CS261198B1

CS261198B1 - Method for the determination of 1,6-bis (5- (4-chlorophenyl) -diguanidino) hexane

Info

Publication number: CS261198B1
Application number: CS873175A
Authority: CS
Inventors: Karel Benes; Zdenek Pavelek
Original assignee: Karel Benes; Zdenek Pavelek
Priority date: 1987-05-05
Filing date: 1987-05-05
Publication date: 1989-01-12
Also published as: CS317587A1

Abstract

1,6-bis/5-(4-chlorfenyl)-diguanidino/- -hexan, chlorhexidin, který je složkou různých farmaceutických přípravků, je stanovován kapalinovou chromatografii na koloně naplněné sorbentem silikagelového typu s kovalentně vázanými kyanoethylovými · skupinami mobilní fází tvořenou roztokem octanu sodného nebo draselného ve směsi acetonitrilu a vody. Všechny vzorky byly rozpuštěny popřípadě řešeny mobilní fází. Za těchto podmínek se zjistila lineární závislost velikosti píku chlorhexidinu na koncentraci v rozsahu 0,005 až 1,5 mol/m31,6-bis/5-(4-chlorophenyl)-diguanidino/- -hexane, chlorhexidine, which is a component of various pharmaceutical preparations, is determined by liquid chromatography on a column filled with a silica gel-type sorbent with covalently bound cyanoethyl groups with a mobile phase consisting of a solution of sodium or potassium acetate in a mixture of acetonitrile and water. All samples were dissolved or resolved with the mobile phase. Under these conditions, a linear dependence of the chlorhexidine peak size on the concentration in the range of 0.005 to 1.5 mol/m3 was found.

Description

Vynález se týká stanovení 1,6-bis/5-(4-chlorfenyl)-diguanidino/-hexanu, dále jen chlorhexidinu, zvláště ve farmaceutických přípravcích, zejména v tekutých lékových formách.The invention relates to the determination of 1,6-bis [5- (4-chlorophenyl) -diguanidino] -hexane, hereinafter referred to as chlorhexidine, in particular in pharmaceutical preparations, in particular in liquid dosage forms.

Stanovení chlorhexidínu, který se používá .zpravidla ve formě soli jako dioctan nebo glukonan, v lékových formách se provádí různými metodami. Nejběžnější je titrace v kyselině octové odraěrným roztokem kyseliny chloristé (ICI, Standard Official Metods No. DH 129 B, 1959), která však v žádném případě není spolehlivá v přítomnosti jiných bazických složek.The determination of chlorhexidine, which is generally used in the form of a salt such as dioctane or gluconate, in the dosage forms is carried out by various methods. The most common is titration in acetic acid with a reflection solution of perchloric acid (ICI, Standard Official Methods No. DH 129 B, 1959), which is by no means reliable in the presence of other basic components.

Jako selektivní se jeví titrace odměrným roztokem tetrafenylboronanu sodného v prostředí octanového ústoje (Pinzanti S., Porta E. La: Pharm. Acta Helv. 56, 1981, s. 155), výsledky jsou však příliš závislé na složení přípravků a metoda je málo citlivá. Velmi rozšířené jsou různé spektrální metody, které využívají bud barevných reakcí samotného chlorhexidínu, nebo jeho rozkladného produktu, 4-chloranilinu (Holbrook A.: J. Pharm. Pharmacol. 10,Titration with volumetric solution of sodium tetrafenylboronate appears to be selective in an acetate buffer (Pinzanti S., Porta E. La: Pharm. Acta Helv. 56, 1981, p. 155), but the results are too dependent on the composition of the preparations and the method is poorly sensitive . Various spectral methods are widely used, using either the color reactions of chlorhexidine itself or its decomposition product, 4-chloroaniline (Holbrook A .: J. Pharm. Pharmacol. 10,

1958, s. 370 ; Goodall R. R., Goldman J., Woods J.: Pharmacol. J. 200, 1968, s. 33; CropperE., Platt P., Puttnam N. A.: J. Soc, Cosmet. Chem. 26, 1975, s. 255; Lowry J. B.: J. Pharm.1958, p 370; Goodall, R. R., Goldman, J., and Woods, J .: Pharmacol. J. 200, 1968, 33; CropperE., Platt P., Puttnam N. A., J. Soc, Cosmet. Chem. 26, 1975, pp. 255; Lowry, J. B .: J. Pharm.

Sci. 68, 1979 , s. 110; Andermann G., Bahler M. O., Erhart M.: J. Pharm. Sci. 69, 1980, s. 215; Vaar F. J. van de, Hulshoff A., Indemans A. W.: Pharm. Weekbl., Sci. Ed. 2, 1980, s. 179; Pinzanti S. et al.: Pharm. Acta Helv.: 57, 1982, s. 334; Arzamascev A. P. et al.: Chim. Farm. Ž. 17, 1983, s. 247; Sukiasjan A. N., Kopylova A. I., Malyševa L. F.: Chim.Sci. 68, 1979, 110; Andermann G., Bahler M. O., Erhart M., J. Pharm. Sci. 69, 1980, pp. 215; Vaar, F.J. van de, Hulshoff, A., Indemans, A. W., Pharm. Weekbl., Sci. Ed. 2, 1980, pp. 179; Pinzanti S. et al., Pharm. Acta Helv .: 57, 1982, 334; Arzamascev, A. P. et al., Chim. Farm. OF. 17, 1983, pp. 247; Sukiasjan A. N., Kopylova A. I., Malyševa L. F .: Chim.

Farm. Ž. 18, 1984, s. 1 271). Tato stanovení vesměs nejsou použitelná na barevné roztoky a jejich citlivost a spolehlivost je silně závislá na složení přípravků. Rovněž ani použití polarografické metody (Jacobsen E., Glyseth B.: Talanta 22, 1975, s. 1 001) nebylo úspěšné.Farm. OF. 18, 1984, 1271). These assays are generally not applicable to color solutions and their sensitivity and reliability are strongly dependent on the formulation of the preparations. Nor was the use of the polarographic method (Jacobsen E., Glyseth B .: Talanta 22, 1975, p. 1 001) successful.

Vzhledem ke složitým lékovým formám jsou použitelné pouze separační metody. Plynové chromatografie se používá při stanovení rozkladného produktu 4-chloranilinu (Siefert K., Casgrande D., Silberman H.: J. Chromatogr. 109, 1975, s. 193; Matsushina H., Sakurl N.:Due to complex dosage forms, only separation methods are applicable. Gas chromatography is used to determine the decomposition product of 4-chloroaniline (Siefert K., Casgrande D., Silberman H .: J. Chromatogr. 109, 1975, p. 193; Matsushina H., Sakurl N .:

Nipon Koshu Eisei Zasshi 29, 1982 , s. 135; Minibel L. et al.: J. Chromatogr. 268, 1983, s. 321) respektive se samotný chlorhexidin rozloží nebo silyluje. Tyto metody jsou však bud velmi pracné anebo značně nepřesné, nebot neodliší produkt samovolného rozkladu. Tenkovrstvá chromatografie sice stanovuje chlorhexidin přímo (Guven K. C.: Eozaelik Bul. 12,Nipon Koshu Eisei Zasshi 29, 1982, pp. 135; Minibel L. et al., J. Chromatogr. 268, 1983, p. 321) or chlorhexidine itself decomposes or silylates. However, these methods are either laborious or inaccurate because they do not distinguish the product of spontaneous decomposition. Though thin-layer chromatography determines chlorhexidine directly (Guven K. C .: Eozaelik Bul. 12,

1970, s. 111; Dalrup T., Susanto F., Mischalke P.: Z. Anal. Chem. 308, 1981, s. 413), ale její citlivost stejně jako přesnost není dostačující. Nejvýhodnější se jeví vysokotlaká kapalinová chromatografie, kdy se zpravidla používá kolona naplněná modifikovaným silikagelem a jako mobilní fáze se obvykle volí směs vody s acetonitrilem nebo methylalkoholem obsahující iontopárovaoí látku (například kyselinu heptansulfonovou, kyselinu pentansulfonovou, kyselinu pentafluorooktanovou ap.) (Collins A. J., Campbell A. T., Bain R.: J. Clin. Pharmacol.1970, pp. 111; Dalrup T., Susanto F., Mischalke P .: Z. Anal. Chem. 308, 1981, p. 413), but its sensitivity as well as accuracy is not sufficient. High pressure liquid chromatography appears to be most preferred, using a column packed with modified silica gel, and a mixture of water with acetonitrile or methanol containing an ion-pairing agent (e.g., heptanesulfonic acid, pentanesulfonic acid, pentafluorooctanoic acid, etc.) as mobile phase (Collins AJ, Campbell AT) , Bain R .: J. Clin Pharmacol.

4, 1979, s. 205; Stuber B., Mueller Η. K.: Pharm. Acta Helv, 55, 1980, s. 171; Bachner J., Heinisch G., Matouš H.: J. High Resol. Chromatog. Commun. 4, 1981, s. 132? Perez R. L.:4, 1979, 205; Stuber B., Mueller K .: Pharm. Acta Helv, 1980, 55, 171; Bachner J., Heinisch G., Matouš H .: J. High Resol. Chromatog. Commun. 4, 1981, pp. 132? Perez R. L .:

J. Chrom. Sci. 19, 1981, s. 570; Huston C. E., et al.: J. Chromatogr. 237, 1982, s. 457;J. Chrom. Sci. 19, 1981, 570; Huston, C. E., et al., J. Chromatogr. 237, 1982, 457;

Lake O. A. et al.: Pharm. Weekbl., Sci. Ed. 5, 1983, s. 15; Bauer M., et al.: J. Chromatogr. 259, 1983, s. 360; 315, 1984, s. 457; Richard A., Elbaz M., Anderman G.: J. Chromatogr.Lake O. A. et al., Pharm. Weekbl., Sci. Ed. 5, 1983, pp. 15; Bauer M., et al., J. Chromatogr. 259, 1983, 360; 315, 1984, 457; Richard A., Elbaz M., Anderman G .: J. Chromatogr.

298, 1984, s. 356) . '298, 1984, 356). '

Pro stanovení chlorhexidínu v lékových formách však není vhodná žádná z uvedených metod. Neselektivní metody neumožňují stanovení samotného chlorhexidínu. Selektivní metody nejsou použitelné z důvodů rušivých vlivů pomocných látek respektive ostatních aktivních složek obsažených ve vzorcích. Přestože bylo navrženo více aplikací pro kapalinovou chromatografii, žádná z nich neposkytuje uspokojivé a reprodukovatelné výsledky.However, none of these methods is suitable for the determination of chlorhexidine in dosage forms. Non-selective methods do not allow the determination of chlorhexidine alone. Selective methods are not applicable due to interferences of excipients and other active ingredients contained in the samples. Although multiple applications for liquid chromatography have been proposed, none of them provide satisfactory and reproducible results.

Uvedené nevýhody odstraňuje způsob stanovení chlorhexidínu podle vynálezu, jehož podstata spočívá ve stanovení kapalinovou chromatografii metodou kalibrační křivky nebo metodou vnějšího standardu na koloně naplněné sorbentem silikagelového typu s kovalentně vázanými kyanoethylovými skupinami o velikosti částic 5 až 10 pm. Mobilní fáze je tvořena roztokem octanu sodného nebo draselného o koncentraci 100 až 200'mol/m³ rozpuštěného ve směsi 40 až 80 % obj. aoetonitrilu a 20 až 60 % obj. destilované deionizované vody. Průtok mobi-’.ηί fáze je v rozmezí 0,5 až 2 ml/min, přičemž se všechny vzorky včetně kalibračních roztoků rozpouští popřípadě ředí mobilní fází a získaný roztok obsahuje minimálně 80 % obj. mobilní fáze.The above-mentioned disadvantages are overcome by the method of determining chlorhexidine according to the invention, which is based on the determination of liquid chromatography using a calibration curve method or an external standard method on a column packed with a silica gel type sorbent with covalently bonded cyanoethyl groups having a particle size of 5-10 µm. The mobile phase consists of a solution of sodium or potassium acetate having a concentration of 100 to 200 mol / m ³ dissolved in a mixture of 40 to 80% by volume of o-acetonitrile and 20 to 60% by volume of distilled deionized water. The flow rate of the mobile phase is in the range of 0.5 to 2 ml / min, all samples including calibration solutions being dissolved or diluted with the mobile phase and the solution obtained contains at least 80% by volume of the mobile phase.

Způsob stanovení podle vynálezu je výhodný pro svoji jednoduchost, rychlost a spolehlivost. Příprava vzorku k analýze je výhodná, protože je na minimum snížena možnost vnášení systematické chyby při přípravě.The assay method according to the invention is advantageous for its simplicity, speed and reliability. Sample preparation for analysis is advantageous as the possibility of introducing a systematic error in preparation is minimized.

Způsob stanovení podle vynálezu byl ověřován kapalinovou chromatografií, kdy chromatograf byl spojen s počítacím integrátorem. Skleněná kolona byla naplněna sorbentem silikagelového typu s kovalentně vázanými kyanoethylovými skupinami o zrněni 5 ,um. Mobilní fáze obsahovala 3The method of the invention was verified by liquid chromatography, where the chromatograph was connected to a counting integrator. The glass column was packed with a silica gel type sorbent with covalently bonded cyanoethyl groups of 5 µm. The mobile phase contained 3

100 až 200 mol/m octanu sodného popřípadě draselného ve směsi acetonitril s vodou. K detekci byla využita absorbce ultrafialového záření o vlnové délce 235 nm. Byla zjištěna lineární , 3 závislost mezi velikosti píku chlorhexidinu a jeho koncentrací v rozsahu 0,005 až 1,5 mol/m s korelačním koeficientem 0,999 98 z dvanácti měření.100 to 200 mol / m of sodium or potassium acetate in acetonitrile / water. Absorption of ultraviolet radiation with wavelength of 235 nm was used for detection. A linear, 3 correlation between the size of the chlorhexidine peak and its concentration in the range of 0.005 to 1.5 mol / m was found, with a correlation coefficient of 0.999 98 from twelve measurements.

Způsob podle vynálezu umožňuje stanovení chlorhexidinu v komplikovaných lékových formách, jež bylo dosavadními metodami značně nespolehlivé a v neposlední řadě významně urychluje a usnadňuje stanovení, a tak do značné míry příznivě ovlivňuje ekonomiku výroby.The method according to the invention makes it possible to determine chlorhexidine in complicated dosage forms which have been considerably unreliable by the prior art methods and, last but not least, significantly accelerate and facilitate the determination, and thus have a positive effect on the production economy.

Následující příklady provedeni způsob podle vynálezu pouze dokládají, ale neomezují.The following examples illustrate, but do not limit, the process of the invention.

Příklad 1Example 1

Chemikálie: octan sodný p. a.Chemicals: sodium acetate p.

octan draselný p. a. acetonitril pro UV destilovaná deonizovaná vodapotassium acetate p. a. acetonitrile for UV distilled deonized water

Přístroje: kapalinový chromatograf ve spojení s počítacím integrátorem spektrofotometrický detektor kolona skleněná, 150x3 mm vnitřní rozměr, naplněná silikagelem s kovalentně vázanými kyanoethylovými skupinami o zrnění 5 jumInstruments: liquid chromatograph in conjunction with counting integrator spectrophotometric glass column detector, 150x3 mm internal size, filled with silica gel with covalently bonded cyanoethyl groups of 5 µm

Chrcmatografické podmínky: Mobilní fáze - 65 % obj. acetonitrilu, 35 % obj. vody, octan o draselný o koncentraci 100 mol/m . Průtok 0,5 ml/min. Retenční čas chlorhexidinu byl 6,2 min. Vyhodnocení metodou kalibrační křivky. Příprava vzorku: 1 ml vzorku byl zředěn na 10 ml mobilní fází. Deklarovaný obsah glukonanu chlorhexidinu ve vzorku byl 0,2 g/1. Stanovený obsah glukonanu chlorhexidinu, činil (0,194 + 0,002) g/1, vypočteno ze tří měření.Chromatographic conditions: Mobile phase - 65% by volume of acetonitrile, 35% by volume of water, potassium acetate at a concentration of 100 mol / m. Flow rate 0.5 ml / min. The retention time of chlorhexidine was 6.2 min. Evaluation by calibration curve method. Sample preparation: 1 ml of sample was diluted to 10 ml with mobile phase. The declared chlorhexidine gluconate content in the sample was 0.2 g / l. The chlorhexidine gluconate content was (0.194 + 0.002) g / l, calculated from three measurements.

Příklad 2Example 2

Chemikálie, přístroje a chromatografické podmínky jako v příkladě 1. Vyhodnocení metodou vnějšího standardu. Jako kalibrační roztok byl použit roztok připravený rozpuštěním 25,6 mg dioctanu chlorhexidinu v 50 ml methanolu a zředěním 1:10 mobilní fází. Takto připravený roztok obsahoval 51,2 mg/1 dioctanu chlorhexidinu, což odpovídá 73,5 mg/1 glukonanu chlorhexidinu. Příprava vzorků popřípadě jejich ředění mobilní fází, deklarovaný obsah a stanovený obsah glukonanu chlorhexidinu v g/1 jsou uvedeny v tabulce:Chemicals, instruments and chromatographic conditions as in Example 1. Evaluation by external standard method. As a calibration solution, a solution prepared by dissolving 25.6 mg of chlorhexidine diacetate in 50 ml of methanol and diluting 1:10 with the mobile phase was used. The solution thus prepared contained 51.2 mg / l of chlorhexidine diacetate, which corresponds to 73.5 mg / l of chlorhexidine gluconate. The preparation of samples or their dilution with the mobile phase, the declared content and the determined chlorhexidine gluconate content in g / l are given in the table below:

TabulkaTable

číslo number Ředění Dilution Deklarovaný obsah Declared content Stanovený ofc Determined ofc 1 1 1:10 1:10 0,50 0.50 0,485 0.485 2 2 1:10 1:10 0,50 0.50 0,501 0.501 3 3 1:5 1: 5 0,10 0.10 0,090 0,090 4 4 1:5 1: 5 0,10 0.10 0,092 0.092 5 5 1:50 1:50 2,5 2.5 2,46 2.46 6 6 1:50 1:50 2,5 2.5 2,47 2.47 7 7 1:10 1:10 1,0 1.0 1,01 1.01 8 8 1:10 1:10 1,0 1.0 0,995 0.995

Příklad 3Example 3

Chemikálie a přístroje jako v příkladě 1. Chromatografické podmínky. Mobilní fáze - 60 % acetonitrilu, 40 % vody, octan sodný o koncentraci 200 mol/m . Ostatní podmínky jako v příkladě 1. Retenční čas chlorhexidinu 8,0 min. Vyhodnoceni metodou vnějšího standardu.Chemicals and apparatus as in Example 1. Chromatographic conditions. Mobile phase - 60% acetonitrile, 40% water, 200 mol / m sodium acetate. Other conditions as in Example 1. Chlorhexidine retention time 8.0 min. Evaluation by external standard method.

Jako kalibrační roztok byl použit roztok připravený rozpuštěním 82,4 mg diootanu chlorhexidinu do 100 ml methylalkoholu a zředěním tohoto roztoku 1:10 mobilní fází. Takto připravený roztok obsahoval 82,4 mg/1 diootanu chlorhexidinu. Vzorek tlakového balení s deklarovaným obsahem diootanu chlorhexidinu 0,50 % byl nejdříve celý vystříkán do odměrné baňky o objemu 100 ml. Hmotnost obsahu zjištěná diferenčním vážením byla 38,2 g. Po dokonalém odstraněni všech těkavých složek byl vzorek doplněn na 100 ml methylalkoholem. Takto připravený roztok byl ředěn 1:25 mobilní fází. Stanovený obsah dioctanu chlorhexidinu byl (0,503 + 0,004) % vypočteno ze tří měření.The calibration solution used was a solution prepared by dissolving 82.4 mg of chlorhexidine diootane into 100 ml of methanol and diluting the solution 1:10 with the mobile phase. The solution thus prepared contained 82.4 mg / l of chloro-hexidine diootane. A sample of the pressure pack with a declared diootane content of chlorhexidine of 0.50% was first sprayed into a 100 ml volumetric flask. The weight of the contents determined by differential weighing was 38.2 g. After all volatiles had been completely removed, the sample was made up to 100 ml with methanol. The solution thus prepared was diluted 1:25 with the mobile phase. The determined chlorhexidine diacetate content (0.503 + 0.004)% was calculated from three measurements.

Claims

Method for the determination of 1,6-bis (5- (4-chlorophenyl) -diguanidino) -hexane by liquid chromatography using a calibration curve method or an external standard method on a column packed with a silica gel type sorbent with covalently bonded cyanoethyl groups, characterized in comprises a solution of sodium or potassium acetate at a concentration of 100 to 200 mol / m ³ in a mixture of 40 to 80 vol.% acetonitrile and 20 to 60 vol.% distilled deionized water, taking samples, including the calibration solutions dissolved or diluted with the mobile phase, whereupon the obtained solution contains at least 80% by volume of the mobile phase before loading onto the column.