CS265772B1

CS265772B1 - Spdsob odstraňovania heparínu z krvi in vitro

Info

Publication number: CS265772B1
Application number: CS871442A
Authority: CS
Inventors: Miroslav Prom Chem Csc Antal; Rudolf Ing Csc Toman
Original assignee: Miroslav Prom Chem Csc Antal; Toman Rudolf
Priority date: 1987-03-04
Filing date: 1987-03-04
Publication date: 1989-11-14
Also published as: CS144287A1

Abstract

Riešenie sa týká zpósobu odstraňovania heparínu z krvi in vitro. Podstata spósobu odstraňovania heparínu z krvi, najmS z krvnej plazmy, in vitro spočívá v tom, že k 0,5 až 3 obj. dielom krvi alebo krvnej plazmy sa přidá prípravok, s výhodou vo formě tablety, obsahujúci 5 až 150 hmot. dielov aspoň jedného v krvi nerozpustného derivátu polysacharidů s naviazanými terciárnymi alebo kvartérnymi aminoskupinami s výměnnou kapacitou 0,3 až 1,3 mmol.g-1, nechá sa napučaf aspoň po dobu 1 minúty, zmes sa intenzívně mieša alebo nechá stač, až kým sa heparín naadsorbuje, pevný podiel sa oddělí a krvná plazma sa použije na testy. Prípravok přidávájúci sa ku krvi, alebo krvnej plazme, obsahuje navýše mikrokryštaliokú celulózu v množstve až 12 hmot. dielov vztiahnuté na 1 hmot. diel derivátu polysacharidů. Derivát polysacharidů sú s výhodou deriváty celulózy alebo deriváty škrobu. Riešenie má použitie v medicíně, najmS hematologii pri vyšetřovaní pacientov úžívajúcich heparín na reálny hemostatický potenciál. Ďalej všade tam, kde sa vyžaduje jednoduchý a rýchly spósob odstránenia heparínu z krvi alebo krvenj plazmy.

Description

Vynález sa týká spósobu odstraňovania heparínu z krvi, najmS krvnej plazmy, in vitro.

Pri liečbe tromboembolických onemocnění heparínom je nutné robit u pacienta komplexně hemokoagulačné testy, ktoré charakterizujú zdravotný stav pacienta a ukazujú úspěšnost, resp, neúspěšnost liečebného procesu. Heparín přítomný v odobratých vzrokách krvi však tieto testy značné skresluje. Preto je potřebná rýchla a spolahlivá metoda na jeho odstránenie bez akýchkolvek vedlajších efektov na krvnú plazmu. Heparín sa bežne v klinickej praxi neutralizuje s protamínom [ J. G. Allen a kol.: J. Lab. Clin. Med. 34, 473 (1949);

H. A. Perkins a kol.: J. Lab. Clin. Med. 48, 223 (1956)J, avšak titráciu sťažuje skutočnost, že v odobratej krvnej plazme pacientov sa nevie dostatočne presne hladina heparínu. Vyplývá z toho, že prebytok protamínu v plazme zostáva nedetegovaný resp. v krvnej plazme zostane nezneutralizovaný heparín, čo negativné ovplyvňuje výsledky hemokoagulačných testov. Vo svojej práci J. S. Wright a kol. už poukázali na tieto problémy [j. S. Wright a kol.: J. Cardiovas. Surg. 5, 244 (1964)3. Za účelom vyhnúť sa uvedeným problémom použili Thompson a kol. [_A. R. Thompson, R. B. Counts: J. Lab. Clin. Med. 88, 922 (1976)3 kolónovú chromatografiu na zachytenie heparínu a protamínu zo vzoriek krvnej plazmy. Použili stredne zásaditý anex na báze celulózy k zachyteniu heparínu a na karboxymetylcelulóze sa adsorboval protamín. Použitie kolónovej chromatografie je časovo náročné a vyžaduje odborné skúsenosti v chromatografii. Ďalej, část krvnej plazmy sa zachytí na stlpcoch ionomeničov, čo je nevýhodou pri pediatrických prípadoch, kde sa na testovanie používá malé množstvo plazmy.

Uvedené nevýhody v podstatnéj miere elminuje spósob odstraňovania heparínu z krvi, najmS z krvnej plazmy, in vitro podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že k 0,5 až 3 obj. dielom krvi *lebo krvnej plazmy sa přidá prípravok, s výhodou vo formě tablety, obsahujúci 5 až 150 hmot. dielov aspoň jedného v krvi nerozpustného derivátu polysacharidů s naviazanými terciárnymi alebo kvartérnymi aminoskupinami s výměnnou kapacitou 0,3 až

I, 3 nunol-g^-'*', nechá sa napučať aspoň po dobu 1 minúty, zmes sa intenzívně mieša alebo nechá stát, až kým sa heparín naadsorbuje, pevný podiel sa oddělí a krvná plazma sa použije na testy. Prípravok přidávájúci sa ku krvi, alebo krvnej plazme, obsahuje navýše mikrokryštalickú celulózu v množstve až 12 hmot. dielov vztiahnuté na 1 hmot. diel derivátu polysacharidů. Derivát polysacharidů sú s výhodou deriváty celulózy alebo deriváty škrobu. Derivát celulózy je vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl celulóza, dimetylaminoetyl celulóza, trimetylamóniumatyl celulóza, dietylaminopropyl celulóza, trietylamóniumpropyl celulóza, dimetylaminopropyl celulóza, trimetylamóniumpropyl celulóza, dietylamino-2-hydroxypropyl celulóza, polyetylénimín celulóza, trietylamónium-2-hydroxypropyl celulóza, dimetylamino-2-hydroxypropyl celulóza, celulóza sieťovaná zmesou epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickom prostředí, imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, chlorid dimetylamino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, benzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl celulóza. Derivát škrobu je vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl sletovaný škrob, dimetylaminoetyl sletovaný škrob, trietylamóniumpropyl sletovaný škrob, dimetylaminopropyl sletovaný škrob, trimetylamóniumpropyl Sletovaný škrob, dietylamino-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, polyetylénimín sletovaný škrob, trietylamónium-2-hydroxypropyl sieťovaný škrob, dimetylamino-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, trimetylamóniummetyl sieťovaný škrob, dietylaminopropyl sieťovaný škrob, škrob sieťovaný zmesou epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickom prostředí, imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, chlorid dimetylamino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, benzyldimetylamonium-2-hydroxypropyl sieťovaný škrob. Derivát polysacharidů pozostáva z částic o velkosti 50 až 300 um, avšak je možné použit i derivát polysacharidů s menším alebo vSčším rozmerom.

Výhodou navrhovaného spósobu odstraňovania heparínu z vyšetřovanéj krvi resp. krvnej plazmy in vitro je, že využívá progresívny spósob testovaciu tabletku, ako rýchlu a jednoduchú metodu na dokonalé odstránenie klinických hladin heparínu z krvnej plazmy pri stanoveni skutočného hemostatického potenciálu a monitorovaní iných koagulačných porúch u vyšetřovaných pacientov. Ďalšou výhodou je, že testovací prípravok s adsorbovaným heparínom sa dokonale oddělí v plazme, takže nemóže ovplyvnit následné hemokoagulačné testy na rozdiel od predošlých spósobov.

Příklad 1 <·

Κ 0,5 ml krvnej plazmy v skúmavke (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 5 mg chlorid imidazólio-N,N'~diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g ¹ a 6Ό mg mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať 0,5 min pri teplote 20 °C. Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore, až kým sa čiastočky tablety rovnoměrně rozložia v plazme a mieša sa dalej na miešadle 10 min pri teplote 20 °C. Tabletová substancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge (1 200xg, 5 min) a příslušné alikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy.

Příklad 2

Κ 1 ml krvnej plazmy v skúmavkem (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 20 mg chlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g ¹ a 60 mg mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať aspoň 1 min pri teplote 22 °C. Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore až kým sa tabletová substrancia rovnoměrně rozloží v plazme a mieša sa dalej na magnetickom miešadle 10 min pri 22 °C. Tabletová substancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge (1 200xg, 5 min) a příslušné alikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy.

Příklad 3

K 3 ml krvnej plazmy v skúmavke (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 30 mg chlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g ¹ a 150 mg mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať 2 min pri teplote 22 °C. Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore, až kým sa tabletová substancia rovnoměrně rozloží v plazme a nechá sa stáť pri teplote 22 °C po dobu 15 min. Tabletová substancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge a příslušné alikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy.

Přikládá

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa použije 150 mg tableta chlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou 0,3 mmol.g ¹.

Příklad 5

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mg dietylaminoetyl celulózy s výměnnou kapacitou 1 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Príklad6

Postupuje sa ako v příklade 2 a tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mg trimetylamóniumetyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 7

Postupuje sa ako v příkladě 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mg trietylamóniumpropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g^-1 a 150 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 8

Postupuje sa ako v příklade 4 s tým rozdielom, že sa přidá 150 mg tableta dietylamino-2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,3 mmol.g ¹.

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mg aktivněj látky pripravenej reakciou celulózy, epichlorhydrinu a dietylamínu v alkalickom prostředí s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g ¹ a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 9

Příklad

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mg polyetylénimín celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g ¹ a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mg dimetylaminoetyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g ¹ a 150 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad

Postupuje sa ako v příklade 4 s tým rozdielom, že sa přidá 150 mg tableta trietylamónium-2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,3 mmol.g ¹.

Příklad 13 postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mg trimetylamónlumpropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 14

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mg chlorid dimetylamino-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 15

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mg benzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g ¹ a 150 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 16 í;

Viv

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mg chlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru sletovaného škrobu s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 17

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 10 mg dietylaminoetyl celulózy a 10 mg dietylaminohydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g^-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 18

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 15 mg chlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy a 15 mg chlorid imidazólio-Ν,Ν -diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru sletovaného škrobu s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g ³ a 150 mg mikrokryštalickej celulózy.

Příklad 19

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 10 mg dietylaminoetyl sletovaného škrobu a 10 mg dietylaminohydroxypropyl sletovaného škrobu s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g”¹ a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Vynález má použitie v medicíně, najmS hematologii pri vyšetřovaní pacientov, užívajúcich heparin na reálny hemostatický potenciál. Ďalej všade tam, kde sa vyžaduje jednoduchý a rýchly spósob odstránenia heparinu z krvi alebo krvnej plazmy.

Claims

1. Spósob odstraňovania heparinu z krvi, najmS z krvnej plazmy in vitro vyznačujúci sa tým, že k 0,5 až 3 obj. dielom krvi alebo krvnej plazmy sa přidá prípravok, s výhodou vo formě tablety, obsahujúci 5 až 150 hmot. dielov aspoň jedného v krvi nerozpustného derivátu polysacharidu s naviazanými terciárnymi kvartérnymi aminoskupinami s výměnnou kapacitou 0,3 až 1,3 mmol.g ¹, nechá sa napučať aspoň po dobu 1 minúty, zmes sa intenzívně mieša alebo nechá stát až kým sa heparin naadsorbuje, pevný podiel sa oddělí a krvná plazma sa použije na testy.

2. Spósob odstraňovania heparinu, podlá bodu 1, vyznačujúci sa tým, že prípravok pridávajúci sa ku krvi alebo krvnej plazme, obsahuje navýše mikrokryštalickú celulózu v množstve až 12 hmot. dielov vztiahnuté na 1 hmot. diel derivátu polysacharidu.

3. Spósob odstraňovania heparinu, podlá bodu 1 a 2, vyznačujúci sa tým, že derivátom polysacharidu sú s výhodou deriváty celulózy alebo deriváty škrobu.

4. Spósob odstraňovania heparinu, podlá bodu 3, vyznačujúci sa tým, že deriváty celulózy je vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl celulóza, dimetylaminoetyl celulóza, trimetylamóniumetyl celulóza, dimetylaminopropyl celulóza, trimetylamóniumpropyl celulóza, dietylamino-2-hydroxypropyl celulóza, polyetylénimín celulóza, trietylamónium-2-hydroxypropyl celulóza, dimetylamino-2-hydroxypropyl celulóza, celulóza Sletovaná zmesou epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickom prostředí, imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, chlorid dimetylamino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, benzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl celulóza, dietylaminopropyl celulóza, trietylamóniumpropyl celulóza.

5. Spósob odstraňovania heparinu, podlá bodu 3, vyznačujúci sa tým, že derivát škrobu je vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl sletovaný škrob, dimetylaminoetyl sletovaný škrob, trietylamóniumpropyl sletovaný škrob, dimetylaminopropyl sletovaný škrob, trimetylamcniumpropyl sletovaný škrob, dietylamino-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, polyetylénimín Sletovaný škrob, trietylamónium-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, dimetylamino-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, škrob sletovaný zmesou epichlórhydrínu a dietylaminu v alkalickom prostředí, imidazólio· -N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, chlorid dimetylamino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, benzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl sletovaný škrob, trimetylamóniumetyl sletovaný škrob, dietylaminopropyl sletovaný škrob.