取代。目前已报道的大豆粉中大豆异黄酮的主要形态是丙二酰苷类，约占大豆异黄酮总量的70％。大豆黄浆水中含有大豆异黄酮，其中丙二酰基染料木苷成分占比约40％。可用β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮生成苷元。但是大多数β-葡萄糖苷酶对大豆异黄酮的糖基具有严格的专一性，对丙二酰基葡萄糖苷不具有活性。故通过设计改造获得可水解丙二酰基染料木苷的β-葡萄糖苷酶，用于水解大豆黄浆水中的大豆异黄酮，可避免资源的浪费。
发明内容
本发明提供了一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用。本发明以来源于海洋未培养微生物的β-葡萄糖苷酶经过半理性改造的突变体为基础，通过同源建模和分子对接设计突变体，将突变体在大肠杆菌中重组表达和纯化制备后进行表征筛选，获得了水解丙二酰染料木苷效率提升和稳定性提升的β-葡萄糖苷酶。以pNPG为底物时，测得突变体的稳定性提高了3.7倍。大豆异黄酮转化实验中，在35℃反应体系中加入8mg的突变酶水解30min可将黄浆水中的丙二酰染料木苷水解88％左右，相同蛋白质量的出发酶在相同反应条件下的水解率只有35％。这些结果说明该突变体在水解大豆异黄酮生产苷元中具有潜在的应用价值。
本发明β-葡萄糖苷酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列中第301位的谷氨酰胺突变为丙氨酸。
编码所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
本发明表达β-葡萄糖苷酶突变体的菌株，含有所述突变质粒。
本发明表达β-葡萄糖苷酶突变体的菌株，其分类命名为Escherichia coli BL21(DE3)/p ET22b(+)-bgl2A:Q301A，已送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 20241888，保藏时间为2024年9月2日，保藏地址：中国·武汉·武汉大学。
本发明表达β-葡萄糖苷酶突变体的菌株的构建方法，包括如下步骤：
首先以农杆菌Agrobacterium的β-葡萄糖苷酶SghA(PDB code:6rjm)结构为模板，利用Swiss-Model对β-葡萄糖苷酶Bgl2A的结构进行同源建模。用Autodock软件通过加氢、计算电荷、添加原子类型等步骤对受体大分子(酶蛋白)进行预处理，导出为pdbqt格式备用。配体小分子丙二酰染料木苷在PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下载，用Autodock软件通过调整电荷、选择配体可扭转的键等步骤对配体小分子进行预处理，导出为pdbqt格式备用。用Autodock vina执行分子对接的计算，Pymol分析对接结果。对接一共有19种构象，根据丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子在底物通道内的朝向，将对接结果分为两类，一是丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子朝向底物通道内部，一是丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子朝向底物通道的外部。通过对结合能以及丙二酰染料木苷的糖苷键距离蛋白催化残基(E170、E352)的距离分析，初步推测糖苷酶在水解丙二酰染料木苷时，葡萄糖分子是朝向底物通道内部的。因此对葡萄糖分子朝向底物通道内部的六种构象进行分析，选择了与丙二酰基有氢键相互作用的氨基酸。其中包含Bgl2A:Q301，将其突变成侧链较小的氨基酸即丙氨酸，目的使蛋白的底物通道变大，能够容纳较大的丙二酰化葡萄糖基，进而提高糖苷酶对丙二酰基类底物的活性。
根据β-葡萄糖苷酶Bgl2A的基因序列，设计并合成突变引物(表1)，以含有β-葡萄糖苷酶Bgl2A基因的重组质粒为模板，以上述的合成突变引物为引物，基于重叠延伸PCR的方法进行定点突变(图1和图2)。
将突变基因与pEASY-T3质粒连接并转化大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞，挑取阳性克隆，对突变基因进行DNA序列测定。挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有突变β-葡萄糖苷酶基因的pEASY-T3重组质粒，用Nde I和Xho I双酶切pEASY-T3重组质粒和表达质粒载体，然后用T4DNA连接酶连接酶切后的突变基因与表达质粒载体，得到连接产物；连接产物转化宿主菌，筛选阳性克隆，得到含有本发明突变基因的工程菌株。
上述构建方法中所述表达质粒载体包括pCold、pET15、pET22或pET28等。
上述构建方法中所述宿主菌包括E.coli BL21(DE3)、E.coli DH5α、E.coli JM109或E.coli Rosetta等。
本发明β-葡萄糖苷酶突变体可由所述工程菌株发酵、表达和纯化获得(图3)。
本发明β-葡萄糖苷酶突变体在水解丙二酰染料木苷中的应用。
本发明对突变体蛋白和原始出发酶蛋白的最适pH、最适温度、稳定性等进行了测定和比较。突变体的稳定性得到了提升，在30-35℃、pH7.0-7.5条件下，出发酶半衰期为1.5h，突变体Bgl2A:Q301A半衰期为7h，突变体的稳定性提高了3.7倍，且突变并未引起最适温度和最适pH的变化(图4)。
在大豆异黄酮水解实验中，在35℃反应体系中加入8mg的突变酶水解30min可将大豆黄浆水中的丙二酰染料木苷水解88％左右，比相同反应条件下相同蛋白质量的出发酶的水解率35％提高了1.5倍(图5)。
附图说明
图1、图2为本发明PCR扩增产物的电泳图谱：图1中各泳道分别为DNAmarker、PCR扩增的片段Q301A-S、Q301A-X；图2中各泳道分别为DNAmarker、Q301A-S和Q301A-X组合为模板的PCR扩增产物。
图3为纯化的突变蛋白和出发酶Bgl2A的SDS-PAGE图谱：1为Bgl2A破碎上清，2为破碎沉淀，3为Bgl2A纯酶，4为Q301A破碎上清，5为Q301A破碎沉淀，6为Q301A纯酶，M为蛋白marker。
图4中a为最适温度测定结果，b为最适pH测定结果，c为稳定性测定结果。
图5为出发酶和突变体对丙二酰染料木苷水解率结果。
具体实施方式
下列实施例中的实施方法，如无特别说明，均为常规方法。
(一)含有本发明β-葡萄糖苷酶突变基因的表达菌株的构建
1、β-葡萄糖苷酶基因突变位点的选择
基于序列比对，Bgl2A与来自农杆菌Agrobacterium tumefaciensA6的β-葡萄糖苷酶SghA(PDB code:6rjm)最为相似，氨基酸序列一致性为44％。以SghA的结构作为模板，利用Swiss-Model(http://swissmodel.expasy.org/)对β-葡萄糖苷酶Bgl2A的结构进行同源建模。
用Autodock软件通过加氢、计算电荷、添加原子类型等步骤对受体大分子(酶蛋白)进行预处理，导出为pdbqt格式备用。配体小分子丙二酰染料木苷在PubChem
(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下载，用Autodock软件通过调整电荷、选择配体可扭转的键等步骤对配体小分子进行预处理，导出为pdbqt格式备用。用Autodockvina执行分子对接的计算，Pymol分析对接结果。对接一共有19种构象，根据丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子在底物通道内的朝向，将对接结果分为两类，一是丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子朝向底物通道内部，一是丙二酰染料木苷分子上的葡萄糖分子朝向底物通道的外部。通过对结合能以及丙二酰染料木苷的糖苷键距离蛋白催化残基的距离分析，初步推测糖苷酶在水解丙二酰染料木苷时，葡萄糖分子是朝向底物通道内部的。因此对葡萄糖分子朝向底物通道内部的六种构象进行分析，选择了与丙二酰基有氢键相互作用的氨基酸。其中包含Bgl2A:Q301,将其突变成侧链较小的氨基酸即丙氨酸，目的使蛋白的底物通道变大，能够容纳侧链较大的丙二酰染料木苷，进而提高糖苷酶对丙二酰基类底物的活性。
2、突变引物的设计和突变基因的PCR扩增
根据β-葡萄糖苷酶Bgl2A的基因序列：SEQ ID NO:2(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1)，以及选定的突变位点301Q，设计以下4个定点突变引物(表1)。
表1引物序列
3、表达载体的构建
将步骤2中得到PCR扩增产物，与pEASY-T3质粒连接，建立如下酶切体系：10ngpEASY-T3载体，70ng PCR扩增产物，25℃连接15min。连接产物热激转化大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞，得到的转化子测序验证是否突变；挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有本发明β-葡萄糖苷酶突变基因的pEASY-T3重组质粒；用Nde I和Xho I双酶切所得的pEASY-T3重组质粒和pET-22b(+)载体，然后用T4DNA连接酶将酶切后的突变基因与表达质粒载体连接，建立如下酶切体系：25ngpET-22b(+)载体，50ng突变基因酶切片段，2μL 10×ligationbuffer，1μLT4DNA连接酶，补水至20μL，22℃连接1h，得到连接产物；连接产物转化宿主菌，得到的转化子测序验证是否突变，挑选序列正确的转化子得到含有本发明突变基因的工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-22b(+)-Bgl2A:Q301A。
本发明表达β-葡萄糖苷酶突变体的菌株，其分类命名为Escherichia coli BL21(DE3)/p ET22b(+)-bgl2A:Q301A，已送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 20241888，保藏时间为2024年9月2日，保藏地址：中国·武汉·武汉大学。
(二)含本发明β-葡萄糖苷酶突变基因工程菌的表达与蛋白纯化
将(一)基因工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)/pET22b(+)-bgl2A:Q301A接种于含有氨苄青霉素的400mL LB液体培养基中，放置于37℃、200rpm条件下培养至OD600为0.6，以培养LB培养基为空白对照；加入终浓度为0.2mM的IPTG进行诱导，并于16℃、120rpm条件下继续培养16小时；4℃、8000g离心收集菌体，加入3倍菌液体积的Bindingbuffer，冰浴条件下350W超声30min破碎细胞，12000g离心收集上清，得到粗酶液。粗酶液经过Ni-NTA柱层析进行纯化。洗脱液中咪唑浓度为60mM，洗脱3个柱体积，得到的蛋白经过检测达到SDS-PAGE纯度。
(三)β-葡萄糖苷酶突变体比活力的检测
反应体系为500μL，在pH6.5的citrate-Na2HPO4缓冲液中加入终浓度为5mM的pNPG，45℃下预热5min后加入酶液，反应5min后加入500μL 1M Na2CO3终止反应。实验组做3个平行实验，对照组以缓冲液代替酶液。以对照组调零，测定405nm下的光吸收值。酶活力(U)定义为：每分钟产生1μmol pNP所用的酶量。
(四)β-葡萄糖苷酶稳定性的检测
在30-35℃、pH7.0-7.5条件下，对Bgl2A与突变体进行热处理，每隔半小时或一小时取样，以初始酶活为100％，计算热处理一定时间后的酶活剩余率，公式如下：酶活剩余率＝(热处理前酶活-损失酶活)/热处理酶活×100％。
(五)β-葡萄糖苷酶突变体在大豆异黄酮水解中的应用
利用实验室前期已建立的黄浆水处理工艺对黄浆水进行处理，首先将黄浆水体积浓缩至1/5，然后加入浓缩液体积3/4的无水乙醇，室温下充分混匀后8000rpm离心20min，从而得到异黄酮的萃取溶液。由于乙醇的终浓度偏高导致β-葡萄糖苷酶非常容易失活，因此，前期的工艺选择加入等体积的水将乙醇浓度稀释到20％(v/v)左右，NaOH调节pH后加入β-葡萄糖苷酶进行水解异黄酮；取10ml黄浆水在35℃水浴锅孵育五分钟，加入8mg的酶，反应30min，取1mL样品，并立即加入1mL 70％乙醇终止反应。全部以不加酶为对照。用1mL注射器取终止反应液并过0.22μm有机系和水系滤膜，HPLC检测糖苷底物的消耗成分。

Claims (5)

1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.表达权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体的菌株，其特征在于：
所述菌株的分类命名为Escherichia coli BL21(DE3)/p ET22b(+)-bgl2A:Q301A，已送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 20241888 ，保藏时间为2024年9月2日，保藏地址：中国·武汉·武汉大学。
4.权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体在水解丙二酰染料木苷中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
水解体系的温度为30-35℃，pH值7.0-7.5。
CN202411358848.1A 2024-09-27 2024-09-27 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用 Active CN118956830B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202411358848.1A CN118956830B (zh) 2024-09-27 2024-09-27 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202411358848.1A CN118956830B (zh) 2024-09-27 2024-09-27 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN118956830A CN118956830A (zh) 2024-11-15
CN118956830B true CN118956830B (zh) 2025-09-09

Family

ID=93392880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202411358848.1A Active CN118956830B (zh) 2024-09-27 2024-09-27 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN118956830B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007028912A (ja) * 2005-07-22 2007-02-08 Gekkeikan Sake Co Ltd 新規β−グルコシダーゼ、及びその利用
CN117683752A (zh) * 2023-12-13 2024-03-12 安徽大学 一种稳定性提升的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2602317T3 (da) * 2009-11-20 2017-11-13 Danisco Us Inc Beta-glucosidasevarianter med forbedrede egenskaber
CN101955922A (zh) * 2010-08-02 2011-01-26 安徽大学 一种葡萄糖耐受的β-葡萄糖苷酶及其表达
CN106282217B (zh) * 2016-09-21 2019-12-06 安徽大学 一种β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的表达载体及表达工程菌和表达方法
CN107142254B (zh) * 2017-05-23 2020-07-14 中国农业科学院饲料研究所 高葡萄糖耐受性β-葡萄糖苷酶突变体及其基因和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007028912A (ja) * 2005-07-22 2007-02-08 Gekkeikan Sake Co Ltd 新規β−グルコシダーゼ、及びその利用
CN117683752A (zh) * 2023-12-13 2024-03-12 安徽大学 一种稳定性提升的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN118956830A (zh) 2024-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN118006590B (zh) 一种Microbacterium dextranolyticumβ-葡萄糖苷酶的突变体及方法和应用
CN117683752B (zh) 一种稳定性提升的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用
US20180312829A1 (en) Directed modification of glucosamine synthase mutant and application thereof
CN104726435B (zh) 一种β-葡萄糖苷酶突变体、其重组表达质粒及转化的工程菌株
CN115873831A (zh) 一种高催化活性及温度稳定性的壳聚糖酶突变体及其应用
CN112725319B (zh) polyG底物特异性的褐藻胶裂解酶FaAly7及其应用
CN116064452B (zh) 一种糖基转移酶突变体及其在合成淫羊藿次甙d2中的应用
CN118956830B (zh) 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其在水解丙二酰染料木苷中的应用
CN113136378B (zh) 一种鼠李糖苷酶TpeRha突变体及其制备方法和应用
Qin et al. High-efficiency secretion expression of cellobiose 2-epimerase in Escherichia coli and its applications
CN118995672B (zh) 一种提高α-琼胶酶热稳定性的突变体及其应用
CN120519488A (zh) 一株能高效生产普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌工程菌及其在海藻糖酶法生产中的应用
CN111471667B (zh) 壳聚糖酶Csn-PT及其应用
CN114107270A (zh) 一种L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体
CN117187216B (zh) 一种耐热α-L-鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用
CN116083404B (zh) β-葡萄糖苷酶突变体及其在昆布二糖制备中的应用
CN117660280A (zh) 一种高产nmn的工程菌株及其应用
CN116640715A (zh) 一种生产乳糖-n-新四糖的基因工程菌及其应用
CN109022397A (zh) 一种降解主产物为新琼二糖的内切型β-琼胶酶及其应用
CN120464595B (zh) 提高α-葡聚糖磷酸化酶催化活性的方法及突变体TpαGPM7、基因和应用
CN110452899B (zh) 一种葡萄糖异构酶、突变体及其在制备d-果糖中的应用
LU503704B1 (en) Type iii pullulan hydrolase mutant for preparing corn resistant starch, preparation method and application thereof
CN115820617B (zh) 一种热稳定性增强的d-甘露糖异构酶突变体
CN115873772B (zh) 一种高效表达生淀粉α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用
CN111607548B (zh) 一种产甘露聚糖的重组大肠杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant