CS257473B1

CS257473B1 - Method of showing mucus in paraffin sections

Info

Publication number: CS257473B1
Application number: CS863704A
Authority: CS
Inventors: Katarina Tothova
Original assignee: Katarina Tothova
Priority date: 1986-05-21
Filing date: 1986-05-21
Publication date: 1988-05-16
Also published as: CS370486A1

Abstract

Riešenie sa týká spósobu znázornenia hlienu v obore histólogickej techniky, ktorá róznymi farbiacinti metodami znázorňuje biologické štruktúry v živých i neživých objektoch v rámci medicíny a prírodných vied. Očelom riešenia je dokázat přítomnost hlienu v v biologickom materiáli. Podstatou riešenia je ofarbenie hlienu v parafínových rezoch v v prvej fáze pomocou farbív triphenylmethanovej skupiny a farbív tiazinovej skupiny v druhej fáze farbivom oranže G a kyseliny fosfowolfrámovej, ktorá vyzráža hlien a v tretej fáze sa farbí pomocou farbiva safraninu T. Spósob znázornenia hlienu a hlienovitých látok v parafínových rezoch uvedenou metodou má možnost použitia v bioptickej a nekroptickej praxi a pri histologickej výučbe studentov medicíny.The solution concerns a method of representing mucus in the field of histological technique, which uses various staining methods to depict biological structures in living and non-living objects in medicine and natural sciences. The purpose of the solution is to prove the presence of mucus in biological material. The essence of the solution is to stain mucus in paraffin sections in the first phase using triphenylmethane group dyes and thiazine group dyes, in the second phase using orange G dye and phosphotungstic acid, which precipitates mucus, and in the third phase it is stained using safranin T dye. The method of representing mucus and mucus-like substances in paraffin sections by the above method can be used in biopsy and necropsy practice and in histological teaching of medical students.

Description

Vynález rieši farebné znázornenie hlienu v parafínových rezoch.The invention provides a color representation of mucus in paraffin sections.

Na dókaz hlienu a hlienotitých látok sa v patologii doposial používali jednak metody empirické ako napr. farbenie mucikarmínom a mukhemateinom. Tieto matódy sa však pre svoju nešpecifickosť postupné nahradili nasledovnými histochemickými metodami. Polysacharidy sa dokazuji! metodou PAS (Periodic Acid Schiff) , pri ktorej oxidáciou polysacharidov vznikajú dialdehydy, ktoré reagujú so Schoffovou reagenciou za vzniku červenofialového sfarbenia.So far, empirical methods have been used in the pathology for the detection of mucus and phlegm substances. staining with mucicarmine and muchematein. However, these methods were gradually replaced by the following histochemical methods due to their non-specificity. Polysaccharides are proving! PAS (Periodic Acid Schiff) method, which oxidizes polysaccharides to form dialdehydes, which react with Schoff's reagent to produce a reddish-violet color.

Haleho metoda využívá schopnosť kyslýoh skupin glykoproteinov elektrostaticky viazať koloidný roztok trojmocného železa.The Hale method utilizes the ability of acid groups of glycoproteins to electrostatically bind a colloidal iron (III) solution.

Takto viazané železo reaguje dalej s roztokom ferrokyanidu draselného za vzniku nerozpustnej berlínskej modrej. K dalším metodám patří farbenie alciánovou modrou, ktorá je básickým farbivom ftalociaminového typu s komplexně viazaným atómom médi a tiež metoda metachromatickej reakcie s toluidínovou modrou. Okrem týchto najznámejších metod existuji! ešte dalšie ale váčšinou sú to modifikácíe týchto už spomínaných histologických metodik.The thus bound iron reacts further with a potassium ferrocyanide solution to form insoluble Berlin Blue. Other methods include staining with alcian blue, which is a phthalociamine type complex dye with a complex bonded medium, and also a method of metachromatic reaction with toluidine blue. In addition to these best known methods exist! yet others are mostly modifications of these already mentioned histological methodologies.

••

Podstatou vynálezu je znázornenie hlienu v parafínových rezoch na bázi postupného odparafínovania řezu obsahujúceho hlien v organických rozpúšťadlách klesajúcej koncentrácie a následným znázorněním histologickými farbivami tým spósobom, že odparafínovaný rez sa ponechá v destilovanéj vodě po dohu 5 až 30 min a za tým sa rez farbí v troch za sebou nasledujúcich fázach. V prvej fázi sa farbí farbivami triphenylmethanolovej skupiny a tiazinovej skupiny obsahujúcej 1,8 až 2,3 g metjiylzelene a 0,2 až 0,7 g methylénovej modrej rozpustenej v 100 g destilovanej vody po dobu 5 až 15 min.It is an object of the present invention to depict mucus in paraffin sections by gradually dewaxing a slice containing mucus in organic solvents of decreasing concentration and then displaying histological dyes in such a way that the dewaxed section is left in distilled water for 5 to 30 minutes and then cut in three successive stages. In the first phase, they are dyed with dyes of the triphenylmethanol group and the thiazine group containing 1.8 to 2.3 g of methylene green and 0.2 to 0.7 g of methylene blue dissolved in 100 g of distilled water for 5 to 15 min.

Po ofarbení sa rez opláchne vo vodovodnej vodě a v druhej fáze sa farbí roztokom skladajú cim sa z 3,5 až 5,5 g kyseliny fosfowolfrámovej a z 1,5 až 2,3 g oranže G rozpustnej v 100 g destilovanej vody, ktorým sa hlien zráža 2 až 3 s a po opláchnutí řezu vo vodovodnej vodě sa v třetej fáze farbí farbiacim roztokem skladajúcim sa z 1,5 až 2,3 g safraninu T rozpuštěného v 100 g destilovanej vody po 1 až 2 s farbenia sa rez opláchne vodovodnou vodou, nechá volné uschnúť na vzduchu a namočí sa do xylénu, kde sa ponechá po dobu 5 až 10 min. Za tým sa rez převrství,médiom, například kanadským balzamom rozpustným v xylene.After staining, the incision is rinsed in tap water and the second phase is stained with a solution consisting of 3.5 to 5.5 g of phosphotungstic acid and 1.5 to 2.3 g of orange G soluble in 100 g of distilled water to precipitate the mucus. 2 to 3, after rinsing the cut in tap water, in the third phase, dye with a staining solution consisting of 1.5 to 2.3 g safranin T dissolved in 100 g of distilled water for 1 to 2 s staining, rinse the cut with tap water, leave free dry in air and soak in xylene, where it is left for 5 to 10 min. Thereafter, the incision is overlaid with a medium, such as a Canadian xylene-soluble balsam.

Výhoda vynálezu spočívá v značnej časovej úspoře voči predchádzajúcim spósobom farbenia, rýchla a nenáročná příprava farbiacich roztokov, dlhodobá trvanlivost ofarbených preparátov, dobrá farebná rozlišitelnost tkanivových štruktúr a táto metoda prispieva tiež k dalšiemu objasňovaniu vlastností hlienu a hlienovitých látok.The advantage of the invention lies in considerable time savings compared to the previous dyeing methods, fast and undemanding preparation of dye solutions, long-term durability of dyed preparations, good color differentiation of tissue structures, and this method also contributes to further clarification of mucus and mucous substances properties.

Příklad prevedeniaExecution example

Ako materiál obsahujúci hlien sa použije excízia z humánnej slinnej žlázy glandula submandibuláris, ktorá sa fixuje 4% formaldehydom. Z parafínového řezu sa odstráni parafín pomocou organických rozpúštadiel klesajúcej koncentrácie a nakoniec sa rez ponechá v destilovanej vodě po dobu 5 až 10 min. Potom sa rez ponoří do sklenenej kyvety obsahujúcej farbiaci roztok pozostávajúco z 1,8 až 2,3 g methylzelene a 0,2 až 0,7 g methylénovej modrej rozpustenej v 100 g destilovanej vody po dobu 5 až 15 min.The mucus-containing material is an excision from the human salivary gland glandula submandibularis, which is fixed with 4% formaldehyde. The paraffin slice is removed with a decreasing concentration of organic solvents and finally the slice is left in distilled water for 5 to 10 min. Then the section is immersed in a glass cuvette containing a coloring solution consisting of 1.8 to 2.3 g of methyl green and 0.2 to 0.7 g of methylene blue dissolved in 100 g of distilled water for 5 to 15 min.

Po uvedenej době sa vykoná dókladný ale nie dlhý oplach vo vodovodnej vodě a ponoří sa rez do dalšej kyvety obsahujúcej farbiaci roztok, ktorý pozostáva z 3,5 až 5,5 g kyseliny fosfowolfrámovej a z 1,5 až 2,3 g oranže G rozpústenej v 100 g destilovanej vody, ktorý vyzráža hlien po dobu 2 až 3 sec. Po uvedenej době sa vykoná dókladný ale nie dlhý oplach vo vodovodnej vodě a ponoří sa rez do dalšej kyvety obsahujúcej farbiaci roztok, ktorý pozostáva z 1,5 až 2,3 g safraninu T rozpuštěného v 100 g destilovanej vody.After this time, a thorough but not long rinse in tap water is performed and the cut is submerged in another cuvette containing a dye solution consisting of 3.5 to 5.5 g of phosphotungstic acid and 1.5 to 2.3 g of orange G dissolved in 100 g of distilled water which precipitates mucus for 2 to 3 sec. After this time, a thorough but not long rinse in tap water is performed and the cut is submerged in another cuvette containing a coloring solution consisting of 1.5 to 2.3 g of safranin T dissolved in 100 g of distilled water.

V tejto kývete sa farbí rez po dobu 1 až 2 s. Znova sa vykoná krátký oplach vo vodovodnej vodě a nechá sa rez volné usušit na vzduchu. Po jeho zaschnutí sa ponoří do kyvety obsahujúcej xylén, ponechá sa po dobu 5 až 10 min v nej a dalej sa zakrýva do médii rozpustných v xylene.In this nod, the incision is stained for 1 to 2 s. Rinse briefly in tap water again and allow the cut to air dry. After drying, it is immersed in a xylene-containing cuvette, left there for 5 to 10 minutes, and then covered in xylene-soluble media.

Výsledok farbenia je nasledovný: hlienové mucinózne tubuly slinných žliaz sú tehlovočervené, sekrét slinných žliaz nachádzajúci sa vo vývodných cestách sa ofarbí na -modrozeleno a vazivo je hnědé. Dobré výsledky sú aj pri ofarbení tráviacej a dýchacej sústavy.The staining result is as follows: the mucinous mucinous tubules of the salivary glands are brick-red, the salivary gland secretions found in the ducts are stained -blue-green and the connective tissue is brown. Good results are also in the coloring of the digestive and respiratory systems.

Spósob znázornenia hlienu a hlienovitých látok v parafínových rezoch uvedenou metodou má možnost použitia v bioptickej a nekroptickej praxi na oddeleniach patologie a pri histologickej výučbe študentov medicíny.The method of representation of mucus and mucous substances in paraffin sections by this method has the possibility of use in biopsy and necroptic practice in the departments of pathology and in the histological teaching of medical students.

Claims

OBJECT OF THE INVENTION

A process for depicting mucus in paraffinic slices based on the gradual dewaxing of a slice containing mucus in organic solvents of decreasing concentration and then depicting, for example, histological dyes, characterized in that the dewaxed slice is left in distilled water for 5 to 10 minutes followed by dyeing in three in successive phases, in the first phase they are dyed with dyes of a triphenylmethane group and a thiazine group containing 1.8 to 2.3 g of methyl green and 0.2 to 0.7 g of methylene blue, dissolved in 100 g of distilled water for 5 to 15 g min, followed by coloring with a solution consisting of 3.5 to 5.5 g of phosphotungstic acid and 1.5 to 5.5 g

2.3 g of orange G dissolved in 100 g of distilled water, which precipitates the mucus for 2 to 3 seconds and, after rinsing the cut in water, dye in the third phase with a dyeing solution consisting of

2.3 g of safranine T dissolved in 100 g of distilled water, after 1 to 2 s staining, rinse with water, allow to air dry, immerse in xylene for 5 to 10 min. xylene.