CS244963B1 - Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 produkujůci chlórtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii - Google Patents

Abstract

Infekcia kultúry kmeňa Streptomyces aureofaciens produkujúceho chlórtetracyklín aktinofágom má za následek lýzu citlivej populácie kmeňa. Lýza nadobúda rozsah od čiastočného rozpadu biomasy mycélia až po jeho úplný zánik. Miere poškodenia produkčného mycélia odpovedajú poruchy fermentačného procesu a nižšia produkcie antibiotika v porovnaní s neinfikovanou kultúrou; pri úplnej lýze je kultúra bez produkcie antibiotika. Kmeň Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 je odolný voči aktinofágovi a pri infekcii kultúry tohto kmeňa nedochádza k lýze mycélia a nasledujúcim nežiadúcim změnám vo fermentačnom procese

Description

HOFBAUER HENRICH ing., BANSKÁ BYSTRICA; KRUMPHANZL VLADIMÍR prof. ing. DrSc., PRAHA; KÚDELA OTAKAR RNDr. CSC., BRATISLAVA; ŽIGOVÁ E VELÍ NA ing., BANSKÁ BYSTRICA,· BÁRTA MIROSLAV RNDr., PRAHA; MARTINCEK LUBOMÍR ing., BANSKÁ BYSTRICA/ VYSKOČIL PAVEL ing., PRAHA; BULLA JÁN ing., BANSKÁ BYSTRICA,'ETTLER PETR ing. CSc., PRAHA (54) Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 produkujůci chlórtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii 1 2

Infekcia kultúry kmeňa Streptomyces aureofaciens produkujúceho chlórtetracyklín aktinofágom má za následek lýzu citlivej populácie kmeňa. Lýza nadobúda rozsah od čiastočného rozpadu biomasy mycélia až po jeho· úplný zánik. Miere poškodenia produkčného mycélia odpovedajú poruchy fermentačného procesu a nižšia produkcie antibiotika v porovnaní s neinfikovanou kultúrou; pri úplnej lýze je kultura bez produkcie antibiotika.

Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 je odolný voči aktinofágovi a pri infekcii kultúry tohto kmeňa nedochádza k lýze mycélia a nasledujúcim nežiadúcim změnám vo fermentačnom procese.

Vynález sa týká kmeňa mikroorganizmu Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 (intéřrté označenie 5/211} produkujúceho antibiotikum chlórtetracyklín a· vyznačujúceho sa odolnosťou voči fágovej infekcii.

V priebehu priemyselnej výroby chlórtetracyklínu sa jeho produkcia neustále zvyšuje. Vyššia produkcia sa dosahuje buď rozšiřováním výrbbných fermentačných prevádzok alebo zvyšováním výtažnosti fermentácie. Druhý sposob nevyžaduje, na rozdiel od prvého, významné investičně náklady. Je založený na lepšej produkčnej schopnosti ikmeňa používaného pre biosyntézu, alebo· na lepších fermentačných podmienkach vyplývajúcich z dokonalejšieho riadenia fermentácie. Pre mikrobiálnu priemyselnú výrobu představuje velké nebezpečie možnost fágovej infekcie, ktorej dosledkom je zastavenie výroby na vetmi dlhú dobu. Závédenie mikrobiálnych kmeňov, odolných voči spósobeniu tága, umožňuje výrobu antibiotika i v přítomnosti fagových partikulí, ktoré sa běžnými spósobmi sterilizácie nedajú z výrobného zariadenia odstrániť.

Kmeň Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 bol získaný z kmeňa Streptomyces aureofaciens CM 3 493 nevoděním spontánnej rezistencie .k fágovi, t. j. pěstováním kmeňa. Streptomyces aureofaciens CCM 3 493 v přítomnosti fága a nasledujúcou selekciou odolného mikroorganizmu z fermentačnej půdy obsahujúcej prevažne zlyzované mycélium. Spory získaného kmeňa bolí vysiate na Petriho misku so sporulačnou půdou obsahujúcou fága a, na Petriho misku so sporulačnou půdou bez fága. Zhodný nárast a sporulácia dokázali odolnost kmeňa voči fágovej infekcii.

Týmto sposobom bol získaný kmeň, na ktorý je uplatňovaný patentový nárok.

Hlavným znakom kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM je jeho odolnost voči fágovej infekcii. Tvar kolonií pri monospórovom rozseve, ich pigmentácia a farba spór sú rovnaké ako u východzieho kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3 493. Rast kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 je na stuzených i kvapalných půdách pomatší ako u východzieho kmeňa. Tak isto sporulácia nastupuje pozdejšie a kmeň Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 je citlivější na dodržanie podmienok sporulácie. Produkčná schopnost kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 je o 10 až 15 °/o nižšia v porovnaní s kmeňom Streptomyces aureofaciens CCM 3 493.

Příklad 1

Podlá doterajšieho spůsobu fermentácie kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3 493 sa vegetativně inokulum připravuje submerzne v 500 ml varných baňkách so 60 ml inokulačnej půdy, ktorá obsahuje základné živiny, a to zdroj uhlíka sacharózu, zdroje dusíka kukuřičný extrakt, síran amonný a sójovú muku a soli. Půda na přípravu vegetatívneho inoikula sa naočkuje sporami asi z jednej třetiny kultúry na šikmom agare a inkubuje sa na rotačnom trepacom stroji 22 hodin. Takto připraveným vegetatívnym inokulom naočkujú sa fermentačné baňky objemu 500 ml so 60 ml produkčnej živnej půdy. Zdrojom uhlíka je sacharóza, zdrojom dusíka je kukuřičný extrakt, sójová mučka a amónna sol’. Půda ďalej obsahuje uhličitan vápenatý a dalšie soli. Na začiatku fermentácie sa do půdy přidává sterilný roztok izotiokyanátu. Příprava vegetatívneho inokula a vlastná fermentácia prebiehajú na rotačnom trepacom stroji pri 230 o/min“¹, výstřednosti 25 mm a teplote 29 °C. Fermentácia trvá 4 dni, kedy sa dosahuje maximálna produkcia antibiotika. Vyššie uvedeným postupom sa dosahujú produkcie 5 500 až 6 000 (Wg/ml s priemernou hodnotou 5 737 fig chlórtetracyklínu/ml půdy odpovedajúcou indexu 100 °/o.

Příklad 2

Podta doterajšieho spůsobu fermentácie kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3 493 v baňkách v příklade 1 sú vegetativně inokulum a z něho očkovaná produkčná půda infikované aktinofágom. Fág lyžuje buňky mycélia citlivej populácie produkčného kmeňa. Za týchto podmienok sú dosahované produkcie 0 až 4 000 ^ug/ml s priemernou produkciou produkujúcich Ikultúr 3 626 ,ug chlórtetracyklínu/ml půdy odpovedajúcou indexu 63 °/o.

Příklad 3

Claims (1)

1. PREDMET VYNALEZU

   Kmeň Streptomyces aureofaciens CCM 3 766 produkujúci chlórtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii.