CS276109B6 - Způsob stabilizace lyofilizované vakcíny z kmene Propionibacterium acnes 26/78 - Google Patents

Abstract

‘Způsob stabilizace lyofilizované vakciny Propionibacterium acnes 26/78 spočívá v homogenizaci suspenze bakterinu Propionibacterium acnes 26/78 s antiseptikem, glycineni a lidským albuminem, přičemž hmotnostní poměr sušiny suspenze bakterinu a lidského albuminu činí 1 : 2,85 až 5 a hmotnostní poměr glycinu a lidského albu- •minu činí 1 : 2 až 4 a vzniklá směs se doplní vodou pro injekce v hmotnostním poměru k sušině bakterinu 55 až 60 : 1, načež se tato směs podrobí lyofilizaci.

Description

Vynález se týká způsobu stabilizace lyofilizované vakciny z kmene Propionibacterium acnes 26/78. , .

Při přípravě lyofilizovaných vakcin se používají stabilizátory nejrůznějšího složení. Zpravidla jde o některé cukry, například sacharózu, dále se používá želatina nebo hovězí albumin. Množství přidávané stabilizující příměsi je různé. Často se používá vfce různých látek k dosažení žádoucího stabilizujícího účinku. Jejich poměr se stanovuje empiricky individuálně pro jednotlivá různá léčiva.

Lyofilizovaná vakcína Propionibacterium acnes musí obsahovat kromě účinné látky a konzervační přísady také příměs vhodného stabilizátoru, který zajistí dobrý vzhled konečného výrobku, jeho dobrou rozpustnost a dlouhodobou stabilitu. Pro nově vyvíjenou vakcinu Propionibacterium acnes 26/78 byly zkoušeny různé stabilizátory a jejich směsi. Výsledky byly proměnlivé. Největším nedostatkem byla špatná rozpustnos výrobku a jeho krátkodobá stabilita. Z firemní literatury je znám způsob stabilizace obdobné vakciny přidáním glycinu v koncentraci 2,3 íí hmot. Tento způsob stabilizace má však za následek nedokonalou rozpustnost lyofilizátu a pokles stability přípravku při pokojové teplotě.

Tyto nedostatky odstraňuje způsob stabilizace lyofilizovné vakciny Propionibacterium acnes 26/78 podle vynálezu. Jeho podstata spočívá v tom, že se kultura po fermentaci a tepelné inaktivaci, bakteriu Propionibacterium acnes 26/78, zhomogenizuje s antiseptikem, glycinem a lidským albuminem, přičemž hmotnostní poměr sušiny bakterinu a lidského albuminu činí 1 : 2,85 až 5 a hmotnostní poměr glycinu a lidského albuminu činí 1 : 2 až 4 a vzniklá směs se doplní vodou pro injekce v hmotnostním poměru k sušině bakterinu 55 až 60 : 1. Jako antiseptikum je vhodné použít merthiolát sodný. Po přidání antiseptika a stabilizačnich přísad k suspenzi bakterinu se směs podrobí lyofilizaci.

Tyto stabilizační přísady přidané v určeném poměru chrání jednotlivé lyofilizované buňky před vzájemným slepením. Použitím lidského albuminu je docíleno úplné rozpustnosti lyofilizátu a dlouhodobé stability přípravku při pokojové teplotě. To umožňuje skladování přípravku i mimo ledničku bez nebezpečí ztráty účinku. Použitím lidského albuminu nevzniká u léčených osob nebezpečí sensibilizace. .

Lyofilizovaná vakcina Propionibacterium acnes 26/78 stabilizovaná způsobem podle vynálezu se vyznačuje těmito vlastnostmi:

- rozpustost do 1 minuty po přidání fyziologického roztoku

- rozpuštěná vakcina je zcela homogenní i při mikroskopickém zkoumání; mikroskopický vzhled rozpuštěné vakciny je shodný se vzhledem téže vakciny před lyofilizaci

- biologická aktivita vakciny je na velmi dobré úrovni

- všechny výše uvedené vlastnosti se nemění ani po 20 měsících skladování lyofilizované vakciny při teplotě 37 °C.

Způsob stabilizace lyofilizované vakciny z kmene Propionibacterium acnes 26/78 je blíže objasněn na následujících příkladech.

Příklad 1

Kultivace Propionibacterium acnes 26/78 byla ukončena po dosažení stacionární fáze růstové křivky, poté se teplota fermentační nádoby zvýšila na 60 °C sg dobu lha následně zchlazena na pokojovou teplotu. Získaný bakteriu byl centrifugován, promyt destilovanou vodou a resuspendován v destilované vodě.

Způsob stabilizace 1. účinného bakterinu připraveného z kmene Propionibacterium acnes 26/78 probíhal následovně. Množství jednotlivých složek směsi před lyofilizaci: bakteriu 7 mg suché hmotnosti, merthiolát sodný 0,04 mg, glycin 9,2 mg. Směs byla doplněna do 400 mg vodou pro injekce. Merthiolát sodný je přidáván jako antiseptikum. Směs byla lyofilizována do zbytkové vlhkosti 2,1 % hmot., zatavena v atmosféře dusíku a skladována při 37 °C.

CS 276109 B 6 2

Sledování kvality stabilizované lyofilizované vakciny z kmene Propionibacterium acnes 26/78 probíhalo v časovém úseku 12 měsíců hodnocením doby rozpustnosti lyofilizátu v sekundách (R), maximálního počtu bakterií v mikroaglutinátech (A) a relativní imunostimulační aktivity v ¾ (I) vztaženo k počáteční hodnotě (M=0).

Hodnocení kvality vakciny stabilizované způsobem 1.

M	0	1	3	6	12
R	12	30	30	30	35
A	20	50 100	100	100
I	100	101	96	80	84
kde	M je délka	skladování	v	měsících.

Příklad 2

Při kultivaci bylo postupováno stejně jako v příkladu 1.

Stabilizace byla provedena způsobem podle vynálezu. Způsob stabilizace před lyofilizací 2. spočíval v homogenizaci účinného bakterinu připraveného z kmene Propionibacterium acnes 26/78 v množství 7 mg suché hmotnosti, merthiolátu sodného jako antiseptické přísady v množství 0,04 mg, 9,2 mg glycinu a 25 mg lidského albuminu. Ostatní podmínky lyofilizace, skladování i hodnocení stabilizované vakciny byly shodné s příkladem 1.

Hodnocení kvality vakciny stabilizované způsobem 2.

M	0	1	3	6	12
R	30	25	30	30	30
A	5	5	5	5	15
I	100	105	104	99	101

kde M je délka skladování v měsících

R - doba rozpustnosti lyofilizátu v sekundách

A - maximální počet bakterií v mikroaglutinátech

I - relativní imunostimulační aktivita v % vztaženo k počáteční hodnotě (M=0)

Příklad 3

Bylo postupováno shodně jako v příkladu 2. Stabilizace byla provedena způsobem 3. podle vynálezu s tím, že směs před lyofilizací obsahovala 35 mg lidského albuminu. Ostatní podmínky byly shodné s příkladem 2.

Hodnocení kvality vakciny stabilizované způsobem 3.

M	0 1 3	6 12
R	40 35 40	40 35
A	5 5 5	5 . 15
I	100 97 102	106 103
kde	M je délka skladování v i	měsících

R - doba rozpustnosti lyofilizátu v sekundách

A - maximální počet bakterií v mikroaglutinátech I - relativní imunostimulační aktivita v ¾ vztaženo k počáteční hodnotě (M=0)

CS 276109 B 6

Příklad 4

Bylo postupováno stejně jako v příkladu 1. Způsob stabilizace 4. spočíval v homogenizaci směsi sestávající se z 7 mg suché hmotnosti účinného bakterinu připraveného z kmene Propionibacterium acnes 26/78, merthiolátu sodného jako antiseptické přísady v množství

0,04 mg a 35 mg lidského albuminu. Ostatní podmínky byly shodné. Hodnocení kvality vakciny stabilizované způsobem 4.

M 0 1 3 6 12

R 120 140 180 180 180

A 5 10 5 10 20

I 100 89 103 93 92

kde M, R, A a I mají význam jako v předchozích příkladech.

Z hodnocení vyplývá, že způsob stabilizace 1., kdy hmogenizovaná směs před lyofiliza-

cí neobsahovala lidský albumin má za následek sice dobrou rozpustnost, ale problémy při skladování, kdy dochází k poklesu imunostimulační aktivity. Způsobem stabilizace 4., kdy homogenizovaná směs neobsahuje glycin, se získá vakcína, jejíž kvalita se skladováním podstatné nemění, ale lyofilizát je velmi špatně rozpustný. Tyto vlastnosti uvádí do souladu způsob stabilizace lyofilizované vakciny 2., 3. podle vynálezu.

Způsob stabilizace lyofilizované vakciny Propionibacterium acnes 26/78 podle vynálezu je určen pro přípravu léčiva vyráběného z kmene Propionibacterium acnes. Lze jej však využít i pro přípravu obdobných korynebakterilních vakcin z jiných kmenů.

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Způsob stabilizace lyofilizované vakciny Propionibacterium acnes 26/78 přídavkem antiseptika a glycinu k bakterinu, vyznačující se tím, že se suspenze bakterinu Propionibacterium acnes 26/78 zhomogenizuje s antiseptikem, glycinem a lidským albuminem, přičemž hmotnostní poměr sušiny suspenze bakterinu a lidského albuminu činí 1 : 2,85 až 5 a hmotnostní poměr glycinu a lidského albuminu činí 1 : 2 až 4 a vzniklá směs se doplní vodou pro injekce v hmotnostním poměru k sušině bakterinu 55 až 60 : 1, načež se tato směs podrobí lyofilizaci. '