CS270193B1 - Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270193B1 CS270193B1 CS888151A CS815188A CS270193B1 CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1 CS 888151 A CS888151 A CS 888151A CS 815188 A CS815188 A CS 815188A CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glycoprotein
- hybridoma
- herpes simplex
- simplex virus
- type
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález sa týká nového hybridómu) tj. hybridného jednobunkového organizmu, zostrojeného fúziou myšej myelómovej buňky Sp2/O a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujúcej protilátku voči glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2.
U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antigénne odlišné typy Herpes simplex typ 1 a typ 2. Ooteraz sa protilátky (antieéra) voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovali imunizáciou pokusných zvierat, najčastejíie králikov, purifikovaným alebo nepurifikovaným vírusom reep. niektorým ižolovaným proteínom-(Forghani B., Schmidt N., Lennette E.H.: Solid phase radioimmunoassay for identification of herpesvirue hom-inis types 1 and 2 from clinical material. Appl. Microbiol.' 28, (1974) 661-667) Dreeaman G.R., Courtney R:J., Adam E., Melnick O.L.t Detection of herpesvirus type-specific antibody by microsolidphase radioimmunometric assay) Intervirology 12, (1979) 115-119),. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané poviacerych dávkách antigénu, slúžilo ako Zdroj protilátek tzv. typovošpacifických,'ktorésa využívali na dókaz antigénu virusu Herpes simplex typ 2 v základnom výskume a v imunodiagnoatickej praxi. Vzhladom na to, ze virusy Herpes simplex typ 1 a 2 obsahujú nielen typovošpacifioké,'ale aj typovo spoločns antigénne determinanty, takto připravené antieéra voči virusu Herpse simplex obsahuji! vysoké hladiny typovospoločných protilátok, ktoré sťažujú resp. úplné znemožňujú správné určenie typu infikujúceho virusu pri diagnostickom testovaní. Typovospoločné protilátky sa obvykle odstraňujú zo sér vysycovaním s vírusom Herpes simplex typ 1, čo je procedúra velmi náročná na materiál a navlac len v malom počte pripadov úspěšná. Výrobně Saríe konvenčných typovošpecifických antisér aa dajú ťažko štandardizovať a bývaju v širokom rozmedzi kvality. V poslednom čase sa s úspěchem používají! na typizáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonálne protilátky tzv. typovošpecifické, ktoré* su schopná detegovať infekciu vírusom Herpes simplex typ 2 v klinickom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytni!, ak je k dispozici! hybridómova buňková linie produkujúca typovošpeclfickú monoklonálnu protilátku voči glykoproteinu gG virusu Herpes simplex typ 2, ktorá je uložena v zbierke hybridomov Virologického ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 303/4.
Uvedený hybridóm bol získaný spSsobom známým z odbornej literatury (Kohler,G.,_ Milstein, C.t Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature, 256, (1975), 495., Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. Monoclonal antlbodiest A new dimension in Biological analyses. Kennett R.H. a spol., eds. New York, Plenum Frees (19B0), 370.) Hybridně buňky získané po fúzii myších my.elomóvych Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myši BALB/c imunizovanéj extraktom buniek infikovaných vírusom Herpes simplex typ 2, boli klonované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 303/4.
Výhodou hybridómu je, že produkuje homogěnnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s glykoproteínom gG virusu Herpes simplex typ 2. Hybridóm VÚ 303/4 možno kultivovat in vit,ro v mediach vhodných pri živo)ííSne buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmeňa BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bez áalSej imunizácie zvieraťa antigénom.
Přikladl
Za účelom získania vSčšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 303/4 kultiváciou hybridómovych buniek in vivo, 5x10^ buniek se aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši. Pre lepšle uchytenle buniek bola myš 15 dní před aplikáciou buniek premedikovaná parafinovým olejom (0,5 ml intraperitonealne na 1 myš). Po 10 dnoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině, bola myS zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobrané. Týmto postupem možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky. Ascitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 303/4 vykazovala Specifická vSzbu k virusu Herpes simplex typ 2 v rádioimunoanalytickom teste (RIA) 'a v imunoenzymatlckej
CS 270 193 Bl analýze (ELISA). Metodou rádioimunoprecipitácie a elektroforézy v polyakrylamidovom géli sa zistila vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotein gG vírueu Herpes simplex typ 2.
Buňky hybrldómu VÚ 303/4 rastů in vitro ako polosuspenzná kultdra. Majd gulatý tvar a velkost charakteristická pro myelómove buňky. Obsahujd fúzované buňkové jadrá, su aneuploídné. Buňky hybridómu VÚ 303/4 majd ultraštruktdrny obraz typických myelómovych buniek, kde prevažujdcou organelou šu volné a na membránu viazané polyribozómy. Základným kultivačnym médiom je Dulbeccova modifikácia· Eagleovho minlmálneho esenciálneho média (Dulbecco, R., Freeman, G., Virology ^(1959, 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pře kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekolostrálnym tel’acim sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37°C v atmosféře 5% C02· 3eho generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgG 2a. .
Hybridóm VÚ 303/4 máže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gG vírueu Herpes simplex typ 2, ktorá sa dá použiť na kvalitativny dSkaz přítomnosti virusu Herpes simplex typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva in.fikujdceho virusu resp. glykoproteínu gG, pri vyhodnocovaní epidemiologickej eituácie, na purifikáciu glykoproteínu gG z extraktov infikovaných buniek pomocou imunoafinitnej chromatografle a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 2a) pre přípravu ántisér Specifických pře uvedend podtriedu.
Claims (1)
- MySÍ lymfocytárny hybridóm VÚ 303/4, produkujdci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG 2a voňi glykoproteínu gG vírueu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815188A1 CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270193B1 true CS270193B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270193B1 (sk) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888151A patent/CS270193B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Orvell et al. | The effects of monoclonal antibodies on biologic activities of structural proteins of Sendai virus. | |
| Noble et al. | Anti-gD monoclonal antibodies inhibit cell fusion induced by herpes simplex virus type 1 | |
| Yamashita et al. | Prevalence of newly isolated, cytopathic small round virus (Aichi strain) in Japan | |
| Thorley-Lawson et al. | Monoclonal antibodies against the major glycoprotein (gp350/220) of Epstein-Barr virus neutralize infectivity. | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| CN105950563B (zh) | 杂交瘤细胞株7e3及其分泌的抗口蹄疫a型病毒的单克隆抗体与应用 | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| CN107937352B (zh) | 用于检测小反刍兽疫病毒h蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条 | |
| Routledge et al. | The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by indirect immunofluorescence | |
| Buck et al. | Monoclonal antibodies specific for cell culture mycoplasmas | |
| Cote Jr et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus: detection of virus neutralization and other antigen-antibody systems using infected human and murine cells | |
| Weiland et al. | Development of monoclonal neutralizing antibodies against bovine viral diarrhea virus after pretreatment of mice with normal bovine cells and cyclophosphamide | |
| Rossiter et al. | The development of antibodies in rabbits and cattle infected experimentally with an African strain of malignant catarrhal fever virus | |
| Gamoh et al. | Use of ELISA forin vitroPotency Test of Rabies Vaccines for Animal Use | |
| Cui et al. | Monoclonal-antibody-mediated enzyme-linked immunosorbent assay for detection of reticuloendotheliosis viruses | |
| Byzova et al. | Interaction of plum pox virus with specific colloidal gold-labeled antibodies and development of immunochromatographic assay of the virus | |
| CN116655779A (zh) | 新型冠状病毒抗体及其应用 | |
| Sawyer et al. | Quantitation of D antigen content in inactivated poliovirus vaccine derived from wild-type or sabin strains | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| CN105296435B (zh) | 杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫o型（o/gx/09-7）病毒的特异性单克隆抗体与应用 | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| Plata et al. | Identification of a viral antigen recognized by H-2-restricted cytolytic T lymphocytes on a murine leukemia virus-induced tumor. | |
| CS270195B1 (sk) | Myší lymfocytárny hybridóm VÚ 809/5 |