CS258637B1 - Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy - Google Patents
Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS258637B1 CS258637B1 CS869692A CS969286A CS258637B1 CS 258637 B1 CS258637 B1 CS 258637B1 CS 869692 A CS869692 A CS 869692A CS 969286 A CS969286 A CS 969286A CS 258637 B1 CS258637 B1 CS 258637B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- enzyme
- preparation
- endopolygalacturonase
- carrier
- pectolytic
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 15
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 title claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 7
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- -1 hydroxyalkyl methacrylate Chemical compound 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- GVLZQVREHWQBJN-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethyl-7-oxabicyclo[2.2.1]hepta-1,3,5-triene Chemical compound CC1=C(O2)C(C)=CC2=C1 GVLZQVREHWQBJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical class 0.000 description 1
- JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N epsilon-caprolactam Chemical compound O=C1CCCCCN1 JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
Vynález sa týká nerozpustných derivátov pektoíytických enzýmov a spósobu ich přípravy. Z pektoíytických enzýmov bolí dosial' připravené nerozpustné deriváty viazaním enzýmu na nerozpustné polymérne nosiče na báze agarózy, celulózy, hydroxyalkylmetakrylátu po ich aktivácii brómkyanom [napr. Carbohydr. Res. 32, 233 (1974), Nahrung 22, 185 (1979), Collect. Czech. Chem. Commun. 45, 163 (1980)] a na poly(6-kaprolaktam) alebo na póly (2,6-dimetyl-p-fenylénoxid) po ich aktivácii glutaraldehydom [CS AO 230 892; Biotechnol. Lett. 7, 99 (1985)). Iným sposobom viazania je fyzikálna adsorpcia na polyetyléntereftalát (CS AO 211 694).
Nevýhodou derivátov na báze uvedených nosičov je nedostatočná mechanická stabilita, nevhodné hydrodynamické vlastnosti a často i vysoká cena a preto tieto deriváty našli v praxi len obmedzené použitie. Určitým pokrokom v príprave nerozpustných derivátov bola imobilizácia pektoíytických enzýmov na keramické nosiče obsahujúce chemicky viazanú 3-amínopropyl skupinu. Tento spósob viazania však vyžadoval ďalšiu technologická operáciu a to ošetrenie nosiča glutaraldehydom (CS AO 256 857). Uvedené nedostatky riešia nové látky podlá vynálezu, ktorého podstatou sú nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov obecného vzorca E—L—A a spósob ich přípravy. V uvedenom vzorci E představuje pektolytický enzým endopolygalakturonázu, alebo pektinázový komplex obsahujúci endopolygalakturonázu, pektínesterázu a exopolygalakturonázu, L je distančná spojka, ktorá vzniká interakciou 3- (2‘,3‘-epoxypropoxy) propylsilyl skupiny povrchovo upraveného nosiča s amíno-, karboxylovou, tiolovou, hydroxylovou, imidazolovou, alebo indolovou skupinou enzýmu, A je porézny, alebo neporézny nosič vybraný zo skupiny keramika, silika a sklo. Podstatou sposobu přípravy týchto nerozpustných derivátov pektolytických enzýmov je, že sa nosič, na ktorom sú povrchovo viazané 3-(2‘,3‘-epoxypropoxy)propylskupiny suspenduje v tlmivom roztoku o pH 3,0 až 6,0, přidá sa zmesný preparát pektoíytických enzýmov obsahujúci endopolygalakturonázu, exopolygalakturonázu a pektínesterázu, alebo niektorá z jeho zložiek v množstve 0,03 až 0,1 hmotnostných dielov na 1 hmotnostný diel nosiča, vzniklá suspenzia sa inkubuje za stálého miešania počas 24 až 240 hodin a imobilizovaný enzým sa nakoniec izoluje.
Východzie reaktanty na přípravu týchto látok sú l'ahko dostupně, lebo rozpustné pektolytické enzýmy sú bežne vyrábané pre použitie v potravinárskom priemysle a tiež uvedené nosiče sú vyrábané v širokom rozmedzí zrnitosti, tvarov, poréznosti a velkosti pórov. Pre viazanie enzýmov je však potřebné tieto nosiče vhodné upraviť, t. j. zaviesť na ich povrch 3-(2‘,3‘-epoxypropoxyjpropylskupinu, ktorá tvoří spojku, prostredníctvom ktorej sa enzými viažu na nosič. Túto epoxyskupinu je možné na povrch nosiča 1'ahko zaviesť reakciou s 3-(2‘,3‘-epoxypropoxy jpropyltrialkoxysilanom [napr. Chemické listy 77, 843 (1983)].
Výhodou takto připravených derivátov enzýmov je okrem nízkej ceny a jednoduchej přípravy predovšetkým skutočnosť, že použitý nosič má rigidnú štruktúru a je mechanicky a tepelne stály a ďalej, že je k dispozícií široký výběr velkosti a tvarov častíc i velkosti pórov použitých nosičov, čo umožňuje voliť takú textúru nosiča, ktorá je pre danú aplikáciu vhodná.
Nerozpustné deriváty enzýmov podlá vynálezu je možné použiť na stiepenie a-1,4-glykozidických vazieb v molekule pektanov a na degradáciu pektínových látok. Ich stabilita umožňuje dlhodobé používanie.
Ďalej uvedené příklady charakterizujú nerozpustné deriváty enzýmov podlá vynálezu, bez toho, že by ho vymedzovali alebo obmedzovali.
Příklad 1 g keramického porézneho nosiča obsahujúceho povrchovo viazané 3-(2‘,3‘-epoxypropoxy jpropylskupiny sa suspendovalo v 50 ml tlmivého roztoku pH 3,8 a ďalej sa přidalo 30 mg endopolygalakturonázy rozpustenej v 1 ml toho istého tlmivého roztoku. Vzniknutá suspenzia sa inkubovala za miešania po dobu 48 hodin. Vzniknutý derivát enzýmu sa odfiltroval a premyl tlmivým roztokom o pH 3,8. V priebehu reakcie nedošlo k strate nosiča a aktivita takto připraveného derivátu endopolygalakturonázy v štiepení glykozidických vazieb pektanu sodného vykazovala 2,9 % aktivity rozpustnej formy enzýmu. Stabilita preparátu bola taká, že umožňovala jeho niekol’komesačné použitie.
Příklad 2
Příklad 1 sa opakoval s tým rozdielom, že namiesto keramiky sa použilo 10 g siliky obsahujúcej povrchovo viazané 3-(2‘,3‘-epoxypropoxyjpropylskupiny. Aktivita imobilizovanej endopolygalakturonázy vykazovala 16 % aktivity rozpustného enzýmu.
Příklad 3
Příklad 1 sa opakoval s tým rozdielom, že namiesto keramiky sa použilo sklo s povrchovo viazanou 3-(2‘,3‘-epoxypropoxyjpropylskupinou. Aktivita imobillzovanej endopolygalakturonázy vykazovala 4,5 % aktivity rozpustného enzýmu.
P r i k 1 a d 4 g siliky obsahujúcej povrchovo viazané 3-(2‘,3‘-epoxypropoxyjpropylskupiny sa suspendovalo v 50 ml tlmivého roztoku pH
4,2 a dalej sa k němu přidalo 30 mg zmesného preparátu pektinázy obsahujúcej endopolygalakturonázu, exopolygalakturonázu a pektínesterázu. Suspenzia sa Inkubovala za miešania 72 hodin. Imobilizovaný enzým sa odfiltroval a premyl tlmivým roztokom pH 5,6. Pektinázová aktivita mobilizovaného preparátu vykazovala 6 % aktivity rozpustného preparátu.
Příklad 5
Příklad 4 sa opakoval s tým rozdielom, že inkubácia zmesného preparátu pektinázy obsahujúceho endopolygalakturonázu, exopolygalakturonázu a pektínesterázu so silikou obsahujúcou povrchovo viazané 3-(2‘,3 -epoxypropoxyjpropylskupiny sa uskutočnila v tlmivom roztoku pH 6,0. Pektinázová aktivita imobilizovaného preparátu vykazovala 1,6 % aktivity rozpustného enzýmu. Příklad 6
Nerozpustný derivát endopolygalakturonázy na báze siliky připravený podlá vynálezu sa suspendoval v tlmivom roztoku pH
3,8 a naplnil sa do kolonky (1,4 X 5 cm). Stípcom enzýmu sa nechal perkolovať 0,5 °/o roztok pektanu sodného v 0,1 M octanovom tlmivom roztoku pH 3,8 rýchlosťou 0,8 ml za minútu. Degradačné produkty pektanu sodného vzniknuté pri enzýmovej reakcii v kolóne sa izolovali z efluentu, po jeho zahuštění, gélovou chromatografiou.
Claims (2)
1. Nerozpustné deriváty pektolytických enzýmov obecného vzorca E—L—A, kde E představuje pektolytický enzým endopolygalakturonázu, alebo pektinázový komplex obsahujúci endopolygalakturonázu, exopolygalakturonázu a pektínesterázu, L je distančná spojka tvořená interakciou 3-(2‘,3‘-epoxypropoxy) propylsilylskupiny povrchovo upraveného nosiča s amíno-; karboxylovou, tiolovou, hydroxylovou, imidazolovou, alebo indolovou skupinou enzýmu, A je porézny, alebo neporézny nosič vybraný zo skupiny keramika, silika a sklo.
2. Spósob přípravy nerozpustných deriváVYNÁLEZU tov pektolytických enzýmov podl'a bodu 1 vyznačujúci sa tým, že nosič vybraný zo skupiny keramika, silika a sklo, na ktorom sú povrchovo viazané 3-(2‘,3‘-epoxypropoxyjpropylskppiny sa suspenduje v tlmivom roztoku o pH 3,0 až 6,0, přidá sa zmesný preparát pektinázy obsahujúci endopolygalakturonázu, exopolygalakturonázu a pektínesterázu, alebo niektorá z jeho zložiek v množstve 0,03 až 0,1 hmotnostných dielov na 1 hmotnostný diel nosiča a vzniklá suspenzia sa inkubuje za stálého miešania počas 24 až 240 hodin a imobilizovaný enzým sa izoluje.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS869692A CS258637B1 (cs) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS869692A CS258637B1 (cs) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS969286A1 CS969286A1 (en) | 1987-11-12 |
| CS258637B1 true CS258637B1 (cs) | 1988-09-16 |
Family
ID=5446083
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS869692A CS258637B1 (cs) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS258637B1 (sk) |
-
1986
- 1986-12-22 CS CS869692A patent/CS258637B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS969286A1 (en) | 1987-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4111838A (en) | Composition for chromatography | |
| JPS5836959B2 (ja) | 固定化α−グルコシルトランスフエラ−ゼによるパラチノ−スの製造法 | |
| KR940005581B1 (ko) | 효소의 고정화방법 및 고정화 효소 | |
| US5998183A (en) | Enzyme immobilization on a siliceous support with a polyaldehyde cross-linking agent | |
| US4927761A (en) | Immobilization of cells with alginate and agarose | |
| Stults et al. | Immobilization of proteins on partially hydrolyzed agarose beads | |
| CS258637B1 (cs) | Nerozpustné deriváty pektoíytických enzýmov a sposob ich přípravy | |
| US4279998A (en) | Regenerable insoluble support for protein immobilization | |
| KR100457546B1 (ko) | 폴리프럭토오스 또는 그 유도체를 이용한 미소구 및 그제조방법 | |
| EP0268997A1 (en) | Process for isolation and purification of cyclodextrins | |
| JPH09500282A (ja) | 担体固定化ペニシリンｇアミダーゼ、グルタリル−７−ａｃａアシラーゼ又はｄ−アミノ酸オキシダーゼ | |
| HU204084B (en) | Process for producing enzymes bonded to a carrier | |
| RU2005784C1 (ru) | Способ получения иммобилизованной пероксидазы | |
| JP2659086B2 (ja) | 高純度糖質関連酵素および固定化糖質関連酵素の製造方法 | |
| Rexova-Benkova et al. | Endopolygalacturonase immobilized on a porous poly (2, 6-dimethyl-p-phenyleneoxide) | |
| KR950014967B1 (ko) | 모라노린 유도체의 제법 | |
| Koli et al. | Continuous cane sugar inversion process using immobilized invertase | |
| Sada | Engineering aspects of bioaffinity separation | |
| Marshall et al. | Polysaccharide synthesis on immobilized phosphorylase | |
| EP0368808A2 (en) | Immobilized enzyme and a method for application thereof | |
| WO1989008705A1 (en) | Supports for proteins and amino acids | |
| RU2054481C1 (ru) | Способ получения иммобилизованных ферментов | |
| Rexová-Benková et al. | Endopolygalacturonase immobilized on ceramic materials substituted with aminopropyl groups. Synthesis, kinetics, and mode of action | |
| RU2029564C1 (ru) | Адсорбент для извлечения атерогенных липопротеинов из биологических жидкостей | |
| CS256857B1 (cs) | Imobilizované pektolytické enzymy |