CN1281981A - 血清低密度脂蛋白测定试剂 - Google Patents
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Abstract
一种血清低密度脂蛋白测定试剂,包括由α－磺化环状糊精、硫酸葡聚糖、MgCl2、二氯苯酚、N－乙基－N－(3－甲苯基)－N′－琥珀酰乙烯二胺、3－[N－吗啡啉]－2－羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅰ、和由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4－氨基安替比林、聚氧乙烯－聚氧丙烯聚醚、3－[N－吗啡啉]－2－羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅱ,具有不需对样品作沉淀、分离操作,简便、快捷、价廉、准确度高、精确度好等优点。
Description
本发明涉及生化技术及生物化学检验技术，特别是临床医学体外诊断及临床心血管疾病的诊断。
LDL是致动脉粥样硬化因子，LDL增多说明具有促进动脉粥样硬化形成的作用。LDL是由血浆中VLDL转变而来的，其功能是由肝将胆固醇转运到全身各组织细胞的主要形式，故与高胆固醇血症的形成密切相关。测定LDL临床常采用Friedewald公式计算，聚乙烯硫酸沉淀法，电泳法测定血清低密度脂蛋白(Low densitylipoprotein，LDL)，前者是间接计算出LDL水平，影响因素多，误差大；聚乙烯硫酸沉淀法尽管为日常工作中常用方法，但麻烦，误差大；电泳法不适合在常规工作中开展。临床检验中需要一种直接测定LDL水平的方法。
本发明的目的是提供一种直接测定血清LDL的检测试剂和使用该试剂之检测方法，使其具有不需对样品作沉淀、分离操作，简便、快捷、价廉、分析能力强，比沉淀法方便，比采用公式法计算简便，而且准确度高、精确度好等优点，更适于临床医学检验的需要。此外，本发明试剂还适于在自动化仪器上操作，可提高分析方法的特异性，消除干扰物影响，提高准确性。
本发明检测试剂及检测方法的原理是：聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚(POE-POP copolyether)可阻止血清中HDL、极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜粒(CM)与胆固醇氧化酶(COD)、胆固醇酯酶(CEH)接触(催化)；而LDL能自由和COD，CEH接触而催化。LDL在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下，生成4-胆甾-3-烯酮和H2O2，H2O2在过氧化物酶作用下与4-氨基安替比啉(4-APP)、二氯苯酚(DCP)反应，生成红色的醌类化合物，利用比色分析原理即可求出样品中LDL含量。
本发明提供的血清低密度脂蛋白测定试剂，包括由α-磺化环状糊精、硫酸葡聚糖、MgCl2、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺、3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅰ，和由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比啉、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅱ。试剂Ⅰ、试剂Ⅱ中各组分含量分别为：
试剂Ⅰ(每升试剂中各组分含量)：
α-磺化环状糊精 0．1-2．0mmol，
硫酸葡聚糖 0．1-1．0g，
MgCl21-3mmol
二氯苯酚 40-60mmol
N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1-4mmol
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 30-70mmol
试剂Ⅱ(每升试剂中各组分含量)：
胆固醇酯酶 0．5-5．0ku，
胆固醇氧化酶 1-10ku，
过氧化物酶 10-100ku，
4-氨基安替比林 1-5．0mmol
聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 1-10g
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 30-70mmol
LDL增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。过去只测TC估计LDL水平，但TC水平也受HDL水平的影响，故目前主张最好采用LDL代替TC作为动脉粥样硬化性疾病的危险因素指标。
与现有技术方法相比较，本发明提供的试剂及检测方法操作方便，不需分离脂蛋白各组分，直接测定样本中LDL含量，准确度、精密度、特殊性及实用性好，应用本发明检测试剂检测，其回收率可达98-102％，精确度达：日内cv为0．5-1．0％，日间cv为1．2-2．0％；而现行沉淀法之回收率仅为90-110％，精确度则为日内cv为0．8-1．5％。日间cv为2-4％；本发明还适用于自动生化分析仪。本发明试剂可制成冻干品，适于保存和运输。
附图1为本发明实施例标准曲线。
实施例1．试剂配制取：α-磺化环状糊精 0．5mmol，硫酸葡聚糖 0．5g，MgCl2 2．0mmol二氯苯酚 35mmolN-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1．4mmol3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 50mmol配制成1升溶液制成试剂Ⅰ；取：胆固醇酯酶 1ku，胆固醇氧化酶 3ku，过氧化物酶 30ku，4-氨基安替比啉 2．5mmol聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 4g3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 50mmol配制成1升溶液制成试剂Ⅱ。2．检测操作
| 样品空白 样品 标准空白 标准 |
| 血清 200ul 200ul |
| 标准 200ul 200ul |
| 试剂I 1000ul 1000ul 1000ul 1000ul |
| 混匀37℃保温5分钟，加入 |
| 试剂Ⅱ 250ul 250ul |
| 蒸馏水 250ul 250ul |
胆固醇标准品的配制：胆固醇标准品(100mg／dL)购于Sigma公司，将所需胆固醇溶于10mmol／L Nacl溶液中，加入1‰叠氮钠作稳定剂，以每安瓿中加2．0ml上述标准品，制成冻千品，使用前加2．0ml纯水复溶，放置20分钟后使用
3．计算及正常值血清低密度脂蛋白
正常值＜3．36mmol／l
4．标准曲线
本发明实施例标准曲线载于说明书附图，是在法国Palcor全自动生化分析仪中测定所作。
根据实验室条件，可选用手工测定或全自动生化分析仪，修改实验参数使试剂Ⅰ∶试剂Ⅱ∶样本=20∶4∶5；．血清VLDL很高时，有时结果会偏低。故在血清严重混浊时，可将血清稀释一倍后测定。
Claims (4)
1．一种血清低密度脂蛋白测定试剂，包括由α-磺化环状糊精、硫酸葡聚糖、二氯苯酚、MgCl2、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺、3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅰ，和由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比啉、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂Ⅱ。
2．根据权利要求1所述的血清低密度脂蛋白测定试剂，其特征是在所述的试剂Ⅰ、试剂Ⅱ中各组分的含量是：
(1)每升试剂Ⅰ中各组分含量为：
α-磁化环状糊精 0．1-2．0mmol，
硫酸葡聚糖 0．1-1．0g,
MgCl2 1-3mmol
二氯苯酚 40-60mmol
N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1-4mmol
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 30-70mmol
(2)每升试剂Ⅱ中各组分含量：
胆固醇酯酶 0．5-5．0ku，
胆固醇氧化酶 1-10ku，
过氧化物酶 10-100ku，
4-氨基安替比啉 1-5．0mmol
聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 1-10g
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 30-70mmol
3．根据权利要求1、2所述的血清低密度脂蛋白测定试剂，其特征是在所说的试剂Ⅰ、试剂Ⅱ中各组分的含量为：
(1)每升试剂Ⅰ中各组分含量：
α-磺化环状糊精 0．5mmol，
硫酸葡聚糖 0．5g，
MgCl2 2．0mmol
二氯苯酚 35mmol
N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1．4mmol
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 50mmol
(2)每升试剂Ⅱ中各组分含量：
胆固醇酯酶 1ku，
胆固醇氧化酶 3ku，
过氧化物酶 30ku，
4-氨基安替比啉 2．5mmol
聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 4g
3-[N-吗啡啉]-2-羟丙基磺酸缓冲液 50mmol
4．一种血清低密度脂蛋白测定方法，其特征在于使用了权利要求1至3中任一项所述的血清低密度脂蛋白测定试剂。
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