CN1932016A

CN1932016A - 影响sre活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

Info

Publication number: CN1932016A
Application number: CN 200510102772
Authority: CN
Inventors: 高霞; 贺鹏飞; 石太平; 高鹏; 张晨颖; 程华玲; 邓唯唯; 李娜; 马进京; 郭金海; 童郁蓉; 蔡恬静; 陆阳; 王平章; 王欣宇; 王峰; 马大龙
Original assignee: Sinogenomax Co Ltd
Current assignee: Sinogenomax Co Ltd
Priority date: 2005-09-15
Filing date: 2005-09-15
Publication date: 2007-03-21

Abstract

本发明公开了一类新的编码具有影响SRE活性的功能的人蛋白的多核苷酸及其编码的多肽，多肽的抗体。本发明也公开了这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达对SRE活性的影响的应用。本发明还公开了所述多肽、抗体在制备预防和治疗与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病或肿瘤的药物上的用途。

Description

影响SRE活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及基因表达调控领域，具体地说，本发明涉及一类新的编码具有影响SRE活性的功能的人蛋白的多核苷酸，及其编码的多肽，多肽的抗体。本发明还涉及这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达对SRE活性的影响的应用。本发明还涉及所述多肽、抗体在制备预防和治疗与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病或肿瘤的药物上的用途。

背景技术

血清反应元件SRE(serum response element)是主要存在于两类基因的启动子区域的短的顺式作用元件。其中一类是立早基因，例如c-fos，fosB，junB，egr-1 and-2等。可以介导血清或生长因子引起的立早基因的激活，从而刺激细胞生长。另一类基因是平滑肌特异(SMC)的基因，其成员主要是一些与肌肉收缩有关的基因和细胞骨架蛋白基因，例如actins and myosins等，另外还包括一些转录因子的基因和信号传导因子基因。SRE的核心序列是CArG box(CC(A/T)₆GG，CC(A/T-rich)GG)(Minty，A.and Kedes，L.Upstream regions of the human cardiacactin gene that modulate its transcription in muscle cells：presence of an evolutionarily conservedrepeated motif.Mol.Cell.Biol.，6：2125-2136，1986.)。目前已知有60多个基因含有CArG box，另外有20多个可能含有CArG box的基因有待于进一步的实验验证。CArG box调控着两套不同的基因：肌肉分化相关基因和细胞生长相关基因。在特定组织中，这两套基因通常是互相排斥的，例如，在停止生长的血管壁细胞中，只表达一些与平滑肌分化相关的CArG box基因，而不表达细胞生长相关的CArG box基因。一旦这两套基因的调控发生问题，就会导致病变，例如在血管壁的平滑肌细胞中如果表达了含有CArG box的生长相关基因，如c-fos，PDGF-A，就会产生血管肉瘤。

SRE的结合蛋白是血清反应因子SRF(serum response factor)。SRF能被很多不同的刺激物所激活，例如血清，生长因子，及影响胞内钙浓度的试剂等。SRF属于MADS蛋白家族，具有DNA结合和二聚体化双功能的结构域MADS box，它被磷酸化后，可以形成二聚体，并与其它一些辅助蛋白因子一起和SRE结合，形成复合物，从而调控下游基因的表达，并介导很多重要的生物学过程，如生血作用，肌肉生成，损伤修复以及胚胎发育等。在c-fos的启动子中，SRF与TCF蛋白作用。TCF(Ternary complex factor)是一类重要的转录因子家族，其成员有elk-1，SAP-1，ERP/NET等。在一些心脏特异基因中，SRF与GATA-4，TEF-1，ATF6，或myocardin相互作用。在骨骼肌细胞中，SRF与helix-loop-helix蛋白，如MyoD，myogenin，或E12形成复合物。这些与SRF相互作用的蛋白作为辅助因子，调控SRE的转录活性。SRF还能够与TFIIF的大亚基RAP74直接结合，而TFIIF是RNA聚合酶II形成起始转录复合物的基本元件，并且能促进转录延伸。因此，SRF与SRE结合可以起到募集转录起始复合物形成的作用。SRF基因的启动子区还有2个可以结合SRF自身的保守的CArG box，表明SRF可以通过反馈加强自身的表达。

至少有两个信号传导通路能够介导SRE对胞外信号的反应。一条通路是受MAPK调控的依赖于TCF蛋白家族成员的信号通路。SRE，SRF，以及TCF蛋白家族的成员能够组成三元复合物。TCFs可以被Ras/MAPK通路磷酸化，从而可以调控SRE的转录活性。另一个通路是SRF直接被磷酸化，不依赖于TCF的信号通路，主要受Rho信号通路或者PI3K途径来激活。Rho GTPase家族(RhoA，Rac1和CDC42)的某些成员能直接激活SRF。这个通路可能是通过某个未知的辅助因子介导的。促肿瘤试剂TPA，也可以通过不依赖TCFs的PI3K途径来激活SRF。SRF在多个位点能被激酶磷酸化，从而被激活。例如，103位的丝氨酸能够被丝/苏氨酸激酶pp90RSK，MAPKAP激酶2(属于MAPK p38通路)，CaMKII和Ⅳ分别磷酸化激活。

由于SRF主要控制着细胞生长相关的立早基因和细胞分化相关的肌肉特异基因这两类基因的表达，这两种不同的角色在不同的组织中必须有严格的调控，否则就容易出现肌肉系统的疾病或肿瘤。

1.SRF和肌肉增生

SRF调控很多心肌特异基因的表达。在心肌增生过程中，很多SRF调控的基因表达发生变化，这暗示了SRF可能参与了其中的调节。转基因方法的研究也证实了这个观点。持续在健康年轻的小鼠心脏中过表达SRF导致心脏肥大，轻度纤维化，心肌症以及早亡。在骨骼肌细胞中，鸟类的过度拉伸和负荷引起的肌肉增生能够增加细胞核和细胞质中的SRF的水平。另外的研究表明，对老鼠的骨骼肌机械负重也能够增加SRF的水平，而且降低负荷水平能够相应的引起SRF的水平的降低。哮喘能引起呼吸道平滑肌负荷的变化，不知道这是否引起SRF浓度或活性的变化。

2.SRF与肌肉重塑

平滑肌细胞的不正常增殖往往引起血管和呼吸道重塑，并且引起一些病变，例如肺紧张pulmonary hypertension，动脉硬化arteriosclerosis，LAM，和哮喘asthma.在人衰竭的心脏中，发现了一种不同的SRF的剪接体SRFΔ4，5。与正常心脏相比，病变心脏中全长SRF降低了。实验诱导的兔心脏中也观察到一样的变化。更重要的是，体外实验发现，SRFΔ4，5能够抑制全长SRF的表达，从而抑制SRF调控的基因表达。

3.SRF与衰老

SRF在衰老中的具体机制并不清楚。但是，年老和年轻成年小鼠心脏相比，细胞核和细胞质中SRF都有增加。更重要的是，在心肌梗塞时，年轻小鼠的心脏能通过外加SRF而重新搏动，而年老小鼠则不能。这种SRF的差别可能导致了观察到的衰老引起的立早基因的诱导能力降低，从而使细胞失去了适应极端条件的能力。奇怪的是，另一方面在率衰老的成纤维细胞中，SRF结合DNA的能力降低了。这可能是因为衰老细胞中SRF被过磷酸化了。肌细胞和成纤维细胞遗传上的差别也许也在一定程度上导致这种不同的发现。在心衰过程中，心肌中SRF水平的降低导致其对心脏特异性转录调控作用的改变，从而引起这些蛋白质转录生成量的改变以对病理性因素作出适应性的变化。如果在心衰的治疗过程中通过增加SRF的水平以增加α2MHC表达，达到增加心肌收缩力的目的，这无疑将为心衰的治疗开辟一条新的思路。

4.SRF与肿瘤

SRF能够促进还是抑制肿瘤产生，对于不同的细胞，有不同的效果，这取绝于与SRF相互作用的辅助因子的种类和数量。恶性平滑肌细胞瘤中，观察到SM-g-actin消失，并且SRF/MEF2/NK-2复合物也与正常细胞有不同。另外的研究表明，在发生间叶细胞的转移的上皮瘤细胞中，SRF是过量而且高度激活的。增加的SRF活性不但增加了SRF自身的表达，还增加了肌球蛋白，黏连蛋白vinculin以及所有依赖SRF调控的基因。这些变化以及纺锤样形态的出现依赖于RhoA信号的介导。

抗癌药distamycin A能够干扰SRF的结合，从而选择性的降低依赖SRF的启动子活性，进而抑制肌肉生成。在实验中，用distamycin A处理培养的多潜能的10T1/2细胞，其不再能分化成肌肉，相反，分化成脂肪纤维瘤的能力却增强了。

发明内容

人基因组学研究目前是国际上的热点，除大规模测序的方法外，还缺少从功能研究开始的高通量筛选具有一定功能的基因的方法。针对这种现状及现有药物或试剂的不足，本发明的目的是提供一类新的编码具有影响SRE活性功能的人蛋白的多核苷酸SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9。

本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽。

本发明的另一目的是提供含有这类多核苷酸的载体，和这类多核苷酸及其载体转化或转导的宿主细胞。

本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽的抗体和用于检测的核酸分子。

本发明的另一目的是提供这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达影响SRE活性的应用。

本发明的另一目的是提供生产这些多核苷酸和其编码的多肽的方法以及该多核苷酸及其编码的多肽的用途。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

在本发明的第一方面，提供新颖的分离的多核苷酸，它包含编码具有影响SRE活性的功能的蛋白的核苷酸序列，该核苷酸序列选自：(a)与编码含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：1O、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQID NO：18的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；(b)编码含有与SEQID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。

较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

较佳地，该多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85％相似性：(a)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列；(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列；(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。

更佳地，该多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列。

在本发明的第二方面，提供了上述核苷酸所编码的多肽，它包含具有选自下组中的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18；或与以上任一氨基酸序列具有至少90％以上相似性的多肽，或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQID NO：18。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞，还提供了被上述多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了与上述多肽特异性结合的抗体，还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。

在本发明的第五方面，提供了上述多核苷酸在宿主细胞中外源表达影响SRE活性的应用。较佳地，该应用包括具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQID NO：9中的编码区或全长序列的多核苷酸在宿主细胞中外源表达抑制SRE活化的应用和具有选自SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17中的编码区或全长序列的多核苷酸在宿主细胞中外源表达促进SRE活化的应用。

在本发明的第六方面，提供了上述多核苷酸和多肽在制备预防和/或治疗与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统的疾病或肿瘤的药物中的用途。较佳地，在制备预防和/或治疗肌肉增生、肌肉重塑、衰老等相关疾病或肿瘤的药物中的用途。

在本发明地第七方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明中的具有诱导人体细胞凋亡功能的多肽及药学上可接受的载体。

在本发明的第八方面，提供了一种与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统的疾病或肿瘤的体外检测方法，利用上述抗体或核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。

本发明的其他方面由于本文的技术的公开，对本领域技术人员而言是显而易见的。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多核苷酸或多肽如果从天然状态中与共同存在的其他物质分开，则为分离纯化的。这样的多核苷酸可能是某一载体的一部分，也可能这样的多核苷酸或多肽是某一组合物的一部分，既然载体或组合物不是它们的天然环境的成分，这些多核苷酸或多肽仍然是分离的。

如本文所用，“相似性”是指核苷酸或多肽序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间相同DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的高低，是一种直接的数量关系，通过部分相同或相似的百分比来度量核苷酸序列或者多肽序列之间相似的程度，此相似性百分比可以通过本领域已有的比对方法来计算，例子有两两序列间的比对方法FASTA程序(Pearson，W.R.and Lipman，D.J.1988.Improved tools for biological sequence comparison.Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444-2448)，BLAST程序(Altschul，S.F.，et al.1990Basic local alignment search tool.J.Mol.Biol.215：403-410)等，或多序列比对方法CLUSTAL W(CORPET，F.1998Multiple sequencealignment with hierarchical clustering.Nucleic Acids Res.，16：10881-10890)等。同源序列是指从某一共同祖先经趋异进化而形成的不同序列，根据相似性百分比可以判断比对序列间的同源性。当基因或蛋白质间相似程度很高时，表示它们具有一段共同的进化历程，从而判断它们会具有相似的生物学功能。当具有至少50％的相似程度时，比较容易推测检测序列和目标序列可能是同源序列。较佳地，具有至少70％的相似程度；更佳地，具有至少85％的相似程度；最佳地，具有至少90％的相似程度。而当相似性程度低于20％时，就难以确定或者根本无法确定其是否具有同源性。

本发明的多核苷酸包括其互补链可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。如本文所用，“编码具有诱导细胞凋亡功能的多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码序列和/或非编码序列的多核苷酸。以SREIF1所编码的多肽为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：1所示的编码区序列相同或者是遗传密码简并的变异体。如本文所用，“遗传密码简并”是指一个氨基酸有几个密码子的现象。例如在本发明中SREIF1所编码的多肽的遗传密码简并的变异体指编码具有SEQ ID NO：2的多肽的核苷酸，且此核苷酸与SEQ IDNO：1所示的编码区序列有差别。对于其他具有诱导人体细胞凋亡功能的多肽，可依此类推。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，它编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。该多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与本发明所述多核苷酸序列的互补序列杂交且两个序列间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与此多核苷酸序列的互补序列可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好的是在97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与本发明所述的多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明的多核苷酸序列能用本领域已有的方法获得。这些技术包括但不局限于：(1)通过杂交技术分离DNA序列；(2)人工化学合成DNA序列；(3)通过构建cDNA文库大规模获得所需的多核苷酸；(4)PCR扩增技术。

第一种方法是先构建基因组文库或者cDNA文库，然后通过分子杂交等技术从基因组文库或cDNA文库中筛选出目的基因或序列。当生物基因组比较小时，此方法较易成功；当生物基因组很大时，构建其完整的基因组文库较困难，再从庞大的文库中去克隆目的基因的工程量也很大。

第二种方法是按设计好的序列一次合成100-200bp长的DNA片段，再用这些合成的片段组合连接成完整的基因。这种合成长的基因序列的方法的价格十分昂贵。此方法主要用于合成作为引物、接头等的核酸片段。

第三种方法是用本领域通常的方法构建cDNA文库，多次测序后，结合生物信息学分析技术(Ota et al.Nat Genet.2004 Jan；36(1)：40-5)，大规模获得目的cDNA克隆。生物信息学分析技术包括但不限于用BLAST或BLAT与已有的公共数据库比对，如refseq数据库等；用Phred算法评估测序质量；用计算转录起始密码子ATG的出现概率的ATGpr算法筛选全长cDNA序列等。

第四种方法用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)。用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。本发明优选应用的方法是两步法通量化RT-PCR技术在混合cDNA文库中扩增得到大量的cDNA克隆。混合cDNA文库包括现有的cDNA文库和肿瘤文库。

本发明的基因，或者各种DNA片段等核苷酸序列的测定可用常规方法，如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)；也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需要反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(如细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本发明的多肽可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。本发明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸编码的人蛋白多肽的片段、衍生物和类似物。术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持与本发明的天然具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物和类似物可以是：(a)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优先保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(b)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(c)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽，或(d)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。

本发明的多肽可以通过常规的重组DNA技术，利用本发明的多核苷酸序列来表达或生产重组的具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。包括以下步骤：

(1)用本发明的多核苷酸(或其变异体)，或用含有此多核苷酸的表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2)在合适的培养基中培养步骤(1)得到的宿主细胞；

(3)从培养基或细胞中分离、纯化所需的蛋白多肽。

本发明中的多核苷酸和多肽优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明也涉及包含本发明所述多核苷酸的载体。本发明中，编码具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽的多核苷酸序列可以插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒，如腺病毒、逆转录病毒，或者其他载体。在本发明中适用的载体可以是原核表达载体，也可以是真核表达载体，如在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)，在哺乳动物细胞中高表达的真核表达载体pcDNA^TM3.1/myc-hisB(-)(Invitrogen)，pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，以下缩写为pcDT)。本发明优选pcDT，它可以直接与PCR产物连接来构建真核表达载体，大大提高了规模化生产的效率。只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以应用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。用本领域的技术人员熟知的方法来构建含有本发明所述多核苷酸序列和转录/翻译控制信号的表达载体即可。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组DNA技术等(Sambrook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。

本发明的多核苷酸序列可有效地连接到表达载体中的适当的启动子上来指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体的PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。表达载体优选的包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性、或真核细胞培养用的绿色荧光蛋白(GFP)、新霉素抗性及二氢叶酸还原酶。

本发明还涉及用上述载体或者本发明的多核苷酸经基因工程产生的宿主细胞。本发明的载体和多核苷酸可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白质。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞；293T、Hela细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常有10-300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。例子有：在复制起始点下游的100-270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点下游的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域的普通技术人员都知道如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主细胞为原核细胞如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收集，用CaCl₂法处理，所用步骤是本领域众所周知的。可供选择的是MgCl₂处理，也可用电穿孔的方法处理。当宿主是真核细胞时，可选择以下转染方法：磷酸钙共沉淀法、常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。获得的转化子可以用常规方法培养，来表达本发明的多核苷酸所编码的多肽。根据所选的宿主细胞选择合适的常规培养基，在适于宿主细胞生长的条件下培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用适当的方法如温度转化或化学诱导，来诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

上述方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其他特性通过各种分离方法分离和纯化重组多肽。这些方法是本领域技术人员所熟知的，如常规的复性处理，用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超声波处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析和其它各种液相层析技术或这些方法的结合。

本发明还涉及与本发明多核苷酸的任何一部分同源的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含有15个核苷酸，较好的是至少30个核苷酸，更好的是至少50个核苷酸，最好的是至少100个核苷酸。此核酸片段通常是在本发明的核苷酸序列信息的基础上化学合成的DNA序列。上述核酸片段可以用于PCR扩增技术(如作为引物)以确定和/或分离编码具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸；也可以作为杂交所用的探针。也可以用于RNA干扰技术。本发明的多核苷酸的一部分或全部也可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

本发明的多肽可以直接作为药物治疗疾病，如与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病和肿瘤等；还可用于筛选促进或对抗具有影响SRE活性的功能的蛋白的抗体、多肽或其它配体，例如，筛选可用于促进或抑制本发明的蛋白的功能的抗体。用表达的重组的本发明的蛋白来筛选多肽库，用于寻找有治疗价值的能够促进或抑制本发明的蛋白的功能的多肽分子。

本发明的多肽可以单独使用或者与合适的药物载体组合后使用。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂及不影响药物效果的载体和赋型剂。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油及它们的组合。药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。给药于患者的用量取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

本发明的多肽也可以通过在活体表达这些多肽来使用。例如患者的细胞可以通过在体外用编码本发明多肽的基因进行基因工程操作，然后将工程细胞提供给患者，使工程细胞在体内高表达这种多肽，从而达到治疗的目的。

具有影响SRE活性功能的人蛋白的多核苷酸也可用于多种治疗目的。可用在基因治疗技术中来治疗由于具有影响SRE活性的功能的人蛋白表达异常或活性异常导致的疾病。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有影响SRE活性的功能的人蛋白，来抑制内源性的具有影响SRE活性功能的人蛋白的活性。重组的具有影响SRE活性功能的人蛋白基因也可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制本发明多肽mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酸也在本发明的范围之内。反义RNA和DNA以及核酸可用本领域已有的方法合成。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷间的连接用磷酸硫酯键或肽键。

本发明的多肽及其片段、衍生物、类似物或表达它们的细胞可以作为抗原来生产抗体。这些抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的抗体。本发明的多肽的抗体可用本领域公知的抗体制备方法来生产。例子有：单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。多克隆抗体的生产可用本发明的多肽免疫动物，如家兔、小鼠、大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术产生(Morrison etal.PNAS，1985，81：6851)。单链抗体也可用已有的技术生产(U.S.Pat No.4946778)。

本发明的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活体标本中的具有诱导细胞凋亡功能的蛋白。还可以在临床上用于与具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白相关的疾病的临床诊断、治疗、疗效评价等。例如用放射性同位素标记与本发明的多肽结合的单克隆抗体，然后注入体内跟踪其位置和分布，可以作为一种非创伤性诊断方法来定位肿瘤细胞，或判断肿瘤细胞是否转移。本发明中的抗体还可以用于治疗或预防与具有影响SRE活性功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有影响SRE活性功能的人蛋白的产生或活性。

本发明还涉及定量和定位检测具有影响SRE活性功能的蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。实验中检测的具有影响SRE活性功能的蛋白水平，可以用作解释具有影响SRE活性功能的蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有影响SRE活性功能的蛋白起作用的疾病。

具有影响SRE活性功能的蛋白的多核苷酸可用于具有影响SRE活性功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有影响SRE活性功能的蛋白的多核苷酸可用于检测具有影响SRE活性功能的蛋白的表达与否，或在疾病状态下具有影响SRE活性功能的蛋白的异常表达。如具有影响SRE活性功能的蛋白的DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有影响SRE活性功能的蛋白的表达异常。杂交技术是本领域已公开的成熟技术，包括Southern印迹法、Northern印迹法、原位杂交等，相关的试剂盒可以从商业途径获得。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。用具有影响SRE活性功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链式反应(RT-PCR)体外扩增也可以检测具有影响SRE活性功能的蛋白的转录产物。

检测具有影响SRE活性功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有影响SRE活性功能的蛋白相关的疾病。具有影响SRE活性功能的蛋白基因的突变形式包括与正常野生型的具有影响SRE活性功能的蛋白的DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用本领域已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Westen印迹法可间接判断基因有无突变。

基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在实验中所有用到的正常组织、胎儿组织、肿瘤组织中都有表达，说明其为人体自身重要的SRE影响因子；在不同的组织中表达量高低有差别，说明其在不同的组织中发挥功能的程度不同。

以下对本发明的实施方案进一步详细说明。

本发明通过对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，进一步利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，根据校正后得到的序列设计基因特异引物，从混合人组织cDNA文库中通过两步法通量化RT-PCR技术扩增得到目的基因的编码区cDNA片段。此编码区cDNA片段与pcDT重组构建真核表达载体。然后采用双荧光素酶报告基因法检测SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9基因对SRE的影响。该方法采用的是体内信号转导途径顺式报导系统，其中所用的SRE-luc报告质粒载有萤火虫荧光素酶基因，该基因的表达由合成的启动子所调控，其中包含基本的启动子元件(TATA box)，以及转录因子SRE的结合位点，SRE-luc报告质粒的结构图如图2所示。当细胞内的SRE通过某种信号转导途径而被活化时，SRE便会结合于报告质粒SRE-luc的增强子元件，从而启动报告基因萤火虫荧光素酶基因的转录，进一步胞内翻译成荧光素酶，导致细胞内荧光素酶数量增加，活性增强；相反，当细胞内的SRE活化受到抑制的时候，荧光素酶的表达量及活性就低。所以，通过检测荧光素酶的活性，便可以反映不同刺激物以及共转染的目的基因对细胞内SRE是否具有促进活化或者抑制活化的功能。pRL-SV40报告质粒载体如图2所示，含有水母荧光素酶基因，该基因的表达由猿猴病毒40(SV40)增强子/启动子所调控，转染哺乳动物细胞后可以产生较强的基本水平的水母荧光素酶的表达，且表达的活性不受SRE活化与否的调节，所以在实验中用作内对照报告基因。实验表明本发明的多肽具有显著、稳定的影响SRE活性的作用。

由于采用了以上技术方案，本发明具有如下优点：

1、提供了规模化克隆和筛选新基因的技术平台。

2、提供了人类新功能基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的cDNA序列及其编码多肽；

3、首次发现人类新功能基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9具有影响SRE活性的作用，并且高效、稳定；

4、SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在机体多数正常细胞表达，说明其为自身重要的SRE调控分子。

5、基于上述的4个优点，本发明为进一步研究SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9与SRE之间的调控关系，以及开发治疗与增殖和肌肉分化相关疾病或肿瘤的新药物，为开创新的临床诊断、疗效评价及预后指标奠定必要的基础。

附图说明

图1、真核表达载体pcDT-SREIFx的构建示意图(SREIFx选自SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9)

图2、pSRE-luc荧光素酶基因报告质粒的结构图(上图)和pRL-SV40报告质粒结构图(下图)

图3、SREIF1、2、3、4、5外源表达抑制PMA对SRE的活化

图4、SREIF6、7、8、9外源表达促进SRE活化

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。这些实施例和附图仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》(2002年第三版[美]萨姆布鲁克等箸，科学出版社)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1、两步法通量化RT-PCR技术扩增目的基因

(1)对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，并利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，最终得到的序列设定为下组序列：SEQID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17。根据此类序列设计基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的特异引物：

基因名称	上游引物(5′-3′)	下游引物(5′-3′)
基因名称	上游引物(5′-3′)	下游引物(5′-3′)	SREIF1SREIF2SREIF3SREIF4SREIF5SREIF6SREIF7SREIF8SREIF9	ctgctcgcacaggactcggcagacgccacggagtttgtggtgcgatgagcttcttcggcgtgatatgagcaacaatggaccagcaccatgatgcaaatctgcgaaggacctgggtttcagtgatgaggctcctctggctgatggcatggactttccttacctgtttttccagcgcttgccattcaacatcatg	gggctataactcagactgggatctgtggcaccagaaaaacccatctctgcaagtaacgggtcaactgagccactatattactcactcgtcaccactctgtgggtcgaagaaggtgctggcctgatagccagtcgagttctcttatatctcctgggacagagccactaagtcggctatgtggctgttgtgtgcggaaaataaactgagcctactgaggag

(2)用上述引物，按目的基因的表达谱在现有的cDNA文库和肿瘤文库中选择模板，进行初扩。现有的文库包括12种人体正常组织(心、胰、睾丸、卵巢、前列腺、结肠、小肠、骨骼肌、胸腺、淋巴结、扁桃体、白细胞)；6种人肿瘤组织(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌)；和8种胎儿组积(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎肾、胎脑、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文库(Clonetch，K1420-1，1241-1)。初扩反应条件如下：

50μl PCR反应：

cDNA混合库5’，3’引物10×Pyrobest buffer2.5mM dNTPsPyrobest双蒸水

各1.0μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl1μl补足至50μl

PCR延伸时间根据所扩目的基因的最长片段，按50sec/Kb的原则进行扩增：

初扩产物纯化到30μl，以去除PCR反应体系中大量的引物及dNTPs等，并浓缩整个体系，得到对应目的基因序列的二级扩增库，作为二扩(大扩)的模板。

(3)将(2)中的纯化产物作为模板，分别对每个目的基因进行二扩，反应条件如下：

50μl PCR(每个基因)反应：

一扩纯化产物5’，3’引物10×Ex-Taq buffer2.5mM dNTPEx-Taq双蒸水

1.6μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl0.5μl补足至50μl

得到的PCR产物取10μl上样电泳，挑选有扩增条带的PCR产物，进行等体积纯化(40μl)。通过两步PCR反应扩增出非单一条带的基因用Qiagen胶回收试剂盒切胶回收目的片段。扩增的结果表明，这些组织的细胞中都存在基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的cDNA，说明SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在这些组织的细胞中都产生了基因SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的转录产物，有较广的表达图谱，在多种组织中参与转录因子的调节。

实施例2、目的基因真核表达载体的构建

将二扩纯化产物和真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，缩写为pcDT)，按照试剂盒制造厂商建议的条件进行连接反应。连接产物电击法转化大肠杆菌DH5α，转化物在含氨苄青霉素的固体LB平板培养基上生长，挑选生长的单一克隆菌落，提取质粒，用EcoRI酶切，酶切产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定，挑选有插入片段的阳性克隆，通过测序(ABI PRISM 3700 DNA分析仪)选出正确的正向插入克隆，各自命名为SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9。

同时收集培养液，用SDS-PAGE分析沉淀蛋白，获得SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9多肽。

SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白分析结果显示：SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白序列如下组序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18所示。

实施例3、双荧光素酶报告基因法测定目的基因对PMA诱导SRE活化的抑制作用。

用目的基因和报告基因pSRE-luc，pRL-TK共转染人胚胎肾293T细胞，通过分别检测两种荧光素酶活性来测定SRE的活性。共转染的方法为阳离子非脂性转染法，采用威格拉斯生物技术(北京)有限公司，按产品说明书所述进行。

转染操作步骤如下：

(1)细胞培养：将293T细胞(ATCC Number：CRL-11268)(2.0×104)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)培养基(Hyclone，SH0022.02)铺在96孔细胞培养板(Costar，3599)上，接种密度1.2万/孔，培养基体积100ul/孔，在5％CO2，37℃的培养箱中培养18-24小时。

(2)制备转染复合物：

取2.5μl生理盐水稀释40ng报告基因pSRE-luc，4ng pRL-TK和50ng目的质粒，缓慢混合均匀；同样用2.5μl生理盐水稀释适当量的vigofect(一般为0.04μl/孔)，缓慢混合均匀，在室温下放置5分钟，与稀释的DNA缓慢混合，室温放置15分钟，以形成转染复合物。

(3)转染：将转染复合物缓慢滴入细胞培养板(5μl/孔)，轻微摇匀。5％CO₂，37℃的培养箱中培养18-24小时。

转染18-24小时后用PMA(十四酸佛波酯，Calbiochem，524400，终浓度50ng/ml)刺激细胞，37℃孵箱培养。6-8小时后弃去培养液，加入Passive Lysis Buffer(Promega，E1960)，放入-80℃冰箱。检测时，取出细胞板，室温下自然解冻，使细胞完全裂解，10μl细胞裂解液移至白色荧光板，加入Dual-luciferase双报告系统检测底物，用微孔板酶标仪(Genios Pro，Tecan)检测荧光素酶活性。

设定转染pcDT空载体、PMA刺激时细胞内的荧光素酶活性比值(萤火虫荧光素酶荧光强度/水母荧光素酶荧光强度表示)为1，其他条件下细胞内的荧光素酶活性比值以此为标准，用相对值表示。结果参照图3，分别用待检质粒和pSRE-luc共转染293T细胞，用PMA刺激的293T细胞中荧光素酶的活性明显地下调，表明SREIF1、2、3、4、5在293T细胞中的表达产物对PMA诱导SRE活化有强的抑制作用。

根据以上实验结果可以确定，当SRE表达水平的上调引起与某些疾病相关基因的转录表达相应增加时，SREIF1、2、3、4、5对SRE活化的抑制作用可以阻止该疾病的发生和发展。因此，本发明可以用于制备预防和治疗由于SRE过表达而引起的肌肉系统疾病或肿瘤的药物。

实施例4、双荧光素酶报告基因法测定目的基因对SRE活化的促进作用。

除不用刺激物刺激外，其余实验过程与步骤同实施例3。

结果参照图4，分别用待检质粒和pSRE-luc共转染293T细胞，以转染空载体pcDT时荧光素酶活性比值为标准100％，待检质粒可明显促进SRE的活化，pSRE-luc荧光素酶活性明显上调，表明SREIF1、2、3、4、5在293T细胞中的表达产物对SRE活化有强的促进作用。

根据以上实验结果可以确定，当SRE表达水平的下调引起与某些疾病相关基因的转录表达相应减少时，SREIF6、7、8、9对SRE活化的促进作用可以阻止该疾病的发生和发展。因此，本发明可以用于制备预防和治疗由于SRE表达较少引起的肌肉系统疾病或肿瘤的药物。

实施例5、抗体制备

抗原选用原核细胞或真核细胞表达的SREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白全长或部分肽段，也可以合成多肽作为抗原。

多克隆抗体的制备：免疫动物选用成年雄性新西兰兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(新西兰兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原与等体积弗氏完全佐剂(FCA)充分乳化后，于背部皮下多点注射。初次免疫后21、42、63天，用弗氏不完全佐剂(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加强免疫1次，用量同前。每次免疫后7~10天，ELISA方法检测血清效价，达到1×10^-4时，放血分离血清。Western blot鉴定抗体特异性。

单克隆抗体制备：免疫BALb/c小鼠同前，取脾脏制成B细胞悬液，与对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0融合，通过HAT(H：次黄嘌呤；A：氨基喋呤；T：胸腺嘧啶核苷)选择性培养，获得杂交细胞系，再通过ELISA方法检测抗体效价，筛选出特定的杂交瘤细胞系，并得到单克隆抗体。

序列表

<110>北京诺赛基因组研究中心有限公司

<120>影响SRE活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

<130>

<160>18

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1280

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(105)..(794)

<400>1

agttgctttg ctgttagcct gttggacctt cgagcctagc tgctcgcaca ggactcggcc 60

acctgccctt cctgcaccga ctggccagct caagaggttt ggat atg gac ctt ctt 116

Met Asp Leu Leu

1

caa ttc ctg gcc ttc ctc ttt gtc ctg ctt ttg tct ggg atg gga gcc 164

Gln Phe Leu Ala Phe Leu Phe Val Leu Leu Leu Ser Gly Met Gly Ala

5 10 15 20

aca ggc acc ttg agg acc tcc ctg gac cca agc ctg gag atc tac aag 212

Thr Gly Thr Leu Arg Thr Ser Leu Asp Pro Ser Leu Glu Ile Tyr Lys

25 30 35

aag atg ttt gag gtg aag cgg cgg gag cag ctg ttg gca ctg aag aac 260

Lys Met Phe Glu Val Lys Arg Arg Glu Gln Leu Leu Ala Leu Lys Asn

40 45 50

ctg gca cag ctg aac gac atc cac cag cag tac aag atc ctt gat gtc 308

Leu Ala Gln Leu Asn Asp Ile His Gln Gln Tyr Lys Ile Leu Asp Val

55 60 65

atg ctc aag ggg ctc ttt aag gtg ctg gag gac tcc cgg aca gtg ctc 356

Met Leu Lys Gly Leu Phe Lys Val Leu Glu Asp Ser Arg Thr Val Leu

70 75 80

acc gct gct gat gtg ctc cca gat ggg ccc ttc ccc cag gac gag aag 404

Thr Ala Ala Asp Val Leu Pro Asp Gly Pro Phe Pro Gln Asp Glu Lys

85 90 95 100

ctg aag gat gct ttc tcc cac gtg gtg gag aac acg gcc ttc ttc ggc 452

Leu Lys Asp Ala Phe Ser His Val Val Glu Asn Thr Ala Phe Phe Gly

105 110 115

gat gtg gtg ctg cgc ttc ccg agg att gtg cac tat tac ttt gac cac 500

Asp Val Val Leu Arg Phe Pro Arg Ile Val His Tyr Tyr Phe Asp His

120 125 130

aac tcc aac tgg aac ctc ctc atc cgc tgg ggt atc agt ttc tgc aac 548

Asn Ser Asn Trp Asn Leu Leu Ile Arg Trp Gly Ile Ser Phe Cys Asn

135 140 145

cag aca ggc gtc ttc aac cag ggg ccc cac tcg ccc atc ctc agc ctg 596

Gln Thr Gly Val Phe Asn Gln Gly Pro His Ser Pro Ile Leu Ser Leu

150 155 160

atg gcc cag gag ctg ggg atc agt gag aaa gac tcc aac ttc cag aac 644

Met Ala Gln Glu Leu Gly Ile Ser Glu Lys Asp Ser Asn Phe Gln Asn

165 170 175 180

cca ttt aaa atc gac cgc aca gag ttc att ccc agc act gac cct ttc 692

Pro Phe Lys Ile Asp Arg Thr Glu Phe Ile Pro Ser Thr Asp Pro Phe

185 190 195

cag aag gcc ctg aga gaa gaa gag aaa cgc cga aag aaa gag gag aag 740

Gln Lys Ala Leu Arg Glu Glu Glu Lys Arg Arg Lys Lys Glu Glu Lys

200 205 210

cgg aag gag atc cga aaa ggc cca agg atc tcc aga tcc cag tct gag 788

Arg Lys Glu Ile Arg Lys Gly Pro Arg Ile Ser Arg Ser Gln Ser Glu

215 220 225

tta tag ccctggagca gctcagggct cagggggcca caaggaggca ggtcgggagg 844

Leu

aagaagaggt ggaggtgtgg ttgtggtgga gagcaccagc tagccccttc cagaagggga 904

ggccacattt gcccggcccc ctggagctgg gtctgagccc cagctgaagg gactgagcct 964

cagatggctg gattttctct caggggcctc ctgctgaagg ggccttcaga ggattttatg 1024

ctggaaatat gaccctgtgc agactgctgg gggaggcagg aggatgcctg cctggaccct 1084

gttggtggct gaagacctct ggccagctgg cttccgccct tggtggggaa gcagcagaac 1144

taggttctga gccacgggtc agggtgccac cctgctgctg gccccactgt gtcacagagc 1204

tgcctggcac aggtcccagc ccctctgcag agacacaata aaagccagca gaccctttga 1264

aaaaaaaaaa aaaaaa 1280

<210>2

<211>229

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Asp Leu Leu Gln Phe Leu Ala Phe Leu Phe Val Leu Leu Leu Ser

1 5 10 15

Gly Met Gly Ala Thr Gly Thr Leu Arg Thr Ser Leu Asp Pro Ser Leu

20 25 30

Glu Ile Tyr Lys Lys Met Phe Glu Val Lys Arg Arg Glu Gln Leu Leu

35 40 45

Ala Leu Lys Asn Leu Ala Gln Leu Asn Asp Ile His Gln Gln Tyr Lys

50 55 60

Ile Leu Asp Val Met Leu Lys Gly Leu Phe Lys Val Leu Glu Asp Ser

65 70 75 80

Arg Thr Val Leu Thr Ala Ala Asp Val Leu Pro Asp Gly Pro Phe Pro

85 90 95

Gln Asp Glu Lys Leu Lys Asp Ala Phe Ser His Val Val Glu Asn Thr

100 105 110

Ala Phe Phe Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Pro Arg Ile Val His Tyr

115 120 125

Tyr Phe Asp His Asn Ser Asn Trp Asn Leu Leu Ile Arg Trp Gly Ile

130 135 140

Ser Phe Cys Asn Gln Thr Gly Val Phe Asn Gln Gly Pro His Ser Pro

145 150 155 160

Ile Leu Ser Leu Met Ala Gln Glu Leu Gly Ile Ser Glu Lys Asp Ser

165 170 175

Asn Phe Gln Asn Pro Phe Lys Ile Asp Arg Thr Glu Phe Ile Pro Ser

180 185 190

Thr Asp Pro Phe Gln Lys Ala Leu Arg Glu Glu Glu Lys Arg Arg Lys

195 200 205

Lys Glu Glu Lys Arg Lys Glu Ile Arg Lys Gly Pro Arg Ile Ser Arg

210 215 220

Ser Gln Ser Glu Leu

225

<210>3

<211>755

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(76)..(630)

<400>3

aactagctcc accctctaac ccccactcca gctgcagacg ccacggagtt tgtgcagggg 60

cgcagcgctc cagcc atg gcg cgt tcg ctc gtc cac gac acc gtg ttc tac 111

Met Ala Arg Ser Leu Val His Asp Thr Val Phe Tyr

1 5 10

tgc ctg agt gta tac cag gta aaa ata agc ccc aca cct cag ctg ggg 159

Cys Leu Ser Val Tyr Gln Val Lys Ile Ser Pro Thr Pro Gln Leu Gly

15 20 25

gca gca tca agc gca gaa ggc cat gtt ggc caa gga gct cca ggc ctc 207

Ala Ala Ser Ser Ala Glu Gly His Val Gly Gln Gly Ala Pro Gly Leu

30 35 40

atg ggt aat atg aac cct gag ggc ggt gtg aac cac gag aac ggc atg 255

Met Gly Asn Met Asn Pro Glu Gly Gly Val Asn His Glu Asn Gly Met

45 50 55 60

aac cgc gat ggc ggc atg atc ccc gag ggc ggc ggt gga aac cag gag 303

Asn Arg Asp Gly Gly Met Ile Pro Glu Gly Gly Gly Gly Asn Gln Glu

65 70 75

cct cgg cag cag ccg cag ccc ccg ccg gag gag ccg gcc cag gcg gcc 351

Pro Arg Gln Gln Pro Gln Pro Pro Pro Glu Glu Pro Ala Gln Ala Ala

80 85 90

atg gag ggt ccg cag ccc gag aac atg cag cca cga act cgg cgc acg 399

Met Glu Gly Pro Gln Pro Glu Asn Met Gln Pro Arg Thr Arg Arg Thr

95 100 105

aag ttc acg ctg ttg cag gtg gag gag ctg gaa agt gtt ttc cga cac 447

Lvs Phe Thr Leu Leu Gln Val Glu Glu Leu Glu Ser Val Phe Arg His

110 115 120

act caa tac cct gat gtg ccc aca aga agg gaa ctt gcc gaa aac tta 495

Thr Gln Tyr Pro Asp Val Pro Thr Arg Arg Glu Leu Ala Glu Asn Leu

125 130 135 140

ggt gtg act gaa gac aaa gtg cgg gtt tgg ttt aag aat aaa agg gcc 543

Gly Val Thr Glu Asp Lys Val Arg Val Trp Phe Lys Asn Lys Arg Ala

145 150 155

aga tgt agg cga cat cag aga gaa tta atg ctc gcc aat gaa cta cgt 591

Arg Cys Arg Arg His Gln Arg Glu Leu Met Leu Ala Asn Glu Leu Arg

160 165 170

gct gac cca gac gac tgt gtc tac atc gtc gtg gac tag ccctagaatg 640

Ala Asp Pro Asp Asp Cys Val Tyr Ile Val Val Asp

175 180

ccatccttct tcaggagcta gtttggagat gggtttttct ggtgccactg acacctgggc 700

tgcccatgcc gctcaggcta cccttatctc ctctgcactt atgttatcaa taaag 755

<210>4

<211>184

<212>PRT

<213>人

<400>4

Met Ala Arg Ser Leu Val His Asp Thr Val Phe Tyr Cys Leu Ser Val

1 5 10 15

Tyr Gln Val Lys Ile Ser Pro Thr Pro Gln Leu Gly Ala Ala Ser Ser

20 25 30

Ala Glu Gly His Val Gly Gln Gly Ala Pro Gly Leu Met Gly Asn Met

35 40 45

Asn Pro Glu Gly Gly Val Asn His Glu Asn Gly Met Asn Arg Asp Gly

50 55 60

Gly Met Ile Pro Glu Gly Gly Gly Gly Asn Gln Glu Pro Arg Gln Gln

65 70 75 80

Pro Gln Pro Pro Pro Glu Glu Pro Ala Gln Ala Ala Met Glu Gly Pro

85 90 95

Gln Pro Glu Asn Met Gln Pro Arg Thr Arg Arg Thr Lys Phe Thr Leu

100 105 110

Leu Gln Val Glu Glu Leu Glu Ser Val Phe Arg His Thr Gln Tyr Pro

115 120 125

Asp Val Pro Thr Arg Arg Glu Leu Ala Glu Asn Leu Gly Val Thr Glu

130 135 140

Asp Lys Val Arg Val Trp Phe Lys Asn Lys Arg Ala Arg Cys Arg Arg

145 150 155 160

His Gln Arg Glu Leu Met Leu Ala Asn Glu Leu Arg Ala Asp Pro Asp

165 170 175

Asp Cys Val Tyr Ile Val Val Asp

180

<210>5

<211>1626

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(453)..(1463)

<400>5

ggcacgaggg aagcgcctcg gtgcgttgca ccgccggagg ctgggcagct cgcagcgctg 60

ctcggcgctg gaccccaccc ggcaggcgca ggccacccac acccggctct gtgcggctgc 120

cccccgcagc attgcacggc cgaccctcgc ccgcccactg ccaccggccg cgggactggc 180

tgggactggc tcggccgagg gcactgctcc tcggtgcatt gctgctcggg cgccgcagcc 240

cgcagccgcc agcctccccc ggccgtgccc ctcccccgtg gagccggctg tccgtcggcg 300

cccactgccc ggcggcagcg gcggagccag gcagccccgc ggcggccgag cgcgctcgcg 360

catcgggccc tctggccttc tttacctagg gcagcccgcg ccccggtgcg agggagcggt 420

ccttaccgag acccgcccgg cccggcggtg cg atg agc ttc ttc ggc ttc ggg 473

Met Ser Phe Phe Gly Phe Gly

1 5

cag agc gtg gag gtg gaa atc ctt ctg aac gat gca gag agt agg aag 521

Gln Ser Val Glu Val Glu Ile Leu Leu Asn Asp Ala Glu Ser Arg Lys

10 15 20

cgg gcc gag cac aag acg gag gac ggg aag aag gag aaa tat ttc ctc 569

Arg Ala Glu His Lys Thr Glu Asp Gly Lys Lys Glu Lys Tyr Phe Leu

25 30 35

ttc tac gac ggg gag acg gtc tcc ggg aag gtg agc ctt gcc ctc aag 617

Phe Tyr Asp Gly Glu Thr Val Ser Gly Lys Val Ser Leu Ala Leu Lys

40 45 50 55

aac ccc aac aag cgg ctg gag cac cag ggc atc aag atc gag ttc atc 665

Asn Pro Asn Lys Arg Leu Glu His Gln Gly Ile Lys Ile Glu Phe Ile

60 65 70

ggg cag atc gaa ctc tac tac gat cgc ggg aac cac cat gag ttt gtg 713

Gly Gln Ile Glu Leu Tyr Tyr Asp Arg Gly Asn His His Glu Phe Val

75 80 85

tcc ctg gtg aag gac ctg gcc cgg cct gga gag atc acc cag tcg cag 761

Ser Leu Val Lys Asp Leu Ala Arg Pro Gly Glu Ile Thr Gln Ser Gln

90 95 100

gcc ttc gac ttt gag ttt acc cac gtg gag aag ccg tat gag tcc tac 809

Ala Phe Asp Phe Glu Phe Thr His Val Glu Lys Pro Tyr Glu Ser Tyr

105 110 115

aca ggg cag aat gtg aag cta cgc tat ttc ctt cgt gct acc atc agc 857

Thr Gly Gln Asn Val Lys Leu Arg Tyr Phe Leu Arg Ala Thr Ile Ser

120 125 130 135

cgc cgc ctc aat gat gtt gtc aaa gag atg gac att gta gtt cac aca 905

Arg Arg Leu Asn Asp Val Val Lys Glu Met Asp Ile Val Val His Thr

140 145 150

ctc agc aca tac cca gag ctg aac tct tcc atc aag atg gag gtt ggg 953

Leu Ser Thr Tyr Pro Glu Leu Asn Ser Ser Ile Lys Met Glu Val Gly

155 160 165

att gag gac tgt ctg cac att gaa ttt gag tac aat aaa tcc aaa tac 1001

Ile Glu Asp Cys Leu HisIle Glu Phe Glu Tyr Asn Lys Ser Lys Tyr

170 175 180

cac ttg aaa gat gtc att gta ggg aag ata tac ttc ctg ctg gtg aga 1049

His Leu Lys Asp Val Ile Val Gly Lys Ile Tyr Phe Leu Leu Val Arg

185 190 195

atc aaa atc aag cac atg gag ata gac atc atc aag cga gaa acg acg 1097

Ile Lys Ile Lys His Met Glu Ile Asp Ile Ile Lys Arg Glu Thr Thr

200 205 210 215

ggt aca ggc ccc aac gtg tac cat gag aat gac acg ata gcc aag tac 1145

Gly Thr Gly Pro Asn Val Tyr His Glu Asn Asp Thr Ile Ala Lys Tyr

220 225 230

gag atc atg gac ggg gca cca gtg cga gga gag tcc atc ccg atc cgg 1193

Glu Ile Met Asp Gly Ala Pro Val Arg Gly Glu Ser Ile Pro Ile Arg

235 240 245

ctc ttc ctg gcc ggg tat gag ctc acg ccc acc atg cgg gac atc aac 124l

Leu Phe Leu Ala Gly Tyr Glu Leu Thr Pro Thr Met Arg Asp Ile Asn

250 255 260

aag aag ttc tct gtg cgc tat tac ctc aac ctg gtg ctg ata gac gag 1289

Lys Lys Phe Ser Val Arg Tyr Tyr Leu Asn Leu Val Leu Ile Asp Glu

265 270 275

gag gag cgg cgc tac ttc aag cag cag gaa gtg gtg ttg tgg cgg aag 1337

Glu Glu Arg Arg Tyr Phe Lys Gln Gln Glu Val Val Leu Trp Arg Lys

280 285 290 295

ggt gac atc gta cgg aag agc atg tcc cac cag gcg gcc atc gcc tca 1385

Gly Asp Ile Val Arg Lys Ser Met Ser His Gln Ala Ala Ile Ala Ser

300 305 310

cag cgc ttt gag ggc acc acc tcc ctg ggt gag gtg cgg acc ccc agc 1433

Gln Arg Phe Glu Gly Thr Thr Ser Leu Gly Glu Val Arg Thr Pro Ser

315 320 325

cag ctg tct gac aac aac tgc agg cag tag gcccccaggg ccgagaagat 1483

Gln Leu Ser Asp Asn Asn Cys Arg Gln

330 335

gctgggcacc cacccagcac ecccatctac caacaccagc ggctgggggc gggggcggac 1543

cttgtgaggc tcagttgacc cgttacttgc aacctgaaaa caaatcatgt ttttgactta 1603

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1626

<210>6

<211>336

<212>PRT

<213>人

<400>6

Met Ser Phe Phe Gly Phe Gly Gln Ser Val Glu Val Glu Ile Leu Leu

1 5 10 15

Asn Asp Ala Glu Ser Arg Lys Arg Ala Glu His Lys Thr Glu Asp Gly

20 25 30

Lys Lys Glu Lys Tyr Phe Leu Phe Tyr Asp Gly Glu Thr Val Ser Gly

35 40 45

Lys Val Ser Leu Ala Leu Lys Asn Pro Asn Lys Arg Leu Glu His Gln

50 55 60

Gly Ile Lys Ile Glu Phe Ile Gly Gln Ile Glu Leu Tyr Tyr Asp Arg

65 70 75 80

Gly Asn His His Glu Phe Val Ser Leu Val Lys Asp Leu Ala Arg Pro

85 90 95

Gly Glu Ile Thr Gln Ser Gln Ala Phe Asp Phe Glu Phe Thr His Val

100 105 110

Glu Lys Pro Tyr Glu Ser Tyr Thr Gly Gln Asn Val Lys Leu Arg Tyr

115 120 125

Phe Leu Arg Ala Thr Ile Ser Arg Arg Leu Asn Asp Val Val Lys Glu

130 135 140

Met Asp Ile Val Val His Thr Leu Ser Thr Tyr Pro Glu Leu Asn Ser

145 150 155 160

Ser Ile Lys Met Glu Val Gly Ile Glu Asp Cys Leu His Ile Glu Phe

165 170 175

Glu Tyr Asn Lys Ser Lys Tyr His Leu Lys Asp Val Ile Val Gly Lys

180 185 190

Ile Tyr Phe Leu Leu Val Arg Ile Lys Ile Lys His Met Glu Ile Asp

195 200 205

Ile Ile Lys Arg Glu Thr Thr Gly Thr Gly Pro Asn Val Tyr His Glu

210 215 220

Asn Asp Thr Ile Ala Lys Tyr Glu Ile Met Asp Gly Ala Pro Val Arg

225 230 235 240

Gly Glu Ser Ile Pro Ile Arg Leu Phe Leu Ala Gly Tyr Glu Leu Thr

245 250 255

Pro Thr Met Arg Asp Ile Asn Lys Lys Phe Ser Val Arg Tyr Tyr Leu

260 265 270

Asn Leu Val Leu Ile Asp Glu Glu Glu Arg Arg Tyr Phe Lys Gln Gln

275 280 285

Glu Val Val Leu Trp Arg Lys Gly Asp Ile Val Arg Lys Ser Met Ser

290 295 300

His Gln Ala Ala Ile Ala Ser Gln Arg Phe Glu Gly Thr Thr Ser Leu

305 310 315 320

Gly Glu Val Arg Thr Pro Ser Gln Leu Ser Asp Asn Asn Cys Arg Gln

325 330 335

<210>7

<211>946

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(155)..(913)

<400>7

ggaagtttgt ggcggaggtg aggccgaggt gactgcagag cggctcgcga gggttttgga 60

ctgataaagc aatggaagcc actgaagagc tttaagatga ggatggcatg gagggaagat 120

aagtcacata atcagttctg tgatatgagc aaca atg gac cag aag att tta tct 175

Met Asp Gln Lys Ile Leu Ser

1 5

cta gca gca gaa aaa aca gca gac aaa ctg caa gaa ttt ctt caa acc 223

Leu Ala Ala Glu Lys Thr Ala Asp Lys Leu Gln Glu Phe Leu Gln Thr

10 15 20

ctg aga gaa ggt gat ttg act aat ctc ctt cag aat caa gca gtg aaa 271

Leu Arg Glu Gly Asp Leu Thr Asn Leu Leu Gln Asn Gln Ala Val Lys

25 30 35

gga aaa gtt gct gga gca ctc ctg aga gcc atc ttc aaa ggt tcc ccc 319

Gly Lys Val Ala Gly Ala Leu Leu Arg Ala Ile Phe Lys Gly Ser Pro

40 45 50 55

tgc tct gag gaa gct gga aca ctt agg aga cgt aag ata tac act tgt 367

Cys Ser Glu Glu Ala Gly Thr Leu Arg Arg Arg Lys Ile Tyr Thr Cys

60 65 70

tgt atc cag ttg gtg gaa tcg ggg gat ttg cag aaa gaa ata gcg tct 415

Cys Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Asp Leu Gln Lys Glu Ile Ala Ser

75 80 85

gag atc ata gga tta ctg atg ctg gag gct cac cat ttt cca gga cca 463

Glu Ile Ile Gly Leu Leu Met Leu Glu Ala His His Phe Pro Gly Pro

90 95 100

tta ttg gtt gaa tta gcc aat gag ttt att agt gct gtc aga gaa ggc 511

Leu Leu Val Glu Leu Ala Asn Glu Phe Ile Ser Ala Val Arg Glu Gly

105 110 115

agc cta gtg aat gga aaa tct ttg gag tta cta cct atc att ctc act 559

Ser Leu Val Asn Gly Lys Ser Leu Glu Leu Leu Pro Ile Ile Leu Thr

120 125 130 135

gcc ctg gct acg aaa aag gaa aat ctg gct tat gga aaa ggt gta ctg 607

Ala Leu Ala Thr Lys Lys Glu Asn Leu Ala Tyr Gly Lys Gly Val Leu

140 145 150

agt ggg gaa gaa tgt aag aaa cag ttg att aac acc ctg tgt tct ggc 655

Ser Gly Glu Glu Cys Lys Lys Gln Leu Ile Asn Thr Leu Cys Ser Gly

155 160 165

agg tgg gat cag caa tat gta atc caa ctc acc tcc atg ttc aag gat 703

Arg Trp Asp Gln Gln Tyr Val Ile Gln Leu Thr Ser Met Phe Lys Asp

170 175 180

gtc cct ctg act gca gaa gag gtg gaa ttt gtg gtg gaa aaa gca ttg 751

Val Pro Leu Thr Ala Glu Glu Val Glu Phe Val Val Glu Lys Ala Leu

185 190 195

agc atg ttc tcc aag atg aat ctt caa gaa ata cca cct ttg gtc tat 799

Ser Met Phe Ser Lys Met Asn Leu Gln Glu Ile Pro Pro Leu Val Tyr

200 205 210 215

cag ctt ctg gtt ctc tcc tcc aag gga agc aga aag agt gtt ttg gaa 847

Gln Leu Leu Val Leu Ser Ser Lys Gly Ser Arg Lys Ser Val Leu Glu

220 225 230

gga atc ata gcc ttc ttc agt gca cta gat aag cag cac aat gag gaa 895

Gly Ile Ile Ala Phe Phe Ser Ala Leu Asp Lys Gln His Asn Glu Glu

235 240 245

cag agt ggt gac gag tga gtaatatagt gtagaaataa agatcatttt tac 946

Gln Ser Gly Asp Glu

250

<210>8

<211>252

<212>PRT

<213>人

<400>8

Met Asp Gln Lys Ile Leu Ser Leu Ala Ala Glu Lys Thr Ala Asp Lys

1 5 10 15

Leu Gln Glu Phe Leu Gln Thr Leu Arg Glu Gly Asp Leu Thr Asn Leu

20 25 30

Leu Gln Asn Gln Ala Val Lys Gly Lys Val Ala Gly Ala Leu Leu Arg

35 40 45

Ala Ile Phe Lys Gly Ser Pro Cys Ser Glu Glu Ala Gly Thr Leu Arg

50 55 60

Arg Arg Lys Ile Tyr Thr Cys Cys Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Asp

65 70 75 80

Leu Gln Lys Glu Ile Ala Ser Glu Ile Ile Gly Leu Leu Met Leu Glu

85 90 95

Ala His His Phe Pro Gly Pro Leu Leu Val Glu Leu Ala Asn Glu Phe

100 105 110

Ile Ser Ala Val Arg Glu Gly Ser Leu Val Asn Gly Lys Ser Leu Glu

115 120 125

Leu Leu Pro Ile Ile Leu Thr Ala Leu Ala Thr Lys Lys Glu Asn Leu

130 135 140

Ala Tyr Gly Lys Gly Val Leu Ser Gly Glu Glu Cys Lys Lys Gln Leu

145 150 155 160

Ile Asn Thr Leu Cys Ser Gly Arg Trp Asp Gln Gln Tyr Val Ile Gln

165 170 175

Leu Thr Ser Met Phe Lys Asp Val Pro Leu Thr Ala Glu Glu Val Glu

180 185 190

Phe Val Val Glu Lys Ala Leu Ser Met Phe Ser Lys Met Asn Leu Gln

195 200 205

Glu Ile Pro Pro Leu Val Tyr Gln Leu Leu Val Leu Ser Ser Lys Gly

210 215 220

Ser Arg Lys Ser Val Leu Glu Gly Ile Ile Ala Phe Phe Ser Ala Leu

225 230 235 240

Asp Lys Gln His Asn Glu Glu Gln Ser Gly Asp Glu

245 250

<210>9

<211>2381

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(868)..(1419)

<400>9

ggcacgaggg gctcactctg caaccaaggc acgtgcattc tggtcatccc acgcggggag 60

cgcgcgcaag gcccgcccag cccccacatg ccagccccac cctccagtcg gtccggacgc 120

cgacgccttt ttgaccctcg ctgtgcccgg ccctcctcat ctggcctgcc cagggcttgg 180

tgctggcggg gtccagctgc tccaatccct cctcctctgc tctgccctgc cctgccctgg 240

cctgccccgg cgccctccct cagcccgggt atcaggcgag aggcggagct ggcccggcgc 300

gccccgcccc cgctgtagaa agggccgggc gagtgttact cgcggtcatc ccggcctggg 360

ccttttatct cggtgctgcc gggggaggcg ggaggaggag acaccagggg tggccctgag 420

cgccggcgac acctttcctg gactataaat tgagcacctg ggatgggtag ggggccaacg 480

cagtcaccgc cgtccgcagt cacagtccag ccactgaccg cagcagcgcc cttgcgtagc 540

agccgcttgc agcgagaaca ctgaattgcc aacgagcagg agagtctcaa ggcgcaagag 600

gaggccaggg ctcgacccac agagcaccct cagccatcgc gagtttccgg gcgccaaagc 660

caggagaagc cgcccatccc gcagggccgg tctgccagcg agacgagagt tggcgagggc 720

ggaggagtgc cgggaatccc gccacaccgg ctatagccag gcccccagcg cgggccttgg 780

agagcgcgtg aaggcgggca tccccttgac ccggccgacc atccccgtgc ccctgcgtcc 840

ctgcgctcca acgtccgcgc ggccacc atg atg caa atc tgc gac acc tac aac 894

Met Met Gln Ile Cys Asp Thr Tyr Asn

1 5

cag aag cac tcg ctc ttt aac gcc atg aat cgc ttc att ggc gcc gtg 942

Gln Lys His Ser Leu Phe Asn Ala Met Asn Arg Phe Ile Gly Ala Val

10 15 20 25

aac aac atg gac cag acg gtg atg gtg ccc agc ttg ctg cgc gac gtg 990

Asn Asn Met Asp Gln Thr Val Met Val Pro Ser Leu Leu Arg Asp Val

30 35 40

ccc ctg gct gac ccc ggg tta gac aac gat gtt ggc gtg gag gta ggc 1038

Pro Leu Ala Asp Pro Gly Leu Asp Asn Asp Val Gly Val Glu Val Gly

45 50 55

ggc agt ggc ggc tgc ctg gag gag cgc acg ccc cca gtc ccc gac tcg 1086

Gly Ser Gly Gly Cys Leu Glu Glu Arg Thr Pro Pro Val Pro Asp Ser

60 65 70

gga agc gcc aat ggc agc ttt ttc gcg ccc tct cgg gac atg tac agc 1134

Gly Ser Ala Asn Gly Ser Phe Phe Ala Pro Ser Arg Asp Met Tyr Ser

75 80 85

cac tac gtg ctt ctc aag tcc atc cgc aac gac atc gag tgg ggg gtc 1182

His Tyr Val Leu Leu Lys Ser Ile Arg Asn Asp Ile Glu Trp Gly Val

90 95 100 105

ctg cac cag ccg cct cca ccg gct ggg agc gag gag ggc agt gcc tgg 1230

Leu His Gln Pro Pro Pro Pro Ala Gly Ser Glu Glu Gly Ser Ala Trp

110 115 120

aag tcc aag gac atc ctg gtg gac ctg ggc cac ttg gag ggt gcg gac 1278

Lys Ser Lys Asp Ile Leu Val Asp Leu Gly His Leu Glu Gly Ala Asp

125 130 135

gcc ggc gaa gaa gac ctg gaa cag cag ttc cac tac cac ctg cgc ggg 1326

Ala Gly Glu Glu Asp Leu Glu Gln Gln Phe His Tyr His Leu Arg Gly

140 145 150

ctg cac act gtg ctc tcg aaa ctc acg cgc aaa gcc aac atc ctc act 1374

Leu His Thr Val Leu Ser Lys Leu Thr Arg Lys Ala Asn Ile Leu Thr

155 160 165

aac aga tac aag cag gag atc ggc ttc ggc aat tgg ggc cac tga 1419

Asn Arg Tyr Lys Gln Glu Ile Gly Phe Gly Asn Trp Gly His

170 175 180

ggcgtggcgc ccgtggctgc ccagcacctt cttcgaccca tctcaccctc tctcattcct 1479

caaagctttt ttttttttcc tggctggggg gcgggaaggg cagactgcaa actggggggc 1539

tgcgtacgtg caggaggcgc ggtggggctg cgtggaggag ggggccacgt gtgagagaga 1599

agaaaatggt ggccggagat gggagggccc aaggaacctc ctgggagggg gcctgcattc 1659

tatgttggtg ggaatgggac tgggctgacg ccctgcattc agcctgtgcc tttcctgggg 1719

tttcttttct gttcttttcg gaggagaggg cccgagaagg ggccatacca gggcgcggcg 1779

ctgggttgcc acacttggga aagcagcccg gagctgggtg ctggggaagg cggggcgcgt 1839

agcctcccgc cgccctgcgg ttgggccggt ggaggcccag gcgttgctag gattgcatca 1899

gttttcctgt ttgcactatt tctttttgta acattggccc tgtgtgaagt atttcgaatc 1959

tcctccttgc tctgaaactt cagcgattcc attgtgataa gcgcacaaac agcactgtct 2019

gtcggtaatc ggtactactt tattaatgat tttctgttac actgtatagt agtcctatgg 2079

cacccccacc ccatcccttt cgtgccactc ccgtccccac ccccacccca gtgtgtataa 2139

gctggcattt cgccagcttg tacgtagctt gccactcagt gaaaataata acattattat 2199

gagaaagtgg acttaaccga aatggaacca actgacattc tatcgtgttg tacatagaat 2259

gatgaagggt tccactgttg ttgtatgtct taaatttatt taaaactttt tttaatccag 2319

atgtagacta tattctaaaa aataaaaaag caaatgtgtc aactaaaaaa aaaaaaaaaa 2379

aa 2381

<210>10

<211>183

<212>PRT

<213>人

<400>10

Met Met Gln Ile Cys Asp Thr Tyr Asn Gln Lys His Ser Leu Phe Asn

1 5 10 15

Ala Met Asn Arg Phe Ile Gly Ala Val Asn Asn Met Asp Gln Thr Val

20 25 30

Met Val Pro Ser Leu Leu Arg Asp Val Pro Leu Ala Asp Pro Gly Leu

35 40 45

Asp Asn Asp Val Gly Val Glu Val Gly Gly Ser Gly Gly Cys Leu Glu

50 55 60

Glu Arg Thr Pro Pro Val Pro Asp Ser Gly Ser Ala Asn Gly Ser Phe

65 70 75 80

Phe Ala Pro Ser Arg Asp Met Tyr Ser His Tyr Val Leu Leu Lys Ser

85 90 95

Ile Arg Asn Asp Ile Glu Trp Gly Val Leu His Gln Pro Pro Pro Pro

100 105 110

Ala Gly Ser Glu Glu Gly Ser Ala Trp Lys Ser Lys Asp Ile Leu Val

115 120 125

Asp Leu Gly His Leu Glu Gly Ala Asp Ala Gly Glu Glu Asp Leu Glu

130 135 140

Gln Gln Phe His Tyr His Leu Arg Gly Leu His Thr Val Leu Ser Lys

145 150 155 160

Leu Thr Arg Lys Ala Asn Ile Leu Thr Asn Arg Tyr Lys Gln Glu Ile

165 170 175

Gly Phe Gly Asn Trp Gly His

180

<210>11

<211>3129

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(214)..(1167)

<400>11

gggcgagtac tcctgattgt gacatcacat tcatcccctg ggcgatggag cttgtcactg 60

ggaaggaata ctcagtcgga gaatagccaa caagatgggt tactgggaga atctcttcag 120

tggcactgag tggaggcatc agggggttgg agccttgtga acagggaacc tgccccccaa 180

cacttggaag gacctgggtt tcagtgatga gac atg ggg tat gat gta acc cgt 234

Met Gly Tyr Asp Val Thr Arg

1 5

ttc cag ggg gat gtt gac gaa gat ctt atc tgc cct att tgc agt gga 282

Phe Gln Gly Asp Val Asp Glu Asp Leu Ile Cys Pro Ile Cys Ser Gly

10 15 20

gtc ttg gag gag cca gta cag gca cct cat tgt gaa cat gct ttc tgc 330

Val Leu Glu Glu Pro Val Gln Ala Pro His Cys Glu His Ala Phe Cys

25 30 35

aac gcc tgc atc acc cag tgg ttc tct cag caa cag aca tgt cca gtg 378

Asn Ala Cys Ile Thr Gln Trp Phe Ser Gln Gln Gln Thr Cys Pro Val

40 45 50 55

gac cgt agt gtt gtg acg gtc gcc cat ctg cgc cca gta cct cgg atc 426

Asp Arg Ser Val Val Thr Val Ala His Leu Arg Pro Val Pro Arg Ile

60 65 70

atg cgg aac atg ttg tca aag ctg cag att gcc tgt gac aac gct gtg 474

Met Arg Asn Met Leu Ser Lys Leu Gln Ile Ala Cys Asp Asn Ala Val

75 80 85

ttc ggc tgt agt gcc gtt gtc cgg ctt gac aac ctc atg tct cac ctc 522

Phe Gly Cys Ser Ala Val Val Arg Leu Asp Asn Leu Met Ser His Leu

90 95 100

agc gac tgt gag cac aac ccg aag cgg cct gtg acc tgt gaa cag ggc 570

Ser Asp Cys Glu His Asn Pro Lys Arg Pro Val Thr Cys Glu Gln Gly

105 110 115

tgt ggc ctg gag atg ccc aaa gat gag ctg ccc aac cat aac tgc att 618

Cys Gly Leu Glu Met Pro Lys Asp Glu Leu Pro Asn His Asn Cys Ile

120 125 130 135

aag cac ctg cgc tca gtg gta cag cag cag cag aca cgc atc gca gag 666

Lys His Leu Arg Ser Val Val Gln Gln Gln Gln Thr Arg Ile Ala Glu

140 145 150

ctg gag aag acg tca gct gaa cac aaa cac cag ctg gcg gag cag aag 714

Leu Glu Lys Thr Ser Ala Glu His Lys His Gln Leu Ala Glu Gln Lys

155 160 165

cga gac atc cag ctg cta aag gca tac atg cgt gca atc cgc agt gtc 762

Arg Asp Ile Gln Leu Leu Lys Ala Tyr Met Arg Ala Ile Arg Ser Val

170 175 180

aac ccc aac ctt cag aac ctg gag gag aca att gaa tac aac gag atc 810

Asn Pro Asn Leu Gln Asn Leu Glu Glu Thr Ile Glu Tyr Asn Glu Ile

185 190 195

cta gag tgg gtg aac tcc ctt cag cca gca aga gtg acc cgc tgg gga 858

Leu Glu Trp Val Asn Ser Leu Gln Pro Ala Arg Val Thr Arg Trp Gly

200 205 210 215

ggg atg atc tca act cct gat gct gtg ctc cag gct gta atc aag cgc 906

Gly Met Ile Ser Thr Pro Asp Ala Val Leu Gln Ala Val Ile Lys Arg

220 225 230

tcc ctg gtg gag agt ggc tgt cct gct tct att gtc aac gag ctg att 954

Ser Leu Val Glu Ser Gly Cys Pro Ala Ser Ile Val Asn Glu Leu Ile

235 240 245

gaa aat gcc cac gag cgt agc tgg ccc cag ggt ctg gcc aca cta gag 1002

Glu Asn Ala His Glu Arg Ser Trp Pro Gln Gly Leu Ala Thr Leu Glu

250 255 260

act aga cag atg aac cga cgc tac tat gag aac tac gtg gcc aag cgc 1050

Thr Arg Gln Met Asn Arg Arg Tyr Tyr Glu Asn Tyr Val Ala Lys Arg

265 270 275

atc cct ggc aag cag gct gtt gtc gtg atg gcc tgt gag aac cag cac 1098

Ile Pro Gly Lys Gln Ala Val Val Val Met Ala Cys Glu Asn Gln His

280 285 290 295

atg ggg gat gac atg gtg caa gag cca ggc ctt gtc atg ata ttt gcg 1146

Met Gly Asp Asp Met Val Gln Glu Pro Gly Leu Val Met Ile Phe Ala

300 305 310

cat ggc gtg gaa gag ata taa gagaactcga ctggctatca ggaagagatg 1197

His Gly Val Glu Glu Ile

315

gaaatcagaa aatcccatca ctccagcagc tgggacctga gtcctaccea ccattcttaa 1257

tactgtggct tatacctgag ccacacatct ccctgccctt ctggcactga agggccttgg 1317

ggtagtttgc tcagcctttc aggtgggaaa cccagatttc ctccctttgc catattcccc 1377

taaaatgtct ataaattatc agtctgggtg ggaaagcccc cacctccatc cattttcctg 1437

cttagggtcc ctggttccag ttattttcag aaagcacaaa gagattcaat ttccctggag 1497

gatcaggaca gaggaaggaa tctctaatcg tccctctcct ccaaaaccag ggaatcagag 1557

cagtcaggcc tgttgactct aagcagcaga catcctgaag aaatggtaag ggtggagcca 1617

aatctctaga aataagtagt gaggccgtta attggccatc actgatggcc cttagggaaa 1677

gactggacct ctgtgccaag cagtatccct gttcagccca ccttaaaggt gtaggcaccc 1737

actgggtcta ccagtatgca ggttgggata ctgaaaattt ccagatgagc tcttctttcc 1797

tacaagtttt cataattagg gaatgccagg gtttagggta ggggttaatc tgttgggggt 1857

tgatgtgttt agcaagaagc tactcctagc ttttgctaaa atatggttgg cactgcctct 1917

tgtggcacag gccataattg ttccatagac ccctctctag ccctgtgact gtagttagtt 1977

actttgatga ttttctttgg ccattgtttg tttatatttc acaaactcca cctactgccc 2037

ccccccctct tttttttaag aatggcctga tcatggctat ctcagccaca ttgttggcaa 2097

tttaatttat ttacttcctt tttttttttt aagaaaggaa aaaagaaaaa aaaatcaaac 2157

ttgaaacttt tcttttgatg ttcctattgt gggggttctg gatagggtgg gacagggatg 2217

ggggtgtgtt ttatattttt tccttttcag cacaaccttt ggctttaata taggaagagc 2277

caagggagtc ctcggctgaa cttacgatat ctgccccaaa cctctgtaac cccgactgaa 2337

atgaggagct tcctctcttc ctgtgaagga tatgacagtc cagcatcgat gcctgtgccc 2397

tctggaaaaa tttcctccta gcccttccag ggccttatca taaaactctg gatttagagt 2457

attcattttg aaggcaactc ccccttcccc aagtttcctt ggagctgtat agctgggttc 2517

taagcttcac catgcaaatc agaaatttta tctctaagta caggctgtgc cgtgtctcac 2577

ccacaccccc ctggggactt cagttccatt tcaggttacc tggggtatac cttgatccct 2637

agagtgactg gcagagtaag agaaggggag agataatagg tgtgattatt ttaatatgaa 2697

ggtgggagtg tggttggaga tagaaaggct cctccccacc atgtaatggc ttcctctcag 2757

aattttattc caggctagct tgctgcaggt ctgggtagtt ggatcatggc tccactggga 2817

ttggggtgga aagcttgagg ggagtagggt tccagctctg ggacattgtg ctcaggaatt 2877

tgaaaacgct gctatactta ctctggttac tacatttctt ccactcccct ttcccctacc 2937

tgccttaacc aaggctcata ctgtcctgtc cttaccctca gatggagcca ggaagctcag 2997

tgaaaggctt ccctaccctt tgcactagtg tctctgcagg ttgctggttg tgttgtatgt 3057

gctgttccat ggtgttgact gcactaataa taaacctttt actcaactct ctaaaaaaaa 3117

aaaaaaaaaa aa 3129

<210>12

<211>317

<212>PRT

<213>人

<400>12

Met Gly Tyr Asp Val Thr Arg Phe Gln Gly Asp Val Asp Glu Asp Leu

1 5 10 15

Ile Cys Pro Ile Cys Ser Gly Val Leu Glu Glu Pro Val Gln Ala Pro

20 25 30

His Cys Glu His Ala Phe Cys Asn Ala Cys Ile Thr Gln Trp Phe Ser

35 40 45

Gln Gln Gln Thr Cys Pro Val Asp Arg Ser Val Val Thr Val Ala His

50 55 60

Leu Arg Pro Val Pro Arg Ile Met Arg Asn Met Leu Ser Lys Leu Gln

65 70 75 80

Ile Ala Cys Asp Asn Ala Val Phe Gly Cys Ser Ala Val Val Arg Leu

85 90 95

Asp Asn Leu Met Ser His Leu Ser Asp Cys Glu His Asn Pro Lys Arg

100 105 110

Pro Val Thr Cys Glu Gln Gly Cys Gly Leu Glu Met Pro Lys Asp Glu

115 120 125

Leu Pro Asn His Asn Cys Ile Lys His Leu Arg Ser Val Val Gln Gln

130 135 140

Gln Gln Thr Arg Ile Ala Glu Leu Glu Lys Thr Ser Ala Glu His Lys

145 150 155 160

His Gln Leu Ala Glu Gln Lys Arg Asp Ile Gln Leu Leu Lys Ala Tyr

165 170 175

Met Arg Ala Ile Arg Ser Val Asn Pro Asn Leu Gln Asn Leu Glu Glu

180 185 190

Thr Ile Glu Tyr Asn Glu Ile Leu Glu Trp Val Asn Ser Leu Gln Pro

195 200 205

Ala Arg Val Thr Arg Trp Gly Gly Met Ile Ser Thr Pro Asp Ala Val

210 215 220

Leu Gln Ala Val Ile Lys Arg Ser Leu Val Glu Ser Gly Cys Pro Ala

225 230 235 240

Ser Ile Val Asn Glu Leu Ile Glu Asn Ala His Glu Arg Ser Trp Pro

245 250 255

Gln Gly Leu Ala Thr Leu Glu Thr Arg Gln Met Asn Arg Arg Tyr Tyr

260 265 270

Glu Asn Tyr Val Ala Lys Arg Ile Pro Gly Lys Gln Ala Val Val Val

275 280 285

Met Ala Cys Glu Asn Gln His Met Gly Asp Asp Met Val Gln Glu Pro

290 295 300

Gly Leu Val Met Ile Phe Ala His Gly Val Glu Glu Ile

305 310 315

<210>13

<21l>3005

<212>DNA

<213>人

<220>

<22l>CDS

<222>(241)..(1155)

<400>13

cagtggtgga agaagaggcg gcggcggcgg gggtagggag cctggaaacg cgagcgggga 60

tggtaggtgg tttggacccg ccgggccgcc gtcgtttcca gaaagggttt gactggagga 120

acctctggag cagctgttgg ctggctcctc tggctgatgg catgttgagg tacatgggcc 180

agcggcagcg agggcatcca atccagaggg gtccactcta gaggccaggc caccagcacc 240

atg ggc cag tgt gtc acc aag tgt aag aat ccc tca tcg acc ctg ggc 288

Met Gly Gln Cys Val Thr Lys Cys Lys Asn Pro Ser Ser Thr Leu Gly

1 5 10 15

agc aaa aat gga gac cgt gag ccc agc aac aag tca cat agc agg agg 336

Ser Lys Asn Gly Asp Arg Glu Pro Ser Asn Lys Ser His Ser Arg Arg

20 25 30

ggt gca ggc cac cgt gag gag cag gta cca ccc tgt ggc aag cca ggt 384

Gly Ala Gly His Arg Glu Glu Gln Val Pro Pro Cys Gly Lys Pro Gly

35 40 45

gga gat atc ctc gtc aac ggg acc aag aag gcc gag gct gcc act gag 432

Gly Asp Ile Leu Val Asn Gly Thr Lys Lys Ala Glu Ala Ala Thr Glu

50 55 60

gcc tgc cag ctg cca acg tcc tcg gga gat gct ggg agg gag tcc aag 480

Ala Cys Gln Leu Pro Thr Ser Ser Gly Asp Ala Gly Arg Glu Ser Lys

65 70 75 80

tcc aat gcc gag gag tct tcc ttg caa aga ttg gaa gaa ctg ttc agg 528

Ser Asn Ala Glu Glu Ser Ser Leu Gln Arg Leu Glu Glu Leu Phe Arg

85 90 95

cgc tac aag gat gag cgg gaa gat gca att ttg gag gaa ggc atg gag 576

Arg Tyr Lys Asp Glu Arg Glu Asp Ala Ile Leu Glu Glu Gly Met Glu

100 105 110

cgc ttt tgc aat gac ctg tgt gtt gac ccc aca gaa ttt cga gtg ctg 624

Arg Phe Cys Asn Asp Leu Cys Val Asp Pro Thr Glu Phe Arg Val Leu

115 120 125

ctc ttg gct tgg aag ttc cag gct gca acc atg tgc aaa ttc acc agg 672

Leu Leu Ala Trp Lys Phe Gln Ala Ala Thr Met Cys Lys Phe Thr Arg

130 135 140

aag gag ttt ttt gat ggc tgc aaa gca ata agt gca gac agc att gac 720

Lys Glu Phe Phe Asp Gly Cys Lys Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ile Asp

145 150 155 160

gga atc tgt gca cgg ttc cct agc ctc tta aca gaa gcc aaa caa gag 768

Gly Ile Cys Ala Arg Phe Pro Ser Leu Leu Thr Glu Ala Lys Gln Glu

165 170 175

gat aaa ttc aag gat ctc tac cgg ttt aca ttt cag ttt ggc ctg gac 816

Asp Lys Phe Lys Asp Leu Tyr Arg Phe Thr Phe Gln Phe Gly Leu Asp

180 185 190

tct gaa gaa ggg cag cgg tca ctg cat cgg gaa ata gcc att gcc ctg 864

Ser Glu Glu Gly Gln Arg Ser Leu His Arg Glu Ile Ala Ile Ala Leu

195 200 205

tgg aaa cta gtc ttt acc cag aac aat cct ccg gta ttg gac caa tgg 912

Trp Lys Leu Val Phe Thr Gln Asn Asn Pro Pro Val Leu Asp Gln Trp

210 215 220

cta aac ttc cta aca gag aac ccc tcg ggg atc aag ggc atc tcc cgg 960

Leu Asn Phe Leu Thr Glu Asn Pro Ser Gly Ile Lys Gly Ile Ser Arg

225 230 235 240

gac act tgg aac atg ttc ctt aac ttc act cag gtg att ggc cct gac 1008

Asp Thr Trp Asn Met Phe Leu Asn Phe Thr Gln Val Ile Gly Pro Asp

245 250 255

ctc agc aac tac agt gaa gat gag gcc tgg cca agt ctc ttt gac acc 1056

Leu Ser Asn Tyr Ser Glu Asp Glu Ala Trp Pro Ser Leu Phe Asp Thr

260 265 270

ttt gtg gag tgg gaa atg gag cga agg aaa aga gaa ggg gaa ggg aga 1104

Phe Val Glu Trp Glu Met Glu Arg Arg Lys Arg Glu Gly Glu Gly Arg

275 280 285

ggt gca ctc agc tca ggg cct gag ggc ttg tgt ccc gag gag cag act 1152

Gly Ala Leu Ser Ser Gly Pro Glu Gly Leu Cys Pro Glu Glu Gln Thr

290 295 300

tag tggctctgtc ccaggagcag cagcaaggat ctgccagctg ccctgcagcc 1205

aactgaggaa ttggaccatt ttggaaatta ctgaagatcc ggatattttc tactttacac 1265

ctttctctgc cttgtatctg aaagggctct aaaatgctgt atcatgtttt aggcactttc 1325

ttcatttttt tggttatttt ggttatttcc tttttggggg gatctcccag aatatttgaa 1385

cctggttaca tgttgtgtat ctttttttga agccttcaga tagaataagc ctgccatttc 1445

ttgcacaaat ttaggttttt tttttgtttt tttttgtttt tttttttttt ttttggtagg 1505

ggagggcata gagcagggcg gggggatggg actgttaggt tgaattaaca ttacaaaatg 1565

atacagtgcc agatctcagt ttcgcatatt gtttttcagg gcaggtctgt actgtgtgta 1625

gtgctgttta catagatgaa tttaggttgt aataattatt tttaaagatt tacacagatt 1685

tgaatagcag tgttaactgt taaccacatt gcattaattc ccaggcgatt tagagctctt 1745

ggagagccaa ggccagccaa gagcatttgt agtctggtga caaccccctt ttaagctaat 1805

ttatccagaa ccctgatttc cctcacttct tgctcattcc ttctttgacc tattgcattt 1865

catgttgagt ttttccatca acatgctgca cctgtcagtc aagtgagcat tttttaagaa 1925

cacattgtac tgagaaccac ttaagcattg aatgcggaga aagcagtgct acctcagttt 1985

tgctggaagt agacttcttt gatagttttc tttctttgat gaagtttctg tattttcatg 2045

ttgtaagtgg aaatactttt ttttgtttgt ttgtttcatt tgccttggag ccaaagtttc 2105

tgttcctggt ggtcgggaaa ctgcctgccg gccaactgac ttgaaggaaa actgtggtat 2165

ggagctctgc ttgaattttt ttttttttaa tatttttatt tttttctttg aatatcatca 2225

gcttacttgt ctggcaaggg cagaagcctg gggttggcct gaactctgcc aaacaaatat 2285

caaagtgtat ttaatagtta aatttgtgcc ctttcccttc ttgctgcacc catgttgtca 2345

cttaaccccc aggagttatt tattatcttt ttgttaaagt caggctcatt tggggtaatg 2405

tgatgactgt ttaggtttac atgaccctcc tctcctttcc ctacccccaa atatgtatat 2465

atacatatat aaaatatgta tatattttac ctatataaaa tatatatata tacacatata 2525

tgtatctata ttcctttgtt tctttgcctg cttatactgg ccataaaaga gggagctgcc 2585

ttcaatgtat aaagtataag aagagtgcca gggaatgcca taatggaggc ttttggatct 2645

gaatttggac catttcacta aagagaacat gagtttgctc agccctttcc tcacaagagg 2705

gagggccccg gttccccaga cttctccacg cgctggctcc ataaaggcca gctttggcca 2765

ggctgccaca ggggcctgag gagctcactc tgggcctacc tggtttcagt tagagggtcc 2825

tcctgttatt tttccattta aaaagtatgt cctcagaaaa ctgtactgga aggatgggtg 2885

gcaggaactt gtatagttca gcttccaaca ctttggaaca gattaaaaag ggaatctttt 2945

aaataaaaac gtataaaaat aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3005

<210>14

<211>304

<212>PRT

<213>人

<400>14

Met Gly Gln Cys Val Thr Lys Cys Lys Asn Pro Ser Ser Thr Leu Gly

1 5 10 15

Ser Lys Asn Gly Asp Arg Glu Pro Ser Asn Lys Ser His Ser Arg Arg

20 25 30

Gly Ala Gly His Arg Glu Glu Gln Val Pro Pro Cys Gly Lys Pro Gly

35 40 45

Gly Asp Ile Leu Val Asn Gly Thr Lys Lys Ala Glu Ala Ala Thr Glu

50 55 60

Ala Cys Gln Leu Pro Thr Ser Ser Gly Asp Ala Gly Arg Glu Ser Lys

65 70 75 80

Ser Asn Ala Glu Glu Ser Ser Leu Gln Arg Leu Glu Glu Leu Phe Arg

85 90 95

Arg Tyr Lys Asp Glu Arg Glu Asp Ala Ile Leu Glu Glu Gly Met Glu

100 105 110

Arg Phe Cys Asn Asp Leu Cys Val Asp Pro Thr Glu Phe Arg Val Leu

115 120 125

Leu Leu Ala Trp Lys Phe Gln Ala Ala Thr Met Cys Lys Phe Thr Arg

130 135 140

Lys Glu Phe Phe Asp Gly Cys Lys Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ile Asp

145 150 155 160

Gly Ile Cys Ala Arg Phe Pro Ser Leu Leu Thr Glu Ala Lys Gln Glu

165 170 175

Asp Lys Phe Lys Asp Leu Tyr Arg Phe Thr Phe Gln Phe Gly Leu Asp

180 185 190

Ser Glu Glu Gly Gln Arg Ser Leu His Arg Glu Ile Ala Ile Ala Leu

195 200 205

Trp Lys Leu Val Phe Thr Gln Asn Asn Pro Pro Val Leu Asp Gln Trp

210 215 220

Leu Asn Phe Leu Thr Glu Asn Pro Ser Gly Ile Lys Gly Ile Ser Arg

225 230 235 240

Asp Thr Trp Asn Met Phe Leu Asn Phe Thr Gln Val Ile Gly Pro Asp

245 250 255

Leu Ser Asn Tyr Ser Glu Asp Glu Ala Trp Pro Ser Leu Phe Asp Thr

260 265 270

Phe Val Glu Trp Glu Met Glu Arg Arg Lys Arg Glu Gly Glu Gly Arg

275 280 285

Gly Ala Leu Ser Ser Gly Pro Glu Gly Leu Cys Pro Glu Glu Gln Thr

290 295 300

<210>15

<211>1832

<212>DNA

<213>人

<220>

<22l>CDS

<222>(281)..(1057)

<400>15

agcagagtcc ggctgcctgg ggcgggcggc gcgtgtctgc agctgctccg ggtagcccgc 60

taggcgcgcc gtccccagcc ccgccgccgg ccctcggtgc gcccggccgc ctgcaccccc 120

aggagcagct gctgtgaata aacacagaag tggagctggg ggactgatta gaagcctcat 180

tcagtgcacc tgggccccag caggcccagc caggcgtgga ggaagaggca ttgaggactt 240

tccttacctg tttttccagc tcacccactg ccagcagaga atg ctg tcc agt ttc 295

Met Leu Ser Ser Phe

1 5

aac gag tgg ttt tgg cag gac agg ttc tgg tta cca ccc aat gtc acg 343

Asn Glu Trp Phe Trp Gln Asp Arg Phe Trp Leu Pro Pro Asn Val Thr

10 15 20

tgg aca gag cta gaa gac cgg gat ggc cgt gtc tac ccc cac ccc cag 391

Trp Thr Glu Leu Glu Asp Arg Asp Gly Arg Val Tyr Pro His Pro Gln

25 30 35

gac ttg ttg gca gcc ctg ccc ctg gcg ctg gtc ctc ctg gcc atg cgc 439

Asp Leu Leu Ala Ala Leu Pro Leu Ala Leu Val Leu Leu Ala Met Arg

40 45 50

ctt gcc ttt gag aga ttc att ggc ctg ccc ctg agc cgg tgg ctg ggt 487

Leu Ala Phe Glu Arg Phe Ile Gly Leu Pro Leu Ser Arg Trp Leu Gly

55 60 65

gtg agg gat cag acc agg agg caa gtg aag ccc aac gcc acg ctg gag 535

Val Arg Asp Gln Thr Arg Arg Gln Val Lys Pro Asn Ala Thr Leu Glu

70 75 80 85

aaa cac ttc ctc acg gaa ggg cac agg ccc aag gag ccc cag ctg tct 583

Lys Hls Phe Leu Thr Glu Gly His Arg Pro Lys Glu Pro Gln Leu Ser

90 95 100

ctc ctg gcc gcc cag tgt ggc ctc acg ctg cag cag acc cag cga tgg 631

Leu Leu Ala Ala Gln Cys Gly Leu Thr Leu Gln Gln Thr Gln Arg Trp

105 110 115

ttc cgg aga cgc cgg aac cag gat cga ccc cag ctg acc aag aag ttc 679

Phe Arg Arg Arg Arg Asn Gln Asp Arg Pro Gln Leu Thr Lys Lys Phe

120 125 130

tgt gag gcc agc tgg agg ttt ctc ttc tac ctg tcc tcc ttc gtg ggc 727

Cys Glu Ala Ser Trp Arg Phe Leu Phe Tyr Leu Ser Ser Phe Val Gly

135 140 145

ggc ctc tcg gtc ctg tac cac gag tca tgg ctg tgg gca cca gta atg 775

Gly Leu Ser Val Leu Tyr His Glu Ser Trp Leu Trp Ala Pro Val Met

150 155 160 165

tgc tgg gac agg tac cca aac cag act ctg aag cca tcc ctg tac tgg 823

Cys Trp Asp Arg Tyr Pro Asn Gln Thr Leu Lys Pro Ser Leu Tyr Trp

170 175 180

tgg tac ctc ttg gag ctg ggt ttc tac ctc tca ctg cta atc agg ctg 871

Trp Tyr Leu Leu Glu Leu Gly Phe Tyr Leu Ser Leu Leu Ile Arg Leu

185 190 195

ccc ttt gat gtc aag cgc aag ggt ggg gga cct tcc agc atc aag cct 919

Pro Phe Asp Val Lys Arg Lys Gly Gly Gly Pro Ser Ser Ile Lys Pro

200 205 210

cgt ccc cac tat gac cca ccg tct act gca gga ttt caa gga gca ggt 967

Arg Pro His Tyr Asp Pro Pro Ser Thr Ala Gly Phe Gln Gly Ala Gly

215 220 225

gat aca cca ctt cgt ggc ggt cat cct gat gac ctt ctc cta cag tgc 1015

Asp Thr Pro Leu Arg Gly Gly His Pro Asp Asp Leu Leu Leu Gln Cys

230 235 240 245

caa cct gct gcg cat tgg ctc tct ggt gct gct gtt aca tga 1057

Gln Pro Ala Ala His Trp Leu Ser Gly Ala Ala Val Thr

250 255

ttcctctgac tacctgctgg aggcctgtaa gatggtcaac tacatgcagt atcagcaagt 1117

gtgcgacgct ctcttcctca tcttctcctt tgtcttcttc tacacccgac tggtcctctt 1177

tcccacccag atcctctaca ccacatacta cgagtccatc agcaacaggg gccccttctt 1237

cggctactac ttcttcaacg ggcttctgat gttgctgcag ctgccgcacg tgttctggtc 1297

ttgcctcatt ctgcgcatgc tctatagctt catgaagaag ggccagatgg agaaggacat 1357

tcgtagtgat gtagaagaat cagactccag tgaggaggtg gcggcggccc aggaacctct 1417

gcagctaaag aacggggcag ctggagggcc caggccagcc cccactgatg gccctcagag 1477

ccgggtggcc gggcgtctga ccaacaggca cacaacagcc acatagccgg gcggggctgg 1537

ctgtaagggg ttgccccccc gccagtgcct tggatatttc tggggtgact ggactggcgc 1597

ccctgggcca cctttctgga gacagggagg gccccacccg gggtgggtgg gaaggctgat 1657

gatctgtctc cagccccttc cttctgccca cccacccttc ttccctctgg gcaactggac 1717

agatctggga gccagcagct ggatgctgtg gctggccaga gacacctcca ggctgtggcc 1777

tgggggctgg ggggagcccc aggctgaaaa gggtccaatt aaaacaaatg gagcc 1832

<210>16

<21l>258

<212>PRT

<213>人

<400>16

Met Leu Ser Ser Phe Asn Glu Trp Phe Trp Gln Asp Arg Phe Trp Leu

1 5 10 15

Pro Pro Asn Val Thr Trp Thr Glu Leu Glu Asp Arg Asp Gly Arg Val

20 25 30

Tyr Pro His Pro Gln Asp Leu Leu Ala Ala Leu Pro Leu Ala Leu Val

35 40 45

Leu Leu Ala Met Arg Leu Ala Phe Glu Arg Phe Ile Gly Leu Pro Leu

50 55 60

Ser Arg Trp Leu Gly Val Arg Asp Gln Thr Arg Arg Gln Val Lys Pro

65 70 75 80

Asn Ala Thr Leu Glu Lys His Phe Leu Thr Glu Gly His Arg Pro Lys

85 90 95

Glu Pro Gln Leu Ser Leu Leu Ala Ala Gln Cys Gly Leu Thr Leu Gln

100 105 110

Gln Thr Gln Arg Trp Phe Arg Arg Arg Arg Asn Gln Asp Arg Pro Gln

115 120 125

Leu Thr Lys Lys Phe Cys Glu Ala Ser Trp Arg Phe Leu Phe Tyr Leu

130 135 140

Ser Ser Phe Val Gly Gly Leu Ser Val Leu Tyr His Glu Ser Trp Leu

145 150 155 160

Trp Ala Pro Val Met Cys Trp Asp Arg Tyr Pro Asn Gln Thr Leu Lys

165 170 175

Pro Ser Leu Tyr Trp Trp Tyr Leu Leu Glu Leu Gly Phe Tyr Leu Ser

180 185 190

Leu Leu Ile Arg Leu Pro Phe Asp Val Lys Arg Lys Gly Gly Gly Pro

195 200 205

Ser Ser Ile Lys Pro Arg Pro His Tyr Asp Pro Pro Ser Thr Ala Gly

210 215 220

Phe Gln Gly Ala Gly Asp Thr Pro Leu Arg Gly Gly His Pro Asp Asp

225 230 235 240

Leu Leu Leu Gln Cys Gln Pro Ala Ala His Trp Leu Ser Gly Ala Ala

245 250 255

Val Thr

<210>17

<211>1689

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(35)..(901)

<400>17

agcaaatttc aactcccgct tgccattcaa catc atg gat gat ccg aag agt gaa 55

Met Asp Asp Pro Lys Ser Glu

1 5

cag cag cgc ata ctg cgc cgc cac caa cgc gag agg cag gag ctg cag 103

Gln Gln Arg Ile Leu Arg Arg His Gln Arg Glu Arg Gln Glu Leu Gln

10 15 20

gcc cag atc egg agc tta aaa aac tcg gtc ccc aag acc gac aag acg 151

Ala Gln Ile Arg Ser Leu Lys Asn Ser Val Pro Lys Thr Asp Lys Thr

25 30 35

aaa aga aag cag ttg ctc caa gac gtg gcc cgc atg gag gcc gag atg 199

Lys Arg Lys Gln Leu Leu Gln Asp Val Ala Arg Met Glu Ala Glu Met

40 45 50 55

gct cag aag cac cgg cag gag ctg gag aag ttc caa gac gac agt agc 247

Ala Gln Lys His Arg Gln Glu Leu Glu Lys Phe Gln Asp Asp Ser Ser

60 65 70

att gaa tct gtc gtc gaa gac ctg gcc aag atg aat ctg gaa aac cgg 295

Ile Glu Ser Val Val Glu Asp Leu Ala Lys Met Asn Leu Glu Asn Arg

75 80 85

cct ccc cgc tcc tcc aaa gcc cac aga aag aga gaa aga atg gag tcc 343

Pro Pro Arg Ser Ser Lys Ala His Arg Lys Arg Glu Arg Met Glu Ser

90 95 100

gag gag agg gag cgc cag gag agc atc ttc cag gct gag atg tcg gag 391

Glu Glu Arg Glu Arg Gln Glu Ser Ile Phe Gln Ala Glu Met Ser Glu

105 110 115

cac ctg gcc ggc ttc aag cgc gag gag gag gag aag ctc gcc gcc atc 439

His Leu Ala Gly Phe Lys Arg Glu Glu Glu Glu Lys Leu Ala Ala Ile

120 125 130 135

ctg gga gcc agg ggt ctg gag atg aaa gcg atc ccg gcc gac ggc cac 487

Leu Gly Ala Arg Gly Leu Glu Met Lys Ala Ile Pro Ala Asp Gly His

140 145 150

tgc atg tac cgc gcc atc caa gac cag ctg gtg ttc agc gtg tct gtg 535

Cys Met Tyr Arg Ala Ile Gln Asp Gln Leu Val Phe Ser Val Ser Val

155 160 165

gag atg ctg cgc tgc cgc acc gcc agc tac atg aag aag cac gtc gac 583

Glu Met Leu Arg Cys Arg Thr Ala Ser Tyr Met Lys Lys His Val Asp

170 175 180

gag ttc ctg ccc ttc ttc agc aac ccc gag acc agc gac tcc ttc ggc 631

Glu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Pro Glu Thr Ser Asp Ser Phe Gly

185 190 195

tac gac gac ttc atg atc tac tgc gac aac atc gtg cgc acc acg gca 679

Tyr Asp Asp Phe Met Ile Tyr Cys Asp Asn Ile Val Arg Thr Thr Ala

200 205 210 215

tgg gga ggc cag ctg gag ctg agg gcc ctg tcg cac gtc ctg aag acc 727

Trp Gly Gly Gln Leu Glu Leu Arg Ala Leu Ser His Val Leu Lys Thr

220 225 230

ccc atc gag gtg atc cag gcc gac tcg ccc acc ttg atc atc ggg gag 775

Pro Ile Glu Val Ile Gln Ala Asp Ser Pro Thr Leu Ile Ile Gly Glu

235 240 245

gag tac gtc aag aag ccg atc atc ctg gtc tac ctg cgc tat gcc tac 823

Glu Tyr Val Lys Lys Pro Ile Ile Leu Val Tyr Leu Arg Tyr Ala Tyr

250 255 260

agc ctc ggc gag cac tac aac tcc gtg aca ccg ctc gag gcc ggc gcc 871

Ser Leu Gly Glu His Tyr Asn Ser Val Thr Pro Leu Glu Ala Gly Ala

265 270 275

gcc ggg ggc gtg ctc ccg cgt ctc ctg tag gccccaaggc gctgagcagc 921

Ala Gly Gly Val Leu Pro Arg Leu Leu

280 285

cccgggaaac tgtcgccgtc gccgcatctc ctcagtaggc tcagtttatt ttcccctttt 981

gcttttctct gtttttcttt tccttccttt taatcaaaac tacccgcccc cgccccgccc 1041

ccgctttcct aaccttgctg ctttcacagg gtgggaaacg aaattcgagg gaaattcccc 1101

ggaaatatga gggaaatctc tgcattgcac caccagaggg gcataaattt gaaagttcta 1161

acctcttctt gcccttaagg gtcttttacc tccctcacca actaagattt ggtcatgttg 1221

cgtataactt caccacaaaa atggaaatat tggccgggcg cggtggctca cgcctgtaat 1281

cccagcactt tgggaggccg aggcgggcgg atcacgaggt caggagttcg agaccagcct 1341

ggccaacatg gtgaaacccc acctctacaa aaaatacaaa aattagccgg gcgtggtggc 1401

aggcacctgt agtcccagat actcgggagg ctaaggcagg agaatcgctt gacgggaagc 1461

ggaggttgca gtgagccgag atcgtgcctt tgcactccag cgtggaagac agtgagactc 1521

cgtctcaaaa aaatgaaaaa ttagccaggc aggttggcgg gggcctgtaa tcctagctac 1581

ttggggtgct gaggcaggag aatcaactga acccgggagg cggaggctgc agtgggccgg 1641

gatcgtacta ctgcactcca gcatggaaga cagcgagact ccgtctcc 1689

<210>18

<211>288

<212>PRT

<213>人

<400>18

Met Asp Asp Pro Lys Ser Glu Gln Gln Arg Ile Leu Arg Arg His Gln

1 5 10 15

Arg Glu Arg Gln Glu Leu Gln Ala Gln Ile Arg Ser Leu Lys Asn Ser

20 25 30

Val Pro Lys Thr Asp Lys Thr Lys Arg Lys Gln Leu Leu Gln Asp Val

35 40 45

Ala Arg Met Glu Ala Glu Met Ala Gln Lys His Arg Gln Glu Leu Glu

50 55 60

Lys Phe Gln Asp Asp Ser Ser Ile Glu Ser Val Val Glu Asp Leu Ala

65 70 75 80

Lys Met Asn Leu Glu Asn Arg Pro Pro Arg Ser Ser Lys Ala His Arg

85 90 95

Lys Arg Glu Arg Met Glu Ser Glu Glu Arg Glu Arg Gln Glu Ser Ile

100 105 110

Phe Gln Ala Glu Met Ser Glu His Leu Ala Gly Phe Lys Arg Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Lys Leu Ala Ala Ile Leu Gly Ala Arg Gly Leu Glu Met Lys

130 135 140

Ala Ile Pro Ala Asp Gly His Cys Met Tyr Arg Ala Ile Gln Asp Gln

145 150 155 160

Leu Val Phe Ser Val Ser Val Glu Met Leu Arg Cys Arg Thr Ala Ser

165 170 175

Tyr Met Lys Lys His Val Asp Glu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Pro

180 185 190

Glu Thr Ser Asp Ser Phe Gly Tyr Asp Asp Phe Met Ile Tyr Cys Asp

195 200 205

Asn Ile Val Arg Thr Thr Ala Trp Gly Gly Gln Leu Glu Leu Arg Ala

210 215 220

Leu Ser His Val Leu Lys Thr Pro Ile Glu Val Ile Gln Ala Asp Ser

225 230 235 240

Pro Thr Leu Ile Ile Gly Glu Glu Tyr Val Lys Lys Pro Ile Ile Leu

245 250 255

Val Tyr Leu Arg Tyr Ala Tyr Ser Leu Gly Glu His Tyr Asn Ser Val

260 265 270

Thr Pro Leu Glu Ala Gly Ala Ala Gly Gly Val Leu Pro Arg Leu Leu

275 280 285

Claims

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸含有编码具有影响SRE活性的功能的多肽的核苷酸序列，该核苷酸序列选自：

(a)与编码含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；

(b)编码含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：1O、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85％相似性：

(a)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列；

(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列；

(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列。

5.权利要求1所述的多核苷酸编码的多肽，其特征在于，所述多肽包含选自下组中的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：1O、SEQID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18；或与以上任一氨基酸序列具有至少9O％相似性的多肽；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

6.权利要求5所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：1O、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

7.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1所述的多核苷酸。

8.一种遗传工程宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自：

(a)用权利要求7所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求1所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

9.一种抗体，其特征在于，所述抗体是能与权利要求5所述的多肽特异性结合的抗体。

10.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段含有权利要求1所述的任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。

11.一种分离的多核苷酸在影响SRE活性中的应用，其特征在于所述多核苷酸选自权利要求1所述的多核苷酸，该多核苷酸在宿主细胞中外源表达会影响SRE活性。

12.权利要求11所述的应用，其特征在于所述多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9的编码区序列或全长序列，该多核苷酸在宿主细胞中外源表达会抑制SRE的活化。

13.权利要求11所述的应用，其特征在于所述多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：

13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列，该多核苷酸在宿主细胞中外源表达会促进SRE的活化。

14.权利要求1所述的多核苷酸或权利要求5所述的多肽在制备预防和/或治疗与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病或肿瘤的药物中的用途。

15.权利要求14所述的用途，其中所述疾病选自肌肉增生、肌肉重塑、衰老等相关疾病或肿瘤。

16.含有权利要求5所述的多肽和药学上可接受的载体的药物组合物。

17.一种与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病或肿瘤的体外检测方法，其特征在于，利用权利要求9所述的抗体或权力要求10所述的核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。