CN120391663B - 一种玫瑰花提取物的制备方法及应用 - Google Patents

一种玫瑰花提取物的制备方法及应用

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Abstract

本申请属于生物技术领域，具体是关于一种玫瑰花提取物的制备方法及应用，利用微生物发酵技术提升玫瑰花中水溶性维生素的含量。该方法选用菌株为植物乳杆菌（L. plantarum）、酿酒酵母（S. cerevisiae）和枯草芽孢杆菌（B. subtilis），调整菌株比例，使植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌的活菌数比例为（1‑3）：（1‑2）：（1‑2），形成复合菌剂，加入预处理玫瑰花进行分段发酵。最终提高了玫瑰花提取物中的水溶性维生素含量，使其在保留了玫瑰花多糖类物质的同时，总抗氧化活性还提高了35%左右。该玫瑰花提取物适用于为功能性食品、保健品及化妆品提供原料。

Description

一种玫瑰花提取物的制备方法及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种玫瑰花提取物的制备方法及应用。
背景技术
玫瑰易于规模化种植，如重瓣玫瑰、大马士革玫瑰，且花期长、生物量大，原料供应稳定。玫瑰花中富含酚类（如没食子酸、鞣花酸）、多糖、黄酮等活性成分，具有抗氧化、抗炎的特性。同时，这些活性物质可作为微生物发酵的底物，经微生物代谢后可以转化为水溶性维生素（如维生素B族、维生素C）或其衍生物。水溶性维生素具有改善皮肤屏障功能，减少炎症，抑制黑色素生成等作用，这些维生素可以与玫瑰花本身的活性成分发生协同作用，提升玫瑰花提取物的生物活性，从而使得其具有更好的美白、抗衰等功效。因此，“玫瑰提取物”在食品、化妆品领域具有高认知度。
然而，现有发酵工艺多针对玫瑰花功能性成分（如多酚、黄酮等物质）进行优化，而非维生素合成，而且水溶性维生素易受热、光、氧等因素破坏，现有发酵工艺如高温灭菌、长时间发酵可能降低玫瑰花提取物中的水溶性维生素的含量，进而影响玫瑰花提取物在化妆品上的使用效果。另外，玫瑰花提取物的传统制备方法存在制备效率低下、产率不稳定的问题，而且有化学试剂残留与安全性风险，能耗高且污染环境，提取时使用强酸/碱或长时间加热可能使玫瑰花提取物中的活性成分被破坏。这些问题一定程度上限制了玫瑰花提取物在食品、保健品领域的应用。
为了克服上述问题，亟须一种新型的制备玫瑰花提取物的方法，使其在提升玫瑰花提取物中水溶性维生素含量的同时，还可以保留多糖，从而将玫瑰花提取物从单一的美容功能拓展至营养补充领域，扩大玫瑰花在食品、保健品及化妆品领域的应用。
发明内容
为了克服背景技术中存在的问题，本申请提供一种玫瑰花提取物的制备方法及应用，通过微生物发酵提高了玫瑰花提取物中水溶性维生素类含量，且不破坏玫瑰花中本身的活性物质。
为实现上述目的，本发明一方面提供了一种玫瑰花提取物的制备方法，具体步骤包括：
（1）制备复合菌剂：将植物乳杆菌（L. plantarum）、酿酒酵母（S. cerevisiae）和枯草芽孢杆菌（B. subtilis）按照活菌数比例为（1-3）：（1-2）：（1-2）进行配比，得到复合菌剂；
（2）制备玫瑰基质：将玫瑰花粉碎后与去离子水混合，得到混合物，向混合物中加入纤维素酶进行酶解，加热灭菌后冷却，形成玫瑰基质；
（3）接种：将所述复合菌剂接种至所述玫瑰基质中，所述复合菌剂与玫瑰基质的质量体积比为（0.2-2）：100（g/mL），形成玫瑰花发酵底物；
（4）发酵：将（3）得到的玫瑰花发酵底物发酵48-72小时，前12小时的溶氧量在50%-70%，之后的发酵时间控制溶氧量在0-10%，发酵完成后形成玫瑰花渣，玫瑰花渣经过过滤得到玫瑰花发酵产物；
（5）收集：对所述玫瑰花发酵产物进行超滤，然后离心收集滤液，即为玫瑰花提取物。
进一步优选，所述步骤（1）中，植物乳杆菌的活菌数为1×107cfu/g；酿酒酵母的活菌数为2.8×107cfu/g；枯草芽孢杆菌的活菌数为1×107cfu/g。
进一步优选，所述步骤（2）中粉碎后的玫瑰花与去离子水的料液比为1：（5-10）（g/mL）。
进一步优选，步骤（2）中，所述纤维素酶与混合物的料液比为（1-5）：1000（g/mL）。
进一步优选，步骤（2）中，所述酶解的温度为40-50℃，酶解的时间为1-2小时。
进一步优选，步骤（2）中，所述灭菌的温度为80℃，时间为15分钟；所述冷却的温度为25-40℃。
进一步优选，步骤（4）中，所述发酵的温度为30-37℃，pH为5.5-6.5。
进一步优选，步骤（4）中，所述过滤的方法为先用100-200目滤材过滤玫瑰花渣得到滤液，再用0.2 μm的除菌滤膜对滤液进行过滤除菌。
进一步优选，步骤（5）中，所述超滤的超滤膜孔径为0.01 μm；所述离心的转速为8000-12000 rpm，时间为10-20分钟。
另一方面，本发明还提供了根据上述的制备方法得到的玫瑰花提取物在食品、保健品或化妆品上的应用。
应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本申请。
本发明的有益效果：
1、本申请提供的一种玫瑰花提取物的制备方法，得到的提取物中的水溶性维生素含量和多糖含量均有显著提升。这是由于本发明通过酶解技术温和地释放出玫瑰花中的维生素合成前体物质，如糖类、氨基酸类物质，然后采用复合菌种协同发酵提高了维生素的含量，发酵过程中采用了分段发酵提高发酵效率，另外在提取时采用了离心与膜分离联用技术富集水溶性维生素，在提高玫瑰花提取物中水溶性维生素得率的同时较好地保留了多糖。
2、本申请提供的一种玫瑰花提取物的制备方法，得到的提取物中维生素B1、B2、B6、C含量与对比例相比均有显著提升。这是由于使用复合菌种进行了协同发酵，同时使用了产酸菌（植物乳杆菌）与维生素合成菌（酿酒酵母和枯草芽孢杆菌），利用前者产生的酸性环境保护维生素稳定性，后者定向合成水溶性维生素，从而达到了上述效果。
3、本申请通过分段发酵，提高了微生物发酵的效率，继而促进了玫瑰花提取物中水溶性维生素含量的提升。这是由于通过溶氧量分段控制，在发酵前期氧气含量较高即溶氧量50%-70%时，有利于菌体生长繁殖，快速形成菌群，而在后期溶氧量0-10%时，厌氧菌增强代谢，提高产物积累速度，避免水溶性维生素氧化损失。
4.本申请通过超滤工艺，保留了玫瑰花多糖和维生素类物质，使玫瑰花提取物的总抗氧化活性提高。这是由于玫瑰花提取时常规工艺为溶剂加热提取，而加热则会导致多糖和维生素类物质的降解，且有溶剂残留风险。而本申请采用高速离心分离上清液，超滤膜过滤截留大分子杂质，收集滤液，进行提取，整体工艺绿色环保，可改善玫瑰花提取物在食品、保健品及化妆品或护肤品领域的应用。
附图说明
图1是本申请玫瑰花提取物维生素含量对比图；
图2是本申请玫瑰花提取物多糖含量对比图；
图3是本申请使用实施例3中表2配方的人体皱纹变化图；
图4是本申请使用实施例3中表3配方的人体皱纹变化图；
图5是本申请实施例4抗氧化活性对比图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本发明的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。
本发明实施例提供一种玫瑰花提取物的制备方法及应用，能够有效提高玫瑰花提取物中水溶性维生素的含量，且不破坏玫瑰花中本身的活性物质，扩大其在食品、保健品及化妆品领域的应用率。
除特殊说明以外，以下实施例中所用到的试剂和材料均采购自市场。
实施例1：（一种玫瑰花提取物的制备方法）
（1）制备复合菌剂：选用菌株为植物乳杆菌（L. plantarum）（1×107cfu/g，购于山东中科嘉亿生物工程有限公司）、酿酒酵母（S. cerevisiae）（2.8×107cfu/g，购于安琪酵母股份有限公司）和枯草芽孢杆菌（B. subtilis）（1×107cfu/g，购于山东中科嘉亿生物工程有限公司），按照植物乳杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的活菌数比例为2：1：1，万分之一天平精确称量配制；
（2）制备玫瑰基质：将玫瑰花瓣粉碎至40目，与去离子水按料液比为1：7（g/mL）进行混合形成混合物，按照纤维素酶与混合物2：1000（g/mL）的比例加入纤维素酶，于45℃酶解2小时，释放底物，80℃加热灭菌15分钟，冷却到25℃，形成玫瑰基质；
（3）接种：按复合菌剂与玫瑰基质的质量体积比为1：100（g/mL）的比例接种于步骤（2）所述的玫瑰基质中，形成玫瑰花发酵底物；
（4）发酵：将（3）得到的玫瑰花发酵底物在30-37℃、pH 5.5-6.5条件下发酵72小时，前12小时向玫瑰花发酵底物中通入无菌空气，使溶氧量50%-70%，后60小时使其处于封闭体系，控制溶氧量在10%以下，发酵完成后形成玫瑰花渣，先用200目滤材过滤玫瑰花渣得到滤液，再用0.2 μm的除菌滤膜对滤液进行过滤除菌，得到玫瑰花发酵产物；
（5）收集：对步骤（4）得到的玫瑰花发酵产物采用超滤膜（SUEZ GK8040F-30D）过滤截留大分子杂质，通过高速离心收集滤液，转速8000 rpm，离心15分钟，滤液即为玫瑰花提取物。
实施例2：（一种玫瑰花提取物的制备方法）
（1）制备复合菌剂：选用菌株为植物乳杆菌（L. plantarum）（1×107cfu/g，购于山东中科嘉亿生物工程有限公司）、酿酒酵母（S. cerevisiae）（2.8×107cfu/g，购于安琪酵母股份有限公司）和枯草芽孢杆菌（B. subtilis）（1×107cfu/g，购于山东中科嘉亿生物工程有限公司），按照植物乳杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的活菌数比例为1：1：1，万分之一天平精确称量配制；
（2）制备玫瑰基质：将玫瑰花瓣粉碎至60目，与去离子水按料液比为1：7（g/mL）进行混合形成混合物，按照纤维素酶与混合物2：1000（g/mL）的比例加入纤维素酶，于45℃酶解2小时，释放底物，80℃加热灭菌15分钟，冷却到40℃，形成玫瑰基质；
（3）接种：按复合菌剂与玫瑰基质的质量体积比为1：100（g/mL）的比例接种于步骤（2）所述的玫瑰基质中，形成玫瑰花发酵底物；
（4）发酵：将（3）得到的玫瑰花发酵底物在30-37℃、pH 5.5-6.5条件下发酵48小时，前12小时向玫瑰花发酵底物中通入无菌空气，使溶氧量50%-70%，后36小时使其处于封闭体系，控制溶氧量在10%以下，发酵完成后形成玫瑰花渣，先用200目滤材过滤玫瑰花渣得到滤液，再用0.2 μm的除菌滤膜对滤液进行过滤除菌，得到玫瑰花发酵产物；
（5）收集：对步骤（4）得到的玫瑰花发酵产物采用超滤膜（SUEZ GK8040F-30D）过滤截留大分子杂质，通过高速离心收集滤液，转速8000 rpm，离心15分钟，滤液即为玫瑰花提取物。
对比例1：
（1）将玫瑰花瓣粉碎至40目，与去离子水按料液比为1：7（g/mL）混合形成混合物，按照纤维素酶与混合物2：1000（g/mL）的比例加入纤维素酶，于45℃酶解2小时，释放底物；
（2）50℃下超声处理30分钟，超声功率300 W，频率40 kHz；
（3）离心取上清液，转速8000 rpm，离心15分钟，重复提取1次；
（4）合并上清液，得到玫瑰花提取物。
对比例2：
一种玫瑰花提取物，制备方法中除了不加复合菌剂以外，直接将玫瑰基质进行步骤（5）的发酵，其余步骤均同实施例1。
对比例3：
一种玫瑰花提取物，制备方法除了步骤（2）中复合菌剂植物乳杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的活菌数比例为4：1：1以外，其余步骤均同实施例1。
对比例4：
一种玫瑰花提取物，制备方法除了将步骤（1）和（2）中的复合菌剂设置为植物乳杆菌和酿酒酵母，活菌数比例为2：1以外，其余步骤均同实施例1。
对比例5：
一种玫瑰花提取物，制备方法中除了步骤（5）所述发酵条件改为：在30-37℃、pH5.5-6.5、溶氧量恒定在0%-10%条件下发酵60小时以外，其余步骤均同实施例1。
实施例3（维生素和多糖的含量测定及数据分析）
1. HPLC检测维生素含量
A、色谱条件：
色谱柱：Alltima C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相：乙腈-50 mmol/L（A），磷酸二氢铵溶液（磷酸调至pH 3.0）（B），梯度洗脱（0-8 min，5% A；8-23 min，5%-35% A；23-28 min，35%-40% A）；
流速：0.5 mL/min；
检测波长：275 nm；
柱温：30℃。
B、样品制备：
分别精密称取维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C对照品适量，用乙腈一水（5∶95）配制成各浓度约2000 μg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1，2，2.5，3，5 mL于50 mL量瓶中，加乙腈一水（5∶95）稀释至刻度，摇匀，获得各成分浓度约为40，80，100，120，200 μg/mL的混合对照品溶液。
C、供试品溶液的制备：
精密量取玫瑰花提取物5 mL，置于100 mL量瓶中，加入乙腈一水（5∶95）定容，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
D、含量计算：
按A所述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X，mg/mL）绘制标准曲线，得到回归方程。玫瑰花提取物中维生素含量以干物质计算（%），计算方法如下：
：根据HPLC测定计算出来的检测浓度（μg/mL）；
20：检测过程的稀释倍数；
：玫瑰花提取物中水分含量（%），通过快速水份测定仪（sartorius，MA35M-000230V1）可以快速检测水分含量。
2. 对玫瑰提取物多糖含量进行测定
参照专利-ZL202410312477.7说明书-实施例6所述多糖含量检测方法实施。玫瑰花提取物中多糖含量以干物质计算（%），计算方法如下：
：供试品中多糖浓度，mg/mL；
100：检测过程的稀释倍数；
0.9：葡萄糖对多糖校正系数；
：玫瑰花提取物中水分含量（%），通过快速水份测定仪（sartorius，MA35M-000230V1）可以快速检测水分含量。
数据分析：
从表1和图1、图2可看出：
对比例1和对比例2的维生素B、维生素C和多糖含量整体来看相对偏低，两组都未添加复合菌剂，说明复合菌剂的使用可以提高玫瑰花提取物中维生素B、维生素C和多糖的含量。同时，对比例1所采用的是传统的玫瑰花提取物的制备工艺，除了未添加复合菌剂以外，所使用的提取方法也是传统的超声提取工艺，所以对比例1中的多糖含量与两个实施例相比均有显著性差异，这说明本申请所采用的超滤提取工艺较好地保留了玫瑰花提取物中的多糖成分，对于提高玫瑰花提取物的活性有着较为重要的作用。
实施例1的维生素B、维生素C的含量最高，其次是实施例2、对比例3，实施例2、对比例3与实施例1的区别是复合菌剂的活菌数比例不同，说明活菌数比例差异会影响维生素B、维生素C的含量，而且对比例3与两个实施例相比其提取物中的维生素含量均较低，说明本申请所选取的复合菌剂的配比是较为优异的。另外，对比例4的维生素B、维生素C的含量与实施例1相比均有显著降低，说明复合菌剂的菌种种类会影响玫瑰花提取物中维生素B、维生素C的含量。因此，以上这些数据表明，本申请所选用的复合菌剂的菌种种类及其配比，对于提高玫瑰花提取物中的水溶性维生素的含量具有重要作用。
对比例5的维生素B、维生素C的含量与两个实施例相比均有显著性降低，说明了复合菌剂发酵过程的工艺控制条件会影响玫瑰花提取物中维生素B、维生素C和多糖含量，进一步证明本申请所采用的分段发酵工艺能较大地提升复合菌剂的发酵效率，提高产物中维生素B和C的合成效率。
综上所述，对比例1-5与实施例1-2的玫瑰花提取物中维生素B1、B2、B6、C和多糖的含量对比，说明了本申请所采用的复合菌剂、分段发酵以及超滤提取工艺均对提高玫瑰花提取物中的维生素和多糖含量具有重要作用。
表1 玫瑰花提取物维生素和多糖含量对比表
注：同一种成分含量组相同字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母之间表示差异显著（P＜0.05）。
实施例4：（一种玫瑰花提取物应用于护肤品中的实例）
按照表2将实施例1所得的玫瑰花提取物应用护肤品中；
表2 玫瑰护肤精华液配方表
（1）按照表3将对比例2所得的玫瑰花提取物应用护肤品中；
表3 玫瑰护肤精华液配方表
（2）随机选择30名人员，分别试用玫瑰护肤精华液（表2配方）和玫瑰护肤精华液（表3配方），各配方15名人员试用，通过问卷调查方式让受试者自我评估，通过MAX版摩玑AI智能图像仪检测试用者皱纹变化情况，在第0天、第28天测试时对受试者进行产品使用评估调查；
（3）主观评价结果：如表4所示，100%的人员认为使用表1配方的玫瑰护肤精华液后面部整体改善，47%的人员认为使用表2配方的玫瑰护肤精华液后面部整体改善。
表4 试用精华液28天主观评价结果
从表4看出，使用表2配方的玫瑰护肤精华液满意度比表3配方高。从图3和图4的人体皱纹变化图可以看出，使用表2配方的人体额头部位皱纹减少程度比表3配方高。表2配方添加实施例1制备的玫瑰花提取物，表3配方添加的是对比例2的玫瑰花提取物，实施例1的玫瑰花提取物比对比例2的维生素B、维生素C和多糖含量更高，这些物质具有紧致抗皱、保湿、修护等作用。因此，玫瑰花提取物在相同添加量下，使用实施例1的表2配方对皮肤的改善程度会更明显。
实施例5（抗氧化活性对比实验）
实验原理：活性氧（ROS）是含氧的化学反应性化学物质。包括过氧化物，超氧化物，羟基自由基等。ROS为氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。然而在紫外线暴露期间，ROS水平会急剧增加。这可能会对细胞结构造成严重损害，这被称为氧化应激。
CellROX®试剂是一种DNA染料，本身荧光较弱，可被细胞内的ROS氧化，氧化产物与DNA结合，产生明亮的绿色荧光。CellROX®可溶于有机溶剂（如二甲基亚砜），而斑马鱼卵黄囊的主要成分为脂肪，因此，CellROX®在卵黄囊的通透性较强，该部位染色明显。
甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应，通过斑马鱼卵黄囊荧光强度评价样品抗氧化功效。
选用实施例1、对比例1、对比例2提供的玫瑰花提取物进行抗氧化活性检测，方法如下：
（1）药品配制：配制0.2 mg/mL的甲萘醌溶液（模型组），0.5%的N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC，阳性组）及实施例1、对比例1、对比例2提供的玫瑰花提取物样品；
（2）将斑马鱼吸入6孔板中，标准稀释液定容至3 mL，除空白组外扣除加药体积后分孔加入药品，模型组加入3 μl甲萘醌溶液，阳性组加入60 μl NAC溶液和3 μl甲萘醌溶液，样品组加入60 μl实施例1或对比例1或对比例2溶液和3 μl甲萘醌溶液；
（3）混匀后锡箔纸包裹避光置于28℃培育24 h；
（4）染色，盖上盖板，锡箔纸包裹避光置于28℃培养箱染色1-3 h；
（5）采用Dunnett ’s T-检验进行统计学处理，以空白组作为标准，比较各实验组卵黄囊染色强度，P<0.05为有显著性差异；
（6）计算：抗氧化功效（%）=×100%；
（7）结果：
如表5所示，实施例1提供的玫瑰花提取物的抗氧化活性与阳性组（含0.5% NAC，抗氧化剂）的抗氧化活性相当（P＞0.05），比对比例1高37.78%（P＜0.01），比对比例2高35.21%（P＜0.01）。
从图5可以看出，在斑马鱼抗氧化实验中，与空白组对比，模型组斑马鱼卵黄囊荧光强度有显著差异（P＜0.05），表明模型建立成功。与模型组对比，阳性组、实施例1样品组的斑马鱼卵黄囊荧光强度有显著性差异（P＜0.05）。对比例1、对比例2样品组的斑马鱼卵黄囊荧光强度明显高于实施例1（P＜0.01），表明在斑马鱼抗氧化实验中，实施例1提供的玫瑰花提取物具有比对比例1、对比例2更好的抗氧化功效，这是因为实施例1提供的玫瑰花提取物中的维生素B、维生素C和多糖含量更高，这些成分有抗氧化作用。因此，在玫瑰花提取物相同浓度条件下，实施例1提供的玫瑰花提取物抗氧化活性远大于对比例1和对比例2。
因此，以上这些数据表明，使用本申请提供的方法可以显著增强玫瑰花提取物的抗氧化活性，更有利于其在化妆品领域的应用。
表5 玫瑰花提取物抗氧化活性对比表
以上已经描述了本申请的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。本文中所用术语的选择，旨在最好地解释各实施例的原理、实际应用或对市场中的技术的改进，或者使本技术领域的其他普通技术人员能理解本文披露的各实施例。

Claims (9)

1.一种玫瑰花提取物的制备方法，其特征在于，
所述制备方法包括以下步骤：
（1）制备复合菌剂：将植物乳杆菌（L. plantarum）、酿酒酵母（S. cerevisiae）和枯草芽孢杆菌（B. subtilis）按照活菌数比例为（1-3）：（1-2）：（1-2）进行配比，得到复合菌剂；
（2）制备玫瑰基质：将玫瑰花粉碎后与去离子水混合，得到混合物，向混合物中加入纤维素酶进行酶解，加热灭菌后冷却，形成玫瑰基质；
（3）接种：将所述复合菌剂接种至所述玫瑰基质中，所述复合菌剂与玫瑰基质的质量体积比为（0.2-2）：100（g/mL），形成玫瑰花发酵底物；
（4）发酵：将（3）得到的玫瑰花发酵底物在30-37℃，pH 5.5-6.5的条件下发酵48-72小时，前12小时的溶氧量在50%-70%，之后的发酵时间控制溶氧量在0-10%，发酵完成后形成玫瑰花渣，玫瑰花渣经过过滤得到玫瑰花发酵产物；
（5）收集：对所述玫瑰花发酵产物进行超滤，然后离心收集滤液，即为玫瑰花提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，植物乳杆菌的活菌数为1×107 cfu/g；酿酒酵母的活菌数为2.8×107 cfu/g；枯草芽孢杆菌的活菌数为1×107cfu/g。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中粉碎后的玫瑰花与去离子水的料液比为1：（5-10）（g/mL）。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述纤维素酶与混合物的料液比为（1-5）：1000（g/mL）。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶解的温度为40-50℃，酶解的时间为1-2小时。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述灭菌的温度为80℃，时间为15分钟；所述冷却的温度为25-40℃。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述过滤的方法为先用100-200目滤材过滤玫瑰花渣得到滤液，再用0.2 μm的除菌滤膜对滤液进行过滤除菌。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述超滤的超滤膜孔径为0.01 μm；所述离心的转速为8000-12000 rpm，时间为10-20分钟。
9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法得到的玫瑰花提取物在食品、保健品或化妆品上的应用。
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