CN119242515B - 一株耐盐芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株耐盐芽孢杆菌及其应用，属于微生物肥料技术领域，所述耐盐芽孢杆菌于2024年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.31260；该菌株耐盐碱能力较强，具有解钾、分解纤维素、降解蛋白、解有机磷的能力，同时能够拮抗桃色欧文氏菌、尖孢镰刀菌、藤仓镰刀菌等多种植物病原菌，且该菌株在无盐或有盐环境下均可对玉米产生良好的促生效果，应用前景十分广阔。

Description

一株耐盐芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物肥料技术领域，具体是一株耐盐芽孢杆菌及其应用。

背景技术

玉米的生长条件相对苛刻，其对土壤、温度和水分等条件的变化十分敏感。通过在土壤中添加微生物菌剂，能够促进玉米等作物在盐碱地中生长进而增加产量，也可对盐碱地的土壤生态环境进行修复。

微生物菌剂是含有特定微生物活体的制品，能够通过其中含有的微生物，对土壤中的微生物群落分布、土壤养分结构进行一定的改善，从而使作物在盐碱胁迫等恶劣环境中维持正常生长甚至优于正常生长条件。植物根际促生细菌(PGPR)是微生物菌剂中常用的菌株类群，包括芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、克雷伯氏菌属(Klebsiella spp.)、固氮菌属(Azotobacter spp.)等，它们能通过溶磷、解钾、固氮、产生长素、拮抗病原菌等多种机制直接或间接促进植物生长。然而，促生特性不同的PGPR对不同作物的促生效果也不相同，合理施用PGPR对作物的促生以及对盐碱地的改良与治理具有极其重要的作用。

耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)是一类重要的PGPR。近年来，研究发现耐盐芽孢杆菌在对盐渍化土壤的改良与治理、微生物菌剂的研制方面具有广阔的应用前景，具体表现在对一些作物具有抗盐促生、防治微生物病害等生防功能。Wu等人从可可粉中分离出的耐盐芽孢杆菌KKD1具有较强的抗盐碱特性，能在高盐度(13％)和高碱度(pH 10.0)条件下生长，并且对一些植物病原菌具有良好的拮抗效果；通过对菌株KKD1基因的遗传筛选，发现在盐、碱胁迫下的渗透平衡、膜转运和离子平衡调节是其抗盐碱的重要因素；另外，菌株KKD1产生的脂肽surfactin和fengycin是主要的抗真菌成分。Etemadzadeh等人分离得到一株耐盐芽孢杆菌SCM034，该菌株可产生一些脂肽类抗生素抑制金黄色葡萄球菌和酿酒酵母的生长。Thomloudi等人从药用植物叶片中分离得到了耐盐芽孢杆菌Hil4，该菌株对灰霉病菌具有拮抗能力且可促进植物生长。Zhang等人报道了耐盐芽孢杆菌ZB201702的全基因组序列，通过全基因组分析，揭示了许多参与防御机制的潜在基因集群，菌株ZB201702对非生物胁迫具有耐受性，其具有抗干旱、耐盐胁迫和促进植物生长的能力。有研究者从盐渍土壤中分离出的耐盐芽孢杆菌MS50-18A，可以有效防治根腐病，并且与辣椒作物存在优良的互作关系，分析该菌株的基因组草图得出其具有与甘氨酸/甜菜碱摄取和杆菌素生物合成相关的基因，可有效抵抗盐胁迫环境。Jiménez-Gómez等人验证了耐盐芽孢杆菌SCCPVE07在正常环境或盐胁迫环境下均可促进植物发育，比如，在土壤中接种菌株SCCPVE07后，莴苣植株内不仅钾、铁、镁含量增加，而且植株内原儿茶酸和咖啡酸的含量也显著提高；在土壤中接种菌株SCCPVE07后，香菜植株内的钾、碳、钙和铁含量均有所增加，且植株内酚类化合物的含量也有明显的提高。

耐盐芽孢杆菌不仅在对一些作物的抗逆促生方面有应用价值，在其它方面也有应用潜力，比如，耐盐芽孢杆菌在去除污染环境的高分子量碳氢化合物方面具有广阔的应用前景：Deng等人从原油污染土壤中分离得到的耐盐芽孢杆菌1-1可以高效降解原油；有些耐盐芽孢杆菌被证实可表现出对1,2-苯并菲的高降解能力。2021年底，Rayasam等人研究发现耐盐芽孢杆菌DSM8802可在应激条件下产生具有生物降解性的聚羟基脂肪酸酯。El-Fakharany等人研究发现耐盐芽孢杆菌OHEM18可产生具有临床应用价值的天冬酰胺酶。

综上，耐盐芽孢杆菌具有多种生物功能，尤其是具有对作物的抗盐碱促生能力，使其成为具有重要应用价值的PGPR。目前，耐盐芽孢杆菌制成的微生物菌剂在对玉米作物的抗盐促生作用方面匮乏，且由于土壤环境的复杂性，部分菌株往往不能发挥出较好的促生效果。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一株耐盐芽孢杆菌及其应用，该菌株是从中国、山东、东营市河口区的海域底泥中分离筛选得到，其具有解钾、分解纤维素、降解蛋白和解有机磷的能力，同时能够拮抗多种植物病原菌，在无盐或有盐环境下均可对玉米产生良好的促生效果。

本发明技术方案如下：

一株耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)DKY-9，2024年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.31260。

其中，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

上述耐盐芽孢杆菌DKY-9的培养方法，包括如下步骤：

将耐盐芽孢杆菌DKY-9菌株接种到LB固体培养基中，37℃倒置培养至长出单菌落；挑取单菌落至LB液体培养基中，120～180rpm、37±1℃条件下振荡培养，得耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液。

所述耐盐芽孢杆菌DKY-9在解钾、分解纤维素、降解蛋白和解有机磷中的应用。

所述耐盐芽孢杆菌DKY-9在拮抗桃色欧文氏菌、尖孢镰刀菌、藤仓镰刀菌中的应用。

所述耐盐芽孢杆菌DKY-9在促进玉米生长方面的应用。

优选的，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9在氯化钠浓度为100mmol/L以下的盐环境中促进玉米生长方面的应用。

优选的，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9在促进玉米生长方面的应用，应用方法是提前将玉米种子在耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液中进行浸泡。

进一步优选的，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液的浓度为10⁵～10⁹cfu/L。

一种以所述耐盐芽孢杆菌DKY-9为有效成分的活菌制剂。

本发明的有益效果：

本发明提供的耐盐芽孢杆菌DKY-9耐盐碱能力较强，具有解钾、分解纤维素、降解蛋白和解有机磷的能力，同时能够拮抗桃色欧文氏菌、尖孢镰刀菌、藤仓镰刀菌等多种植物病原菌，且该菌株在无盐或有盐环境下均可对玉米产生良好的促生效果，应用前景十分广阔。

附图说明

图1为菌株DKY-9的菌落形态及经革兰氏染色后在显微镜下的菌体观察图片；

图2为菌株DKY-9在不同盐度LB固体培养基上的生长情况；

图3为菌株DKY-9在不同碱度LB固体培养基上的生长情况；

图4为菌株DKY-9在硅酸盐细菌培养基中的生长情况；

图5为菌株DKY-9在羧甲基纤维素钠培养基中的生长情况；

图6为菌株DKY-9在干酪素培养基中的生长情况；

图7为菌株DKY-9在有机磷细菌培养基中的生长情况；

图8为菌株DKY-9拮抗尖孢镰刀菌的效果；

图9为菌株DKY-9拮抗藤仓镰刀菌的效果；

图10为菌株DKY-9拮抗桃色欧文氏菌的效果；

图11为栽培4天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片；

图12为栽培4天后不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据；

图13为栽培8天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片；

图14为栽培8天后不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据；

图15为栽培12天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片；

图16为栽培12天后不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据。

具体实施方式

下面结合具体实施例进行说明：

实验材料来源说明：

细菌微量生化鉴定管：购自海博生物公司；

玉米种子：郑单958号，购自山东粮业社会化服务集团有限公司；

桃色欧文氏菌：购自上海保藏生物技术中心，货号为SHBCC D10977；

尖孢镰刀菌：购自上海保藏生物技术中心，货号为SHBCC D25188；

藤仓镰刀菌：购自上海保藏生物技术中心，货号为SHBCC D19154。

实施例1：

耐盐芽孢杆菌DKY-9的分离、筛选和诱变处理

从中国、山东、东营市河口区的海域底泥中进行分离和筛选，通过平板三区划线的方法将筛选好的菌株不断纯化，直至获得单一菌落。

挑取上述单一菌落作为出发菌株，进行ARTP诱变处理，具体诱变步骤如下：

(1)出发菌株菌悬液的制备：

将出发菌株接种于LB液体培养基中，37℃、180rpm条件下培养，待菌体长到对数期时，对培养液进行离心，用生理盐水洗涤菌体沉淀并重悬，得OD₆₀₀为0.4的出发菌株菌悬液。

(2)诱变过程：

用酒精灯将铁质载片烧热后于无菌环境中放凉，吸取10μL步骤(1)所制备的出发菌株菌悬液，均匀涂抹在上述铁制载片表面；

ARTP诱变条件：设置仪器输出功率为120W，气流量为10slm，在距离发射源2mm处进行处理；

将载有出发菌株菌悬液的铁制载片转移至ARTP诱变室，在上述ARTP诱变条件下诱变22s，并进行2次重复诱变，然后将诱变后的菌体冲洗至适量生理盐水中，得诱变后的菌株。

(3)诱变菌株的筛选：

对步骤(2)诱变后的菌株用含不同浓度NaCl的LB固体培养基进行耐盐性筛选，然后用不同pH的LB固体培养基进行耐碱性筛选，最终筛选获得一株耐盐碱能力较强的菌株，将其命名为“DKY-9”。

菌株DKY-9在LB固体培养基上的菌落形态及其经革兰氏染色后在显微镜下的观察图片如图1所示；由图1中的A图可得，菌株DKY-9的菌落形态为圆形、中间凸起、边缘整齐、菌落呈乳白色，不透明；由图1中的B图可得，菌株呈现典型的杆状革兰氏阳性细菌。

另外，采用细菌微量生化鉴定管对筛选得到的菌株DKY-9进行生理生化特征鉴定，鉴定结果如下：菌株DKY-9可利用棉子糖、海藻糖、木糖、蔗糖、麦芽糖和D-纤维二糖；不利用乳糖、半乳糖、葡萄糖和鼠李糖。

将菌株DKY-9的16S rDNA基因序列委托生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，测序结果参见SEQ ID NO.1；将所得16S rDNA序列与NCBI数据库中已有的序列进行BLAST分析，并选取同源性相近的菌株，采用MEGA X软件构建系统发育树，结果发现，上述筛选得到的菌株DKY-9与Bacillus halotolerans为一支，同源性最高；结合菌株的生理生化特征，鉴定其为耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)。

耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)DKY-9，于2024年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.31260。

实施例2：

耐盐芽孢杆菌DKY-9的培养，具体方法如下：

(1)将耐盐芽孢杆菌DKY-9菌株转接到装有5mL LB液体培养基的试管中，置于摇床中180rpm、37℃恒温震荡培养12h，得DKY-9活化菌液；

(2)将步骤(1)中的活化菌液以1％的接种量(0.5mL)转接到装有50mL LB液体培养基的锥形瓶中，180rpm、37℃恒温震荡培养24h，得耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液。

实验例1：

耐盐芽孢杆菌DKY-9的耐盐碱能力测定

(1)菌株DKY-9的耐盐能力测定：分别配制NaCl浓度为0～10％的LB固体培养基，即NaCl的浓度依次为0g/L(0％)、20g/L(2％)、70g/L(7％)、90g/L(9％)、100g/L(10％)；取100μL实施例2制备得到的耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液分别涂布于上述LB固体培养基上，37℃倒置培养24h，观察耐盐芽孢杆菌DKY-9在不同盐度LB固体培养基上的生长情况。

结果如图2所示，其中图A、B、C、D、E分别为菌株DKY-9在NaCl浓度为0％、2％、7％、9％、10％的LB固体培养基上的生长情况；由图2可得，耐盐芽孢杆菌DKY-9能够在盐度为0～9％的环境中生长，但当盐度升高为10％时则停止生长，这说明耐盐芽孢杆菌DKY-9最高能够耐受9％(90g/L)的盐环境。

(2)菌株DKY-9的耐碱能力测定：分别配制pH为7～12的LB固体培养基；取100μL实施例2制备得到的耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液分别涂布于上述LB固体培养基上，37℃倒置培养24h，观察耐盐芽孢杆菌DKY-9在不同碱度LB固体培养基上的生长情况。

结果如图3所示，其中图A、B、C、D、E、F分别为菌株DKY-9在pH为7、8、9、10、11、12的LB固体培养基上的生长情况；由图3可得，耐盐芽孢杆菌DKY-9能够在pH为7～11的环境中生长，但当pH升高为12时则停止生长，这说明耐盐芽孢杆菌DKY-9最高能够耐受pH为11的碱性环境。

实验例2：

耐盐芽孢杆菌DKY-9的解钾、分解纤维素、降解蛋白和解有机磷能力测定

(1)通过硅酸盐细菌培养基测定菌株DKY-9的解钾能力，具体方法如下：

用灭菌牙签将菌株DKY-9接种至硅酸盐细菌培养基上，28℃培养4d，观察菌落生长情况；

其中，所述硅酸盐细菌培养基组分如下：蔗糖5g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCO₃ 0.1g/L，Na₂HPO₄ 2g/L，FeCl₃ 0.005g/L，玻璃粉1g/L，琼脂15g/L，pH 7.0。

菌落生长情况如图4所示，由图4可得，菌株DKY-9在硅酸盐细菌培养基中为光滑透明的油滴状菌落，说明菌株DKY-9具有解钾能力。

(2)通过羧甲基纤维素钠培养基测定菌株DKY-9降解纤维素的能力，具体方法如下：

用灭菌牙签将菌株DKY-9接种于羧甲基纤维素钠培养基上，37℃培养2d，然后加入浓度为1mg/mL的刚果红溶液淹没菌株DKY-9进行染色30min，最后用1mol/L的NaCl溶液洗掉染液，观察菌落生长情况；

其中，所述羧甲基纤维素钠培养基组分如下：磷酸氢二钾2.5g/L，磷酸氢二钠2.5g/L，羧甲基纤维素钠20.0g/L，蛋白胨2.0g/L，酵母浸粉0.5g/L，琼脂14.0g/L，pH 7.2。

菌落生长情况如图5所示，由图5可得，在羧甲基纤维素钠培养基中，菌株DKY-9出现了十分明显的黄色降解圈，这说明菌株DKY-9具有较强的降解纤维素的能力。

(3)通过干酪素培养基测定菌株DKY-9降解蛋白的能力，具体方法如下：

用灭菌牙签将菌株DKY-9接种于干酪素培养基上，37℃培养2d，观察菌落生长情况；

其中，所述干酪素培养基组分如下：干酪素(酪蛋白)10g/L，牛肉浸膏3.0g/L，NaCl5.0g/L，K₂HPO₄ 2.0g/L，琼脂15g/L，溴百里香酚兰0.05g/L，pH 7.3。

菌落生长情况如图6所示，由图6可得，在干酪素培养基中，菌株DKY-9出现了透明降解圈，这说明菌株DKY-9具有降解蛋白的能力。

(4)通过有机磷细菌培养基测定菌株DKY-9解磷的能力，具体方法如下：

用灭菌牙签将菌株DKY-9接种于蒙金娜有机磷细菌培养基上，30℃培养3d，观察菌落生长情况；

其中，所述蒙金娜有机磷细菌培养基组分如下：葡萄糖10g/L，(NH4)₂SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.3g/L，MnSO₄·4H₂O 0.03g/L，KCl 0.3g/L，FeSO₄·7H₂O 0.03g/L，NaCl0.3g/L，CaCO₃ 5.0g/L，卵磷脂0.2g/L，琼脂15g/L，pH 7.0。

菌落生长情况如图7所示，由图7可得，在有机磷细菌培养基中，菌株DKY-9周围出现透明降解圈，结果说明菌株DKY-9具有降解有机磷的能力。

实验例3：

耐盐芽孢杆菌DKY-9对多种植物病原菌的拮抗能力测定

选择棉花枯萎病的病原真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、水稻致病菌的病原真菌藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、大蒜致病菌的病原细菌桃色欧文氏菌(PeachErwinia)，研究菌株DKY-9对上述病原菌的拮抗能力。

(1)菌株DKY-9拮抗真菌能力的测定采用平板对峙法，具体步骤为：将尖孢镰刀菌和藤仓镰刀菌分别接种于PDA固体培养基上，28℃培养4～5d，至培养基内长满圆饼形菌丝；用灭菌的打孔器打下菌丝，用镊子转接于新的PDA固体培养基上，用灭菌牙签挑取菌株DKY-9单菌落并接种于距离菌丝边缘2cm处的PDA固体培养基上，28℃继续培养2～5d，观察是否有抑菌圈出现；

其中，所述PDA固体培养基的组分如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，自然pH。

结果如图8和图9所示，其中图8中的病原菌为尖孢镰刀菌，图9中的病原菌为藤仓镰刀菌；由图8～9可得，菌株DKY-9周围均出现了明显的抑菌圈，这说明菌株DKY-9具有拮抗尖孢镰刀菌和藤仓镰刀菌的能力。

(2)菌株DKY-9拮抗细菌能力的测定采用平板涂布法，具体步骤为：将保存在甘油管中的桃色欧文氏菌接种于LB固体培养基上，37℃培养至长出单菌落；将单菌落接种至5mLLB液体培养基中，37℃、180rpm振荡培养10～12h，得到桃色欧文氏菌菌液，备用；

取100μL上述桃色欧文氏菌菌液均匀涂布于LB固体培养基上，待菌液涂干后用灭菌的接种环将菌株DKY-9接种到该平板上，37℃倒置培养24h，观察耐盐芽孢杆菌DKY-9周围是否出现抑菌圈。

结果如图10所示，由图10可得，菌株DKY-9周围出现了明显的抑菌圈，这说明菌株DKY-9具有拮抗桃色欧文氏菌的能力。

实验例4：

耐盐芽孢杆菌DKY-9对玉米促生作用的测定，具体步骤如下：

(1)玉米种子的预处理：挑选颗粒饱满、大小均匀的郑单958号玉米种子，先用75％(v/v)酒精浸泡5min，再用无菌水冲洗2～3次以将表面的有毒物质冲洗至无色，然后用3％(v/v)的NaClO溶液振荡浸泡10min，最后用无菌水反复冲洗至无色，完成预处理；将预处理完成的玉米种子置于无菌玻璃瓶中室温避光湿润保存20h，备用。

(2)菌株DKY-9对玉米种子的处理：将预处理完成的玉米种子平均分为两组，分别为无菌组和有菌组，将有菌组中的玉米种子在10⁵～10⁹cfu/L的DKY-9菌液中浸泡30s，然后立即倒掉菌液；将所有玉米种子进行卷苗。

(3)卷苗：在无菌条件下，将灭菌后的牛皮纸用无菌水浸湿，用浸湿的牛皮纸将玉米种子包裹，将玉米胚根放于距离牛皮纸边缘3cm处，利用根的向地性，将种子的胚根向下，胚芽向上；每卷约8～10颗种子，用绳子固定，防止种子脱落。

(4)普通霍格兰氏(Hoagland)营养液的配制：组分如下：四水硝酸钙945mg/L，硝酸钾506mg/L，硝酸铵80mg/L，磷酸二氢钾136mg/L，硫酸镁493mg/L，铁盐溶液2.5mL/L，微量元素液5mL/L，pH 6.0；其中，所述铁盐溶液和微量元素液的组分分别如下：

铁盐溶液：七水硫酸亚铁5.56g/L，乙二胺四乙酸二钠7.46g/L，pH 5.5；

微量元素液：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，钼酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L。

高盐霍格兰氏营养液的配制：在上述普通霍格兰氏营养液中加入终浓度为100mmol/L的NaCl，以模仿高盐环境。

(5)将卷好的玉米种子放入无菌透明玻璃瓶中，然后在无菌组和有菌组中分别加入200mL的普通霍格兰氏营养液和高盐霍格兰氏营养液，即共设置四组处理组：无盐无菌组、无盐有菌组、有盐无菌组、有盐有菌组；盖上瓶盖，放入光照培养箱进行培养，每隔4天补加一次普通霍格兰氏营养液/高盐霍格兰氏营养液；

其中，光照培养箱设置两个周期：光照周期为25℃、16h，光照强度为60％；黑暗周期为25℃、8h，光照强度为0％。

(6)在玉米生长第4、8和12天时对玉米的生长形态进行拍照，然后收苗并测定玉米的株高(拉直后所具有的最大距离)、根长和鲜重等农艺性状数据。

栽培4天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片如图11所示，不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据如图12所示。由图11～12可得，在有盐或无盐条件下，经DKY-9菌液处理后的玉米株高、根长和鲜重均呈上升趋势，具体表现为：无盐有菌组的玉米株高、根长和鲜重相比于无盐无菌组分别增加了20.10％(达到显著差异，p<0.05)、25.68％和20.84％；有盐有菌组的玉米株高、根长和鲜重相比于有盐无菌组分别增加了24.04％、19.07％和7.87％。

栽培8天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片如图13所示，不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据如图14所示。由图13～14可得，在无盐条件下，经DKY-9菌液处理后的玉米株高、根长和鲜重都呈上升趋势，具体表现为：与无盐无菌组相比，无盐有菌组的玉米株高、根长和鲜重分别增加了39.25％(达到显著差异，p<0.05)、19.60％和30.66％。在有盐条件下，DKY-9菌液处理后的玉米株高、鲜重都有所增加，而根长受到抑制，具体表现为：与有盐无菌组相比，有盐有菌组的玉米株高和鲜重分别提高了18.10％和11.89％，根长下降了9.65％。

栽培12天后不同处理组中随机选取的玉米植株形态照片如图15所示，不同处理组中玉米的株高、根长和鲜重数据如图16所示。由图15～16可得，在无盐和有盐条件下，经DKY-9菌液处理后的玉米株高、根长和鲜重都有所提高。具体表现为：在无盐条件下，有菌组的的玉米株高、根长和鲜重相比于无菌组分别增加了42.82％(达到极显著差异，p<0.01)、31.42％和44.48％(达到显著差异，p<0.05)；在有盐条件下，有菌组的玉米株高、根长和鲜重相比于无菌组分别增加了36.82％(达到极显著差异，p<0.01)、52.67％和41.43％。

以上结果表明，耐盐芽孢杆菌DKY-9在无盐和有盐条件下均能够对玉米产生一定的促生效果，且在培养后期时对玉米的促生效果更加显著。

Claims (6)

1.一株耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）DKY-9，其特征在于，2024年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.31260；

其中，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述耐盐芽孢杆菌DKY-9的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

将耐盐芽孢杆菌DKY-9菌株接种到 LB固体培养基中，37℃倒置培养至长出单菌落；挑取单菌落至LB液体培养基中，120~180rpm、37±1℃条件下振荡培养，得耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液。

3.权利要求1所述耐盐芽孢杆菌DKY-9的应用，其特征在于，应用于解钾、分解纤维素、降解蛋白、解有机磷；拮抗桃色欧文氏菌、尖孢镰刀菌、藤仓镰刀菌；在氯化钠浓度为100mmol/L以下的盐环境中促进玉米生长。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述在氯化钠浓度为100mmol/L以下的盐环境中促进玉米生长的应用方法是：提前将玉米种子在耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液中进行浸泡。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述耐盐芽孢杆菌DKY-9菌液的浓度为10⁵~10⁹ cfu/L。

6.一种活菌制剂，其特征在于，以权利要求1所述耐盐芽孢杆菌DKY-9为有效成分。