CS269834B1

CS269834B1 - Phospholipoproteins and their production

Info

Publication number: CS269834B1
Application number: CS87759A
Authority: CS
Inventors: Mojmir Ing Csc Ranny; Jan Prof Mudr Rndr Drsc Musil; Jiri Ing Csc Sedlacek; Jiri Ing Csc Soucek
Original assignee: Ranny Mojmir; Musil Jan; Jiri Ing Csc Sedlacek; Soucek Jiri
Priority date: 1987-02-05
Filing date: 1987-02-05
Publication date: 1990-05-14
Also published as: CS75987A1

Abstract

Fosfolipoproteiny jsou nové komplexy obsahující kyselé fosfolipidy a peptidy nebo · bílkoviny v hmotnostním poměru 1 až 50 : 99 až 50. Peptidy musejí obsahovat nejméně dva aminokyselinové zbytky, z nichž aspoň jeden je tvořen bazickou aminokyselinou. Získávají se smísením kyselých fosfolipidů s peptidy nebo bílkovinami za intenzivního ml- ■ cháni při 10 až 100 °C. Fosfolipoproteiny najdou uplatnění jako nové biologické fak.- tory v lékařství, kosmetice, v potravinářském průmyslu a v zemědělství.Phospholipoproteins are new complexes containing acidic phospholipids and peptides or proteins in a weight ratio of 1 to 50 : 99 to 50. Peptides must contain at least two amino acid residues, at least one of which is a basic amino acid. They are obtained by mixing acidic phospholipids with peptides or proteins under intensive stirring at 10 to 100 °C. Phospholipoproteins find application as new biological factors in medicine, cosmetics, the food industry and agriculture.

Description

Vynález se týká fosfolipoproteinů, obsahujících kyselé fosfolipidy komplexně vázané na peptidy nebo proteiny a způsobu jejich výroby.The invention relates to phospholipoproteins containing acidic phospholipids complexed with peptides or proteins and a method for their production.

Fosfolipoproteiny jsou nové biologické faktory, k jejichž přípravě lze použít fosfolipidy získané známými izolačními a syntetickými postupy. Pro průmyslovou přípravu jsou vhodné zejména směsi fosfatidových kyselin a bis/diacylglycerol/fosforečných kyselin a jejich lysoderivátů, které se připravují fosforylací směsi parciálních acylglycerolů, například postupem podle čs. autorského osvědčení č. 173 220, čs. autorského osvědčení č. 203 421, čs. autorského osvědčení č. 256 691 a čs. autorského osvědčení č. 259 440.Phospholipoproteins are new biological factors, for the preparation of which phospholipids obtained by known isolation and synthetic procedures can be used. For industrial preparation, mixtures of phosphatidic acids and bis/diacylglycerol/phosphoric acids and their lysoderivatives are particularly suitable, which are prepared by phosphorylation of a mixture of partial acylglycerols, for example, according to the procedure according to Czechoslovak Patent No. 173 220, Czechoslovak Patent No. 203 421, Czechoslovak Patent No. 256 691 and Czechoslovak Patent No. 259 440.

• Komplexy, které vznikají interakcí bílkovin s fosfolipidy, se vyskytují ve všech živých objektech, kde plní řadu funkcí, z nichž nejdůležitější je funkce strukturní /biomembrány/ a transportní /přenášeče látek přes membrány nebo lipoproteiny/. V biologických membránách se komplexy tvoří na fázovém rozhraní lipidové dvojvrstvy s integrálními a periferními proteiny. Z hlediska struktury vzniklých komplexů s integrálními bílkovinami jde o útvary, kde vazba obou složek je zprostředkována především hydrofobními interakcemi mezi uhlovodíkovými řetězci acylových skupin fosfolipidů a lipofilními částmi aminokyselin v polypeptidových molekulách, jako jsou aromatická jádra v tryptofanu, tyrosinu a fenylalaninu a alifatické, popřípadě rozvětvené řetězce leucinu, isoleucinu a valinu. Periferní bílkoviny, které jsou lokalizovány na povrchu membrán jsou na něj vázány polárními vazbami a většinou také vodíkovými vazbami. I tyto vazby jsou relativně slabé, protože periferní bílkoviny lze z povrchu snadno uvolnit, například účinkem zředěných roztoků neutrálních solí. Počet molekul fosfolipidů vázaných na molekulu bílkoviny závisí jak na velikosti molekuly integrálního proteinu, tak i na složení a struktuře jeho povrchu, který je ve stykuslipidovou dvojvrstvou. Fosfolipidy vázané na bílkovinnou molekulu se neustále vyměňují rychlostí, srovnatelnou s rychlostí laterální difúze těchto molekul v prostoru membrány a jejich složení významně ovlivňuje funkci daného komplexu. Lipoproteiny, které jsou nejvýznamnější transportní formou lipidů krevní plazmy jsou, podobně jako biomembrány, tvořeny jádrem /s obsahem triacylglycerolů a esterů cholesterolu/ a dále pláštěm tvořeným fosfolipidovou vrstvou, na které jsou vázány speciální proteinové molekuly, tzv. apoproteiny. Také zde se vazba realizuje především hydrofobními interakcemi mezi hydrofobními řetězci fosfolipidů a hydrofobními postranními řetězci apolipoproteinů /o jejichž struktuře se říká, že je amfifilní/. Hydrofilní postranní řetězce apoproteinů vyčnívají do vodné fáze a umožňují transport lipidů v krevní plazmě. Vazba všech složek v lipoproteinových částicích je poměrně volná, protože při pohybu lipoproteinů v krevní plazmě se jednotlivé molekuly apoproteinů, ale i lipidů, snadno vyměňují za jiné. Existence shora popsaných komplexů fosfolipoproteinů v biomembránách i v lipoproteinech byla odvozena především z fyzikálních vlastností nativních systémů. Pokud je nám známo, takové komplexy nebyly, vzhledem k jejich malé stabilitě, zatím izolovány. Interakce lipidů s peptidy a bílkovinami se významně uplatňují i při některých jiných fyziologických dějích, například při myelinizaci nervových vláken, kdy se uskutečňuje mimo jiné vazba lysofosfatidylcholinu na basický protein myelinu, dále při tvorbě antiatelektaktického lipoproteinů, který vystýlá vnitřní povrch plicních alveolů a při vzniku ionoforů, komplexů lipidů s nižšími peptidy, které umožňují transport iontů přes membrány a podobně. V posledních letech je také věnována pozornost významu interakce lipidů a proteinů v potravinách, kde se vzniku komplexu přisuzuje významná úloha při trávení a při resorpci živin ze zařívacího traktu. V této souvislosti byly především studovány interakce neutrálních /amfoterních/ fosfolipidů /fosfatidylcholinu, lysofosfatidylcholinu/ s některými potravinářskými bílkovinami a jejich frakcemi, zejména s mléčnými a sójovými bílkovinami. Také z těchto prací vyplynulo, že při vzniku komplexů se uplatňují převážně hydrofobní interakce mezi acylovými řetězci fosfolipidů a hydrofobními skupinami bílkoviny a že polární část fosfolipidů zůstává relativně volná. Jinými slovy řečeno, izolace těchto komplexů pro praktické využití jako biologických faktorů v lékařství a ve výživě by byla, vzhledem k jejich malé chemické• Complexes formed by the interaction of proteins with phospholipids occur in all living objects, where they perform a number of functions, the most important of which are structural /biomembrane/ and transport /substance transporter functions across membranes or lipoproteins/. In biological membranes, complexes are formed at the phase interface of the lipid bilayer with integral and peripheral proteins. From the point of view of the structure of the complexes formed with integral proteins, these are formations where the binding of both components is mediated mainly by hydrophobic interactions between the hydrocarbon chains of the acyl groups of phospholipids and the lipophilic parts of amino acids in polypeptide molecules, such as aromatic nuclei in tryptophan, tyrosine and phenylalanine and aliphatic, or branched chains of leucine, isoleucine and valine. Peripheral proteins that are localized on the surface of membranes are bound to it by polar bonds and mostly also by hydrogen bonds. These bonds are also relatively weak, because peripheral proteins can be easily released from the surface, for example by the effect of dilute neutral salt solutions. The number of phospholipid molecules bound to a protein molecule depends both on the size of the integral protein molecule and on the composition and structure of its surface, which is in contact with the lipid bilayer. Phospholipids bound to a protein molecule are constantly exchanged at a rate comparable to the rate of lateral diffusion of these molecules in the membrane space, and their composition significantly affects the function of the given complex. Lipoproteins, which are the most important transport form of blood plasma lipids, are, like biomembranes, formed by a core /containing triacylglycerols and cholesterol esters/ and a shell formed by a phospholipid layer, to which special protein molecules, the so-called apoproteins, are bound. Here too, the binding is mainly carried out by hydrophobic interactions between the hydrophobic chains of phospholipids and the hydrophobic side chains of apolipoproteins /whose structure is said to be amphiphilic/. The hydrophilic side chains of apoproteins protrude into the aqueous phase and enable the transport of lipids in blood plasma. The binding of all components in lipoprotein particles is relatively loose, because during the movement of lipoproteins in blood plasma, individual molecules of apoproteins, but also lipids, are easily exchanged for others. The existence of the above-described phospholipoprotein complexes in biomembranes and in lipoproteins was derived mainly from the physical properties of native systems. As far as we know, such complexes have not yet been isolated due to their low stability. Interactions of lipids with peptides and proteins are also significantly applied in some other physiological processes, for example in the myelination of nerve fibers, when, among other things, the binding of lysophosphatidylcholine to the myelin basic protein takes place, in the formation of antiatelectatic lipoproteins, which line the inner surface of the pulmonary alveoli, and in the formation of ionophores, complexes of lipids with lower peptides that enable the transport of ions across membranes, etc. In recent years, attention has also been paid to the importance of the interaction of lipids and proteins in foods, where the formation of the complex is attributed to a significant role in digestion and in the resorption of nutrients from the digestive tract. In this context, the interactions of neutral /amphoteric/ phospholipids /phosphatidylcholine, lysophosphatidylcholine/ with some food proteins and their fractions, especially with milk and soy proteins, have been studied. These works also showed that the formation of complexes is mainly due to hydrophobic interactions between the acyl chains of phospholipids and the hydrophobic groups of the protein, and that the polar part of the phospholipids remains relatively free. In other words, the isolation of these complexes for practical use as biological factors in medicine and nutrition would be, due to their small chemical

CS 269834 Bl a fyzikální stabilitě jen obtížně realizovatelná. Dosvědčuje to ostatně i skutečnost, že komplexy tohoto typu se zatím nikde neobjevily na trhu.CS 269834 Bl and physical stability is difficult to implement. This is also evidenced by the fact that complexes of this type have not yet appeared on the market.

Pro průmyslovou výrobu a pro aplikace jako biologické faktory v lékařství, potravinářském průmyslu a ve výživě zvířat jsou podle vynálezu vhodné fosfolipoproteiny charakterizované tím, že obsahují kyselé fosfolipidy a peptidy nebo bílkoviny v hmotnostním poměru 1 až 50 : 99 až 50. Jako kyselé fosfolipidy lze použít přírodní nebo syntetické ' glycerolfosfolipidy nebo sfingofosfolipidy, obsahující aspoň jednu volnou kyselou fosfátovou nebo karboxylovou skupinu schopnou interakce s bazickými skupinami peptidů nebo bílkovin. Patří sem mimo jiné zejména kyseliny fosfatidová, bis/diacylglycerol/fosforečná, plasmanová, plasmenová a íosíatidylgylcerolfosforečná, dálo fosfatidylglycerol, difosfatidylglycerol, fosfatidylserin, fosfatidylinositol nebo jejich lysoderiváty, dále kyseliny ceramidfosforečná, ceramidfosfoinositol, ceramidfosfoserin nebo jejich směsi s neutrálními fosfolipidy.For industrial production and for applications as biological factors in medicine, the food industry and animal nutrition, phospholipoproteins are suitable according to the invention, characterized in that they contain acidic phospholipids and peptides or proteins in a weight ratio of 1 to 50: 99 to 50. Natural or synthetic glycerolphospholipids or sphingophospholipids containing at least one free acidic phosphate or carboxyl group capable of interacting with basic groups of peptides or proteins can be used as acidic phospholipids. These include, among others, in particular phosphatidic, bis/diacylglycerol/phosphoric, plasmanic, plasmanic and isothiocytidylglycerolphosphoric acids, as well as phosphatidylglycerol, diphosphatidylglycerol, phosphatidylserine, phosphatidylinositol or their lysoderivatives, as well as ceramidephosphoric, ceramidephosphoinositol, ceramidephosphoserine or their mixtures with neutral phospholipids.

> Jako peptidy se hodí nízkomolekulové i vysokomolekulové peptidy, obsahující nejméně dva aminokyselinové zbytky /dipeptid/, z nichž aspoň jeden je tvořen bazickou aminokyselínou, jako arginin, lysin, histidin nebo ornithin. Lze je připravit buď izolacemi z přírodních materiálů, nebo vhodnými metodami chemické syntézy a biosyntézy.> Suitable peptides are low-molecular and high-molecular peptides containing at least two amino acid residues /dipeptide/, at least one of which is a basic amino acid, such as arginine, lysine, histidine or ornithine. They can be prepared either by isolation from natural materials or by suitable methods of chemical synthesis and biosynthesis.

Bílkovinná složka ve fosfolipoproteinech může být tvořena jakoukoliv bílkovinou rostlinného, mikrobiálního nebo živočišného původu nebo připravená synteticky /čistě chemicky nebo biochemicky/, nativní nebo denaturovanou, která nese ve svých postranních řetězcích bazické skupiny schopné vázat fosfátové nebo karboxylové anionty. Mohou to být mimo jiné například proteinové koncentráty ze sóje, řepky, brambor, řas, z listů rostlin a stromů, z kvasinek, z mléka, kostí, z kůže, z krve a krevní plazmy, z vaječného bílku a žloutku nebo jejich směsi.The protein component in phospholipoproteins can be any protein of plant, microbial or animal origin or prepared synthetically /purely chemically or biochemically/, native or denatured, which carries basic groups in its side chains capable of binding phosphate or carboxyl anions. These can be, among others, protein concentrates from soy, rapeseed, potatoes, algae, from the leaves of plants and trees, from yeast, from milk, bones, from skin, from blood and blood plasma, from egg white and yolk or mixtures thereof.

• Fosfolipoproteiny podle vynálezu lze připravit intenzivním mícháním obou složek za teplot 10 až 100 °C. Fosfolipidy, které jsou za dané teploty tekuté, lze míchat s práškovými peptidy a bílkovinami,.přičemž se reakce urychluje přídavkem malého množství vody. Tuhé fosfolipidy lze předem rozpustit ve vhodných organických rozpouštědlech, například alifatických uhlovodících, v chlorovaných a fluorovaných uhlovodících, v diethyletheru a výšemolekulových etherech, v nižších alkoholech aj. Přebytečné rozpouštědlo se po reakci odstraní odpařením. Reakci mezi kyselými fosfolipidy a peptidy nebo bílkovinami lze uskutečnit i rozptýlením fosfolipidů ve vhodných roztocích bílkovin a odpařením vody ve vhodném zařízení za zvýšené teploty, popřípadě i sníženého tlaku.• Phospholipoproteins according to the invention can be prepared by intensive mixing of both components at temperatures of 10 to 100 °C. Phospholipids, which are liquid at a given temperature, can be mixed with powdered peptides and proteins, the reaction being accelerated by adding a small amount of water. Solid phospholipids can be dissolved in advance in suitable organic solvents, for example aliphatic hydrocarbons, chlorinated and fluorinated hydrocarbons, diethyl ether and higher molecular weight ethers, lower alcohols, etc. The excess solvent is removed by evaporation after the reaction. The reaction between acidic phospholipids and peptides or proteins can also be carried out by dispersing phospholipids in suitable protein solutions and evaporating water in a suitable device at elevated temperature or, optionally, reduced pressure.

Fosfolipidy jsou ve fosfolipoproteinech, připravených podle vynálezu, vázány nejen běžnými hydrofobními interakcemi a vodíkovými vazbami, ale prostřednictvím svých fosfá„ tových a volných karboxylových skupin i pevnějšími elektrostatickými vazbami na bazické skupiny lysinu, histidinu, argininu v postranních řetězcích peptidů a proteinů. Vznik této vazby, aí již H-vazebného iontového páru bez přenosu protonu nebo iontové vazby, * vyplývá mimo jiné i ze zřetelné změny pH reagujícího systému.Phospholipids in phospholipoproteins prepared according to the invention are bound not only by conventional hydrophobic interactions and hydrogen bonds, but also by stronger electrostatic bonds to the basic groups of lysine, histidine, and arginine in the side chains of peptides and proteins through their phosphate and free carboxyl groups. The formation of this bond, or rather an H-bonded ion pair without proton transfer or ionic bonding, results, among other things, from a distinct change in the pH of the reacting system.

Vazbou fosfolipidů na peptidy nebo bílkoviny se výrazně změní jejich rozpustnost ve vodě i v organických rozpouštědlech. Většina fosfolipoproteinů je na rozdíl od výchozích fosfolipidů dobře rozpustná nebo dispergovatelná ve vodě a chová se - podle poměru mezi fosfolipidem a peptidem nebo proteinem - jako typická povrchově aktivní látka, vytvářející s hydrofobními oleji emulze typu olej ve vodě nebo voda v oleji. Přítomnost výšemolekulové peptidové nebo proteinové složky zaručuje dobrou stabilitu vzniklých emulzí nebo disperzi.The binding of phospholipids to peptides or proteins significantly changes their solubility in water and in organic solvents. Most phospholipoproteins, unlike the original phospholipids, are highly soluble or dispersible in water and behave - depending on the ratio between phospholipid and peptide or protein - as a typical surfactant, forming oil-in-water or water-in-oil emulsions with hydrophobic oils. The presence of a high-molecular peptide or protein component guarantees good stability of the resulting emulsions or dispersions.

Příklad 1 kg práškového sójového koncentrátu obsahujícího 72 % hmot, proteinů bylo smícháno v uzavřeném homogenizátoru, napojeném na chlazený kondenzátor s disperzí 15 kg kyselých amonných solí fosfatidových a bis/diacylglycerol/fosforečných kyselin v 100 kgExample 1 kg of powdered soy concentrate containing 72% protein by weight was mixed in a closed homogenizer connected to a cooled condenser with a dispersion of 15 kg of acidic ammonium salts of phosphatidic and bis/diacylglycerol/phosphoric acids in 100 kg

CS 269834 Bl π-hexanu. Kyselé soli byly vyrobeny fosforylací diacylglycerolů ze slunečnicového oleje a parciální neutralizací plynným amoniakem a obsahovaly 40 % hmot, fosfatidových kyselin, 15 % hmot, bis/diacylglycerol/fosforečných kyselin, 6 hmot, jejich lysoderivátů, 1 \ mastných kyselin, 2 % hmot, diacylglycerolů a 36 % hmot, triacylglycerolů. Po přidání 2 kg vody byla reakčni směs 2 hodiny míchána při 40 až 55 °C za sníženého tlaku. Získaný fosfolipoprotein byl upraven na prážek v sítovém mlýnu a byl použit jako nutriční faktor v dietetických přípravcích pro sportovce. Obsahoval komplex fosfolipidů a bílkovin v hmotnostním poměru 25 : 75.CS 269834 Bl π-hexane. The acid salts were produced by phosphorylation of diacylglycerols from sunflower oil and partial neutralization with gaseous ammonia and contained 40 wt% phosphatidic acids, 15 wt% bis/diacylglycerol/phosphoric acids, 6 wt% their lysoderivatives, 1 \ fatty acids, 2 wt% diacylglycerols and 36 wt% triacylglycerols. After adding 2 kg of water, the reaction mixture was stirred for 2 hours at 40 to 55 °C under reduced pressure. The obtained phospholipoprotein was ground into powder in a sieve mill and used as a nutritional factor in dietetic preparations for athletes. It contained a complex of phospholipids and proteins in a weight ratio of 25 : 75.

Příklad 2 kg lyofilizovaného lidského seralbuminu reagovalo s disperzí 10 kg syntetické l-hexadecyl-2-lyso-sn-glycerol-3-fosforečné kyseliny /l-hexadecyl-2-lyso-plasmanové kyseliny/ v 200 ml diethyletheru a 20 ml vody. Po 30 minutách míchání byl diethylether oddestilován za sníženého tlaku při 30 °C a takto získaný práškový fosfolipoprotein byl sušen v tenké vrstvě ve vakuové sušárně po dobu 2 hodin při 30 °C. Přípravek obsahoval komplex fosfolipidů a bílkovin v hmotnostním poměru 1 : 99 a byl zkoušen jako modifikátor maligních transformací a růstu buněk.Example 2 kg of lyophilized human serum albumin was reacted with a dispersion of 10 kg of synthetic l-hexadecyl-2-lyso-sn-glycerol-3-phosphoric acid /l-hexadecyl-2-lyso-plasmatic acid/ in 200 ml of diethyl ether and 20 ml of water. After 30 minutes of stirring, the diethyl ether was distilled off under reduced pressure at 30 °C and the powdered phospholipoprotein thus obtained was dried in a thin layer in a vacuum oven for 2 hours at 30 °C. The preparation contained a complex of phospholipids and proteins in a weight ratio of 1 : 99 and was tested as a modifier of malignant transformation and cell growth.

Přiklad 3 kg ultrafiltrátu sérových mléčných bílkovin s obsahem 65 % hmot, proteinů bylo rozptýleno v disperzi 7 kg fosfatidylcholinové frakce sójového lecithinu v 30 litrech π-hexanu a po 20 minutách míchání bylo rozpouštědlo odpařeno při 40 °C za sníženého tlaku. Bylo získáno 16,5 kg komplexu obsahujícího fosfolipid a bílkovinu v hmotnostním poměru 50 : 50.Example 3 kg of ultrafiltrate of whey milk proteins containing 65% by weight of proteins were dispersed in a dispersion of 7 kg of phosphatidylcholine fraction of soy lecithin in 30 liters of π-hexane and after 20 minutes of stirring the solvent was evaporated at 40 °C under reduced pressure. 16.5 kg of a complex containing phospholipid and protein in a weight ratio of 50:50 was obtained.

Příklad 4 kg bílkoviny z brambor /85 % hmot, proteinu/ bylo v temperovaném homogenizátoru při 80 °C smícháno s 10 kg směsi fosfatidových a bis/diacylglycerol/fosforečných kyselin, získaných fosforylací diacylglycerolů z řepkového oleje s nízkým obsahem kyseliny erukové. Fosfolipidová směs obsahovala 60 % hmot, fosfatidové kyseliny, 10 % hmot, kyseliny bis/diacylglycerol/fosforečné, 15 % hmot, jejich lysoderivátů, 4 % hmot, mastné kyseliny a 11 % hmot, triacylglycerolů. Po 2 hod. míchání, když původně kyselá směs přešla na neutrální, byly získané fosfolipoproteiny prosety v sítovém mlýnu a použity jako nutriční faktory při výrobě dietetického pečivá a jako emulgátory v emulgovaných tucích. Hmotnostní poměr mezi fosfolipidy a proteiny byl v tomto komplexu 16 : 84.Example 4 kg of potato protein /85% protein by weight/ was mixed in a tempered homogenizer at 80 °C with 10 kg of a mixture of phosphatidic and bis/diacylglycerol/phosphoric acids, obtained by phosphorylation of diacylglycerols from rapeseed oil with a low erucic acid content. The phospholipid mixture contained 60% by weight of phosphatidic acids, 10% by weight of bis/diacylglycerol/phosphoric acids, 15% by weight of their lysoderivatives, 4% by weight of fatty acids and 11% by weight of triacylglycerols. After 2 hours of mixing, when the initially acidic mixture had become neutral, the obtained phospholipoproteins were sieved in a sieve mill and used as nutritional factors in the production of dietetic pastries and as emulsifiers in emulsified fats. The weight ratio between phospholipids and proteins in this complex was 16:84.

Přiklad 5Example 5

V 1 kg tekutých vaječných bílků s obsahem 10,5 % hmot, bílkovin bylo dispergováno 10 g sojového lecithinu, získané chromatografií lecithinu na sloupci oxidu hlinitého. Kysele reagující frakce obsahovala 64 % hmot, fosfatidylinositu, 12 % hmot, fosfatidylserinu, 10 % hmot, fosfatidylethanolaminu, 5 % hmot, fytoglykolipidů, 4 % hmot, fosfatidylcholesterolu, 1 % hmot, lysofosfatidylcholesterolu, 3 % hmot, fosfatidové kyseliny a 1 % hmot, mastných kyselin. Po 10 minutách míchání při 25 °C byla získaná emulze práškována v proudu horkého vzduchu v rozprašovací sušárně. Finální práškové fosfolipoproteiny byly použity jako nutriční faktor a emulgátor v enterální výživě. Obsahovaly fosfolipidy a bílkoviny v hmotnostním poměru 9 : 91.In 1 kg of liquid egg whites containing 10.5% protein by weight, 10 g of soy lecithin, obtained by chromatography of lecithin on an alumina column, was dispersed. The acid-reacting fraction contained 64% by weight, phosphatidylinositol, 12% by weight, phosphatidylserine, 10% by weight, phosphatidylethanolamine, 5% by weight, phytoglycolipids, 4% by weight, phosphatidylcholesterol, 1% by weight, lysophosphatidylcholesterol, 3% by weight, phosphatidic acid and 1% by weight, fatty acids. After 10 minutes of mixing at 25 °C, the obtained emulsion was powdered in a stream of hot air in a spray dryer. The final powdered phospholipoproteins were used as a nutritional factor and emulsifier in enteral nutrition. They contained phospholipids and proteins in a weight ratio of 9 : 91.

Příklad 6Example 6

Ke 500 mg vodného roztoku /4%/ nonapeptidu bradykinu bylo při 40 °C přimícháno 100 mg 1% disperze 1,2-diolevl-sn-glycerol-3-fosfátu /fosfatidové kyseliny/, připravené reakcí 1,2-sn-dioleylglycerolu oxychloridem fosforečným. Po 5 minutách míchání seTo 500 mg of an aqueous solution (4%) of bradykinin nonapeptide was added at 40 °C 100 mg of a 1% dispersion of 1,2-dioleyl-sn-glycerol-3-phosphate (phosphatidic acid), prepared by reacting 1,2-sn-dioleylglycerol with phosphorus oxychloride. After 5 minutes of mixing,

CS 269834 Bl původně kyselá reakce směsi změnila na neutrální. Získaný roztok fosfolipoproteinů byl použit jako biologicky aktivní látka při studiu experimentálních zánětů. Hmotnostní poměr mezi kyselým fosfolipidem a peptidem byl 5 : 95.CS 269834 Bl the originally acidic reaction of the mixture changed to neutral. The obtained solution of phospholipoproteins was used as a biologically active substance in the study of experimental inflammations. The weight ratio between acidic phospholipid and peptide was 5 : 95.

Fosfolipoproteiny jsou nové látky, jejichž uplatnění v lékařství, v potravinářském průmyslu, v zemědělství, popřípadě i v jiných oborech si vyžádá ještě značnou výzkumnou práci. Podle zatím získaných výsledků lze počítat s jejich využitím pro přípravu disperzních enterálních dietních směsí pro aplikaci v medicíně, které se zavádějí jako plnohodnotný doplněk parenterální výživy. V dermatologii se pravděpodobně uplatní především komplexy s albuminy a kolageny jako přísady do krémů a lotionů a jako farmaka pro léčení ran a popálenin. V humánní výživě je lze aplikovat jako aditiva s vysokou nutriční hodnotou do nových typů dietetik a směsi s roborujícím účinkem, zejména pro sportovce, rekonvalescenty, nemocné se zhoubnými nádory jakož i pro fyziologicky stárnoucí populaci. Dále jako netoxické emulgátory a stabilizátory do speciálních potravinářských emulzí a jako dispergátory tuku v masných výrobcích a podobně.Phospholipoproteins are new substances, the application of which in medicine, in the food industry, in agriculture, and possibly in other fields will still require considerable research work. According to the results obtained so far, we can count on their use for the preparation of dispersible enteral dietary mixtures for application in medicine, which are introduced as a full-fledged supplement to parenteral nutrition. In dermatology, complexes with albumins and collagens will probably be used primarily as additives to creams and lotions and as pharmaceuticals for the treatment of wounds and burns. In human nutrition, they can be applied as additives with high nutritional value to new types of dietetics and mixtures with a roborating effect, especially for athletes, convalescents, patients with malignant tumors, as well as for the physiologically aging population. Furthermore, as non-toxic emulsifiers and stabilizers in special food emulsions and as fat dispersants in meat products, etc.

Claims

1. Phospholipoproteins composed of acidic natural or synthetic glycerophospholipids and proteins of plant, microbial or animal origin, characterized in that they contain acidic phospholipids and peptides or proteins in a weight ratio of 1 to 50: 99 to 50.

2. Phospholipoproteins according to item 1, characterized in that the peptides contain at least two amino acid residues, at least one of which is formed by a basic amino acid such as arginine, lysine, histidine or ornithine.

3. A method for producing phospholipoproteins according to items 1 and 2, characterized in that acidic phospholipids or their solutions in organic solvents or their dispersions in water are mixed with powdered peptides or proteins or with aqueous solutions of peptides or proteins at a temperature of 10 to 100 °C under intensive stirring and, after the reaction is complete, the excess water is removed by evaporation or azeotropic distillation.