CS246221B1

CS246221B1 - A method for treating liquid chromatography columns

Info

Publication number: CS246221B1
Application number: CS531684A
Authority: CS
Inventors: Radim Vespalec; Jarmil Viska; Alois Brzobohaty
Original assignee: Radim Vespalec; Jarmil Viska; Alois Brzobohaty
Priority date: 1984-07-09
Filing date: 1984-07-09
Publication date: 1986-10-16

Abstract

Řešení se týká úpravy lože adsorbentu v chromatografických kolonách, kterou se minimalizuje rozmývání zón separovaných látek. Způsob úpravy kolon pro kapalinovou chromatografii se provádí tak, že se na adsorbent v koloně působí zásadami nebo kyselinami a/nebo jejich solemi, jako jsou například hydroxid amonný, tetraalkylamoniumhydroxid, kyselina chloristá, kyselina pikrová, alkylsulfonová a arylsulfonové kyseliny s výjimkou povrchově aktivních látek a jejich sodné, draselné nebo amonné soli, rozpuštěnými v anorganických rozpouštědlech nebo ve směsi organických rozpouštědel a vody průtokem tohoto roztoku. Výsledkem je rovnoměrnější a hutnější uspořádání částic v loži adsorbentu.The solution relates to the treatment of the adsorbent bed in chromatographic columns, which minimizes the washing out of the zones of separated substances. The method of treating columns for liquid chromatography is carried out by treating the adsorbent in the column with bases or acids and/or their salts, such as ammonium hydroxide, tetraalkylammonium hydroxide, perchloric acid, picric acid, alkylsulfonic and arylsulfonic acids with the exception of surfactants and their sodium, potassium or ammonium salts, dissolved in inorganic solvents or in a mixture of organic solvents and water by the flow of this solution. The result is a more uniform and denser arrangement of particles in the adsorbent bed.

Description

Vynález se týká stabilizace lože adsorbentu v chromatografických kolonách, kterou se mini malizuje rozmývání zón separovaných látek.The invention relates to the stabilization of the adsorbent bed in chromatographic columns, which minimizes the washing of the separated material zones.

Klíčový význam v kapalinové chromatografii má kolona s adsorbentem, na níž probíhá dělení směsi látek. Na její kvalitě primárně závisí dělicí účinek a tím celý výsledek chromatografické analýzy. Pro získání vysoce dělící účinnosti musí být adsorbent uložen v koloně velmi rovnoměrně a hutně. Rovnoměrnost uložení částic adsorbentu zajišťuje rovnoměrný průtok mobilní fáze průřezem kolony a nedochází k rozmývání zón látek dělící se směsi, které se projevuje v poklesu dělicí účinnosti kolony. Hutné uspořádání částic adsorbentu v koloně zajišťuje' objemovou stálost lože adsorbentu a nevytvářejí se v něm během používání kolony dutiny, tzv. mrtvé prostory, v nichž dochází k intenzivnímu rozmytí zón látek.The adsorbent column separating the mixture of substances is of key importance in liquid chromatography. The separation effect and thus the whole result of the chromatographic analysis depend primarily on its quality. To obtain a high separation efficiency, the adsorbent must be packed very uniformly and densely in the column. The uniformity of the adsorbent particle deposit ensures a uniform flow of the mobile phase through the cross-section of the column and there is no washing out of the zones of the separating material, which results in a decrease in the separating efficiency of the column. The dense arrangement of the adsorbent particles in the column ensures the bulk stability of the adsorbent bed and does not create cavities, so-called dead spots, in which the zones of material are intensively washed during use of the column.

Jako adsorbentů se v kapalinové chromatografii používá silikagelu, kysličníku hlinitého a celé řady modifikovaných silikagelů s chemicky vázanými zbytky, jako např. alkyly o počtu uhlíkových atomů 1 až 22, fenyl nebo jsou to uhlovodíkové zbytky s různými funkčními skupinami, např. se skupinou nitrilovou, hydroxylovou primární, sekundární, terciární nebo kvartérní aminovou skupinou nebo skupinou sulfokyselinovou, fosfátovou či karboxylovou, eventuálně se skupinou opticky aktivní nebo afitivní.The adsorbents used in liquid chromatography are silica gel, alumina and a variety of modified silica gel with chemically bonded residues such as alkyls of 1 to 22 carbon atoms, phenyl or hydrocarbon residues with different functional groups, such as nitrile, a hydroxyl primary, secondary, tertiary or quaternary amine group or a sulfoacid, phosphate or carboxylic acid group, optionally with an optically active or affinity group.

Tyto adsorbenty mají nepravidelný nebo sférický tvar částic, jsou jemně zrněné, úzce vytříděné a jejich střední velikost Částic je většinou v rozmezí 3 až 25 ^um, ve vysoce účinné kapalinové chromatografii 3 až 12 ^um.These adsorbents have an irregular or spherical particle shape, are finely divided, narrowly screened, and have a mean particle size of usually in the range of 3 to 25 µm, in high performance liquid chromatography 3 to 12 µm.

Kolony, do nichž se adsorbenty plní, jsou ocelové, ocelové s vnitřním skleněným povlakem, skleněné nebo plastové trubice vnitřního průměru do 8 mm pro analytické účely a více než 8 mm pro preparativní použití. Jejich délka je zpravidla do 3 do 30 cm, nejčastěji 10 až 25 cm, mohou však být i kratší či delší.The columns into which the adsorbents are packed are steel, glass-coated steel, glass or plastic tubes with an internal diameter of up to 8 mm for analytical purposes and more than 8 mm for preparative use. Their length is usually up to 3 to 30 cm, most often 10 to 25 cm, but may be shorter or longer.

Je známo několik způsobů plnění chromatografických kolon adsorbenty s mnoha nuancemi ve volbě kapaliny pro zavádění adsorbentu ve formě suspenze do kolony, tj. suspendační kapaliny, a v tlakovém nebo průtokovém režimu plnění. Podstatně méně pozornosti je věnováno druhu kapaliny, jíž se používá pro vytlačení suspenze adsorbentu ze zásobníku nebo předkolony do chromatografické kolony, jedná se o tzv. tlačnou kapalinu, a kapalině kondicionační, upravující sorpční aktivitu adsorbentu.Several methods of loading chromatographic columns with many nuances of adsorbents are known in the choice of the liquid for introducing the adsorbent in the form of a suspension into the column, i.e., the suspending liquid, and in the pressure or flow mode of loading. Considerably less attention is paid to the type of liquid used to push the adsorbent suspension from the reservoir or precolumn into the chromatography column, the so-called push liquid, and the conditioning liquid, which adjusts the adsorbent sorption activity.

Je tomu tak proto, že suspendační kapalina může podporovat nebo potlačovat shlukování nebo dispergaci zrn adsorbentu a stupeň odmíšení zrn podle jejich velikosti. Tyto účinky pak určují hutnost naplnění kolony, rovnoměrnost odporu lože v průměru i podélné ose kolony a rovnoměrnost průtoku mobilní fáze kolonou. Důraz na dodržení optimálních hodnot tlaku a průtoku suspenze -adsorbentu pramení z všeobecně rozšířeného názoru, že právě okamžik ukládání částic adsorbentu do lože je rozhodující pro rovnoměrné a hutné naplnění kolony.This is because the suspending liquid can promote or suppress the agglomeration or dispersion of the adsorbent grains and the degree of grain separation according to their size. These effects then determine the packing density of the column, uniformity of bed resistance in the diameter and longitudinal axis of the column, and uniformity of flow of the mobile phase through the column. The emphasis on maintaining optimum pressure and flow rates of the adsorbent suspension stems from the widespread belief that the moment of depositing adsorbent particles in the bed is crucial for even and dense column loading.

Podle vlastností suspendační kapaliny se popsané způsoby plnění chromatografických kolon dělí na metody isodenzitní, viskozitní, nízkov.iskozitní nebo plnění ze stabilizované vodné suspenze. Isodenzitní metoda používá organických rozpouštědel o hustotě shodné nebo blízké hustotě adsorbentu, aby bylo zabráněno jeho sedimentaci. Jsou to např. různé směsi tetrabromethanu, chloridu uhličitého, dibromethanu, tetrachlorethylenu a dioxanu.Depending on the properties of the suspending liquid, the methods described for the filling of the chromatographic columns are divided into isodensity, viscosity, low viscosity or stabilized aqueous suspension methods. The isodensity method uses organic solvents with a density equal to or close to the density of the adsorbent to prevent sedimentation thereof. These include, for example, various mixtures of tetrabromoethane, carbon tetrachloride, dibromoethane, tetrachlorethylene and dioxane.

Při viskozitní metodě se volí organická rozpouštědla s velkou viskozitou, která velmi zpomaluje sedimentaci částic adsorbentu. Jsou to např. směsi cyklohexanolu s alkoholy, směsi parafinového oleje s uhlovodíky nebo ethylonglykolu s alkoholy.In the viscosity method, organic solvents of high viscosity are chosen which greatly retard sedimentation of the adsorbent particles. They are, for example, mixtures of cyclohexanol with alcohols, mixtures of paraffin oil with hydrocarbons or ethylonglycol with alcohols.

Nízkoviskozitní metoda využívá organických rozpouštědel o malé viskositě, jako např. acetonu, nižších kapalných alifatických uhlovodíků, tetrahydrofuranu a dioxanu, jednotlivě nebo ve vzájemných směsích, případně s přídavkem vody. Aby se zabránilo sedimentaci, při níž dochází k odmíšení částic adsorbentu, musí se kolona plnit rychle nebo se musí sus3 penze v zásobníku míchat, a to buč mechanickými míchadly, nebo při plnění zdola nahoru, proudem tlačné kapaliny. K plnění kolony stabilizovanou vodnou suspenzí adsorbentu se jako stabilizátorů používá např. amoniaku nebo fosforečnanového pufru.The low-viscosity method utilizes low-viscosity organic solvents such as acetone, lower liquid aliphatic hydrocarbons, tetrahydrofuran and dioxane, individually or in admixture with each other, optionally with the addition of water. In order to avoid sedimentation in which the adsorbent particles are separated, the column must be packed rapidly or the sus3 of the pension in the container must be mixed, either by mechanical stirrers or from bottom to top, with a jet of pusher liquid. Ammonia or phosphate buffer are used as stabilizers to fill the column with a stabilized aqueous adsorbent suspension.

Při isodenzitní a viskozitní metodě plnění kolon se používá tlačná kapalina odlišná od suspendační kapaliny, jako např. nižších alkoholů, vody, tetrahydrofuranu, chloroformu, methylenchloridu, nižších kapalných alifatických uhlovodíků, samostatně nebo ve směsích. U nízkoviskozitní metody plnění kolon je tlačná kapalina zpravidla shodná s kapalinou suspendační.In the isodensity and viscosity column loading method, a pressurizing liquid other than a suspending liquid such as lower alcohols, water, tetrahydrofuran, chloroform, methylene chloride, lower aliphatic hydrocarbons, alone or in mixtures, is used. In the low-viscosity column filling method, the pushing fluid is generally the same as the suspending fluid.

Nevýhodou těchto způsobů plnění kolon pro kapalinovou chromatografii je kolísavá hodnota dělicí účinnosti naplněných kolon, způsobená špatnou reprodukovatelností vytváření rovnoměrného a hutného uspořádání částic v loži adsorbentu. Jejím důsledkem je pak i nedostatečná objemová stálost náplně kolony při jejím používání. Dále to jsou nároky na dodržení tlakového a průtokového režimu při plnění kolony.' Přestože dodatečné sedání lože adsorbentu v koloně je jevem velmi častým, jeho příčina byla dosud hledána pouze ve vlastnostech suspendační kapaliny a v působení tlaku, rychlosti a doby průtoku suspendační a tlačné kapaliny.A disadvantage of these liquid chromatography column packing methods is the varying separation efficiency of the packed columns, due to the poor reproducibility of the formation of a uniform and dense particle arrangement in the adsorbent bed. This results in insufficient volume stability of the column packing during its use. Further, there are requirements for maintaining the pressure and flow mode when filling the column. Although post-settling of the adsorbent bed in the column is a very common phenomenon, its cause has so far been sought solely in the properties of the suspending liquid and under the influence of pressure, velocity and flow time of the suspending and pushing liquid.

Způsob úpravy kolon pro kapalinovou chromatografii podle vynálezu^xse vyznačuje tím, že se na adsorbent, kterým je silikagel, silikagel s chemicky vázanými organickými skupinami nebo kysličník hlinitý, působí v chromatografické koloně zásadami nebo kyselinami a/nebo jejich solemi, jako jsou například hydroxid amonný, tetraalkylamonium hydroxidu, kyselina chloristá, kyselina pikrová, alkylsulfonové kyseliny o počtu uhlíkových atomů 1 až 8 a arylsulfonové kyseliny o počtu uhlíkových atomů 6 až 10 s výjimkou povrchově aktivních látek, a jejich sodné, draselné nebo amonné soli, rozpuštěnými v organických rozpouštědlech typu alkoholů, ketonů, aldehydů, esterů nebo kyanosloučenin, nebo ve směsi těchto organických rozpouštědel s vodou do obsahu vody 90 % hmotnostních.The method of treating the liquid chromatography columns of the invention ^x is characterized in that the adsorbent, which is silica gel, silica gel with chemically bonded organic groups or aluminum oxide, is treated in the chromatography column with bases or acids and / or their salts such as ammonium hydroxide. , tetraalkylammonium hydroxide, perchloric acid, picric acid, alkylsulphonic acids having 1 to 8 carbon atoms and arylsulphonic acids having 6 to 10 carbon atoms, except for surfactants, and their sodium, potassium or ammonium salts, dissolved in organic solvents such as alcohols , ketones, aldehydes, esters or cyano compounds, or in a mixture of these organic solvents with water to a water content of 90% by weight.

Působením zásad, kyselin a solí, rozpuštěných samostatně nebo ve směsích v organických rozpouštědlech nebo ve vodně-organických rozpouštědlech, dochází k většímu vzájemnému přiblížení částic v loži adsorbentu. Pravděpodobně eliminací elektrického náboje částic adsorbentu se zruší síly mezi částicemi náplně kolony. Výsledkem tohoto působení je rovnoměrnější a hutnější uspořádání částic v loži adsorbentu. Větší rovnoměrnost uložení částic se příznivě projevuje v poměrně vysoké, asi devadesátiprocentní, výtěžnosti kolon s dobrými dělicími vlastnostmi .The action of bases, acids and salts, dissolved alone or in mixtures in organic solvents or in aqueous-organic solvents, results in greater approximation of the particles in the adsorbent bed. Probably by eliminating the electrical charge of the adsorbent particles, the forces between the particles of the packed column are eliminated. This results in a more uniform and dense arrangement of the particles in the adsorbent bed. Greater uniformity of particle deposition is favorably reflected in the relatively high, about ninety percent recovery of the columns with good separating properties.

Vyšší hutnost lože adsorbentu způsobuje větší objemovou stálost náplně kolony při jejím zatěžování průtokem mobilní fáze libovolného složení během používání kolony v chromatografických analýzách. Sloupec adsorbentu v koloně neklesá a nevytvářejí se v něm mrtvé prostory. Zhutňování náplně kolony při působení kyselin a solí podle vynálezu je patrné z kontrakce sloupce adsorbentu, projevující se snižováním jeho horní úrovně. Zhutnění potvrzuje i vyšší tuhost náplně kolony při jejím mechanickém namáhání.The higher bed density of the adsorbent results in greater bulk stability of the column packing as it is loaded by the mobile phase flow of any composition during column use in chromatographic analyzes. The adsorbent column in the column does not drop and does not form dead spaces. The compacting of the column packing under the action of acids and salts according to the invention is evident from the contraction of the adsorbent column resulting in a decrease in its upper level. The compaction is also confirmed by the higher rigidity of the column packing under mechanical stress.

Při úpravě chromatografických kolon podle vynálezu není podstatný druh suspendační a tlačné kapaliny, tlakový a průtokový režim použitý při plnění kolony. Pro úpravu je možno vzít kolonu ve stadiu plnění po vtlačení suspenze adsorbentu do kolony, kdy tlačnou kapalinou je roztok kyselina solí podle vynálezu, dále kolonu, kterou již protekla tlačná kapalina nebo kolonu v libovolném stadiu její kondicionace, tedy i kolonu s procesem plnění ukončeným, například kolonu komerční. Jedinou podmínkou, která musí být splněna, je mísitelnost kapaliny v koloně s roztokem použitým k stabilizaci lože adsorbentu podle vynálezu.In the treatment of the chromatographic columns according to the invention, the type of suspending and pushing liquid, the pressure and flow modes used in the column filling are not essential. For the treatment, the column can be taken in the filling stage after the adsorbent suspension has been pushed into the column, where the pushing liquid is a salt acid solution according to the invention, a column which has already passed through the pushing liquid or column at any stage of its conditioning. such as a commercial column. The only condition that must be met is the miscibility of the liquid in the column with the solution used to stabilize the adsorbent bed of the invention.

Pro dosažení účinku na náplň kolony podle vynálezu postačuje zpravidla koncentrace kyselin, solí nebo jejich směsí 10 až 10 % hmotnostních v použitém roztoku. Pokud se použije jako rozpouštědla směs nepolárního a polárního organického rozpouštědla nebo směs polárního organického rozpouštědla s vodou, pak je třeba jejich vzájemný poměr volit takový, aby výsledný roztok zásad, kyselin a solí byl homogenní a nedocházelo k tvorbě dvoufázového systému. Nejčastěji vyhovují směsi nízkomolekulárních alkoholů a vody v poměru 50:1 až 1:20.As a rule, a concentration of 10 to 10% by weight of the acids, salts or mixtures thereof in the solution used is sufficient to obtain an effect on the column load according to the invention. If a mixture of a non-polar and a polar organic solvent or a mixture of a polar organic solvent with water is used as the solvent, their ratio to each other must be chosen such that the resulting solution of bases, acids and salts is homogeneous and does not form a two-phase system. Mixtures of low molecular weight alcohols and water in a ratio of 50: 1 to 1:20 are most suitable.

Příklad 1Example 1

Kovová kolona rozměrů 4x250 mm byla naplněna silikagelem o střední velikosti Částic 10,0 s chemicky vázanými dimethylsilylovými skupinami za použití suspendační kapaliny cyklohexanol-methanol v poměru 95:5. Lože adsorbentu bylo stabilizováno průtokem tlačné kapaliny, kterou byl roztok 0,05 g chloristanu sodného v 250 ml methanolu. Po promytí kolony mobilní fází, jíž byla směs methanol-voda v poměru 60 : 40, byla testována. Pro anisol (k = 2,5) měla dělicí účinnost 10 700 teoretických pater, což odpovídá výšce redukovaného patra h = 2,3. Stejným způsobem připravená kolona bez použití chloristanu sodného měla dělicí účinnost jen 4 030 teoretických pater a h = 6,2.A 4x250 mm metal column was packed with medium particle size silica gel 10.0 with chemically bonded dimethylsilyl groups using a 95: 5 cyclohexanol-methanol suspension liquid. The adsorbent bed was stabilized by the flow of a pressurized liquid, which was a solution of 0.05 g of sodium perchlorate in 250 ml of methanol. After washing the column with 60:40 methanol-water, the mobile phase was tested. For anisole (k = 2.5), the separation efficiency was 10,700 theoretical plates, corresponding to the height of the reduced tray h = 2.3. The column prepared in the same manner without sodium perchlorate had a separation efficiency of only 4,030 theoretical plates and h = 6.2.

Příklad 2 'Example 2 '

Postupem uvedeným v příkladu 1 byla naplněna stejná kolona silikagelem o střední velikosti částic 7,5 jum s chemicky vázanou oktadecylovou fází s tím rozdílem, že jako tlačné kapaliny bylo použito 250 ml směsi acetonitril-voda v poměru 40:60, v níž bylo rozpuštěno 0,04 g kyseliny chloristé. Dělicí účinnost kolony dosáhla 17 430 teoretických pater a h ~ 1,9.Using the same procedure as in Example 1, the same 7.5 µm silica gel column was packed with chemically bonded octadecyl phase, except that 250 ml of a 40:60 acetonitrile-water mixture in which 0 was dissolved as the pushing liquid was used. 4.0 g perchloric acid. The separation efficiency of the column reached 17,430 theoretical plates and h ~ 1.9.

Příklad3Example3

Kovová kolona o rozměrech 4x200 rrm byla naplněna silikagelem o střední velikosti částic 5,2/um Jako suspendační kapalina byla použita směs cyklohexanolu s n-heptanem v poměru 95 : 5 a tlačnou kapalinou byl lékárenský bezín. Tato kolona kondicionovaná mobilní fází n-hexan-ethanol v poměru 993 : 7 měla dělicí účinnost odpovídající h - 2,9. Po záměně této mobilní fáze mobilní fází s obsahem alkoholu vyšším než 2 % objemová, do níž byla přidána voda nebo vodný roztok elektrolytu, bylo již po několika hodinách měření pozorováno postupné zhoršování, dělicí účinnosti kolony, provázené zhoršováním tvaru chromatografických zón a kontrakcí lože adsorbentu. Proto byla kolona doplněna další porcí silikagelu, stejným způsobem jako při plnění a po odstranění tlačné kapaliny byla promyta směsí n-hexan-isopropanol v poměru 95:5, do níž bylo přidáno 10 ^J % hmotnostních kyseliny pikrové. Po této úpravě byla získána kolona s dělicí účinností odpovídající h = 3, z níž byly nastřikované soluty aluovány v symetrických zónách. Lože adsorbentu bylo rozměrově stálé bez ohledu na obsah alkoholu, vody i elektrolytu v mobilní fázi.A 4x200 rm metal column was packed with a 5.2 µm average particle size silica gel. A 95: 5 mixture of cyclohexanol and n-heptane was used as the suspending liquid, and the pharmaceutical liquid was elderly. This column, conditioned by the mobile phase n-hexane-ethanol at a ratio of 993: 7, had a separation efficiency corresponding to h - 2.9. After the mobile phase was exchanged with a mobile phase containing more than 2% by volume of alcohol to which water or an aqueous electrolyte solution was added, a gradual deterioration, separation efficiency of the column accompanied by deterioration of the shape of the chromatographic zones and contraction of the adsorbent bed were observed. Therefore, the column was completed with additional portions of silica in the same manner as during loading and compression after removal of the liquid was washed with n-hexane-isopropanol 95: 5, to which was added 10 wt% ^J picric acid. After this treatment, a column with a separation efficiency corresponding to h = 3 was obtained, from which the solutes injected were aluted in symmetrical zones. The adsorbent bed was dimensionally stable regardless of the content of alcohol, water and electrolyte in the mobile phase.

Příklad 4Example 4

Postupem uvedeným v příkladu 3 byla ze silikagelu téže výrobní šarže, ale o zrnění 10,3 připravena kolona stejných rozměrů, s tím rozdílem, že po vymytí suspendační kapaliny tlačnou kapalinou byla kolona stabilizována průtokem směsi n-hexan-isopropanol v poměru 95 : 5 s přídavkem 10~ % hmot. kyseliny pikrové. Pro nesorbovaný solut měla tato kolona dělicí účinnost odpovídající h = 2,5. Eluované zóny testovaných látek byly symetrické a dělicí účinnost kolony byla po dobu čtyř měsíců používání stálá, bez ohledu na složení mobilních fází, v nichž hlavní podíl, nad 75 % objemových, tvořil uhlovodík.Using the procedure described in Example 3, a column of the same size was prepared from silica gel of the same production batch, but with a grain size of 10.3, except that the column was stabilized by flowing n-hexane-isopropanol at 95: 5 sec. by addition of 10 ~ wt. picric acid. For the non-adsorbed solute, this column had a separation efficiency corresponding to h = 2.5. The elution zones of the test substances were symmetrical and the separation efficiency of the column was stable for four months of use, regardless of the composition of the mobile phases in which the major part, over 75% by volume, was hydrocarbon.

Příklad 5Example 5

Kolona rozměrů 4x100 mm byla naplněna silikagelem o střední velikosti částic 4,5 ^um.The 4x100 mm column was packed with silica gel with a mean particle size of 4.5 µm.

Silikagel byl suspendován ve směsi cyklohexanol-methanol v poměru 80:20 a jako tlačná kapalina -3 byl použit ethanol denaturovaný methanolem s přídavkem 5.10 % hmotnostních kyseliny chloristé. Při testování s hexanem jako mobilní fází měla takto připravená kolona pro nesorbovanou látku dělicí účinnost odpovídající h = 2,7. Lože adsorbentu zůstalo objemově stálé a podrželo si svoje dělicí schopnosti i při promývání vodným roztokem síranu sodného nebo chloristanu sodného o koncentraci 4 % hmotnostních, do něhož bylo přidáno do 10 % objemových methanolu, a který byl případně okyselen kyselinou fosforečnou nebo kyselinou chloristou na pH = 2 až 5. Proti změnám v uložení částic, způsobeným rozpouštěním silikagelu ve vodných mobilních fázích, byla náplň kolony chráněna předkolonou naplněnou silikagelem.The silica gel was suspended in a 80:20 cyclohexanol-methanol mixture and methanol denatured with 5.10% by weight perchloric acid was used as the pushing liquid -3. When tested with hexane as the mobile phase, the column thus prepared had a separation efficiency of h = 2.7 for the unabsorbed substance. The adsorbent bed remained stable in volume and retained its separation capability even after washing with an aqueous solution of sodium sulfate or sodium perchlorate at a concentration of 4% by weight, to which it was added to 10% by volume methanol and which was optionally acidified with phosphoric acid or perchloric acid to pH = 2 to 5. Against changes in particle deposition caused by the dissolution of silica gel in the aqueous mobile phases, the packed column was protected with a silica gel pre-column.

Příklad6Example6

Kovová kolona rozměrů 4x200 mm byla naplněna neutrálním kysličníkem hlinitým o střední velikosti částic 6,2 postupem popsaným v příkladu 3 s tím rozdílem, že po vymytí suspendační kapaliny tlačnou kapalinou bylo lože adsorbentu stabilizováno promytím směsí n-hexan-isopropanol v poměru 90: 10, nasycenou koncentrovaným vodným roztokem amoniaku. Takto upravená kolona měla počáteční dělicí účinnost pro nesorbovanou látku odpovídající h - 3,2. Po ročním používání kolony, během něhož byla zatěžována mobilními fázemi typů uhlovodík-polární organické rozpouštědlo-voda-elektrolyt se snížila její dělicí účinnost pouze na hodnotu odpovídající h = 4,0.A 4x200 mm metal column was packed with neutral alumina with a mean particle size of 6.2 as described in Example 3 except that the adsorbent bed was stabilized by washing the n-hexane-isopropanol with a ratio of 90:10 after washing the suspending liquid with pressure liquid. saturated aqueous ammonia solution. The column thus treated had an initial separation efficiency for the unabsorbed material corresponding to h - 3.2. After one year of use of the column, during which it was loaded with the mobile phases of the hydrocarbon-polar organic solvent-water-electrolyte types, its separation efficiency decreased only to a value corresponding to h = 4.0.

Příklad 7Example 7

Komerční kovová kolona o rozměrech 6x250 mm naplněná silikagelem o velikosti částic 10 ^um s chemicky vázanými oktylovými skupinami mela po uvedení dó provozu za podmínek doporučených výrobcem pro testování, dělicí účinnost odpovídající h = 8 a testovací látky z ní byly eluovány v asymetrických zónách. Byla proto stabilizována promytím směsí vody a acetonu v objemovém poměru 70:30 s přídavkem 0,01 % hmot. benzensulfonanu sodného. Volný prostor na vstupu kolony, vzniklý kontrakcí lože adsorbentu byl vyplněn skleněnými kuličkami o velikosti 60 až 80 jim. Takto upravená kolona vykazovala za podmínek doporučených pro testování pro všechny zkušební látky dělicí účinnost lepší než h = 5,0, přičemž zóny testovacích látek byly symet* rické.A commercial 6x250 mm metal column packed with 10 .mu.m silica gel with chemically bonded octyl groups had, after commissioning under the conditions recommended by the manufacturer for testing, a separation efficiency corresponding to h = 8 and the test substances eluted in asymmetric zones. It was therefore stabilized by washing with a mixture of water and acetone in a volume ratio of 70:30 with the addition of 0.01 wt. sodium benzenesulfonate. The free space at the inlet of the column resulting from the contraction of the adsorbent bed was filled with 60-80 µm glass beads. The column thus treated exhibited a separation efficiency better than h = 5.0 under the conditions recommended for testing for all test substances, with test substance zones being symmetrical.

Příklad 8Example 8

Nerezová kolona rozměrů 3x100 mm byla naplněna silikagelem o střední velikosti částic 5,5 fum s chemicky vázanými kyanopropylovými skupinami. Adsorbent byl suspendován v tetrachlormethanu, jako tlačná kapalina byl použit hexan, který byl z kolony odstraněn promytím kolony ethanolem, denaturovaným methanolem. Lože adsorbentu pak bylo stabilizováno promytím kolony směsí denaturovaného ethanolu a vody v objemovém poměru 2:1, do níž bylo přidáno 0,01 % hmotnostních p-toluensulfonanu sodného. Pro nesorbovanou látku měla tato kolona dělicí účinnost odpovídající h ~ 3,4 a zóny sorbovaných látek byly symetrické.A 3 x 100 mm stainless steel column was packed with 5.5 µm medium particle size silica gel with chemically bonded cyanopropyl groups. The adsorbent was suspended in carbon tetrachloride using hexane as the pushing liquid, which was removed from the column by washing the column with ethanol, denatured with methanol. The adsorbent bed was then stabilized by washing the column with a 2: 1 v / v mixture of denatured ethanol and water to which 0.01% by weight sodium p-toluenesulfonate was added. For the unabsorbed material, this column had a separation efficiency corresponding to h ~ 3.4 and the zones of sorbed substances were symmetrical.

Příklad 9Example 9

Nerezová kolona o rozměrech 4x100 mm byla naplněna silikagelem o středním průměru částic 10,4 fUm s chemicky vázanými oktadecylovými skupinami. Náplň byla suspendována cyklohexanol-ethanol v poměru 95:5 a jako tlačná kapalina byl použit ethanol denaturovaný methanolem, do něhož bylo přidáno ,001 % hmotnostních chloristanu sodného. Jako mobilní fáze byla použita směs vodného fosforečnanového pufru s acetonitrilem v objemovém poměru 70:30. Pro sorbovanou látku s kapacitním faktorem k = 4 měla kolona dělicí účinnost odpovídající h = 2,4. Po dobu jednoho roku používání byla kolona promývána mobilními fázemi typu voda-polární organické rozpouštědlo, například methanol, isopropanol, aceton, acetonitril, s přídavkem anorganických kyselin, například kyseliny sírové, kyseliny fosforečné, nebo pufrů, např. fosfátový, acetátový nebo pufr s tris(hydroxymethyl)aminomethanem, přítomnými ve vodné složce mobilní fáze v koncentracích až do 200 mmol/1. Během této doby dělicí účinnost kolony pro sorbovanou látku s k - 4 poklesla pouze na h - 3,1, přičemž zóny solutů zůstaly symetrické.A 4x100 mm stainless steel column was packed with silica gel with a mean particle diameter of 10.4 µm with chemically bonded octadecyl groups. The cartridge was suspended in cyclohexanol-ethanol at a ratio of 95: 5 and ethanol denatured with methanol to which was added, 001% by weight of sodium perchlorate, was used as the pushing liquid. A 70:30 by volume mixture of aqueous phosphate buffer with acetonitrile was used as the mobile phase. For the sorbed material with a capacity factor k = 4, the column had a separation efficiency corresponding to h = 2.4. For one year of use, the column was washed with mobile phases of a water-polar organic solvent such as methanol, isopropanol, acetone, acetonitrile, with the addition of inorganic acids such as sulfuric acid, phosphoric acid, or buffers such as phosphate, acetate or tris buffer. (hydroxymethyl) aminomethane, present in the aqueous component of the mobile phase at concentrations up to 200 mmol / l. During this time, the separation efficiency of the adsorbed column with k - 4 decreased to only h - 3.1, while the solute zones remained symmetrical.

Claims

Process for the treatment of liquid chromatography columns, characterized in that the adsorbent, which is silica gel, silica gel with chemically bonded organic groups or aluminum oxide, is treated in the chromatography column with bases or acids and / or their salts, such as ammonium hydroxide, tetraalkylammonium- hydroxides, perchloric acid, picric acid, alkylsulfonic acids having 1 to 8 carbon atoms and arylsulfonic acids having 6 to 10 atoms, except for surfactants, and their sodium, potassium or ammonium salts, dissolved in organic solvents such as alcohols, ketones, % of aldehydes, esters or cyano compounds, or in a mixture of these organic solvents with water to a water content of 90% by weight.