CN118961858B

CN118961858B - 一种干血斑中多种元素的检测方法

Info

Publication number: CN118961858B
Application number: CN202410770284.6A
Authority: CN
Inventors: 冯振; 刘翠兰; 崔文斌
Original assignee: Shandong Ying Sheng Biotechnology Co ltd
Current assignee: Yingsheng Biotechnology Co., Ltd.
Priority date: 2024-06-14
Filing date: 2024-06-14
Publication date: 2025-03-25
Anticipated expiration: 2044-06-14
Also published as: CN118961858A

Abstract

本发明公开了一种干血斑中多种元素的检测方法，属于元素分析技术领域。本发明所述的检测方法包括如下步骤：利用打孔器分别取干血斑样本、干血斑校准品和干血斑质控品的相同大小的血斑片于不同的进样管中，加入稀释工作液，涡旋混匀后超声50～70min，得到待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液采用电感耦合等离子体质谱法进行检测；其中，所述稀释液为硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇的混合水溶液；所述干血斑校准品和干血斑质控品中含有牛全血基质。本发明的样品前处理过程简单快速，适用于临床大批量样本的检测；同时，本发明的检测方法具有高灵敏度、高特异性、高抗干扰性、高精密度、高重复性，具有良好的应用前景。

Description

一种干血斑中多种元素的检测方法

技术领域

本发明涉及元素分析技术领域，尤其涉及一种干血斑中多种元素的检测方法。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

微量元素的缺乏和过量都可以引起疾病，甚至死亡。砷、钼、钯、镉、铟、锑、钆、铂、汞、铊、铅、铋是有毒重金属，在人体中没有已知的益处，它们的高含量会导致活性氧的增加，损害蛋白质、脂质和DNA。锂、钒、钴、钼是与生命有关的必需微量元素，尽管在人体内含量极少，却对新陈代谢起着至关重要的作用，这些元素的量化对营养研究和疾病干预至关重要。

然而，生物样本的收集和分析存在物流、伦理的限制，尤其是全血，虽然可以提供各种营养状况指标，但是通过静脉穿刺采集血液，需要有专业人员及用于样品储存，运输的冷链；对于偏远或资源有限的地区，设备、储存的运输的成本相对较高。此外，对新生儿、儿童和老年人等弱势群体来说，血液采样具有侵入性和道德挑战性。

干血斑(DBS)是一种通过刺破个人的手指或脚跟在专用滤纸上采集毛细血管血的方法，为静脉穿刺提供了另一种采集生物样本的方法，其具有相对较小的样本量，降低了患者的采样负担，有利于对静脉穿刺困难的婴儿、儿童和老年人等弱势群体进行血液采样。然而干血斑的元素分析存在着较大的挑战，因其要求低检测限和低样本量。

公开号为CN110687190A的专利公开了一种干血斑中多种元素的检测方法，其使用硝酸、半胱氨酸、曲拉通溶液作为消解液对试样血斑进行消解后采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)进行检测，虽然该发明取得了较低的检出限，但是由于该发明前处理需要涡旋静置1h，继而超声10分钟、在8000g离心后用针式过滤器过滤，前处理较为复杂耗时，并不适用于大批量样本的筛查。

因此，如何提供一种前处理方法简单、准确度高、可进行大规模筛查的干血斑中多种元素的检测方法及试剂盒是亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种干血斑中多种元素的检测方法，解决了现有技术的干血斑中多种元素的检测前处理复杂、不适用于大规模筛查的问题。

本发明提供了一种干血斑中多种元素的检测方法，包括如下步骤：

利用打孔器分别取干血斑样本、干血斑校准品和干血斑质控品的相同大小的血斑片于不同的进样管中，加入稀释工作液，涡旋混匀后超声50～70min，得到待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液采用电感耦合等离子体质谱法进行检测；

其中，所述稀释工作液由稀释液和内标工作液按设定比例混匀而得，所述稀释液为硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇的混合水溶液；所述干血斑校准品和干血斑质控品中含有牛全血基质。

优选的，所述多种元素包括Li、V、Co、As、Mo、Pd、Cd、In、Sb、Cs、Gd、Pt、Hg、Tl、Pb和Bi。

优选的，所述牛全血基质的制备方法如下：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，离心分离血浆与血细胞，分层后再以血浆：血细胞＝(54～58):(42～46)的体积比混合得到牛全血基质。

优选的，所述干血斑校准品的制备方法如下：取多元素校准品原液采用0.5wt％HNO₃溶液按比例稀释成一系列浓度溶液，然后将所述一系列浓度溶液以10％的体积比与牛全血基质混合得到一系列带基质校准品溶液，然后将所述一系列带基质校准品溶液分别滴入到采血卡中制备不同的血斑片，晾干至少4小时制成干血斑校准品。

优选的，所述干血斑质控品包括高浓度质控品和低浓度质控品，所述干血斑质控品的制备方法如下：将多种元素的单元素标准溶液配成高浓度质控理论浓度和低浓度质控理论浓度，然后按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，获得高浓度质控溶液和低浓度质控溶液；所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液的质控靶值和范围如下所示：

分别取所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液滴入到两份采血卡中，晾干至少4小时制成干血斑质控品。

优选的，所述内标工作液中，各元素的浓度为：铍800mg/L，钪100mg/L，锗200mg/L，钇100mg/L，铑10mg/L，铼10mg/L，铀0.5mg/L。

优选的，所述稀释液为0.1wt％硝酸、0.01wt％乙二胺四乙酸二钠、0.2wt％半胱氨酸和2wt％甲醇的混合水溶液；所述稀释液与内标工作液的体积比为5000：1。

优选的，所述电感耦合等离子体质谱法的测定条件如下：采用Burgener ari雾化器，KED模式采集数据，碰撞气为氦气；仪器参数如下：射频功率为1500～1600W；雾化气流速为0.9～1.1L/min；辅助气流速为0.7～1.0L/min；冷却气流速为12～15L/min；采样深度为5～6mm，定量环规格为0.4～0.6mL。

优选的，以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标，以校准品溶液与内标的信号比为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将待测样品溶液与内标的信号比代入方程，从而计算待测样品溶液中各元素浓度。

优选的，所述血斑片的直径为9～11mm；所述加入稀释内标液的体积为2～3mL。

优选的，将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液转移到空管中，采用电感耦合等离子体质谱法进行检测。

与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：

(1)本发明采用了带牛全血基质的干血斑校准品，与待测干血斑样本的血斑大小保持一致，并且样品前处理方式保持一致，一方面校正血斑被提取后的损失，规避了样本量未知的情况，另一方面校正了基质效应和物理效应的干扰，有效提高了准确度。

(2)本发明在稀释液中添加了硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇，其中甲醇的加入可以降低溶液的表面张力，有助于样品更好地引入到等离子体中，提高雾化效率，从而提高检测时的灵敏度和降低检测限；同时，甲醇可减少样品中某些元素及有机化合物的降解，特别是当样品需要在分析前或分析时进行长时间存放时。半胱氨酸以及乙二胺四乙酸二钠可以与样品中的金属离子形成稳定的络合物，从而将血斑中的元素更高效提取出来，同时可提高样品稳定性，从而提高分析的灵敏度和准确度。

(3)本发明的样品前处理过程只需对血斑片进行超声提取，而后采用电感耦合等离子体质谱法进行检测，前处理过程更加简单快速，更适用于临床大批量样本的检测。

(4)本发明建立了一种适用于干血斑多元素高灵敏度、高特异性、高抗干扰性、高精密度、高重复性的检测方法，该方法可用于重金属筛查及愈后监测，例如检测环境微量毒素污染、检测治疗药物浓度或中毒愈后监测，具有良好的应用前景。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

本发明对涡旋混匀和超声的操作步骤均不作特殊限制，采用本领域常用的涡旋混匀和超声的操作步骤即可。本发明通过上述步骤对干血斑样本、干血斑校准品和干血斑质控品中的元素进行提取。

本发明中，所述多种元素包括Li、V、Co、As、Mo、Pd、Cd、In、Sb、Cs、Gd、Pt、Hg、Tl、Pb和Bi。其中，砷、钼、钯、镉、铟、锑、钆、铂、汞、铊、铅、铋是有毒重金属，在人体中没有已知的益处，它们的高含量会导致活性氧的增加，损害蛋白质、脂质和DNA。锂、钒、钴、钼是与生命有关的必需微量元素，尽管在人体内含量极少，却对新陈代谢起着至关重要的作用，这些元素的量化对营养研究和疾病干预至关重要。

本发明中，所述牛全血基质的制备方法如下：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，离心分离血浆与血细胞，分层后再以血浆：血细胞＝(54～58):(42～46)的体积比混合得到牛全血基质。由于肝素钠抗凝牛全血批次差异使得批次间稀稠程度不一致，从而在滤纸扩散程度会有差异影响结果，本发明采用离心重新配比的方式，规避了批次间的差异，同时与人血稀稠程度保持一致，提高了检测真实样本的准确性。

本发明中，所述干血斑校准品的制备方法如下：取多元素校准品原液采用0.5wt％HNO₃溶液按比例稀释成一系列浓度溶液，然后将所述一系列浓度溶液以10％的体积比与牛全血基质混合得到一系列带基质校准品溶液，然后将所述一系列带基质校准品溶液分别滴入到采血卡中制备不同的血斑片，晾干至少4小时制成干血斑校准品。本发明将多元素校准品原液稀释液与牛全血基质混合，避免因校准品与样品基质不一致导致的结果不准确，另一方面也能校正血斑提取带来的损失。

本发明中，所述干血斑质控品包括高浓度质控品和低浓度质控品，所述干血斑质控品的制备方法如下：将多种元素的单元素标准溶液配成高浓度质控理论浓度和低浓度质控理论浓度，然后按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，获得高浓度质控溶液和低浓度质控溶液；所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液的质控靶值和范围如下所示：

分别取所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液滴入到两份采血卡中，晾干至少4小时制成干血斑质控品。本发明应用的质控品靶值是由液体状况下经验证通过的试剂盒所定值，再由采血卡制成干血斑质控，以此来考察方法的准确性、有效性，确定检测结果的准确性。

本发明所述内标工作液中，各元素的浓度为：铍800mg/L，钪100mg/L，锗200mg/L，钇100mg/L，铑10mg/L，铼10mg/L，铀0.5mg/L。本发明对内标工作液的配制方法不作特殊限制，采用本领域技术人员常用的配制方法即可。

本发明中，所述稀释液优选为0.1wt％硝酸、0.01wt％乙二胺四乙酸二钠、0.2wt％半胱氨酸和2wt％甲醇的混合水溶液。本发明对稀释液的配制方法不作特殊限制，采用本领域技术人员常用的配制方法即可。本发明所采用的水优选为超纯水。本发明中，所述稀释液与内标工作液的体积比为5000：1。

本发明中，所述电感耦合等离子体质谱法的测定条件如下：采用Burgener ari雾化器，KED模式采集数据，碰撞气为氦气；仪器参数如下：射频功率为1500～1600W；雾化气流速为0.9～1.1L/min；辅助气流速为0.7～1.0L/min；冷却气流速为12～15L/min；采样深度为5～6mm，定量环规格为0.4～0.6mL。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测是基于元素的质荷比，因此本发明对于末梢血中的微量元素检测特异性强，定量准确。

本发明中，以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标，以校准品溶液与内标的信号比为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将待测样品溶液与内标的信号比代入方程，从而计算待测样品溶液中各元素浓度，本发明采用此方法可校正提取带来的损失，规避各个元素提取率的差异，所得检测样本浓度即为真实人体采血样本浓度。

本发明中，所述血斑片的直径为9～11mm；所述加入稀释内标液的体积为2～3mL。本发明采用相同大小的血斑片，确保了取样量相同。本发明采用新生儿采血卡，其预打印圈为直径12mm的圆，本发明干血斑校准品和干血斑质控品的制作均采用40μL血液填满预打印圆圈，而临床干血斑样本只需刺破指腹或脚跟将血滴滴满预打印圈即可，无需准确定量采血，后经晾干折叠储存即可，此方法简化了采血流程，同时也消除了干血斑一直存在的样品量未知的问题，取直径9～11mm的圆形血斑片也可以最大化提高其灵敏度，降低定量限。

本发明中，将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液转移到空管中，采用电感耦合等离子体质谱法进行检测。转移到空管是为了去除被提取后的血斑片及进样管底部沉淀杂质。若在1h内完成检测可不进行转移，震荡使血斑片沉入管底，抬高进样针使其不触碰血斑片，同时进样量满足进样要求可直接上机检测。

下面结合具体实施例对本发明技术方案做进一步阐述。

实施例

1、仪器：

电感耦合等离子体质谱仪为YS EXT 8600MD(山东英盛生物技术有限公司)、Burgener ari(Burgener Research Inc)雾化器、高速台式冷冻离心机(湘仪)、涡旋混匀仪(Scientific industries)，超声清洗仪(240W，康士洁超声波)，打孔器(10mm)。

2、试剂：

硝酸(CNW，浓度≥65％，trace metal analysis)；甲醇(质谱级，Merck)；乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)(分析级，Macklin)；L-半胱氨酸(纯度99％，Macklin)；肝素钠牛抗凝全血(肝素钠抗凝，博尔西)；新生儿采血卡(贝斯特)。

3、相关溶液配制

(1)稀释液配制：

称取硝酸、L-半胱氨酸、甲醇、EDTA-2Na溶液至HPDE瓶中，后加入超纯水，使其各组分浓度(溶质的质量分数)如下：0.1％硝酸，0.2％半胱氨酸、2％甲醇、0.01％EDTA-2Na，超声混匀10min后，作为稀释液备用。

(2)清洗液配制：

称取硝酸，EDTA-2Na溶液至HPDE瓶中，加入超纯水，使其各组分浓度(溶质的质量分数)：硝酸：0.5％，EDTA-2Na：0.002％，超声混匀10min后，作为清洗液备用。

(3)内标工作液的配制：

分别取铍、钪、锗、钇、铑、铼、和铀各元素内标原液，取400μL铍元素标准溶液(浓度：2000mg/L)+100μL钪元素标准溶液(浓度：1000mg/L)+200μL锗元素标准溶液(浓度：1000mg/L)+100μL钇元素标准溶液(浓度：1000mg/L)+10μL铑元素标准溶液(浓度：1000mg/L)+10μL铼元素标准溶液(浓度：1000mg/L)+5μL铀元素标准溶液(浓度：100mg/L)+175μL超纯水，混匀后制备成内标工作液，各元素浓度如表1所示。

表1内标工作液各元素浓度(单位：mg/L)

铍Be	钪Sc	锗Ge	钇Y	铑Rh	铼Re	铀U
							800	100	200	100	10	10	0.5

(4)牛全血基质：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，4000rpm离心10min，分离分层的血浆与血细胞，再以血浆：血细胞＝4:3的体积比混合后得到牛全血基质。

(5)多元素校准品原液：按照表2所示的浓度配制多元素校准品原液。

表2多元素校准品原液各元素浓度

元素	质量数	浓度(μg/mL)	元素	质量数	浓度(μg/mL)
						Li	7	350	Sb	121	20
V	51	10	Cs	133	40
						Co	59	10	Gd	157	10
As	75	40	Pt	195	10
						Mo	95	50	Hg	202	20
Pd	105	10	Tl	205	10
						Cd	111	20	Pb	208	100
In	115	10	Bi	209	6.4

4、样本采集和制备

(1)干血斑样本：

使用一次性采血针刺足跟内或外侧，深度小于3毫米，用干棉球拭去第一滴血，取第二滴血；将滤纸片接触血滴，切勿触及足跟皮肤，使血自然渗透至滤纸背面，至少采集三个血斑；将血片置于清洁空气中，避免阳光直射，自然晾干呈深褐色，得到干血斑样本，并放入密封袋储存。

(2)干血斑校准品：

分别取多元素校准品原液采用0.5％HNO₃稀释10倍得到高浓度校准品中间液。取高浓度校准品中间液用0.5％HNO₃依次按1:1等比稀释，共7个浓度梯度(含高浓度校准品中间液)，从高浓度到低浓度依次为7、6、5、4、3、2、1号，分别取7、6、5、4、3、2、1号溶液及0.5％HNO₃ 100μL至900μL(体积比为10％)的牛全血基质中，得到S7、S6、S5、S4、S3、S2、S1、Blank，共8份带基质校准品溶液。各溶液中的理论浓度如表3所示。

表3一系列带基质校准品溶液中各元素的理论浓度(单位：μg/L)

分别取上述8份溶液40μL滴入两份采血卡(每份含4个预打印圈)中，晾干至少4小时制成干血斑校准品，折叠密封储存。

(3)干血斑质控品：

分别取16种元素的单元素标准溶液配成两种质控理论浓度，按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，分别取上述两种溶液40μL滴入两份采血卡中，晾干至少4小时制得干血斑质控品，折叠密封储存，质控理论浓度如表4所示。

表4质控理论浓度

5、样品前处理

(1)制备稀释工作液

按5000:1的体积比将稀释液与内标工作液混匀，制备稀释工作液。现用现配，依据待测样品数计算稀释工作液的量。

(2)样品制备

①待测样品溶液：用打孔器取直径为10mm的干血斑样本于进样管中，加入2mL稀释工作液，涡旋混匀，放入超声机中超声60min，将提取后的溶液转移至空管，即得待测样品溶液，检测备用。

②校准品溶液：用打孔器取直径为10mm的干血斑校准品于进样管中，加入2mL稀释工作液，涡旋混匀，放入超声机中超声60min，将提取后的溶液转移至空管，即得校准品溶液，检测备用。

③质控品溶液：用打孔器取直径为10mm的干血斑质控品于进样管中，加入2mL稀释工作液，涡旋混匀，放入超声机中超声60min，将提取后的溶液转移至空管，即得质控品溶液，检测备用。

6、检测方法

将进样管放置样品架上，启用应用软件(YS EXT 8600MD为Qtegra软件)，建立检测方法及样品列表。

采用Burgener ari雾化器(Burgener Research Inc)，KED模式采集数据，碰撞气为氦气，采用采用电感耦合等离子体质谱仪进行检测。仪器参数：射频功率(Plasma power)1550W；雾化气流速(Nebulizer flow)0.99L/min；辅助气流速(Auxiliary flow)0.8L/min；冷却气流速(Cool flow)14L/min；采样深度(Sampling depth)5.5mm，定量环规格：0.5mL。

7、性能验证

(1)16种元素标准曲线图

打开Qtegra软件，选择相应数据进行结果分析。首先以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标(表3)，以校准品溶液与内标信号的比值为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将样品与内标的信号比代入方程，计算样品中各元素浓度，各元素的线性浓度的范围、标准曲线以及相关系数(R²)如表5所示。

表5 16种元素的线性结果

(2)检测限和定量限

根据查阅的各元素在人全血中参考范围以及结合仪器能够检测的最小浓度，利用稀释液稀释16种元素校准品混合液(各个元素的浓度如表3所示)，每个浓度平行制备20份；以所有分析物测量结果的变异系数(CV)≤20.0％，实测值与规定值偏差≤20.0％作为定量限，1/2倍定量限作为27种分析物的检测限，则检测限与定量限结果如表6所示。

表6 16种元素的检测限与定量限结果

结果：16种元素定量限变异系数(CV)均在3.34％～13.60％之间，实测值与规定值偏差均在-11.89％～14.72％之间。所有分析物测量结果的变异系数(CV)均≤20.0％，实测值与规定值偏差均≤20.0％。

(3)回收率

选择临床样本，分为三份；在其中的两份样本中加入不同浓度相同体积的待测物标准溶液，取40μL加入标准溶液的样本滴到采血卡，制备回收干血斑样本，加入标准溶液的体积不超过临床样本体积的10％；在另一份样本中加入相同体积不含待测物的空白试剂，作为基础干血斑样本。按照说明书方法，将基础干血斑样本平行测定3次，低、高浓度回收干血斑样本各平行测定10次。分别计算均值，根据公式计算回收率，则16种分析物回收率偏差均在±15％范围内，变异系数(CV)均小于15％，结果见表7和表8。

表7 16种分析物回收率实验测定结果

表8 16种分析物回收率理论值和偏差

结果：16种元素回收率偏差均在-13.11％～13.19％范围内，变异系数(CV)均在0.65％～9.82％范围内。所有分析物回收率偏差均在±15％范围内，变异系数(CV)均小于15％，说明方法的准确性。

(4)正确度

为验证方法的准确度，取采用山东英盛生物技术有限公司全血29元素试剂盒，对制备好的质控品进行定值，得到靶值，再将质控品制备成干血斑质控，进行正确度与精密度验证，如表9～11所示。

从表9中可以看出，16种分析物测量结果的变异系数(CV)≤10.0％，实测值均在给定靶值范围内，且与靶值的偏差均在±15％范围内，证明具有良好的正确度。

表9 16种分析物正确度结果(单位：μg/L，除CV之外)

结果：16种元素测量结果的变异系数(CV)均在1.14％-5.44％范围内，与靶值的偏差均在-12.39％-16.84％范围内，所有分析物结果均在给定靶值范围内，说明方法的可靠性。

表10 16种分析物日内精密度结果(单位：μg/L，除CV之外)

表11 16种分析物日间精密度结果(单位：μg/L，除CV之外)

结果：16种元素日内、日间测量结果的变异系数(CV)均在3.57％-11.08％范围内，说明方法的可靠性。

对比例1

为了验证校准品中加入牛全血基质对干血斑中16种元素检测的影响，本对比通过回收率实验进行验证。

(1)回收率实验

具体的实验过程同实施例中回收率检测，但是多元素校准品中不加入牛全血基质，取多元素校准品原液采用0.5％HNO₃溶液稀释100倍得到高浓度校准品中间液。取高浓度校准品中间液100μL，用0.5％HNO₃溶液依次按1:1等比稀释，共7个浓度梯度(含高浓度校准品中间液)，从高浓度到低浓度依次为7、6、5、4、3、2、1号，用稀释液稀释，各元素浓度如表12所示，回收率结果如表13所示。

表12不同浓度水平下各个化合物的理论浓度(单位：μg/L)

表13回收率偏差实验结果(单位：％)

对比例2

为了验证稀释液中各个成分对于血斑中16种元素提取的影响，本对比例通过回收率实验进行验证。

具体的实验过程同性能验证实验中回收率检测，但是稀释工作液中分别不含有、EDTA-2Na以及半胱氨酸，结果如表14所示。

表14回收率偏差实验结果(单位：％)

结果：根据表14结果可知，稀释液中EDTA-2Na主要作为金属络合剂，与血斑中钴、镉、铟、铅、铋等元素稳定络合，保证血斑中元素被提取至稀释液中，同时保证其在溶液中的稳定性。稀释液中甲醇能补偿碳基质，从而提高如砷，钼元素灵敏度，同时，稀释液中半胱氨酸能与汞元素络合，增加血斑中汞元素的提取，并增加汞在溶液中及后续检测中的稳定性。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种干血斑中多种元素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

其中，所述稀释工作液由稀释液和内标工作液按设定比例混匀而得，所述稀释液为硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇的混合水溶液；所述干血斑校准品和干血斑质控品中含有牛全血基质；

所述多种元素包括Li、V、Co、As、Mo、Pd、Cd、In、Sb、Cs、Gd、Pt、Hg、Tl、Pb和Bi；

所述稀释液为0.1wt％硝酸、0.01wt％乙二胺四乙酸二钠、0.2wt％半胱氨酸和2wt％甲醇的混合水溶液；所述稀释液与内标工作液的体积比为5000：1；

所述电感耦合等离子体质谱法的测定条件如下：采用Burgener ari雾化器，KED模式采集数据，碰撞气为氦气；仪器参数如下：射频功率为1550W；雾化气流速为0.99L/min；辅助气流速为0.8L/min；冷却气流速为14L/min；采样深度为5.5mm，定量环规格为0.5mL。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述牛全血基质的制备方法如下：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，离心分离血浆与血细胞，分层后再以血浆：血细胞＝(54～58):(42～46)的体积比混合得到牛全血基质。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述干血斑校准品的制备方法如下：取多元素校准品原液采用0.5wt％HNO₃溶液按比例稀释成一系列浓度溶液，然后将所述一系列浓度溶液以10％的体积比与牛全血基质混合得到一系列带基质校准品溶液，然后将所述一系列带基质校准品溶液分别滴入到采血卡中制备不同的血斑片，晾干至少4小时制成干血斑校准品。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述干血斑质控品包括高浓度质控品和低浓度质控品，所述干血斑质控品的制备方法如下：将多种元素的单元素标准溶液配成高浓度质控理论浓度和低浓度质控理论浓度，然后按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，获得高浓度质控溶液和低浓度质控溶液；所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液的质控靶值和范围如下所示：

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述内标工作液中，各元素的浓度为：铍800mg/L，钪100mg/L，锗200mg/L，钇100mg/L，铑10mg/L，铼10mg/L，铀0.5mg/L。

6.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标，以校准品溶液与内标的信号比为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将待测样品溶液与内标的信号比代入方程，从而计算待测样品溶液中各元素浓度。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述血斑片的直径为9～11mm；加入稀释内标液的体积为2～3mL；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液转移到空管中，采用电感耦合等离子体质谱法进行检测。