CS250889B1 - Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3820 produkujúci chlúrtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká kmeňa mikroorganizmu Streptomyces auiretífaiciems CCM 3820 produikujúceho chíórtetracyklin a odolného voči fáigovej infekci.

Description

(54) Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3820 produkujúci chlúrtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii

2

Riešenie sa týká kmeňa mikroorganizmu Streptomyces auiretífaiciems CCM 3820 produikujúceho chíórtetracyklin a odolného voči fáigovej infekci.

.? 5 O 8 8 9

Vynález sa týká kmen a Streptomyces aureofaciens CGM 3820 (interně označenie kmeňa je UV 712/84-31) produlkujúceho chlórtetracyklín, vy.značujúeeho sa odolnosťou voči fágovej infekcii a stabilitou vlastností v následujúcich generáciách.

Zvýšenie priemyselnej výroby antibiotika chiórtotracyklínu je najčaetejšie založené na vyššej produkčnej schopnosti kmeňov používaných na Ibiosyntézu. Tieto kmene musia vykazovat specifické vlastnosti, ktoré sa prejavujú pri fermentácii vo výrobinom zariadení. Ido najma o udržanie vysekej produkčně] schopnosti a odolnosti voči nepriaznivým vplyvom v priebehu fermentácie, z ktorých najvačšie nebezpečeustvo představuje fágová infekcia.

Kmen Streptomyces aureofaciens CCM 3820 hol získaný radOni za sebou naisledujúcich mutagénnych zásahov a pasivných seiekcií z kmeňa Střep tomyces aureofaciens CCM 3766.

Dalšími Ikmeňmii v genealogie,kej linii bolí CCM 3767 a kmeň s interuým označením UV 71/84-15. Na tento, kmeň bol vedený poisledný zásah UV světlo,m dávkou 214 J.nr ² s nasledujúeou seiekciou v kvapalnom a pevnoin médiu obsáhujúcom vlastný metabolit — ,chlórtetracyklín s koncentráciou 170 a 670 («g v mililitri média. Získané vysporulované kolonie holi preočkovatné na šikmé agary .so štandardnou sporulačnou půdou. Vysporulované kuitúry holi uložené pri teplote +4 °C na dobu 20 týždňov. Za uvedených podmienok zachovala si rastové vlastnosti jedna třetina Ikultúr. Tieto kultúry holi testované na produkčnú aktivitu podlá systému spory---< vegetativně inokuium--->

---- fermentácia a z nich bol získaný kmeň Streptomyces aureofaciens CCM 3820, .na ktorý je uplatňovaný patentový nárok. ·

Kmeň je charakteristický získanými, pre aktinofág Bl nepriaznivými hostitelskými vlastnosťaimi a vysokou produkciou antibiotika, ktorú dosahuje za určených podmienok kultivácie. Tvar kolonií, vyrastených na sporulačnej ,póde po monospórovom rozseve, ich pigmentácia ako aj farba spor sú rovnaké ako u východzieho kmeňa. CCM 3766. Rast kmeňa CCM 3820 je na pevných i kvapalných půdách pomalší ako u východzieho kmeňa.

Mikroskopické preparáty kultury z ferunentácie kmeňa CCM 3820 sú charakteristické tenkými, krátkými a bohato větvenými vláknami. Sporulácia kmeňa CM 382,0 a kultivácia jeho vegetatívnej formy vyžadujú dodržovanie určených podmienok kultivácie. V nasledujúcej tabufke je uvedené porovnáme vlastností kmeňa s vlastnosťami produkčných kmeňov CCM 3766 a CCM 3767.

Kmeň Produkcia chlórtetracýklínu v banke Dokaž fága v kultúre ((Ug.ml^-1) (%) (% z počtu kultúr)

CCM 3766	4 900	100	'79
CCM 3767	5 200	106	50
CCM 3820
(UV 72/84-31)	5 400	110	meinej alko 2

Příklad 1

Podlá idoterajšieho sposobu kultivácie produkčného kmeňa vegetativně inokuium připravuje sa v 500 ml varnej banike so 60 mililitrovej inokulačnej živnej pódy, ktorá obsahuje základné živiny, a to sacharózu ako zdroj uhlíka, kukuřičný výluh, sójová múku a amónnu sol' ako zdroje dusíka a uhličitan vápenatý. Póda na přípravu vegetatívneho inokula očkuje sa sporami z jednej třetiny kuitúry na šikmom agare a nechá inkubcvaif 22 hodin.

Vegetatívnym inokulom očkuje sa 500 ml varná banka so so 60 ml produkčnej živnej půdy. Zdrojom uhlíka v tejto pode je sacharóza, .ztlrojmi dusíka sú kukuřičný výluh, sójová mírka a amóuna sol'. Póda ďalej obsahuje uhličitan vápenatý, benzyltiokyanát a minerálně soli.

Příprava ivegetaiívneho inokula a fermentácia pretoiebajú na rotačnom trepacom stroji pri 240 ot./min^-1, výstřednosti 2,5 om a kultivačnej teplote 29 °C. Fermentácia trvá dni. Vzorky na stanovenie produkicie antibiotika oldoberajú sa v 96. hodině, kedy sa dosahuje najvyššia produkcia. Vyššie uvedeným postupem dosahujú sa produkcie chlórtetracýklínu 4 700 až 5 200 ,ug . ml^-1 pódy.

P r í k 1 a d 2

Podlá doterajšieho sposobu kultivácie produkčného kmeňa v příklade 1 s tým rozdielom, že příprava vegetatívneho inokula a fermentácia preibiehajú vo velkoobjemovej aparatúre. Inokuium připravuje sa v inokulačnom tanku s objemom 5 m³, ktorý je naplněný 3 m,³ živnej pódy. Vegetatívnym inokulom očkuje sa produkčná živná póda vo fermemtore s objemom 50 m³, ktorý je plněný 29 ,m³ živnej pódy. Benzyltiokyanát prítokuje sa v množstve 1 až 1,5 μξ. ml^-1 půdy spolu s prikrmovacím roztokom, ktorého prítoikovanie začína pri spotřebovaní zídroja uhlíka na hladinu 26 až 25 mg. ml^-1 půdy. Vyššie uvedeným postupom dosahuje sa produikcia chlórtetracyklínu zo šarže odpovedajúca indexu 100 %.

Příklad 3 ^!Podl'a před metu vynálezu pri kultivácii kmoňa Streptomyces aureofaciens CGM 3820 v bankách ako v příklade 1 idosáhujú sa produkcie chlórtetracyklínu 5 200 až 5 500 mikrogramov . ml^-1 půdy.

Příklad 4

Podlá předmětu vynálezu pri kultivácii kmeňa OCM 3820 vo velkoolbjemovej aparatúre ako v příklade 2, dosahuje sa produkcia chlórtetracyklínu ,zo šarže odpovedajúca 100 % produkcie v příklade 2.

P r í k 1 a d‘ 5

Podlá předmětu vynálezu pri kultivácii kmeňa CCM 3820 vo velkoolbjemiovej aparatuře alko v příklade 4 s tým rozdielom, že vo fermentore upravuje sa kultivačná teplota z 20 na 28 °G pri poklese pH kultúry na 6,0 a benzylíiokyanát prítokuje sa v množstve 2 až 3 ^g.ml¹ půdy spolu s prikr,inovacím roztokom, ktorého prítokovanie začína ipri spotřebovaní zdroja uhlíka na hladinu '21 až 20 mg. ml^-1 pódy. Vyššie uvedleným postupem dosahuje sa produkeia 108 % produkcie ídosahovanej v príkladoch chlórtetracyklínu zo šarže odpovedajúca 2 a 4.

Výhoda používania kmeňa Streptomyces aureofaciens CCM 3820 je vo vytvoření podmienok ďalšieho rastu výroby chlórtetracyklínu bez jej ohrozenia fágovou infekciou.

Claims (2)

1. PREDMET VYNALEZU

   Kmeň Streptomyces aureofaciens CCM382O produlkujúci chlórtetracyklín a odolný voči fágovej infekcii.