CS254937B1 - Bivalentná vakcína proti nákaziivéinu chlamýdiovému a paratýfovému zmeíaniu oviec a sposob jej výroby - Google Patents

Abstract

Bivalentná vakcína proti nakažlivému chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec s olejovým adjuvans je určená k i- munizácii oviec a haranov proti týmto dvom ochoreniam. Obsahuje kmen Chlamydia psit- taci, ktorý bol izolovaný na území ČSSR a kmen Salmonella abortus ovis izolovaný vo Velkej Británii. Olejový adjuvans vhodné potencuje účinnost vakcíny. Antigen Chlamydia psittaci sa připravuje pomnožovaním tohoto mikroba na Zítkových vakoch kuřácích embryí, antigén Salmonella abortus o- vis pomnožovaním salmonel v tekutej po- nmožovacej pode za použitia submerznej kultivácie. Na inaktiváciu oboch mikrobíál- nych druhov sa používá formaldehyd v množstve 0,5 ml na 100 ml kultúry. Jedna vakcinačná dávka, ktorá představuje 4 ml vakcíny, obsahuje tieto množstvá účinných látok: Chlamydia psittaci 50 Salmonella abortus ovis 2X 5,6 . 109 mikróbov

Description

Vynález sa lýka bivalentnej vakcíny proti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfo vému zmetaniu oviec s olejovým solvens a sposobu jej přípravy. V súvislosti s budováním podnikov s velkou koncentráciou oviec sú nutné účinné preventivné opatrenia před infekčnými chorobami postihujúcimi tento druh zvierat. Tieto dve nákazy, ktoré patria medzi zoonózy, vyvolávaje u dospělých ovcí ahorty, u jahniat sepíické formy ochore nia s nasledujúcimi úhynmi. Chlamydia psiť taci naviac vyvolává u baranov orchitídy, e pididymitídy a vesikulitídy, pričom plemenný baran vylučuje spennou virulentně bak térie Chl. psittaci. Chlamydia psittaci představuje jedného z dvoch reprezentantov rodu Chlamydia, pričom niektoré kmene sa vyznačuju výraznou afinitou ku gravidnému uteru (STORZ, J.: Chlamydia and ChlamydiaInduced Diseases, Charles C., Thomas Publisher, Springfield, Illinois, USA, 1971, s. 171 až 207], kde vyvolávajú zápal placenty, čoho dósledkom je u vačšiny infikovaných zvierat potrat (STAMP, J. T. a kol.: Enzootic abortion in ewes. I. Transmission of the disease. Vet. Rec., 62, 1950, s. 251—254; TRÁVNIČEK, M. a kol.: Veterinářství, XXVIII, 1978, č. 12, s. 541). Ekonomická závažnost chlamýdiových aborlov je vysoká. V čerstvo infikovaných stádach može abortovať 56,9 % gravidných bahníc (WACHENDORFER, G., VALDER, W. A.: Der Praktische Tierarzt, 1976, č. 7, s. 422—426] resp. až 80 % bahníc (HIEPE, Th.: Schafkrankheiten, VEB Gustav Fischer Verlag Jena, 1970, s. 119). Živonarodené jahňatá od infikovaných matiek sa vyznačujú nízkou životaschopnosťou, váčšinou hynú do 48 hodin, resp. trpia na pneumónie, polyartritídy a keratokonjuktivitídy. Kmene Chlamydia psittaci, ktoré vyvolávají! aborty u oviec, móžu vyvolat aborty tiež u gravidných žien (JOHNSON, W. A. a kol.: Brit. Med. J. Febrary, 1985, 290, s. 592—594], resp. systémové a orgánové onemocnenia (atypická pneumónia, tromboflebitídyť predovšetkým u profesionálně exponovaných pracovníkov (Surveillance zoonóz, ORNITÓZY, SLOVENSKO, 1978, s, 1—6, vydává Komisia vlády SSR pre koordináciu práce na úseku boja proti ochoreniam přenosným zo zvierat na l'udí). Salmonella abortus ovis vyvolává u oviec paratýfové zmetanie, pričom v infikovanom stádě móže abortovať 40—60 % oviec (VRZGULA, L. a kol.: Choroby oviec, Příroda, Bratislava, 1973, s. 21; HIEPE, Th.: Schafkrankheiten, VEB Gustav Fischer Verlag Jena, 1970, s. 142). V dosledku komplikaci! po aborte (retencia sekundín, endometritídy) uhynie v stádě až 5 % dospělých oviec. Nákaza postihuje aj narodené jahňatá, ktoré hynú na sepsu. Nakazit sa móže aj člověk. V súčasnej době sa v ČSSR na prevenciu infekčných potratov oviec vyrába monovalentná chlamýdiová vakcína bez adjuvansu ako aj vakcína proti paratýfovému nákazlivému zmetaniu kobýl a oviec. Jedná sa o bujónoví! kultúru dvoch bakteriálnych kmeňov Sclmonella abortus equi a Salmonella abortus ovis, inaktlvované teplom a konzervované fenolom. Vakcína je bez adjuvans a slúži k ochrannému očkovaniu chovných kobýl a oviec proti paratýfovému zmetaniu. Vakcíny proti chlamýdiovému zmetaniu oviec sa vy rábajú v nasledujúcich európskych štátoch: Maďarsko — firma Phylaxia vyrába monovalentnú vakcínu s aluminium hydroxyď gelom. Vakcína v dávke 2 ml s. c. sa používá na prevenciu chlamýdiových abortov oviec. Francúzsko — firma IST (Institut de Sérothérapie de Toulouse] vyrába vakcínu Clila mystan. Jedná sa o ínonnvalentnú vakcínu s olejovým adjuvans, ktorá sa používá na prevenciu chlamýdiových infekci! υ oviec v dávke 2 ml s. c. a u hovádzieho dobytka v dávke 5 ml s. c. Anglicko — firma Wellcome vyrába monovalentnú vakcínu s olejovým adjuvans, určenú na prevenciu chlamýdiového abortu oviec v dávke 1 ml s. c. NDR — z iiterárnych údajov je známe (VALDER,

A., WACHENDORFER, G.: Untersuchungen zur Wirksamkeit der Vakzination gegen den Chlamydien abort des Schafer, Deutsch. Tierárztl. Wschr., 82, 1975, 6, s. 220 -225), že v NDR sa experimentálně použila raonovalentná chlamýdiová vakcína bez adjuvans vyrobená v laboratórnych podmienkach. Proti paratýfovému zmetaniu oviec sa vyrába monovalentná vakcína v NDR a NSR, pričom v obidvoch prípadoch sa jedná o hujúnovú kultúru kmeňov Salmonella abortus ovis, umrtvených formalínom bez adjuvans. Používá sa na prevenciu paratýfového zmetania v dávke 5 a 10 ml s. c. Podía dostupných informácií sa vo svete nevyrába vakcína proti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec s olejovým adjuvansom.

Chlamydia psittaci v organizme ovce vyvolává v gravidnej maternici zápal plodových obalov, dósledkom čoho je prerušenie spojenia medzi matkou a plodom a následné abort. Salmonella abortus ovis vyvolává zápal uteru, celkový septický stav v orga nižme matky a plodu, čoho dósledkom jo odúmrť plodu a jeho vypúdenie z těla matky.

Zloženie olejového solvens použitého v bivalentnej vakcíne je uvedené v ďalšom texte na str. 6. Obdobnú receptúru má aj olejové solvens z Biovety Nitra. Přesné zloženie olejových solvens použitých vo vakcínach firiem Wellcome a I. S. T, tieto firmy v návodoch na použitie neuvádzajú, resp. ich z komerčných dovodov utajujú. Fir ma Wellcome popisuje olejové adjuvans použité vo svojej vakcíne ako fahký, tekutý parafín, firma I. S, T. len ako olejové adjuvans.

Podstatou vynálezu je bivalentná vakcína proti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec vyznačujúca sa tým, že obsahuje inaktivované elementárne telieska kmeňa Chlamydia psittaci v množstve 50 /íg na 4 ml vakcíny a inaktivované bakteriálně telá kmeňa Salmonella abortus ovis v množstve minimálně 2X 5,6 .10⁹ mikróhov na 4 ml vakcíny. Bivalentná vakcína sa vyznačuje tým, že obsahuje kmeň Chlamydia psittaci CAMP R-24 a kmeň Salmo nella abortus ovis CCM 5611, ktoré sú uložené v Sbírce patogenních mikroorganismů, Výzkumný ústav, veterinárního lékařství, Brno, Hudcova 70. Táto bivalentná vakcína sa ďalej vyznačuje tým, že obsahuje zriedovač vo formě lipoidného adjuvans pufrovaný fyziologický roztok a konzervans. Podstatou vynálezu je tiež sposob výroby vakcíny spočívajúci v tom, že kmeň Chlamydia psittaci sa pomnožil je na žltkových vakoch kuřácích embryí po dobu 4 až 7 dní, po vybratí žltkových vakov následuje inaktivácia formaldehydom a homogenizácie a po odstředění purifikácie antigenu éterom. Kmeň Salmonella abortus ovis sa pomnožuje v másopeptónovom bujóne pri teplote 37 °C, potom sa inaktivujo formaldehydom a následné sa zmieša inaktivovaná kultura Calmonella abortus ovis s adjuvansom a s koncentrovaným antigénom Chlamydia psittaci a po homogenizácii sa rozplňuje. Spósob výroby sa vyznačuje tým, že olejový adjuvans sa zmieša v rovnakom objemovom pomere s inalttivovanou kulturou Salmonella abortus ovis.

Vakcína podfa vynálezu je určená k aktívnej imunoprofylaxii gravidných oviec ak aktívnej imunoprofylaxii plemenných baranov. Medzi výhody, ktoré uvedená vakcína prináša, patří:

— súčasné posobenie proti dvora závažným infekčným ochoreniam, ktoré sú radené medzi zoonózy, — zlepšenie stability vakcína v dósledku použitia olejového adjuvans, — vyššia úroveň chránenosti zvierat proti obidvom nákazam v dósledku použitia olejového solvens, — radikálně zníženie výskytu abortov u oviec, vyvolávaných chlamýdiami a salmonelami a súčasné zníženie úhynov jahniat do 48 hodin po narodení, — zníženie možnosti traumatizácie gravidných oviec, pretože počet manipulácií so zvieratami sa zníži zo 4 monovalentných vakcín na 2 u vakcíny bivalentnej, — v porovnaní s nákladmi na výrobu monovalentných vakcín, sú náklady na výrobu bivalentnej vakcíny nižšie.

Vakcína představuje suspenziu inaktivovaných elementárnych teliesok Chlamydia psittaci a inaktivovaných bakteriálnych tiel Salmonella abortus ovis v pufrovanom fyziologickom roztoku, konzervované formaldehydom a olejovým zriedovačom. Komponenty na přípravu bivalentnej vakcíny proti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfové6 mu zmetaniu oviec s olejovým adjuvansom:

1. Kmeň Chlamydia psittaci CAMP R-24, izolovaný v ČSSR, povodně označenie EPá 4/85 Debrad.

2. Kmeň Salmonella abortus ovis CCM 5611 izolovaný vo V. Británii, povodně označenie: NCTC 10241, J. Taylor, CPHL London.

3. Kuracie embryá 5—7dňové, získané z násadových vajec podta ČSN.

4. Pufrovaný fyziologický roztok o pH 7,2, 0,25 sacharózový roztok vo fosfátovom pufri, 1 M roztok chloridu sodného.

A. Pufrovaný fyziologický roztok o pH 7,2

a) příprava fosfátového pufru:

1. 0.15 M roztok hydrofosforečnanu sodného (NazHPCH . I2H2O)

53,79 g destilovaná voda 1 000,0 ml

2. 0,15 M roztok dihydrofosforečnanu draselného 20,41 g destilovaná voda 1 000,00 ml

Na dosiahnutie pufru o pH 7,2 zmiešame roztoky č. 1 a 2 v nasledujúcom pomere:

roztok č. 1 14,3 ml roztok č. 2 5,7 ml

20,0 ml pufru o pH 7,2

b) příprava fyziologického roztoku:

NaC' (chlorid sodný) 8,5 g destilovaná voda 1 000,0 ml

Fyziologický roztok upravujeme pufrom až po dosiahnutie pH 7,2.

B. 0,25 M sacharózový roztok vo fosfátovom pufrovanom fyziologickom roztoku — příprava:

sacharóza 85,6 g pufrovaný fyziol. roztok o pH 7,2

000,0 ml

C. 1 M roztok chloridu sodného (Načl) — příprava:

chlorid sodný 58,44 g destilovaná voda 1 000,00 ml

5. Streptomycín 200 m. j. na 1 ml pufrovaného fyziologického roztoku,

Gentamycín 0,2 mg na 1 ml pufrovaného fyziologického roztoku.

6. Formaldehyd podfa ČSN (36—38 % roztok p. a.) 686236.

7. Zrieďovač a solvens — zloženie:

Olej vazelínový medicinálny AI Csl 3

000 g

Lanolín Čsl 3 8 000 g

Tween 80 (Polyoxyethylene sorbitan monooleate, n ca.20) HLB 15,0; d20 1,07 MWca 1 300 1 600 g

Voda redestilovaná 66 400 g

Popis příkladu prevedenia:

K namnoženiu Chlamydia psittaci (elementárnych teliesok) sa používájú embryonované kuracie vajcia 5—7 dnové. Embryá sa infikujú 20 % hmot. suspenziou připravenou zo žilkových vakov infikovaných kmeňom Chlamydia psittaci v 0,25 M sacharózovom pufrovanom fyziologickom roztoku o pH 7,2 do žítkových vakov. Množstvo inokula je 0,2 až 0,4 ml na 1 embryo. Embryá uhynutá v prvých 3 dňoch vyradzujeme. Embryá uhynuté vo 4., 4. resp. 6. dni (na 7. den sa všetky embryá vyberajú) sa spracu jú následovně:

Vyberu sa žilkové vaky, ktoré sa odvažia. Připraví sa 20 % hmot. suspenzia žilkových vakov s 1 M roztokom NaCl, pričom na každých 100 m' suspenzie sa přidá 0,5 ml formaldehydu. Materiál sa homogenizuje v mixéri počas 3 minút. Zhomogenizované žltkové vaky sa uložia do chladničky pri +4 stupňoch Celzia na 72 hodin. Následuje centrifugácia pri 15 000 ot./min. po dobu 30 minút. Odstráni sa tuk a supernatant. Se diment sa resuspenduje v dostatočnom množstve fyziologického roztoku (Ví pfivodného objemu) rozmiešaním. Suspenzia sa naleje do deliaceho lievíka a přidá sa 1,5násobok objemu éteru. Dobré sa pretrepe a uloží sa do chladničky cez noc. Důjde k diferenciácii fáz. Používá sa vodná fáza, ktorá obsahuje elementárne telieska Chlamydia psittaci. Zbytky éteru sa odstránia prebublávaním vzduchom. Následuje ďalšia centrifugácia pri 15 000 ot./min. po dobu 30 minút. Sediment sa resuspenduje v Ví původného objemu vo fyziologickom roztoku. Suspenzia v deliacom ^:ieviku sa znova zmieša s éterom. Na separáciu jednotlivých vrstiev stačia teraz 2—3 hodiny. Následuje vybublanie éteru a závěrečná centrifugácia pri 12 00 ot./min. počas 30 minút. Sediment sa nariedi fyziologickým roztokom tak, aby vznikol fahko zakalený roztok. Z takto nariedeného antigénu připravíme 3 až 5 riedení v pomeroch 1 : 4, 1 : 8, 1 : 16, 1 : 32 a 1 : 64. Následuje meranie hodnot extínkcie na spektrofotometr! pri vlnovej dížke 420. Antigén sa meria oproti pufrovanému fyziologickému roztoku o pH 7,2. Následným výpočtom za použitia koeficientu pre Chlamydia psittaci nastavíme obsah účinnej látky na 1 mg na 1 ml. Obsah účinnej látky vo vakcinačnej dávke — 50 /.íg na 4 ml sa dosiahne následným riedenim pomocou solvens.

Příprava antigénu Salmonella ahortus ovis. Lyofilizovaný vakcinačný kmeň Salmonella abortus ovis sa po otvorení ampulky rehydratuje v 0,2 ml masopeptonóvého bujónu a vyočkuje sa kfučkou na masopeptonový agar a na Endov agar, kde sa inkubuje 24 hod. pri 37 ^CC. Na ďalšie pomnožovsnie kmeňa Salmonella abortus ovis sa používá tekutá pomnožovacia půda nasledujúceho zloženia:

Enzymatický kazeinový hydrolyzát

Imuna 10,0 g

Kyslý kazeinový hydrolyzát 10,0 g

Sójový pepton 5,0 g

Chlorid sodný 5,0 g

Destilovaná voda ad 1 000,0 ml

Z Endo agaru sa kfučkou prenesie kultúra do násad s obsahom 50 ml vyššie popísanej tekutej pomnožovacej pódy. Po 6 hodinové) inkubácii pri 37 ^CC sa násada naočkuje do 10 litrových fliaš s obsahom 3 003 milllitrov tekutej pomnožovacej půdy za přísné sterilných podmienok (naliatie cez plameň), ffaše sa po výžíhaní hrdla starostlivo uzavrú. Po premiešaní sa kultivujú 2 hodiny staticky pri 37 °C a potom následuje submerzná kultivácia na třepačko 18 hodin pri 37 °C. Po kultivácii sa urobí odběr vzoriek z každej kultivačně] ffaše na stanovenie počtov mikróbov a na kontrolu čistoty kultúry. Narastená kultúra sa po odbere vzoriek inaktivuje formaldehydom v množ štve 0,5 ml na 100 ml kultúry po dolní 24 hodin pri 37 ^CC. Stanovenie čistoty kultu ry sa urobí vyočkovanlm na masopsptónový agar, Endov agar, agar s brilantovou modrou a galaktózou. Stanovenie počtu mikróbov sa robí pomocou spektrofotometra. 1 ml narastenej kultúry obsahuje minimálně 5,6 . . 10⁹ jedincov Salmonella abortus ovis.

Zmiešanie antigénov Chlamydia psittaci a Salmonella abortus ovis a pridanie olejového solvens. Inaktivovaná kultúra Salmonella abortus ovis, ktorá obsahuje v 1 ml minimálně 5,6 . 10⁹ mikróbov sa zmieša s rovnakým objemom olejového solvens (poměr 1 : 1). Na každý liter takto pripravenej vakcíny sa přidá 12,5 ml koncentrovaného antigénu Chlamydia psittaci (obsah účinnej látky 1 mg v 1 ml) čím sa dosiahne výsledná koncentrácia 50 ,ug na 4 ml vakcíny. Výsledná koncentrácia antigénov bude v 1 vakcinačnej dávke, t. j. v 4 ml nasledovná:

Salmonella abortus ovis

2X 5,6 . 10⁹ mikróbov

Chlamydia psittaci 50 μ%

Kontrola hotovej vakcíny: a) Skúška sterility:

Vakcína sa vyočkuje na krvný agar, Endov agar a thioglykolátový bujón, ktoré počas 48 hodinovej inkubácii pri 37 °C musia ostať sterilné.

b) Skúška inaktívácie:

Vakcína o objeme 0,2 ml sa injikuje do žítkových vakov 5—7 dňových kuřácích embryí, pričom v priebehu 5 dní nesmie dójsť k pomnoženiu Chlamydia psittaci. Vakcína sa vyočkuje 2X na šikmý masopeptónový agar, 0,5 % hmot. hovadzí bujón a glukózový agar, ktoré sa inkubujú 7 dní pri 37 °C a súbežne 10 dní pri izbovej teplote. Počas tejto inkubácie nesmie dójsť k narasteniu Salmonella abortus ovis.

c) Skúška neškodnosti:

králikom sa aplikuje s. c. dvojnásobná dávka, t. j. 8 ml vakcíny. Posúdenie po 10 dňoch. Vakcína musí byť neškodná. V mieste aplikácie móže vzniknut reakcia, ktorá behom 14 dní mizne. Nesmie byt narušený celkový zdravotný stav. Doterajšie výsledky:

Králíky

Počet Dávka Spósob podania Dni kusov

123456789 10

8 ml s. c.

' 4 ml s. c.

Ovce

4 ml s. c.

8 ml s. c.

neg.

neg.

neg.

neg.

dj Skúška neškodnosti je založená na vzostupe hladin proti!álok u zdravého králíka voči antigenu Chlamydia psitlaci a Salmonella abortus ovis. Králikom sa aplikuje 4 ml vakcíny s. c. Po 10 dňoch sa urobí revakcinácla tou istou dávkou. Po dalších 14 dňoch sa kardiálnou prnkciou odoberá krv a zisfujú sa hladiny protilátok. Na detekciu chlamýdiových protilátok používáme metodu reakcie vazby komplementu, na detekciu salmonelových protilátok metodu pomalej skúmavkovej ag’utinácie. Za účinný považujeme antigén, voči ktorému sa vytvoria protilátky minimálně v riedení 1 : 16, resp. rozdiel proti iniciálnym tiírom musí byť v priemere 2 riedenia. Doterajšie výsledky:

Králíky — aplikovaná kompletná vakcína

Králík číslo	Dávka	Spósob podania	Chlamýdle před vakc.	— protilátky po vakc.	před vakc.	po vakc.
1	4 ml	s. c.	0	32	0	160
2	4 ml	s. c.	0	32	0	80
3	4 ml	s. c.	0	32	0	40
4	4 ml	s. c.	0	32	0	80

Aplikovaný len chlamýdiový antigén s olejovým adjuvansom —

1	2 ml	s. c.	0	32	0	10
2	2 ml	s. c.	0	64	0	10
Aplikovaný len salmonelový antig	,éo s olejovým a	djuvansom —
1	2 ml	s. c.	0	8	0	40
2	2 ml	s. c.	0	8	0	20

Ovce — aplikovaná kompletně vakcína

Ovca číslo	Dávka	Sposob podania	Chlamýdie před vakc.
1	4 ml	s. c.	16
2	4 ml	s. c.	8
3	4 ml	s. c.	16
4	4 ml	s. c.	16
5	4 ml	s. c.	8
6	4 ml	s. c.	8
7	4 ml	s. c.	16
8	4 ml	s. c.	0
9	4 ml	s. c.	8
10	4 ml	s. c.	16
11	4 ml	s. c.	32
12	4 ml	s. c.	16
e) Stanovenie pH sa	nastaví na	7,0 +0,3.
f) Vzhtad	vakcíny:	Vakcína	představuje

mliečne bielu zakalená olejovitú tekutinu bez sedimentu a vločiek.

Vakcína bola pokusné vyrobená a ověřená v rámci laboratórneho overovania u králikov a oviec (viď vyššie uvedené výsledky). V rámci laboratórneho overovania sa použili vakcinačné výsledky). V rámci laboratórneho overovania sa použili vakcinačné dávky 2, 4 a 8 ml s. c. kvůli zisteniu znášanlivosti vakcíny a sledovaniu postvakcinačných titrov. V priebehu overovania neboli zistené žiadne postvakcinačné reakcie ani u oviec ani u králikov. Vzostup protilátok u oviec voči obidvom antigénom poukazuje na dobrá chránenosť, ktorú vakcína vyvolává. Naviac je možné počítat u chlamýdiového antigenu aj s buňkovou zložkou imunity. Vzostup protilátok u králikov poukazuje na vhodnost týchto zvierat pri testovaní účinnosti vakcíny.

Z čelenžných pokusov bol zatial' urobený predpokus na stanovenie dávky pre vlastnú čelenž. V predpokuse sa použil homológny kmeň, ktorý bol podaný i. v. v dávke 2 a 4 cm³ a s. c. v dávke 2 a 4 cm³. Pokus zatial' nie je ukončený, bude pokračovat v najbližšom pripúšťacom období oviec. V predpokuse sa sledovali nasledujúce ukazovatele: TRIAS, sérologické vyšetrenie pomocou RVK, heniatologické vyšetrenie, Skin-test a klinické sledovania.

protilátky Salmonelly — protilátky po vakc. před vakc. po vakc.

64	0	40
32	10	40
64	10	20
32	10	20
32	10	40
64	20	40
256	10	40
16	0	20
128	10	80
64	10	40
128	10	80
64	10	40

Klinické overovanie vakcíny proti chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec sa vykonávalo podta metodiky schválenej ÚSKVBL v Brně. Vlastně overovanie sa robilo v dvoch chovoch oviec a to na JRD Velký Lipník, okr. Stará Lubovňa a JRD Drienov, okr. Prešov. Výsledky overovania sú nasledujúce:

JRD Vel'ký Lipník, okr. Stará Lubovňa

Biologický pokus na 20 ks oviec vykonaný 20. 5. 1986. Bola podaná vakcína podta návodu. Žiadne lokálně resp. celkové změny zdravotného stavu neboli pozorované. Bola podaná dávka 10 ml s. c. Vakcinácia — bolo vakcínovaných 200 bahníc po synchronizácii. Vakcinácia sa urobila 28. 5. 1986, súčasne bol urobený odběr krvných vzoriek na zistenie iniciálnych hladin protilátok u 30 ks. Revakcinácia — sa vykonala 18. 6. 1986 táktiež u všetkých 200 ks bahníc a sňčasne sa urobil odběr krve od 30 ks individuálně označených zvierat. Ďalšie odběry krvných vzoriek sa urobili po 2 a 4 mesiacoch po revakcinácii.

Výsledky sérologických vyšetření (titre) za použitia KFR a antígénu Chl. psittaci sú uvedené vo zvláštnej Správě o klinickom overovaní vakcíny.

Kontrolnú skupinu představovalo 312 ks oviec, ktorým bo o podané placebo (adjuvans bez antigenu) a ktorá bola držaná oddelene od pokusnej skupiny. Výskyt abortov v uvedených skupinách bol nasledujúci:

	Počet oviec	Počet abortov	%	Příčina
skup. vakc.	200	4	2,0	neinfekčná
skup. kontr.	312	27	8,33	ChL psittaci
Porovnanie výskytu	abortov s minulou	sezónou je nasledujúce:
	Počet oviec	Počet abortov	%	Příčina
1985-86	557	39	7,0	Chl. psittaci
1986-87	312	27	8,33	Chl. psittaci
Kontr. skup.	200	4	2,0	neinfekčná
Hodnotenie		ný 17. 6.	1986. Bola	podaná vakcína podl'.

Dynamika tvorby protilátok po podaní chlamýdiového antigénu mala výrazný vzostup po prvej 'átke. Druhá dávka tieto liladiny čiastočne udržala. Výšky hladin protilátok u chlamýdiových vakcín však nie je v priamej úměrnosti s protektívnym účinkom vakcíny, pretože tu zohráva hlavnú úlohu buňková zložka imunity. U protilátok voči antigénu saimonel bol vzestup protilátok najvyšší po 1. dávke, kým 2 mesiace po revakcinácii sme zaznamenali mierny vzostup.

Samotná vakcína bola znášaná ovcami bez akýchkofvek lokálnych či celkových reakcií. Případné zdravotně poruchy nesúviseli s podáním vakcíny. Výskyt abortov vo vakcinovanej skupině a skupině kontrolnej, resp. v chove v predchádzajúcej sezóně svědčí pre kladný efekt po vakcinácii. JRD Drienov, okres Prešov

Biologický pokus na 20 ks oviec vykonanávodii. Žiadne lokálně resp. celkové změny zdravotného stavu neboli pozorované.

Vakcinácia — bolo vakcinovaných 274 ks bahníc po synchronizácli. Vakcinácia sa urobila 26. 6. 1986, súčasne bol urobený odběr krvným vzoriek na zistenie iniciálnych hladin protilátok u 30 ks individuálně označených oviec.

Revakcinácia — sa vykonala 21. 7. 1986 u všetkých vakcinovaných kusov. Súčasne sa urobil odběr krvných vzoriek od 30 individuálně označených oviec.

Výsledky sérologických vyšetření (titre) za použitia KFR a antigénu Chl. psittaci sú uvedené vo zvlášínej Správě o klinickom overovaní vakcíny.

Kontrolní! skupinu tvořilo 270 ks oviec, ktorým bolo podané placebo (adjuvans bez antigénu) a ktorá bola držaná oddelene od pokusnej skupiny. Výskyt abortov v uvedených skupinách bol nasledujúci:

	Počet oviec	Počet abortov	%	Příčina
skup. vakc.
(okotené)	174	2	1,14	neinfekčná
skup. kontr.	270	13	4,81	nezistená inf. etiológia

Porovnáme výskytu abortov s minulou sezónou je nasledujúce:

	Počet oviec	Počet abortov	%	Příčina
1985-86	464	26	5,60	Chl. psittaci
1986-87	270	13	4,81	nezistená inf. příčina
kontr. skup.	174	2	1,14	neinfekčná
Hodnotenie		zaznamenali sme	žiadne lokálně či celkové

Vzostup protilátok voči antigénu Ohi. psittaci bol výraznější po 2. dávke. Hladiny protilátok po 4 mesiacoch po revakcinácii sa výrazné znížili. Protektívny účinok chlamýdiovýcli vakcín je založený predovšetkým na bunkovej zložke imunity. U protilátok voči salmonelovému antigénu sme zaznamenal vzostup už po prvek dávke vakcíny.

Vakcína bola znášaná ovcami vefmi dobré podobné ako v lokalitě Vel'ký Lipník. Nereakcie. Zníženie výskytu abortov u vakcinovanej skupiny v porovnaní so skupinou kontrolnou a predchádzajúcou sezónou svědčí o protektívnom účinku vakcíny.

Postvakcinačná buněčná imunita sa hodnotila iba na malom súbore zvierat a tak výsledky t. č. nie sú smerodajné. Výsledky testovania 4 antigénov na modelových zvieratách (morča, myš) za použitia Skin-testu podfa FAYE a kol. (1974) sú následovně: v kožnom teste zo štyroch testovaných kme254937 ňov najintenzívnejšie reagoval vakcinačný kmen — šířka indurácie 6—9 mm, čo představuje 4. stupeň stupnice podlá Faye. Ako kontroly boli použité:

1. Tuberkulínový alergen v množstve 50 |Ug.

2. Antigén připravený z neinfikovaného žítkového vaku.

Claims (7)

1. Bivalentná vakcína proti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec vyznačujúca sa tým, že obsahuje inaktivované elementárne telieska Chlamydia psittaci v množstve 50 ^g na 4 ml vakcíny a inaktivované bakteriálně telá kmeňa Salmonella abortus ovis v množstve minimálně 2X 5,6 . 10⁹ mikróbov na 4 ml vekcíny a adjuvans v množstve 2 ml na 4 ml vakcíny.

2. Bivalentná vakcína podlá bodu 1, vyznačujúca sa tým, že obsahuje kmeň Chlamýdia psittaci CAPM R-24, ktorý v organizme ovce vyvolává zápal plodových obalov čoho následkom je abort.

3. Bivalentná vakcína podlá bodu 1, vyznačujúca sa tým, že obsahuje kmeň Salmonella abortus ovis CCM 5611, ktorý v organizme ovce vyvolává septický stav matky a plodu a jeho odúmrť, čoho následkom je abort.

4. Bivalentná vakcína podlá bodov 1 až 3 vyznačujúca sa tým, že obsahuje pufrovaný fyziologický roztok a konzervans a zrieďovač vo formě lipoidného adjuvans.

5. Sposob výroby bivalentnej vakcíny proYNÁLEZU ti nákazlivému chlamýdiovému a paratýfovému zmetaniu oviec, podfa bodov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že kmeň Chlamýdia psittaci sa pomnožuje na žítkových vakoch kuřácích embryí po dobu 4 až 7 dní, po vybrat! žítkových vakov následuje inaktivácia formaldehydom a homogenizácia a po odstránení purifikácia antigénu éterom a kmeň Salmonella abortus ovis sa pomnožuje v tekutej pomnožovacej pode za použitia submerznej kultivácie pri teplote 37 °C, potom sa inaktivuje formaldehydom a následné sa zmieša inaktivovaná kultúra Salmonella abortus ovis s adjuvansom a s koncentrovaným antigénom Chlamydia psittaci a po homogenizácii sa rozplňuje.

6. Sposob výroby podlá bodu 5 vyznačujúci sa tým, že k infekcii 5—7 denných kuřácích embryí sa používá 10—20 % hmot. suspenzie infikovaných žítkových vakov v dávke 0,2 ml na jedno kuracie embryo.

7. Sposob výroby podfa bodu 5, vyznačujúci sa tým, že sa olejový adjuvans zmieša v rovnakom objemovom pomere s inaktivovanou kultúrou Salmonella abortus ovis.

Severografia, n. p. závod 7, Most

Cena 2,40 Kčs