CS271835B1 - Method of purified allergens preparation from materials of biological origin - Google Patents
Method of purified allergens preparation from materials of biological origin Download PDFInfo
- Publication number
- CS271835B1 CS271835B1 CS883908A CS390888A CS271835B1 CS 271835 B1 CS271835 B1 CS 271835B1 CS 883908 A CS883908 A CS 883908A CS 390888 A CS390888 A CS 390888A CS 271835 B1 CS271835 B1 CS 271835B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- allergenic
- materials
- fraction
- separation
- gel
- Prior art date
Links
- 239000013566 allergen Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 claims description 9
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract description 3
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
(57) Řešení se týká způsobu průmyslové přípravy purifikovaných alergenů z extraktů alergenních materiálů biologického původu.(57) The present invention relates to a process for the industrial preparation of purified allergens from extracts of allergenic materials of biological origin.
Je založeno na dělení komponent směsi dle jejich izoelektrických bodů samočinnou izoelektrickou fokusací bez nutnosti použití amíolytických pufrů a dle molekulových hmotností gelovou chromatografii. Podle navrženého způsobu se vodivost extraktů alergenních materiálů upraví odsolením a neředěním na hodnoty 400 až 1 000 pS/cm a koncentrace bílkovin do 40 g/1, poté se ne extrakt alergenních materiálů v autofokuséru působí stejnosměrným elektrickým proudem při napětí 100 až 2 000 V při teplotě 2 až 8 °C dokud procházející proud neklesne alespoň na polovinu původní hodnoty, izolovaná frakce s nejvyšší alergenní aktivitou se pomoci gelové chromatografie rozdělí dle molekulových hmotností s následnou separací frakce o nejvyšší alergenní účinnosti, čímž se získá frakce s užším rozmezím izoelektrických bodů a molekulových hmotností, popřípadě lze působení stejnosměrného elektrického proudu nebo dělení pomocí gelové chromatografie alespoň jednou opakovat. Purifikovaných alergenů je možno použít k desensibilizační léčbě injekční i perorální formou a k výrobě diagnostických setů pro stanovení koncentrací specifických protilátek proti danému alergenu v sérech pacientů metodami RAST a jejich enzymovými modifikacemi v podmínkách in vitro.It is based on the separation of the components of the mixture according to their isoelectric points by self isoelectric focusing without the need for amolytic buffers and by molecular weight gel chromatography. According to the proposed method, the conductivity of the allergenic material extracts is adjusted by desalting and not diluting to 400-1000 pS / cm and protein concentrations up to 40 g / l, then the allergenic material extract in the autofocuser is treated with direct electric current at 100-2000 volts at 2 to 8 ° C until the passing current drops to at least half of the original value, the isolated fraction with the highest allergenic activity is separated by molecular weight with the aid of gel chromatography, followed by separation of the fraction with the highest allergenic activity, thus obtaining a fraction with narrower range of isoelectric points and molecular by weight or alternatively, the action of direct current or separation by gel chromatography can be repeated at least once. Purified allergens can be used for desensitization treatment by injection and oral form and for the production of diagnostic kits for the determination of specific antibody concentrations against a given allergen in patient sera by RAST methods and their enzyme modifications under in vitro conditions.
-w·-w ·
CS 271835 BlCS 271835 Bl
Vynález se týká způsobu průmyslové připravy purlfikovaných alergenů z materiálů biologického původu pro diagnostiku a terapii v oblasti humánní medicíny.The invention relates to a process for the industrial preparation of purified allergens from materials of biological origin for diagnosis and therapy in the field of human medicine.
Dosud se při puriíikaci a izolaci alergenů z biologických materiálů používá v průmyslovém měřítku kombinace různých separačnich metod, jako sráženi extraktů alergenních materiálů roztoky anorganických solí, dialýzy či ultrafiltraoe rozpuštěného precipitátu s následnou frakcionacl takto získaného surového alergenu gelovou, ionexovou, afinitní či hydrofobní chromatografii, preparativní polyakrylamidovou elektroforézou a v omezeném rozsahu preparativní izoelektrickou fokusaci. Tyto purifikační postupy se vyznačují pracností a složitostí, vysokými nároky na přístrojové vybavení a v průmyslovém měřítku především vysokými cenami používaných médií(ionexů, amfolytických pufrů atd.). Z tohoto důvodů jsou purifikované alergeny drahé, což omezuje jejich široké využití v lékařské praxi.Until now, the purification and isolation of allergens from biological materials has used on an industrial scale a combination of different separation methods, such as precipitation of extracts of allergenic materials with solutions of inorganic salts, dialysis or ultrafiltration of the dissolved precipitate followed by fractionation of the crude allergen thus obtained by gel, ion exchange, affinity or hydrophobic chromatography. polyacrylamide electrophoresis and to a limited extent preparative isoelectric focusing. These purification processes are characterized by laboriousness and complexity, high demands on instrumentation and, on an industrial scale, especially high prices of used media (ion exchangers, ampholytic buffers, etc.). For this reason, purified allergens are expensive, which limits their widespread use in medical practice.
V ČSfR je znám způsob dělení a purifikace biologických materiálů na základě rozdílnosti jejich izoelektrických bodů bez použití amfolytických pufrů - samočinná izoelektrická fokusace (čs. autorské osvědčeni č. 211 B56) a zařízení k provádění způsobu (čs. autorské osvědčení č. 234 801). Princip samočinné izoelektrické fokusace podle uvedeného autorského osvědčení spočívá v tom, že na směs látek biologického charakteru, pokud jejich roztok má vodivost do 400 xiS/cm a koncentraci dělených látek do 50 g/1, se působí stejnosměrným proudem po dobu 6 až 72 hodin. Pro dělení alergenů, jejichž molekulové hmotnosti se pohybují v širokém rozmezí 10 000 až 100 000, způsob dělení samočinnou izoelektrickou fokusaci podle autorského osvědčení č. 211 856 nevyhovuje.The method of separation and purification of biological materials based on the difference of their isoelectric points without the use of ampholytic buffers - automatic isoelectric focusing (Czech author's certificate no. 211 B56) and equipment for carrying out the method (Czech author's certificate no. 234 801) is known. The principle of automatic isoelectric focusing according to said author's certificate is that a mixture of substances of biological character, if their solution has a conductivity of up to 400 xiS / cm and a concentration of separated substances of up to 50 g / l, is treated with direct current for 6 to 72 hours. For the separation of allergens whose molecular weights are in the wide range of 10,000 to 100,000, the separation method does not comply with the automatic isoelectric focusing according to the author's certificate No. 211 856.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob přípravy purifikovaných alergenů z materiálů biologického původu samočinnou izoelektrickou fokusaci a následnou gelovou chromatografii, vyznačující se tím, že vodivost extraktů alergenních materiálů se upraví odsolením a neředěním na hodnoty 400 až 1 000 jjS/cm a koncentrace bílkovin do 40 g/1, potom se na extrakt alergenních materiálů v autofokuséru působí stejnosměrným elektrickým proudem při napětí 100 až 2 000 V při teplotě 2 až 8 °C, dokud procházející proud neklesne alespoň na polovinu původní hodnoty, izolovaná frakce s nejvyšší alergenní aktivitou se pomocí gelové chromatografie rozdělí podle molekulových hmotností s následnou separací frakce o nejvyšší alergenní účinnosti, čímž se získá frakce s užším rozmezím izoelektrických bodů a molekulových hmotností, popřípadě lze působení stejnosměrného elektrického proudu nebo dělení pomocí gelové chromatografie alespoň jednou opakovat.The above disadvantages are eliminated by the method of preparation of purified allergens from materials of biological origin by automatic isoelectric focusing and subsequent gel chromatography, characterized in that the conductivity of the extracts of allergenic materials is adjusted by desalting and non-dilution to values of 400-1000 µS / cm and protein concentration up to 40 g / l. , then the extract of allergenic materials in the autofocuser is treated with a direct electric current at a voltage of 100 to 2,000 V at a temperature of 2 to 8 ° C until the passing current has dropped to at least half of its original value. molecular weight followed by separation of the fraction with the highest allergenic activity, thus obtaining a fraction with a narrower range of isoelectric points and molecular weights, or alternatively by direct electric current or separation by means of gel chromatography repeat the graffiti at least once.
Alergenně nejúčinnějšl frakci lze použít jako diagnostický či desensibilizační alergen v injekční nebo perorální formě v humánní medicíně nebo k laboratorní diagnostice v podmínkách in vitro.The most allergenic fraction can be used as a diagnostic or desensitizing allergen in injectable or oral form in human medicine or for laboratory diagnostics under in vitro conditions.
Optimalizací podmínek samočinné izoelektrické fokusace pro alergeny podle vynálezu se docílí větší dělicí schopnosti, v jejímž důsledku lze získat čistší alergen, což je z hlediska jeho použití velmi důležité.By optimizing the automatic isoelectric focusing conditions for the allergens of the present invention, a greater separation capacity is achieved, which results in a cleaner allergen, which is very important for its use.
Příklad:Example:
Bytový prach se v poměru 1 : 5 (hmot./obj.) extrahuje 48 h 0,005 mol/1 NH^OH za občasného promíchání. Po uplynutí této doby se oddělí roztok alergenu od pevného zbytku a vyprecipituje trojnásobným objemem vychlazeného acetonu. Po 12 hodinovém stání se precipitát odfiltruje, promyje acetonem a vysuší. Takto získaný surový alergen se rozpustí v destilované vodě v koncentraci 0,86 g/1 na roztok o vodivosti 480 pS/cm a podrobí se samočinné izoelektrické fokusaci v autofokusačnim zařízení. Napětí se pohybuje v rozmezí 200 až 1 200 V, přičemž součin napětí a procházejícího proudu nepřesáhne hodnotu 5 W pro fokusér o objemu 1 litr. Fokusace byla ukončena po 200 hodinách (pokles proudu na polovinu). Všechny operace až do ukončení fokusace se provádějí při 4 °C.The household dust is extracted at a ratio of 1: 5 (w / v) for 48 h with 0.005 mol / l NH 4 OH with occasional stirring. After this time, the allergen solution is separated from the solid residue and precipitated with three times the volume of chilled acetone. After standing for 12 hours, the precipitate was filtered off, washed with acetone and dried. The crude allergen thus obtained is dissolved in distilled water at a concentration of 0.86 g / l to a solution having a conductivity of 480 pS / cm and subjected to automatic isoelectric focusing in an autofocuser. The voltage ranges from 200 to 1200 V, with the product of voltage and current passing not exceeding 5 W for a 1 liter focuser. The focusing was stopped after 200 hours (the current was halved). All operations are performed at 4 ° C until the focus is complete.
Obsah komůrek fokuséru o nejvyšší alergenní aktivitě stanovené standardními metodami (kožními testy) - jednalo se o komůrky s pH mezi 9,5 až 12,5 - se sjednotí a rozdělí podle molekulových hmotností na sloupci molekulového síta Sephadex G 200, frakce o nejCS 271835 Bl vyšší alergenní aktivitě se zlyofilizuje. Po odpovídajícím naředění Cocovým roztokem, sterilní filtraci, otestování sterility a netoxicity ji lze použít jako diagnostický či desensibilizačni alergen v injekční formě nebo se lyofilizát po rozpuštění v 50% glycerinu použije jako alergen perorální.The contents of the focusers of the highest allergenic activity determined by standard methods (skin tests) - these were cells with a pH between 9.5 and 12.5 - were unified and divided according to molecular weight on the Sephadex G 200 molecular sieve column, fraction of maximum CS 271835 B1 higher allergenic activity is lyophilized. After appropriate dilution with Coc solution, sterile filtration, sterility testing and non-toxicity, it can be used as a diagnostic or desensitizing allergen in injectable form, or the lyophilisate can be used as an oral allergen when dissolved in 50% glycerin.
Vynález je možno použít při purifikaci alergenů z biologických materiálů různého původu jako pylů, trav, bylin, stromů a keřů, prachů z různých prostředí a materiálů, členovců (hmyz, roztoči), řas a sinic, potravin, bakterií, plísní, hub a kvasinek. Kromě vlastni terapie lze purifikovaných alergenů využít i k alergodiagnostice in vitro k výrobě diagnostických setů pro stanovení koncentrací specifických protilátek v sérech pacientů proti danému alergenu metodami RAST a jejich enzymovými modifikacemi.The invention is applicable to the purification of allergens from biological materials of various origins such as pollen, grasses, herbs, trees and shrubs, dust from various environments and materials, arthropods (insects, mites), algae and cyanobacteria, food, bacteria, fungi, fungi and yeasts. . In addition to the actual therapy, purified allergens can also be used for in vitro allergodiagnostics for the production of diagnostic kits for the determination of specific antibody concentrations in the sera of patients against a given allergen by RAST methods and their enzyme modifications.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS390888A1 CS390888A1 (en) | 1990-03-14 |
| CS271835B1 true CS271835B1 (en) | 1990-11-14 |
Family
ID=5380522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS883908A CS271835B1 (en) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS271835B1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7887821B2 (en) | 2007-12-20 | 2011-02-15 | Alk-Abello A/S | Process for producing an allergen extract |
-
1988
- 1988-06-07 CS CS883908A patent/CS271835B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS390888A1 (en) | 1990-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CH634334A5 (en) | NEW GLYCOPROTEIN AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
| Coyne et al. | Guinea Pig Lymphotoxin (LT) II. Physicochemical Properties of LT Produced by Lymphocytes Stimulated with Antigen or Concanavalin A: Its Differentiation from Migration-Inhibitory Factor (MIF) | |
| DE3019847A1 (en) | METHOD FOR PRODUCING HUMAN INTERFERON AND MEANS CONTAINING IT | |
| EP0307002A1 (en) | Method for producing an antithrombin III concentrate | |
| JPS62174027A (en) | Improved chymopapain and pharmaceutical composition | |
| DE3316464A1 (en) | VIRUSANTIGEN, METHOD FOR ITS DETERMINATION AND APPLICATION IN DIAGNOSIS AND THERAPY (VACCINE) | |
| CS271835B1 (en) | Method of purified allergens preparation from materials of biological origin | |
| Franklin et al. | Comparison of honeybee venoms and their components from various sources | |
| Hirst | THE NATURE OF THE VIRUS RECEPTORS OF RED CELLS: III. Partial Purification of the Virus Agglutination Inhibitor in Human Plasma | |
| CN111530439B (en) | Method for preparing fixed-value syphilis specific antibody in serum | |
| Shulman et al. | The allergic response to stinging insects: I. Preparation of extracts and their biochemical characterization | |
| US4228068A (en) | Peptide complexes of DNA-containing organisms | |
| Kuo et al. | A new allergen from the perienteric fluid of Ascaris suum with respect to charges | |
| Mackie et al. | On the immunological nature of the principle in serum responsible for the Wassermann reaction, with reference also to the flocculation reaction of Sachs and Georgi | |
| DE2815758C3 (en) | Peptide complexes from organisms containing DNA | |
| RU2031657C1 (en) | Method of preparing allergen for revealing sensitization of organism to fungus of candida genus | |
| JP4581082B2 (en) | Autoimmunity enhancer, method for producing the same, and cosmetics using the same | |
| AT356823B (en) | DIAGNOSIS METHOD FOR DETECTING COLIENTEROTOXIN | |
| DE2353035B2 (en) | Process for stabilizing human or animal body fluids or plant extracts | |
| CN109771641A (en) | A kind of Chinese juniper pollen allergen extract, its immersion liquid and preparation method thereof | |
| Williams | Ancylostoma caninum: Analysis of antigens of the canine hookworm | |
| Jones et al. | Studies on the Fractionation of Tuberculin and Johnin: I. Fractionation of Tuberculin Proteins | |
| Eichhorn | FIXATION, WITH SPECIAL REFERENCE TO BOVINE TUBERCULOSIS | |
| Porter | The Precipitin, Complementbinding, and Anti-Opsonic Tests in Tuberculous and Normal Cattle | |
| US4426454A (en) | Diagnostic method for immune disorders |