CS229054B1 - [2-0-Methyltyrosin]deamino~6-karba-oxytocin a způsob jeho výroby - Google Patents

Description

Předmětem vynálezu je analog oxytocinu, [2-0-metyltyrosin] deamino-6-karba-oxytocin, a způsob jeho výroby.

Jde o nový analog oxytocinu, který má vysoký a selektivní natriuretický účinek.

Přírodní hormon oxytooin mé řadu biologických účinků, z nichž některé, např. uterotonický a galaktogogický, jsou využívány v lékařství. Kromě toho má další účinky, typické pro hormon vasopresin, a to antidiuretický a presorický. U oxytocinu byly zjištěny i další biologické aktivity, hydrooemotická, natriferioká, natriuretická atd. Při praktickém využití v lékařství je toto široké spektrum biologických účinků nevýhodné a vede někdy až ke kontraindikaci. Autoři vynálezu zjistili nyní, že jestliže se provedou v molekule oxytocinu tři strukturní změny, a to, že se zamění alfa-aminoskupina cysteinu za vodík, tyrosin za O-metyltyrosin a disulfidová vazba za skupinu -S-CH₂-, získá se látka s vysokým natriuretický® účinkem (dvakrát vyšším než mé oxytocin), přičemž ostatní aktivity jsou podstatným způsobem sníženy. Uvedené strukturní změny zvyšují také chemickou i metabolickou stabilitu látky podle vynálezu, která se pak projevuje v prodlouženém biologickém účinku.

Analog oxytocinu [2-0-metyltyrosin]deamino-6-karba-oxytocin (tj. cyklický laktam 0-metyltyrosylisoleucylglutaminylasparaginyl-S-(beta-karboxyetyl)homocysteinylprolylleucylglycinamidu) má vzorec 1,

CH,--S-CH,-CH, | ² I ^(I)

CH₂-C0-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-NH-CH-C0-Pro-Leu-Gly-NH₂ kde všechny aminokyseliny jsou L-řady.

Podstatou způsobu výroby nového analogu oxytocinu vzorce I podle vynálezu je, že se lineární peptid vzorce 11, ch₂--S-ch₂-ch₂

I |

CH₂-CO-X Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-NH-CH-CO-Pro-Leu-Gly-NH₂ kde X znamená skupinu aktivující karboxylovou skupinu, s výhodou aktivovaný ester, podrobí cyklizaci pro vytvoření peptidové vazby mezi aminoskupinou O-metyltyrosinu a karboxylovou skupinou S-karboxyetylhomocysteinového zbytku.

Připravený nový analog oxytocinu mé 200 % natriuretické aktivity oxytocinu, přičemž jeho uterotonická aktivita je 3 m.j. na mg a galaktogogické 18 m.j./mg (pro oxytocin jsou tyto aktivity 500 m.j./mg).

Způsob výroby analogu oxytocinu se dále objasňuje v příkladech provedení.

Příklad 1

0-metyltyrosylisoleucylglutaminylasparaginyl-S-(beta-p-nitrofenoxykarbonyletyl)homocysteinylprolylleucylglycinami d

K suspenzi isoleucylglutaminylasparaginyl-S-(beta-karboxyetyl)homocysteinylprolylleucylglycinamidu (0,40 g) (Jošt K., šorm F.: Collection Czechoslov. Chem. Commun. 36.

234 /1971/) v dimetylformamidu (10 ml) byl přidán N-etylpiperidin (30/ll) a 2,4,5-trichlorfenyleeter terč.butyloxykarbonyl-O-metyltyrosinu (0,3 g). K reakční směsi byl po 2 h přidán jeětě týž aktivní ester (0,15 g) a N-etylpiperidin (60/il). Po 44 h byla reakční směs odpařena, odparek byl roztírán s petroléterem a získaný krystalický produkt byl odfiltrován a promyt éterem, etylacetétem, vodou a éterem. Bylo získáno 0,55 g (95 %) produktu o teplotě tání 224 až 230 °Cj [a]_D = -23,2° (c = 0,2, dimetylformamid).

Pro G₅₀H_7gN₁,0,₅S . 4 H₂O (1 178) vypočteno: 50,96 % C, 7,44 % H, 13,07 % N; nalezeno: 51,14 % C, 7,01 % H, 12,86 % N.

DálSÍ reakce byly prováděny v atmosféře dusíku. K roztoku výěe připraveného chráněného oktapeptidu (250 mg) ve směsi dimetylformamidu (8 ml) a pyridinu (8 ml) byl za míchání přidán bis-(p-nitrofenyl)sulfit (0,8 g) a po 7 h další podíl sulfitu (0,8 g). Po dalších 16 h byl přidán další podíl sulfitu (0,4 g) a po 6 h byla reakční směs odpařena a odparek byl , rozetřen s éterem, pevný podíl byl odfiltrován a promyt vodou a éterem (do negativní reakce na nitrofenol). Po vysušení bylo získáno 210 mg produktu, který byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctóvé (8 ml) a po 70 min stání při teplotě místnosti byl k roztoku přidán toluen (8 ml) a roztok byl odpařen. Po rozetření s éterem byl produkt vysušen a pokud možno nejdříve použit k další reakci (produkt je nestálý).

Příklad 2 [2-0-metyltyrosin]deamino-6-karba-oxytocin

Aktivní ester oktapeptidu připravený v příkladu 1 byl rozpuštěn v dimetylformamidu (8 ml) a roztok byl přidán během 3 h do směsi pyridinu (200 ml) a N-etylpiperidinu (40^ul), zahřívaná na 50 °C, za míchání a probublávéní dusíkem. Reakční směs byla zahřívána ještě 4 h a poté stála ,4 h při teplotě místnosti. Po odpařeni byl produkt rozetřen s éterem a vysuěen. čištěni bylo provedeno dvěma různými způsoby. Pokud bylo použito ionexové chromá3 tografie a gelové filtrace, byla přímo získána žádaná látka. Pokud byla reakční směs čištěna protiproudným roztřepáváním, vznikal odpovídající sulfoxid, který bylo nutno redukovat bromovodíkem a acetonem (Lebl Μ., Barth T., Jošt K.: Collection Czechoslov. Chem. Commun. 43. 1 538 /1978/). V obou případech byl produkt získáván v 30 až 40% výtěžku. Chromatografie na tenké vrstvě silikagélu (detekce chloračním činidlem): Rj, - 0,17 (2-butanol - 98% kyselina mravenči - voda, 75:13,5:11,5), 0,12 (2-butanol - 25% amoniak - voda, 85:7,5:7,5), 0,20 (1-butanol - kyselina octová - voda, 4:1:1), 0,62 (pyridin - 1-butanol - kyselina octové - voda, 10:15:3:6); [a] p = -78,3° (c = 0,1, IM kyselina octová). Aminokyselinová analýza (po 20 h hydrolýze 6M-HC1 ve vakuu 150 Pa): Asp = 1,03, Clu = 1,01, Pro = 0,98,

Gly = 1,02, Ile = 1,02, Leu = 1,05, Tyr + Tyr(Me) = 0,97, Hcy(C^COgH) = 0,94.

Pro C^HggN,,	Oj 2S <	• 2 C2H4O2 .	h2o (1	126)
vypočteno:	52,25	% C,	7,07	% H,	13,68 % N;
nalezeno:	51,88	% C,	6,76	% H,	13,42 % N.

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Claims (2)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. [2-0-metyltyrosinJdeamino-6-karba-oxytocin vzorce I,

   CH,- S--CH,-CH,

   I ^{2 2} I ² (I)

   CH₂-C0-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-NH-CH-C0-Pro-Leu-Gly-NH₂ kde všechny aminokyseliny jsou L-řady.
2. 2. Způsob výroby sloučeniny vzorce I podle bodu 1, vyznačený tím, že se lineární peptid vzorce II, ch₂·-S-ch₂-ch₂ | . j (xi)

   CH₂CO-X Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-NH-CH-CO-Pro-Leu-Gly-NH₂ kde X znamená skupinu aktivující karboxylovou skupinu, s výhodou aktivovaný ester, podrobí cyklizaci pro vytvořeni peptidové vazby mezi aminoskupinou O-metyltyrosinu a karboxylovou skupinou S-karboxyetylhomocysteinového zbytku.