CN1689628A - 穿心莲提取物的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种穿心莲提取物的医药用途，具体涉及一种穿心莲提取物在制备TNF－α和/或IL－1β抑制剂中的用途，特别是涉及一种穿心莲提取物在制备治疗溃疡性结肠炎或克隆病的药物中的用途。

Description

穿心莲提取物的医药用途

技术领域

本发明涉及一种穿心莲提取物的医药用途，具体涉及一种穿心莲提取物在制备TNF-α和/或IL-1β抑制剂中的用途，特别是涉及一种穿心莲提取物在制备治疗溃疡性结肠炎或克隆病的药物中的用途。

背景技术

炎症是机体对各种致炎症因子引起的损伤所发生的以防御为主的反应，炎症的局部表现为红，肿，热，痛及功能障碍。这些表现在急性体表炎症时较为明显，而内脏的炎症和慢性炎症则多不明显。炎症不仅表现在局部，而且也常引起全身反应。常见的全身反应有发热，血液中的白细胞数目增多以及心，肝，肾等实质性器官可出现不同程度的变性，坏死等病变。

按病理分类，炎症可分为变质性炎、浆液性炎、纤维素性炎、化脓性炎、出血性炎、卡他性炎、增生性炎和慢性肉芽肿性炎。

TNFα是一种前体炎症细胞因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，参与许多炎症反应的过程。内毒素(LPS)是TNFα的诱导剂。研究发现，TNFα具有多种生物学活性：1)杀伤或抑制肿瘤细胞；2)提高中性粒细胞的吞噬能力，增加过氧化物阴离子产生，参与炎症反应；3)抗感染等。据文献报道，TNFα抑制剂可用于类风湿性关节炎、幼年型类风湿关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、炎性肠病(包括克隆病和溃疡性结肠炎)、心力衰竭、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、银屑病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓型白血病、帕金森氏症、艾滋病痴呆综合征、早老性痴呆、抑郁症、脓毒症、坏疽性脓皮病、败血症、感染性休克、白塞氏病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、Wegener′s肉芽肿、休格连氏干燥症、慢性阻塞性肺病、哮喘、急性胰腺炎、牙周病、恶病质、癌症、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染、肥胖等多种病症的治疗^(1-25)(1.Ogata H，Hibi T.et al Curr Pharm Des.2003；9(14)：1107-13.2.Moller DR.et al J Intern Med.2003 Jan；253(1)：31-40.3.Taylor PC.Etal Curr Pharm Des.2003；9(14)：1095-106.4.Wilkinson N et al Arch Dis Child.2003 Mar；88(3)：186-91.5.Nishimura F et al J Periodontol.2003 Jan；74(1)：97-102.6.Weinberg JM et al Cutis.2003 Jan；71(1)：41-5.7.Burnham E et al CritCare Med.2001 Mar；29(3)：690-1.8.Sack M.et al Pharmacol Ther.2002 Apr-May；94(1-2)：123-35.9.Barnes PJ.Et al Annu Rev Pharmacol Toxicol.2002；42：81-98.10.Mageed RA et al Lupus.2002；11(12)：850-5.11.Tsimberidou AM et al ExpertRev Anticancer Ther. 2002 Jun；2(3)：277-86.12.Muller T.et al Curr Opin InvestigDrugs.2002 Dec；3(12)：1763-7.13.Calandra T et al Curr Clin Top Infect Dis.2002；221-23.14.Girolomoni G et al Curr Opin Investig Drugs.2002 Nov；3(11)：1590-5.15.Tutuncu Z et al Clin Exp Rheumatol.2002 Nov-Dec；20(6 Suppl 28)：S146-51.16.Braun J et al Best Pract Res Clin Rheumatol.2002 Sep；16(4)：631-51.17.Barnes PJ.Et al Novartis Found Symp.2001；234：255-67；discussion 267-72.18.Brady M，et al Baillieres Best Pract Res Clin Gastroenterol.1999 Jul；13(2)：265-89.19.Goldring MB.et al Expert Opin Biol Ther.2001 Sep；1(5)：817-29.20.MarietteX.Rev Prat.2003 Mar 1；53(5)：507-11.21.Sharma R et al Int J Cardiol.2002 Sep；85(1)：161-71.22.Wang CX et al Prog Neurobiol.2002 Jun；67(2)：161-72.23.VanReeth K et al Vet Immunol Immunopathol.2002 Sep 10；87(3-4)：161-8.24.LeonardBE et al Int J Dev Neurosci.2001 Jun；19(3)：305-12.25.Hays SJ et al Curr PharmDes.1998 Aug；4(4)：335-48.)。

IL-1β是由单核巨噬细胞、树突状细胞、纤维母细胞等产生的一种细胞因子。它能刺激T细胞和B细胞的增殖和分化、刺激造血以及参与炎症反应。据文献报道，IL-1β抑制剂可用于类风湿性关节炎、败血症、牙周病、心力衰竭、皮肌炎、急性胰腺炎、慢性阻塞性肺病、早老性痴呆、骨性关节炎、细菌感染、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、葡萄膜炎、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染、哮喘、抑郁症、硬皮病等多种病症的治疗^(26～45)(26.Taylor PC.et al CurrPharm Des.2003；9(14)：1095-106.27.Dellinger RP et al Clin Infect Dis.2003 May15；36(10)：1259-65.28.Takashiba S et al J Periodontol.2003 Jan；74(1)：103-10.29.Diwan A，et al Curr Mol Med.2003 Mar；3(2)：161-82.30.Lundberg IE，et alRheum Dis Clin North Am.2002 Nov；28(4)：799-822.31.Makhija R，et al JHepatobiliary Pancreat Surg.2002；9(4)：401-10.32.Chung KF.Et al Eur Respir JSuppl.2001 Dec；34：50s-59s.33.Hallegua DS，et al Ann Rheum Dis.2002 Nov；61(11)：960-7.34.Goldring MB.Et al Expert Opin Biol Ther.2001 Sep；1(5)：817-29.35.Mrak R E，Griffin WS.Et al Neurobiol A ging.2001 Nov-Dec；22(6)：903-8.36.Brady M，et al Baillieres Best Pract Res Clin Gastroenterol.1999 Jul；13(2)：265-89.37.Van der Meer JW，et al Ann N Y Acad Sci.1998 Sep 29；856：243-51. 38.Rameshwar P et al Acta Haematol.2003；109(1)：1-10.39.deKozak Y et al Int Rev Immunol.2002 Mar-Jun；21(2-3)：231-53.40.Wang CX et alProg Neurobiol.2002 Jun；67(2)：161-72.41.Van Reeth K et al Vet ImmunolImmunopathol.2002 Sep 10；87(3-4)：161-8.42.Stirling RG et al Br Med Bull.2000；56(4)：1037-53.43.Leonard BE et al Int J Dev Neurosci.2001 Jun；19(3)：305-12.44.Allan SM et al Ann N Y Acad Sci.2000；917：84-93.45.Cafagna D et al MinervaMed.1998 May；89(5)：153-61)。

穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis Paniculata(Brun.f.)Nees的干燥地上部分，其性寒味苦，具有清热解毒、凉血消肿的功效。穿心莲在中国和印度都有广泛应用，常用于治疗感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮，顿咳劳嗽，泄泻痢疾，毒蛇咬伤等症(国家药典委员会，中华人民共和国药典2000版一部，200页，2000)。据报道穿心莲中的主要活性成分为二萜内酯类化合物穿心莲内酯(Andrographolide)，其它的活性成分还有脱氧穿心莲内酯，新穿心莲内酯等(Chem WM.，et al.，Planta Medica；15：245-246.1982；Siripong，P.，B.et al.，J.Sci.Soc.Thailand 18(4)：187-94.1992)。

现代医学研究证明，穿心莲具有免疫增强(Puri A.，et al.，J Nat Prod，56(7)，995-9，1993)、抗肿瘤(李玉祥等，中国药科大学学报，30(1)，37-41，1999)、保肝(Trivedi NP.，et al.，Indian J Exp Biol.39(1)：41-6，2001)、抗生育(Akbarsha MA.，et al.，Indian J Exp Biol.May；28(5)：421-6，1990)、抗病毒和抗炎等作用(陈国祥等，现代中西医结合杂志，10(11)，1004-5，2001)。另外，据报道穿心莲提取物具有治疗糖尿病的作用(Zhang XF.，et al.，Acta Pharmacol Sin.21(12)：1157-64，2000)。最近，美国Bastyr大学的研究证明穿心莲能够抗HIV病毒，可能用于治疗艾滋病(Calabrese C.et al.，Phytother Res.14(5)：333-8，2000)。

现有文献未见有关穿心莲提取物、穿心莲内酯及其衍生物、类似物具有抑制TNFα和IL-1β表达活性的报道。

发明内容

本发明的目的旨在提供穿心莲提取物的一种新的制药用途。

本发明的一个方面是涉及穿心莲提取物在制备TNFα和/或IL-1β抑制剂中的用途。

尤其是，本发明涉及穿心莲提取物在制备治疗溃疡性结肠炎或克隆病的药物中的用途。

所述“TNFα抑制剂”可用于治疗下列病症，包括但不限于：脊柱关节病、炎性肠病(包括克隆病和溃疡性结肠炎)、心力衰竭、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、银屑病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓型白血病、帕金森氏症、早老性痴呆、抑郁症、艾滋病痴呆综合征、白塞氏病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、Wegener′s肉芽肿、休格连氏干燥症、慢性阻塞性肺病、哮喘、急性胰腺炎、牙周病、恶病质、癌症、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染或肥胖。

所述“IL-1β抑制剂”可用于治疗下列病症，包括但不限于：败血症、牙周病、心力衰竭、皮肌炎、急性胰腺炎、慢性阻塞性肺病、早老性痴呆、骨性关节炎、细菌感染、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、葡萄膜炎、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染、哮喘、抑郁症或硬皮病。

本发明的另一个方面是涉及穿心莲提取物在制备治疗炎性病症药物中的用途，所述药物可用于治疗选自下组病症的一种或多种，这些病症包括但不限于：炎性肠病(包括克隆病和溃疡性结肠炎)、心力衰竭、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、银屑病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓型白血病、帕金森氏症、早老性痴呆、抑郁症、艾滋病痴呆综合征、白塞氏病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、Wegener′s肉芽肿、休格连氏干燥症、慢性阻塞性肺病、哮喘、急性胰腺炎、牙周病、恶病质、癌症、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染或肥胖。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的其它特点、目的和优势将会更为明显。

本发明的问世部分是基于这样一个意外的发现：穿心莲提取物在体外可显著抑制前体炎症因子TNFα和IL-1β的表达。因此，穿心莲提取物可用于制备TNFα和/或IL-1β抑制剂。

特别是，本发明的穿心莲提取物可显著缓解溃疡性结肠炎或克隆病小鼠模型的病情，因而可用于制备治疗溃疡性结肠炎或克隆病的药物。

本发明的穿心莲提取物可用本领域的常规方法制得，例如可将穿心莲粗粉用乙醇热提，合并提取液，冷却、过滤，滤液浓缩至干燥制得。本发明的穿心莲提取物中优选含有穿心莲内酯2％～20％、14-去氧穿心莲内酯1％～6％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯1％～12％、新穿心莲内酯1％～5％(重量比)，更优选含有穿心莲内酯3～5％、14-去氧穿心莲内酯3～8％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯7～9％、新穿心莲内酯2～4％(重量比)，最优选含有穿心莲内酯4.2％、14-去氧穿心莲内酯4.4％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯8％、新穿心莲内酯2.1％(重量比)。

所述“TNF-α抑制剂”可用于治疗下列病症，包括但不限于：脊柱关节病(spondyloarthropathies)、炎性肠病(inflammatory bowel disease)、心力衰竭(heart failure)、糖尿病(diabetes mellitus)、系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus)、硬皮病(scleroderma)、结节病(sarcoidosis)、皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis)、银屑病(psoriasis)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome)、急性髓型白血病(acute myelogenous leukemia)、帕金森氏症(Parkinson′s disease)、艾滋病痴呆综合征(AIDS dementia complex)、早老性痴呆(Alzheimer′s disease)、抑郁症(depression)、白塞氏病(Behcet′s syndrome)、移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease)、葡萄膜炎(uveitis)、Wegener′s肉芽肿(Wegener′s granulomatosis)、休格连氏干燥症(Sjogren′s syndrome)、慢性阻塞性肺病(chronic obstructivepulmonary disease)、哮喘(asthma)、急性胰腺炎(acute pancreatitis)、牙周病(Periodontal disease)、恶病质(cachexia)、癌症(cancer)、中枢神经系统损伤(central nervous system injury)、呼吸道病毒感染(viral respiratory disease)、肥胖(obesity)等。

所述“IL-1β抑制剂”可用于治疗下列病症，包括但不限于：败血症(hematosepsis)、牙周病(Periodontal disease)、心力衰竭(heart failure)、皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis)、急性胰腺炎(acute pancreatitis)、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease)、早老性痴呆(Alzheimer′sdisease)、骨性关节炎(osteoarthritis)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome)葡萄膜炎(uveitis)、中枢神经系统损伤(central nervous system injury)、呼吸道病毒感染(viral respiratorydisease)、哮喘(asthma)、抑郁症(depression)、硬皮病scleroderma)等。

其中“脊柱性关节病”(spondyloarthropathies)是指一组具有内在联系的多系统炎症性疾病。因此类疾病患者其血中的类风湿因子(rheumatoid factor)为阴性，所以又称为“血清阴性脊柱关节病(seronegative spondyloarthropathies)。本病可累及脊柱、外周关节、关节周围结构或三者均累及，并伴有各种特征性的关节外表现，如急慢性胃肠或泌尿生殖系统炎症(有时可为感染)、眼前部炎症、银屑病性皮肤、指甲损害等。本组疾病主要包括：强直性脊柱炎(Ankylosingspondylitis)、瑞特氏综合症(Reiter′s syndrome)、银屑病性关节炎(Psoriaticarthropathy)、炎性肠病性关节炎(Inflammatory bowel disease arthritis)、未分化型脊柱关节病(Undifferentiated spondyloarthropathy)等。

其中“炎性肠病”(inflammatory bowel disease)是克隆病(Crohn’s disease)、和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)两种非特异性肠炎的统称。

其中“慢性阻塞性肺病”(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是指具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和/或肺气肿(美国胸科学会(ATS)和中华医学会呼吸系统学会定义)。某些支气管哮喘，在疾病进程中发展为不可逆性气流阻塞，当支气管哮喘与慢性支气管炎和(或)肺气肿重叠存在或难以鉴别时，也可列入COPD范围。COPD的主要特征是慢性进行性气流阻塞。

可以理解，本发明的穿心莲提取物可用于制备治疗上述炎性病症的药物。术语“炎性病症”是指一组存在炎症反应病理变化的病症，包括但不限于：类风湿性关节炎、幼年型类风湿关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、炎性肠病、心力衰竭、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、银屑病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓型白血病、帕金森氏症、早老性痴呆、抑郁症、艾滋病痴呆综合征、脓毒症、坏疽性脓皮病、败血症、感染性休克、白塞氏病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、Wegener′s肉芽肿、休格连氏干燥症、慢性阻塞性肺病、哮喘、急性胰腺炎、牙周病、恶病质、癌症、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染、细菌感染或肥胖。

应该理解，所述“炎性病症”可能会在日后被证明具有其它的、未必与TNFα和IL-1β的表达密切相关的发病机理。但这并不影响本发明的穿心莲提取物在制备治疗上述病症的药物的应用。

本发明的穿心莲提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成份的本发明的穿心莲提取物及可药用载体。较佳的，本发明的药物组合物含有0.1-99.9％重量百分比的作为活性成份的本发明的穿心莲提取物。“可药用载体”不会破坏本发明的穿心莲提取物的药学活性，同时其有效用量，即能够发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。

“可药用载体”包括但不限于：离子交换材料、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-α-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐温(Tweens)或其它类似聚合介质等药物制剂用的表面活化剂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二纳、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、硅酸镁等。聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚丙稀酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、环糊精如α-、β-及γ-环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基-β-环糊精等羟烷基环糊精或其它可溶性衍生物等均可用于促进本发明的穿心莲提取物的药物传递。

其它可药用辅料如填充剂(如无水乳糖、淀粉、乳糖珠粒和葡萄糖)、粘合剂(如微晶纤维素)、崩解剂(如交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素和交联PVP)、润滑剂(如硬酯酸镁)、吸收促进剂、香味剂、甜味剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂、溶剂、增溶剂和着色剂等也可加入本发明的药物组合物中。

上述本发明的穿心莲提取物以及药物组合物可通过肠道或者非肠道途径给药。非肠道给药制剂包括注射液、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。给药途径包括皮下、皮内、动脉内、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内注射或输注。其给药途径包括口服、局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、皮内、粘膜、气管、尿道。本发明的穿心莲提取物以及药物组合物还可以通过吸入气雾或植入蓄积或者针刺方式给药。

本发明的穿心莲提取物以及药物组合物的口服制剂包括但不限于胶囊、片剂、乳剂、水悬浮剂、溶液、微胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂或粉剂。常用于片剂的可药用载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还可加入硬脂酸镁等润滑剂。常用于胶囊剂的可药用载体包括乳糖和干玉米淀粉。当制成口服水悬浮剂和/或乳剂时，所述穿心莲提取物可悬浮或溶解于油相里并与乳化剂或悬浮剂相结合。也可以按需加入一些甜味剂和/或香味剂和/或增色剂。

本发明的穿心莲提取物以及药物组合物可被制成无菌注射剂，如无菌水相或油相的悬浮液。该悬浮液可按本领域的常规方法即使用适宜的分散剂或湿润剂(如Tween 80)及悬浮剂等制得。所述无菌注射剂还可以是在可肠道外给药的无毒稀释剂或溶剂中的溶液或悬浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。其可用载体或溶剂包括甘露醇、水、林格氏液、等渗氯化钠等。另外，无菌的固定油常被作为溶剂或悬浮剂的媒介，因而各种温和的固定油(bland fixed oil)如合成的甘油单酯或甘油二酯等均适用。脂肪酸，如十八烯酸及其甘油酯衍生物可用于制备所述注射剂，如橄榄油或蓖麻油及其聚氧乙烯基衍生物等。所述油溶液或悬浮液还可包含一种长链的乙醇稀释剂或分散剂或羧甲基纤维素或类似的分散剂，此类物质常用于制备可药用乳剂和/或悬浮剂。其它一些药物制剂常用的表面活性剂如Tweens或Spans和/或其它类似的乳化剂或生物利用度促进剂等均可用于制备本制剂。

本发明的穿心莲提取物以及药物组合物可制成栓剂以直肠给药，方法是将所述穿心莲提取物与适宜的非刺激性赋形剂混合，后者在室温下为固体而在直肠温度下为液体，因而该栓剂可融解于直肠中并释放出活性成份。此类赋形剂包括但不限于：可可油、蜂蜡、聚乙二醇。本发明的穿心莲提取物以及药物组合物的局部给药制剂(如油膏)可直接应用于患处。该局部制剂含有活性成份及可药用载体，所述可药用载体包括但不限于矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙稀化合物、乳化腊和水。另外，本发明的穿心莲提取物以及药物组合物还可制成洗剂或油剂。其适用的载体包括但不限于：矿物油、山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸腊酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇和水。本发明的穿心莲提取物以及药物组合物还可制成灌肠剂等进行直肠局部给药。局部透皮贴剂亦在本发明的保护范围之内。本发明的穿心莲提取物以及药物组合物亦可经鼻喷雾或者吸入给药，即按本领域的常规方法使用苯甲基乙醇或其它防腐剂、吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它增溶剂或分散剂制得盐溶液。

本发明的穿心莲提取物以及药物组合物还可通过植入给药。采用植入给药方式可达到在给药对象体内持续、定时释放本发明的穿心莲提取物以及药物组合物的效果。另外，植入给药还能在局部组织和器官定位给药(Negrin et al.，Biomaterials 22(6)：563，2001)定时释放技术亦可用于本发明的穿心莲提取物以及药物组合物的给药，如基于聚合体技术的定时释药胶囊、缓释技术和制剂包裹技术(如聚合体和脂质体)等。

贴剂同样包括在本发明的范围之内。其包括基层(如聚合体、布、纱和绷带)和本发明的药物组合物。基层的一边可设有一保护层以防止活性成份的流出。所述贴剂还可含有一用于固定的粘合剂，后者可以是一种自然的或者合成的物质，当其与给药对象的皮肤接触时可暂时粘附于皮肤上。粘合剂可以是防水的。

治疗有效量的本发明的穿心莲提取物及药物组合物介于0.001～100mg/kg/d之间。任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的有效量，其中较低剂量介于0.001mg/kg/d和99.999mg/kg/d之间，较高剂量介于0.002mg/kg/d和100mg/kg/d之间。所述“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗。本领域的专业人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象(如哺乳动物-人)的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素的影响，包括所用化合物或其前药的药效活性、给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。

为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的诠释而非对本发明的任何方式的限制。上文所列的各相关文献均以全篇引入本文作为参考。

附图说明

图1在正常人外周血单核细胞中穿心莲提取物剂量依赖性抑制内毒素诱导的前体炎症因子TNFα的表达；

图2在正常人外周血单核细胞中穿心莲提取物剂量依赖性抑制内毒素诱导的前体炎症因子IL1-β的表达；

图3各给药组对TNBS诱导炎性肠病小鼠体重的影响(与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01)；

图4各给药组对TNBS诱导炎性肠病小鼠结肠比重及病变的影响(与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01)。

具体实施方式

实施例1制备穿心莲提取物

1000g穿心莲粗粉用85％的乙醇热提两次，每次2小时，合并提取液，冷却，过滤，滤液浓缩至干燥，得105g穿心莲提取物。经高压液相色谱法(HPLC)测定，其中含有穿心莲内酯4.2％、14-去氧穿心莲内酯4.4％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯8％、新穿心莲内酯2.1％(重量比)。

实施例2穿心莲提取物抑制前体炎症因子实验研究

实验材料：

1、细胞：正常人外周血单核细胞(PBMC)

2、受试药物：穿心莲提取物(按实施例1方法制备)

3、阳性对照：地塞米松(美国Sigma公司产品)

4、试剂：Ficoll-Paque Plus(Amersham Bioscience)；内毒素(LPS，lipopolysaccharide)和地塞米松(CalBiochem.)；TNFa ELISA Kit及IL-1βELISAKit(晶美生物工程公司)；二甲基亚砜(DMSO)为美国Sigma公司产品；细胞培养基及胎牛血清Gibco公司为产品

方法与结果：

新鲜血液以EDTA为抗凝剂，Ficoll分离血细胞，重悬细胞于含有10％胎牛血清的RIMP 1640培养基中。在96孔板中加入100μl密度为1×10⁵细胞/ml新分离的细胞，每孔细胞总数为10⁴个，每个样品作3个孔。

1)在细胞中加入指定浓度的(终浓度分别为1、3、10、30、100ug/ml，加样量为10ul)供试药物和阳性对照(地塞米松，10uM)。置于37℃含5％CO₂的培养箱中保温15分钟；

2)加入10ul浓度为100ug/ml的LPS，置于37℃含5％CO₂的培养箱中保温16小时；

3)与1000rpm离心15分钟，将上清转移入新的培养板中，测定TNFa及IL-1β浓度；或冻藏于-20℃，避免反复冻融。

实验结果：

表1.穿心莲提取物物抑制TNFα及IL1表达

样品编号	化学成分	抑制TNFαIC50(g/ml)	抑制IL1.IC50(g/ml)
				1	穿心莲乙醇总提取物	7.99	15.5

  表2.穿心莲提取物抑制TNFα表达呈剂量依赖关系

穿心莲提取物抑制TNFα的表达
			药物剂量(g/ml)	细胞分泌TNFα浓度(pg/ml)	TNFα表达抑制率(％)
1	228±21	15.5
			3	203±18	24.9
10	129±21	52.8
			30	32±26	89.4
100	4±1	100.0
			LPS	269±48	0.0
10uM DEX	76±4	72.8

表3.穿心莲提取物抑制IL1表达呈剂量依赖关系

穿心莲提取物抑制IL1的表达
			药物剂量(g/ml )	细胞分泌IL1浓度(pg/ml)	L1表达抑制率(％)
1	178±25	-2.7
			3	155±14	10.7
10	115±7.1	34.5
			30	40±15	79.5
LPS	173±18	0.3
			10uM DEX	9±1.4	97.6

以上实验表明，在正常人外周血单核细胞中穿心莲提取物明显抑制内毒素诱导的前体炎症因子TNF-α和IL-1β的表达，穿心莲提取物对TNF-α和IL-1β的抑制呈剂量依赖关系。

实施例3穿心莲提取物对小鼠炎性肠病模型的作用

实验材料

1、药物

(1)受试样品名称：

穿心莲提取物(按实施例1方法制备)

莲必治注射液(LBZ)：山禾药业(SHANHE PHARMACERTICAL)；批号：030302；主要成分：亚硫酸氢钠穿心莲内酯；规格：2ml，0.1g。

穿心莲内酯(AR)：常州市神马麦迪蒲植物提取有限公司(C.Z.MediproBotanical Laboratories Pty)批号：Cz3-0806CXL；规格：98％(标准品)；数量：5g。

(2)阳性对照药：柳氮磺胺吡啶片(Sulfasalazine)，上海三维制药有限公司，200206C11，250mg/片；规格：12片×5。

2、动物：Balb/c小鼠，雄性，18-24g，2003/09/16中科院上海动物实验中心。

合格证：SCXK(沪)2002-0010，每组7-8只。

3、试剂

TNBS(2，4，6-Trinitrobenzenesulfonic acid，Picrylsulfonic acid)：Sigma公司；批号：033K5020；规格：5％(w/v)，10ml/瓶。

4、仪器  天平(Metler，AB104-N，0.01g，0-2100g)

实验方法

1.模型制作[1]：

5％TNBS用双蒸水稀释与50％乙醇等体积混合成1.5％TNBS。小鼠用1％戊巴比妥0.05mg/10g麻醉，麻醉后，用灌胃器由肛门轻缓插入深约3cm，生理盐水组以0.1ml/只的50％生理盐水溶液，模型组以1.5％含(150mg/kg)TNBS的50％乙醇溶液0.1ml/只缓缓推入结肠，诱导炎性肠病形成，正常对照组仅单独接受50％乙醇，每只0.1ml。

2.给药方式：造模前24、2小时及造模后每天给药一次，连续7天服用，末次给药一小时取材。

3.评价指标

(1)体重

造模后，每一天测体重1次，并记录；

(2)炎症评价

A称重：末次给药后24小时，打开腹腔，观察结肠与其它器官的粘连程度，取出每段结肠，对每段结肠称重，计算结肠与体重比率：

减少百分率＝(对照组比率/正常组比率-给药组比率/正常组比率)/(对照组比率/正常组比率)×100。

B组织切片

对结肠取一部分结肠做病理切片，病理评分标准：0分 无炎症症状；1分 低水平炎症，无结构改变；2分 低水平白细胞浸润；3分 高水平白细胞浸润，高血管密度，腺窝延伸，结肠壁增厚，浅表溃疡；4分 高水平白细胞浸润超过粘膜层，腺窝延伸，杯状细胞减少，高血管密度，肠壁增厚，广泛溃疡。

实验结果

1、对小鼠体重的影响

从附图4可以看出，穿心莲提取物对炎性肠病导致的小鼠体重减轻有明显的改善作用，与模型组比较有显著性差异。

2、对小鼠结肠重量、死亡率及结肠组织病变的影响

表1：各给药组对TNBS诱导炎性肠病小鼠结肠比重及死亡率的影响

	剂量(mg/kg)	给药途径	结肠重(g)	结肠重/体重×100％	增重	结肠比重减少率	死亡率	结肠评分
									正常组			0.18	0.808**	-	-	0	1.0**
模型组			0.55	3.549	2.821	-	50％	3.7
									穿心莲提取物	500	p.o.	0.24	1.155**	0.427	87％	0	1.8**
莲必治注射液	300	S.C	0.32	1.980	1.252	57％	29％	3.2
									穿心莲内酯	500	p.o.	0.62	3.758	3.03	-8％	57％	3.5
柳氮磺胺吡啶片	300	p.o..	0.32	1.739*	1.011	66％	50％	2.8*

与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

小鼠诱导结肠炎后，模型组存活鼠结肠占体重比重明显增加，死亡率达到了50％(表1和附图5)，直肠端结肠均有明显溃疡，与周围组织重度粘连。病理组织检查表现高水平白细胞浸润超过粘膜层，腺窝延伸，杯状细胞减少，高血管密度，肠壁增厚，广泛溃疡，而穿心莲提取物500mg/kg口服可明显减轻小鼠结肠比重，减轻率达到了88％，死亡率也明显降低，肠组织无粘连现象，粘膜壁大部分光滑，未见明显病变。阳性药也可明显减轻结肠比重，减轻率达到了66％，但对死亡率无影响，有部分小鼠出现肠粘连及粘膜病变现象。

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明之精神与范围的前提下，对上述描述的任何修饰都是允许的。同样，类似的情况也包括在权利要求中。

Claims (14)

1、穿心莲提取物在制备TNFα抑制剂中的用途。

2、权利要求1的用途，其中所述TNFα抑制剂可用于治疗下组病症中的一种或多种：类风湿性关节炎、幼年型类风湿关节炎、骨性关节炎、脊柱关节病、炎性肠病(溃疡性结肠炎和炎性肠病)、心力衰竭、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、银屑病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓型白血病、帕金森氏症、早老性痴呆、抑郁症、艾滋病痴呆综合征、白塞氏病、移植物抗宿主病、葡萄膜炎、Wegener′s肉芽肿、休格连氏干燥症、慢性阻塞性肺病、哮喘、急性胰腺炎、牙周病、恶病质、癌症、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染或肥胖。

3、权利要求1的用途，其中所述TNFα抑制剂可用于治疗炎性肠病、系统性红斑狼疮、银屑病。

4、权利要求3的用途，其中所述TNFα抑制剂可用于治疗溃疡性结肠炎。

5、权利要求3的用途，其中所述TNFα抑制剂可用于治疗克隆病。

6、权利要求1的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比为穿心莲内酯2～20％、14-去氧穿心莲内酯1～6％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯1～12％、新穿心莲内酯1～5％。

7、权利要求6的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比为穿心莲内酯3～8％、14-去氧穿心莲内酯3～5％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯7～9％、新穿心莲内酯2～4％。

8、权利要求7的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比为穿心莲内酯4.2％、14-去氧穿心莲内酯4.4％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯8％、新穿心莲内酯2.1％。

9、穿心莲提取物在制备IL-1β抑制剂中的用途。

10、权利要求9的用途，其中所述IL-1β抑制剂可用于治疗下组病症中的一种或多种：类风湿性关节炎、败血症、牙周病、心力衰竭、皮肌炎、急性胰腺炎、慢性阻塞性肺病、早老性痴呆、骨性关节炎、细菌感染、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、葡萄膜炎、中枢神经系统损伤、呼吸道病毒感染、哮喘、抑郁症或硬皮病。

11、权利要求10的用途，其中所述IL-1β抑制剂可用于治疗皮肌炎、硬皮病。

12、权利要求9的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比为穿心莲内酯2～20％、14-去氧穿心莲内酯1～6％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯1～12％、新穿心莲内酯1～5％。

13、权利要求12的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比为穿心莲内酯3～8％、14-去氧穿心莲内酯3～5％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯7～9％、新穿心莲内酯2～4％。

14、权利要求13的用途，其中所述穿心莲提取物含重量比穿心莲内酯4.2％、14-去氧穿心莲内酯4.4％、14-去氧-11，12去氢-穿心莲内酯8％、新穿心莲内酯2.1％。

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