CS231687B1 - Fermentační zařízení k množeni mikrobiální kultury - Google Patents

Abstract

Vynález Je určen k množeni mikróbů obtížně rostoucích τ tekutém kultivačním médiu. Množení těchto mikróbů se doeahuje na polopropustné membráně a v difuzátu ve fermentačnim zařízeni, skládajícím se z nádoby ve tvaru válce s víky a z dialyzačnich trubic, které lze nahradit celofánovými řasenými střevy. Dialyzačni trubice nebo celofánová rašená střeva se plní kultivačním médiem a nádoba difúzetem. Vynález může být využít ve veterinárním lékařství.

Description

Vynález se týká dialyzačního zařízení k množení mikroorganizmů.

Mikrobiální suspenze k přípravě imunopreparátů se obvykle získávají bučí množením mikrobů v tekutých kultivačních médiích nebo spláchnutím mikrobiálního nárůstku s povrchu pevných kultivačních půd. V prvním případě se bu3 užívá kultura včetně kultivačního média s nevýhodou značného obsahu balastnich látek, nebo se mikroby oddělují a promývají s nevýhodou možného narušeni a odplavení povrchových struktur, např. fimbrií. V druhém případě jsou tyto nevýhody pominutelné, ale pěstování mikrobů na pevných půdách je ve velkovýrobě pracné a nákladné. Použití tekutých kultivačních médií je problematické u mikroorganizmů, které se v nich množí velmi slabě, např. baktérie Moráxella bovis (HENRIKSEN, S.

D,: Moraxella, Acinotobacter, and the Mimeae. Bact. Rev,, 37, 1973,

S. 522 - 561; PUGH, G.W. - HUGHES, D.E. - McOONALD, T.O.: The isolation and characterization of Moraxella bovis. Am. 3. vet. Res., 27, 1966, s. 957 - 962). K přípravě pokusných vakcín z tohoto bakteriálního druhu se v zahraničí pomnožuje Moraxella bovis na tuhých kultivačních médiích (PUGH, G.W. - McDONALD, T.O. - KOPECKÝ,

K.E.: Experimental infectious bovine keratoconjunctivitis: Efficacy of a vaccine prepared from nonhemolytic strains of Moraxella bovis. Am. 0. vet. Res., 43, 1982, s. 1081 - 1084). V ČSSR se vyrábějí bakteriální vakcíny množením bakteriálních buněk nejčastěji v tekutých kultivačních médiích ve fermentorech a omezeně na tuhých kultivačních médiích. V současné i starší odborné literatuře není popsáno zařízeni k množeni mikrčbů na stěnách dialyzačních trubic nebo v difuzátu, i když v bakteriologických laboratořích ke kultivaci některých baktérií a k přípravě purifikovaných bakteriálních produktů je používáno polopropustných membrán, položených na povrch tuhého kultivačního média.

231 687

Podstatou fermentačniho zařízení k množení mikrobiální kultury je nádoba uzavřená vlky s otvory, ve které jsou umístěny dialyzačni trubice, utěsněné v otvorech vík na jedné straně trubicemi a na druhé straně odnímatelnými uzávěry. Víko je déle opatřeno plnicím nebo vypouštěcím otvorem a otvory k případnému provzduěňování mikrobiální kultury, Dialyzační trubice jeou nahrazeny celofánovými řasenými střevy, Fermentační zařízeni se sterilizuje, dia lyzačni trubice se náplni kultivačním médiem, které má funkci retenátu a prostor nádoby difuzátem, jehož základem je např, fyziolo gický roztok soli, Difuzát se naočkuje suspenzi mikrobů a celé zařízeni ee inkubuje staticky nebo za provzdušnování při teplotě a po dobu potřebnou k pomnoženi děného mikrobiálního druhu. Tím, že mikroby využívají ke svému množeni plochu dialyzačnich trubic a difuzátu, se dosahuje ve fermentačním zařízeni množení mikrobiál nich druhů, které v tekutých kultivačních médiích rostou nedostatečně, Získaná mikrobiální suspenze obsahuje minimální množství balastnich látek kultivačního média.

Ňa výkresu je na obr, 1 naznačen v řezu přiklad provedení fermentačniho zařízení, na obr. 2 je zobrazeno víko v nárysu a na obr, 3 je nakreslena v řezu pryžová vložka ‘a na obr. 4 je znázorněno upevněni dialyzační trubice, případně celofánového řaseného střeva v otvoru víka.

Na obr. 1 v nádobě _1 ve tvaru válce, uzavřené víky 2 pomocí přírubových spojů 3, jsou umístěny dialyzační trubice“*nebo jako náhrada za ně celofánová řasená střeva 4,4» která jsou protažena pryžovými vložkami 5 v otvorech 6 vík 2. Dialyzační trubice 4 nebo celofánová řasená střeva 4a jsou utěsněna v pryžových vložkách 5, otvorů 6 vík 2 zasunutými skleněnými trubicemi 7 na jedné straně a zasunutými odnímatelnými uzávěry v provedeni jako skleněné zátky 8 na protilehlé straně. Dialyzační trubice 4 nebo celofánová řasená střeva 4a jsou naplněna retenátem, který tvoří kultivační médium a prostor nádoby je naplněn difuzátem, jehož základem je např. fyziologický roztok soli. Do nádrže Ji ústi plnící a vypouštěci otvor 9, otvor 10 k zasunuti provzdušňovací trubice 11, k jejíž utěsnění ve víku 2 slouží pryžové těsnění 12, a otvor 13 k odvodu vháněného vzduchu. Skleněná trubice 7, ústící do dialyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a a otvor plnící a vypouětěci 9, jsou uzavřeny pryžovými zátkami 14. Na obr. 2

231 687

- 3 je znázorněno víko 2 s otvory 6 k protažení díalyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a, s otvorem plnícím nebo vypouštěcím 9, s otvorem 10 k zasunutí provzdušňovacího zařízení a s otvorem 13 k odvodu vháněného vzduchu· Otvory 6 jsou opatřeny pryžovými vložkami 5., otvor 10 je opatřen pryžovým těsněním 12,

Při obvodu víka 2 je kruhové pryžové těsnění 15. Na obr. 3 je pryžová vložka 5. Na obr. 4 je znázorněno utěsněni díalyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a v otvorech 6 vík 2 s pryžovými vložkami Í3, skleněnými trubicemi 7 a odnimatelnými uzávěry v provedení jako skleněné zátky .8.

Příklad č. 1:

Fermentačni zařízení bylo užito k množeni bakteriálního druhu Moraxella bovis. Nádoba 1 ve tvaru válce byla zhotovena ze skla SIMAX, měla délku 400 mm, vnitřní průměr 150 mm a silu stěny 6 mm. Víka 2 byla zhotovena z nerezavějící oceli, pryžová kruhová těsnění 15 a pryžové vložky 5> z LUKOPRENu N 1725, přírubové spoje 3 byly komerčně dodávané. Místo díalyzačnich trubic 4 byla užita celofánová řasená střeva 4a o průměru 24 mm, která byla upevněna v 9 otvorech 6 každého víka 2 s pryžovými vložkami 5 skleněnými trubicemi 7 na jedné straně a odnimatelnými uzávěry v provedeni jako skleněné zátky 8 na straně druhé. Celofánová řasená střeva 4a a prostor nádoby 1. byl naplněn destilovanou vodou k vyzkoušeni těsnosti spojů. Po vypuštění vody byly skleněné trubice 7, ústící do celofánových řasených střev 4a, otvor plnící a vypouštěcí 9, skleněné provzdušňovací trubice 11 a otvor 13 k odvodu vháněného vzduchu uzavřeny vatovými zátkami a fermentačni zařízeni bylo sterilizováno autoklávováním při teplotě 130 °C po dobu 30 min. Po ochlazeni na teplotu laboratoře byla celofánová řasená střeva 4a naplněna kultivačním médiem. Skleněné trubice 7, ústící do celofánových řasených střev 4a, byly uzavřeny pryžovými zátkami 14. Nádoba 1. ve tvaru válce byla naplněna fyziologickým roztokem soli, jehož reakce byla upravena na pH = 7,2, plnící a vypouštěcí otvor 9 byl uzavřen pryžovou zátkou 14. Po 16 h dialýzy při teplotě laboratoře byl difuzát naočkován 20 ml bakteriální suspenze s počtem jednotek tvořících kolonie mikroorganizmů 10 / 1 ml. Po inkubaci po dobu 48 h při 37 °C bylo z nádoby JL získáno 6 000 ml bakteriální suspenze o obsahu mikroorganizmů 10⁷/ 1 ml kolonie tvořících jednotek.

Příklad č. 2: 231 887

Fermentačni zařízeni bylo sestaveno a připraveno způsobem popsaným v přikladu č. 1 s tim, že misto celofánových řasených střev 4a byly užity dialyzačni trubice 4 kalibru 40 výrobce Kalle-Wiesbaden. Dosažené výsledky odpovídaly výsledkům dosaženým s celofánovými řasenými střevy 4a. Výhodou celofánových řase ných střev je snadnější dostupnost·

Claims (2)

1. Fermentační zařízeni k množeni mikrobiální kultury vyznačuji cí ee tim, že v nádobě (1) uzavřené vlkem (2) jsou umístěné dialyzační trubice (4) upevněné ve víku (2) na.jedné straně v otvorech (6) trubicemi (7) a na druhé straně odnímátelnými uzávěry (8), přičemž je v nádobě (1) umístěné provzdušňovací zařízení (11) upevněné v otvoru (10) víka (2) a víko (2) ja opatřeno plnícím nebo vypouštěcím otvorem (9) a otvorem (13) k odvodu vzduchu·

2. Fermentační zařízení podle bodu 1, vyznačující se tím, že dialyzační trubice (4) jsou nahrazeny celofánovými řasenými střevy (4a).