CU22849A1 - Cámara de electroforosis de campos pulsantes, accesorios y métodos de empleo para la separación rápida y reproducible de grandes moléculas de adn - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con el campo de la Biología Molecular y en particular se refiere a mini-cámaras de electroforesis de campos pulsantes de los sistemas `Contour Clamped Homogeneous Electric Field' o `Transversal Alternating Field Electrophoresis' (TAFE) y su método de empleo. Las cámaras de la presente invención se emplean para la separación de grandes moléculas de ADN mediante electroforesis de campos pulsantes (ECP) en mini equipos y geles. Las mini-cámaras de esta invención poseen un sistema para limitar la formación de turbulencias en la solución tampón, para preparar geles planos, para preparar los bloques que contienen las muestras y para alinear las muestras. Estos sistemas garantizan que el área de sección tranversal al paso de la corriente, tanto por el gel como por la solución tampón donde se sumerge el gel, sea constante en toda la cámara de electroforesis e impida modificaciones regionales de la corriente que fluye en la misma, de aquí que la migración de las moléculas de ADN de cualquier talla no se modifica incontroladamente durante el proceso de electroforesis. Las cámaras además poseen un sistema para fijar y mantener tensos los electrodos. De esta forma se simplifica su operación y se contribuye a la reproducibilidad de los patrones de bandas. Con estas cámaras se obtienen separaciones reproducibles de moléculas de hasta 2 Mb en menos de 5 horas y de hasta 1 Mb en menos de 2.5 horas cuando se emplean campos eléctricos entre 8-16 V/cm, 20C, así como la duración adecuada de los pulsos eléctricos y una correcta polarización de los electrodos. En la invención se brinda además un método para seleccionar las condiciones de electroforesis empleando dichas cámaras.