CS266651B1

CS266651B1 - Činidlo pro stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferaey

Info

Publication number: CS266651B1
Application number: CS86253A
Authority: CS
Inventors: Ludek Rndr Zahradnicek; Vratislav Ing Csc Chromy; Milan Rndr Maly
Original assignee: Ludek Rndr Zahradnicek; Chromy Vratislav; Maly Milan
Priority date: 1986-01-13
Filing date: 1986-01-13
Publication date: 1990-01-12
Also published as: CS25386A1

Abstract

Řsěsni sa týká činidla pro stanoveni katalytické koncentrace gama-glutemyltransferaey, které sa používá v humánní medicíně při diagnostice jatarnich chorob. Činidlo podle vynálezu obsahuje kyselinu amidoaulfonovou nebo Jaji soli, kyselinu naftalan -2,5-diaulfonovou nebo její soli, N-naftylethylethylendiamin a polyethylenglykol v určitých molárních poměrech a dála polyathylanglykol a popřípadě kyselinu. Činidlo dále obsahuje amidosulfonan amonný, kyselinu naftalen-2,5-dieulfonovou v dané koncentraci, činidlo Je ve' srovnáni e doposud používanými metodami stabilní, citlivé.

Description

Vynález se týká činidla na stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferasy.

Stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferasy v krevním séru nebo plazmě je velmi cennou analysou, umožňující značné zpřesnění diferenciální diagnostiky jaterních chorob. Proto se stalo od svého zavedení do klinické praxe v první polovině sedmdesátých let jednou z nejčastěji prováděných analys v klinické biochemii. Gama-glytamyltransferees (E.C.2.3.2.2.) katalýzuje zejména reakci gama-glutamyl-NH-R s aminokyselinou za vzniku gama-glutamylaminokyseliny a organického aminu, Nejčastěji používanými doncrovými substráty jsou gama-glutamyl-4-nitroanilid a v poslední době stále častěji gama-L-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid, doporučovaný jako donorový substrát i referenční metodou Mezinárodní federací klinické biochemie (IFCC). Stanovení katalytické koncentrace enzymu GMT lze provést dvěma základními způsoby:

Sledování vzrůstů koncentx’ace barevného reakčního produktu 2-amino~5-nitrobenzoátu v závislosti na čase, kinetická metoda.

rotalyzovauá reakce se nechá probíhat určenou dobu, poté se reakce zastaví okyselením, například kyselinou octovou nebo chlorovodíkovou a určí se koncentrace reakčního produktu. Kinetická metoda stanovení vyžaduje speciální přístrojové vybavení, které je nákladné. Proto se katalytické koncentrace enzymů stanovují převážně metodou s konstantním časem. Metoda s konstantním časem se provádí v podstatě dvěma způsoby; v prvním se reakce zastaví přidáním kyseliny, zpravidla kyseliny octové a změří se absorbance roztoku. Ve druhém případě se využívá barevné reakce reakčního produktu katalyzované reakce, např. s N-naftyleAhylendiaminem za vhodných podmínek. První z těchto dvou možností má ty nevýhody,

266 651 že ke každému vzorku je třeba provést kontrolní sérový roztok, což zdvojnásobuje pracnost i náklady na analysu. Kromě toho, molární absurbanční koeficient reakčního produktu je nízký a metoda je proto málo citlivá, čímž se zhoršuje její diagnostická hodnota. Druhé možnosti bylo dosud využito pouze s 4-nitroanilinem jako reakčním produktem^ citlivost této reakce je sice několikanásobně vyšší než citlivost prvního způsobu, ale výsledný barevný produkt je nestálý, což způsobuje značné nepřesnosti výsledků a rovněž zhoršuje diagnostickou hodnotu analysy. Pro reakční produkt 2-amino-5-nitrobenzoát zatím této druhé možnosti nebylo využito.

Činidlo pro stanovení katalytické koncentrace GMT dle vynálezu řeší uvedené nevýhody tím, že je v širokém časovém intervalu stálé, reakce s činidlem je citlivá, takže diagnostická hodnota výsledků není zkreslena nepřesnostmi měření, není třeba provádět kontrolní sérový roztok, čímž se snižuje pracnost i náklady na jednu analysu. Nadto je.barevné činidlo ne stanovení katalytické koncentrace GMT vhodné pro určení obou uvedených reakční eh produktů.

Podstata činidla pro stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferasy ne bázi N-naftyletylendiaminu podle vynálezu spočívá v tom, že obsahuje kyselinu amidosulfonovou nebo její soli, kyselinu naftalen-2,5-disulfonovou nebo její soli, N-naftylethylendiamin a polyethylenglykol v molárních poměrech amidosulf onová kyselina ku N-naftylethylendiaminu 20 000 ku 1 až I ku 10,· N-naftylendiamin ku naftalen-2,5-disulfonové kyselině 10 ku 1 až 1 ku 20 OOOj kyselina naftalen-2,5-disulfonová ku kyselině amidosulf onové 1 ku 200 až 100 ku 1 a dále polyethylenglykol v množství 0,01 g až 0,5 g v 1 g činidla, popřípadě kyselinu, například chlorovodíkovou, mravenčí, octovou, sírovou, fosforečnou, citrónovou, maleinovou,-jablečnou, šíavelovou nebo vinnou. Činidlo podle vynálezu dále obsahuje amidosulfonan amonný v koncentraci 1 — 1 až 100 mmol.l , kyselinu naftalen-2,5-disulfonovou v koncentraci 0,5 až 100 mmol.l“\ N-naftyletylendiamin v koncentraci 5 /umol.l“^ — 1 ^z — 1 až 10 mmol.l , polyethylenglykol v koncentraci 0,1 až 50 g.l a kyselinu chlorovodíkovou v koncentraci 0,01 až 2 mol.l“\

Příklad» 1 266 651

Rozpuštěním uvedených látek se připraví činidlo o složení: -1 -1 mmol.l amidosulfonanu amonného, 0,5 minol.l kyseliny nafta4 *4 len-2, 5-disulfonové, 5 yumol.l R-naftylethylendiaminu, 0,1 g.l“ polyethylenglykolu a 10 mmol.l“¹ kyseliny chlorovodíkové.

Příklad 2

Připraví se pevná směs z 11,4 g amx^dosulfonanu amonného, 30,3 g naftalen-2,5-disulfonanu disodného, 2,912 g R-naftyiethylendiamin dihydrochloridu e 50 g polyethylenglykolu a 18D g kyseliny citrónové.

Příklad 3

Připraví se tableta obsahující amidosulfonan amonný v množství 0,3 g»O,36 g kyseliny naftalen-2-disulfonové dvojsodné soli, 0,02 g R-naftylethylendiamin dihydrochloridu a 2 g polyethylenglykolu.

Činidlo se připraví rozpuštěním tablety ve 200 ml kyseliny sírové 0,15 mol.l¹.

Příklad 4

K 220 /U1 reakční směsi obsahující 150 mmol.l¹ glycinu, 6 mmol.l¹ gama-L-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilidu, 7»2 mmol.l¹dusitanu sodného a sérum, objemový poměr inkubační směs + sérum 10 + 1, se po patnáctiminutové inkubaci při 30 °C přidají 2 ml čerstvě připraveného barevného činidla na stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferasy. Po 5 až 20 minutách se změří absorbance výsledného roztoku při vlnové délce 540 nm.

Claims

1. Činidlo pro stanovení katalytické koncentrace gama-glutamyltransferasy na bázi N-naftylethylendiaminujvyznačené tím, že obsahuje kyselinu amidosulfonovou nebo její suli, kyselinu naftalen-2,5-disulfonovou nebo její soli, N-naftylethylendiamin a polyethylenglykol v molárních poměrech amidosulfoncvá kyselina ku N~naftylethylendiaminu 20 000 ku 1 až 1 ku 10, N-naftylendiamin ku naftalen-2,5-disulfonové kyselině 10 ku 1 až 1 ku 20 000, kyselina naf talen-2, fr^disulfonová ku kyselině amidosulfonové 1 ku 200 až 100 ku 1 a dále polyethylenglykol v množství 0,01 až 0,5 g v 1 g činidla, popřípadě kyselinu, například chlorovodíkovou, mravenčí, octovou, sírovou, fosforečnou, citrónovou, maleinovou, jablečnou, ěíavelovou nebo vinnou.

2. Činidlo podle bodu 1, vyznačené tím, že obaahuje amidosulfonan amonný v koncentraci 1 až 100 mmol.l'^, kyselinu naftalen-2,5-disulfonovou v koncentraci 0,5 až 100 mmol.l”\ N-naftylethylendiamin v koncentraci 5 /umol.l”^ až 10 mmol.l*’\ polyethy- / —1 lenglykol v koncentraci 0,1 až 50 g.l a kyselinu chlorovodí— i kovou v koncentraci 0,01 až 2 mol.l .