CS211215B1 - Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov - Google Patents
Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov Download PDFInfo
- Publication number
- CS211215B1 CS211215B1 CS609480A CS609480A CS211215B1 CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1 CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 609480 A CS609480 A CS 609480A CS 211215 B1 CS211215 B1 CS 211215B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- gel
- proteins
- concentration
- liter
- equal
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Vynález sa týká spčsobu kvantitatívnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov. Podstata vynálezu spočívá v tom, že před vykonáním elektroforézy sa na gelový rez uložený na polyakrylamidovom nosiči přidá pufrovací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02 až 0,2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu, výhodné tris/hydroxymethyl/aminometán s prídavkom glycerolu, nad ktorý sa ■ navrství roztok anorganickej soli o koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu. MVýznam vynálezu spočívá v tom, že umožňuje rýehlu, rutinnú, technicky nenáročná kvantitatívnu elúciu bielkovin z gólových rezov, v štandardných elektroforetických aparatúrach. Vynález má uplatnenie t v aplikovanomzvýskume, biochémii, imunologii a hematologii.
Description
Vynález sa týká spdsobu kvantitativnéj izolácie bielkovin z polyakrylamidových gélov.
Po detekcii biélkoviny na polyakrylamidovom góle sa doteraz bielkovina izolovala bud chemickým spčsobom (depolymerizácia pomocu peroxidu vodíka) alebo elektroforézou s opačnou polaritou. Pri chemickom spčsobe izolácie sa vo vzorke vyskytuje značné množstvo depolymerizovaného materiálu z nosiča (gélu). Pri elektroforéze s opačnou polaritou bolo potřebné použiť špeciálne konstruované trubičky, alebo modifikované elektroforetické zariadenie, ktoré použivajú na zachytenie biélkoviny napr. dialyzačné membrány, alebo hydroxylapatit. Použitie týchto metod izolácie je spojené s náročnou manipuláciou a zložitou přípravou jednotlivých trubičiek obsahujúcich gélové řezy. Použitie dialyzačných membrán a hydroxylapatitu vedie k nespecifickéj absorpci bielkovin na týchto materiáloch, čo spSsopuje nekvantitatívnu izoláciu bielkovin. Okrem toho sa bielkovina vo váčšine metod zachytává v značnou: objeme, čo zvyčajne vyžaduje ďalší krok, spočívajúci v koncentrácii biélkoviny. Aplikácia spomenutých špeciálnych trubičiek zabraňuje rutinnému spracovaniu vzoriek.
Tieto nevýhody sú odstraněné spčsobom podTa vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že před elektroforézou sa na gélový rez uložený na polyakrylamidovom nosiči přidá pufrovací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácii 0,02 až 0,2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gélového řezu, výhodné tris/hydroxymetyl/aminometán s prídavkom glycerolu, nad ktorý sa navrství roztok anorganickej soli o koncentrácii 1 až 2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gélového řezu.
Vzostupný diskontinuálny gradient vodivosti nachádzajúci sa nad gélovým rezom zabráni úniku biélkoviny do elektroforetického média a zostupný gradient hustoty, nachádzajúci sa nad gélovým rezom udržuje vzestupný gradient vodivosti.
Vynález umožňuje rýchlu, rutinnú, techniky nenáročná kvantitatívnu elúciu bielkovin z gólových rezov v štandardných elektroforetických aparatúrach. Eluovaná kvapalina sa zachytává v malom objeme - menej ako 0,2 ml.
Příklad
Postup je vysvětlovaný v súvislosti s připojeným výkresom.
Gélový rez obsahujúci príslušnú bielkovinu, napr. myoglobín, hovadzí sérum albumin alebo inzulín (úsek B), sa uloží do bežnej trubičky, ktorá je naplněná do 3/4 svojho objemu polyakrylamidovým gélom, napr. polymerizát z 10 % akrylamidu (úsek A). Nad gélový rez sa napipetuje roztok o nízkej vodivosti, napr. 0.15 ml 0,025 M tris/hydroxymethyl/aminometánu, 0,075 M glyoínu, 30 % objemových glycerolu (pH = 8,8) (úsek C). Nad úsek C sa opatrné pipetuje roztok 2 ?.» chloridu sodného (úsek D) o vysokej vodivosti a nižšej hustoty oproti roztoku v úseku C až do horného okraja trubičky. Prevedie sa elektroforéza s opačnou polaritou po dobu 1 až 3 hodiny (1 hodina za nepřítomnosti dodecylsulfátu sodného). Aplikuje sa prúd 4 mA na jednu trubičku. DÍžka elúcie je závislá od druhu izolovanej bielkoviny, hrůbky gélového řezu a přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Eluovaná bielkovina sa nachádza v malom objeme v úseku C. Výťažok pri testovaných bielkovinách bol priemerne napr. při myoglobíne 95 %. V případe použitia gólových rezov, ktorých hustota je nižšia ako hustota roztoku v úseku C sa može hustota řezu zvýšit inkubáoiou tohoto řezu v riedenom roztoku izopropylalkoholu.
Vynález má uplatnenie na kvantitatívnu elúciu bielkovin z gólových rezov v aplikovanom výskume, v biochémii, v imunologii a hematologii.
Claims (2)
- SpSsob kvantitativné;) izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov elektroforézou s opačnou polaritou, vyznačujúci sa tým, že před elektroforézou sa na gélový rez uložený na polyakrylamidovom nosiči přidá pufrovací roztok o pH 8,5 až 9,5 a koncentrácíi 0,02 až 0,2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu, výhodné tris/hydroxymetyl/aminometán s prídavkom glycerolu, nad ktorý sa navrství roztok anorganickej soli o koncentrácíi 1 až 2 mól/liter v množstve minimálně rovnom objemu gólového řezu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (sk) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (sk) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS211215B1 true CS211215B1 (sk) | 1982-02-26 |
Family
ID=5407176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS609480A CS211215B1 (sk) | 1980-09-09 | 1980-09-09 | Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS211215B1 (sk) |
-
1980
- 1980-09-09 CS CS609480A patent/CS211215B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guzman | Improved solid‐phase microextraction device for use in on‐line immunoaffinity capillary electrophoresis | |
| Chen et al. | Capillary electrophoresis--a new clinical tool | |
| Kubáň et al. | Contactless conductivity detection in capillary electrophoresis: a review | |
| Takács | Electrophoresis of proteins in polyacrylamide slab gels | |
| AU686495B2 (en) | Capillary electrophoresis of glycosylated proteins | |
| Doyle et al. | Enzyme-linked immunoadsorbent assay with electrochemical detection of. alpha. 1-acid glycoprotein | |
| US4939098A (en) | Immunoassay and measurement kit used therefor | |
| DE3679688D1 (de) | Elektrochemischer nachweis von cis-diolen. | |
| Shiba et al. | Thin-layer potentiometric analysis of lipid antigen-antibody reaction by tetrapentylammonium (TPA+) ion loaded liposomes and TPA+ ion selective electrode | |
| Weng et al. | Determination of free intracellular amino acids in single mouse peritoneal macrophages after naphthalene‐2, 3‐dicarboxaldehyde derivatization by capillary zone electrophoresis with electrochemical detection | |
| Knopf et al. | A new two-dimensional gel electrophoresis system for the analysis of complex protein mixtures: application to the ribosome of E. coli | |
| Ölvecká et al. | Direct determination of valproate in serum by zone electrophoresis–isotachophoresis on a column‐coupling chip | |
| Van Staden et al. | Amperometric biosensor based on D-aminoacid oxidase for the R-perindopril assay | |
| GB1314263A (en) | Blood diagnostic methods employing radioactive tracer compounds and ion-exchange resin membranes | |
| ATE29591T1 (de) | Salzbrueckenfluessigkeit fuer die potentiometrische blutanalyse. | |
| Weng et al. | Assay of amino acids in individual human lymphocytes by capillary zone electrophoresis with electrochemical detection | |
| Ferslew et al. | Capillary ion analysis of potassium concentrations in human vitreous humor | |
| US4925545A (en) | Method of generating pH functions in electrophoresis and isoelectric focusing | |
| CS211215B1 (sk) | Sposob kvantitativnej izolácie bielkovín z polyakrylamidových gélov | |
| ATE53912T1 (de) | Verfahren zur konzentrierung und bestimmung von biomolekuelen und zellen. | |
| JPS5853745A (ja) | ２次元電気泳動装置 | |
| Westwood et al. | Group-specific component: A review of the isoelectric focusing methods and auxiliary methods available for the separation of its phenotypes | |
| WO2010017109A1 (en) | Systems and methods for quantitative analyte transfer | |
| Fukushi et al. | Determination of magnesium and calcium ions in sea water by capillary type isotachophoresis | |
| US4994161A (en) | Apparatus and method for macromolecular charge determination |