CS231763B1 - Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek - Google Patents
Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek Download PDFInfo
- Publication number
- CS231763B1 CS231763B1 CS82194A CS19482A CS231763B1 CS 231763 B1 CS231763 B1 CS 231763B1 CS 82194 A CS82194 A CS 82194A CS 19482 A CS19482 A CS 19482A CS 231763 B1 CS231763 B1 CS 231763B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- preparation
- mol
- deoxyribonucleoprotein
- temperature
- binding
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108091023046 Deoxyribonucleoprotein Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 claims description 2
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006424 Flood reaction Methods 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010059724 Micrococcal Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 240000002657 Thymus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
2317S3
Vynález sa lýka spůsobu přípravy pro-striedku pre viazanie protilátok, ktorý jeurčený najma pre diagnózu systémovéholupus erythematosus.
Doteraijšie testy pre diagnózu systémové-ho lupus erythematosus vychádzajú z obja-vu tzv. LE-bunkového fenoménu, resp. tes-tu Hargraves Μ. M., Richmond H., MortonR., Pr-oc. Mayo Glin. 23, 25 až 28, 1948; otomto fenoméne sa dokázalo, že v ňom akoefektor účinkujú protilátky proti deoxyribo-inukleoproteínu, povodně· označené ako LE--faktory. Je známy rad testov, ktoré tentofakt zúžitkovali a najviac sa rozšířili aglu-tinačné testy. Vačšinou však tieto testy ne-spíňajú nároky praxe, najma pokia! ide ocitlivost. Aglutinačné testy preferuji! lenurčitú část protilátok a bývajú pozitivně v14 až 86 % sér, podlá koncentrácie proti-látok, ktoré tieto obsahujú Chapman J. C.,Amer. j. med. Technol. 42, 154 až 157, 1978.V testoch, ktoré sú obchodné dostupné sapoužívajú latexové častíce, potiahnuté de-oxyribonukleoproteínom: firemná literatúraHyland, Lederle, Fisher.
Deoxyribonuklooproteín je zložka chro-matínu a na jeho přípravu sa využívá jehonerozpustnost pri fyziologickej iónovej si-le, t. j. pri koncentrácii NaCl 0,15 mol.. dm-3 a relativná rozpustnost alebo dis-pergovatelnosť pri nízkej alebo vyššej ió-novej sile. Nedosjtatok tohoto klasickéhopostupu je tendencia deoxyribonukleopro-teínu vytvárat iréverzibilne nerozpustnýgél, a to už pri relativné nízkej koncentrá-cii, nad 0,8 g . dm-3 deoxyribonukleoproteí-nu, ďalej pri prezrážaní alkoholom alebosofami, a tiež keď sa predčistený materiálnechá dlho stát a homogenizácia nie je dostintenzívna. To sa v súčasnosti obchádza nazáklade poznatku, že chromatín je zlože-ný z menších podjednotiek — nukleozó-mov — a tieto je možné získat na rozdielod predchádzajúcich mechanických postu-pov, působením enzýmov, ako napr. mikro-kokovej nukleázy alebo extrakciou při se-lektívnej koncentrácii niektorých solí NollM., Thomas J. O., Kornberg R., Science 187, 1203, 1975; Fenske a spol., Acta med. biol.germ. 39, 343 až 354, 1980. Tieto postupysú zložité, nákladné a výtažky bývajú ma-lé, menšie ako 25 % východzieho materiá-lu. Takéto přípravky slúžia hlavně pre ba-datelské ciele.
Uvedené nevýhody odstraňuje sposob pří-pravy prostriedku pre viazanie protilátok,tvořeného deoxyribonukleoproteínom, priktorého príprave sa vychádza z tefaciehotýmusu, jadier kuřácích erytrocytov aleboz materiálu s hmotnostným zlomkom jadiernad 0,5, vyčištěného opakovanou extrak-ciou fyziologickým roztokom. Podstata vy-nálezu spočívá v zbotnaní zvyšku a autolý-ze vo vodě alebo roztoku chloridu sodné-ho v koncentrácii do 0,01 mol. dm-3 počas8—48 hodin, pri teplote 0 až 10 °C a v 2až 5-násobnom podrobení vibračnému účin-ku s frekvenciou 10 až 30 kHz pri výkone50 až 1300 W při teplote 0 až 10 °C. Získa-ný materiál sa vysuší mrazovou subllmá-ciou a získá sa stabilný preparát vo forměbielej, páperovitej látky, dobré rozpustnejv roztokoch solí i vo vodě. Použitelnosttakto připraveného prostriedku na viaza-nie protilátok, LE-faktorov, jo možná na zá-klade poznatku, že aj napriek enzýmovej avibračinej degradácii a zníženiu molekulo-vej hmotnosti si zachovává potřebné anti-'génne determinanty. Výhodou tohoto sposobu přípravy je hlav-ně to, že sa dá uskutočniť jednoducho anenákladné. V laboratórtnych podmienkachsa dá připravit také množstvo substancie,aké je potřebné na jej priemyselné využi-tie. K důkazu účinku slúži nasledujúca ta-bulka, udáyajúca výsledky testovania sérchorých s pozitívnym LE-bumkovým testom,'ktorý sa v tomto případe může považovatza referenčný. Analýzy sa vykonali testova-cími súpravami Hyland, Lederle a pomocouprostriedku podfa vynálezu, enzýmovou imu-noanafýzou na detekciu protilátok proti de-oxyribonukleoproteínu triedy IgG (IgG——ainti—DNPj.
Tabulka
Test Počet analyzovaných vzoriek Pozitívnych vzoriek počet % Hyland Lederle 76 36 47,4 IgG—anti—DNP 94 76 80,9 podlá vynálezu 157 138 87,9
Tieto výsledky dokazujú, že prostriedokpodlá vynálezu je najúčinnejší v porovna-ní s referenčným testom, v zmysle zhody vpozitivitě oboch testov. Příprava deoxyribonukleoproteínu známý-mi postupmi vedle k malým výťažkom pro- duktu, ktorý je limitované rozpustný. Běž-ný postup spočívá v homogenizácii tkani-va, alebo izolovaných jadier v štandardnomsolinom roztoku 0,15 mol. dm-3 NaCl, čo saopakuje dotiaf, kým sa už neextrahuje sig-nifikantně množstvo proteinu. Nerozpustný
Claims (2)
- zvyšok isa potom rýchlo homogenizuje v ti-síiC-násobnom přebytku slabého solného roz-toku, 0,015 mol. dim-3 NaCl a menej a cen-trifuguje pri vysokom zrýchlsaí 15 000 . ga viac. Typicky sa z 10 g íeíacieho týmusuvyťaží 0,20' až 0,50 g deoxyribonukleopro-teínu. Postup pódia vynálezu je jednoduchý apřitom účinnější. Poskytuje vačšie množst-vo isubstancie, s výhodnějšími vlastnosťami.Postup přípravy vynálezu jo ďalej objasně-ný ma príkladoch, ktoré ale jeho rozsah anineobmedzujú ani nevyčerpávajú. Přikladl 10 g telacieho týmusu, ktorý bol predbež-ne dokladné extrahovaný štandardným sol-ným, roztokom, obsahujúcim 0,15 mol. dm-3NaCl, sa dispergoval pomocou kuchyňské-ho mixéru v 250 ml 0,01 mol. dm-3 NaCl agél sa nechal stát v chlade pri 5 °C 10 až18 hod., kým nemabotnal. Gél sa potom dis-pergoval pomocou injekčnej striekačky strubičkou 0 2,0 až 2,5 mm a podrobil so-nikovaniu pri výkone 100 W a frekvencii20 kHz. Teplota nesmie vystúpiť na 10 ’C.Po scentrifugovaní pri 15 000 g počas 1 hod,a 5 °C sa sediment podrobil rovnakému so-nikovaniu opakované, až sa v sedimente ne-nachádzaia deoxyribonukleová kyselina. Ex-trakty sa zlyofilizovali a vyťazilo sa takspolu 1,7 g preparátu. Tento sa dobré roz-pusta vo vodě alebo v solných roztokoch.Roztoky majú charakteristické spektrum vultrafialové] oblasti, kde vykazujú Amax =— 257 nm a Amin = 237 inm. Poměr absor-bancií pri 260 a 280 nm je 1,3 až 1,5 v šty-roch frakiciách a hmotnostný poměr pro-teín/DNA bol 1,0 až 1,6. Na přípravu je výhodné použit tkanivábohaté na obsah deoxyribonukleoproteínua vedla týmusov sú osobitne výhodné ajjadrá z kuřácích erytrocytov, ktoré sa da-jú 1'ahko připravit v čistom stave. Příklad
- 2 . Asi 150 ml kuracej krvi sa premylo 4 rá-zy fyziologickým roztokom a podrobilo lý-že v 0,01 rool.dim-3 CaCl2. Jadrá sa zachy-tili scentrifugovaním lyzátu pri nízkých ob-rátkách a premyli sa štandardným sofnýmroztokom až do zjavného odstránenia he- moglobinu. Jadrá sa narušili dvojnásobnýmzmrazením a rozmražením a podrobili sazbotnaniu v 100 ml vody počas 18 hod. Natosa dispergovali a podrobili sonlkovaniu pri100 W a 20 kHz pri tepláte do 10 °C vždy 1min, načo sa stočili pri 15 000 g 1 hod. a 5stupňov Celsia a zvyšok sa opat podrobilsonikovaniu, Po 5 sonikáciách sa prakticky.všetok nukleoproteín jadíer previedol doroztoku a po mrazovej sublimácii sa získa-lo 1,35 g 'bielej páperoviíej látky. Rozpúšťalsa dobré vo vodě i v solných roztokoch scharakteristickým, spektrom v ultrafialové]oblasti. Poměr absorbancií pri 260 a 280 nmbol 1,05 až 1,4 a hmotnostný poměr pro-tein,/DNA 1,0 až 1,7. V priebehu niekofkých dní sa dá připra-vit týmto postupom také množstvo substan-cie, ktoré vystačí pre priemyslové zhoto-venie testovacích súprav na screening sy-stémového lupus erytíhematosus. Prosíriedokje dlhcdobe 'skladovatelný v chladničke priteplote pod 10 °C. Preparáty skladované 2roky sa dali použit v teste. Před přípravoutestovacích skúmaviek alebo mikrodosieksa prosíriedok rozpustí vo vodě a jeho kon-centráci-a sa nastaví výhodné tak, že v sol-nom roztoku 0,15 mol. dm“3 NaCl a 0,015mol. dm-3 trinátriumcitrát dává absorban-ciu pri 260 nm 0,5. Skúmavky, mikrodosky,všeobecná pevná fáza, sú výhodné z poly-styrénu a naplnia sa roztokom prostriedkutak, aby sa získala dostatočná aktívna plo-cha. Pláštenle, aktivovanie pevnej fázy prebeh-ne za 15 až 18 hod. pri 5 °C, načo sa roz-tok odsaje a pevná fáza sa opakované pre-myje vodou. Testovanie sér sa uskuteční na-plněním vhodné riedeného séra, ktoré sapo inkubácii odstraní a pevná fáza sa opatdokladné propláchne. Viazané protilátky sahapokon odhalia inkubáciou, pomocou ainti-globulínového konjugátu, označeného vý-hodné enzýmom, ktorého farebný produktje úměrný koncentrácii viazaného konjugá-tu a tým aj protilátky. Rozsah reaktivity tes-tovaného' séra sa može výhodné porovnats reaktivitami pozitívneho a negativného re-ferenčného séra. Využitie prostriedku v en-zýmoimunologickom teste umožňuje speci-fický a citlivý screeining chorých so systé-movým lupus erythematosus, s možnoisťoukvantitativného určemia protilátek v roz-nych imunoglobulínových triedach. PREDMET Sposob přípravy prostriedku pre viazanieprotilátek tvořeného dooxyribonukleopro-teínom, pri ktorého přípravě sa vychádza ztelacieho týmusu, jadier kuřácích erytrocy-itov alebo z materiálu s hmotnostným zlom-komi jadier ina 0,5, vyčištěného opakovanouextrakciou fyziologickým roztokom, vyzna-čujúci sa tým, že sa predčistený zvyšok po- vynAlezu drobí zbotnaniu a autolýze vo vodě aleboroztoku chloridu 'sodného v koncentrácii do0,01 mol. dm-3 počas 8 až 48 hodin, při tep-lotě 0 až 10 °C a vibračnom účinku s frek-venciou 10 až 30 kHz pri výkone 50 až 100W pri teplote 0 až 10 °C, ktorý sa opakuje2- až 5krát.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS82194A CS231763B1 (cs) | 1982-01-11 | 1982-01-11 | Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS82194A CS231763B1 (cs) | 1982-01-11 | 1982-01-11 | Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS19482A1 CS19482A1 (en) | 1984-05-14 |
| CS231763B1 true CS231763B1 (cs) | 1984-12-14 |
Family
ID=5333662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS82194A CS231763B1 (cs) | 1982-01-11 | 1982-01-11 | Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS231763B1 (cs) |
-
1982
- 1982-01-11 CS CS82194A patent/CS231763B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS19482A1 (en) | 1984-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Margolis | The kaolin clotting time: a rapid one-stage method for diagnosis of coagulation defects | |
| US4433059A (en) | Double antibody conjugate | |
| DE68907372T2 (de) | Diagnostischer Satz und Verfahren zur schnellen Bestimmung von Antikörpern. | |
| Zabriskie et al. | Lymphocytic responses to streptococcal antigens in glomerulonephritic patients | |
| EP0001223A2 (de) | Mit einer Polyhydroxyverbindung beschichteten Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Latex, immunologisches Reagenz enthaltend diesen Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Reagenzes, Verwendung dieses Reagenzes, Bestimmungsverfahren unter Verwendung dieses Reagenzes und Reagenziengarnitur enthaltend dieses Reagenz. | |
| US4210622A (en) | Kit for assay of immune complexes | |
| PT88615B (pt) | Equipamento e metodo de dosagem imunometrica aplicavel a celulas completas | |
| IE42031B1 (en) | Detection of hepatitis b surface antigen by latex agglutination | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| JP4105768B2 (ja) | タンパク質の抽出方法 | |
| JPH10160734A (ja) | イムノアッセイ用較正／対照用配合物 | |
| EP0079145B1 (en) | Reagent for use in diagnosis of syphilis and preparation thereof | |
| Nishimaki et al. | Studies on immune complexes in rheumatoid arthritis | |
| CS231763B1 (cs) | Sposob přípravy prostriedku pre viazanie protilátek | |
| US4301142A (en) | Method and reagent for the detection of infectious mononucleosis and preparation thereof | |
| AU625344B2 (en) | Chlamydia half-sandwich immunoassay | |
| JPH1123573A (ja) | 免疫学的測定方法 | |
| US4296024A (en) | Human immune serum globulin with high hepatitis A antibody titer | |
| Lane et al. | Serological and biochemical analysis of the PlA1 alloantigen of human platelets | |
| US3449488A (en) | Immunology | |
| JPH0674956A (ja) | 抗体測定用試薬 | |
| Amadi et al. | Thyroid hormone: a “prime suspect” in human immuno deficiency virus (hiv/aids) patients? | |
| DE3116882A1 (de) | Stabile form des zur hepatitis b gehoerenden delta-antigens und verfahren zu seiner isolierung | |
| US4228148A (en) | Heterophil antibody differentiation (HAD) test | |
| AU627452B2 (en) | A method of preparing an analytical element for the determination of anti-nuclear antibodies |