CS251532B1

CS251532B1 - Kmeň mikroorganizmu Aspergilus tamarii CCM F-781

Info

Publication number: CS251532B1
Application number: CS855509A
Authority: CS
Inventors: Jozef Dobias; Julius Brtko; Jaroslav Sadlon; Stefan Balint
Original assignee: Jozef Dobias; Julius Brtko; Jaroslav Sadlon; Stefan Balint
Priority date: 1985-07-26
Filing date: 1985-07-26
Publication date: 1987-07-16
Also published as: CS550985A1

Abstract

Riešenie sa týká nového kmeňa Aspergillus tamarii CCM F-781, ktorý produkuje kyselinu ikójovú vo zvýšenom výtažku. Podstata šlachtenia a získania nového 'kmeňa spočívá v tom, že na suspenziu spor Aspergillus tamarii o koncentrácii 106/ml v dimetylsulfoxide sa posobí χ-lúčmi pri laboratórinej teplote po dobu 25 až 35 minút, pričom sa izolujú získané mhtanty štandardnými selekčnými metodami.

Description

Vynález sa -týká nového kmeňa Aspergillus tamarii, 'ktorý produkuje kyselinu kójovú vo zvýšenom výtažku.

Kmeň Aspe-rgillus tamarii sa -popisuje ako producent kyseliny kójovej už dávnejšíe, avšak -bez udania množstva prdduik-oivanej kyseliny [Korzy-b-ski, T., Kofwezyk — Gi-n-difer, Z. Kurylowicz, W.: AntibiOtics, PWN — — Polish Scientific Publishers, Warszawa, (1967)].

Podta literárnej rešerše kmeň Aspergillus tamarii sa na priemyslo-vú výrobu kyseliny kójovej nepoužívá. Katalogy kultúr húb (Cataloque of Cultures, Univerzita Karlova Praha 1976, č. 664 Aspergillus tamarii Kita; ATCC Cataloque of Fungij Yeasts, 16-th e-dition, 1984 čísla 1005, 10 836, 12 699, 16 865, 20 054, 26 950, 26 951 Aspergillus tani-arii Kita) uvádzajú -druh Aspergillus tamarii bez vlastnosti produkovat kyselinu kójo-vú. U nás nie sú k dispozícii vysokoiprodukčné kmene húb, ktoré sú schopné vytvárať kyselinu kójovú.

Uvedené nedostatky doteraz známy-ch kmeňov odstraňuje vynález, ktorým je nový kmeň mikroorganizmu Aspergillus tamarii mutartt VIII ulo-že-ný v Ceskosloveinskej zbierke milkroorganizmov Univerzity ]. E. Purkyně v Brně, Třída Obránců míru 10, po-d označením CCM F-781. Nový kmeň sa získal tak, že na suspenziu spor Aspergillus tamarii o koncentrácii 10⁶/ml v 10 %-nom dimetylsulfoxide sa působilo χ-lúčmi po dobu 25 až 35 minút, suspeinzia spor sa rozliala -na sladinkový agar a nechala vysporulovat pri teplote 25 až 30 °C, z vysporulovanej -kuitúry sa připravila suspenzia spor, -ktorá sa riedila 1:1 000, rozlial-a na sladinkový -agar, kde vyrás-tli kolonie kultury mikroorganizmu, ktoré sa hodnotili fermentačnými skúškami z hla-didka produkcie kyseliny kójovej a z nich bol vybraný kmeň Aspergillus tamarii mutant VIII.

Hlavnou výhodou nového -kmeňa je zvýšená produktivita, ktorá dosahuje hodnoty 42 ik-g kyseliny kójovej na 100 kg cukru. Povodný kmeň Aspergillus tamarii mal maximálnu pr-o-dukciu kyseliny kójovej 15 až 18 Ikg na 10-0 kg cukru. Tonto kmeň na Sabouraudovej pode za 3 dni vytvára kolonie o priemere 2,6 cm, vrch-ná stra-na je biela so silnou sporuláciou v střede koló-nie. Spodná strana je slabo oranžová. Spory sú tmavohnědě) farby 7 až 8 μΐη v priemere, ve-zlkulum výrazné gufaté v priemere 44 až 48 ,αηι.

Nový kmeň Aspergillus tamarii mútant VIII dobře rastie na Sa-b-ouraudovej aga-rov-ej pode. Za 3 dini vytvára kolonie o priemere 5,3 cm bez sporulácie, vrchná strana je biela s vysokým vzdušným mycéliom, spodná strana je oranžová a hladká. Na sladinko-vom agare vytvára za 3 dni kolónie o priemere 4 cm bez sporulácie, spodná strana je radiálně z-vrásinená a oranžovohnedej farby, vrchná strana je biela. Sporulácia na oboch půdách sa objavuje po 6 dňoch 'kultivácie. S-póry sú tma-vohnedej farby, 7 až 8 ₍um v priemere, vezilkulum -výrazné gufaté o priemere 56 až 6-0 /tm. Životnost sjpór je dlhodobá pri skladovaní v suspenzii s aktívny-m 'uhlím v parafíndvom oleji, alebo v lyoifllizovanom s-taive aj niekoíko rokov.

Příklad 1

Na suspenziu -spor Aspergillus tam-arii o (koncentrácii 10⁶/m'l v 10 %-nom dimetylsulfoxide sa působí χ-lúčmi zo zdroja ⁶⁰CO po dobu 25 až 35 minút. Suspenzia spor sa potom rozleje -na sladinkový agar a nechá vysporulovať v termostate pri teplote 25 až 3-0 °C. Z vysiporulovanej kuitúry sa připraví suspenzia spor v 0,9 °/o-n-om chloride sodnom, ktorá sa riedi 1 : 1 000 a rozleje na sl-adinlkový agar, kde za 3 až 4 dni vyrastú kolónie kuitúry mikroorganizmu, ktoré sa hodnotia fermentačnými skúškami na produlkciu kyseliny kójovej a z nich sa vybral kmeň Aspergillus tamarii mutwnt VIII.

Příklad 2 (

Připraví sa 'kultiv-ačné médium, na 1 liter -sa použije 100 g glulkó-zy, 0,16 g -dihydrofosforeičnanu draselného, 0,-07 g chloridu sodného, 0,02 g tetrahydrátu síranu manganatého, 1 g močoviny, 1 g chloridu amonného, 0,01 g heptahydrátu síranu zinočnatého a 0,01 g heptahydrátu síranu železnatého. Sterilně kultiv-ačné médium o pH 5,0 až 6,5 v 5 1 fermen-tačnom tanku sa zaoč.kuje s 10 % obj. 48 hodinového vegetatívneho inokula Aspergillus tamarii muta-nt VIII a kultivuje sa pri teplote 30 °C, pri obvodovej rýchlosti 3,1 ms^_1 a vzdušnění 3 WM po dobu 5 až 6 dní. V priebehu fermen-tácie sa vytvára v médiu 42 g/1 kyseliny kójovej.

P r i k il a d- 3

Izol-ovaný kmeň má tú vl-astnosť, že jeho mycélium po oddělení od fermentačnej tekutiny je možné použit niekofkokrSt zia sebou na ferme-n-ta-čnú přípravu kyseliny kójovej. Připraví sa roztok 13-0 g glukózy v 1 1 0,1 M fosfátového tlmiivého roztoku o pH 6,0. Sterilný roztok v 5 1 fermenta-čnom tanku sa zmiešal s mycéliom, ktoré sa získalo -separováním o-d fermen-ta-čnéh-o média po skončenej fermentácii popísanej v příklade 2. Podmienky ferme-ntácie sú také isté ako v příklade 2. Po 5 až 6' dňoch kultivácie sa v médiu vytvára 19 až 21 g/1 kyseliny kójo-vej.

K-meň Aspergillus tamarii muta-nt VIII može sa využit pri fermentačnej výrobě kyseliny kójovej, ktorá slúži ako surovina pre chemický, potravinářsky a farmaceutický priemysel.

Claims

PREDMET VYNALEZU

Kmen mikroorganizmu Aspergillus tama-rii CCM F-781 produkujúci kyselinu kójovú.