CS252736B1 - Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy - Google Patents
Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS252736B1 CS252736B1 CS855593A CS559385A CS252736B1 CS 252736 B1 CS252736 B1 CS 252736B1 CS 855593 A CS855593 A CS 855593A CS 559385 A CS559385 A CS 559385A CS 252736 B1 CS252736 B1 CS 252736B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- vaccine
- virus
- cell
- medium
- lyophilized
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 241000282339 Mustela Species 0.000 title description 2
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 title 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 75
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 65
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims description 15
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 15
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 12
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 claims description 11
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L dipotassium;(2s)-2-aminopentanedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 235000013919 monopotassium glutamate Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 4
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 4
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 3
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 2
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 2
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 7
- 241000702625 Mink enteritis virus Species 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000015220 hamburgers Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 1
- 241001032492 Canine parvovirus 2 Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 1
- 241000042032 Petrocephalus catostoma Species 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález sa týká žívej atenuovanej vakcíny proti parvovírusovej enteritíde noriek a spósobu jej přípravy, a vakcinočného komponentu bivalentnej lyofilizovanej vakcíny aj proti psinke pripravenej na buňkových kulturách.
Parvovírusová enteritída noriek představuje hromadné ochorenie zažívacích ústrojov, ktoré sa klinicky prejavuje nechutenstvem, malátnosťou, zvracením a hnačkou, ktorá móže byt krvavá. Zvieratá majú horúčku a pri hematologickom vyšetření sa spravidla zisťuje znížený počet leukocytov. Ochorenie spósobuje významné straty vo veíkocliovoch noriek, pričom úhyn představuje 20 až 50 % z celkového počtu zvierat. Pri zavlečení do chovu postihuje všetky věkové kategorie zvierat, ale najma mláďata, pričom nástup je prudký a priebeh velmi rýchly·
Póvodcom ochorenia je virus z čefade Parvoviridae, ktorého částice sú izomerické, neobalené a obsahujú dezoxyribonukleovú kyselinu. Virus sa replikuje v bunkovom jadre, a to iba v určitých fázach buňkového cyklu, preto je jeho pestovanie in vitro poměrně obtiažne.
Specifická profylaxia je založená ma pasívnej imunizácii podáním hyperimúnneho séra alebo imúnnych sérových globulínov, ale najčastejšie sa využívá aktívna imunizácia. Spočiatku sa používali pre norky očkovacie látky (inaktivované a živé] připravené z virusu panleukopénie mačiek, nakolko sa vychádzalo* z poznatku, že uvedené 2 virusy sú antigénne příbuzné, ale nie identické (FLAGSTAD, A.: Feline panleukopenia virus and mink enteritis virus. Acta vet. scand., 18, 1977, :1 — 9; CARMAN, P. S. _ POVEY, R. C.: Comparison of the viral proteins of Canine parvovirus-2, Mink enteritis virus and Feline panleukopenia virus. Veterinary Microbiology, 8, 1983, :423 — 435; GORHAM, J. R. — HARTSOUGH, G. R. — BURGER, D. — a spol.: The preliminary use of attenuated feline panleukopenia virus to protéct cats against panleukopenia and mink against virus enteritis. Cornell Vet., 1965, :559 až 566; POLLOCK, R. V. H.: The parvoviruses, Piart I. Feline Panleukopenia virus and Mink enteritis virus. Compendium on continuing education for the practicing veterinarian, Vol. 6, 1984, 3: 227 — 236 j.
Neskór sa přijala zásada, že optimálně riešenie bude, ak pre každé ochorenie sa připraví homológna vakcína. Používajú sa inaktivované vakcíny připravené z virulentných kmenový (CARMAN, S. — POVEY, C.: The failure of an Inactivated Mink Enteritis virus vaccine in four preparations to- provi252736 de protection to dogs against challenge with Canine parvovirus II. Can. J. comp. Med.,
1982, 46: 47 — 50; SHEN, D. T. — GORHAM, J. R. — RYLAND, L. M. — a spol.: Using jet injection to vaccinate mink and ferrets against canine distemper, mink virus enteritis, and botulism, type C. Vet. Med. /Smáli Animmal Clinician, 1981, :856 — 859/), ale v poslednom období získali převahu živé vakcíny, ktoré obsahujú virus oslabený sériovým pasážovaním na buňkových kulturách. Nevýhodou inaktivovaných vakcín je, že ich účinnost je významné ovplyvňovaná najma prítomnosťou materských protilátok a obsahom účinného antigénu. Imunita trvá len krátku dobu — niekoťko mesiacov, pričom chrání len proti subklinickej infekcií, ale z hladiska tlmenia nákazy je významná skutečnost, že takéto očkovanie nezabráni intenzívnemu vylučovaniu virulentného virusu do prostredia (CARMICHAEL, L. E. — OLIN, J. M.: Immunization strategies in puppies — why failures? Compend. Contin. Educ. Prací. Vet., 5, 1983, 12: 1 043 — 1 051; POLLOCK,
R. V. H. — CARMICHAEL, L, E,: Canine viral enteritis. Vet. Clin. North. Amer., 13,
1983, 3: 551 — 556).
Pri aktívnej imunizácii získavajú postupné převahu živé vakcíny připravené z atenuovaných homológnych kmeňov. Po ich aplikácii dosahujú hladiny specifických protilátok úroveň, ako po prirodzenej infekcii vírulentným kmeňom. Protilátky sa zisťujú už na 3. deň po inokulácii a perzistujú najmenej 2 roky (CARMICHAEL, L. E. — JOUBERT, J. C. — POLLOCK, R. V. H.: A modified live canine parvovirus vaccine. II. Irnmune response. Cornell Vet., 73, 1983,: 13 až 29; KALIN, D. E. — EMERGY, J. B. — SMITH, M. J. — SPOTTS, A. M.: Safety and efficacy of modified-live canine parvovirus vaccine. Vet. Med. Smáli Anim. Clin., 78, rok 1983,: 1 739 — 1 746).
Potomstvo od imúnnych matiek je chráněné proti infekcii materskými protilátkami, z ktorých 10 % získává transplacentárne a 90 % kolostrom. Na druhej straně tieto protilátky nepriaznivo ovplyvňujú imunitnú odpověď na podanie živých alebo inaktivovaných vakcín (CARMICHAEL, L. E. — JOUBERT, J. C. -- POLLOCK, R. V. H.: A modified live canine parvovirus vaccine. fl. Immune response. Cornell Vet., 73, 1983, :13 až 29; BAKER, J. A. — ROBSON, D. S. — GILLESPIE, J. H. — ET AL.: A nomograph that predicts the age to vaccinate puppiers against distemper. Cornell Vet., 49, 1959, :185 až 167; CARMICHAEL, L. E. — ROBSON, D.
S. — BARNES, F. D.: Transfer and decline of maternal infectious canine hepatitis antibody in puppies. Proč. Soc. Exp. Biol. Med., 109, 1962, :677 — 681).
Z experimentálnych aj praktických skúseností vyplývá, že podmienkou pře dosiahnutie dlhodobej chránenosti je očkovanie mláďat až vo veku okolo 16 až 18 týždňov.
Sposob kultivácie parvovírusu v buňkových kultúrach za účelom pomnoženia virusového materiálu na přípravu pokusných vakcín popísali vlacerí autoři (GORHAM, J. R. — HARTSOUGH, G. R. — BURGER, D. — ET AL.: The preliminary use of attenuated feline panleukopenia virus to protéct cats against panleukopenia and mink against virus enteritis. Cornell Vet., 55, 1965, :559 až 566; MOCHIZUKI, M. — KONISHI, S. — OGATA, M.: Studies on feline panleukopenia. II. Antigenicities of the virus. Jpn. J. vet. Sci., 40, 1978, 4: 375 — 383; CARMICHAEL, L. E. — JOUBERT, J. C. — POLLOCK, R. V. H.: A modified live canine parvovirus strain with novel plague characteristics. I. Viral attenuation and dog response. Cornell Vet., 71, 1981, 4: 408 — 427; CHURCHILL, A. E.: A potency test for inactivated smáli animal parvovirus vaccines using chicks. J. Biol. Standard., 10, 1982, :1 — 8; NARA, P. L. — WINTERS, K. — RIlCE, J. B. et al.: Systemic and local intestinal antibody response in dogs given both infective and inactivated canine parvovirus. Amer. J. vet. Res., 44, 1983, 11: 1 989 — 1 995; BERGMAN, R. — SUNDQUIST,
B. — STROMAN, L.: Production of a feline parvovirus vaccine using monolayer cell Systems in roller flasks and microcarriers. Develop. biol. Standard., 55, 1984, :77 — 78 j.
Použili najma primárné kultúry mačacích a psích embryonálnych buniek alebo z nich připravené stabilně buňkové linie. Infekciu buniek robili obvykle za 4 až 6 hodin po masadení do kultivačných nádob. Nakolko množenie virusu nebolo doprevádzané pravidelným vývojom cytopatických zmien, kontrolovali obsah virusu v tkanivových tekutinách na základe přítomnosti intranukleárnych teliesok, imunofluorescentnou metodou, připadne výšky hemaglutinačného titru. Pri infekcii buniek sa často používal oplach fyziologickým roztokom a výměna kulíivačného média. Velkovýrobna technológia výroby vakcíny vyžaduje však minimálně množstvo operácií a podfa možnosti priamu, pohotová a presvedčivú mikroskopická kontrolu množenia virusu na základe specifických cytopatických zmien.
Táto úloha bola vyriešená následovně:
Bola připravená živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek, monovalentná, fyofilizovaná, alebo vakcinačný komponent bivalentnej lyofilizovanej vakcíny aj proti psinke, ktorá obsahuje v 1 ml atenuovaný kmeň virusu enteritídy noriek MEVA-BN 63/82 CAMP V-292 v množstve najmenej 103 TKIDso častíc virusu a v případe bivalentnej vakcíny obsahuje ešte kmeň virusu psinky CDV-F-BN 10/83 CAPM V-289 v množstve najmenej 103 TKIDso častíc virusu psinky.
Uvedený virusový kmeň bol adaptovaný na kultúry buniek stiabilnej mačacej linie
FE. Ako rastové médium bolo použité mini252738 málne esenciálně médium podlá Eaglea obohatené o bovínné sérum, v ktorom. sa virus pomnožoval pri teplote 36 až 38 CC po dobu 4 až 8 dní. Po vytvoření zřetelných cytopatických zmien sa virusový materiál zmiešal s lyofilizačným médiom tak, aby obsahoval minimálně 104 TKIDso Častíc virusu enteritídy noriek v 1 ml.
Virusový kmeň enteritídy noriek s označením MEVA-BN 63/82 a zbierkovým číslom CAMP V-292, uložený v Ceskoslovenskej zbierke mikroorganizmov na Výskumnom ústave veterinárneho lekárstva v Brně, Hudcova 60, sme získali z povodně virulentného virusu izolovaného z infekčných materiálov cestou sériových pasáži na mačacej bunkovej linii označené) FE. Homogenita vírusovej populácie a stabilita imunobiologíckých vlastností atenuovaného kmeňa sa dosiahla izolováním linie metódou hraničných riedení so šesťnásobným opakováním.
Uvedený kmeň MEVA-BN 63/82 CAPM V-292 je charakterizovaný týmito ímunobiologickými vlastnosťami:
1. Pri dodržaní definovaných kultivačných podmienok je množenie virusu na stabilnej bunkovej linii FE doprevádzané vývojom výrazných cytopatických zmien s obsahom 10’·5 až 105·6 TKIDso . ml-1.
2. Vakcinačný virus je neškodný pre všetky věkové kategorie noriek, pričom mláďata bez materinských protilátok móžu byť úspešne imunizované počnúc vekom 6 týždňov.
3. Vakcinačný virus sa nevylučuje z organizmu očkovaných zvierat a neprenáša sa na spoluustajnené vnímavé zvieratá.
4. Očkovanie vnímavých zvierat vyvolá chránenosť, počnúc 4. dňom po podaní vakcíny.
5. Imunita vyvolaná jednorázovým očkováním zvierat straších ako 12 týždňov trvá najmenej jeden rok, a je doprevádzaná přítomnostmi specifických protilátok.
Stabilná buňková línia FE, vykazovala pri jej získaní nedostatočné rastové vlastnosti charakterizované pomalým množením buniek a neschopnosťou vytvořit súvislý monolayer. Uvedené vlastnosti bunkovej linie nezodpovedali nárokom na intenzívně množenie uvedeného virusu so získáním virusových suspenzi! s dostatočnými titrami potřebnými pre výrobu vakcíny. Prejavom nedostatečných pastových vlastností bunkovej linie bolo aj chýbanie vývoja cytopatických zmien po infekcii vakcinačným kmeňom, čo nedovolovalo sledovat a hodnotit stupeň pomnoženia virusu. Sériovým pasážovaním bunkovej linie FE vo vybraných médiách (MEM, BEM, M199) s obsahom novorodeneckého séra sme po. 25 pasážach v médiu MEM derivovali populáciu buniek, ktorá vykazuje následovně vlastnosti: 1. Líniu je možné pasážovať v pomere 1: : 3 až 1: 4 v 72- až 96hodinových intervaloch pomocou roztoku verzén-trypsin.
2. Najvhodnejšie rastové médium je minimálně esenciálně médium podlá Eaglea s prídavkom 5 až 15 hmot. % bovínneho. séra.
3. Bunkovú líniu je možné uchovávat v zmrazenom stave pri teplotách pod —100 °C, s použitím protekčného média, ktoré obsahuje 10 až 20 hmot. °/o dimetylsulfoxidu.
4. Množenie vakcinačného virusu je pravidelné sprevádzané výraznými cytopatickými změnami na 4. až 8. deň po infekcii v závislosti od dávky virusu.
Dosiahnuté titry virusu dovolujú realizovat ěfektívnu výrobu očkovacej látky proti parvovírusovej enteritíde noriek.
Výběr kultivačného séra:
Kultivačně sérum s dobrými rastovými vlastnosťami pre uvedenú bunkovú líniu može obsahovat nešpecifické inhibitory najviac v titry 1 : 32, stanovenom hemaglutinačno-inhibičným testom.
Postup výroby vakcíny:
Spůsob infekcie buniek linie FE vakcinačným vírusom:
A.
Suspenzia buniek FE o hustotě 5 až 10 .
. 10B buniek . ml-1 v rastovom médiu sa zmieša s vakcinačným vírusom pri multiplicite infekcie od 0,0001 do 0,001. Zmes virusu a buniek sa inkubuje pri 36 až 38 °C počas 30 až 60 minút. Potom sa zmes virusu a buniek nariedi v rastovom médiu, ktoré představuje minimálně esenciálně médium podlá Eaglea s pH 6,8 až 7,3 ia prídavkom piatich až desiatich hmot. °/o bovinného séria s kvalitou vyznačenou v odstavci „Výběr kultivačného séra“.
B.
Do bunkovej suspenzie v rastovom médiu sa přidá inokulum vakcinačného virusu o multiplicite infekcie 0,0001 až 0,001, ktorá sa ihned' vyleje do kultivačnej nádoby. Takto připravená suspenzia buniek za účelom přípravy vakcíny sa kultivuje na skle, plastickej hmotě, štacionárnym sposobom, alebo v. otáčaných flašiach („rolleroch“), připadne na mikronosičoch, pri 36 až 38 °'C počas 4 až 8 dní. Množenie virusu je sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.
C.
Infekcia prichytených buniek na kultivačnom povrchu — po štvor- až šesťhodinovej inkubácii buniek linie FE pri 36 až 38 °C. Do rastového média sa přidá inokulum vakcinačného virusu pri multiplicite infekcie 0,0001 až 0,001. Inkubácia pokračuje pri 36 až 38 °C počas 4 až 8 dní. Množenie virusu je rovnako ako· v bode A a B sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.
Zmes infekčných tekutin sa získává vtedy, keď 80 až 90 % monolayeru vykazuje specifické změny. Takto připravená virusová suspenzia sa kontroluje na přítomnost nežiadúcich kontaminujúcich mikroorganizmov a stanoví sa obsah virusu titráciou na buňkách linie FE. Po ukončení kultivácie sa virusový materiál zmieša s lyofilizačným médiom v pomere 50 až 75 hmot. % virusu k 50 až 25 hmot. % lyofilizačného média a uchováva pri —15 až —20 °C až do lyofilizácie. Lyofilizačné médium je možné pri zachovaní rovnakých hmotnostných pomerov přidávat' až tesne před lyofilizáciou. Na přípravu lyofilizovanej vakcíny sa použijí infekčně tekutiny s obsahom minimálně 104 TKIDso . ml'1 virusu, bakteriologicky sterilně. Homogenizovaná virusová suspenzia s lyofilizačným médiom, ktoré obsahuje sacharózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodný, alebo draselný, bovinný albumin alebo iný zdroj bielkovín, dextran alebo želatinu (BOVARNICK, M. R. — MILLER, J. C. — SYNDER, J. C.: The influence of certain salts, amonoacids, sugars, and proteins on the stability of rickettsiae. J. Bacteriol., 59, 1950,: 509—522] sa rozplňuje do ampuliek, alebo liekoviek, lyofilizuje, vzduchotěsně uzatvára a uchovává pri chladničkovej teplote. Vakcína připravená podlá uvedeného postupu obsahuje najmenej 103 TKIDso.ml-1 vakcinačného virusu, čo představuje jednu imunizačnú dávku.
Použité lyofilizačné médium podfa BOVARNICK, M. R. — MILLER, J. C. — SNYDER, J. C.: The influence of certain salts, aminoacids, sugars, and proteins on the stability of rickettsiae. J. Bacteriol 59, 1950, :509 — 522] je vhodné aj na lyofilizáciu iných druhov vakcinačných vírusov. Preto ak sa přidá do infekčnej suspenzie obsahujúcej iný druh vakcinačného virusu, například virus psinky, je možné tieto suspenzie navzájom miešať v 1'ubovoínom pomere a lyofilizovať.
Uvedené příklady predmet vynálezu nijak neobmedzujú, ani nevyčerpávajú:
1. Spůsob kultivácie:
Suspenzia buniek, připravená pomocou proteolytických fermentov v rastovom médiu, ktoré obsahuje definované množstvo amínokyselín, a vytamínov s prídavkom 10 hmot. % séra určeného pre tkanivové kultúry sa kutivuje na skle, plastickej hmotě, štacionárnym spůsobom alebo v otáčaných flašiach (rolleroch), připadne v suspenzii na mikronosičoch.
2. Spůsob infekcie buňkových kultúr vakcinačným virusom:
Buňkové kultúry připravené a pěstované podlá bodu 1, sa infikujú vakcinačným vírusom pri multiplicite infekcie najmenej 0,001 nasledovnými sposobmi:
aj suspenzia buniek linie FE o hustotě 10.
. 106 buniek .ml-1 v rastovom médiu sa zmieša s vakcinačným virusom pri multiplicite infekcie 0,001. Zmes virusu a buniek sa inkubuje pri 37 CC počas 30 minút. Potom sa zmes virusu a buniek nariedi v rastovom médiu, ktoré představuje minimálně esenciálně médium podlá Eaglea s pH 7,1 a prídavkom 10 hmot. % Povinného séra.
b) do suspenzie buniek linie FE o hustotě 5 .
. 105. ml1 v rastovom médiu sa přidá inokulum vakcinačného virusu o multiplicite infekcie 0,001, a infikovaná suspenzia sa ihned vyleje do kultivačnej nádoby. Takto připravená suspenzia buniek za účelom přípravy vakcíny sa kultivuje v Rouxových fl'ašiach pri teplote 37 °C počas 6 dní. Množenie virusu je sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.
c) infekcia prichytených buniek na kultivačnom povrchu — po šesťhodinovej kultivácii buniek linie FE pri 37 °C sa do rastového média přidá inokulum vakcinačného virusu pri multiplicite infekcie 0,001. Inkubácia pokračuje pri 37 °C počas 6 dní. Množenie virusu je rovnako ako v bode aj a bj sprevádzané výraznými cytopatickými změnami.
3. Zber vakcinačného virusu:
Vakcinačný virus sa produkuje v rastovom médiu, na buňkových kultúrach pěstovaných podfa bodu 1 a infikovaných podfa bodu 2. Po vytvořeni rozsiahlych cytopatických zmien stanovených mikroskopicky sa kultivácia ukončí a do rastového média s pomnoženým virusom sa přidá priamo do kultivačných nádob vhodné lyofilizačné médium v pomere 67 hmot. % vírusovej suspenzie a 33 hmot. % lyofilizačného média. Zmes sa dalej uchovává v kultivačných nádobách v zmrazenom stave až do lyofilizácie.
252738
Homogenizovaný virusový materiál s požadovaným obsahom infekčných jednotiek [najmenej 104 TKIDso. ml“1), ktorý neobsahuje kontaminujúce mikroorganizmy sa rozplňuje do· ampuliek, lyofilizuje, vzduchotěsně uzatvorí a uchovává pri chladničkovej teplote. Vakcína připravená podlá uvedeného postupu obsahuje najmenej 103-° TKIDso . . mto1 vakcinačného virusu.
4. Příprava kombinovanej vakcíny:
Lyofilizačné médium, ktoré obsahuje sacharózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodný alebo draselný, bovinný albumin alebo iný zdroj bielkovín a želatinu alebo dextrán vyhovuje aj pre lyofilizáciu iných druhov vakcinačných virusov. Připravená vakcína proti virusovej enteritíde noriek sa mieša so živou atenuovanou vakcínou proti psinke v fubovofnom pomere, rozplňuje do ampuliek, lyofilizuje, vzduchotěsně uzatvorí a uchováva pri chladničkovej teplote. Bivalentná vakcína připravená podía uvedeného postupu obsahuje najmenej IQ3 TKIDso. mto1 vakcinačných virusov psinky a virusovej enteritídy noriek.
Claims (6)
- PŘEĎME T1. Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek, monovalentná, lyoíilizovaná, alebo vakcinačný komponent bivalentnej lyofilizovanej vakcíny aj proti psinke, vyznačujúci sa tým, že obsahuje v 1 ml atenuovaný kmeň virusu enteritídy noriek MEVA-BN 63/82 CAPM-292 v množstve najmenej 103 TKIDso častíc virusu a v případe bivalentnej vakcíny obsahuje ešte kmeň virusu psinky CDV-F-BN 10/83 CAPM V-289 v množstve najmenej 103 TKIDso častíc virusu psinky.
- 2. Živá atenuovaná vakcína podlá bodu 1, alebo vakcinačný komponent bivalentnej lyofilizovanej vakcíny aj proti psinke, vyznačujúci sa tým, že obsahuje lyofilizačné médium v množstve 25 až 50 hmot. %, vztiahnuté na hmotnost celej vakcíny.
- 3. Sposob výroby vakcíny podlá bodov 1 a 2 vyznačujúci sa tým, že atenuovaný kmeň virusu enteritídy noriek sa pomnožuje na stabilnej mačacej linii buniek FE v minimálnom esenciálnom médiu podlá Eaglea s pH 6,8 až 7,3, obohatenom o bovinné sérum pri teplote od 36 do 38 °C po dobu 4 až 8 dní, až do vytvorenia výrazných cytopatických zmien a potom sa virusový materiál zmieša s lyofilizačným médiom tak, aby obsahoval minimálně 104 TKIDso . mto1.
- 4. Sposob výroby vakcíny podlá bodu 3, vyznačujúci sa tým, že ako přísada do ku ltivačného média sa použije bovinné sérum s definovaným obsahom nešpecifických inhibítorov proti odpovedajúcemu virusu.YNÁLEZU
- 5. Sposob výroby vakcíny podfa bodov· 3 a 4, vyznačujúci sa tým, že infekcia buniek na produkciu virusu sa robí bud tak, že buňková suspenzia s obsahom 5 až 10.106. mto1 buniek v rastovom médiu sa infikuje vírusom při MOI najmenej 0,0001 na buňku, inkubuje pri 36 až 38 °C počas 30 až 60 minút, potom sa 10 až 20 krát nariedi v rastovom médiu, vyleje do kultivačnej nádoby a kultivuje pri teplote 36 iaž 38 °C až do zberu virusu, alebo buňková suspenzia s obsahom 4 až 8. 105. mto1 buniek v rastovom médiu sa infikuje virusom pri MOI najmenej 0,0001 na buňku a inkubuje pri 36 až 38 °C až do zberu virusu, do kultivačných nádob sa nasadzuje buňková suspenzia v rastovom médiu s obsahom 4 až 8.105 . ml-1 buniek, a kultúry sa po 4- až 6hodinovej inkubácii pri 36 až 38 °C infikujú priamo do rastového média virusom pri MOI najmenej 0,0001 na buňku a inkubujú až do zberu virusu.
- 6. Sposob výroby vakcíny podfa bodov 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že sa k virusovým suspenziam přidává po ukončení inkubácie lyofilizačné médium, ktoré obsahuje sacharózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodný alebo draselný, bovinný albumin alebo iný zdroj bielkovín a želatinu alebo dextrán a zmes sa uchovává až do lyofilizácie v· zmrazenom stave bez straty obsahu infekčného virusu pri teplotách vyšších ako —20 stupňov Celsia, alebo sa lyofilizuje okamžité.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
| CS861842A CS252746B1 (sk) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti, panleukopénii mačiek a sposob jej přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS559385A1 CS559385A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS252736B1 true CS252736B1 (cs) | 1987-10-15 |
Family
ID=5401109
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
| CS861842A CS252746B1 (sk) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti, panleukopénii mačiek a sposob jej přípravy |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
| CS861842A CS252746B1 (sk) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti, panleukopénii mačiek a sposob jej přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (3) | CS252736B1 (sk) |
-
1985
- 1985-07-31 CS CS855593A patent/CS252736B1/cs unknown
-
1986
- 1986-03-17 CS CS861843A patent/CS252747B1/cs unknown
- 1986-03-17 CS CS861842A patent/CS252746B1/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS184286A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS252747B1 (cs) | 1987-10-15 |
| CS252746B1 (sk) | 1987-10-15 |
| CS184386A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS559385A1 (en) | 1987-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2396976C2 (ru) | Вакцины и способы лечения собачьего гриппа | |
| EP1123710B1 (en) | Freeze-dried hepatitis a attenuated live vaccine and its stabilizer | |
| CN106399260B (zh) | 一种犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗及其制备方法 | |
| US5650153A (en) | Recombinant Marek's disease virus and vaccine | |
| EP1129723B1 (en) | Combined vaccine against both hav and measle virus and method of producing it | |
| JP7448475B2 (ja) | 細胞関連アルファヘルペスウイルスワクチン用の改善された希釈液 | |
| US4303644A (en) | Feline infectious peritonitis virus vaccines | |
| US3155589A (en) | Parenteral extravascular injectable vaccines for simultaneous immunization of canidae against rabies, canine distemper, and infectious canine hepatitis | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| KR100531491B1 (ko) | 백신으로서 소 호흡 코로나바이러스 | |
| Blaškovič et al. | Experimental infection of weanling pigs with A/Swine influenza virus: 2. The shedding of virus by infected animals | |
| US4279893A (en) | Vaccine against Newcastle fowl disease, method for preparing and use thereof | |
| CN103820398A (zh) | 一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法 | |
| US2965544A (en) | Tissue culture propagated canine distemper virus and vaccine thereof | |
| CN112807424A (zh) | 牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗及其制备方法 | |
| CS252736B1 (cs) | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy | |
| CA1097219A (en) | Respiratory syncytial vaccine | |
| US2934473A (en) | Bovine rhinotracheitis vaccine and methods of production | |
| US4215107A (en) | Parainfluenza virus vaccine and its preparation | |
| US3585108A (en) | Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same | |
| CN112402599B (zh) | 一种犬用犬瘟热、细小病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| US3704203A (en) | Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same | |
| Makoschey et al. | Serum-free produced Bovine Herpesvirus type 1 and Bovine Parainfluenza type 3 virus vaccines are efficacious and safe | |
| Yamagishi et al. | Infectivity assay and neutralization test for equine influenza virus in microplate cell cultures | |
| RU2297452C2 (ru) | Штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов |