CS277576B6 - Kmeň mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCF-2035 - Google Patents

Description

Vynález sa týká kmeňa mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCF-2035 produkujúceho cefalosporín C /dalej CFS-C/. Tento kmeň bol získaný z kmeňa Acremonium chrysogenum CCM F-750, šlachtením zameraným na zvýšenie produkcie CFS-C.

Východzí kmeň dosahoval produkčnú aktivitu v baničkách 10 200 ug/ml a‘ v tančíku 22 400 ug/ml.

Popisovaný, kmeň mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCF-2035 bol získaný tak, že materský kmeň Acremonium chrysogenum CCM-740, bol vystavený mutagénnemu šlachteniu UV-svetlom.

Šlachtenie bolo robené tak, že vysporulovaná kultúra rodičovského kmeňa na šikmom agare SP-S o zložení: peptón 1 %, maltóza 3,8 %, tekutá rafináda /ťažká šťava/ o obsahu 60 %, sacharózy 4 %, agar 2,4 % sa zmyla 10 ml sterilněj vody, přefiltrovala cez vatovú zátku umiestnenú na pipete, za účelom. oddelenia hýf a artrospór od konídií. Z takejto suspenzie konídií, vhodné nariedenej sa očkovali Petriho misky s pódou SP-S.

Mutagenný zásah sa robil pomocou UV světla germicídnou lampou Philips TUV 30 W s rozdělením spektrálnéj energie - vlnová dížka 253,7 nm až 93,5 %, ostatně vlnové dížky 6,5 %. Vzdialenosť misky od zdroja žiarenia bola 30 cm. Po ožiarení sa misky okamžité preniesli do inkubátora na teplotu 28 °C, kde sporulovali 11 dní. Vysporulované kolonie boli za aseptických podmienok izolované a přenesené na šikmý agar pódy SP-S. Ako pomnožovacia submerzná póda sa použila póda IP-V o zložení: sacharóza 1,5 %, C₂H₇O₂N 0,5 %, DL-metionín 0,1 %, KH₂PO₄ 0,027 %, kukuřičný výluh /100 %-ný/ 0,8 %, metyloleát 0,08 %. Po 72 hodinovéj kultivácii na rotačnom trepacom stroji 4 Hz pri teplote 27 °C, sa získalo vegetativně inokulum /1.vegetatívny stupeň/.

ml tohoto inokula sa očkovali 500 ml varné banky s obsahom 60 ml pódy IP-V a kultivovali pri teplote 27 °C na rotačnom trepacom stroji 48 hodin /II. vegetatívny stupeň/.

Z nařasteného inokula sa 4 ml očkovali 500 ml varné banky plněné 40 ml produkčněj pódy PP-II/as o zložení: škrob kukuřičný 3,2 %, dextrin 6 %, sacharóza 1,5 %, glukóza 0,5 %, CaCO₃ 1,1 %, /NH₄/2SO₄ 1,5 %, KH₂PO₄ 0,5 %, MgSO₄ 0,3 %, kukuřičný výluh 100 %-ný 8,7 %, sojový olej 1,9 %. DL-metionín do pódy nepřidáváme, pretože nároky produkčného mikroorganizmu na túto aminokyselinu sú dostatočne zabezpečené inými zložkami pódy napr. kukuřičným výluhom.

Příklad 1

Konídie materského kmeňa Acremonium chrysogenum CCM F-750 asepticky zmyté z Endovej skúmavky 10 ml sterilnej vody a nariedené lOOOkrát sa s 0,5 ml naočkovali na Petriho misky s pódou SP-S. Misky se vystavili 1 minútovému pósobeniu UV světla v aseptickom boxe. Po ožiarení sa misky okamžité preniesli do inkubátora a po 11 dňoch sa 55 samostatných kolonii preočkovalo na šikmé agary s pódou SP-S. Po narastení za 11 dní sa takto získaní izo láty testovali najprv jednobaničkovým testom na produkciu. 5 najlepších izolátov z tohto súboru sa podrobilo druhému stupňu výběru a to v 3 baničkovom teste. Z nich sa získal izolát, ktorý mal o cca 29 % vyššiu produkční! aktivitu, ako východzí rodičovský kmen.

Tento kmen bol zaslaný do zbierky mikroorganizmov na Katedru botaniky nižších rastlín, Prírodovedeckej fakulty UK, Praha 2, Benátská 2, kde mu bolo přidělené číslo CCF-2035.

Příklad 2

Produkčný kmen Acremonium chrysogenum CCF-2035 bol z lyofilizovanej konzervy postupné pomnožený na šikmý agar SP-S v Roux-flaši. Kmen tvoří kolonie krémovej farby s vrásčitým povrchom, v střede s kráterom róznej velkosti.

Konídie z Roux-flaši boli v dvojstupňovom inokulačnom postupe pomnožené do vegetatívnej formy. S 1500 ml narasteného inokula bol naočkovaný laboratórny tančík Chemap 0030. Po 136 hodinách kultivácie sa dosiahla produkčná aktivita 35 800 ug/ml cefalosporínu C, vypuštěný objem činil 26 000 ml.

Claims (1)

1. Kmen Acremonium chrysogenum CCF-2035 produkujúci cefalosporín C.