CS122792A3 - Pharmaceutical composition for treating auto-immune diseases - Google Patents

Description

teMWdWSlt‘S2?ui!? ϊψ^ΟΛρΒ AN313Z l«ABd Janr

Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitních onemoc-nění. >

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického prostředku proléčení autoimunitních onemocnění, který obsahuje jako svojiúčinnou složku methoxyalkanovou kyselinu indazolu.

Dosavadní stav techniky

Pokud se týče dosavadního stavu techniky, v evrop-ské patentové přihlášce č. A 0 382 276 se popisuje sloučeni-na obecného vzorce I a-ch2-o-crr'-COOR "' (I) ve kterém znamená : A l-benzyl-indazol-3-ylové jádro, R a R' mohou být stejné nebo rozdílné, přičemž znamenají atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1až 5 atomů uhlíku, R'" je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahu-jící 1 až 4 atomy uhlíku, a v případě, že R'" znamená atom vodíku, potom do rozsahuuvedené patentové přihlášky náleží rovněž i soli s organic-kými nebo anorganickými farmaceuticky přijatelnými bazickýmilátkami odvozené od těchto sloučenin.

Kromě toho je třeba uvést, že ve výše uvedenépatentové přihlášce je specifikována sloučenina obecnéhovzorce I, která i když je do určité míry strukturně podobnájako bendazac, ve skutečnosti je natolik odlišná, že farma-kologický profil této výše uvedené sloučeniny obecného vzor-ce I projevuje analgetickou účinnost, kterou neprojevuje - 2 - bendazac.

Nyní bylo podle uvedeného vynálezu zjištěno, Že tatosloučenina obecného vzorce I je účinná i při léčení auto-imunitních onemocnění. Všeobecně je známo, že do oblasti autoimunitníchonemocnění spadá široká skupiny chorob, které jsou charakteri-zovány záněty a destrukcí tkáně, jejichž příčinou jsou proti-látky produkované imunitním systémem proti některým složkámvlastního organizmu. Jako příklad onemocněni, které jsoupokládány za nemoci autoimunitního typu, je možno uvéstrevmatickou arthritidu, glomerulonefritidu, Hashimotovutyreoitidu, systemický lupus erythematodes, myastenie gravis,určité formy hemolytické anemie, autoimunitní trombocytope-nická purpura, určité hepatické poruchy a diabetes typu 1. Z dosavadního stavu techniky je rovněž dobře známo,že při therapii revmatické arthritidy, která patří k jednomuz nejčastěji se vyskytujících autoimunitních onemocnění atím i k onemocnění, které bylo až dosud nejvíce prozkoumáno,bylo až dosud použito velké množství léčivých prostředkůna bázi mnoha steroidních a nesteroidních protizánětovýchlátek, některé sloučeniny zlata, penicilín, imunodepresantya jiné látky. Kromě převážně symptomatických účinků, kterýchbylo dosaženo s Četnými různými léčivými látkami v akutnífázi, byl nejvýznamnější účinek dosažen se sloučeninami zlataa s penicilinem, ovšem tento penicilín není možno podávatpo dlouhé časové intervaly, nebot projevuje různé toxické účinky a to v silné míře.

Naopak, pokud se týče therapie prováděné za pomocisloučenin zlata, je třeba uvést, že u této therapie sedosahuje prodloužené remise pouze u asi 15 % pacientů, u asi60 až 70 % pacientů se dosahuje zmírnění projevu nemoci a - 3 - vzhledem k toxicitě těchto aplikovaných sloučenin zlata musíbýt tato therapie u asi 15 až 20 % pacientů skončena. Poskončení této therapie při aplikaci sloučenin zlata jedoba remise značně proměnlivá (pohybuje se v rozmezí od asi 1do asi 18 měsíců). I presto, že recidiva není obvykle takvážná jako původní onemocnění a značná část pacientů reagujepříznivě na druhý cyklus therapie pomoci sloučenin zlata,mnoho revmatologů dává přednost v pokračování therapieneomezeně aniž by se čekalo na relaps. Po 3 až óletechprovádění kontinuální nebo diskontinuální therapie musívíce než 50 % pacientů, kteří původně projevovali příznivoureakci (t. zn. výše uvedených 15 % pacientů) , tuto therapiipřerušit vzhledem k relapsu nebo z důvodu později se vyskyt-nuvší toxicitě. Kromě toho je dalším důvodem proč se tatotherapie opouští ve velkém měřítku to, že vyžaduje dlouhoudobu léčení, potřebu návštěv a docházení na laboratornítesty. Tato therapie za pomoci sloučenin zlata se neindikujeu pacientů trpících nefropatií, hepatickou dysfunkcí nebou těch pacientů, kteří mají v anamnéze infekční žloutenkunebo hematologické poruchy (viz Goodman & Gilman ”Le basifarmacologiche della terapia", 7. italské vydání, Zanichelli,str. 651 - 652). Z výše uvedeného je zřejmé, že v oblasti tétoproblematiky existuje značná potřeba nalezení léčiva, kteréby bylo schopno vyvolat zastavení vývoje a případně rovněždosáhnout remise revmatické arthritidy a autoimunitníchonemocnění obecně, aniž by toto léčivo projevovalo vážné ved-lejší účinky.

Podstata vynálezu Cílem uvedeného vynálezu je tedy nalezení farma-ceutického prostředku pro léčení autoimunitních onemocnění.

Podstatu uvedeného vynálezu tvoří farmaceutickýprostředek pro léčení autoimunitníeh onemocnění, který obsa-huje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a-ch2-o-crr'-coor' " (I) ve kterém znamená : A l-benzyl-indazol-3-ylové jádro, R a R* mohou mít stejný nebo rozdílný význam,přičemž znamenají atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsa-hující 1 až 5 atomů uhlíku, H'" je atom vodíku nebo alkylové skupina obsa-hující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo v případě, kdy R"' ' znamená atom vodíku, soli tétosloučeniny s organickými nebo anorganickými farmaceutickypřijatelnými bázemi, společně s přinejmenším farmaceutickypřijatelným inertním vehikulem.

Dalším znakem uvedeného vynálezu je způsob léčenípři kterém se podává pacientovi, trpícímu uvedenou nemocí,jako anti-autoimunitní činidlo účinné množství sloučeninyobecnéhovzorce I A-C^-O-CRR^OOR"' (I) ve kterém znamená A l-benzyl-indazol-3-ylové jádro, R a Rz , které mohou mít stejný nebo rozdílný význam, představují atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsa-hující 1 až 5 atomů uhlíku, a R//z znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinuobsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo v případě, že R//z znamená atom vodíku, soli tétosloučeniny s organickými nebo anorganickými farmaceuticky přijatelnými bázemi. - 5 -

Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezupředstavuje Rz" ve výše uvedeném obecném vzorci I atomvodíku a R a R* představují methylovou skupinu (tatosloučenina bude v dalším popisu označována kodovou značkouF 2838).

Jako typické příklady autoimunitních onemocnění,které je možno léčit aplikací farmaceutického prostředkupodle uvedeného vynálezu, je možno uvést revmatickouarthritidu, glomerulonefritidu, Hashimotovu tyreoitidu,systemický lupus erythematodes, myastemii gravis, autoimunitníhemolytickou anemii, autoimunitní trombocytopenickou purpuru,autoimunitní poruchy a diabetes typu 1.

Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu setento farmaceutický prostředek připraví ve vhodné dávkové forměobsahující účinnou dávku pro léčení autoimunitního onemocně-ní přinejmenším jedné sloučeniny obecného vzorce I nebosoli této sloučeniny s farmaceuticky přijatelnou bazickoulátkou a přinejmenším jedno inertní farmaceuticky přijatelnévehikulum.

Jako příklad vhodných dávkových forem je možnouvést tablety, kapsle, povlečené tablety, granule, roztokya syrupy pro orální podáváni, dále masti, krémy a náplastis léčivou látkou pro topické podávání, dále čípky prorektální podávání a sterilní roztoky pro injekce, aerosolya ofthalmické prostředky.

Tato dávková forma může rovněž obsahovat i dalšíběžně používané přídavné látky, jako jsou například konzer-vační přísady, stabilizátory, povrchově aktivní činidla,pufry, soli pro regulaci osmotického tlaku, emulgátory, sla-didla, barviva, aromatizační přísady a podobné další látky. - 6 - V případě potřeby je možné, aby farmaceutický pros-tředek pro léčení autoimunitních onemocnění podle uvedenéhovynálezu obsahoval při některých therapiích rovněž iněkteré další farmakologicky účinné látky, které jsou vhod-né pro současně prováděné therapeutické léčení.

Množství sloučeniny obecného vzorce I nebosoli této sloučeniny s organickou nebo anorganickou farma-ceuticky přijatelnou bazickou látkou ve farmaceuticky při-jatelném prostředku podle uvedeného vynálezu se může pohy-bovat ve velmi širokém rozmezí, což závisí na známýchfaktorech, jako je například typ autoimunitního onemocněni,který má být léčen, na intenzitě onemocnění, na tělesné hmot-nosti pacienta, na dávkové formě, na zvoleném způsobu podá-vání, na počtu dávkových forem, které se denně podávají ana účinnosti konkrétní vybrané sloučeniny obecného vzorce1 . Ovšem je třeba uvést, že optimální množství může každýprůměrný odborník pracující v daném oboru snadno určit.

Obvykle je množství sloučeniny obecného vzorce Inebo soli této sloučeniny s organickými nebo anorganickýmifarmaceuticky přijatelnými bázemi ve farmaceutickém prostřed-ku podle uvedeného vynálezu pro léčení autoimunitníchonemocnění takové, aby hýla zajištěna podávaná hladinatéto látky v rozsahu od 0,01 do 100 miligramů/kilogram/den.Například je možno uvést, že v případě orálního podávánítablet je podávaná dávka této sloučeniny v rozmezí od 0,03do 1 gramu, přičemž tato dávka se podává několikrát zaden, zatímco v případě ofthalmického podávání se používádávkování 0,5 až 2 %-ního sterilního roztoku, v tomto pří-padě rovněž několikrát za den.

Tuto dávkovači formu farmaceutického prostředkupodle uvedeného vynálezu je možno připravit běžnými meto-dami známými z dosavadního stavu techniky každému farmaceuti-kovi, přičemž tyto postupy obvykle zahrnují míšení , granu- - 7 - láci, stlačování, rozpouštění a sterilování.

Sloučenina AF 2838, specifikovaná výše, podle uve-deného vynálezu byla testována na pokusném onemocnění vy-volaném u krys v autoimunitní fázi (arthritida vyvolanáFreundovým adjuvans). Během provádění těchto testů bylozvláště sledováno elektroforetické chování albuminu v. krvi ,neboí předchozí studie ukázaly (viz Silvestrini B. a kol.,Can. J. Biochem., Loc. Cit.), že v průběhu zánětových onemoc-nění je snížení hladiny albuminu v krvi zaviněno denatu-rací spojenou se ztrátou elektroforetických charakteristik.

Sloučenina AF 2838 byla podávána ve stravě vmnožství 0,5 % , nebot tato dávka zajištuje v podstatěkonstantní koncentraci v krvi 100 mikrogramů/mililitr.

Vzhledem k tomu, že zde neexistují farmaceuticképrostředky, které by měly podobný farmakologický profil jakoje tomu u sloučeniny AF 2838 podle vynálezu, porovnání byloprovedeno za použití indomethacinu, který byl podávánve známé účinné dávce (1 miligramAilogram). V každémpřípadě bylo při tomto porovnání shledáno jako vhodnéporovnávat projevy konečného therapeutického účinku avyhodnocovat schopnost sloučeniny AF 2838 pokud se týčezlepšování průběhu onemocnění pomocí vlivu na parametrytekutin v těle, jako je například koncentrace albuminu vséru, což nepředstavuje výsledek působení indomethacinu.

Konkrétně je možno uvést, že při tomto testubylo 0,05 mililitru suspenze (5 miligramů/mililitr) M. Tuberculolosis (H37Ra-Difco) v dokonale kapalném para- finu (Merck 7174) vpraveno injekcí do pravé zadní packy samečků krys, přičemž bylo použito metody podle Newbolda B.B. (viz Chemotherapy of arthritis induced in rats by mycobacterial aójuvant, Brit. J. Pharmacol., 21, 127-136, (1963) , přičemž objem packy byl měřen pomocí přístrojepletismometer model 7150, Ugo Basile, Cernerio, Varese,Itálie. K testování byly použity skupiny po 5 zvířatech,přičemž tato pozorovaná zvířata z různých skupin bylausmrcena druhý den po injekci adjuvans a potom každý.týden,což bylo prováděno po dobu 6 týdnů.

Sedimentace (úroveň sedlivosti červených krvinek)ASR byla zjišťována metodou podle Westergrena (viz. DouglasA.N. Basic Methodology, lne. : Clinical Diagnosis andManagement by Laboratory Methods, eds. Todd, Sanford,Davidsohn J W.B. Sanders Company, Philadelphia, vol. 1,str. 858-915, 1979). Celková úroveň proteinů v plasměbyla zjišťována metodou podle Lowryho O.H. a kol. (viz.Protein measurement with folin phenol reagent, J. Biol.

Chem., 193 : 265 - 275, 1951). Elektroforeza plasmovýchproteinů byla prováděna v Mc Ilveinovu pufru (pH 7,0 j I 0,2)na páscích acetátu celulózy (2,5 . 16 an) . K testování bylo použito skupin se šesti zvířatyv každé ošetřované skupině a pozorování bylo prováděno podobu 51 dní po injekci adjuvans, přičemž v různých časovýchintervalech bylo prováděno měření tělesné hmotnosti,příjmu stravy a objemu packy. Získané výsledky jsou uvedeny v následujícíchtabulkách I, II, III a IV . - 9 -

Tabulka I

Artritida vyvolaná Freundovým adjuvans; zvětšení objemupacky (ml)

Doba (dny) Kontrola arthritidy AF 283S(0,5 % vpotravě) Indomethacin(1 mg/kg, orálně) Normální kontrola 5 1,36 í 0,17 1,35 - 0,12 ++ 1,03 + 0,06 0,77 - 0,04 23 2,16 - 0,25 1,52 - 0,4Í +·+ 1,02 ΐ 0,12 0,99 - 0,04 44 2,59 - 0,60 1,32 - 0,45* ++ 0,90 - 0,08 0,89 - 0,04 +p nižší než 0,05 (analýza odchylky) ++p nižší než 0,01 (analýza odchylky) .

Tabulka II

Arthritida vyvolaná Freundovým adjuvans ; snížení hladinyalbuminu v séru (ml/ml)

Doba (dny Kontrola artritidy AF 2838(0,5 % vpotravě) Indomethacin(1 mg/kg orálně) Normální kontrola 2 5,2 t 1,30 5,2 t 3,83 7,8 - 2,28 1,8 - 0,45 23 14,2 t 4,42 6,6 t 7,99 4,4 - 4,93 1,0 - 0,0 ++ ++ 44 34,2 ΐ 17,25 3,5 - 5,00 1,0 i 0,?? 1,0 - 0,0 ++ p nižší než 0,01 (analýza odchylky) 10

Tabulka III

Artritida vyvolaná Trendovým adjuvans *, zvýšení sedimentace (mm/2 h) Doba (dny) Kontrola artritidy AF 2838(0,5 % vpotravě) Indomethacin(1 mg/kgorálně) Normální kontrola 2 5,2 t 1,30 5,2 - 3,83 7,8 - 2,28 1,8 - 0,, 23 14,2 ΐ 4,42 6,6 - 7,99 4,4 t 4,93 1,0 1 o,' 44 34,2 ΐ 17,25 3,5 - 5,00 ++ 1,0 t 0,?? 1,0 - 0,1 p je nižší než 0,01 (analýza odchylky).

Tabulka IV

Artritida vyvolaná Freundovým adjuvans j změny tělesnéhmotnosti (g)

Doba (dny) Kontrola artritidy AF 2838(0,5 % vpotravě Indomethacin(1 mg/kg orálně) Normální kontrola 2 182,3 - 7,58 186,2 t 6,52 + 185,2+5,91 ++ 199,7 - 7,45 23 191,2 - 29,98 247,8 ΐ 21,46+ 255,5 - 38,87 + 316,5 - 23,45 44 254,5 - 57,27 334,7 - 31,61 329,8 - 35,62 393,3 - 37,10 +p je nižší než 0,05 (analýza odchylky) ++p je nižší než 0,01 (analýza odchylky) . - 11 Z výše uvedených výsledků je patrné, že AF 2838je inaktivní na primární zánět (prvních 5 dní) j na druhéstraně jeho účinek na objem tlapky se stává naprostopatrným během druhého zánětu (po asi 23 dnech jako projevrozšíření autoimunitní reakce). Po asi stejném časovémintervalu (23 dní) se stává rovněž zřejmým jeho ochrannýúčinek na albumin v séru.

Naopak, první účinek, který projevuje indomethacin,je protizánětový účinek na primární léze (snížení objemupacky již za 5 dní od adjuvantní infekce), zatímco zvýšenísérového albuminu se dosáhne pouze za 44 dní. S oběma látkam^dochází k tendenci snižovat sedi-mentaci (sedli vost červených krvinek) v konečné fázi expe-rimentální fáze jako znak hojení.

Na rozdíl od imunodepresiv běžného typu, při jejichžpoužití je možno pozorovat snížení tělesné hmotnosti, k čemuždochází nadměrně v porovnání s kontrolou artritidy (viz.Billingham M.E.J., Models of arthritis and the search foranti-arthritic drugs J Pharm. Ther., 21 : 389 - 428, 1983),vliv na tělesnou hmotnost demonstruje, že kontrola nemocipomocí AF 2838 není dosažena na úkor zdravotního stavu ošetřováných zvířat.

Další testy prováděné se zvýšenými orálními dávkamiaž do 400 mg/kg prokázaly, že sloučenina AF 2838 : - neprojevuje žádný účinek na edem vyvolaný carrageeninem(porovnávací látka : indomethacin účinný při 0,5 mg/kg podá-vaný orálně, fenylbutazon^ účinný při 12,5 mg/kg podávanýorálně a acetylsalicylová kyselina účinná při 25 mg/kg podá-vaná orálně) , - neprojevuje antipyretický účinek (test : horečka vyvo-laná kvasijU^oemí'"''; porovnávací látky : acetylsalicylová - 12 - kyselina účinná při méně než 100 mg/kg podávaná orálně aaminopyrin účinný při méně než 50 mg/kg podávaný orálně),

- neprojevuje antigranulometozní účinnost (test :granulomy z bavlněných pelet *, porovnávací látka : hydrocortisonúčinný při 25 mg/kg intraperitoneálně podávaný)J - neprojevuje lymfocytickou účinnost (test : zavinutíbrzlíku j porovnávací látka : hydrocortizon účinný přiméně než 25 mg/kg podávaný intraperitoneálně), a - neprojevuje hojivý účinek na vředy (porovnávací látka :fenylbutazon účinný při méně než 75 mg/kg podávaný orálně).

Vzhledem k neprojevované aktivitě této sloučeninypodle uvedeného vynálezu ve výše uvedených testech je možnopředpokládat, že sloučenina AF 2838 nezasahuje do metabolismuarachidonové kyseliny jak na úrovni periferní tkáně tak i^ vcentrálním nervovém systému.

Kromě toho je nutno uvést, že při zvýšených množstvíchsloučeniny AF 2838 až na úroveň 200 mikrogramů/mililitrnedochází k inhibování cyklooxygenázového systému v semennýchváčcích u berana J porovnávací látka : indomethacin(účinný při méně než 0,4 mikrogramů/mililitr) a 5-lipoxy-genázového systému leukemických basofilů (leukemické basofilnígranulocyty) u krys ve srovnání s porovnávací sloučeninou,kterou byla kyselina nordihydroguajaretová kyselina (účinnápři 0,3 mikrogramů/mililitr). V průběhu vyhodnocování farmakologického profilusloučeniny AF 2838 byl rovněž sledován účinek na imunitníreakce u myší, přičemž bylo zjištěno, že tato sloučenina jeinaktivní jak na buněčné tak i na humorální úrovni až dodávek 200 mg/kg. Kromě toho bylo zjištěno, že tato sloučeninamá inhibiční účinek na proliferační reakce T a B lymfocytůvyvolané specifickými specifickými mitogeny (concanavelin A,resp. lipopolysacharidy). - 13 -

Toxikologické studie ukázaly, že minimální toxickádávka sloučeniny AF 2838 u myší a u krys je 400 miligramů/kilo-gram při intraperitoneálním podávání a 800 miligramů Ag při · orálním podávání.U sloučeniny AF 2838 vyplynulo, že nemáalfa, beta, ani blokující účinky a rovněž tak * neprojevuje anticholinergickou účinnost. Antigrady chininováaktivita se objevuje pouze při velmi zvýšených dávkách (20 mg/kg při intravenozním podávání), přičemž se ukázalo, že je více než 20-krát nižší než u fenylbutazonu, zatímco antiserotoninová účinnost in vitro se projevovala pouze při koncentraci 10 mikrogramů/ml, přičemž bylo zjištěno, že je asi 5000-krát nižší než u porovnávací látky (cyproheptadin). Z profilu sloučeniny AF 2838, který vyplynul zvýše uvedených testů a pozorování, vyplývá, že tato slouče-nina představuje prototyp specifického léčiva pro léčeníautoimunitních nemocí, přičemž tato sloučenina je účinnái při orálním podávání a neprojevuje protizánětovou účinnosta toxické účinky, které jsou charakteristické pro léčivatypu aspirinu, dále imunosupresivní aktivitu a významnévedlejší účinky, které by mohly omezovat možnosti použití tétolátky pokud se týče dévkovéní nebo délky léčení.

Ostatní sloučeniny podle uvedeného vynálezu obec-ného vzorce I projevují podobný profil.

Claims (6)

1. JUDr. Pavel ZELENÝadvokát Žitná 25,115 04 Praha 1

   PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitních onemocnění , v y z n ač u j í c í se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a-ch2-o-crr'-coor"' (I) ve kterém znamená : A l-benzyl-indazol-3-ylové jádro, R a R' , které mají stejný nebo rozdílný význam,představují atom vodíku nebo alkylovou skupinu, která obsa-huje 1 až 5 atomů uhlíku, Rz#' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinuobsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo v případě, že Rzzz znamená atom vodíku, soli tétosloučeniny s organickými nebo anorganickými farmaceutickypřijatelnými bázemi.
2. 2. Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitníchonemocnění podle nároku 1, vyznačující setím, že ve sloučenině obecného vzorce I znamená Rzz atom vodíku.
3. 3. Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitníchonemocnění podle nároku 2,vyznačující setím, že ve sloučenině obecného vzorce I znamená Rmethylovou skupinu.
4. 4. Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitníchonemocnění podle nároku 3, vyznačující setím, že ve sloučenině obecného vzorce I znamená Rmethylovou skupinu. - 15 -
5. 5. Farmaceutický prostředek pro léčení autoimunitníchonemocnění podle nároku 1, vyznačující setím, že obsahuje 30 až 1000 miligramů sloučeninyobecného vzorce I v libovolné dávkové formě, která jepodávána systemickým způsobem.
6. 6. Farmaceutický prostředek pro léžení autoimunitních onemocnění podle nároku 1, vyznačující se tím, že dávkovou formou pro ofthalmické podávání jesterilní roztok obsahující 0,5 až 2 % sloučeniny obecnéhovzorce 1 . Zastupuje : Dr. Pavel Zelený