CZ150193A3

CZ150193A3 - Aminoalkyl pyrrolidinylthiocarbapenem derivatives

Info

Publication number: CZ150193A3
Application number: CS931501A
Authority: CZ
Inventors: Susumu Nakagawa; Shinji Kato; Satoshi Murase; Osamu Okamoto; Ryuji Mitomo; Katsumi Yamamoto; Koji Yamada; Hiroshi Fukatsu
Original assignee: Banyu Pharma Co Ltd
Priority date: 1991-11-27
Filing date: 1992-11-26
Publication date: 1994-03-16
Also published as: BG97965A; TW209220B; HU9302170D0; HU210817A9; YU100792A; AU667786B2; MX9206838A; ATE195736T1; CN1032061C; HUT64345A; AU7589494A; DE69231375T2; IL103807A0; CN1073176A; WO1993011128A1; FI933346A7; CA2083980A1; FI933346A0; DE69231375D1; CA2083980C

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových karbapenemových sloučenin (7-oxo-l-aza-l-azabicyklo[ 3.2.0 ]hept-2-en-2-karboxylových kyselin) , antibakteriálních činidel obsahujících tyto sloučeniny jako aktivní příměsi a způsobu jejich přípravy.

Dosavadní stav techniky

V posledních letech byly v přírodě nalezeny nové B-laktamové antibiotické látky, které mají stejné β-laktamové kruhy jako deriváty penicilinu a cefalosporinu, ale které mají odlišné základní struktury.

Jako příklad přírodně odvozených karbapenemových sloučenin může být uveden thienamycin isolovaný z fermentace Streptomyces cattleya (J. Am. Chem. Soc., díl 100, str. 6491 (1978)). Thienamycin má vynikající antibakteriální spektrum a silné antibakteriální účinky proti grampozitivním a gramnegativním bakteriím. Proto byl očekáván jeho další rozvoj jako vysoce účinného β-laktamového činidla. Nicméně thienamycin samotný je chemicky nestálý a bylo publikováno, že se rozkládá určitým enzymem in vivo, takovým jako je reneálni dehydropeptidása I (zde pro zjednodušení uvedena jako DHP-I), čímž se snižují antibakteriální účinky a získaný zpětný výtěžek v moči je nízký (Antimicrob. Agents Chemother. , díl 22, str. 62 (1982); dtto, díl 23, str. 300 (1983.)).

Merck & Co., Inc. připravily mnoho thienamycinových analogů s cílem udržet vynikájící antibakteriální účinky thienamycinu při zachováni chemické stability. Výsledkem byl imipenem, monohydrát ( 5E, 6S,8R)-3-[ ( 2- (f ormřmidoylaimťnó jethyl ] thio ] -6- (1-hydroxyethy1) -7-oxo-l-azabicyklo[3.2.0]hept-2-en-2-karboxylové kyseliny, získaný formimidací aminoskupiny thienamycinu a který byl doveden do farmaceutického produktu (J. Med. Chem., díl 22, str.

1435 (1979)). Imipenem má antibakteriální účinky proti některým typům bakterií stejné nebo vyšší než thienamycin a má odolnost vůči β-laktamáse. Zejména proti Pseudomonas aerigunosa jsou jeho antibakteriální účinky 2 až 4 krát vyšší než u thienamycinu.

Dále stabilita imipenemu v pevné formě nebo ve vodném roztoku je znatelně vyšší než u thienamycinu.

Nicméně, podobně jako thienamycin, imipenem je pravděpodobné rozkládán DHP-I v lidské ledvině. Proto nemůže být použit k léčení infekcí močových cest. Dále působí toxicky v ledvině následkem rozkladných produktů. Proto nemůže být imipenem podáván samotný a je žádoucí, aby byl použit v kombinaci s inhibitorem DHP-I, jako cilastatin (J. Antimicrob. Chemother., díl 12 (dodatek D), str. 1 (1983)). V minulých létech byl imipenem často používán k léčení a ochraně infekčních nemocí. Následkem toho zaznamenaly v léčebné praxi zvýšený výskyt vůči methicilinu vysoce odolná Staphylococcus aureus, která je též odolná vůči imipenemu a vůči imipenemu odolná Pseudomonas aeruginosa.

Imipenem nedosahuje adekvátní léčebné účinky vůči těmto bakteriím.

Ze stavu techniky vztahujícímu se k tomuto vynálezu může být uveden Evropský patent č..182 213. Tento dokument popisuje ve svých nárocích takové karbapenemové sloučeniny, které mají v poloze 2 karbapenemové struktury (2-substituovanou)pyrrolidin- fc

-4-ylthio skupinu a substituent je amino-C-^.g alkylová skupina, která může být chráněna. Tyto sloučeniny se vyznačují tím, že I* obsahují lineární C-j__g alkylenovou skupinu. Sloučeniny podle vynálezu se však vyznačují tím, že buď osahují substituent na lineární nižší alkylenové skupině nebo mají rozvětvenou alkylenovou skupinu. '

Zejména je ve sloučeninách popsaných ve výše uvedené publikaci postranní řetězec v poloze 2 pyrrolidinové skupiny omezen na substituent vázaný na pyrrolidinovou skupinu přes lineární C]__g alkylenovou skupinu a dále sloučenina která má aminoalkylovou skupinu v poloze 2 pyrrolidinové skupiny je omezena na sloučeninu která má (acetylamino)methylovou skupinu [sloučenina specifického příkladu. 24 v Evropském patentu č. 182 213 (str.

116) (sloučenina referenčního příkladu 13 v této přihlášce) nebo sloučenina specifického příkladu 23 (příklad 19)]. Z tohoto důvodu jsou karbapenemové sloučeniny podle vynálezu, u kterých nižší alkylenová skupina postranního řetězce v poloze 2 pyrrolidinylové skupiny která je substituovaná v poloze 2 karbapenové struktury a která obsahuje na konci primární, sekundární nebo terciární aminoskupiny nebo amoniové skupiny a která má rozvětvenou strukturu (strukturu která má rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu nebo strukturu ve ktei;é lineární nižší alkylenová skupina je substituována), nové a dosud nepopsané v žádné literatuře nebo patentových dokumentech.

β-laktamová antibiotika vykazují selektivní toxicitu proti bakteriím a nemají podstatný účinek proti živočišným buňkám. Z tohoto důvodu nalézají široké uplatnění pro léčení infekčních nemocí způsobených bakteriemi jako vzácná antibiotika, která mají malé vedlejší účinky a tudíž jsou vysoce užitečnými léčivy.

V minulých létech byly často izolovány z pacientů se sníženou imunitou vůči methicilinu vysoce odolné Staphylococcus aureus a odolná Pseudomonas aeruginosa jako bakterie způsobující těžko léčitelné infekční choroby. Toto se ukazuje být vážným klinickým problémem. Proto je velice žádoucí vyvinout antibakteriální činidlo se zlepšenými účinky proti takovým odolným bakteriím. Zejména u karbapenemových sloučenin je žádoucí zlepšit antibakteriální účinky, zlepšit stálost vůči DHP-I, snížit toxicitu vůči ledvině a snížit postranní účinky na centrální nervový systém.

Sloučeniny popsané ve výše uvedeném Evropském patentu č. 182213 ·vykazuj i dobré antibakteriální účinky ale jejich antibakteriální účinky zejména proti výše uvedeným vůči methicilinu vysoce odolným Staphylococcus aureus a odolným Pseudomonas aeruginosa nejsou přiměřené. Proto jsou karbapenemové sloučeniny s lepšími antibakteriálními účinky stále žádané.

Podstata vynálezu

Vynálezci provedli řadu výzkumů s cílem nalézt nové karbapenemové sloučeniny s vynikajícími antibakteriálními účinky a které by byly odolné vůči DHP-I. Výsledkem těchto výzkumů jsou karbapenemové sloučeniny podle vynálezu, které mají ve 2 poloze karbapenemové struktury skupinu

R³

o ve ktere R^J znamena atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu vzorce -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu vzorce -CON(R⁵)R⁶ (kde R⁵ a R které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo R⁵ a R⁶ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu, morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸ (kde R⁷ a R^s které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu)’nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹) (R¹⁰ JR¹¹ ( kde R⁹ ,

R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R³ neznamená atom vodíku a které jsou nové a které nebyly dosud popsány v žádné literatuře a které mají silné' ántibakteriálni účinky proti grampozitivním bakteriím jako je Staphylococcus aureus a proti gramnegativním bakteriím zahrnující Pseudomonas aeruginosa a které se dále vyznačují vynikající stálostí vůči DHP-I.

Vynález zahrnuje sloučeniny vzorce

ve kterém R³· znamená atom vodíku nebo methylskupinu, R² znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl) aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu vzorce -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu vzorce -CON(R⁵)R⁶ (kde R⁵ a R⁶ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo R⁵ a R⁶ tvoří společné s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidylovou. skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu, morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R^S (kde R⁷ a R³ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu)nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹) (R³-⁰ )R¹³- ( kde R⁹ , a R^3-3“, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R³ neznamená atom vodíku nebo jejich farmaceuticky použitelné sole nebo estery.

Vynález se dále týká způsobu přípravy sloučenin vzorce (I) nebo jejich farmaceuticky použitelných solí nebo esterů reakcí sloučeniny vzorce

ve kterém je R¹ definován výše, R¹² znamená atom vodíku nebo hydroxyl-chránící skupinu a R²⁰ znamená atom vodíku nebo karboxyl-chránící skupinu nebo jejího reaktivního derivátu se sloučeninou vzorce

ve kterém R¹³ znamená atom vodíku nebo imin-chránící skupinu,

O A

R znamena atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, která může být chráněna, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, které mohou být chráněny, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu které mohou být chráněny, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu vzorce -COOR⁴⁰(kde R⁴⁰ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo karboxyl-chránící skupinu) nebo skupinu vzorce -CON(R⁵⁰)R⁶⁰(kde r50 a R⁶⁰ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo amin- nebo imin-chránící skupinu nebo R⁵⁰ a R⁶⁰ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázaný heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižsi alkylpiperazinylovou skupinu, morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X¹ znamená skupinu vzorce -N(R⁷⁰)R³⁰ (kde R⁷⁰ a R⁸⁰ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylovou skupinu nebo amin- nebo imin-chránící skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ (kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu) , s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R³® neznamená atom vodíku, přičemž se * získá sloučenina vzorce

ve kterém R¹, R¹², R¹³, R²⁰, R³⁰, A a X¹ jsou definovány výše a je-li to nezbytné, odstraní se chránící skupiny sloučeniny vzorce (IV).

Dále se vynález týká antibakteriálního činidla, které obsahuje antibakteriálně účinné množství sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky použitelné soli nebo esteru a farmaceuticky použitelný nosič nebo ředidlo.

Dále bude vynález popsán podrobné, s odkazy na výhodné provedení. Nejprve budou vysvětleny symboly a termíny použité v této přihlášce.

Sloučenina podle vynálezu má základní strukturu vzorce

který je systematicky pojmenován jako 7-oxo-l-azabicyklo[3.2.0]8 hept-2-en-2-karboxylová kyselina. Pro zjednodušení bude v této přihlášce tato základní struktura nazývána l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina a očíslování karbapenemové strukturv bude provedeno způsobem používaným obvykle pro karbapenemové struktury

COOH

Vynález zahrnuje optické isomery založené na asymetrických atomech uhlíku v poloze 1, poloze 5, poloze 6 a poloze 8 karbapenemové struktury a stereoisomery. Mezi těmito isomery je výhodná konfigurace (5R,6S,8R), t.j. sloučenina která má stérickou konfiguraci (5R,6S)(5,6-trans) podobně jako thienamycin a ve které atomy uhlíku v poloze 8 tvoři R-konfiguraci nebo sloučenina konfigurace (IR,5S,6S,8R), ve které je methylskupina v poloze 1.

COOH

R = H. -CH₃

S ohledem na 2-substituovanou polohu pyrrolidin-4-ylthio skupiny postranního řetězce v poloze 2, vynález zahrnuje isomery založené na asymetrických atomech uhlíku v poloze 2 a v poloze 4 pyrrolidinové struktury a na postranním řetězci ve 2 poloze. Z těchto isomerů jsou výhodné sloučeniny vzorce

Ί 9 *7 ve kterem R , R , R , A a X jsou definovány výše a sloučeniny vzorce

ve kterém R¹, R², R³ , A a X jsou definovány výše.

S ohledem na postranní řetězec substituovaný v poloze 2 pyrrolidinové struktury, zde existují isomery založené na asymetrických atomech uhlíku a vynález zahrnuje rovněž tyto isomery.

Nižší alkylová skupina znamená lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je methylskupina, ethylskupina, propylskupina, isopropylskupina, butylskupina, sec.butylskupina, terč.butylskupina, pentylskupina nebo hexylskupina, výhodné methylskupina, ethylskupina nebo terč.butylskupina.

Nižší alkoxyskupina znamená alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyskupina, butoxyskupina, sec.butoxyskupina nebo terč.butoxyskupina, výhodně methoxyskupina, ethoxyskupina nebo terč.butoxyskupina.

Nižší alkanoyloxyskupina znamená alkanoyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s nižší alkanoylovou skupinou substituovanou na hydroxylové skupině, jako je formyloxyskupina, acetoxyskupina, propionyloxyskupina, butyryloxyskupina, isobutyryloxyskupina, valeryloxyskupina nebo pivaloyloxyskupina, výhodné formyloxyskupina nebo acetoxyskupina.

N-nižší alkylaminoskupina znamená N-alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s výše uvedenou nižší alkylovou skupinou mpnosubstituovanou na aminoskupině, jako je N-methylaminoskupina, N-ethylaminoskůpina, N-propylaminoskupina , N-isopropylaminoskupina nebo N-butylaminoskupina, výhodně N-methylaminoskupina nebo

N-ethylaminoskupina.

Ν,Ν-di-nižší alkylaminoskupina znamená N,N-dialkylaminoskupinu se 2 až 12 atomy uhlíku s výše uvedenými dvěma nižšími alkylovými skupinami substituovanými na aminoskupině, jako je Ν,Ν-dimethylaminoskupina, Ν,Ν-diethylaminoskupina, N,N-dipropylaminoskupina, N,N-diisopropylaminoskupina,

N,N-dibutylaminoskupina, N-ethyl-N-methylaminoskupina, N-methyl-N-propylaminoskupina nebo N-ethyl-N-propylaminoskupina, výhodně Ν,Ν-dimethylaminoskupina nebo Ν,Ν-diethylaminoskupina.

Nižší alkanoylaminoskupina znamená alkanoylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s nižší alkanoylovou skupinou substituovanou na aminoskupině, jako je formylaminoskupina, acetylaminoskupina, propionylaminoskúpina, butyrylaminoskupina, isobutyrylaminoskupina, valerylaminoskupina, isovalerylaminoskupina nebo pivaloylaminoskupina, výhodně formylaminoskupina nebo acetylaminoskupina.

Aroylaminoskupina znamená aroylaminoskupinu se 7 až 11 atomy uhlíku jako je benzoylaminoskupina.

(Nižší alkylsulfonyllaminoskupina znamená (alkylsulfonyl)aminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s výše uvedenou nižší alkylsubstituovanou sulfonylovou skupinou substituovanou na aminoskupině, jako je (methylsulfonyl)aminoskupina, (ethylsulfonyl)aminoskupina, (propylsulfonyl)aminoskupina, (isopropylsulfonyl)aminoskupina, (butylsulfonyl)aminoskupina, (sec.butylsulfonyl)aminoskupina, (terč.butylsulfonyl)aminoskupina, (pentylsulfonyl)aminoskupina, výhodně (methylsulfonyl)aminoskupina .

Lineární nebo rozvětvená nižší alkylenová skupina znamená lineární nebo rozvětvenou alkylenovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je methylenskupina, ethylenskupina, propylenskupina, butylenskupina, methylmethylenskupina, ethylmethylenskupina, dimethyImethylenskupina, 1-methylethylenskupina, 2-methylethylenskupina, 1-ethy 1-ethylenskupina, 2-ethylethylenskupina,

1,1-dimethylethylenskupina, 1,2-dimethylethylens-kupina, 2,2-dimethylethylenskupina, 1-methylpropylenskupina, 2-methylpropylen11 skupina, 3-methylpropylenskupina, 1-ethylpropylenskupina,

2-ethylpropylenskupina, 3-ethylpropylenskupina, 1,1-dimethylpropylenskupina, 2,2-dimethylpropylenskupina nebo

3,3-dimethylpropylenskupina, výhodně methylmethylenskupina, 1,1-dimethylethylenskupina, 2,2-dimethylethylenskupina nebo

2-methylpropylenskupina.

Atom halogenu může být např. atom fluoru, atom chloru, atom bromu nebo atom jodu.

Karboxyl-chránici skupina může být např. nižší alkylová skupina, jako je methylskupina', ethylskupina', propylskúpina, isopropylskupina nebo terč.butylskupina, halogenovaná nižší alkylová skupina, jako je 2,2,2-trichlorethylskupina nebo

2,2,2-trifluorethylskupina, nižší alkanoyloxyalkylová skupina jako je acetoxymethylskupina, propionyloxymethylskupina, pivaloyloxymethylskupina, 1-acetoxyethylskupina nebo 1-propionyloxyethylskupina, nižší alkoxykarbonyloxyalkylskupina, jako je

1- (methoxykarbonyloxy) ethylskupina a

1- (ethoxykarbonyloxy) ethylskupina nebo

1- ( isopropoxykarbonyloxy)ethylskupina, nižší alkenylová skupina, jako je 2-propenylskupina,

2- chlor-2-propenylskupina,

3- methoxy-karbonyl-2-propenylskupina,

2-methyl-2-propenylskupina, 2-butenylskupina nebo cinnamylskupina, aralkylskupina, jako je benzylskupina, p-methoxybenzylskupina , 3,4-dimethoxybenzylskupina , o-nitrobenzylskupina, p-nitrobenzylskupina, benzhydrylskupina nebo bis(p-methoxyfenyl)methylskupina, (5-substituovaná

2-oxo-l,3-dioxol-4-yl)methylskupina, jako je ( 5-methyl-2-oxo-l, 3-dioxol-4-yl)methylskupina, nižší alkylsilylskupina, jako je trimethylsilylskupina nebo terč . butyldimethylsilylskupina, indanylskupina, ftalidylskupina nebo methoxymethylskupina. Zvlášť výhodné jsou 2-propenylskupina, p-nitrobenzylskupina, p-methoxybenzylskupina, benzhydrylskupina a terč.butyldimethylsilylskupina.

Hydroxyl-chránící skupina může být např. nižší alkylsilylskupina, jako je trimethylsilylskupina nebo terč.butyldimethylsilylskupina, nižší alkoxymethylskupina, jako je methoxymethylskupina nebo

2-metboxyethoxymethylskupina, tetrahydropyranylskupina, aralkylskupina, jako je benzylskupina, p-methoxybenzylskupina, 2,4-dimethoxybenzylskupina, o-nitrobenzylskupina, p-nitrobenzylskupina nebo tritylskupina, acylskupina, jako je formylskupina nebo acetylskupina, nižší alkoxykarbonylskupina, jako je terc.butoxykarbonylskupina, 2-jodethoxykarbonylskupina nebo

2,2,2-trichlorethoxykarbonylskupina, alkenyloxykarbonylskupina, jako je 2-propenyloxykarbonylskupina

2- chlor-2-propenyloxykarbonylskupina,

3- methoxykarbonyl-2-propenyloxykarbonylskupina,

2-methyl-2-propenyloxykarbonylskupina,

2-butenyloxykarbonylskupina nebo cinnamyloxykarbonylskupina, aralkyloxykarbonylskupina, jako je benzyloxykarbonylskupina, p-methoxybenzyloxykarbonylskupina, o-nitrobenzyloxykarbonylskupina nebo p-nitrobenzyloxykarbonylskupina. Zvlášť výhodné jsou

2-propenyloxykarbonylskupina, p-nitrobenzyloxykarbonylskupina a terč.butyldimethylsilylskupina.

Amin- nebo imin-chránící skupina může být např. aralkylidenová skupina, jako je benzylidenskupina, p-chlorbenzylidenskupina, p-nitrobenzylidenskupina, salicylidenskupina, α-naftylidenskupina nebo β-naftylidenskupina, aralkylová skupina, jako je benzylskupina, p-methoxybenzylskupina,

3,4-dimethoxybenzvlskupina, o-nitrobenzylskupina, p-nitrobenzylskupina, benzhydrylskupina, bis(p-methoxyfenyl)methylskupina nebo tritylskupina, nižší alkanoylová skupina, jako je formylskupina, acetylskupina, propionylskupina, butyrylskupina, oxalylskupina, sukcinylskupina nebo pivaloylskupina, halogenovaná nižší alkanoylová skupina, jako je chloracetylskupina, ďichloracetylskupina, trichloracetylskupina nebo trifluoracetylskupina, arylalkanoylová skupina, jako je fenylacetylskupina, fenoxyacetylskupina, nižší alkoxykarbonylová skupina, jako je methoxykarbonylskupina, ethoxykarbonylskupina, propoxykarbonylskupina nebo terč.butoxykarbonylskupina, halogenovaná nižší alkoxykarbonylová skupina, jako je

2-jodethoxykarbonylskupina nebo

2,2,2-trichlorethoxykarbonylskupina, alkenyloxykarbonylová skupina, jako je 2-propenyloxykarbonylová skupina,

2- chlor-2-propenyloxykarbonylskupina,

3- methoxykarbonyl-2-propenoyloxykarbonylskupina,

2-methyl-2-propenyloxykarbonylskupina,

2-butenyloxykarbonylskupina nebo cinnamyloxykarbonylskupina, aralkyloxykarbonylová skupina, jako je benzyloxykarbonylskupina, o-nitrobenzyloxykarbonylskupina, p-nitrobenzyloxykarbonylskupina nebo fenetyloxykarbonylskupina, nižší alkylsilylskupina, jako je trimethylsilylskupina nebo terc.butyldimethylsilylskupina.

Zvláš6 výhodné jsou 2-propenyloxykarbonylskupina, terč.butoxykarbonylskupina a p-nitrobenzyloxykarbonylskupina.

R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu vzorce -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu vzorce -CON(R⁵)R⁶(kde R⁵ a R⁶ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo R⁵ a R⁶ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu, morfolinovou skupinu).

Nicméně, jestliže A znamená nižší alkylenovou skupinu, R³ , o neznamená atom vodíku. R muže být substituován ve výhodné poloze na lineární nebo rozvětvené nižší alkylenové skupině představované A. R znamena výhodně atom vodíku, atom halogenu, hydroxyskupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylskupinu, zvlášř výhodně hydroxyskupinu.

X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸ (kde R⁷ a R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ ( kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu). X může být např. aminoskupina,

N-methylaminoskupina, N-ethylaminoskupina,

N-propylaminoskupina, N-isopropylaminoskupina, N-butylamino. skupina-, N,N-dimethylaminoskupina, N,N-diethylaminoskupina,

Ν,N-dipropylaminoskupina, Ν,N-diisopropylaminoskupina,

Ν,N-dibutylaminoskupina, N-ethyl-N-methylaminoskupina, N-methyl-N-propylaminoskupina, N-ethyl-N-propylaminoskupina,

Ν,Ν,N-trimethylamoniová skupina, Ν,Ν,Ν-triethylamoniová skupina, Ν,N-dimethyl-N-ethylamoniová skupina nebo N,N-diethyl-N-methylamoniová skupina, výhodně aminoskupina, N-methylaminoskupina, N-ethylaminoskupina,

N,N-dimethylaminoskupina, Ν,N-diethylaminoskupina nebo

Ν,Ν,Ν-trimethylamoniová skupina.

R znamena atom vodíku nebo negativní náboj. Jestliže postranní řetězec v poloze 2 pyrrolidinové struktury tvoří amoniovou skupinu, R³ znamená negativní náboj a tvoří pár společně samoniovým iontem, přičemž sloučenina vzorce (I) tvoří intramolekulární sůl.

Sůl sloučeniny vzorce (I) je obvyklá farmaceuticky použitelná sůl a může být např. sůl karboxylové skupiny v poloze 3 karbapenemové struktury nebo pyrrolidinové báze nebo báze na postranním řetězci substituovaném na pyrrolidinovém kruhu.

Bázická adiční sůl uvedené karboxylové skupiny zahrnuje např. sůl alkalického kovu, jako je sodná nebo draselná sůl, sůl kovu alkalických zemin, jako je vápenatá nebo horečnatá sůl, amonnou sůl, sůl alifatického aminu, jako je trimethylaminová sůl, triethylaminová sůl, dicyklohexylaminová sůl, ethanolaminová sůl, diethanolaminová sůl, trietanolaminová sůl nebo prokainová sůl, aralkylaminovou sůl, jako je

N,N'-dibenzylethylendiaminová sůl, sůl aromatického heterocyklického aminu, jako je pyridinová sůl, pikolinová sůl, chinolinová sůl nebo isochinolinová sůl, kvarterní amoniovou sůl, jako je tetramethylamoniová sůl, tetraethylamoniová sůl, benzyltrimethylamoniová sůl, benzyltriethylamoniová sůl, benzyltributylamoniová sůl, methyltrioktylamoniová sůl nebo tetrabutylamoniová sůl a bazickou sůl aminokyseliny, jako je sůl argininu nebo lysinu.

Kyselá adiční sůl pyrrolidinové báze nebo báze na postranním řetězci substituovaném na pyrrolidinovém kruhu zahrnuje např. anorganickou sůl, jako je hydrochlorid, sulfát, nitrát, fosfát, uhličitan, hydrogenuhličitan nebo perchlorát, organickou sůl, jako je acetát, propionát, laktát, maleát, fumarát, vinan, maleát, sukcinát nebo askorbát, sulfonát, jako je methansulfonát, isethionát, benzensulfonát nebo p-toluensulfonát a kyselou sůl aminokyseliny, jako je aspartát nebo glutamát.

Netoxický ester sloučeniny vzorce (I) znamená farmaceuticky použitelný ester karboxylové skupiny v poloze 3 karbapenemové struktury. Např. zahrnuje ester s alkanoyloxymethylovou skupinou, jako je acetoxymethylskupina nebo pivaloyloxymethylskupina, ester s alkoxykarbonyloxyalkylovou skupinou, jako je 1-(ethoxykarbonyloxy)ethylskupina, ester s ftalidylovou skupinou, jako je ester s (5-substituovanou-2-oxo-l, 3-dioxol-4-yl)methylskupinou, jako je (5-methyl-2-oxo-l,3-dioxol-4-yl)methylskupina.

Ze sloučenin vzorce (I) je výhodná sloučenina vzorce

ve kterém R¹ znamená atom vodíku nebo methylskupinu, R² znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R^2a znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, alkanoylaminoskupinu, (nižší.

alkylsulfonyl)aminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylskupinu,

A znamená lineární nebo rozvětvenou alkylenovou skupinu,

X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸ (kde R⁷ a R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ ( kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R^2a neznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelné soli nebo estery.

Zvlášt výhodnou je sloučenina vzorce

ve kterém R¹ znamená atom vodíku nebo methylskupinu, R²znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R²*³ znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu, aminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylskupinu,

A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸ (kde R⁷ a R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹)(R¹⁰)R¹¹ (kde R , R a R , ktere mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R²'³ neznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelné sole nebo estery a sloučenina vzorce

ve kterém R¹ znamená atom vodíku nebo methylskupinu, R²znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R^3c znamená atom halogenu, nižší alkoxyskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu nebo nižší alkanoyloxyskupinu

A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená.skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸ (kde R⁷ a R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ (kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R^3c neznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelné sole nebo estery.

Sloučenina podle vynálezu je vyznačená tím, že koncová skupina nižší alkylenové skupiny, která je postranním řetězcem v poloze 2 pyrrolidinové struktury substituované v poloze 2 karbapenemové struktury, je primární, sekundární nebo terciární aminoskupina nebo amoniová skupina a že nižší alkylenová skupina má rozvětvenou strukturu.

Termín rozvětvená skupina znamená, že nižší alkylenová skupina sloučeniny vzorce (I) nese substituent nebo že je rozvětvená. Zahrnuje případ, kdy nižší alkylenová skupina je lineární nižší alkylenová skupina která nese substituent a případ, kdy je nižší alkylenová skupina rozvětvená nižší alkylenová skupina. Rozvětvená nižší alkylenová skupina může nebo nemusí být substituována.

Jestliže je nižší alkylenová skupina lineární nižší alkylenová skupina, substituent (R³) je výhodně atom halogenu, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupina, nižší alkanoyloxyskupina, aminoskupina, nižší alkanoylaminóskupina, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupina, kyanoskupina nebo karbamoylskupina.

Jestliže je nižší alkylenová skupina rozvětvená nižší alkylenová skupina, substituent (R³) je výhodně atom vodíku, hydroxylová skupina nebo karbamoylová skupina.

Zvláštní příklady sloučeniny vzorce (I) zahrnují např. následující sloučeniny. Zkratky použité v tabulcemají následující významy

Ac: acetylskupina

Et: ethylskupina

Me: methylskupina

X

Č.·	R¹	R²	/R³ -<x	Č.	R¹	R²	,/^r3 \χ
1	H	H	Me	10	H	H	OH '^/^^/X'NH₂
2	H	H	Et	11	H	• H	^Y^NH-Me OH
3	H	H	Et '^NH-Et	12	H	H	Me .. J ř\ i t i
\| ^Nl 2 Me
4	H	negativní náboj:	Me Á ₊/^Me / — Me Me	13	Me	H	Me ^^NH-Et
5	H	H	OH ^I^^zNH-Me	14	Me	H	CN ^/^^XNH₂
6	H	H	C£ J^NK^Et	15	Me	H	c* u v I ^//Sxnh₂
7	H	H	NH-Ac X/^NH*	16	Me	H	OH z^\/^NH2
8	H	H	NH-SO₂Me ^l^/NH-Me	17	Me	H	OH ^t^/NH-Me
9	H	H	,~conh₂ A/^NH2	i 3	Me	H	ok ^Υ/Νπ-Ξ;

č.	r’	R²	p3	Č.·	p?	R²	A/' ~A
19	Me	H	OH 1 /^Me	30	Me	H	xC0NH₂
20	Me	negativní náboj	θ^Η ,/l's ///ΝςΜε ^x Me	31	Me	H	^conh₂/k^x NH-Me
21	Me	H	OMe NH-Me	32	Me	H	.OOiCn-Εϊ /zk^NH-Me
22	Me	H	a ^k^x NH-Me	33	Me	. H	no₂ xx:
23	Me	H	? /^Me	34	Me	H	^COtX] ,.zU/NH₂ _
24	Me	H	no₂ X\/^NH2	35	Me	H	_xconjd ·
25	Me	H	NH-Ac A/^nh’	36	Me	H	^COíXnH Z^A-NH-Me
26	Me	H	NH-SO₂Me /\/^N'n₂	37	Me	H	NH-SO₂NH₂ ^I^/NH-Me
27	Me	H	NH-SO₂Me ^Js^x NH-Me	38	Me	H	'NH-Me ^l^x NH-Me
.28	Me.	.. -H	_/z-\_//NH₂ conh₂	39	Me	H	Me A/^nh=
29	Me	H	conh₂ Me	40	Me	u i t	Me ^k^x NH-Me

0,.	R¹	9 FT	-<^r3 ^xx	č·.·	i i	R²	/R^J -^Α\χ
63	Me	H	^/Z^y^Z^^xNH-Me	74	Me	l_í 1 1	NH-Me
			OH				/ΠΧνΗ-Μθ
64	Me	H	/γ-\_Ν/Μθ OH ^Μβ	75	Me	H	NH-Ac ^^X^SNH-Me
65	Me	H	OMe	76	Me	H	NH-SO₂Me H^-X^NH-Me
66	Me	H	NH-Me OMe	77	Me	H	conh₂ '^/^X^z~^xNH-Me
							CON^N-Et
67	Me	H	^Y^nh₂ OAc	78	Me	H
68	Me	H	^^γ^ΝΗ-Με	79	Me	H	coiCo
			OAc				NH-Me
69	Me	H	'^ζΖ^γ^/Χχ·ΝΗ-Μθ C2	80	Me	H	nh₂ /XHnKz
			/NH₂				nh₂
70	Me	H	o; ^XOH	31	Me	H	/HXnh-ms
			/NH-Me				nh₂
71	Me	H	Oj	32	Me	H	/C\_N ^/Me
			^XOH				^xMe
		-	/Me /\ /Njj -			nega-	nh₂
72	Me	H	^Xfvle	33	Me	Livni náboj	ΠΠνΧθ
		nega-	^CH . . ₊ / Me z N - Me Hle				Me Me Me
73	Me	tivní náboj	34	Me	H
		^-OH				* ‘ ‘2

č.	r’	R²	^xX	Či.	R¹	R²	' -X ^Xx
85	Me	H	Me Me /^X'-^*^X'NH-Me	96	Me	H	Et NH-Me
86	Me	H	Me Me ζ^νΧ_Ν/^Μδ	97	Me	H	CN
			^xMe
		nega-	Me Me	98	Me	H	no₂
87	Me	tivní náboj		Me
			^x Me				,—·,
							/CON N-Et
88	Me	H	^X>C^NK2	99	Me	H	Χχ
			Me Me				^^^NH-Me
89	Me	H	/^X^ NH-Me	100	Me	H	^X^^NH-Me
			Me Me				^X CON0
90	Me	H	oo<:	101	Me	H
		•	Me Me				Me Me
91	Me	negativní	' * /Me X<X - Me	102	Me	H
		náboj	Me Me				Et
92	Me	H	^/Χγ^χΖχΝΗ₂	103	Me	H	/XXh,
			Me				F
			Me				-^^γ^ΝΗ-Μβ P
93	Me	H	/^zx^^x^nh₂	104	Me	H
			Me _				F
94	Me	H	NH-Me	105	Me	H	/\/\ NH-Me
95	Me	H	NH,	106	Me	H	^xMe

Z výše uvedených sloučenin jsou výhodné sloučeniny

uvedené	pod	čís	iy 2,	4 ,	5, 6, 9, 11, 12	, 13, 14, 16, 17 , 18 ,
19, 20,	22,	23 ,	25,	26 ,	27, 28, 29, 30,	31, 32, 35, 36, 37,
33, 41,	43,	44,	48,	49,	53, 56, 57, 53,	59, 61, 62, 63, 64,
67, 70,	71,	72,	73,	74,	75, 76, 78, 79,	80, 84, 88, S9, 90,
91, 92,	94,	95,	99,	101	, 102, 104, 105,	107, 103, 109, 110,
111, 112	, 113,	114 ,	115	, 116 a 117. Z nich zvlášť výhodné

jsou následující:

(5R,6S)-6-[(lRj-l-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(l-hydroxy-2-N-methylamino)ethyl ] pyrrolidin-4-ylthio ] -1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(l-chlor-2-N-ethylamino)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio] -6-[(IR) -1-hydroxyethyl] -1:.-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-aminomethyl-2-karbamoylethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(l-amino-l,l-dimethyl)methyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(1-amino-l-kyanmethyl]pyrrolidin-4-ylthio ]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(2-amino-l-hydroxy)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-Γ(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S_/6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(l-hydroxy-2-methy lamino) ethyl ]pyrrolidin-4-ylthio ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S) -2 - [(2S,4S)-2-[(2-N-ethylamino-l-hydroxy)ethyl ]pyrrolidin-4-ylthio3 — 6— [ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(2-N,N-dimethy1amino-1-hydroxy)ethyl ]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l26

-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(1-hydroxy-2-N,Ν,N-trimethylamonium)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(1-chlor-2-N-methylamíno)ethylJpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ♦, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-acetamido-2-aminoethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-2- (1-methansulfonylamido-2-aminoethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-2-[(2-N-methylamino-l-methansulfonylamino)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-karbamoylethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová' kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S )-2-(l-aminomethyl-2-karbamoy1ethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(l-karbamoylmethyl-2-N-methylamino)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio 3 — 6 —[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[[1-(4-ethylpiperazin-l-yl)karbonyImethy1-2-N-methylamino]ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová * kyselina, (IR,5S,6S) -2- [(2S,4S)-2-[(2-N,N-dimethylamino-l-morfolinokarbonyImethy1)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S , 6S )-6-[ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l-methyl-2-[ ( 2S , 4S ).-2-[[1-N-methylamino-1-(piperazin-l-y1)karbonyImethy1]methyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina , (IR,5S,6S)-6-((IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-2-((2S ,4S )-2-[(2-N-methylamino-1-sulfamoylamino)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio] -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S )-2-[1,2-bis(N-methylamino)ethyl]pyrrolidin-A-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2R,4S) -2-[(2-amino-2-methyl)propyl]pyrrolidin-4-ylthio ] -6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3-amino-l-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-l-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[ (l-hydroxy-3-N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l.. -methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3-N,N-dimethylamino-l-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-yIthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-l-hydroxyethyl] — 2— ((2S,4S)-2- ((l-hydroxy-3-N,Ν,N-trimethylamonium)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát, (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3-amino-2-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((2-hydroxy-3-N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, {IR,5S,SS)-2-((2S,4S)-2-((3-N,N-dimethylamino-2-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(2-amino-3-hydroxy)propy1]pyrrolidin-4-yIthio]-6-((IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3-hydroxy-2-N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l28

-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(2-N,N-dimethylamino-3-hydroxy)propy1]pyrrolidin-4-ylthioJ-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,55,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3-hydroxy-2-N,Ν,N-trimethylamonium)propy1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát, (IR, 5S , 6S ) - 2- [ (.2S , 4S ) - 2- [ 1,3-bis ( N-methy lamino ) propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,55,6S)-2-[(2S,4S)-2-[[3-amino-l-(4-ethylpiperazin-l-yl)karbonyl]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3-N-methylamino—1-morfolinokarbonyl)propylJpyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1,3-diaminopropyl) pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-3-methyl)butyl]pyrrolidin-4-ylthio]-ó-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2,2-dimethyl)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(2,2-dimethyl-3-N-methylamino)propylJpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-2-methylpropyl)pyřrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-.em-3-karboxylová kyselina,

94. (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-N-methylaminobutyl)-pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

104 (IR,5S,6S)-2-[(2S,45)-2-(2-fluor-3-N-methylaminopropyl)29 pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

107 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(1-aminomethyl-3-hydroxy)propyl] pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethylJ-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

108 (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[ [ 1-(2hydroxyethyl)-2-methylamino]ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

111 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[[1-(2-chlorethyl)-2-methylaminoj ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

114 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(1-aminoethy1-3-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

115 (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[[l-(2-hydroxyethyl)-3-N-methylamino]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

116 (lR,5S,6S)-6-((lR)-l-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[[3-N,N-dimethylamino-l-( 2-hydroxyethyl) ]propyl ]pyrrolidin-4-yl thio ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina a

117 (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[[ 1-'(2-hydroxyethyl) -3-N, N, N-trimethylamonium]propyl ]pyrrolidin-4 -ylthio ] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát.

Zvlášť. výhodná je sloučenina uvedená pod pořadovým číslem 57, tj. (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2 - [ (l-hydroxy-3-methylamino) propyl ]pyrrolidin-4-ylthio ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina.

‘ t* Nyní bude popsán způsob přípravy sloučeniny podle vználezu.

* Aktivační činidlo reaguje se sloučeninou vzorce

COOR²⁰ ve kterém R¹ znamená atom vodíku nebo methylskupinu, R²²znamená atom vodíku nebo hydroxyl-chránící skupinu, R²²znamená atom vodíku nebo karboxyl-chránící skupinu, v inertním organickém rozpouštědle v přítomnosti báze, za vzniku reaktivního derivátu vzorce (II'):

ve kterém R¹, R¹² a R²⁰ jsou definovány výše a Y znamená odcházející skupinu.

Inertní organické rozpouštědlo použité při reakci může’ být např. diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, benzen, toluen, chlorbenzen, methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, trichlorethylen, aceton, ethylacetát,. acetonitril, N,N-dimethylformámid, triamid kyseliny hexamethylfosforečné nebo směs těchto rozpouštědel. Zvlášt výhodné jsou acetonitril a benzen. Báze použitá při reakci může být např. terciární alifatický amin, jako je trimethylamin, triethylamin,

N,N-diisopropylethylamin, N-methylmorfolin,

N-methylpyrrolidin, N-methylpiperidin, N,N-dimethylanilin, l,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-en (DBU) nebo 1,5-diazabicyklo[4.3.0]non-5-en (DBN) nebo aromatický amin, jako je pyridin, 4-N,N-dimethylaminopyridin, pikolin, lutidin, chinolin nebo isochinolin. Zvlášt výhodné jsou N,N-diisopropylethylamin a triethylamin.

Aktivační činidlo použité při reakci může být např. anhydrid kyseliny, jako je anhydrid kyseliny trifluoroctové, anhydrid kyseliny methansulfonové, anhydrid kyseliny trifluormethansulfonové, anhydrid kyseliny p-toluensulfonové nebo chlorid kyseliny, jako je methansulfonylchlorid, p-toluensulfonylchlorid nebo difenylchlorfosfát.'

Zvlášt výhodný je difenylchlorfosfát.

Y ve vzorci (II') znamená odcházející skupinu, jako je trifluoracetoxyskupina, methansulfonyloxyskupina, trifluormethansulfonyloxyskupina, p-toluensulfonyloxyskupina nebo difenoxyfosforyloxyskupina. Zvlášť, výhodná je difenoxyfosforyloxyskupina.

Při reakci se používá 1 až 3 molů, výhodně 1 až 1,5 molů báze a 1 až 1,2 molů aktivačního činidla na 1 mol sloučeniny vzorce (II) .

> Reakce se obvykle provádí v teplotním rozsahu od -40 do °C, výhodně při teplotě od -20 do 20 ’C a.obvykle je * kvantitativně skončena po 0,5 až 3 hodinách.

Po skončení reakce se reakční produkt zpracuje obvyklými způsoby, přičemž se získá reaktivní derivát (II') sloučeniny vzorce (II) v kvantitativním výtěžku.

Reakce reaktivního derivátu sloučeniny vzorce (II') se sloučeninou vzorce:

ve kterém R¹³ znamená atom vodíku nebo imin-chránící skupinu, R znamena atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, která může být chráněna, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, které mohou být chráněny,

N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší

4¼ alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulf onyl) aminoskupinu, sulf amoylaminoskupinu ·» které mohou být chráněny, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu vzorce -COOR⁴⁰ (kde R⁴⁰ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo karboxyl-chránící skupinu) nebo skupinu vzorce -C0N(R⁵⁰ ).R^S0 (kde R⁵⁰ a R⁶⁰ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo amin- nebo imin-chránící skupinu nebo R^⁰ a R⁶⁰ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu, morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X¹ znamená skupinu vzorce -N(R⁷⁰)R^S0 (kde R⁷⁰ a R^sokteré mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylovou skupinu nebo amin- nebo imin-chránící skupinu) nebo skupinu vzorce -N⁺(R⁹) (R¹⁰ )R^1:^· ( kde R⁹, rIO a R^·, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s tím, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, pak R²® neznamená atom vodíku, se provádí za použití výše uvedeného organického rozpouštědla a báze, přičemž vznikne sloučenina vzorce:

ve kterém R¹, výše.

Reakce se provádí za použití 1 až 2 molů, výhodně 1 až

1,5 molů báze a 1 až 1,2 molů sloučeniny vzorce (III) na mol reaktivního derivátu vzorce (II'). Reakce se provádí obvykle v teplotním rozsahu od -40 do 50 ’C, výhodně při teplotě -20 do 20 °C a reakce je obvykle skončena za dobu 0,5 až 3 hodin.

Sloučenina vzorce (IV) může být také připravena v jednom reakčním stupni ze sloučeniny vzorce (II). Reaktivní derivát vzorce (II') připravený ze sločeniny vzorce (II) reaguje bez isolace se sloučeninou vzorce (III) ve stejném reakčním systému, přičemž vznikne sloučenina vzorce (IV). Při této reakci se použije 2 až 4 molů, výhodné 2,5 až 3,5 molů báze na mol sloučeniny vzorce (II).

Po skončení reakce se obvyklým zpracováním získá surový produkt sloučeniny vzorce (IV), který může být zpracován pro odstranění chránící skupiny bez čištění. Nicméně je vhodné čistit tento surový produkt (IV) krystalizaci nebo sloupcovou chromatografií např. na silikagelu.

Z takto získané sloučeniny vzorce (IV) může být získána sloučenina vzorce (I) a je-li to nezbytné, odstraní se chránící skupina hydroxylové skupiny, aminoskupiny, iminoskupiny a karboxylové skupiny.

K odstranění chránících skupin se použije metoda závislá r na typu chránících skupin. Nicméně toto odstranění může být provedeno obvyklými způsoby, např. solvolýzou, chemickou redukcí nebo hydrogenací.

Např. jestliže ve výše uvedené sloučenině (IV) je chránící skupina pro hydroxyskupinu a/nebo pro aminoskupinu nebo iminoskupinu aralkyloxykarbonylová skupina, jako je benzyloxykarbonylskupina nebo p-nitrobenzyloxykarbonylskupina a chránící skupina pro karboxylovou skupinu je aralkylová skupina, jako je benzylskupina, p-nitrobenzylskupina nebo benzhydrylskupina, mohou být tyto chránící skupiny odstraněny katalytickou hydrogenací na platinovém katalyzátoru, jako je oxid platnatý, platinový drát nebo platinová čerň nebo na palladiovém katalyzátoru, jako je palladiová čerň, oxid palladnatý nebo hydroxid palladnatý-uhlík.

Jako rozpouštědlo může být pro tuto katalytickou hydrogenační reakci použit methanol, ethanol, tetrahydrofuran, dioxan, kyselina octová nebo směs těchto organických rozpouštědel s vodou nebo s tlumivým roztokem, např. fosfátem.

Reakce může být skončena během 0,5 až 4 hodin při teplotním rozsahu od 0 do 50 °C pod proudem plynného vodíku 1 až 4 atm.

Jestliže ve výše uvedené sloučenině vzorce (IV) je chránící skupina pro hydroxyskupinu a/nebo aminoskupinu nebo iminoskupinu allyloxykarbonylová skupina a chránící skupina

- 34 pro karboxylovou skupinu allylová skupina, mohou být tyto chránící skupiny odstraněny reakcí organo-rozpustného katalyzátoru na bázi komplexu palladia v inertním organickém rozpouštědle obsahujícím činidlo zachycující allylovou skupinu (methoda W. McCombie a kol., J. Org. Chem., díl 47, str. 587-590 (1982) a methoda F. Guibé, stejná literatura, díl 52, str. 4984-4993 (1987)).

Rozpustidlo použité při reakci může být např. voda, aceton, diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, ethylacetát, acetonitril, methylenchlorid, chloroform a směs těchto rozpouštědel.

Komplex sloučeniny palladia vhodný pro tuto reakci může být např. palladium-uhlík, hydroxyd palladnatý-uhlík, chlorid palladnatý, octan palladnatý, tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0), tetrakis(trifenoxyfosfin)palladium (0), tetrakis(triethoxyfosfin)palladium (0), bis[ethylenbis(difenylfosfin)Jpalladium (0), tetrakis[tri(2-furyl)fosfinjpalladium (0), chlorid bis(trifenylfosfin)palladnatý a octan bis(trifenylfosf in)palladnatý.

Jako činidlo zachycující allylovou skupinu může být použit např. dimedon, kyselina mravenčí, kyselina octová, mravenčan amonný, mravenčan sodný, 2-ethylhexanoát sodný, 2-ethylhexanoát draselný, pyrrolidin, piperidin a tributylcínhydrid.

Reakce se obvykle provádí v teplotním rozsahu od -10 do 50 ’C, výhodně od 0 do 30 °C za použití 0,01 až 0,5 molu katalyzátoru a 1 až 6 molů činidla zachycujícího allylovou skupinu na 1 mol sloučeniny vzorce (IV) a reakce skončí obvykle za 0,5 až 3 hodiny.

Jestliže je ve výše Uvedené sloučenině.vzorce (IV) chránící skupina pro hydroxylovou skupinu a/nebo aminoskupinu nebo iminoskupinu o-nitrobenzyloxykarbonylová skupina a chránící skupina pro karboxylovou skupinu o-nitrobenzylová skupina, mohou být tyto chránící skupiny odstraněny fotoreakcí (methoda podle Amita a kol., J. Org. Chem., díl 39, str. 192-196 (1974)).

Po skončeni reakcí k odstranění chránících skupin může být sloučenina vzorce (I) izolována obvyklým způsobem, jako je sloupcová chromatografie na silikagelu nebo adsorpční pryskyřici, lyofilizací nebo krystalizaci.

Jestliže je chránící skupina pro karboxylovou skupinu v poloze 3 sloučeniny vzorce (IV) nižší alkanoyloxyalkylová skupina, jako je acetoxymethylskupina nebo pivaloyloxymethylskupina, methoxymethylová skupina, indanylová skupina nebo ftalidylová skupina, může být tento ester fyziologicky hydrolyzován in vivo. Tato sloučenina může být podávána lidem nebo živočichům přímo bez předchozího odstranění chránící skupiny.

Sloučenina vzorce (I) může být převedena známými způsoby ve farmaceuticky použitelnou sůl nebo ester.

Při reakci reaktivního derivátu (II') sloučeniny vzorce (II) se sloučeninou vzorce (III), může být sloučenina vzorce (III) použita bez chránění svých skupin, jako je iminoskupina na pyrrolidinovém kruhu nebo aminoskupina, hydroxyskupina nebo sulfamoylskupina jako substituent na postranním řetězci v poloze 2 pyrrolidinové struktury. Reakce reaktivního derivátu (II') a sloučeniny (III) se může provádět za stejných podmínek jak bylo popsáno výše.

Např. sloučenina vzorce:

je důležitou výchozí látkou' k získání sloučeniny vzorce:

Tato thiolová sloučenina a reaktivní derivát (II’) reagují kopulační reakcí a poté se přidá k reakčnímu roztoku tlumivý roztok, jako je MOPS. Směs se poté zpracuje katalytickou reakcí za mírných podmínek a získá se žádaná sloučenina.

Chránící skupiny sloučeniny (III) mohou být vybrány volně. Doporučuje se však, aby za účelem zvýšení výtěžku reakce bylo použití chránících skupin minimální.

Výchozí látky vzorce (II) mohou být připraveny např. methodou Salzmanna a kol, kde R¹ znamená atom vodíku (J. Am. Chem. Soc. , díl 102, str. 6161-6163 (1981)) nebo methodou podle Shiha a kolkde R¹ znamená methylskupinu (Heterocycles, díl 21, str. 29-40 (1984)).

Výchozí látka vzorce (III) může být připravena následujícím způsobem.

Hydroxylová skupina sloučeniny 1 se aktivuje známým způsobem, poté reaguje s thioacetátem, jako je thioacetát draselný, přičemž se získá acetylthioderivát 3. Poté následuje alkalická nebo kyselá hydrolýza, přičemž se získá thiolderivát vzorce (III).

Y

R³⁰

AcS—( |

Ve výše uvedených sloučeninách znamená R³·^ atom vodíku nebo hydroxyl-chránící skupinu, Z znamená odcházející skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje atom chloru, atom bromu, atom jodu, trifluoracetoxyskupinu, methansulfonyloxyskupinu, trifluormethansulfonyloxyskupinu a p-toluensulfonyloxyskupinu, Ac znamená acetylskupinu a R¹³, R³⁰, A a X¹ jsou definovány výše.

Skupina sloučenin vzorce 1 může být připravena podle způsobů popsaných v referenčních příkladech.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují silné antibakteriální účinky proti grampozitivním a gramnegativním bakteriím.

Užitečnost sloučenin podle vynálezu byla demonstrována měřením in vitro antibakteriálních účinků proti bakteriím za použití následující zředovací methody na agarové desce (standartní methoda podle Japan Chemotherapy Society, Chemotherapy, díl 29, str. 76-79 (1981)). Jedna kapka na platinové smyčce každého zkoušeného mikroorganismu inkubovaného přes noc v Mueller Hintonově živné půdě byla očkována na Mueller Hintonúv agar (velikost inokulum: 10⁶CFU/ml). Tato kulturní média obsahovala antibakteriální činidla v různých koncentracích. Po inkubaci při teplotě 37 °C po dobu 16 hodin byly měřeny minimální inhibiční koncentrace (MIC:/5/ml).

Susceptibilita DHP-I byla kvantitativně analyzována methodou Kroppa a kol., Antimicrob. Agents Chemother., díl 22, str. 62-70 (1982), přičemž čím menší je numerická hodnota představující poměr k imipenemu (=1,0), tím vyšší je stabilita.

Minimální inhibiční koncentrace a s-usceptibilita DHP-I sloučeniny podle vynálezu byly porovnány s imipenem a sloučeninou z referenčního příkladu 13. Výsledky jsou uvedeny v tabulce I..

r-l

Tabulka ι

o,

X

Q £S

4->

JO •H +J

Q.

ω o

κ

O co

O t-i <u o

CO

-t->

c β!

O c

o 'r4

C >o • r-H JO ♦rd 43 C c

r—t

KT,

Sloučeniny podle vynálezu vykazují vynikající antibakteriální účinky vůči různým grampozitivním a gramnegativním bakteriím a jsou použitelné jako antibakteriální prostředky pro léčení a prevenci lidských infekčních nemocí způsobených těmito bakteriemi. Typické pathogeny citlivé k antibakteriálním činidlům podle vynálezu zahrnují např. druhy Staphylococcus, Enterorococcus, Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Próteus a Pseudomonas. Sloučeniny podle vynálezu vykazují vynikající antibakteriální účinky zejména vůči methicilinu odolným Staphylococcus aureus a vůči thienamicinu odolným Pseudomonas aeruginosa.

Sloučeniny podle vynálezu jsou velmi stálé proti DHP-I, ačkoliv stálost závisí na jednotlivých sloučeninách a tyto sloučeniny jsou rovněž vynikající ve fyzikálně-chemické stabilitě a v rozpustnosti ve vodě.

Farmakokinetiky v myších

Materiály a methody

Farmakokinetiky v myších: Skupinám tří 20 g ddY myších samců se podá podkožně jedna dávka v množství 20 mg/kg sloučeniny z přikladu 19 a imipenem. Jedna skupina tři myší byla umístěna v metabolické kleci, která byla navržena tak, aby shromažďovala moč odděleně od fekální kontaminace. V určité době po podání dávky byly skupině odebrány vzorky krve a moče pro biologickou zkoušku. Z vysrážené krve byla získána po odstředění plasma.

Mikrobiální zkoušky: Bioaktivita ve vzorcích byla měřena postupem standartní diskové difuse za použití Bacillus subtilis ATCC12432 jako testovacího mikroorganismu

Tabulka 2: Farmakokinetické parametry sloučeniny z příkladu a imipenemu v myši po podkožní injekci 20 mg/kg

Antibiotiku	farmakokinetické	parametry	Výtěžek v raoči (0-6h) (%) IY ¹
íu f* max Og/mg)	Φ “nax (h )	Tl/2 (n · ) Yg	AUC • h /m
Příklad -9	29.0	0.18	0.13	13.8	62.5
1 Imipenem	21.5	0.18	0.12	9.5	21.5
Farmakokinetické	parametry	a výtěžek v	moči	sloučeniny z

příkladu 19 a imipenemu, které byly stanoveny v myši po podkožním podání jsou shrnuty v tabulce 2. Sloučenina z příkladu 19 jasně ukázala příznivější farmakokinetický profil než imipenem (obrázek). Poločas života plasmy (0,13 hod.) a tw·; .oblast pod křivkou (AUC; 13, 8/<· g. hod/ml) sloučeniny z příkladu . 19 byly mnohem větší než u imipenemu. Výtěžek z moče 62,5%

Aj ' pro sloučeninu z příkladu 19 byl asi 3x větší než u imipenemu.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být použity ve formě ..léčivých formulacích vhodných pro neorální podání, orální podáni nebo externí podání jejich smícháním s pevnými .nosiči nebo kapalnými excipienty známými z této oblasti. Hlavní způsob podání spočívá v neorálním (nitrožilní nebo nitrosvalové injekce) podání pomocí injekce nebo lokálního podání. Léčivé formulace zahrnují tekuté formulace jako jsou injekční roztoky, sirupy nebo emulse, pevné formulace jako jsou tablety, kapsle nebo granule a externí aplikační » formulace jako jsou masti nebo čípky. Tyto formulace mohou obsahovat aditiva jako jsou báze, pomocná činidla, » stabilizátory, zvlhčovadla, emulgátory, činidla urychlující absorpci, povrchově aktivní látky atd, které se použijí případ od případu podle požadavků.

Aditiva zahrnují např. destilovanou vodu pro injekce, Ringerův roztok, glukosu, sacharosový sirup, želatinu, jedlý olej, kakaově máslo, ethylenglykol, sacharosu, kukuřičný

- 42 škrob, stearát hořečnatý a mastek.

Dávka se různí podle stavu pacienta, jeho váhy, věku, pohlaví, typu formulace, počtu podání atd. Avšak obvyklá denní dávka aktivní složky dospělému je od 5 do 50 mg/kg a výhodná denní dávka pro děti je od 5 do 25 mg/kg, která se podá jednou denně nebo. několikrát za den.

Sloučenina podle vynálezu může být podávána v kombinaci s DHP-I inhibitorem jako je cilastatin [(Z)-7-(L-amino-2-karboxyethylthio )-2-(2,2-dimethylcyklopropankarboxamid) -2-heptanoát sodný] (Japonská patentová přihláška bez průzkumu č. 81518/1981, Evropský patent č. 2S 778, J. Med. Chem., díl 30, str. 1074 (1987)).

Příklady a referenční příklady vynálezu ,

Vynález bude dále popsán detailněji příklady a referenčními příklady, přičemž však tyto příklady v žádném případě neomezují předmět vynálezu.

Není-li uvedeno jinak, použitý siiikagel pro sloupcovou - chromatografii je Wakogel™ C-300 (Wakojunyaku) a siiikagel pro sloupcovou chromatografii v reversní fázi je LC-SORB™ SP-B-ODS (Chemco). Pro HPLC byl použit chromatograf JASCO 800 (Nippon Buňko). Spektra NMR byla měřena za použití roztoku sulfoxidu-dg nebo chloroformu-d, jako vnitřní standard byl použit tetramethylsilan a když byl k měření použit roztok deuterium oxidu, byl jako vnitřní standard použit

2-, 2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonát a měření bylo provedeno pomocí spektrometru XL-200 (200 MHz, Varian). Všechny hodnoty δ jsou uvedeny v ppm.

Význam zkratek pro měření NMR je následující:

s: singlet d: dublet t: triplet q: kvartet

ABq: kvartet AB dd: dvojitý dublet m: multiplet br: široký » J: interakční konstanta

Hz: hertz ’ DMSO-dg : dimethylsulfoxid-dg

CDCl^: chloroform-d

D₂O: deuteriumoxid

Dále použité zkratky mají následující význam:

Ac : acetylskupina

Boc : terč.butoxykarbonylskupina

Bzl : benzylskupina

Et : ethylskupina

Ms : methansulfonylskupina

Me : methylskupina

MOPS: 3-morfolinpropansulfonát

PNB : p-nitrobenzylskupina

PNZ : p-nitrobenzyloxykarbonylskupina

PMB : p-methoxybenzylskupina

TBS : terč.butyldimethylsilylskupina

Tr : trifenylmethylskupina

Ts : p-toluensulfonylskupina

Příklad 1 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-aminomethyl-2-karbamoyl)ethyl pyrrolidin-4-rylthio]-6-[ (lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina 1)

K ledem chlazenému roztoku sloučeniny připravené v referenčním příkladu 1-6 (300 mg, 0,58 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá 1 N vodný hydroxid sodný (0,58 ml) a roztok se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se opět ochladí, přidá se 1 N vodná kyselina chlorovodíková (0,64 ml) ⁴ a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá ethylacetát (50 ml) a směs se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po. sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a získá· se (2S,4S)-2-[2-karbamoyl-1-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)ethyl]-4-merkapto-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (290 mg).

IČ(KBr)cm^-1: 3 3 30,29 20,1700,1605,1520,1400,1340

2)

K ledem chlazenému roztoku p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenylfosforyloxy-6-( (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (344,8 mg, 0,58 mmol) v acetonitrilu (12 ml) se přidá pod atmosférou dusíku N,N-diisopropylethylamin (0,1 ml, 0,58 mmol) a poté se po kapkách přidá výše uvedená sloučenina (290 mg) v acetonitrilu. Směs se míchá přes noc při teplotě 5 °C a poté se k reakční směsi přidá ethylacetát (100 ml) Organická vrstva se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem· chloridu sodného. Po vysušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou -chromatografií na silikagelu (chloroform : methanol = 80 : 1) a získá se p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[ ( 2s , 4S)—2-[ 2-karbamoyl-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) ethyl ]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl )pyrrolidin-4-ylthio]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (290 mg, výtěžek 61,2%).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,1770,1700,1605,1520,1345

NMR(CDC1₃)' δ:

1,28(3H,d,J=3,0Hz), 1,33(3H,d,J=7,0Hz), l,60(2H,br),

1,90-2,60(5H,m), 3,00-3,60(4H,m), 4,00-4,30(3H,m),

5,20(4H-,m), 5,50(2H,br), 7,53 ( 4H , d , J=8,0Hz ) ,

7,64(2H,d,J=8,0Hz), 8,20(4H,d,J=8,0Hz), 8,22(2H,d,J=8,0Hz)

3)

Suspense 10 % palladium-uhlík (300 mg) v 0,1 M MOPS jako tlumivém roztoku (pH 7,0, 10 ml) se míchá pod atmosférou vodíku 1 hodinu, katalyzátor se odfiltruje a promyje se vodou. K roztoku výše uvedené sloučeniny (283 mg, 0,35 mmol) ve směsi tetrahydrofuranu (10 ml) a 0,1 M MOPS tlumivém roztoku (pH 7,0, 10 ml) se přidá získaný katalyzátor a směs se míchá 2 hod. pod atmosferickým tlakem vodíku při teplotě místnosti. Katalyzátor se odfiltruje a tetrahydrofuran se odpaří ve vakuu. Vodný zbytek se promyje ethylacetátem a chloroformem a malé množství· nerozpustné látky se Odfiltruje. Filtrát se zahustí ve vakuu, čistí sloupcovou chromatografií v reverzní fázi (15% methanol ve vodě) a lyofilizuje se, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu (81,96 mg, výtěžek 57,43 %).

IČ)KBr)cm^-1: 3400,1750,1680,1590,1390,1280

NMR(D₂O) 5:

1,28(3H,d,J=8,0Hz), 1,33(3H,d,J=8,0Hz), l,60(2H,m),

2,00-2,40(3H,m), 2,60-3,50(4H,m), 3,60-4,30(6H,m),

UVÁ_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0) : 298nm(£ =8623)

Příklad 2 ( 5R, 6S ) -2- [ ( 2S , 4S ) -2- (1-aminométhy 1-2-karbamoyl) e.thylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethylJ-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina 1)

p-nitrobenzyl (5R,6S)-6-[(IR) -1-hydroxyethyl] -2- [ ( 2S , 4S) - 2- [ 2-karbamoyl-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) ethyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl )pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (164 mg, výtěžek 51,1 %) se získá z thiolu připraveném v příkladu 1-1 (190 mg, 0,39 mmol) a p-nitrobenzyl (5R,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (189,3 mg,

0,39 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-2.

lČ(KBr)cm^-1: 3400,1770,1700,1520,1340

NMR(CDC1₃) S:

1,38(3H,d,J=8,0Hz), l,60(2H,br),

1,90-2,60 (5H,m), 3,00-3,60(4H,m) , 4,00-4,40(3H,m), 5,30(4H,m), 5,55(2H,br), 7,54(4H,d,J=8,0Hz),

7,66(2H,d,J=8,0Hz), 8,24(4H,d,J=8,0Hz), 8,28(2H,d,J=8,0Hz)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (46,68 mg, výtěžek 78,4 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (120 mg) stejným způsobem jako v příkladu 1-3

IČ)KBr)cm^-1: 34 20,1760,1680,1600,1400,1200,1050 48

NMR(D₂O) δ:

1,30(3Η,d,J=3,ΟΗζ), l,70(2H,m), 2,00-2,4 Ο(3Η,m), 2,50-3,45 (4H,m), 3,60-4,30(6H,m), υνλ _max(Ο,IM MOPS tlumivý roztok, ρΗ7,0): 299nm(£ =5250)

Příklad 3 (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-karbamoyl)ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl)-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina

1)

K ledem chlazenému roztoku (2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-2-karbamoylethyl)-4-trifenylmethylthiopyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 2 (120 mg, 0,2 mmol) v methylenchloridu (0,5 ml) se přidá kyselina trifluoroctové (0,5 ml) a triethylsilan (0,04 ml,

0,25 mmol) pod atmosférou dusíku a roztok se míchá 15 minut při stejné teplotě. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se přidá ke zbytku ethylacetát (30 ml). Organická vrstva se promyje 1 M fosfátovým tlumivým roztokem (pH 5,5) a vodou a vysuší se přes bezvodý síran sodný. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se zbytek zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform-methanol), přičemž se získá thiolová sloučenina. Allyl (IR, 5S',6S)-2-[ ( 2R,4S)-N-allyloxýkarbonyl-2-( 2-allyloxykarbonylamino-2-karbamoyl)ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6- [ (IR) --l-’hydr oxy ethyl ] - l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (70 mg, výtěžek 69 %) se získá z výše uvedené thiolové sloučeniny a allyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-649

- [ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (90 mg, 0,13 mmol) stejným způsobem jako v příkladu

1-2. . . _ ' ,_T .. . ..

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2970,1775,1790,154 0,1445,1410,1325,1275,1205

1135,1045,770

NMR(CDC1₃) S:

1,25(3H,d,J=7,0Hz), 1,36(3H , d,J=7,0Hz), 1,55-1,80 (lH,m), 1,80-2,10 (lH,m) , 2,15-2,55 ( 2H, m) , 2,55-2,7 5 (2H, m.) 3,Í0-3,55(3H,m), 3,55-3,80(2H,m) , 3,90-4,40(5H,m) ,

4,40-4,90(6H,m), 5,00-5,60(6H,m) , 5,60-5,30(1H,m),

5,80-6,20(3H,m)

2)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (60 mg, 0,099 mmol) v methylenchloridu (1 ml) se pod atmosférou dusíku přidá voda (0,1 ml, 0,553 mmol), dichlorid bis(trifenylfosfin) palladnatý (3 mg, 0,0043 mmol) a tributylcínhydrid (0,18 ml, 0,669 mmol). Směs se míchá při stejné teplotě 5 minut a poté při teplotě místnosti 30 minut. Ke směsi se přidá methylenchlorid (10 ml) a směs se extrahuje vodou (3 x 10 ml). Vodná vrstva se postupné promyje methylenchloridem a ethylacetátem a poté se odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií v reverzní fázi (0-15% vodný roztok methanolu) a lyofilizací se získá sloučenina uvedená v názvu (11 mg, výtěžek 28 %).

IČ)KBr)cm^-1: 3430,1750,1675,1605,1445,1380

NMR(D₂O) 5:

1,17(3H,d,J=8,0Hz), 1,24(3H,d,J=7,0Hz), 1,50-1,80(lH,m)

1,80-2,20(2H,m), 2,55-2,85(lH,m), 2,85-3,20(lH,m),

- 50 3,20-3,40(5H,m), 4,10-4,30(2H,m) υνλ _roax(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( £ =9320 )

Příklad 4 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-acetamido-2-amino)ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina 1)

K ledem chlazenému roztoku (2S,4S)-4-acetylthio-N-allyloxykarbonyl-2-(l-acetamido-2-allyloxykarbonylamino)ethylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 3 (100 mg, 0,26 mmol) v methanolu (2 ml) se přidá 2 N vodný hydroxid sodný (0,18 ml, 0,36 mmol) a roztok se míchá 1 hodinu. Po přidáni 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové (0,06 ml, 0,36 mmol) se směs zředí methylenchloridem a promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu, přičemž se získá (2S,4S)-2-(l-acetamido-2-allyloxykarbonylamino)ethyl-N-allýloxykarbonyl-4-merkaptopyrrolidin. K roztoku výše uvedené sloučeniny a allyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (182 mg, 0,36 mmol) v acetonitrilu (2 ml) se přidá diisopropylethylamin (63.m1, 0,36 mmol) při teplotě -10 ’C a směs se míchá 6 hodin při stejné teplotě. Reakční směs se zředí ethylacetátem a promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se čistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě (E. Merck # 5717, 2,0 mm, 10 x 20 cm, vyvolání ethylacetátem), přičemž se získá allyl (IR,5S,6S ) - 2-[(2S,4S)-2-(l-acetamido-2-allyloxykarbonylamino )ethylpyrrolidin-4-ylthio ]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (105 mg, výtěžek 65 %) NMR(CDC1₃) δ:

1,26(3H,d,J=8,OHZ), 1,34(3H,d,J=3,0Hz) , l,96(3H,s), 4,60(6H,m), 5,10-5,60(6H,m), 5,80-6,10(3H ,m)

2)

K ledem ochlazené směsi výše uvedené sloučeniny (105 mg, 0,17 mmol), vody (20 ml) a chloridu bis (trif e'nylf osf in) paladnatému (2,2 mg, 0,003 mmol) se přidá pod atmosférou dusíku tributylcínhydrid (0,26 ml, 1,02 mmol). Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, poté se zředí vodou (10 ml) a chloroformem (10 ml) a opět se míchá. Vodná vrstva se oddělí a organická vrstva se extrahuje vodou (10 ml). Spojené vodné vrstvy se promyjí chloroformem (10 ml) a zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí ODS sloupcovou chromatograf ií (YMC GEL™, AQ-120-S50, 20 ml, 20% vodný roztok methanolu) a lyofilizuje se, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu (19 mg, výtěžek 27 %).

NMR(D₂O) δ :>

l,12(3H,d,J=6,0Hz) , 1,22 (’3H,d , J=6,0Hz ) , l,38(2H,m) 2,06(3H,s), 2,46(lH,m),· 2,80-3,46 ( 6H,m) ,

3,78(lH,m), 4,.22(3H,m) ^uv^max^(H2°)^: 301nm(E =8663)

Příklad 5 (IR,5S,6S)-6-((lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-2-(l-methansulfonylamido-2-amino)ethylpyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylát sodný

1) ' '

HO			NHMs
X	H	T	* 1 ^nhpnz
	I	<	' 1 . 1
	—		\
		1	^XPNZ	>
		COOPNB
K ledem chlazenému	roztoku	(2S,4S)-4-merkapto-N-(p-nitro-

benzyloxykarbonyl)-2-[1-methansulfonylamido-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl]pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 4 (253 mg, 0,42 mmol) a p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (226 mg, 0,38 mmol) v acetonitrilu (5 ml) se přidá diisopropylethylamin (74/il, 0,42 mmol) a směs se míchá 1 hodinu-. Reakční směs se zředí ethylacetátem a promyje se nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným. Po sušeni přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří rozpouštědlo ve vakuu.

Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (30 ml, 5% methanol v ethylacetátu) přičemž se získá p-nitrobenzyl (IR,5S,6S )-2-((2S, 4S)-2-(1-methansulfonylamido-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (240 mg, výtěžek 61 %) .

NMR(CDC1₃) 5:

1,28(3H,d,J=6,0Hz), 1,38(3H,d,J=6,0Hz), 2,86(3H/s),

5,24(4H,br s), 5,28(lH,d,J=12,0Hz), 5,50(1H,d,J=12,0Hz) , 7,56(4H,m), 7,68(2H,d,J=l0,0Hz), 8,24(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (46 mg, výtěžek 39 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (240 mg, 0,26 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

NMR(D₂O) δ:

1,13(3H,d,J=6,0Hz), 1,28(3H,d,J=6,0Hz), 3,16(3H,s) ^UV^max^(H2^0): 300nm( £=6164)

Příklad 6 (IR, 5S , 6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-amino-l-kyan)methylpyrřolidin-4-ylthio]-6-[ (lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina

(2S, 4R) -2- (1-kyan-l-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) methyl-4-merkapto-N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl)pvrrolidin se získá jako surový produkt z (2S,4R)-4-acetylthio-2-(l-kyan-l-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)methyl-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 5 (88,1 mg, 0,158 mmol) stejným postupem jako v příkladu 1-1.

p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -2- [ ( 2S , 4R) -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl )-2-( 1-kyan-l-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) pyrrolidin-4-ylthio ] -1-methyl-lkarbapen-2-em-3-karboxylát (103,3 mg, výtěžek 76,4 %) se získá z'výše uvedené sloučeniny a p-nitrobenzyl (IR, 5R, 6S )-2-difenoxyfosforyloxy-6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu· (93 mg, 0,158 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-2.

IČ(KBr)cm ¹: 3400,1760,1700

NMR(CDC1₃) δ:

1,21(3H,d,J=7,0Hz), 1,3O(3H,d,J=7,0Hz) , 1,90-2,10(2H,m)

2,80-3,50(4H,m), 4,20(2H,m), 2,16(2H,s), 5,12 & 5,42 (totál. 2H,každý ABq,J=13,OHz), 5,58(lH,m),

7,42(2H,d,J=8Hz), 7,58(2H,d,J=8,OHz), 8,12 ( 4H,d,J=3,0Hz)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (18,2 mg, výtěžek 41,1 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (103,8 mg, 0,121 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2250,1760,1600,1400

NMR(CDC1₃) δ:

1,21(3H,d,J=7,0Hz), 1,29(3H,d,J=7,OHz), l,85(lH,m) 2,65(lH,m), 3,05(lH,m), 3,10(lH,m) 3,40(3H,m), 4,05(lH,m), 4,25(2H,m) ^^max^⁰'¹¹¹ MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 301nm( £=8400)

Příklad 7

Diastereomer A (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-2-methyl)propylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

COOPNB

Diastereomer A p-nitrobenzyl (IR, 5S , 6S )-6-[.(IR)-1-hydroxy ethyl]-1-methyl-2-[(2R,4S)-2-[2-methy1-3-(p-nitrobenzyloxykarbony lamino )propy1]-N-(p-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidin-4-yl thio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (méně polární sloučenina, 120 mg, výtěžek 13 %) a diastereomer B (polární sloučenina,

130 mg, výtěžek 14 %) se získají z (2R,4S)-4-acetylthio-2[(2-methyl-3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-N-(p-nitrobenzoyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 6 (590 mg, 1,03 mmol) a p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (610 mg, 1,03 mmol) stejným postupem jako v příkladu 1-1 a 1-2.

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3420,1770,1705,1520,1345,1210,1110

NMR(CDC1₃) 5:

0,96(3H,m), 1,28(3H,d,J=7,0Hz) , 1,37(3H,d,J=7,0Hz),

1,40—2,40(6H,m), 2,40-2,70(lH,m), 2,90-3.90(6H,m),

3,90—4,55(4H,m), 5,10-5,55(7H,m), 7,52(4H,d,J=7,0Hz),

7,66(2H,d,J=9,0Hz), 8,23(6H,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^_1: 3410,1770,1700,1520,1345,1205,1135

NMR(CDC1₃ ) δ :

0,96(3H,m), 1,28(3H,d,J=8,OHz), 1,37(3H,d,J=7,0Hz),

1,55-2,20(6H,m), 2,50-2,80(1H,m), 2,80-3.80(5H,m),

3,80-4,40(4H,m) , 4,80-5,60(7H,m), 7,52(4H,d,J=8,OHz),

7,67(2H,d,J=9,OHz), 8,26(6H,m)

2)

HO

Sloučenina uvedená v názvu (8 mg, výtěžek 15 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (120 mg, 0,137 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ)KBr)cm^-1: 3400,2960,1755,1590,1395

NMR(D₂O) δ:

0,92(3H,d,J=7,0Hz), 1,12(3H,d,J=7,0Hz),

1,20(3H,d,J=7,0Hz), 1,40-2,00(5H,m),

2,50-3,00(3H,m), 3,10-3,40(3H,m), 3,60-3,80(2H,m),

4,00—4,20(2H,m) υνλ^χίΟ,ίΜ ^Mops tlumí vý roztok, pH7,0): 298nm(£ =5950)

Příklad 8

Diastereomer B (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2-methyl)propyl3pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Sloučenina uvedená v názvu (21 mg, výtěžek 37 %) se získá z diastereomeru B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-2-[(2R,4S)-2-[2-methyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu připraveném v příkladu 7-1 (130 mg, 0,148 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ)KBr)cm^_1: 3400,1755,1585,1390

NMR(D₂0) δ:

0,98(3H,d,J=6,0Hz), 1,15(3H,d,J=7,0Hz),

1,23(3H,d,J=7,0Hz), 1,30-2,00(5H,m),

2,50-3,00(3H,m), 3,00-3,60(3H,m), 3,65-3,90(2H,m),

4,10-4,25(2H,m) ^rjv^iiiax⁽⁰'^1M MOPS tlumivý roztok, pH7,0 ) : 298nm(£ =7250)

Příklad 9

Diastereomer A (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3-amino-l-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl -methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny 1)

Diastereomer A p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[ (3-p-nitrobenzyloxykarbonylami-no-l-hydroxy)propyl ]pyrrolidin-4-ylthio] -6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu' ( 271 mg, výtěžek 68 %) se získá z diastereomeru B (2S,4S)-4-acetylthio-N(p-nitrobenzyloxykarbonyl)—2— [ (3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino-l-hydroxy)propylJpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-6 (259 mg, 0,45 mmol) a p-nitrobenzyl (1R,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (267 mg, 0,45 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3400,1770,1700,1600,1520,1350

NMR(CDC1₃) 5:

l,26(3H,d,J=4,0Hz), 1,37(3H,d,J=4,0Hz) , l,44-l,82(2H,m) , 2,20-2,70(2H,m), 3,00-3,70(6H,m) 3,84(lH,m), 3,94-4,35(4H,m), 5,00-5,30(5H,m),

5,54(1H,d,J=7,0Hz) , 7,51(2H,d,J=5,0Hz), 7,52(2H,d,J=5,0Hz), 7,65(2H,d,J=5,0Hz) , 8,19(2H,d,J=5,0Hz) ,

3,20(2H,d,J=5,OHz), 8,21(2H,d,J=5, OHz)

2)

Suspense 10 % palladium-uhlík (135 mg) v 0,1 M MOPS tlumivém roztoku (pH 7,0, 10 ml) se míchá pod atmosférou vodíku 30 minut, katalyzátor se odfiltruje a promyje vodou. K roztoku výše uvedené sloučeniny (270 mg, 0,307 mmol) v tetrahydrofuranu (30 ml) a 0,1 M MOPS tlumivém roztoku (pH 7,0, 30 ml) se přidá výše uvedený katalyzátor a směs se míchá 2 hodiny pod atmosférickým tlakem vodíku při teplotě místnosti. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří na objem cca 10 ml. Vzniklá sraženina se odfiltruje a filtrát se odpaří na objem cca 5 ml. Vodným hydrogenuhličitaném sodným se upraví pH filtrátu na hodnotu 8, čistí se za použití neiontové adsorpční pryskyřice sloupcovou chromatografií (DIAION™ - HP20SS, 5—10% vodný roztok methanolu) a lyofilizací se získá sloučenina uvedená v názvu (35 mg, výtěžek 30 %). IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1760,1730,1600,1400

NMR(D₂O) δ:

1,16(3H,d,J=5,0Hz), 1,24(3H,d,J=5,0Hz), 1,60-1,94(2H,m)

2.24- 2,64(2H,m), 2,74-3,00(2H,m), 3,00-3,25(3H,m),

3.25- 3,44(2H,m), 3,64-3,83(2H,m), 4,06-4,30(2H,m) UVÁm_ax(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0) : 297nm( 6=4870)

Příklad 10

Diastereomer B (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[ ( 3-amino-l-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[(3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino-l-hydroxy) propy 1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen2-em-3-karboxylátu (364 mg, výtěžek 67 %) se získá z diastereomeru A (2S,4S)-4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2- [ ( 3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino-1-hydroxy)propy1]pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-6 (357 mg,.

0,62 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-{ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (369 mg, 0,62 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1770,1700,1600,1520,1340

NMR(CDC1₃) δ:

, 1,26(3H,d,J=4,0Hz), 1,34(3H,d,J=4,0Hz) , 1,40-1,80(2H,m)

2,26-2,50(2H,m), 3,10-3,70(6H,m), 3,90-4,36(5H,m),

5,04-5,30(5H,m) , 5,50(1H,d,J=7,OHz), 7,48(2H,d,J=5,0Hz),

7,49(2H,d,J=5,OHz), 7,65(2H,d,J=5,OHz),

8,18(2H,d,J=5,OHz), 8,19(2H,d,J=5,OHz), 8,20(2H,d,J=5,OHz)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (50 mg, výtěžek 31 %) se získá zvýše uvedené sloučeniny (363 mg, 0,413 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 9.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2960,1760,1730,1600,1400

NMR(D₂O) δ:

1,13(3H,d,J=5,0Hz), 1,26(3H,d,J=5,OHz), 1,40-2,10(3H,m) 2,44(lH,m), 2,92(lH,m), 3,00-3 , 30 ( 4Η ,m) , 3,30-3,46 ( 2Η ,m) , 3,68-3,86(2Η,m), 4,12-4,30(2Η,m) ^UV^max^°'^{1M Mops} tlumivý roztok, pH7,0): 298nm( £=5730)

Příklad 11

Dihydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1,3-diaminopropyl) pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxýkarbonyl-2-[(1,3-diazidopropyl)pyrrolidin-4-ylthio ] -6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (889 mg, výtěžek 95 %) se získá z ( 2S , 4S)-4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-(1,3-diazidopropyl)pyrřolidinu připraveném v referenčním příkladu 8 (560 mg, 1,25 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (743 mg, 1,25 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2. IČ(KBr)cm^-1: 3450,2100,1770,1700,1600,1520,1340

NMR(CDC1₃) δ:

1,25(3H,d,J=6,0Hz), 1,34(3H,d,J=6,0Hz), 1,42-1,84(2H,m) l,98(lH,m), 2,34(lH,m), 2,48-3,10(2H,m), 3,10-3,72(5H,m) ,

3,82 —4., 52 ( 4H,m) , 5,13(1H,d,J=12,0Hz), 5,22 (1H ,d , J=12,0Hz ) 5,36(lH,d,J=12,0Hz), 5,52(lH,d,J=12,0Hz)

2)

HO

NH?

NH₂ · 2HCf

COOH

Sloučenina uvedená v názvu (16 mg, výtěžek 8%) se získá z výše uvedené sloučeniny (336 mg, 0,448 mmol) úpravou pH roztoku na hodnotu 6,5 kyselinou chlorovodíkovou a lyofilizací stejným postupem jako v příkladu 9.

IČ(KBrJcm¹: 3400,2950,1750,1730,1600,1400

NMR(D₂O) δ:

1,11(3H,d,J=6,0Hz), l,17(3H,d,J=6,0Hz) , 1,50-2,14(3H,m) 2,50(lH,m), 2,80-3,14(2H,m), 3,20-3,38(2H,m),

3,40-3,92(5H,m), 4,04-4,30(2H,m)

UVÁ_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm( €=4894)

Příklad 12

Diastereomer A monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[( 2-amino-l-hydroxy)ethyl ]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR) -1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny 1)

HO

OH

Diastereomer B allyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-( 2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxy )ethylpyrrolidin-4 -ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (10 5 mg, výtěžek 50 %) se získá z diastereomeru B ( 2S , 4S)-4-acetylthio-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxy )ethylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 9 (165 mg, 0,368 mmol) a allyl (IR,5S,6S ) -2-difenoxyfosforyloxy-6- [ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (184 mg, 0,368 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2. IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1770,1700,1650,1540,1410

NMR(CDC1₃) δ:

l,27(3H,d,J=6,0Hz), 1,35(3H,d,J=6,0Hz),

2,08(lH,ra), 2,45(lH,m), 2,71-3,72(7H,m), 3,83-4,39(4H,m)

4,45-4,90(6H,m), 5,09-5,55(6H,m), 5,80-6,09(3H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (11 mg, výtéžek 15 %) se připraví z výše uvedené sloučeniny (1,5 mg, 0,181 mmol) úpravou pH roztoku kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 6,8 a lyofilizací stejným způsobem jako v příkladu 3-2.

IČ(KBrJcm¹: 3400,2950,1750,1730,1600,1390

NMR(D₂O) S:

1,12(3H,d,J=7,0Hz), l,18(3H,d,J=7,0Hz), l,70(lH,m), 2,48(lH,m), 2,90(lH,m), 3,00-3,68(6H,m) 3,83(lH,m), 3,96-4,24(3H,m) ^max^⁰'¹¹'¹ MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 300nm( £ =4760)

Příklad 13

Diastereomer B monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(2-amino-l-hydroxy)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]-l-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny 1) . .

Diastereomer A allyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-allyloxykarbonyl-2- (2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxy )ethylpyrrolidin» -ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (164 mg, výtěžek 58 %) se získá z diastereomeru » A (2S , 4S)-4-acetylthio-N-allyloxykarbonyl-2-( 2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxy)ethylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 9 (183 mg, 0,491 mmol) a allyl. (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em -3-karboxylátu (245 mg, 0,491 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1780,1700,1650,1540,1410 NMR(CDC1₃) δ:

1,26(3H,d,J=7,0Hz), 1,34(3H,d,J=7,0Hz ) , l,82(lH,m), 2,60(lH,m), 3,00-3,62(7H,m), 3,78(lH,m)

3,94-4,36(3H,m) , 4,46-4,92(6H,m), 5,16-5,68(6H,m)

,« Sloučenina uvedená v názvu (10 mg, výtěžek 8 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (164 mg, 0,283 mmol) úpravou pH roztoku na hodnotu 6,8 kyselinou chlorovodíkovou a lyofili-zací stejným postupem jako v příkladu 3-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1740,1730,1600,1390

NMR(D₂O) δ:

1,12(3H,d,J=7,OHz), 1,19(3H,d,J=7,OHz), l,60(lH,m), 2,52(lH,m), 2,92(lH,m), 3,08-3,70(6H,m)

3,80-4,06(2H,m), 4,08-4,20(2Η,m) _max( ° , ÍM MOPS tlumivý roztok, ρΗ7,0): 299nm( £. =5390 )

Příklad 14 (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2,2-dimethyl)propy1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2em-3-karboxylové kyselina

p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(2,2-dimethyl-3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (350 mg, výtěžek 80 %) se získá z (2R,4S)-4-acetylthio-2-[2,2-dimethyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonyl amino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 10 (290 mg, 0,493 mmol) a P-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxy ethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (300 mg, 0,505 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2960,1775,1700,1605,1520,1400,1345,1205, 1140,1105,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

0,90(6H,s), 1,28(3H,d,J=7,0Hz), 1,37(3H,d,J=6,0Hz)

1,50-1,90(4H,m), 2,70(lH,m), 3,00(lK,m),

3.10- 3,65(4H,m), 3,66(lH,m), 4,27(2H,m), 3,92(2H,m),

5.10- 5,60(6H,m), 6,48(lH,m), 7,52(4H,m),

7,66(2H,d,J=8,0Hz), 8,22(6H,m)

Sloučenina uvedená v názvu (53 mg, výtěžek 37 %) se připraví z výše uvedené sloučeniny (320 mg, 0,359 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2960,1750,1590,1380,1255

NMR(D₂O) 5:

0,96 & 0,98(totál.6H,každý s), 1,16(3H,d,J=7,0Hz),

1,24(3H,d,J=7,0Hz) , 1,65(2H,d,J=6,OHz), 2,56(lH,m),

2,77(2H,S), 2,96(lH,m), 3,10-3,65(4H,m) 3,65-3,80(2H,m),

4,10-4,30(2H,m)

UV.\ _max ( 0 , IM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm(£ =6330)

Příklad 15 (IR, 5S , 6S ) -2- [ (2R,4S)-2-[ (-2,2-dimethyl-3-N-methylamino) propyl 3pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina

1)

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(2,2-dimethyl-3-N -.methy 1-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) propyl ] -N-p-nitrobenzylóxykarbonylpyrrolidin-4-ýlthio ] -6-[ (IR) -1-hydroxyethyl ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (470 mg, výtěžek kvantitativní) se získá z (2R,4S)-4-acetylthio-2-[(2,2-dimethyl-3-N-methy1-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 11 (310 mg, 0,514 mmol) a (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu (310 mg, 0,521 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3440,2960,1770,1700,1605,1520,1400,1245, 1205,1140,1105,855,735 nmr(cdci₃) Ó:

0,92 & l,02(totál. 6H,každý br s), 1,27(3H,d,J=7,0Hz), 1,37(3H,d,J=7,0Hz), 1,55-1,90(4H,m), 2,67(lH,m), 3,02(3H,br s), 3,05-3,50(5H,m) 3,56(lH,m), 4,02(2H,m) 4,28(2H,m), 5,00-5,55(6H,m), 7,52(4H,d,J=8,0Hz),

7,66(2H,d,J=8,OHZ), 8,23(6H,d,J=8,0Hz)

Sloučenina uvedená v názvu (108 mg, výtěžek 52 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (460 mg, 0,508 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2960,1750,1595,1390,1250,1095

NMR(D₂O) δ:

1,00 & l,02(totál. 6H,každý s), 1,17(3H,d,J=7,0Hz),

1,25(3H,d,J=6,0Hz), 1,70(2H,d,J=7,0Hz),

2,45-2,70(lH,m), 2,63(3H,s), 2,84(2H,s), 3,01(lH,m),

3,20—3,45(4H,m), 3,65-3,85(2H,m), 4,10-4,30(2H,m)

UvA _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 297nm(£ =6580)

Příklad 16

- 67 Diastereomer Β (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-aminomethy1-3-hydroxy)propy 1 ] pýrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Diastereomer B p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2- [ (1-aminomethy1-3-hydroxy) propy 1 ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonyl pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (217 mg, výtěžek 45 %)se získá z diastereomeru A (2S,4S)-4-acetylthio-2-(l-aminomethyl-3-hydroxy )propyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 12 (319 mg, 0,54 mmol) a p-nitrobenzyl (IR, 5S, 6S) -2-dif en- yl f osf oryloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (3 21 mg, 0,54 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ;(KBr)cm^_1: 3420,1770,1700,1605,1520,1345,1205, 1140,1110,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

1,27(3H,d,J=6,0Hz ) , 1,36(3H,d,J=7,0Hz), 1,50-1,80(3H,m), 2,00(lH,m), 2,32(lH,m), 2,50(lH,m), 3,10-3,40(5H,m), 3,51(lH,m), 3,76(2H,m), 4,10-4,30(4H,m), 5,18(2H,s), 5,20(2H,s), 5,29(lH,d,J=14,OHz), 5,52(1H,d,J=14,0Hz),

7,49(2H,d,J=8,0Hz), 7,50(2H,d.J=8,OHz),

7,66(2H,d,J=9,0Hz), 8,21(2H,d,J=8,OHz) ,

8,22(2H,d,J=3,OHz), 8,23(2H,d,J=9,OHz)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (54 mg, výtěžek 56 %) se připraví z výše uvedené sloučeniny (206 mg, 0,24 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1750,1600,1390

NMR(D₂O) δ:

1,23(3H,d,J=6,0Hz), 1,31(3H,d,J=7,0Hz), l,45-l,80(2H,br m), 2,14(lH,m), 2,50(lH,m), 2,76(lH,m), 2,95-3,10(2H,m), 3,10-3,50(4H,m), 3,72(2H,m), 3,84(2H,m), 4,20-4,30(2H,m)

Příklad 17

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(lR)-l-methoxy-3-N-methylaminopropyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

K roztoku sloučeniny připravené v referenčním příkladu 14-4 (287 mg, 0,643 mmol) v methanolu (1 ml) se přidá 2 N roztok, kyseliny chlorovodíkové v methanolu (1,3 ml) a směs se míchá 3 dny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí ve směsném roztoku acetonitrilu (1,5 ml) a N,N-dimethylformamidu (0,5 ml). Pod atmosférou- dusíku se k roztoku postupné přidá při -20 °C N,N-diisopropylethylamin (0,22 ml, 1,25 mmol) a roztok p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-di69 fenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen- ' “

-2-em-3-karboxylátu (344 mg, 0,579 mmol) v acetonitrilu (8 ml) a N,N-diisopropylethylaminu (0,11 ml, 0,62 mmol) a směs se míchá přes noc při 5 ’C. K reakční směsi se přidá tetrahydrofuran (15 ml), 0,5 M MOPS tlumí vý roztok (pH7,0, 0,1.5 ml), ethanol (4,5 ml) a 10% katalyzátor palladium-uhlík (0,32 g).

Směs se míchá 1 hodinu pod atmosférou vodíku při teplotě místnosti. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu na objem cca 15 ml. Zbytek se promyje chloroformem a vodná vrstva se zahustí ve vakuu na objem 2 ml. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií v reversní fázi na silikagelu (20 % methanol-voda), pH roztoku se upraví kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 5,0 a lyofilizací se získá sloučenina uvedená v názvu (84 mg, výtěžek 32 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2960,1760,1600,1460,1395,1180

NMR(D₂O) S:

1,14(3H,d,J=7,0Hz), 1,20(3H,d,J=7,0Hz) ,

1,70-2,20(3H,m), 2,60(lH,m), 2,66(3H,s)

3,00-3,64(5H,m), 3,60(3H,s), 3,78-4,00(4H,m),

4,08-4,24(2H,m)

UvA_max(0,lM ^M0PS tlumivý roztok, pH7,0): 300nm(£ =8310)

Příklad 18

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((1S)-l-hydroxy-3-N-methylamino ] propylpyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

PNZ p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[[(1S)-l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl3-l-methyl-l-karbapenbapen-2-em-3-karboxylát (1,25 g, výtěžek 60 %) se získá z (2S,4S)-4-acetylthio-2-[[(1S)-1-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbony1-N-methylamino)]propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 15-3 (1,46 g, 2,47 mmol) a p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,47 g, 2,47 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3430,2950,1780,1700,1610,1520,1400,1350,1210,

1140,1110

NMR(CDC1₃) δ:

1,27(3H,d,J=7,3Hz), 1,37(3H,d,J=6,3Hz),

1.40- 2,00(3H,m), 2,50(lH,m), 2,94(3H,m), 3,10-3,80(6H,m), 4,00-4,35(5H,m), 5,10-5,30(5H,m), 5,50(1H,d,J=13,9Hz),

7.40- 7,60(4H,m), 7,65(2H,d,J=8,6Hz), 8,18-8,30(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (322 mg, výtěžek 20 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,26 g, 1,41 mmol) úpravou pH roztoku na hodnotu 5,0 kyselinou chlorovodíkovou a lyofilizací stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2960,2930,1760,1590,1390

NMR(D₂0) δ:

• l,37(3H,d,J=7,3Hz) , 1,4.5 ( 3H , d , J=6,6Hz ) ,

1,85-2,22(3H,m), 2,84(lH,m), 2,90(3H,s), 3,30-3,68(5H,m),

3,80-4,00(2H,m), 4,08-4,30(2H,m), 4,30-4,45(2H,m) υνλ _raax(o,1M MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm( £ =9270)

Příklad 19

Monohydrochlorid (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(lR)-l-hydroxy-3-N-methy lamino] propy lpyrrolidin-4-ylthio] -6- [ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[ [ (lR)-l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl -N-methylamino) ]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (1,58 g, výtěžek 81 %) se získá z .(2S,4S)-4-acetylthio-2-[[(IR)-1-hyd roxy-3- (N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino) ]propyl ] -N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 15-3 (1,29 g, 2,18 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S , 6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,30 g, 2,18 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

TČ(KBr)cm^-1: 3420,2940,1770,1700,1600,1520,1400,1340,1210,

1140,1110

NMR(CDC1₃) δ:

1,28(3H,d,J=7,3Hz), 1,37(3H,d,J=5,9Hz), l,50-2,40(4H,m) , 2,95(3H,S), 3,00-3,70 ( 5H , m),,

3,80-4,40(6H,m) , 5,10-5,40(5H,m), 5,50(1H,d,J=13,9Hz),

7,40-7,60(4H,m), 7,65(2H,d,J=8,9Hz), 8,15-8,30(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (269 mg, výtěžek 35 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,58 g, 1,77 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 18-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2970,1760,1620,1400

NMR(D₂O) δ:

1,30(3H,d,j=6,9Hz), 1,37(3H,d,J=6,3Hz),

1,80-2,15(3H,m), 2,70(lH,m), 2,82(3H,s), 3,20-3,60(5H,m), 3,70—3,90(2H,m), 3,95-4,20(2H,m), 4,20-4,40(2H,m) ^^max^⁰'^{111 Mops} tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( f=9030)

Přiklad 20 >

Monohydrochlorid (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[ (ÍS)-l-hydroxy-2-N-methylamino]ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[[(lS)-l-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)]ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (lR)-l-hydroxyethyl]-i--methyl-l-karbapenbapen-2-em-3-karboxylát 661 mg, výtěžek 65 %) se získá z (2S,4S)-4-acetvlthio-2-[[(1S)-1-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)Jethyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 16-3 (67 0 mg, 1,16 mmo1j _stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2950,1770,1700,1610,1520,1400,1340 NMR(CDC1₃ ) δ :

1,27(3H,d,J=6,9HZ), 1,38(3H,d,J=6,3Hz), l,90(lH,m) 2,60(lH,m), 3,06(3H,s), 3,20-3,60(7H,m), 3,90-4,30(4H,m),

5,10-5,35(5H,m) , 5,51(lH,d,J=13,5Hz), 7,50-7,60(4H,m)

7,65(2H,d,J=8,9Hz), 8,15-8,30(6H,m)

2)

'N'

H •NHMe

OH

Sloučenina uvedená v názvu (53 mg, výtěžek z výše uvedené sloučeniny (656 mg, 0,746 mmol)

HCŽ

%) se získá stejným postupem jako v příkladu 18-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2960,1770,1600,1390

NMR(D₂0) δ:

1,29(3H,d,J=7,3HZ), 1,36(3H,d,J=6,6Hz), l,86(lH,m) 2,82(lH,m), 2,86(3H,s), 3,20(lH,m), 3,35-3,60(4H,m),

3,75-3,90(2H,m), 4,15(1H,m), 4,25-4,40(3H,m)

UvÁ_nax(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0 ) : 299nm( £ =9810)

Příklad 21

Monohydrochloria (1R,5S,6S)-2-((2S,45)-2-((IR)-l-hyároxy-2-N-methylamino ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny 1)

p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-[[(IR)-1-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbony1-N-methylamino)]ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapenbapen-2-em-3-karboxylát (1,87 g, výtěžek 55 %) se získá z (2S,4S)-4-acetylthio-2-[[(lR)-l-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)Jethyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 17-3 (2,00 g, 3,85 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (2,29 g, 3,85 mmol)' stejným způsobem jako v příkladech l-l a 1-2.

IČÍKBrJcm“¹: 3440,2970,2940,1770,1700,1610,1520,1400,1340

1210,1140,1110

NMR(CDC1₃) S:

1,25(3H,d,J=7,3Hz), 1,37(3H,d,J=6,3Hz), 2,00-2,50(2H,m)

3,04(3H,s), 3,00-3,80(8H,m), 3,95-4,40 ( 3H,m) ,

5,10-5,35(5H,m), 5,51(lH,d,J=13,5Hz), 7,40-7,60(4H,m)

7,65(2H,d,J=8,Hz), 8,15-8,30(6H,m)

2)

NHMe

HCf ' Sloučenina uvedená v názvu (256 mg, výtěžek 29 %) se získá ž výše uvedené sloučeniny (1,87 g, 2,13 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 18-2.

- 75 IČ (KBř)čm¹: 3 4 2 0/29 7 O',l 7 6 0,160 0,1400...... ~

NMR(D₂O) S:

1,19(3H,d,J=7,6Hz), 1,25(3H,d,J=6,6Hz) , l,92(lH,m) 2,62(lH,m), 2,75(3H,s), 3,05(lH,m), 3,15-3,60(4H,m),

3,70(lH,m), 3,82(lH,m), 4,02(lH,m), 4,15-4,25(2H,m),

4,35(lH,m)

UvA_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0 ) : 300nm( £ =9440 )

Příklad 22

Diastereomer A monohydrochloridu (IR, 5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methy 1-2-[ [ ( 2R,4S)-2-[2-{N-methylamino)]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Diastereomer A p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl j-l-methyl-2-[ (2R,4S)-2-[2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) propyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin4-ylthiol-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (480 mg, výtěžek 81 %) diastereooeru A se získá z» ( 2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbony lamino) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 18 (390 mg,

0,679 mmol) a p-nitrobenzyl (IR, 5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (400 mg, 0,673 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2. IČ(KBr)cm^-1: 3420,2960,1770,1700,1605,1520,1445,1400,1345,1205,

1135,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

1,05-1,30(3H,m), 1,25(3H,d,J—7,0Hz) , 1,36(3H,d,J=6,0Hz),

1,60-2,40(4H,m), 2,48(lH,m), 2,78(3H,s), 3,20-3,40(3H,m),

3,54(lH,m), 3,85-4,20(2H,m), 4,20-4,50(3Η,m),

5,10-5,60(6Η,m), 7,51(4Η,d,J=8,ΟΗζ), 7,65(2Η,d,J=9,ΟΗζ) , 8,21(6Η,d,J=9,ΟΗζ)

2)

NHMe

HCI

Sloučenina uvedená v názvu (114 mg, výtěžek 50 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (480 mg, 0,547 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3 s tím, že pH eluátu bylo upraveno 0,1 N HCI na hodnotu 6, poté byl zahuštěn a lyofilizován.

IČ(KBr)cm^-1: 3410,2960,1760,1590,1455,1390,1280,1255,1145 NMR(D₂O) δ:

l,28(3H,d,J=7,0Hz), 1,34(3H,d,J=6,0Hz), 1,42(3H,d,J=7,0Hz) l,80(lH,m), 2,15—2,40(2H,m), 2,79(3H,s), 2,85(lH,m),

3,35-3,60(4H,m), 3,76(1H,m), 3,90(1H,m), 4,10(1H,m)

4,25-4,35(2H,m)

UV^max^⁰'™ ^Mops tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( £.=9200)

Příklad 23

Diastereomer B monohydrochloridu (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxy ethyl]-l-methyl-2-[(2R,4S)-2-[2-(N-methylamino)propyl]pytiOlidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny 1)

Diastereomer Β p-nitrobenžyl' (IR, 5S ,'6S ) - 6- [ (1Ř) -l-hydrox~y-'~ ethyl ] - l-methyl-2- [ ( 2R, 4S ) -2- [ 2- (N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino ) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio ]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (70 mg, výtěžek 57 %) se získá z diastereomeru B (2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 19 (80 mg, 0,139 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (90 mg, 0,151 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2 IČ(KBr)cm^-1: 3440,2960,1770,1700,1605,1520,1445,1400,1345,1205,

1135,1105,850,735

NMR(CDC1₃) 8:

1,14(3H,d,J=6,0Hz), 1,26(3H,d,J=7,0Hz) , 1,37(3H,d,J=6,0Hz),

1,60—2,80(4H, m) , 2,90(3H,s), 3,20-3,40(3H,m),

3,56(lH,rn), 3,71(lH,m), 3,98(lH,rn), 4,20-4,40(3H,m),

5,10-5,60(6H,m), 7,51(4H,d,J=9,0Hz) , 7,65(2H,d,J=9,0Hz),

8,22(6H,d,J=9,0Hz)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (17 mg, výtěžek 51 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (70 mg, 0,080 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm

-1.

3420,2970,1760,1600,1455,1390,1260,1150,1040

NMR(D₂O) δ:

l,24(3H,d,J=7,0Hz) , 1,31(3H,d,J=6,0Hz), 1,41(3H,d,J=7,0Hz) l,74(lH,m), 2,12(lH,m), 2,75(3H,s), 2,83(lH,m),

3,20-3,50(3H,m) , 3,50(lH,m), 3,63(lH,m), 3,82(lH,m)

3,90-4,10(lH,m) ,--4,20-4,35 (2H,m).

UvA_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0) : 299nm( £=8600)

Příklad 24

Diastereomer A monohydrochloridu (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[3-hydroxy-2-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio] -6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

OH

NMe l

coo^^

Diastereomer A allyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-[2-(N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-3-hydroxy]propylpyrrolidin-4-ylthio]-6- [(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (70 mg, výtěžek 38 %) se získá z diastereomeru A (2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2~ C2-(N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-3-hydroxy]propy1-4~trifenylmethylthiopyrrolidinu připraveném v referenčním

Ί příkladu 20 (180 mg, 0,30 mmol) a allyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (160 mg, 0,32 mmol) stejným postupem jako v příkladu 3-1.

IČ(KBr)cm^_1: 3430,1775,1695,1450,1405,1325,1280,1200,1140, 1040,980,930,765

NMR(CDC1₃) δ:

1,26(3H,d,J=7,0Hz), 1,35(3H,d,J=6,OHz),

1,20-2,40 ( 5H;,m) , 2,57(lH,m), 2,84(3H,s), 3,20-3,4 5 ( 3H ,m) 3,45-3,80(3H,m), 3,90-4,15(2H,m), 4,15-4,40(3H,m)

4,50-4,90(6H,m), 5,20-5,50(6H,m), 5,85-6,05(3H,m) •2)

HCI

Sloučenina uvedená v názvu (7 mg, výtěžek 16 %) se připraví z výše uvedené sloučeniny (60 mg, 0,099 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 18-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1755,1590,1455,1390,1260,1150,1040

NMR(D₂O) δ:

1,25(3H,d,J=7,0Hz), 1,32(3H,d,J=7,0Hz), (l,78(lH,m),

2,15-2,45(2H,m), 2,80(3H,s), 2,83(lH,m), 3,25-3,55(4H,m),

3,60-3,90(3H,m) 3,90-4,10(2H,m), 4,20-4,35(2H,m) υνλ _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm(£=7400)

Příklad 25

Diastereomer B monohydrochloridu (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2- [ 3-hydroxy-2- (N-methylamino) propyl]pyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

OH

NMe coo^^

Diastereomer B allyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2- ( 2- (N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-3-hydroxy ]propylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (90 mg, výtěžek 49 %) se získá z diastereomeru B (2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-[2-(N-allyloxykarbonyl-N.-methylamino)-3-hydroxy] propyl-4-( trif eny lmethylthio) pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 20 (180 mg, 0,30 mmol) a allyll (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ] -l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (160 mg, 0,32 mmol) stejným postupem jako v příkladu 3-1.

IČ(KBr)cm^-1: 3440,1770,1695,1450,1405,1325,1280,1205,1140,

970,765

NMR(CDC1₃) δ:

1,26(3H,d,J=7,0Hz), 1,35(3H,d,J=6,0Hz),

1,60-2,80(6H,m), 2,83 & 2,91(totál. 3H,každý s)

3,20—3,45(3H,m), 3,45-3,70(3H,m) 3,81(lH,m),

3,90-4,40(4H,m), 4,50-4,90(6H,m), 5,20-5,50(6H,m) 5,80-6,10(3H,m) >

2)

Sloučenina uvedená v názvu (17 mg, výtěžek 26 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (90 mg, 0,148 mmol) stejným postupem jako v příkladu 3-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1760,1585,1450,1390,1260,1150,1040

NMR(D₂O) δ:

1,24(3H,d,J=7,0Hz), 1,31(3H,d,J=7,0Hz), l,79(lH,m), 2,15-2,40(2H,m), 2,79(3H,s), 2,86(lH,s),

3,30-3,55(4H,m), 3,60-4,10(5H,m), 4,20-4,35(2H,m) ^uVÁ_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( £=7700)

Příklad 26

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-methyl)propylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-kárbapen-2-em-3-karbóxylové kyseliny

1)

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-2-[ (2R,4S)-2-[2-methyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (280 mg, výtěžek 83 %) se získá z (2S,4S)-4-acetylthio-2-[2-methyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 21 (220 mg, 0,383 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6 -[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (230 mg, 0,387 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2970,1770,1705,1610,1520,1345,1210,

1105,850,740

NMR(CDC1₃) 5:

1,27(3H,d,J=7,0Hz), 1,37(9H,d,J=6,0Hz),

1,50-2,30(4H,m), 2,68(lH,m), 3,30(3H,m),

3,45-3,75(lH,m), 3,90-4,20(2H,m), 4,27(2H,m)

5,00-5,60(6H, m) , 6,26(1H,br s), 7,50(4H,d,J=8,0Hz),

7,65(2H,d,J=9,OHz), 8,15-8,30(6H,m)

2)

HCI

Sloučenina uvedená v názvu (52 mg, výtěžek 42 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (260 mg, 0,297 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr )cm^_1: 34 20,29.70,1760,1585,1395,1290., 1265,1180,1150 NMR(D₂0) δ:

1,24(3H,d,J=7,0Hz), 1,31(3H,d,J=6,0Hz), l,42(3H,s), l,44(3H,s), l,63(lH,m), 2,05-2,25(2H,m), 2,81(lH,m), 3,24(lH,m), 3,39(lH,m), 3,51(lH,m), 3,70(lH,m) 3,92(lH,m), 4,25(2H,m)

Uv\_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( £=9000)

Příklad 27

Mmonohydrochlorid (IR, 5S, 6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-2-[ (2R,4S)-2-[2-methy1-2-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-2-[(2R,4S)-2-[2-methyl-2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (270 mg, výtěžek 66 %) se získá z (2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-methyl-2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbony1pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 22 (270 mg,

0,459 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu (300 mg, 0,505 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2. IČ(KBr)cm^-1: 3450,2960,1770,1700,1605,1520,1340,1205,

1120,850,735

NMR(CDC1₃) 6:

1,25 ( 3H , d , J=7,OHz), 1,3 7(3H,d,J=6 , OHz ),-!-, 44 ( 6H , br S ) ,----1,60-2,00(3H,m), 2,32(lH,m), 2,47(lH,m) 2,97(3H,s), 3,17(lH,m), 3,25-3,45(2H,m), 3,51(lH,m), 3,90-4,20(2H,m) 4,25(2H,m), 5,10-5,60(6H,m), 7,51(4H,d,J=9,OHŽ),

7,66(2H,d,J=9,OHz), 8,22(6H,d,J=9,OHz)

Sloučenina uvedená v názvu (70 mg, výtěžek 53 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (270 mg, 0,303 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2970,1760,1590,1390,1260,1145

NMR(D₂O) 5:

1,26(3H,d,J=7,OHz) , 1,33(3H,d,J=6,OHz), l,43(3H,s) l,47(3H,s), l,81(lH,m), 2,24(1H,dd,J=8,0, 14,OHz),

2,36(1H,dd,J=5,0,14,OHz), 2,71(3H,s), 2,94(lH,m),

3,30-3,50(2H,m), 3,52(1H,dd,J=3,0, 6,OHz)

3,68(lH,dd,J=7,0, 12,OHz), 3,87(lH,m), 4,06(lH,m), 4,29(2H,m) ^max^⁰'¹¹^ MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299nm( £=9500)

Příklad 28

Monohydrochlorid (IR, 5.S, 6S )-2-( ( 2R, 4S)-2-{3-aminc=3=methyl) butylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l -karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

p-nitrobenzy1 (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-2-[(2R,4S)-2-[3-methyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)buty1]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (300 mg, výtěžek 86 %) se získá z (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-methyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)butyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 23 (230 mg,

0,391 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (lR)-l-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (260 mg, 0,437 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2 IČ(KBr)cm'¹: 3420,2970,1770,1705,1605,1520,1400,1345,1260,

1210,1140,1105,850,735

NMR(CDC1₃) 5:

l,27(9H,d,J=7,0Hz), 1,36(3H,d,J=6,0Hz) ,

1,40-2,20(6H,m), 2,52(lH,m), 3,20-3,50(3H,m)

3,57(lH,m), 3,80-4,20(2H,m), 4,26(2H,m),

4,69 & 4,80(totál. 1H,každý br s), 5,05-5,60(6H,m)

7,50(4H,d,J=8,OHZ), 7,64(2H,d,J=9,0Hz), 8,15-8,30(6H,m)

Sloučenina uvedená v názvu (45 mg, výtěžek 31 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (300 mg, 0,337 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

-IČ(KBr)cm^-1: 3420,2970,1755,1580,1450,1390,1285,1260,1145 NMR(D₂O) δ:

1,26(3H,d,J=7,ΟΗζ), 1,33(3Η,d,J=7,ΟΗζ) , l,41(6H,s),

1,70-1,90(3Η,m), 1,90-2,10(2Η,m), 2,34(lH,m),

3,30-3,55(3Η,m), 3,65-3,85(2Η,m), 4,07(lH,m), 4,29(2H,m)

UVÁ_max(O,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm( 6=10400)

Příklad 29

Diastereomer A (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(l-aminomethyl-3-hydroxý) propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-2-[(2S,4S)-2-[3-hydroxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (366 mg, výtěžek 65 %) se získá z diastereomeru B (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-l- (p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 24-5 (374 mg, 0,63 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-ι (IR)-l-nydroxyethyl j-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (339 mg, 0,57 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČfKBrjcm“¹: 3400,2920,1770,1700,1600,1520,1340,1200,

1130,1100,-845,730

NMR(CDC1₃) δ:

1,26(3H,d,J=7,3Hz), 1,36(3H,d,J=6,3Hz), l,46(lH,m) l,72(2H,m), 2,10(lH,m), 2,53 (lH,m) , 3,05( lH,m).,

3,15(lH,m), 3,29(2H,m), 3,51(2H,m), 3,75 ( 2H , m).,

4,00-4,30(4H,m), 5,20(5H,m), 5,49(1H,d,J=13,5HZ), 6,04(lH,br s), 7,51(4H,d,J=8,6Hz), 7,65(2H,d,J=8,9Hz), 8,21(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (79,6 mg, výtěžek 48 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (366 mg, 0,41 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2960,1750,1600,1390,1050

NMR(D₂O) δ:

1,22(3H,d,J=6,9Hz), 1,30(3H,d,J=6,6Hz), l,48(lH,m), l,65(lH,m), l,77(lH,m), l,94(lH,m), 2,57(1H,ddd,J=8,3, 8,3, 13,5Hz), 2,90(lH,dd,J=4,6, 11,9Hz), 3,12(2H,d,J=5,9Hz),

3,20-3,40(4H,m), 3,71(3H,m), 4,23(2H,m)

UvX_max(o,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 300nm( £.=9140)

Příklad 30

Diastereomer A monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-(2-aminoethyl)-3-hydroxypropyl)pyrrolidin-4-ylthio)-6-((IR)-l-hydroxyethyl)-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Diastereomer A p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ] -2-f (2S,4S)-2-[3-hydroxy-1-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylami87

-------------noethyl) propy 1 j -N-( p-ni trobenzy loxykarbony lpyrrol idin-4-ylthio ]

-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,29 g, výtěžek 75 %) se získá z diastereomeru A (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-1—( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl)propy 1 ]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 25-6 (1,13 g, 1,87 mmol) a p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,11 g, 1,87 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2940,1770,1700,1605,1520,1345,1205,

1140,1110,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

l,27(3H,d,J=7,3Hz), 1,37(3H,d,J=6,2Hz), 1,40l,70(4H,m), l,81(lH,d,J=4,6Hz) , 2,40(2H,m), 3,103,30 ( 4H,m) ,· 3,37 (lH,m) , 3,50(lH,m), 3,71(2H,m), 4,13(2H,m), 4,25(2H,m), 5,01(lH,br mj, 5,20(5H,m),

5,51(1H,d,J=13,9Hz), 7,50(4H,m), 7,81(2H,d,J=8,6Hz),

2)

HC!

Sloučenina uvedená v názvu (373 mg, výtěžek 58 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,29 g, 1,42 mmol) stejným způsobem jako v pxiklodu zz—z.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1760,1580,1390

NMR(D₂0) δ:

l,23(3H,d,J=7,3Hz), 1,30(3H,d,J=6,6Hz), 1,702,00(5H,m), 2,09(lH,m), 2,79(lH,m), 3,09(2H,m),

3,48(1Ή,dd,J=2,6, 6,3Hz), 3,60-3,80(4H,m), 4,24(2H,m)

3,37(2H,m) 4,04(lH,m) ^uv^max(°'^{1M M0PS} tlumivý roztok, pH7,0): 298nm

Příklad 31

Diastereomer B monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[l-(2-aminoethyl)-3-hydroxypropyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(1R)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ] -2- [(2S,4S)-2-[3-hydroxy-l-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (442 mg, výtěžek 49 %) se získá z diastereomeru B (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-l-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 25-6 (423 mg, 0,70 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (416 mg, 0,70 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2940,1770,1700,1610,1520,1400,1350,1210,

1140,1110,1050,850,740

NMR(CDC1₃) S:

l,25(3H,d,J=7,6Hz), 1,36(3H,d,J=6,3Hz), 1,40l,70(4H,m),

3,40(5H,m),

4,25(2H,m),

7,65(2H,d,J=8,9Hz), 8,21(6H,m) l,89(lH,m), 2,41(2H,m), 3,103,56(lH,m), 3,62(2H,m), 4,ll(2H,m), 5,23(5H,m), 5,50(lH,d,J=13,5Hz), 7,53(4H,m

2)

Sloučenina uvedená v názvu (102 mg, výtěžek 47 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (442 mg, 0,487 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1760,1590,1390,1040

NMR(D₂O) δ:

1,23(3H,d,J=7,3Hz), 1,29(3H,d,J=6,3Hz), 1,701,90(5H,m), 2,08(1H,m), 2,77(lH,m), 3,0-3,4(4H,m),

3,48(lH,dd,J=2,6, 5,9Hz), 3,60-3,80(4H,m),

4,04(lH,m), 4,23(2H,m) υνλ^χίΟ,ΙΜ MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299nm (£=8300)

Příklad 32

Diastereomer B (IR,5S,6S)-6-((IR)-1-hydroxyethy 1 ] — 2— [ ( 2S, 4S)-2-( 3-hydroxy-l-(N-methylaminomethyl)propyl ]pyrrolidin-4-ylthio]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kys.eliny

1)

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-2- ( ( 2S , 4S )-2-( 3-hydroxy-l- (N-methyl-N-p-nitrobenzyl oxykarbonylaminomethyl) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio ] -1-methyl- 1-karbapen-2-em- 3-karboxylátů (165 mg, výtěžek 64 %) se získá z diastereomeru B (2S,4S)-490

-acetylthio-2-[3-hydroxy-1-(N-methy1-N-p-nitro-benzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonypyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 26-6 (172 mg, 0,28 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (152 mg, 0,26 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,2880,1770,1700,1605,1520,1345,1200,

1140,1105,1050,850,740

NMR(CDC1₃) S:

1,27(3H,d,J=4,7Hz), 1,37(3H,d,J=6,3Hz), 1,50l,80(4H,m), 2,60-3,70(7H,m), 3,01(3H,br s),

3,27(2H,dd,J=2,6, 6,9Hz), 4,05(2H,m), 4,ll(2H,m)

5,21(4H,s), 5,24(1H,d,J=13,9Hz), 5,5O(lH,d,J=13,6Hz),

7,51(4H,d,J=8,3Hz), 7,65(2H,d,J=8,9Hz), 8,22(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (37 mg, výtěžek 49 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (165 mg, 0,18 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

ÍČ(KBr)cm^_1: 3396,2968,1749,1589,1462,1392,1290,1265,1184, 1149,1074,1045,941,814,771

NMR(D₂O) δ:

1,23(3H,d,J=7,4Hz), 1,31(3H,d,J=6,4Hz), l,50(2H,m) l,75(lH,m), l,96(lH,m), 2,56(lH,m), 2,72(3H,s), 2,82(lH,dd, J=5,l, 11,8Hz), 3,12(2H,m), 3.,31(2H,m), 3,45(2H,m), 3,68(3H,m), 4,25(2H,m)

UVA _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 300nm( 6=9140)

Příklad 33

Diastereomer A monohydrochloridu ( IR, 5S,6S)- 2- [(2R,4S)-2-(3-amino-2-hydroxypropyl )pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (1R)-1-hydroxyethyl ]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1) ....

Diastereomer A (2R,4S)-2-(2-acetoxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl) -4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (806 mg, 1,3 mmol) se rozpustí v dioxanu (2,4 ml) a k roztoku se přidá 5,5 N roztok kyseliny chlorovodíkové v methanolu (2,4 mmol). Směs se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti 3 hodiny. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a opět se rozpustí přidáním dioxanu (2 ml) a ethanolu (2 ml). Roztok se opět zahustí ve vakuu přičemž se odstraní přebytek kyseliny chlorovodíkové. Opakováním postupu se zcela odstraní kyselina chlorovodíková a získá se surový thiol.

Tento surový thiol se nechá reagovat za stejných podmínek jako v příkladu 1-2 s p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6- [ (IR) -l-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátem (773 mg, 1,3 mmol), přičemž se získá diastereomer A p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-2-[ ( 2R,4S )-2-( 2-hydroxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (638 mg, výtěžek 56 %) jako hlavní produkt a diastereomer A p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2- [ ( 2R, 4S) -2- ( 2-acetoxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl) -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydro xyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (137 mg, výtěžek 15 %)'jako vedlejší produkt.

Hlavní produkt:

IČ(KBr)cm^-1: 3437,2939,1763,1705,1606,1520,1433,1404,1346,

1275,1209,1140,1109,852,739

NMR(CDC1₃) δ:

l,28(3H,d,J=7,5Hz), 1,38(3H,d,J=6,4Hz), 2,ll(lH,m) 2,63(lH,m), 3,15(lH,m), 3,29(4H,m), 3,64(lH,m), 3,78(lH,m)

4,00-4,20(2H,m) , 4,28(2H,m), 5,20(2H,s),

5,21(2»,s), 5,23(1H,d,J=ll,1Hz), 5,35(lH,br m), 5,5O(lH,d,J=12,9Hz), 7,50(4H,d,J=8,8Hz), 7,65(2H,d,J=8,6Hz), 8,20(6H,m)

Vedlejší produkt:

IČ(KBr)cm^-1: 3421,1770,1731,1709,1606,1522,1429,1348,

1236,1141,1109,1014,852,739

NMR(CDC1₃) δ:

1,27(3H,d,J=7,2Hz), 1,36(3H,d,J=6,4Hz), l,76(4H,m) 2,O3(3H,S), 2,63(lH,m), 3,32(5H,m), 3,62(5H,m), 3,62(lH,m) 4,02(2H,ra), 4,27(2H,m), 5,01(1H,br m),

5,20(4H,s), 5,24 (1H, d , J=13,9Hz ) , 5,50 (1H, d, J=13 ,. 9Hz ) , 7,49(4H,m) 7,64(2H,d,J=8,8Hz), 8,19(6H,m)

2)

Sloučenina uvedená v názvu (200 mg, výtěžek 65 %) se získá z výše uvedeného hlavního produktu (638 mg, 0,725 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2968,1749,1589,1396,1288,1182,1045

NMR(D₂0) δ:

1,22(3H,d,J=7,3Hz), 1,29(3H,d,J=6,4Hz), l,75(lH,m) 2,03(2H,m), 2,83(lH,m), 3,02(lH,dd,J=4,5, 8,6Hz),

3,19(lH,dd,J=3,2, 13,3Hz), 3,4O(3H,m), 3,70(lH,m), 3,90(lH,m), 4,.03(2»,m), 4,22(2H,m)

UVλ (0,ÍM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298nm( 6=7400)

----- Příklad 3 4----------— * *'

Diastereomer B monohydrochloridu (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-2-hydroxypropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (1R)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

HO

ΝΗΡΝΣ

COOPNB

PNZ

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-2-[(2R,4S)-2-(2-hydroxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl)-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (154 mg, výtěžek 52 %) se získá z diastereomeru B (2R,4S)-2-(2-acetoxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl)-4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl pyrrolidinu (207 mg, 0,335 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (199 mg, 0,335 mmol) stejným postupem jako v příkladu 33-1.

IČÍKBrJcm”¹: 3438,1770,1705,1606,1520,1346,1211,

1140,1109,852,739

2)

Sloučenina uvedená v názvu (40 mg, výtěžek 54 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (154 mg, 0,175 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3385,1757,1633,1574,1392,1261,1153,1068,781 NMR(D₂0) δ:

1,27(3H,d,J=7,3Hz), 1,34(3H,d,J=6,4Hz), l,84(lH,m), 2,06(lH,m), 2,19(lH,m), 2,87(lH,m), 3,04(1H,dd,J=9,4 , 13,1Hz), 3,23(lH,dd,J=3,1, 13,1Hz), 3,44(2H,m),

3,52(1H,dd,J=2,7, 16,1Hz), 3,71(1H,dd,J=7,0, 12,5Hz), 3,97(lH,m), 4,10(2H,m), 4,29(2H,m) ' UVÁ _max(0,IM ^M0PS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm(£=8930)

Příklad 35

Diastereomer A (lR,5S,6S)-2-[ (2R,4S)-2-(2-acetoxy-3-aminopropyl ]pyrrolidin-4-ylthio ]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

l)

Sloučenina uvedená v názvu (33 mg, výtěžek 41 %) se získá z diastereomeru A p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-acetoxy-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaminopropyl)-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu, vedlejšího produktu připraveném v příkladu 33-1 (137 mg, 0,183 mmol),

- ' stejným-způsobem-jako- -v—příkladu 1-3 .--------------------- -------------------------IČ(KBr)cm^-1: 3385,2970,1755,1633,1539,1392/1290,1182,1147,1109 NMR(D₂0) δ:

1,21(3H,d,J=7,3HŽ), ϊ,28(3H,d,J=6,1Hz), 1,70(1H,m),' l,96(2H,m), 2,01(3H,s), 2,78(lH,m), 3,20-3,40(4H,m), 3,15(lH,m), 3,71(2H,m), 3,98(lH,m), 4,23(2H,m)

UvA_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm(£=8820 )

Příklad 36

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(lR)-l-hydroxy-3-N-methylaminopyl ]pyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

Sloučenina připravená v referenčním příkladu 27-3 (664 mg, 2,52 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (1,35 g, 2,27 mmol) se suspendují v

N,N-dimethylformamidu (15 ml) a poté se přidá za chlazení ledem a pod atmosférou dusíku N,N-diisopropylethylamin (0,88 ml, 5,04 mmol). Směs se míchá 3 hodiny při 5 ’C. K reakční směsi se přidá 0,25 M MOPS tlumivý roztok (pH 7,0, 50 ml), tetrahydrofuran (50 ml), ethanol (12 ml) a 10% katalyzátor palládium-uhlík (300 mg) a směs se míchá pod atmosférickým tlakem vodíku při teplotě místnosti 2 hodiny. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se promyje směsí methylenchloridu a methanolu. Malé množství nerozpustného zbytku se odfiltruje a zbytek se zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na neiontové pryskyřici (HP-2O^R, Mitsubishi Kasei Corp., eluováno 30% vodným methanolem), přičemž se získá žádaná frakce', která se zahustí ve vakuu a po úpravě pH kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 5,0 a lyofilizací se získá žádaná sloučenina uvedená v názvu (660 mg, výtěžek 66 %). Fyzikálně-chemická data sloučeniny souhlasí s daty získanými u sloučeniny v příkladu 19.

Příklad 37

Diastereomer A monohydrochloridu (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-aminopropyl)pyrrolidin-4-ylthioJ-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1- *

-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

PNZ

Diastereomer A p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2R,4S) — 2 — [(2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-(nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (2,04 g, výtěžek 99,8 %) se získá z diastereomeru A (2S,4S)-4-acetylthio-2-[2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 28 (1,33 g,

2,37 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,41 g, 2,37 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3400,1770,1700,1610,1520,1200,1100,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

1,26(6H,d,J=6,9HZ), 1,37(3H,d,J=6,3Hz), l,73(2H,m) , 14 (lH,br m) , 2,56(lH,m), 3,28(3H,m), 3,54(lH,m),

3,73 ( lH,m) , 4,00.( 2H,m) , 4,25(2H,m), 5,15(2H,s),

5,20(2H,s), 5,23(lH,d,J=13,8Hz), 5,50(1H,d,J=13,8Hz),

7,49(4H,d,J=8,6Hz), 7,65(2H,d,J=8,9HZ), 8,21( 6Ή,d,J=8,6HZ)

2)-----------------------------,-----

Sloučenina uvedená v názvu (456 mg, výtěžek 47 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (2,04 g, 2,36 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 22-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,1760,1580,1390

NMR(D₂O) δ:

1,18(3H,d,J=7,3Hz), 1,25(3H,d,J=6,27Hz),

1,33(3H,d,J=7,4Hz), l,71(lH,m), 2,17(2H,m), 2,78(lH,m), 3,18-3,51(3H,m), 3,67(lH,m), 3,8l(lH,m), 4,01(lH,m), 4,21(2H,m)

UvA _max(o,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm( 8.=8890)

Příklad 38

Diastereomer B monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-aminopropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny.

1)

PNZ

Diastereomer B p-nitrobenzyl (IR, 5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxy ethyl ]-l-methyl-2-[ ( 2R,4S)-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)-2.r[ 2- (p-ni trobenzyloxykarbony lamino) propy 1 ] pyrrolidin-4-ylthio ] -1 -karbapen-2-em-3-karboxylátu (239 mg, výtěžek 62 %) se získá diástereomeru B (2S,4S)-4-acetylthip-N.-(p-nitrobenzyloxykarbonyl )-2-(2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propylJpyrro98 olidinu připraveném v referenčním příkladu 29 (250 mg,

0,44 mmol) a p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu (265 mg, 0,44 mmol) stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3410,1770,1700,1610,1520,1350,1200,1100,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

1,19(3H,d,J=6,3Hz), 1,27(3H,d,J=7,3Hz),

1,37(3H,d,J=6,3Hz,), 1,70-2,20(3H,m), 2,71(lH,m), 3,28(3H,m), 3,61(2H,m), 3,94(2H,m), 4,24(2H,m),

5,17(2H,s), 5,22(2H,S), 5,23(1H,d,J=13,5Hz),

5,51(1H,d,J=13,5Hz), 7,51(4H,d,J=8,9Hz),

7,65(2H,d,J=8,6Hz), 8,21(6H,m)

Sloučenina uvedená v názvu (65 mg, výtěžek 58 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (239 mg, 0,277 mmol) stejným způsobem jako v- příkladu 22-2.

IČ(KBř)cm^-1: 3400,1760,1580,1400,1180,1040

NMR(D₂O) δ:

1,26(3H,d,J=6,9HZ), 1,33(3H,d,J=6,3Hz),

1,43(3H,d,J=6,6Hz), l,82(lH,m), 2,10-2,40(3H,m), 2,90(2H,m), 3,05(2H,m), 3,30-3,60(3H,m), 3,72(lH,m),

3,90(lH,m), 4,10(lH,m), 4,28(2H,m)

UvA_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 299 nm( 6=6940)

Příklad 39

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-N-methylaminobutyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-199

-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy1ové kyseli ny 1)

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[3-(N-methy1-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) butyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbo-‘ nylpyrrolidin-4-ylthio ] -6-[ (IR) -1-hydroxyethyl ] -1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (1,45 g, výtěžek 70 %) se získá ze sloučeniny připravené v referenčním příkladu 30 (1,2 g, 2,33 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2960,1770,1700,1605

NMR(CDC1₃) S:

l,10(3H,br d), l,25(3H,d,J=7,0Hz) ,

1,35(3H,d,J=6,0Hz,), 1,60-1,80(2H,m) , 2,50(lH,m), 2,75(3H,s), 3,20-3,40(2H,m), 3,55(lH,m), 3,95(lH,m), 4,25(2H,m), 5,20-5,50(6H,m), 7,50(4H,d.J=8,OHz),

7,6 2(2H,d,J=8,0Hz), 8,20(6H,d,J=8,OHz)

2)

» JZ-* I

r.Vi

Sloučenina uvedená v názvu (200 mg, výtěžek 28,3 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,45 g, 1,63 mmol) stejným způsobem.jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3440,2960,1760,1700

ŇMR(D₂O) δ:

l,20(3H,d,J=7,0Hz), 1,25(3H,d,J=7,OHz) ,

100 l,70(3H,d,J=7,0Hz), 1,60-1,80(2H,m), 1,80-2,00(3H,m), 2,65(3H,s), 2,63(lH,m), 3,30-3,45( 3H,m) , 3,70(lH,m), 4,00(lH,m), 4,20(lH,m) υνλ _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm(6=8230)

Příklad 40

Monohydrochlorid (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(2-fluor-3-N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[2-fluor-3-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyěthyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (192 mg, výtěžek kvantitativní) se získá ze sloučeniny připravené v referenčním příkladu 31 (133 mg, 0,22 mmol) stejným způsobem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^_1: 3440,2960,1770,1700

NMR(CDC1₃) δ:

1,22(3H,d,J=7,0Hz), 1,35(3H,d,J=7,0Hz),

1,60-1,80(3H,m), 2,60(lH,m), 2,90-3,00(1H,m), 3,05(3H,s),

3,25-3,65(3H,m), 4,25(2H,m), 4,60-5,00(1H,m), 5,205,50(6H,m), 7,50(2H,d,J=8,0Hz), 7,68(2H,d,J=8,0Hz)

8,25(6H,d,J=8,0Hz)

2)

101

Sloučenina uvedená v názvu (27 mg, výtěžek 28,4 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (190 mg, 0,22 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2960,1750,1600

NMR(D₂O) δ:

1,15(3H,d,J=7,0Hz), 1,25(3H,d,J=7,OHZ) , l,70(lH,m), 2,10-2,30 (2H,m), 2,70(3H,s), 2,803,00(lH,m), 3,20-3,50(4H,m), 3,60(lH,m), 3,95(lH,m), 4,20(lH,m), 4,90-5,20(1H,m)

UVλ _max(0,1M MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm( £=8500)

Sloučeniny v příkladech 41 až 43 byly získány stejným postupem jako v příkladu 18.

Příklad 41

Monohydrochlorid (IR, 5S, 6S)-2-[ (2R,4S)-2-[ (l-methyl-3-N-me thy lamino) propyl ] pyrrolidin-4^ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxy ethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2970,1750,1595,1395

NMR(D₂O) 5:

1,08(3H,d,J=7,0Hz), l,17(3H,d,J=7,0Hz) , l,24(3H,d,J=7,0Hz.) , 1,60-1,75( 1H ,m) , 2,20-2,3 5 (1H ,m) • 2,60-2,80 ( 4H , m.) , 2,80-3,60(7H,m), 3,85-4,00 (1H, m)

4,15-4,25(2H,m)

W>W* et ' 102

UvA_max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0 ) : 299 nm( £=10590)

Příklad 42

Diastereomer A monohydrochloridu (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(1-aminomethyl )ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2970,1760,1590,1390

NMR(D₂O) δ:

1,15-1,20(6H,m), 1,25(3H,d,J=7,0Hz), 1,65-1,80(lH,m)

2,10-2,30(2H,m), 2,70-3,00(3H,m), 3,10-3,70(4H,m)

3,90-4,10(lH,m), 4,15-4,25(2H,m) υνλ _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm(£. =6600)

Příklad 43

Diastereomer B monohydrochloridu (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2- (1-aminomethyl)ethylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

- ^H Me ’ HCI

IČ(KBr)Cm^-1: 3420,2970,1760,1585,1390 NMR(Ď₂O) δ:

1,10(3H,d,J=7,OHz), 1,18(3H,d,J=7,OHz),

1,25(3H,d,J=7,0Hz) ,1,6 5-1,80(1H,m) , 2,20-2,30(1H,m) ,

103

----2,60-2,80(1H,m) , 2,80-3,00(1H,m) , 3,18 ( 1Η , dd ,'J=4,00 , '

13,0Ηζ), 3,25-3,60(5Η,m), 3,35-4,00(1Η,m), 4,154,25(2H,m) ^UV^max^°'^{1M M0PS} tlumivý roztok, pH7,0 ) : 299 nm(£=8840)

Příklad 44

Monohydrochlorid (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(IR)-3-N,N-dimethylamino-l-hydroxypropyl ]pyrrolidin-4-ylthio ]-6-[ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l--methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové kyseliny

1)

•N

Me

Me p-nitrobenzyl (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(lR)-3-(N,N-dimethylamino-l-hydroxypropyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (3,3 g, výtěžek 96 %) se získá ze sloučeniny připravené v referenčním příkladu 34-5 (3,7 g, 5,7 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 3-1.

IČ(KBr)cm^-1: 3370,1770,1702,1590,1455,1345

NMR(CDC1₃) S:

1,10-1,40(6H,m), 3,70(3K,m), 3,80 6,90-7,70(12H,m)

1,50-2,40(5H,m) , 2,55(6H,s), 2,804,10(2H,m), 4,25(lH,m), 5,10-5,50(4H,m),

8,10-8,30(2H,m)

COOH

2)

104

Sloučenina uvedená v názvu (154 mg, výtěžek 27 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1 g, 1,4 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1S-2.

IČ(KBr)cm^_1: 1785,1590,1490,1250,1090

NMR(D₂O) δ:

l,34(3H,d,J=7,4Hz), 1>41(3H,d,J=6,4Hz), 1,802,20(3H,m), 2,60-2,80(lH,m), 3,02(6H,s), 3,203,90(8H,m), 4,00-4,20(2H,m), 4,30-4,40(2H,m),

UVA _max(0,1M MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298' nm( £ =5340 )

Referenční příklad 1 (2S,4S)-4-acetylthio-2-[2-karbamoyl-N-(p-nitrobenzyloxykarbony laminomethy 1 )ethyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin

Ledem chlazený roztok (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terč.butoxykarbonyl-2-[(2-ethoxykarbonyl-l-nitromethyl)ethyl]pyrrolidinu (5 g, 11,99 mmol) v methanolu (100 ml) se nasytí amoniakem. Po uzavření lahve se roztok nechá stát při teplotě místnosti 1 týden. Poté se odpaří ve vakuu methanol a ke zbytku se přidá ethylacetát (150 ml). Organická vrstva se promyje postupně vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté se suší přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií ría silikagelu (chloroform : methanol = 1 : 100), přičemž se získá (2S,4R)-4-terc;butyldimethylsiloxy-N-terc.- . butoxykarbonyl-2-[(2-karbamoyl-l-nitromethyl)ethyl]pyrrolidin (3,44 g, výtěžek 72,6 %).

105

IČ (KB r) cm ~¹:-------3 3 0 0 ,17 50,17 0 0,1560,1380---------- ----------------NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,S6(9H,s), l,48(9H,s), 1,60-1,90(4H,m), 1,95-2,50(2H,m), 3,10(2H,m), 3,50(1H,br),

4,10-4,60(3H,m), 5,50-6,00(2H,br)

2)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (3,1 g, 7,1 mmol) v methanolu (100 ml) se přidá Raney Ni (W-2, 3,1 g) a směs se míchá přes noc pod atmosférou vodíku (3 kg/cm²). Poté se odfiltruje katalyzátor a filtrát se zahustí ve vakuu, přičemž se získá ( 2S,4R)-2-(l-aminomethyl-2-karbamoyl)ethyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin jako surový olej (2,43 g, výtěžek 81,6 %).

3)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (2,42 g, 6,04 mmol) ve směsi dioxanu (30 ml) a vody (30 ml) se přidá 4,6—dimethyl—2· -(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (2,11 g, 6,64 mmol) za udržování pH na hodnotě 8 triethylaminem a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. K reakčni směsi se přidá ethylacetát (150 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou, 1 N vodnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným hydrógenuhličitanem sodným a nasyceným vodným chloridem sodným. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve

106 vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform : methanol = 100 : 1), přičemž se získá (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[2-karbamoyl-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)ethylJpyrrolidin (2,05 g, výtěžek 63,3 %) .

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1700,1520,1390

NMR(CDC1₃) 5:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,48(9H,s), 1,60-2,40(6H,m),

2,90-3,80(4H,m), 3,30-4,40(2H,m), 5,20(2H,br), 5,50(2H,br), 5,80(2H,br), 7,50(2H,d,J=9,0Hz),

8,20(2H,d,J=9,0Hz)

4)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (2,1 g, 3,91 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá 2,5 N roztok kyseliny chlorovodíkové v methanolu (5,1 ml) a roztok se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a získaný prášek se rozpustí v dioxanu (50 ml) a vodě (50 ml).

K roztoku se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (1,25 g, 4 mmol), pH roztoku se udržuje triethylaminem na hodnotě 8 a roztok se míchá 6 hodin při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidá ethylacetát (100 ml) a organická vrstva se promyje vodou (50 ml). Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform : methanol =20 : 1), přičemž se získá (2S,4R)-2- [ 2-karbanoyl-l- (p-nitrobenzy.loxykarbony laminomethyl) ethyl]-4-hydroxy-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (1,53 g, výtěžek 85,65 %).

107 _________ IČ(KBr) cm¹: . 3 4.0 0,16 9 O , 15 20,13 45,1110,86O____________ nmr(cdci₃) 5:

1,70-2,80(6H,m), 3,20-3,60(2H,m), 3,80(lH,m),

4,00-4,50(2H,m), 5,20(4H,m), 6,10(2H,br),

7,50(4H,d,J=9,OHz) , 8,20(4H,d,J=9,OHz)

K leden chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (1,5 g, 2,77 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá pod atmosférou dusíku triethylamin (0,77 ml, 5,54 mmol) a methansulf onylchlorid (0,43 ml, 5,54 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a přidá se ethylacetát (100 ml). Organická vrstva se postupně promyje 1 N vodnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté se suší přes bezvodý síran hořečnatý. Po filtraci se filtrát zahustí a získá se (2S, 4R) -2- [ 2-karbamoyl-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) ethyl ]-4-methansulfonyloxy-N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl )pyrrolidin (1,72 g, výtěžek 97,9 %) .

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1700,1605,1520,1350,1170,905

NMR(CDC1₃) δ:

1.90- 2,60(6H,m), 3,10(3H, s ) , 3,30-3,70(2K,m),

3.90- 4,40(3H,m), 5,30(4H,m), 6,10(2H,br),

7,50(4H,d,J=9,0Hz), 8,20(4H,d,J=9,OHz)

6)

108

AcS

PNZ conh₂

NHPNZ

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,7 g, 2,75 mmol) v

N,N-dimethylformamidu (20 ml) se přidá thioacetát draselný (627 mg, 5,5 mmol) a jodid sodný (412 mg, 2,75 mmol) a směs se míchá 4 hodiny při teplotě 60 až 70 °C. K reakční směsi se přidá ethylacetát (200 ml) a organická vrstva se postupně promyje 1 N vodnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Vznikající zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform : methanol =80 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (1,04 g, výtěžek 63,6 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1700,1605,1520,1400,1345

NMR(CDC1₃) δ:............

1,80-2,30(6H,m), 2,30(3H,s), 3,20-3,60(2H,m),

3,70-4,50(3H,m), 5,20(4H,br), 6,30(2H,br),

7,50(4H,d,J=9,0Hz), 8,15(4H,d,J=9,0Hz)

Referenční příklad 2 (2S,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-2-karbamoyl)ethyl-4-trifenylmethylthiopyrrolidin 1) •COOMe i rS

109 __________K ledem.chlazené suspenzi .hydr idusodného (60 %, olejová suspenze, 300 mg, 7,5 mmol) v N,N-dimethylformamidu (15 ml) se přidá pod atmosférou dusíku po kapkách dimethylmalonát (0,92 ml, 8,05 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 30 minut. K směsi se přidá roztok (2S,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-jodmethyl-4-trifenylmethylthiopyrrolidinu (2,85 g, 5 mmol) v N, N-dimethylf ormamidu (10 ml) a směs se míchá 30 minut za chlazení ledem, 1 hodinu při teplotě místnosti a 6 hodin při teplotě 60 C. Reakční směs se vlije do směsi vody (30 ml) a 1 N vodného roztoku hydrogensíranu draselného (30 ml) a extrahuje se ethylacetátem (1 x 100 ml, 2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupné promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát), přičemž se získá (2S,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-[2,2-bis(methoxykarbonyl) ethyl ]-4-trif eny lmethylthiopyrrolidin (2,59 g, výtěžek 90 %)

IČ(KBr)cm^_1: 3450,2960,1760,1740,1705,1495,1450,1410,1200,

750,705

NMR(CDC1₃) δ:

l,30-l,50(lH,m), 1,90-2,50(3H,m) , 2,50-3,00(3H,m),

3,25-3,60(2H,m), 3,71(3H,s), 3,72(3H,s), 4,30-4,55(2H,m),

5,15-5,31(2H,m), 5,75-6,00(1H,m), 7,10-7,60(15H,m)

2)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (1,15 g, 2,12 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá po kapkách 1 N vodný “roztok hydroxidu sodného (2,2 ml, 2,2 mmol) a roztok se míchá při téže teplotě 30 minut a poté 4 hodiny při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla se ke zbytku

110 přidá voda (20 ml) a vodná vrstva se promyje etherem. K vodné vrstvě se přidá za chlazení ledem 1 N vodný roztok ^kyseliny chlorovodíkové (2,2 ml, 2,2 mmol) a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (1 x 30 ml, 2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté suší přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surová karboxylové kyselina. K roztoku surové karboxylové kyseliny v benzenu (5 ml) se přidá triethylamin (0,25 ml, 1,79 mmol) a azid kyseliny difenylfosforečné (0,39 ml, 1,81 mmol). Směs se refluxuje 1 hodinu pod atmosférou dusíku, přidá se allylalkohol (0,13 ml, 1,91 mmol) a; směs se dále refluxuje 2 hodiny.

Poté se odpaří rozpouštědlo ve vakuu, ke zbytku se přidá ethylacetát (150 ml) a organická vrstva se promyje postupně 1 N hydrogensíranem draselným, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se zbytek zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-2-methoxykarbonylethyl)-4-trifenylmethylthiopyrrolidin (260 mg, výtěžek 29 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,1750,1700,1530,1445,1410,1200,745,700

NMR(CDC1₃) δ:

1,35-1,70(lH,m), 2,50-3,10(3H,m) , 4,30-4,65(4H,m),

5,70-6,10(3H,m),

1,70-2,00(lH,m) ,

3.10- 3,50(lH,m),

4.10- 4,30(lH,m), 7,15-7,60(15H,m)

2,00-2,45 (2H,m), 3,7O(3H,S),

5,10-5,40(4H,m)

)

111

Y^ztóku^vyše^ uvědeňe“ sloučeniny ( 230 mg, 0,374 mmol) v methanolu (2 ml) se přidá pod atmosférou vodíku 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (0,45 ml, 0,45 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Poté se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a ke zbytku se přidá voda (10 ml) a vodná vrstva se promyje etherem. K vodné vrstvě se přidá 1 N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,45 ml, 0,45 mmol) a extrahuje se ethylacetátem (1 x 20 ml, 2 x 10 ml). Spojené organické vrstvy se postupné promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surová karboxylové kyselina. K roztoku surové karboxylové kyseliny v tetrahydrofuranu (1,5 ml) se přidá při teplotě -30 °C pod. atmosférou dusíku triethylamin (0,05 ml, 0,359 mmol) a ethylchloruhličitan (0,035 ml, 0,366 ml) a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě. Ke směsi se přidá 28% vodný roztok amoniaku (0,4 ml) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě -20 °C a poté 1 hodinu při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se přidá voda (5 ml) a vodná vrsva se extrahuje chloroformem (3 x 10 ml). Spojené organické vrstvy se suší přes bezvodý síran hořečnatý a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (methanol-chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu (130 mg, výtěžek 72 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,3320,1680,1530,1450,1410,1340,1255,1200,

745,700 •ί* •<ř

NMR(CDC1₃) δ:

1,35-1,70(1H,m), 2,50-3,10(3H,m), 4,10-4,30(lH,m),

5,70-6,10(3H,m),

1,70-2,00(1H,m), 3,10-3,50(1H,m), 4,30-4,65(4H,m), 7,15-7,60(15H,m)

2,00-2,45 (2H,m),

3,7O(3H,S),

5,10-5,40(4H,m)

Referenční příklad 3 ( 2S , 4S)-4-acetylthio-N-allyloxykarbonyl-2-(l-acetamido-2-allyl

112 oxykarbonylamino)ethylpyrrolidin 1)

K roztoku (2S,4R)-N-butoxykarbonyl-2-vinyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (14,3 g, 47,5 mmol) a 4-methylmorfolin N-oxidu (8,8 g, 75 mmol) v acetonu (140 ml) a vodě (140 ml) se přidá 4% vodný oxid osmičelý (9,6 ml) a směs se míchá při téže teplotě přes noc. Poté se upraví pH reakční směsi na hodnotu 2 vodnou 6 N kyselinou chlorovodíkovou a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se suší přes bezvodý síran hořečnatý, zahustí se ve vakuu a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(l,2-dihydroxyethyl)pyrrolidin (16,7 g, výtěžek 105 %)

NMR(CDC1₃) δ: 0,08(6H,s), 3,40(2H,m),

0,88(9H,s), 3,58(3H,m), l,48(9H,s), 4,05(lH,m),

2,06(2H,m), 4,38(lH,m)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené surové sloučeniny (8,7 g, 26 mmol jako.čistá látka) v methylenchloridu (174 ml) se postupně přidá methansulfonylčhlorid (6,0 ml, 78 mmol) a triethylámin (16,2 ml; 117 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě. Směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se

113 zpracuje áTóupcovou chromatografií na silikagelu (600 ml, ethylacetát : hexan =1 : l), přičemž se získá (2S,4R)-N-terc. butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2-(l, 2-dimethansulfonyloxyethyl)pyrrolidin (9,5 g, výtěžek 74 %). NMR(CDC1₃) S:

0,05(6H,s), O,86(9H,S), l',46(9H,s), 2,00(2H,m),

3,06(3H,s), 3,08(3H,s), 3,34(2H,m), 4,12(lH,m), 4,40(lH,m) 5,42 (lH,m)

Směs výše uvedené sloučeniny (9,5 g, 19,3 mmol) a azidu sodného (8,72 g, 134 mmol) v dimethylsulf oxidu (95 ml) se míchá 1,5 hodiny při 100 °C. Po ochlazení se reakční směs zředí ethylacetátem (300 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou (100 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (50 ml). Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (400 ml, ethylacetát : hexan = : 5) á získá se (2S, 4R-N-terc. butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2-( i , 2-diazidoethylJpyrrolidin (4,54 g, výtěžek 61 %) .

NMR(CDC1₃) 5:

0,08(6H,s), 0,86(9H,s), l,48(9H,s), 3,10-3,90(5H,m) 4,22(lH,m), 4,38(lH,m)

4)

TBSO <·-

114

K roztoku výše uvedené sloučeniny (434 mg, 1,13 mmol) v methanolu (9 ml) se přidá katalyzátor 10% palladium-uhlík (90 mg) a směs se míchá 1 hodinu pod atmosférou vodíku při teplotě místnosti. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. K ledem chlazenému roztoku zbytku v methylenchloridu (20 ml) se přidá 2-allyloxykarbonylthio-4,6-dimethylpyrimidin (252 mg, 1,12 mmol) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Směs se zředí methylenchloridem (50 ml) a organická vrstva se postupně promyje 2 N vodným roztokem hydroxidu sodného (0,56 ml) a vodou (10 ml). Organická vrstva se suší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. K ledem chlazenému vzniklému zbytku v methylenchloridu (20 ml) se přidá acetylchlorid (96/xl, 1,35 mmol) a triethylamin (0,19 ml, 1,35 mmol) a směs se míchá 30 minut. Směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří a získá se (2S,4R)-2-(l-acetamido-2-allyloxykarbonylamino)ethyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin (210 mg, výtěžek 41 %).

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,48(9H,s), 1,70-2,20(2H,m), l,96(3H,s), 3-,18-3,40(3H,m) , 3,50(lH,m), 3,78(lH,m) 4,10(lH,m), 4,32(lH,m), 4,56(2H,d,J=6,0Hz)

5,18-5,20(2H,m), 5,90(lH,m)

Výše uvedená sloučenina (250 mg, 0,55 mmoD.se rozpustí ve směsi methylenchloridu a kyseliny trifluoroctové (1 : 1,5 ml) a roztok se nechá stát 10 minut při teplotě místnosti. Po

115 odpařeni rozpouštědla ve vakuu se k ledem chlazenému roztoku zbytku v methylenchloridu (5 ml) přidá roztok triethylaminu (0,38 ml, 2,75 mmol) a allylchloruhličitanu (0,17 ,ml, 1,65 mmol) v methylenchloridu (0,8 ml) a směs se míchá 30 minut. Směs se poté promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Po odpařeni rozpouštědla se získá (2S,4R)-2-(l-acetamido-2-allyloxykarbonylamíno)ethyl-N-allyloxykarbonyl-4-terc .butyldimethylsiloxypyrrolidin (326 mg).

NMR(CDC1₃) S:

O,O6(6H,S), 0,84(9H,s), l,94(3H,s), 1,80-2,20(2H,m), 3,32(2H,m), 3,62(lH,m), 3,84(lH,m), 4,10(2H,m), 4,40(lH,m), 4,58(4H,m),. 5,10-5,40(4H,m), 5,96(2H,m)

6)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (326 mg) v tetrahydrofuranu (6,0 ml) se přidá roztok 1 N tetra-n-butylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu (0,82 ml, 0,82 mmol) a směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakční smés se zředí ethylacetátem a organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Po odpaření rozpouštědla se přidá k ledem ochlazenému roztoku zbytku v methylenchloridu (6,0 ml) methansulfonylchlor.id (63^1, 0,32 mmol) a triethylamin (0,15 ml, 1,1 mmol) a smés se míchá 15 minut. Reakční smés se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší přes bezvodý síran hořečnatý. Po odpařeni rozpouštědla se vzniklý zbytek zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (40 ml, 5% methanol v ethylacetátu) a získá se (2S,4R) -2- (1-acetamido-2-a Ily loxykarbony lamino) ethy 1-N-allyloxykarbo- 116 nyl-4-irtethansulf onyloxypyrrolidin (201 mg, výtěžek 67 %). NMR(CDC1₃) 5:

l,98(3H,s), 1,95-2,30(2H,m), 3.04 (3H,s),

3,10—3,60(3H,m), 3,70-4,40(4H,m), 4,53(2H,m) 4,66(2H,m), 5,10-5,40(5H,m), 5,94(2H,m)

Směs výše uvedené sloučeniny (200 mg, 0,46 mmol) a thioacetátu draselného (159 mg, 1,39 mmol) v N,N-dimethylformamidu (4 ml) se míchá 1 hodinu při teplotě 70 °C. Reakčni směs se zředí ethylacetátem a promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (40 ml, ethylacetát) a získá se sloučenina uvedená v názvu (100 mg, výtěžek 52 %).

NMR(CDC1₃) δ:

1,70-2,10(2H,m), 1,96(3H,s), 2,36(3H,m), 3,12(lH,m), 3,38(2H,m), 3,82(lH,m), 4,00-4,30(3H,m), 4,62(4H,m),

5,20-5,50(4H,m), 5,80-6,10(2H,m)

Referenční příklad 4 (2S,4S)-4-merkapto-2-[1-methanosulfonylamido-2-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)]ethyl-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin.

1)

117

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- ( 1,2-diazido)ethylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 3-3 (1,6 g, 3,89 mmol) v methanolu (32 ml) se přidá katalyzátor 10 % palladium-uhlík (320 mg) a směs se míchá pod atmosférou vodíku při teplotě místnosti 1 hodinu. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí vé vakuu. K ledem chlazenému roztoku vzniklého zbytku v methylenchloridu (32 ml) se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (1,1 g, 3,45 mmol) a směs se míchá 1 hodinu. Reakční smés se promyje 1 N vodným roztokem hydroxidu sodného (3,5 ml), suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se.

K ledem chlazenému roztoku vzniklého zbytku v methylenchloridu (30 ml) se přidá triethylamin (0,81 ml, 5,35 mmol) a allylchlormravenčan (0,49 ml, 4,27 mmol) a směs se míchá 30 minut. Reakční smés se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se a získá se (2S,4R)-2-[l-allyloxykarbonylamino-2- (p-nitrobenzyloxykarbonylamino) ethyl ] -N-terc. butoxykarbonyl-4-ter.c.butyldimethylsiloxypyrrolidin (2,28 g, výtěžek 94 %).

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), C,86(9K,š), l,50(9H,s), 2,00(2H,m),

3,00-4,00(5H,m), 4,18(lH,m), 4,38(lH,m), 4,60(2H,m),

5,10-5,50(4H,m), 6,00(lH,m), 7,56(2H,d,J=8,OHZ),

8,28(2H,d,J=8,0Hz)

2)

118

NHCOO^^

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (2,28 g, 3,66 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (10 ml) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Směs se zahustí a získaný olejovitý zbytek se rozpustí v methylenchloridu (20 ml). K roztoku se přidá p-nitrobenzyloxykarbonylchlorid (1 g, 4,65 mmol) a triethylamin (1,62 ml, 10,7 mmol) a směs se míchá 30 minut. Směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. K roztoku vzniklého zbytku v tetrahydrofuranu (40 ml) se přidá roztok 1 N roztok tetrabutylamoniumfluoridu (7,3 ml, 7,3 mmol) a směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Odpaří se rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (ICO ml, ethylacetát) a získá se (2S,4R)-2- [ l-allyloxykarbonylamino-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl]-4-hydroxy-N-(p-nitrobenzyloxykarbóny1)pyrrolidin (1,74 g, v

NMR(CDC1₃) δ: l,90(2H,m),

4,36(lH,m),

7,52(4H,m),

3) ýtezek 81 %).

3,30(2H,m), 3,62(2H,m), 4,18(2H,m) 4,54(2H,m), 5,l0-5,40(6H,m), 5,84(lH,m), 8,22(4H,m)

AcS

ΡΝΣ

NHCOO'^'^' NHPNZ

119

4)

- K ledem chlazenému roztoku' výše uvedené sloučeniny (1,74 g, 2,96 mmol) v methylenchloridu (34 ml) se přidá triethylamin (0,62 ml, 4,44 mmol) a methansulfonylchlorid (0,34 ml, 4,44 mmol) a směs se míchá 30 minut. Reakční smés sodného, se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanuf suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se, přičemž se získá 1,8 g zbytku. K roztoku zbytku v N,N-dimethylformamidu (36 ml) se přidá thioacetát draselný (1,0 g, 8,77 mmol) a směs se míchá 22 hodin při teplotě 70 °C. Reakční směs se zředí ethylacetátem, promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (100 ml, ethylacetát : hexan = 1 : 1) a získá se ( 2S , 4S) -4-acetylthio-2- [ l-allyloxykarbonylamino-2- (p-nitrobenzyloxykarbonylamino) ethyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) pyrrolidin (1,38 g, výtěžek 72 %).

NMR(CDC1₃) δ:

l,80(2H,m), 2,38(3H,s), 2,60(lH,m), 3,12(2H,m),

3,28(2H,m), 3,82(lH,m), 4,10(lH,m), 4,56(2H,m) . 5,10-5,40(6H,m), 5,90(lH,m), 7,54(lH,m), 8,24(4H,m)

NHCOO^^

NHPNZ

PMBS

K ledem chlazenému roztoku sloučeniny (1,3 g, 2,01 mmol) v methanolu (26 ml) se přidá 2 N hydroxid sodný (1,2 ml, 2,4 mmol) a směs se míchá 1 hodinu. K reakční směsi se přidá p-methoxybenzylchlorid (0,55 ml, 4,0 mmol) a 2 N vodný roztok hydroxidu sodného (1,2 ml, 2,4 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí methylenchloridem, promyje.nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (100 ml,

120 ethylacetát : hexan = 2 : 1) a získá se (2S,4S)-2-[1-allyloxykarbonylamino-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl]-4-(4-methoxybenzylthio)-N-(p-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidin (1,10 g, výtěžek 75 %).

NMR(CDC1₃) δ:

l,76(2H,m), 2,48(lH,m), 3,00(2H,m), 3,32(2H,m), 3,8O(3H,S), 3,80-4,20(2H,m), 4,56(2H,m),

5,00—5,40(6H,m), 5,90(lH,m), 6,64(2H,d,J=8,0Hz),

7,24(2H,d,J=8,0Hz), 7,52(4H,m), 8,24(4H,m)

5) ffc-

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,1 g, 1,52 mmol) v methylenchloridu (22 ml) se přidá voda (0,22 ml), chlorid bistrifenylfosfinpalladnatý (21 mg, 0,03 mmol) a tributylcínhydrid (0,9 ml, 3,34 mmol) a směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se k ledem chlazenému roztoku vzniklého zbytku v methylenchloridu (20 ml) přidá triethylamin (0,32 ml, 2,28 mmol) a methansulfonylchlorid (0,14 ml, 1,82 mmol) a směs se míchá 1 hodinu. Reakční směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (100 ml, ethylacetát : hexan = 3 : 1) a získá se (2S,4S)-2-[l-methansulfonylamido-2-(p-nitrobenzyloxykarbony lamino)ethyl]-4-(p-methoxybenzylthio)-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (720 mg, výtěžek 66 *

NMR(CDC1₃) δ:

l,90(2H,m), 2,50(lH,m), 2,86(3H,s), 2,90-3,40(4H,m), 3,8O(-3H,s) , 3,6,0-4,20 ( 2H ,m) , 5,24 (4H,m),

6,86(2H,d,J=8,0Hz), 7,22(2H,d,J=8,0Hz), 7,52(4H,m), 8,26 (4H,m)

121

6)

NHPNZ

Směs výše uvedené sloučeniny (400 mg, 0,56 mmol), kyseliny trifluoroctové (4 ml) a anisolu (90 ul, 0,84 mmol) se míchá pod refluxem 30 minut. Po ochlazení se reakční smés zahusti. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (30 ml, ethylacetát : hexan = 3 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (253 mg, výtěžek 76 %).

NMR(CDC1₃) δ:

l,80(2H,m), 2,70(lH,m), 2,90(3H,s), 3,10-3,50(4H,m), 3,76(lH,m), 4,10(lH,m), 5,24(4H,m), 7,56(4H,m),

8,24 (4H,m)

Referenční příklad 5 (2S, 4S) -4-acetylthio-2- (1-kyan-l-p-nitrobenzyloxykarbonylamino) methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin 1)

K roztoku Ν,Ν-dimethylformamidu (2,54 ml, 35,8 mmol) a methylenchlorídu (34,5 ml) se přidá při -78 ’C oxalylchlorid (1,53 ml, 17,5 mmol) a smés se míchá při téže teplotě 15 minut. K reakční směsi se přidá během 10 minut po kapkách roztok ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-hydroxymethylpyrrolidinu (3,92 g, 11,8 mmol) v methylenchloridu (34,5 ml). Po míchání po dobu 30 minut se k reakční směsi přidá triethylamin (8,27 ml, 59,3.mmol) a

122 směs se ohřeje na teplotu místnosti. Po míchání po dobu 15 minut se reakční směs promyje vodou, suší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se ve vakuu, přičemž se získá olejovitý zbytek, který se rozpustí v benzenu (20 ml). K tomuto roztoku se přidá trimethylsilylkyanid (1,75 ml, 13,1 mmol) a směs se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidá methanol (15 ml) a pokračuje se v míchání. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Vzniklý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan : ethylacetát =5:1) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- ( 1-kyan-l-hydroxymethyl )pyrrolidin (3,8 g, výtěžek 88,1 %) .

IČ(KBr)cm^-1:

NMR(CDC1₃) δ:

0,10(6H,s), l,85(lH,m),

5,80(lH,m)

2)

3400,2900,2260,1700,1670

0,90(9H,s), 1,50 & l,54(totál. 9H,každý s), 2,18(lH,m), 3,40-3,60(2H,m), 4,50(2H,m),

OMs Η í

TBSO -·<

^XBoc

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (2,33 g, 6,37 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) se přidá triethylamin (1,28 ml, 9,12 mmol) a methansulfonylchlorid (0,73 ml, 9,43 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě. Reakční směs se zředí ethylacetátem (40 ml), postupné se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan : ethylacetát =4 : i) získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-(1-kyan-l-methansulfonyloxy)methylpyrrolidin (2,1 g, výtěžek

123

0,5 %) .------NMR(CDC1₃) δ:

0,40(6H,s), O,82(9H,S), 1,60(9H,s) , _t2,12(2H,m) , 3,08 & 3,17(totál. 3H,každý s), 3,40(2H,m), 4,40(2H,m), 5,95(lH,m)

3)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (819 mg, 2 mmol) v Ν,Ν-dimethylformamidu (16 ml) se přidá azid sodný (390 mg, 6 mmol) a směs se míchá 3 hodiny při 50 °C. Reakční směs se zředí ethylacetátem (40 ml), promyje se postupně vodou (2 x 30 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se ve vakuu, přičemž se získá zbytek, který se rozpustí v methanolu (20 ml). K roztoku se přidá katalyzátor o složení 10 % palladium-uhlík (300 mg) a směs se míchá pod atmosférou vodíku 1 hodinu. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. K roztoku vzniklého zbytku v chloroformu (20 ml) se přidá 4,6-dimethy 1-2-(p-nitrobenzyloxythio)pyrimidin (640 mg, 2 mmol) a směs se míchá 2 hodiny. Reakční smés se promyje postupně vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyce ným vodným roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan : ethylacetát =1 : 1), přičemž se získá (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[l-kyan~l-1-(p-nitrobenzyloxyamino)methyl Jpyrrolidin (520 mg, výtěžek 48,7 %). Výše uvedená sloučenina se rozpustí v methanolu nasyceném chlorovodíkem a roztok se nechá stát 5 hodin. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se zbytek rozpustí v ethylacetátu (20 ml) a směs se postupné promyje .nasyceným

124 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se rozpouštědlo odpaří. K roztoku vzniklého zbytku v chloroformu (10 ml) se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (319 mg, 1 mmol) a směs se míchá 2 hodiny. Reakční smés se zpracuje a čistí stejným způsobem jak bylo uvedeno výše a získá se (2S,4R)-2-(1-kyan-l-p-nitrobenzyloxykarbonylmethyl)-4-hydroxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (260 mg, výtěžek 53,4 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,2250,1700

NMR(CDC1₃) 5:

2,20(2H,mj, 3,56-3,84(2H,m), 4,40(lH,m), 4,60(1H,br s ) , 5,10(lH,m), 5,26(2H,S), 5,30(2H,s), 6,20(1H,m),

7,52(4H,d,J=7,0Hz), 8,12(4H,d,J=7,0Hz)

4)

Sloučenina uvedená v názvu (88,1 mg, výtěžek 32,2 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (260 mg, 0,52 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 1-5 a 1-6.

NMR(CDC1₃) δ: 2,10(3H,s), 4,60(lH,m), 6,20(lH,m),

2,20(2H,m), 3,40-3,70(2H,m), 4,20(lH,m), 5,10(lH,m), 5,30(2H,s), 5,35{2H,s),

7,50(4H,d,J=7,0Hz), 8,10(4H,d,J=7,0Hz)

Referenční příklad 6 (2S,4S)-4-acetylthio-2-(2-methyl-3-p-nitrobenzyloxykarbonyl- amino )propyl-N-p-nitr,obenzyloxykarbonylpyrrolidin

l)

125

T8S0

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[ (E)-2-ethoxykarbonylvinyl]pyrrolidinu ( 29 g, 50 mmol) v ethanolu (500 ml) se přidá katalyzátor o složení TO % palladium-uhlík (5 g) a směs še míchá pod atmosférou vodíku při teplotě místnosti 2 hodiny. Ke směsi se přidá další množství katalyzátoru o složení 10 .% palladium-uhlík (2 g) a směs se míchá 1,5 hodiny při stejných podmínkách. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2- (2-ethoxykarbonyl) ethylpyrrolidin (15,62 g, výtěžek 78 %).

IČ(KBr)cm^_1: 29 30,173 5,1695,13 90,1365,1250,1170,1110,83 5,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), 1,26(3H,t,J=7,0Hz), l,46(9H,s),

1,60-1,85(2H,m), 1,85-2,20(2H,m), 2,20-2,40(2H,m),

3,25-3,55(2H,m), 3,95(lH,m), 4,14(2H,q,J=7,0Hz),

4,35(lH,m)

2)

TSSO

Ke směsi 2,1 M diisopropylamidu litného v tetrahydrofuranu (3ml, 6,3 mmol) a tetrahydrofuranu (12 ml) se přidá po kapkách při*teplotě -78 ’C a pod atmosférou dusíku roztok výše uvedené sloučeniny (2,01 g, 5 mmol) v tetrahydrofuranu

126 (3 ml) a směs se míchá 1 hodinu při stejné teplotě. K reakční směsi se přidá methyljodid (1 ml, 11,9 mmol) a směs se míchá při teplotě -78 °C dalších 10 minut a poté při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se vlije do směsi vody (200 ml) a 1 N vodného roztoku hydrogensíranu draselného (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 10% vodným roztokem siřičitanu sodného, vodou,

N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odstraní ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-ethoxykarbonyl-2-methyl)ethylpyrrolidin (1,93 g, výtěžek 93 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2940,1740,1700,1465,1395,1370,1260,1160,1120,

840,780

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), O,86(9H,S), 1,20(3H,d,J=7,0Hz),

1,27(3H,t,J=7,0Hz), l,46(9H,s), 1,50-1,80(2H,m),

1,80-2,10(lH,m), 2,10-2,30(1H,m), 2,30-2,60(1H,m),

3,20-3,55(2H,m), 3,80-4,00(lH,m), 4,14(2H,q,J=7,0Hz), 4,25-4,40 (lH,m)

K ledem chlazené suspenzi lithiumaluminiumhydridu (80 mg, 2,11 mmol) v diethyletheru (8 ml) se přidá roztok výše uvedené sloučeniny (830 mg, 2,0 mmol) v etheru (2 ml) pod atmosférou, dusíku a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě.

K vznikající reakční směsi se postupně přidá za stálého chlazení ledem a intenzivního míchání voda (0,08 ml)', 20% vodný

127 ____roztok hydroxidu sodného (0,06 ml) a voda (0,28 ml). Reakční směs se chvíli míchá a poté se přidá diethylether (20 ml). Vznikající sraženina se odfiltruje a promyje diethyletherem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo.

Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbony 1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxy-2-methy1)propy1pyrrolidin (750 mg, výtěžek kvantitativní).

IČ(KBr)cm^-1: 3460,3420,2930,1695,1675,1400,1365,1255,1165,

840,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87(6H,s), 0,96(3H,d,J=7,OHz) , l,45(9H,s), 1,55-2,30(6H,m), 3,20-3,80(4H,m)

3,90-4,10(1H,m), 4,25-4,45(lH,m)

4)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (700 mg, 1,87 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá pod atmosférou dusíku triethylamin (0,4 ml, 2,87 mmol) a methansulfonylchlorid (0,22 ml, 2,84 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 1 hodinu. Reakční směs se zředí ethylacetátem (150 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou, 1 N vodným hydrogensíranem draselným, vodou, nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a získá se surová mesylsloučenina. K roztoku výše uvedené surové mesyis-ioučeniny v N,N-dimethylformamidu (6 ml) se přidá azid sodný (410 mg, 6,31 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při

128 teplotě 70 ’C pod atmosférou dusíku. Reakční směs se vlije do vody (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odstraní ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-2-(3-azido-2-methyl)propyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin (610 mg, výtěžek 82 %).

IČ(KBr)cm^_1: 2930,2100,1695,1390,1365,1255,1160,840,775

NMR(CDC1₃) S:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), 1,01(3H,d,J=7,0Hz), l,45(9H,s), 1,55-2,10(5H,m), 3,05-3,50(4H,m)

3,85-4,10(1H,m), 4,30-4,40(1H,m)

5)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (600 mg, 1,51 mmol) v methanolu (15 ml) se přidá katalyzátor o složení 10 % palladium-uhlík (120 mg) a směs se míchá pod atmosférou vodíku 1 hodinu při teplotě místnosti. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, přičemž se získá surová aminosloučenina. K roztoku aminosloučeniny v dioxanu (5 ml) se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (490 mg, 1,53 mmol) a směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (150 ml) a postupně se promyje 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného a nasyceným vodným roztokem ..chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaři ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-ferc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethyl129 siloxy-2-[ ( 2-methy 1-3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino ) propyl ] pyrrolidin (750 mg, výtěžek 90 %).

IČ(KBr)cm^_1: 2930,1725,1695,16S0,1525,1400,1345,1250

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), 0,94(3H,d,J=7,0Hz),

1,45 & l,46(totál. 9H,každý s), 1,50-2,10(5H,m),

3,00-4,50(4H,m) , 3,80-4,10(lH,m), 4,33(lH,m)

5,22(2H,s), 5,50-6,30(lH,m), 7,53(2H,m),

8,23(2H,d,J=8,0Hz )

Roztok výše uvedené sloučeniny (740 mg, 1,34 mmol) v kyselině trif luoroctové (5 ml) se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla se zbytek několikrát destiluje s benzenem, přičemž se získá surová aminošloučenina. K roztoku aminosloučeniny v dioxanu (3 ml) a vodě (1 ml) se přidá hydrogenuhličitan sodný (1,13 g, 13,45 mmol) a 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (430 mg, 1,35 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (150 ml) a promyje postupně vodou, 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (rnethylenchlorid-ethylacetát) a získá se ( 2S,4R)-4-hydroxy-2-(2-methyl-3-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (640 mg, výtěžek 92 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2940,1700,1605,1520,1430,1400,1345,1240.,

1105,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

130

0,96(3Η,d,J=6,ΟΗΖ), 1,00-1,4 Ο (1Η , m),

1,50-2,30(5Η,m), 2,30-3,80(4Η,m), 3,95-4,20(1Η,m),

4,30-4,50(1Η,m), 4,70-5,70(1Η,m),

5,21 & 5,24(totál. 4Η,každý s), 7,52(4Η,d,J=8,ΟΗζ)

8,22(4H,d,J=8,0Hz)

7)

MsO

NHPNJ

PNZ

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (630 mg, 1,22 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se po kapkách v atmosféře dusíku přidá triethylamin (0,26 ml, 1,87 mmol) a poté methansulfonylchlorid (0,14 ml, 1,81 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 30 minut. Reakční směs se zředí ethylacetátem (150 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou, 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odstraní rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (methylenchlorid-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-4-methansulfonyloxy-2-(2-methyl-3-p-nitrobenzyloxykarbonylaraino)- propyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (710 mg, výtěžek 98 %) .

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,1720,1700,1690,1600,1520,1340,1240,

1165,1105,900,735

NMR(CDC1₃) δ:

0,97(3H,d,J=7,0Hz) ,. 1,10-1,15 (lH,m) ,

1,50-2,10(5H,m), 2,40-2,60(lH,m), 2,90-3,40(lH,m),

3,05(3H,s), 3,50-3,70(lH,m), 3,90-4,20(2H,m)

4,80-5,50(1H,m), 5,22 & 5,25(totál. 4H, každý s),

7,53(4H,d,J=8,0Hz), 8,24(4H,m)

131

K roztoku výše uvedené sloučeniny (700 mg, 1,18 mmol) v Ν,N-dimethylformamidu (6 ml) se přidá thioacetát draselný (270 mg, 2,36 mmol) a jodid sodný (270 mg, 1,80 mmol) a směs se míchá 4 hodiny pod atmosférou dusíku při teplotě 70 ’C. Reakční směs se vlije do vody (300 ml) a extrahuje se ethylacetátem (1 x 100 ml, 2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 10% vodným roztokem siřičitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se sloučenina uvedená v názvu (620 mg, výtěžek 92 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,1700,1605,1520,1400,1345,1240,

1110,1010,855,740

NMR(CDC1₃) δ:

0,95(3H,d,J=6,0Hz), 1,20-1,40(lH,m) ,

1.40- l,80(3H,m), 2,34 & 2,35(totál. 3H,každý s),

2.40- 2,70(lH,m), 3,00-3,35(3H,m), 3,80-4,20(3H,m),

5,21 & 5,23(totál. 4H,každý s), 5,25-5,60(lH,m),

7,52 ( 4H, d , J=8,0Hz 8,23(4H,m)

Referenční příklad 7

Diastereomer A a B (2S,4S)-4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2- ( [ 3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)-1-hydroxy]propy1]pyrrolidinu

1)

132

K roztoku methylesteru (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinu (9,06 g, 25,2 mmol) v methanolu (75 ml) se přidá po kapkách 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (27 ml, 27 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 5 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí ve vodě (50 ml). Vzniklý roztok se promyje diethyletherem (50 ml), přidá se 1 N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (27 ml, 27 mmol) a poté se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se postupné promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran horečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a získá se surová karboxylové kyselina. K roztoku výše uvedené karboxylové kyselině v tetrahydrofuranu (25 ml) se pomalu přidává karbodiimidazol (4,08 g, 25,2 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. K roztoku monomethylesteru malonové kyseliny (13,84 g, 126 mmol) v tetrahydrofuranu (125 ml) se přidá chlorid hořečnatý (7,19 g, 75,5 mmol) a triethylamin (19,3 ml, 75,5 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. K vznikající smési se přidá výše uvedený imidazolidový roztok a směs se míchá přes noc. K reakční směsi se přidá 10% vodná kyselina citrónová (150 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2 x 150 ml). Organická vrstva se postupně promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po vysušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odstraní rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na- silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S;4R j-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-(2-karboxymethyl-l-oxo)ethylpyrrolidin (6,0 g, výtěžek 59 %) IČ(KBr)cm^-1: 3450,2950,1750,1700,1690,1390,1250

133

NMR(CDC1₃ Γ δ :

0,06(6H,s), Q,86(9H,s), 1,38 & l,40(totál. 9H),

1,80-2,20 (2H,m) , 3, 35-3,65( 4H,m)., 3,73 & 3,75 (to tál. 3H)

4,33-4,57(2H,m)

2)

K suspenzi výše uvedené sloučeniny (4,02 g, 10 mmol) a natriumborohydridu (0,95 g, 25,0 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) se po kapkách a pod refluxem přidá během 30 minut methanol (8 ml). Po ochlazení na teplotu místnosti se k reakční směsi postupné přidá voda (5 ml) a 10% vodný roztok kyseliny citrónové (20 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a získá se surový (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(IR,S)-1,3-dihydroxypropyl]pyrrolidin (3,75 g, výtěžek kvantitativní).

IČÍKBrJcm-'¹: 3400,293 0,1670,1400

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,43(9H,s), 1,25-1,65(2H,m),

1,65-2,00(2H,m), 3,25(lH,dd,J=2,0, 6,0Hz),

3,51(lH,m), 3,86(2H,t,J=3,OHz), 3,93-4,22(2H,m),

4,32(lH,m)

134

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (1,05 g, 2,8 mmol) v pyridinu (5,6 ml) se přidá p-toluensulfonylchlorid (640 mg, 3,36 mmol) a smés se míchá přes noc při teplotě 0 až 5 ’C. K reakčni směsi se přidá ethylacetát (6 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (6 ml) a směs se míchá 15 minut při teplotě místnosti. Směs se vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (30 c

ml) a extrahuje se chloroformem (3 x 20 ml). Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a získá se hrubý monotosylát. K roztoku výše uvedeného monotosylátu v N,N-dimethylformamidu (2,8 ml) se přidá azid sodný (546 mg, 8,4 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě 70 °C. Reakčni směs se vlije do vody (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 25 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného.

Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-2-(3-az ido-l-hydroxy)propy1-N-terč.butoxykarbony1-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (310 mg, výtěžek 28 %, polární diastereomer) a diastereomer B (280 mg, výtěžek 25 %, méně polární diastereomer).

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^_1: 3430,2950,2100,1690,1670,1400,1250

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,84 & 0,86(totál. 9H), l,47(9H,s),

1,40-2,05(4H,m), 3,23(1H,dd,J=2,0, 6,0Hz),

3,35-3,65(4H,m), 3)85(111,m), 4,29(lH,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2930,2100,1700,1660,1400,1250

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,43(9H,s), 1,40-2,05(4H,m) ,

3,25(1H,dd,J=2,0, 6,0Hz), 3,44-3,72 (4H,m),

4,00(lH,m), 4,27(lH,m)

135

K roztoku výše uvedeného diastereomeru A (448 mg, 1,12 mmol) v methanolu (11 ml) se přidá katalyzátor o složení 10 % Pri teplotě místnosti palladium-uhlik (45 mg) a směs se míchá 1 hodinuypod atmosférickým tlakem vodíku. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. K roztoku zbytku v methanolu (8 ml) se přidá 3 M roztok kyseliny chlorovodíkové v dioxanu (16 ml) a směs se míchá přes noc při. teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a ke zbytku se přidá methanol (11 ml) a triethylamin (1,56 ml,

11,2 mmol). Ke směsi se přidá roztok 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidinu (715 mg, 2,24 mmol) v methylenchloridu (4 ml) a směs se míchá 5 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (50 ml), promyje postupně 1 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran horečnatý se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-4-hydroxy-2-(l-hydroxy-3-N-p-nitrobenzy loxykarbony lamino) propy 1-N-p-ni trobenzy loxykarbonylpyrrolidi nu (484 mg, výtěžek 83 %)=

Diastereomer B (2S,4R)-4-hydroxy-2-(l-hydroxy-3-N-p-nitrobenzy loxykarbony lamino) propy 1-N-p-ni trobenzy loxykarbony lpyrrolidinu (363 mg, výtěžek 63 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru B (484 mg, 1,12 mmol) stejným způsobem.

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1700,1620,1520,1340

NMR(CDC1₃) δ:

1,29-2,05(4H,m), 3,31(lH,m), 3,37-3,62(2H,m).

136

3,70(lH,m), 4,00-4,22(2H,m), 4,49(lH,m)

5,10-5,35(4Η,m), 7,48(2Η,d,J=7,ΟΗζ)

7,53(2Η,d,J=7,ΟΗζ), 8,22(2Η,d,J=7,ΟΗζ)

8,23(2H,d,J=7,ΟΗζ)

Diastereomer Β:

IČ(KBr )cm^-1: 3 4 0Ό-, 1700,1600,1520,13 50

NMR(CDC1₃) δ:

1,40-2,15(4H,m), 3,15-3,41(3Η,m) , 3,41-3,85(2H,m) , 4,12(lH,m), 4,25(lH,m), 5,08-5,29(4H,m),

7,29(2H,d,J=7,0Η2), 7,30(2H,d,J=7,ΟΗζ),

8,22(2H,d,J=7,ΟΗζ), 8,23(2Η,d,J=7,ΟΗζ) 'í

5)

Κ ledem chlazenému roztoku výše uvedeného diastereomeru A (478 mg, 0,922 mmol) ve směsi methylenchloridu (9 ml) a --· Ν,Ν-dimemethylformamidu (1 ml) se přidá pod atmosférou dusíku po kapkách triethylamin (0,17 ml, 1,2 mmol) a poté methansulf onylchlorid (0,08 ml, 1,01 mmol) a směs se míchá za chlazení ledem 30 minut. Reakční směs se zředí methylenchloridem (30 ml).a postupně se promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem .chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-2-(l-hydroxy-3-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl-4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (550 mg, výtěžek kvantitativní).

Diastereomer B (2S,4R)-2-(l-hydroxy-3-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl-4-methansufonyloxy-N-p-nitrobenzy loxykarbonylpyrrolidinu (317 mg, výtěžek 78 %) se získá, z výše uvedeného diastereomeru B (355 mg, 0,685 mmol) stejným

137

Diastereomer A:

IČ(KBrJcm¹: 3400,2950,1700,1600,1520,1350,1170

NMR(CDC1₃) δ:

l,30-l,70(2H,m), 2,17-2,46(2H,m), 3,05(3H,s) 3,15-3,79(4H,m), 3,93-4,25(3H,m), 5,09-5,37(4H,m) «*7,48(2H,d,J=6,OHz), 7,53(2H,d,J=6,OHz) ,

8,82(2H,d,J=6,OHz), 8,83(2H,d,J=6,OHz)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2940,1700,1620,1520,1350,1170

NMR(CDC1₃) δ:

1,44-1,79(2H,m), 2,08(lH,m). 2,39(lH,m), 3,04(3H,s) 3,15-3,77(5H,m), 4,02-4,24(2H,m), 5,10-5,36(4H,m)

7,34(2H,d,J=6,OHz), 7,35(2H,d,J=6,OHz) ,

8,23(2H,d,J=6,OHz), 8,24(2H,d,J=6 , OHz )

6)

NHPNZ

K roztoku výše uvedeného diastereomeru A (550 mg, 0,922 mmol) v N,N-dimethylformamidu (9,2 ml) se přidá thioacetát draselný (210 mg, 1,84 mmol) a jodid sodný (167 mg, 1,11 mmol) a směs se míchá při teplotě 70 ’C pod atmosférou dusíku 4 hodiny. Reakční směs se vlije do vody (75 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 25 ml). Organická vrstva se postupné promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného.

Po sušení přes bezvodý síran horečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá diastereomer A sloučeniny uvedené v názvu (357 mg, výtěžek 67 %).

Diastereomer B sloučeniny uvedené v názvu (316 mg, výtěžek 85 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru B ( 259 mg, 0,53 mmol) stejným způsobem.

138

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^_1: 3400,1700,1600,1520,1340

NMR(CDC1₃) δ:

1,32-2,10(4H,m), 2,34(3H,s), 3,06-3,58(3H,m),

3,66-4,28(4H,m) , 5,06-5,31(4H,m)

7,49(2H,d,J=6,OHz), 7,53(2H,d,J=6,OHz),

8,19(2H,d,J=6,OHz), 8,20(2H,d,J=6,OHz)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1700,1610,1520,1340

NMR(CDC1₃) δ:

1,42-1,86(4H,m), 2,36(3H,s). 3,16(lH,m), 3,32(lH,m) 3,48(lH,m), 3,68-3,88(2H,m), 4,00(lH,m), 4,22(lH,m),

5,10-5,30(4H,m), 7,53(2H,d,J=6,OHz), 7,54(2H,d,J=6,OHz), 8,23(2H,d,J=6,OHz), 8,24(2H,d,J=6,OHz)

Referenční příklad 8 (2S,4S)-4-acetylthio-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-2-(1,3-diazido )propylpyrrolidin 1) ‘BSO

N₃ ( 2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(1,3-diazido)propylpyrrolidin (1,01 g, výtěžek 22 %) se získá z (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-((IR,S)—1,3-dihydroxypropyl]pyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-2 (3,98 g, 10,6 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 3-2 a 3-3.

ICÍKBrJcm“¹: 3450,2950,2100,1690,1500,1400,1360

NMR(CDCl₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87( 9H,S), l,48(9H,s), 1,32-2,10(4H,m) ,

139

-----_37ΐθ_₃₇₁(_4H,), ₃ ,θ _{2 (}ih,mj, 4 ,16-4,28(2H,m)

2)

( 2S,4R)—4—hydroxy—2—(1,3-diazido)propyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (946 mg, výtěžek kvantitativní) se získá' z výše uvedené sloučeniny (1,01 g, 2,37 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-4.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2950,2100,1700,1610,1520,1430,1400,1350

NMR(CDC1₃) δ:

1,32-1,86(2H,m), 1,86-2,24(2H,m), 3,28-3,64(3H,m),

3,70-3,94(2H, m) , 4,19(lH,m), 4,42(lH,m), 5,28(2H,m),

7,51(2H,m), 8,24(2H,m)

3)

Sloučenina uvedená v názvu (560 mg, výtěžek 53 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (946 mg, 2,42 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 7-5 a 7-6. IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,2100,1700,1600,1520,1400,1340

NMR(CDC1₃) δ:

1,36-2,06(4H,m), 2,38(3H,s), 3,16(lH,m),

3,32-3,66(2H,m), 3,72-4,12(2H,m) , 4,12-4,52(2H,m),

5,28(2H,m), 7,56(2H,m), 8,24(2H,m)

Referenční příklad 9

Diastereomer A a B '(2S, 4S)-4-acetylthio-N-allyloxykarbonyl-2- ( 2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxyethyl) pyrrolidinu

140

1)

K ledem chlazené suspenzi lithiumaluminiumhydridu (226 mg, 5,95 mmol) v bezvodém etheru (12 ml) se přidá po kapkách pod atmosférou dusíku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(l-kyan-l-hydroxy)methylpyrrolidin připravený v referenčním příkladu 5-1 (2,12 g, 5,95 mmol) v diethyletheru (4 ml) a směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. K reakční směsi se za‘. stálého chlazení ledem a intenzivního míchání postupně přidá voda (0,24 ml), 20% vodný roztok hydroxidu sodného (0,18 ml) a voda (0,84 ml). Směs se chvíli míchá a zředí se diethyletherem. Nerozpustná látka se odfiltruje a promyje diethyletherem. Spojené etherové vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a získá se surová aminosloučenina. K roztoku výše uvedené aminosloučeniny v ethylacetátu (4 ml) se přidá roztok di-terc.butyldikarbonátu (1,24 g, 5,69 mmol) v ethylacetátu (2 ml) a směs se míchá 3 dny při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (50 ml) a postupné promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-(2-butoxykarbonylamino-l-hydroxyethyl)pyrrolidinu (745 mg, výtěžek 27 %, polární diastereomer) a diastereomer B (743 mg,‘výtěžek 27 %, méně polární diastereomer).

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1690,1500,1400,1360

141

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), l,42(9H,s), l,44(9H,s) l,80-2,08(2H,m), 2,90(lH,m), 3,16-3,72(4H,m) 4,16(lH,m), 4,30(lH,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr)crn^-1: 3400,2950,1690,1500,1400,1360

NMR(CDC1₃) δ:

0,04(6H,s), 0,85(9H,s), l,44(9H,s), l,47(9H,s), l,65(lH,m), 2,05(lH,m), 3,14-3,32(2H,m),

3,48-3,65(2H,m) , 4,03(lH,m), 4,27(lH,m), 5,21(lH,m)

2)

K roztoku výše uvedeného diastereomeru A (543 mg, 1,18 mmol) v methanolu (5 ml) se přidá 3 M roztok kyseliny chlorovodíkové v dioxanu a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v methanolu (10 ml). K vznikajícímu roztoku se přidá za chlazení ledem triethylamin (0,82 ml, 5,9 mmol) a allylchloruhličitan (0,31 ml, 3,0 mmol) a směs se míchá 30 minut při téže teplotě. Reakční směs se zředí ethylacetátem (100 ml) a postupně se promyje 1 N kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odstraní ve vakuu rozpouštědlo Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-N-allyloxykarbonyl-2- ( 2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxy)ethyl-4-hydroxypyrrolidinu (298 mg, výtěžek 80 %).

Diastereomer B (2S,4R)-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-l-hydroxyjethyl-4-hydroxypyrrolidinu (280 mg, výtěžek 76 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru B (543 mg, 1,18 mmol) stejným způsobem.

142

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2940,1680,1530,1430,1410

NMR(CDC1₃) δ:

1,68-2,32 ( 2H,m) , 3,02(lH,m), 3,18-3,94 ( 4H,m) ,. 4,18(lH,m), 4,44(lH,m), 4,50-4,68(4H,m)

5,16-5,41(4H,m), 5,70-6.07(2H,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2940,1690,1520,1410

NMR(CDC1₃) δ:

l,94(lH,m), 2,ll(lH,m), 3,08-3,36(2H,m), 3,43(lH,m) 3,56-3,82(2H,m), 4,14(lH,m), 4,44(lH,m)

4,52-4,66(4H,m), 5,18-5,44(4H,m), 5,80-6,08(2H,m)

Diastereomer A sloučeniny uvedené v názvu (165 mg, výtěžek 47 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (298 mg, 0,949 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 7-5 a 7-6.

Diastereomer B sloučeniny uvedené v názvu (183 mg, výtěžek 55 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru B (280 mg, 0,892 mmol) stejným způsobem.

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3320,2920,1690,1540,1410

NMR(CDC1₃) δ:

2,00(lH,m), 2,34(3H,S), 2,45(lH,m), 2,84-3,20(2H,m),

3,50(lH,m), 3,68-4,38(4H,m), 4,50-4,66(4H,m),

5,18-5,41(4H,m), 5,72-6,12(2H,m)

Diastereomer B:

IČÍKBrJcm“¹: 3400», 2940,1690,1520,1410

NMR(CDC1₃) δ:

l,74(lH,m), 2,37(3H,S), 2,53(lH,m), 3,ll(lH,m),

143

3,27 ( 2H , m) ,' 3,47-3,8 7 (2Η,m), 4,03 (ΙΗ , m ) , 4,20 (ΙΗ, η) ,

4,45-4,71(4H,m), 5,16-5,42(4H,m), 5,81-6,08(2H,m)

Referenční příklad 10 ( 2R,4S)-4-acetylthio-2-[2,2-dimethyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin 1)

K tetrahydrofuranovému roztoku 2,1 M lithium diisopropyl..amidu (3,1 ml, 6,51 mmol) se po kapkách pod atmosférou dusíku přidává roztok isobutylnitrilu (420 mg, 6,08 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) a roztok se míchá 1 hodinu při téže teplotě. K reakční směsi se po kapkách přidá roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-jodmethylpyrrolidinu (2,21 g, 5,01 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a směs se míchá 30 minut při teplotě -78 C a poté přes noc při teplotě místnosti. Reakční smés se zředí vodou (100 ml) a 1 N hydrogensÍránem draselným (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se podrobí sloupcové chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbony 1-4-terč. butyldimethylsiloxy-2-( 2-kyan-2,2-dimethylethyl)pyrrolidin (1,12 g, výtěžek 58 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2930,2230,1695,1475,1390,1365,1255,1170,1140,

1105,1025,840,775

NMR(CDG1₃) δ:

0,07 & 0,08(totál. 6H,každý s), 0,86(9H,s),

1,35-1,55(6H) , l,46(9H,s), 1,62 (1H, dd , J=14,0., 4,0Hz ) ,

144 l,98(lH,m), 2,22(2H,m), 3,29(1H,dd,J=12,O, 5,OHz) 3,65(lH,m), 4,08(lH,m), 4,34(lH,m)

K ledem chlazené suspenzi lithiumaluminiumhydridu (170 mg, 4,48 mmol) v etheru (8 ml) se po kapkách přidává pod atmosférou dusíku roztok výše uvedené sloučeniny (830 mg, 2,17 mmol) v étheru (2 ml) a směs se míchá 30 minut při téže teplotě a poté 1 hodinu při teplotě místnosti. Ke směsi se postupně přidá za stálého chlazení ledem a intenzivního míchání voda (0,17 ml), 20% vodný roztok hydroxidu sodného (0,13 ml) a voda (0,6 ml). Roztok se chvíli míchá a reakční směs se zředí diethyletherem (20 ml) a nerozpustná látka se odfiltruje. Tato nerozpustná látka se promyje.diethyletherem (2 x 20 ml). Spojené etherové vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a získá se surová aminosloučenina. K roztoku výše uvedené aminosloučeniny v dioxanu (7 ml) se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (700 mg, 2,19 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (70 ml) a postupně se promyje 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[2,2-dimethyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbohylamino)propyl]pyrrolidin (730 mg, výtěžek 59 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3300,2950,1725,1675,1520,1405,1345,1245,

145

----------------------1150,1105,8 4077 7 5----------------------NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,80-0,90(6H), 0,87(9H,s), l,48(6H,s), ’ί,55-1,80(2Η,m), 1,85-2,15(2H,m), 3,02(1Η,dd,J=14,0, 3,ΟΗζ),

3,15-3,45(3H,m), 3,84(lH,m), 4,34(lH,m), 5,23(2H,s), 7,43(lH,br d,J=10,0Hz), 7,55(2H,d,J=9,OHz),

8,20(2H,d,J=9,OHz)

( 2R,4R)-2-[ 2,2-dimethyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl ]-4-methansulf ony loxy-N-p-nitrobenzy loxykarbony lpyrrolidin (790 mg, výtěžek 94 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (780 mg, 1,38 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 6-6 a 6-7.

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,1700,1605,1520,1400,1345,1240,

1175,1105,900 nmr(cdci₃) δ:

0,91(6H,s), l,19(lH,m), l,63(2H,s), 1,85-2,25(2H,m),

2,59(lH,m), 3,05(3H,s), 3,32(lH,m),

3,62(1H,dd,J=14,0, 4,0Hz), 3,99(2H,m),

5,24 & 5,28(totál. 4H,každý s), 6,51(lH,br d,J=9,0Hz),

7,54(4H,m), 8,22(4H,d,J=9,0Hz)

4)

.Sloučenina· uvedená v názvu (550 mg, výtěžek 80 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (760 mg, 1,25 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 6-8.

146

IČ(KBr)cm^_1: 3340,2950,1725,1695,1605,1520,1400,1345,1240,

1105,1015,855,740

NMR(CDC1₃) δ:

0,89(6H,S), T,30(1H,m), l,64(2H,s), 2,05(1H,d,J=14,0Hz), 2,34(3H,s), 2,65(lH,m), 3,01(lH,m), 3,26(2H,m),

3,70-4,10(2H,m), 5,23(4H,s), 6,61(1H,br d,J=7,OHz) , 7,52(4H,m), 8,21(4H,d,J=9,OHz)

Referenční příklad 11 ( 2R,4S)-4-acetylthio-2-[2,2-dimethyl-3-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin

A*

1)

Surová aminosloučenina se získá z (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-kyan-2,2-dimethyl)ethylpyrrolidinu připreveném v referenčním příkladu 10-1 (1,44 g, 3,76 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 10-2. K roztoku výše uvedené aminosloučeniny v dioxanu (10 ml) se přidá 2-(terc.butoxykarbonylthio)-4,6-dimethylpyrimidin (900 mg, 3,74 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (150 ml) a postupně se promyje 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří rozpouštědlo ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá ^-se (2R,4R)-N.terč.butoxykarbonyl-2-[3-(terč.butoxykarbonylamino)-2,2-dimethylJpropyl—4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin (1,35 g, výtěžek 74 %).

147

IČ (KBr)cm“¹: 2900,1715,1680,1530,147 0,1400,1360,12 45,

1170,1105,335,770

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,80-0,95(6H), l,46(9H,s), 1,65-2,15(4H,m)

3,10-3,45(3H,m), 3,87(lH,m)

O,87(9H,S), l,44(9H,s), , 2,92(1H,dd,J=13,0, 4,0Hz) , 4,34(lH,m), 6,57(lH,br s)

2)

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (1,05' g, 2,16 mmol) v N, N-dimethylf ormamidu (7 ml) se přidá pod atmosférou dusíku 60% hydrid sodný v oleji (170 mg, 4,25 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. K reakční směsi se za chlazení ledem po kapkách přidá methyljodid (1,8 ml, 21,4 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 30 minut a poté 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ledovou vodou (200 ml) a 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného (20 ml) a poté se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 10% roztokem siřičitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R, 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[3-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino) -2,2-dimethyl ]propyl-4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidin (630 mg, výtěžek 58 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2920,1695,1470,1390,1360,1250,1165,1100,

835,770

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), 0,93 & l,00(totál. 6H,každý s) l,45(9H,s), l,46(9H,s), 1,60-2,15(4H,m), 2,94(3H,s),

3,05 & 3,15(totál. 2H,každý ABq,J=14,OHz), 3,52(2H,m),

148

3,98(lH,m), 4,32(lH,m) 3 )

MsO

PNZ

N—PNZ I

Me (2R,4R)-2-[2,2-dimethyl-3-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxy karbonylpyrrolidin (700 mg, výtěžek 89 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (630 mg, 1,26 mmol) stejným způsobem, jako v referenčních příkladech 6-6 a 6-7.

IČ(KBr)cm^_1: 2950,2940,1700,1605,1520,1400,1345,1170,1105,

960,900,850

NMR(CDC1₃) δ:

0,70-1,10(6H,m), l,26(lH,m), l,64(lH,m),

1,80-2,20(2H,m), 2,55(lH,m), 2,85-3,10(1H,m),

3,04(3H,s), 3,22(lH,m), 3,53(lH,m), 3,90-4,20(2H,m),

5,10-5,60(4H,m), 7,52(4H,d,J=8,OHz), 8,22(4H,d,J=8,0Hz) 4)

Sloučenina uvedená v názvu (550 mg, výtěžek 84 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (680 mg, 1,09 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 6-8.

IČ(KBr)cm^-1: 2950,1700,1600,1520,1400,1340,1200,1110,850

NMR(CDC1₃) δ:

0,94 & l,02(totál. 6H,každý br s), l,40(lH,m), l,64(2H,s), 2,05(lH,m), 2,34(3H,s), 2,64(lH,m), 3,O3(3H,br S), 3,05-3,35(2H,m), 3,75-4,20(3H,m), 5,22(4H,s), 7,5'3 ( 4H , d , J=9,0Hz ) , 8,2 3 ( 4H , d , J=9,0Hz )

149

Referenční příklad 12 —------------Diastereomer A (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethylj propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu

1)

K ledem chlazené suspenzi lithiumaluminiumhydridu (2,5 g, 66 mmol) v diethyletheru (100 ml) se přidá pod atmosférou dusíku diastereomer A methyl 3-[(2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl -4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin-2-yl ]-4-nitrobutylátu (méně polární diastereomer, 9,8 g, 22 mmol) v diethyletheru (10 ml) a směs se míchá 30 minut při téže teplotě. Reakční směs se zředí methanolem (50 ml) a 1 N vodným roztokem hydroxidu sodného (20 ml) a nerozpustná látka se odfiltruje. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v dioxanu (100 ml) a vodě (100 ml). K roztoku se přidá 4,6-dimethy 1-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (7,03 g, 22 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odstraní rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxy-l-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propylpyrrolidinu (2,55 g, výtěžek 20,4 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1690,1670,1520,1400,1255,1160,835,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), l,48(9H,s), 1,60-2,20(4H,m),

150

3,10-3,30(3H,m), 3,50-3,80(4Η,m), 4,10-4,30(3Η,m), 5,22(2Η,d,J=3,ΟΗζ), 6,15(1Η,br m),

7,54(2Η,d,J=9,ΟΗζ), 8,24(2Η,d,J=9,ΟΗζ)

2)

Κ ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (2,55 g, 4,49 mmol) v methylenchloridú (9,0 ml) se přidá pod atmosférou dusíku po kapkách kyselina trifluoroctová (4,5 ml) a směs se míchá 40 minut při téže teplotě. Reakčni směs se přidá při téže teplotě po kapkách ke směsi dioxanu (58 ml) a 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného. K roztoku se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-mitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (1,43 g,

4,49 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, přičemž se udržuje pomocí 1 N vodného hydroxidu sodného pH na hodnotě 10. Reakčni směs se zahustí ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Organická vrstva sé postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (4% roztok methanolu v chloroformu) a získá se diastereomer A (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxy-l-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,15 g, výtěžek 37,9 %). IČ(KBr)cm^_1: 3400,2900,1700,1605,1520,1400,1350,1250,1105,

840,770

NMR(CDC1₃) 5:

0,05(6H,s), 0,84(9H,s), l,52(2H,m), 1,80-2,00 ( 2H ,m) ,

2,10-2,40 ( 2H,m)., 3,10-3,30(3H,m) , 3,60-3,80 ( 3H, m ) ,

4,34(2H,m), 5,20(4H,s), 5,92(lH,m)

7,51(4H,d,J=8,0Hz), 8,22(4H,d,J=8,0Hz)

151

NHPNZ

OAc

K ledem chlazenému roztoku výše uvedené sloučeniny (1,15 g, 1,78 mmol) v pyridinu (10 ml) se přidá acetanhydrid (2 ml) a směs se míchá 2 hodiny při téže teplotě. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem (50 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou, 10% vodným roztokem kyseliny citrono vé, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (2% roztok methanolu v chloroformu) a získá se diastereomer A ( 2S, 4R)-2-(3-acetoxy-l-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-N-p-^nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (698 mg, výtěžek 57 %).

IČ(KBrJcm¹: 3400,2940,1700,1520,1430,1400,1340,1250,1100,

850,735

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(3H,s), 0,08(3H,s), 0,85(9H,s), 1,40-1,60(2H,m), 1,70-1,90(lH,m), 2,05(3H,s), 2,10(lH,m),

3,00-3,40(3H,m) , 3,70(lH,s), 3,76(lH,s), 4,16(2H,m), 4,35(2H,m), 5,19(4H,S), 5,85(lH,m),

7,51(4H,d,J=9,0Hz), 8,22(4H,d,J=9,0Hz)

NHPNZ

MsO h-^;

OH

4)

152

K roztoku výše uvedené sloučeniny (698 mg, 1,01 mmol) v tetrahydrofuranu (15 ml) se přidá roztok 1 N tetrabutylamoniumfluoridu (1,05 ml, 1,05 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem (50 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a získá se surová sloučenina alkoholu. K roztoku výše uvedené sloučeniny alkoholu v methylenchloridu (15 ml) se přidá triethylamin (0,07 ml, 1,0 mmol) a methansulf onylchlorid (0,08 ml, 1,0 mmol) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří rozpouštědlo ve vakuu a získá se surová mesylsloučenina. K směsi výše uvedené mesylsloučeniny v tetrahydrofuranu (10 ml) a methanolu (10 ml) se přidá methoxid sodný (77 mg, 1,4 mmol) a směs se míchá 20 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se zahusti ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem (50 ml). Organická vrstva se postupné promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří rozpouštědlo ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (4% roztok methanolu v chloroformu) a získá se diastereomer A (2S,4R)-2-(3-hydroxy-l-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propy1-4-methansulfo nyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (413 mg, výtěžek 67,6 %)

IČ(KBr)cm^_1: 1700,1520,1340,1170,900,735

NMR(CDC1₃) δ:

l,51(2H,m), l,70(lH,m), 2,00-2,50(4H,br m),

3,O2(3H,S), 3,15(lH,m), 3,35(lH,m),

3,52(lH,dd,J=14,0, 4,0Hz), 3,78(2H,m), ' 4,23(lH,d,J=l’4,0Hz) , 4,36(lH,m) , 5,24(4H,m),

5,81(lH,br S), 7,49(2H,d,J=8,0Hz),

7,52(2H,d,J=8,0Hz), 8,21(2H,d,J=8,0Hz),

153

8,27(2H,d,J=8,OHz) 5)

Sloučenina uvedená v názvu (319 mg, výtěžek 80,5 g) se získá z výše uvedené sloučeniny (413 mg, 0,67 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-6.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1695,1520,1400,1345,1250,1110,850,735,630

NMR(CDC1₃) δ:

l,50-l,70(4H,m) , 2,35(3H,s), 2,30-2,50(2H,m),

3,00-3,40(3H,m) , 3,78(3H,m), 4,19(lH,s),

4,28(lH,dd,J=15,0 , 8,OHz), 5,19(2H,s), 5,22(2H,s),

5,84(lH,br s), 7,49(2H,d,J=8,OHz) ,

7,52(2H,d,J=8,OHz), 8,22(2H,d,J=8,OHz) ,

8,24(2H,d,J=8,OHz)

Referenční příklad 13 (IR, 5S , 6S)-2-[(2S,4S)-2-(acetylaminomethyl)pyrrolidin-4-ylthio] -6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina

1)

TBSO

K ledem chlazenému roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4 - terč.buty Idimethy ls i loxy- 2-hydroxymethy lpyrro 1 idinu (1,66 g, 5 mmol) v tetrahydrof uranu (10 ml) se přidá pod atmosférou dusíku triethylamin (1,4 ml, 10 mmol) a poté methansulfonyl154 chlorid (0,76 ml, 9,82 mmol). Po 30 minutovém míchání při téže teplotě se smés zředí ledovou vodou (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a získá se surový mesylát. K roztoku výše uvedeného mesylátu v dimethylsulfoxidu (15 ml) se přidá azid sodný (1,10 g, 15,94 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při teplotě 70 “C. Reakční směs se zředí vodou (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-2-azidomethyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin (1,19 g, výtěžek 67 %).

IČ(KBrJcm¹: 2940,2110,1700,1395,1365,1255,1165,1120,840,775

NMR(CDC1₃) 5:

0,07(6H,s), 0,86(9H,s), l,47(9H,s), l,96(2H,m),

3,20—3,60(4H,m), 4,10(1H,m), 4,38(1H,m)

2)

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,19 g, 3,34 mmol) v methanolu (33 ml) se přidá katalyzátor o složení 10 % palladium-uhlík (240 mg) a smés se míchá 1 hodinu pod atmosférickým tlakem vodíku. Katalyzátor se ofiltruje a po odpaření rozpouštědla ve vakuu se získá surový amin. K ledem chlazenému roztoku výše uvedeného aminu v methylenchlorídu (10 ml) se přidá pod atmosférou dusíku triethylamin (0,94

155 ml, 6,74 mmol) a poté acetanhydrid (0,64 ml, 6,78 mmol). Po 1 hodinovém míchání při téže teplotě se reakční směs zředí vodou (100 ml) - a extrahuje se ethylacetátem (1 x 100 ml, 2 x 30 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí postupně 1 N vodným hydrogensíraném draselným, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-2-acetylaminomethyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin (1,18 g, výtěžek 95 %). IČ(KBr)cm^-1: 2920,1695,1655,1550,1395,1360,1250,1160,

1115,835,770

NMR(CDC1₃) 5:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), l,47(9H,s), 1,60-1,90(2H,m), 1,98(3H,S), 3,12(lH,m), 3,25-3,55(3H,m), 4,ll(lH,m) 4,33(lH,m), 7,52(lH,br S)

3) : >-

Výše uvedená sloučenina (1,15 g, 3,09 mmol) se rozpustí v kyslině trifluoroctové (10 ml) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se několikrát destiluje s benzenem, přičemž se získá surový aminoalkohol. K roztoku výše uvedeného aminoalkoholu ve směsi dioxanu (7,5 ml) a vody (2,5 ml) se přidá hydrogenuhličitan sodný (2,6 g, 30,9 mmol) a poté 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (990 mg, 3,10 mmol). Po 3 hodinovém míchání při teplotě místnosti se reakční směs zředí ethylacetátem (150 ml) a postupně se promyje vodou, 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným

156 roztokem chloridu sodného. Po sušeni přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odstraní rozpouštědlo a získá se surový alkohol. K ledem chlazenému roztoku výše uvedeného alkoholu v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá po kapkách a pod atmosférou dusíku triethylamin (0,86 ml, 6,17 mmol) a poté methansulfonylchlorid (0,48 ml, 6,20 mmol). Po 30 minutovém míchání při téže teplotě se reakční směs zředí ethylacetátem (150 ml) a postupně se promyje vodou, 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličtanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromátografi na silikagelu (chloroform-methanol) a získá se (2S,4R)-2-acetylaminomethyl-4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (740 mg, výtěžek 58 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3400,1700,1660,1520,1430,1400,1340,1170,

1110,955,900

NMR(CDC1₃) S:

1,8O(1H,S), 1,95-2,20(lH,m), l,98(3H,s),

2,47(lH,dd,J=8,0, 14,0Hz), 3,05(3H,s),

3,20-3,45(1H,m), 3,45-3,80(2H,m), 4,00-4,25(2H,m),

5,15-5,35(2H,m), 6,82(lH,br s), 7,54(2H,d,J=9,0Hz),

8,25(2H,d,J=9,0Hz)

4)

K výše uvedené sloučenině (690 mg, 1,66 mmol) v roztoku N,N-dimethylformamidu (7 ml) še přidá thioacetát draselný (380 mg, 3,33 mmol) a jodid sodný (370 mg, 2,47 mmol) a směs se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 70 °C. Reakční směs se zředí ledovou vodou (150 ml) a extrahuje se ethylacetátem (1 x 100 ml, 2 x 50 ml). Spojené organické

157 vrstvy se postupně promyjí 10% vodným roztokem siřičitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný’se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4S)-2-acetylaminome thy 1-4-acety lthio-N-p-n i trobenzyloxykarbony lpyrrol idin (560 mg, výtěžek 85 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3330,17 00,1680,1640,1520,1425,1345,1200,1125,

1105,630

NMR(CDC1₃) δ:

l,55-l,90(lH,m), l,96(3H,s), 2,34(3H,s), 2,53(lH,m),

3,10-3,45(2H,m), 3,63(lH,m), 3,88(lH,m),

3,95-4,25(2H,m), 5,25(2H,s), 6,99(lH,br s),

7,54(2H,d,J=9,0Hz), 8,25(2H,d,J=9,0Hz)

5.)

p-nitrobenzyl (IR,5S,6S)-2-[(2S, 4S)-2-acetylaminomethyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR) -1-hydroxyethyl 3-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát (4 20 mg, výtěžek 88 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (270 mg,

0,683 mmol) a p-nitrobenzyl (IR, 5S,6S)-2-difenoxyfosforyloxy-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (430 mg, 0,723 mmol) se získá stejným postupem jako v příkladech 1-1 a 1-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1770,1700,1660,1520,1345,1200,1105

NMR(CDC1₃) δ:

1,28(3H,d,J=7,0Hz), 1,36(3H,d,J=6,OHz) , l,60-2,15(2H,m), l,96(3H,s), 2,59(lH,m),

3.20- 3,45(4H,mj ,. 3,45-3,85(2H,m), 3,90-4,20(2H,m),

4.20- 4,30(2H,m) , 5,10-5,55(4H,m), 6,87(1H,br 5) ,

7,45 —7,75(4H,m) , 8,15-8,30(4H,m)

158

6)

Sloučenina uvedená v názvu (130 mg, výtěžek 64 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (370 mg, 0,53 mmol) stejným způsobem jako v příkladu 1-3.

IČ(KBr)crn^-1: 3400,1755,1660,1600,1550,1390,1285

NMR(D₂0) 5:

1,14(3H,d,J=7,OHZ), 1,21(3H,d,J=6,OHZ), l,66(lH,m), l,96(3H,m), 2,65(lH,m), 3,10-3,45(3H,m),

3,45-3,70(3H,m), 3,70-4,05(2H,m), 4,05-4,30(2H,m) υνλ _max(0,lM MOPS tlumivý roztok, pH7,0): 298 nm( £.=8800)

Referenční příklad 14 (2S,4S)-4-acetylthio-N-terc.butoxykarbonyl-2-[(IR)-3-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-1-methoxyJpropylpyrrolidin 1)

TSSOz,

K roztoku diastereomeru A (2S , 4R)-2-[(IR)-3-azido-l-hydroxy]propyl-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-3 (1,39 g, 3,47 mmol) v methanolu (14 ml) se přidá katalyzátor o složení 10 % palladium-uhlík (140 mg) a smés se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti pod atmosférou vodíku. Katalyzátor se Odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Ke vznikajícímu methanolovému roztoku (14 ml) se přidá di-terc.butyldikarbonát (0,98 g 4,51 mmol) a smés se míchá 1 hodinu· při udržování

159 pH na hodnotě 8 pomocí triethylaminu. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(IR)-3-terc.butoxykarbonylamino-l-hydroxy]propylpyrrolidin (1,05 g, výtěžek 64 %). IČ(KBr)cm^-1: 3440,3320,2970,29 3 0,2350,1680,1550,1470,1410,1280,

1250,1130,

NMR(CDC1₃) δ:

0,04(6H,s), 0,85(9H,s), l,44(9H,s), l,46(9H,s),

1,22—1,98(4H,m), 3,05-3,65(4H,m), 3,77-4,40(3H,m)

2)

TBSOx, ,H

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,05 g, 2,21 mmol) v N,N-dimethylformamidu (6,6 ml) se přidá při teplotě 0 °C a pod atmosférou dusíku hydrid sodný (60%, v olejové suspenzi, 177 mg, 4,43 mmol) a směs se míchá 30 minut při téže teplotě. K reakční směsi se přidá za chlazení ledem methyljodid (0,15 ml, 2,43 mmol) a směs se poté míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidá ethylacetát (100 ml) a poté se promyje postupné vodou (2 x 50 ml) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran.hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[ (IR)- 3-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-1-methoxy]propylpyrrolidin (177 mg, výtěžek 16 %). IČ(KBr)cm^-1: 2930,2850,1700,1460,1400,1360,1250,1170,1110 NMR(CDC1₃) δ :

0,04(6H,s), O,8O(9H,S), l,42(18H,s), 1,10-1,60(2H,m), l,70(lH,m), 2,00(lH,m), 2,79(3H,s), 3,25(3H,s)

3,00-3,50 ( 4H, m) , 3,60-3,90 ( 2H,m) , 4,30(lH,m)·

160

MsO,,

NMe

Boc

OMe

Boc

K roztoku výše uvedené sloučeniny (562 mg, 1,12 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) se přidá 1 M tetrabutylamoniumfluorid (1,23 ml, 1,23 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (100 ml) a postupně se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří rozpouštědlo ve vakuu a získá se surový derivát alkoholu. (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-methansulfonyloxy-2- [(IR)-3-(N-terc. butoxykarbonyl-N-methylamino) -1-methoxy]propylpyrrolidin (510 mg, výtěžek 98 %) se získá z výše uvedeného derivátu alkoholu stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-5.

IČ(KBr)cm^_1: 2970,2930,1695,1480,1460,1400,1365,1170 NMR(CDC1₃) δ:....................... · l,46(9H,s), l,48(9H,s), 1,20-1,50(2H,m),

2,10-2,44(2H,m), 2,86(3H,s), 3,04(3H,s), 3,40(3H,s)

3,20-3,60(4H,m), 3,64-4,06(3H,m)

4)

AcS

NMe

I

Boc

Sloučenina uvedená v názvu (287 mg, výtěžek 59 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (510 mg, 1,09 mmol) stejným způsobem jako v referenčním přikladu 1-6.

IČ(KBr)cm^-1: 2980,2930,1695,1480,1460,1400,1365,1160

NMR(CDC1₃) δ: 1,48(18H,S), l,28-l,64(2H,m), 2,00(lH,m),

161

2,30(lH,m), 2,35(3H,s), 2,86(3H,s), 2,90-3,54(4H,m), 3,40(3H,s), 3,60-3,92(2H,m), 4,08(lH,m)

Referenční příklad 15 (25.45) -4-acetylthio-2-[(IS) - l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)py rrolidin a (25.45) -4-acetylthio-2-[(IR)-l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino) propyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) py rrolidin

K ledem chlazenému roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2- [(IR,S)-1,3 -dihydroxy ] propylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-2 (13,79 g, 36,71 mmol) v methylenchloridu (370 ml) se přidá za chlazení ledem a pod atmosférou dusíku triethylamin (15,35 ml,

110,1 mmol), dimethylaminopyridin (448 mg, 3,67 mmol) a p-toluensulfonylchlorid (10,5 g, 55,07 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti.

Methylenchloridová vrstva se oddělí a promyje se postupně 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[[(IS)-l-hydroxy-3-p-toluensulfonylóxy]propylJ pyrrolidin (2,56 g, výtěžek 13 %, méně polární isomer),

162 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-[[(lR)-l-hydroxy-3-p-toluensulfonyloxyjpropyljpyrrolidin (4,8 g, výtěžek 25 %, polární isomer), smés (4,1 g, výtěžek 21 %) a výchozí látky (3,28 g, regenerace 24 %).

Derivát (ÍS) (méně polární isomer)

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,2930,2850,1690,1660,1600,1460,1400, 1360,1250,1180

NMR(CDCl₃) δ:

0,05(6H,s), 0,85(9H,s), l,44(9H,s), 1,50-1,70(2H,m),

1,75-2,00(2H,m), 2,43(3H,s), 3,20(1H,dd,J=3,5, 11,7Hz),

3,40-3,70(2H,m), 3,92(1H,dd,J=8,1, 16,OHZ),

4,10-4,40(3H,m), 7,33(2H,d,J=8,3Hz), 7,78(2H,d,J=8,3Hz) Derivát (IR) (polární isomer)

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,2930,2850,1690,1670,1600,1460,1400 , 1360,1250,1180

NMR(CDC1₃) δ:

0,04(6H,s), O,84(9H,S), l,43(9H,s),

1,40-2,00(4H,m), 2,43(3H,s), 3,20(lH,dd,J=3,6, 11,5Hz), 3,48(lH,m), 3,74(lH,m), 4,18-4,23(4H,m), . .... 7,3 2 ( 2H, d, J=7,3Hz ) , 7,77 ( 2H, d , J=7,3Hz ) .......

2)

HO/,,

PNZ

OH

NMe

PNZ

K 40% roztoku methylaminu v methanolu (37 ml) se při teplotě místnosti přidá roztok (ÍS) derivátu výše uvedené sloučeniny (2,56 g, 4,83 mmol) v methanolu (10 ml) a směs se zahřívá v uzavřené trubici na 120 ’C (venkovní teplota) po dobu 30 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a zahusti se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v methanolu (40 ml) a přidá se roztok 4 ,.6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidinu (1,54 g, 4,83 mmol) v chloroformu (10 ml)'. Směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti, při udržování

163 pH triethylaminem na hodnotě 8. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (100 ml). Roztok se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran horečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se rozpustí v methanolu (5 ml). Poté se k roztoku přidá roztok 2,6 N methanolického hydrochloridu a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v methanolu (40 ml) a poté se upraví triethylaminem pH na hodnotu 8. K ledem chlazenému roztoku se přidá roztok 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidinu (1,54 g, 4,83 mmol) v chloroformu (10 ml) a směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (100 ml). Roztok se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát) a získá se ( 2S, 4R)-4-hydroxy-2-[[(IS)-l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylaino) ]propyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) pyrrolidin (1,92 g, výtěžek 75 %).

(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(IR)-l-hydroxy-3-(N-p-nitrobenzyloxy karbony 1-N-methylamino) ]propyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) pyrrolidin (1,75 g, výtěžek 78 %) se získá z výše uvedeného (IR) derivátu (2,23 g, 4,20 mmol) stejným způsobem.

(IS) -derivát

IČÍKBrjcm’¹: 3390,2940,1680,1600,1520,1400,1340,1310,1150 NMR(CDC1₃) δ:

1,50-2,20(4H,m), 2,95(3H,S), 3,30-3,90(5H,m),

4,00-4,30( 2H,m) , 5,17-5,32(4H,m), 7,50-7,65(4H,m),

8,20-8,25(4H,m) (IR)-derivát

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1670,1610,1520,1440,1400,1340,1320,1150 NMR(CDC1₃) δ:

164 l,40(lH,m), l,55(lH,m), l,72(lH,m), 2,05(lH,m),

3,20-3,60(4H,m), 3,32(3H,s), 3,70-4,05(2H,m), 4,15(lH,m), 5,10-5,35(4H,m), 7,50-7,70(4H,m),

8,10-8,30(4H,m)

3)

AcS^

(1S)-derivát sloučeniny uvedené v názvu (1,46 g, výtěžek 83 %) se získá z výše uvedeného (1S)-derivátu (1,92 g, 3,61 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 4-3.

(IR)-derivát sloučeniny uvedené v názvu (1,29 g, výtěžek 82 %) se získá z výše uvedeného (IR)-derivátu (1,75 g, 3,29 mmol) stejným způsobem.

(1S)-derivát

IČ(KBr)cm^_1: 3440,2950,1700,1610,1520,1430,1400,1340,1210,1110 NMR(CDC1₃) S:

1.40- 1,80(3H,m), 2,34(3H,S), 2,50(lH,m), 2,96(3H,s)

3,10-4,30(7H,m), 5,10-5,30(4H,m), 7,43-7,60(4H,m),

8,18-8,30(4H,m) (IR)-derivát

IČ(KBr)crn^_1: 3450,2950,1700,1610,1520,1430,1400,1350

NMR(CDC1₃) δ:

1,30-2,10(4H,m), 2,34(3H,S), 2,96(3H,s),

3,00-3,60(3H,m), 3,60-4,30(4H,m), 5,10-5,36(4H,m),

7.40- 7,60(4H,m), 8,18-8,30(4H,m)

Referenční příklad 16 (2S,4S)-4-acetylthio-2-[[(1S)-1-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbonylrN-methylamino)ethyl}-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin

165

1)

K ledem chlazenému roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-vinyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (1,44 g, 4,40 mmol) ve směsi dioxanu a vody 2 : 1 (21 ml) se přidá N-bromsukcinimid (1,57 g, 8,79 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem (100 ml) a postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatograf i i na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (4R, 5S, 7R)-4-brommethyl-7-terc.butyldimethylsiloxy-l-aza-3-oxobicyklo[3,3,0]oktan-2-on (1,20 g, výtěžek 78 %). IČ(KBr)cm^-1: 2950,2920,2880,2850,1750,1460,1390,1360,

1240,1210,1170

NMR(CDC1₃ ) & :

0,07(6H,s), 0,88(9H,s), l,60(lH,m), 2,03(lH,m),

3,05(lH,dd,J=1,6 , 12,0Hz), 3,48(1H,dd,J=8,6, 10,3Hz),

3,61(lH,dd,J=4,5, 10,3Hz), 3,82(lH,dd,J=5,5, 12,0Hz),

4,06(lH,m), 4,47(lH,m), 4,56(lH,m)

2)

HO/,

K 40%. roztoku methylaminu v methanolu (58 ml) se přidá při teplotě místnosti roztok výše uvedené sloučeniny (2,69 g,

166

7,67 mmol) v methanolu (12 ml) a směs se zahřívá v uzavřené trubici na 120 ’C (vnější teplota) 30 minut. Reakční směs se ochladí na teploru místnosti a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá methanol (30 ml) a 20% vodný roztok hydroxidu draselného (15 ml) a směs se míchá přes noc pod refluxem. Pomocí konc. kyseliny chlorovodíkové se upraví pH směsi na hodnotu 9 a přidá se roztok 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidinu (4,89 g, 15,3 mmol) v chloroformu (10 ml). Reakční smés se míchá 3 hodiny při udržování pH pomocí 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného na hodnotě 9. Roztok se zahustí ve vakuu na cca 20 ml a zředí se ethylacetátem (200 ml). Roztok se postupně promyje 2 N kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran hořečnatý se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4R)-4-hydroxy-2-[((1S)-l-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-N-methylamino)]ethyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (699 mg, výtěžek 17 %).

IČÍKBrycm¹: 3430,2950,1700,1610,1520,1430,1410,1350 NMR(CDC1₃) S:

1,90-2,20(2H,m),

3,70—3,90(2H,m),

5,15-5,30(4H,m),

3)

3,10(3H,s), 3,30-3,60(3H,m), 4,10(lH,m), 4,45(lH,m),

7,45-7,60(4H,m), 8,15-8,30(4H,m)

AcS.^_ b

Μ K a a

PNZ °^H PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (675 mg, výtěžek 87 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (699 mg, 1,35 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 4-3.

IČ(KBr)cm^-1: 3440,2940,1700,1610,1520,1400,1350

167

NMR(CDC1₃) δ:

1,90-2,20(2H,m), 2,33(3H,s), 3,08(3H,s),

3,20-4,30(7H,m), 5,15-5,30(4H,m), 7,40-7,60(4H,m), 8,10-8,30(4H,m)

Referenční příklad 17 ( 2S , 4S)-4-acetylthio-2-[[(IR) -l-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxy karbony 1-N-methylamino) ethyl ] -N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) pyrrolidin

1)

s (2S, 4R) -terč. butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2-[ C (IR)-l-hydroxy-2-p-toluensulfonyloxy jethyllpyrrolidin (3,14 g, výtěžek 65 %) se získá z (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2- (1,2-dihydroxyethyl) -4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 3-1 (3,40 g, 9,40 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 15-1. IČ(KBr)cín'’¹: 3430,2960,2940,2860,1700,1670,1600,1410,1370,

1260,1190,1180,1100

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,85(9H,s), 2,44(3H,s), 3,27(lH,m), 4,13(lH,m), 4,30(lH,m), 7,78(2H,d,J=8,3Hz) l,42(9H,s), 1,90-2,05(2H,m), 3,46(lH,m), 3,90-4,05(3H,m), 7,34(2H,d,J=8,3Hz),

2)

HO.

PNZ i

OH

Nívle

I i

PNZ

168 (2S,4R)— 4-hydroxy-2-[[(IR)-l-hydroxy-2-(N-p-nitrobenzyloxykarbony1-N-methylamíno)ethyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (2,80 g, výtěžek 89 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (3,14 g, 6,09 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 15-2.

IČ(KBr)cm^-1: 3430,2950,1700,1610,1520,1430,1400,1350

NMR(CDC1₃) S:

l,90-2,40(2H,m), 3,07(3H,s),

3,30-3,55(2H,m), 3,75(lH,m), 4,50(lH,m), 5,20-5,35(4H,m), 8,15-8,30(4H,m)

3,18(lH,m),

4,00-4,30(2H,m), 7,40-7,60(4H,m)

3)

AcS

NMe

I

PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (2,00 g, výtěžek 64 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (2,80 g, 5,40 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 4-3. ------------------IČ(KBr)cm^-1: 3420,2940,1700,1610,1520,1430,1400,1350,1110 NMR(CDC1₃) δ:

2,10(lH,m), 2,34(3H,s), 2,35(lH,m), 3,05(3H,s),

3,00-3,30(2H,m), 3,40-4,40(5H,m), 5,10-5,30(4H,m),

7,45-7,60(4H,m), 8,15-8,30(4H,m)

Referenční příklad 18

Diastereomer A (2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrro- £ lidinu

1)

169

T3SCU

i □cc

K 1,6 M roztoku methyllithia v etheru (5,5 ml, 8,8 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) se přidá pod atmosférou dusíku a při teplotě -70 °C (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonýl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(formylmethyl)pyrrolidin (1,67 g, 4,86 mmol) a směs se míchá 2 hodiny při téže teplotě. Ke směsi se přidá při teplotě pod -70 °C nasycený vodný roztok chloridu amonného (3 ml) a poté se směs ohřeje na teplotu místnosti. Reakční směs se vlije do směsi vody (200 ml) a 1 N vodného roztoku hydrogensíranu draselného (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromátografi.í na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-hydroxypropyl)pyrrolidinu (890 mg, výtěžek 51 %) a diastereomer B (350 mg, výtěžek 20 %).

170

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2930,1695,1675,1400,1365,1250,1165,1115,

835,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87(9H,s), 1,19(3H,d,J=6,OHz),

1.30- 1,60 ( 2H.,m) , l,46(9H,s), l,75(lH,m),

2,00-2,40(2H,m), 3,37(2H,m), 3,88(lH,m), 4,07(lH,m), 4,33(lH,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^-1: 3 44 0,293 0,1695,1675,1395,1365,1250,1160,1120 ,

835,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87(9H,s), 1,17(3H,d,J=6,OHz),

1.30- 1,60(2H,m), 1,45 & l,46(totál. 9H,každý s), l,71(lH,m), 2,00-2,20(2H,m), 3,34(2H,m), 3,73(lH,m),

4,20-4,40(2H,m)

2)

Boc

K ledem chlazenému roztoku diastereomeru A výše uvedené sloučeniny (890 mg, 2,48 mmol) v tetrahydrofuranu (6 ml) se přidá pod atmosférou dusíku trifenylfosfin (980 mg, 3,74 mmol) a ftalimid (550 mg, 3,74 mmol) a poté diethylazodikarboxylát (0,6 ml, 3,81 mmol). Směs se míchá 15 minut při téže teplotě a poté přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-ftalimid)propylpyrrolidinu (1,00 g, výtěžek 83’%).IČ(KBr)cm^-1: 2930,1775,1710,1695,1470,1390,1365,1250,1165,

171

1030,835,775,720

NMR(CDC1₃) δ:

0,00(6H,s), 0,31(9H,s), 1,39(3H,m),

1,47 & l,50(totál. 9Η,každý s) , 1,60-2,60(4Η,m),

3,20-3,45(2H,m), 3,80-4,10(lH,m), 4,20-4,50 ( 2Η, m) , 7,70(2H,m), 7,80(2H,m)

3)

TBSO,

Boc Boc

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,00 g, 2,05 mmol) v ethanolu (20 ml) se přidá hydrazinmonohydrát (0,8 ml, 16,49 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surový amin. K roztoku výše uvedeného aminu ve směsi dioxanu (6 ml) a vody (3 ml) se přidá triethylamin (1,15 ml, 8,25 mmol) a poté 2-terc.butoxykarbonylthio-4,6-dimethylpyrrolidin (990 mg,

4,12 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, poté se přidá ethylacetát (150 ml) a postupně se promyje 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[2-terc.butoxykarbonylamino)propyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (590 mg, výtěžek 63 %) ·

IČ(KBr)cm^-1: 3340,2920,1690,1510,1455,1390,1360,1250,1170,

1130,1070,835,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,17(3H,d,J=6,0Hzj, l,43(9H,s), l,46(9H,s), 1,60-2 , L0 (*4H,m) , 3,30(2H,m),

172

3,59(lH,m), 3,70-4,10(1Η,m),

4,30(lH,m), 4,68(lH,m)

4)

Diastereomer A (2R,4R)-4-hydroxy-2-[2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (490 mg, výtěžek 67 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (650 mg, 1,42 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 11-2 a 6-6.

IČ(KBr)cm^_1: 3450,2940,1700,1610,1520,1405,1350,1110, 1015,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

1,05-1,30(3H,m), 1,40-2,40(5H,m), 2,70-2,90(3H,m),

3,40-3,75(2H,m), 4,04(lH,m), 4,30(lH,m), 4,42(lH,m),

5,21(4H,s), 7,50(4H,d,J=8,0Hz), 8,21(4H,d,J=9,0Hz)

5)

PNZ PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (480 mg, výtěžek 88 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (490 mg, 0,949 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 6-7 a 6-8.

IČ(KBr)cm^_1: 3420,2930,1700,1605,1520,1400,1345,1120,

850,735

NMR(CDC1₃) δ:

1,00-1,30(3H,m) , 1,40-2,60 (.4.H ,m) , 2,33(3H,s)

2,78(3H,s), 3,14(lH,dd,J=8,0, 11,0Hz), 3,83(2H,m),

4,07(lH,m), 4,30(lH,m), 5,10-5,30(4H,m),

7,51(4H,ď,J=8,0Hz), 8,22(4H,d,J=9,0Hz)

173

Referenční příklad 19

Diastereomer B ( 2R, 4S )-4-acetylthio-2- [.2-( N-methy1-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino ) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbony Ipyrrolidinu ^1} TSSO,.

Boc

Diastereomer B (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-( 2-f talimidopropyl )pyrrolidinu (3 20 mg, výtěžek 51 %) se získá z (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc .butyldimethylsiloxy-2-( 2-hydroxy) propy Ipyrrolidinu připraveném v referenčním přikladu 18-1 (460 mg, 1,28 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 18-2.

IČ(KBr)cm^_1: 2930,1775,1710,1695,1465,1395,1365,1255,1165, 1100,1080,835,775,720

NMR(CDC1₃) 5:

0,03(6H,s), O,81(9H,S), l,40(9H,s),

1,51(3H,d,J=7,0Hz), 1,55-1,85(2H,m), 2,06(lH,m),

2,66(lH,m), 3,30-3,50(2H,m), 3,74(lH,m),

4,25-4,50(2H,m), 7,70(2H,m), 7,81(2H,m)

2)

AcS«^

I I

PNZ ^PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (80 mg, výtěžek 22 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (310 mg, 0,634 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 18-3, 18-4 a 18-5. IČ(KBr)cm^_1: 2940,1695,1605,1520,1400,1345,1325,1120,

850,735

174

NMR(CDC1₃) δ:

1,14(3H,d,J=7,OHz), l,32(lH,m), l,68(lH,m),

2,30-2,70(2H,m), 2,34(3H,s), 2,89(3H,s), 3,20(lH,m),

3,60-3,90(2H,m), 4,09(lH,m), 4,20-4,45{lH,m),

5,10-5,30(4H,m), 7,51(4Η,d,J=8,ΟΗζ),

8,22(4H,d,J=9,ΟΗζ)

Referenční příklad 20

Diastereomer A a diastereomer B (2R,4S)-N-allyloxykarbony1-2-[2-(N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-3-hydroxypropyl]-4-(trifenylmethylthio)pyrrolidinu

1)

COO^^· COO^⁵·

K roztoku (2R,4S)-N-allyloxykarbonyl-2-(2-allyloxykarbonylamino-2-methoxykarbonylethyl)-4-(trifenylmethylthio)pyrro-- lidinu připraveném v referenčním příkladu 2-2 (810 mg, 1,32 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidá pod-atmosférou dusíku chlorid litný (100 mg, 2,58 mmol), natriumborohydrid (110 mg, 2,59 mmol) a ethanol (5 ml) a smés se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se za chlazeni ledem okyselí 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a poté se odpaří ve vakuu organické rozpouštědlo. Zbývající vodný roztok se extrahuje methyleňchloridem (1 x 40 ml, 2 x 20 ml) a spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4S)-N-allylcxykarbonyl-2- (^:2-al'lyÍoxykarbonylamino-3-hydroxypropyl )-4-( trif enylmethylthio)pyrrolidin (440 mg, výtěžek 57 %).

175

IČ(KBr)cm^-1: 3420,1700,1530,1445,1410,1330,1255,1200,1060,

990,925,740,700

NMR(CDC1₃) δ :

1.40- 2,40(5H,m), 2,60-3,00(3H,ro) , 3 , 40-3,80(4H,ro) ,

4.40- 4,65(4H,m), 5,10-5,40(4H,m), 5,56(lH,m), 5,86(2H,m), 7,10-7,60(15H,m)

coo/^ C00

K roztoku výše uvedené sloučeniny (440 mg, 0,750 mmol) v N,N-dimethylformamidu (1,5 ml) se přidá pod atmosférou dusíku imidazol (110 mg,' 1,6 2 mmol) a poté terč.butyldimethylchlorsilan (170 mg, 1,13 mmol) a smés se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se vlije do vody (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (1 x 40 ml, 2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se ( 2R, 4S)-N-allyloxykarbonyl-2-[2-allyloxykarbonylamino-3-(terč.butyldimethylsiloxy)propy1 ] -4-(trif eny Imethy lthio )pyrrol idin (480 mg, výtěžek 91 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3440,3320,2950,2930,1720,1700,1500,1440,1400,1325,

1250,1095,990,920,835,700

NMR(CDC1₃) δ:

0,03(6H,s), 0,87(9H,s), 1,40-1,70(2H,m),

2,00-2,50(2H,m), 2,60-3,00(2H,m), 3,45-3,80(4H,m),

4,40-4,65(4H,m), 4,77(lH,m), 5,15-5,40(4H,m),

5,88(lH,m), 7,20-7,60(15H,m)

3)

176

COO ZQQ^R

Surový methylderivát se získá z výše uvedené sloučeniny (470 mg, 0,670 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 11-2. K roztoku methylderivátu v tetrahydrofuranu (2,5 ml) se přidá 1 M tetrabutylamoniumfluorid v tetrahydrofuranu (0,8 ml, 0,8 mmol) a smés se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbylý vodný roztok se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se postupně promyje 1 N hydrogensíranem draselným, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušeni přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer A sloučeniny uvedené v názvu (190 mg, výtěžek 47 %) a diastereomer B (190 mg, výtěžek 47 %).

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^_1: 3440,2940,16 95,14 85,1445,1405,13 3 0,1200,1140,

990,920,740,700

NMR(CDC1₃) δ:

1,20-2,50(5H,m), 3,40-3,75(3H,m), 5,15-5,40(4H,m),

Diastereomer B:

2,60-3,00(3H,m), 2,81(3H,s), 4,ll(lH,m), 4,40-4,70(4H,m), 5,91(2H,m), 7,20-7,55(15H,m)

IČ(KBrJcm¹: 3450,2940,1695,1485,1445,1400,1330,1200,1160,

990,920,740,700

NMR(CDC1₃) δ:

I., 20-2,50( 5H,m) 3,4'5-3', 70 ( 3H, m) 5,15-5,45(4H,m)

2,60-2,90(3H,m), 2,86(3H,s), 4,25(lH,m), 4,35-4,70(4H,m), 5,88(2H,m), 7,20-7,60 (15H , m).

177 Referenční příklad 21 ( 2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-methyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propy1]-N-p-nitrobenzyloxykarbonyIpyrrolidin 1)

HO-,..

Boc

Surový dimethylderivát se získá z (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2-( 2-ethoxykarbonyl-2-methyl)ethylpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 6-.2 (15,84 g, 38,1 mmol)) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 6-2. K roztoku dimethylderivátu v tetrahydrofuranu (150 ml) se přidá 75% vodný roztok tetrabutylamoniumfluoridu (15,94 g, 45,7 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 1,5 hodiny. Reakční směs se zahustí ve vakuu a extrahuje se ethylacetátem (700 ml). Organická vrstva se postupně promyje vodou, 1 N vodným roztokem hydrodensíranu draselného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý Síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-( 2-ethoxykarbonyl-2-methyl )propyl-4-hydroxypyrrolidin (11,33 g, výtěžek 94 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2980,1725,1695,1670,1475,1395,1365,1250,1170, 1140,1025,860,770

NMR(CDC1₃) δ:

l,23(6H,s), 1,27(3H,t,J=7,OHz), l,47(9H,s), l,60-l,80(2H,m), 1,80-2,25(3H,m),

3,35(lH,dd,J=4,0, 8,0Hz), 3,52(lH,m), 4,05(lH,m)

4,13(2H,q,J=7,0Hz), 4,38(lH,m)

2)

178

BzlO,.

COOEi

Boc

K rztoku výše uvedené sloučeniny (13,09 g, 41,5 mmol) v Ν,N-dimethylformamidu (100 ml) se přidá pod atmosférou dusíku hydrid sodný (60%, v olejové suspenzi, 2,0 g, 50 mmol) a směs * se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Ke směsi se přidá tetrabutylamoniumjodid (1,53 g, 4,14 mmol) a benzylbromid “ (9,9 ml, 83,23 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a přes noc při teplotě 70 °C. Reakční směs se vlije do ledové vody (500 ml) a 1 N vodného roztoku hydrogensíranu draselného (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí 10% vodným roztokem siřičitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-4-benzyloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2-(2-ethoxykarbonyl-2-methyl)propylpyrrolidin (10,44 g, výtěžek 62 %).

IČCKBrJcm¹: 3430,2970,1725,1695,1480,1455,1395,1365,1170,

1140,1110,865,740

NMR(CDC1₃) 6:

l,22(6H,s), 1,25(3H,t,J=7,0Hz), l,47(9H,s), l,60-l,80(2H,m) , 1,90-2,40 ( 2H ,m) , 3,30(lH,m),

3,45-3,95(lH,m), 3,95-4,20(4H,m), 4,47(2H,m),

7,25-7,50(5H,m)

3)

BzlO

NH

Boc

179

K roztoku výše uvedené sloučeniny (10,44 g, 25,74 mmol) v ethanolu (100 ml) se přidá 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (52 ml, 52 mmol) a směs se refluxuje 3 hodiny. Ethanol se , odpaří ve vakuu a zbytek se promyje diethyletherem. K vodné vrstvě se za chlazení ledem a míchání přidá 1 N kyselina chlorovodíková (52 ml, 52 mmol) a směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se postupně promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surová karboxylové kyselina. K roztoku karboxylové kyseliny v terč.butanolu (80 ml) se přidá triethylamin (4 ml, 28,70 mmol) a poté azid kyseliny difenylfosforečné (6,2 ml) a směs se refluxuje přes noc. K reakční směsi se přidá terč.butanol (50 ml) a směs se refluxuje 3 dny. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a ke zbytku se přidá ethylacetát (600 ml) a organická vrstva se postupně promyje 1 N vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografii na silikagelu (methylenchlorid-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-4-benzyloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2- ( 2-terc. butoxykarbonylamino-2-methyl)propylpyrrolidin (6,49 g, výtěžek 56 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3340,2970,1710,1690,1500,1390,1360,1245,1160, 1070,865,770,735,695 l,34(3H,s), 1,43(9H,S), l,48(9H,s), l,86(lH,m), 2,04(lH,m), 2,23(lH,m),

3,40-3,95(lH,m), 3,95-4,20(Η,m),

4,40-4,70(2H,m), 5,30-5,60(1H,m), 7,20-7,50(5H,m)

NMR(CDC1₃) δ:

l,30(3H,s), l,68(lH,m), 3,35(lH,m),

4)

180

Boc Boc

K roztoku výše uvedené sloučeniny (4,61 g, 10,3 mmol) v methanolu (90 ml) se přidá katalyzátor o složení 10 % palladium-uhlík (4,6 g) a mravenčan amonný (3,25 g, 51,5 mmol) a směs se refluxuje. Každou hodinu se dodatečně přidá mravenčan amonný (3,25 g, 51,5 mmol) a směs se refluxuje celkem 8 hodin. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Ke zbytku se přidá ethylacetát (400 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se ve vakuu odpaří rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbony1-2-(2-terc.butoxykarbonylamino-2-methyl)propyl-4-hydroxypyrrolidin (1,74 g, výtěžek 47 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3430,2980,1715,1695,1680,1505,1455,1405,1365, í 1255,1170,1070,775

NMR(CDC1₃) δ:

l,25-l,40(6H,m), l,43(9H,s), l,48(9H,s), l,60-l,95(3H,m), T,95-2,30(2H,m), 3,30-3,70(2H,m), 4,03(lH,m), 4,40(lH,m), 4,57 & 5,50(totál. 1H,každý br s)

5)

HO z,.

PNZ PNz

K roztoku výše uvedené sloučeniny (140 mg, 0,391 mmol) v methylenchloridu (1 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (1 ml) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a směs se destiluje néko181 likrát s benzene -a—získá -se-surový amin K rozteku aminu ve směsi dioxanu (0,9 ml) a vody (0,3 ml) se přidá hydrogenuhličitan sodný (330 mg, 3,93 mmol) a poté 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobehzyloxykarbonylthio)pyrimidin (250 mg, 0,783 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti a poté přes noc při teplotě 50 ”C. K reakční směsi se přidá ethylacetát (30 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou,

N hydrogensíranem draselným, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Po sušení přes bezvodý síran sodný se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se ( 2R,4R)-4-hydroxy-2-[2-methyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (160 mg, výtěžek 79 %).

IC(KBr)cm *·: 3420,2940,1690,1605,1520,1430,1405,1345,1260, ' ·

1210,1090,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

1,36(3H,S), 1,39(3H,S), 1,60-2,00(3H,m),

2,10-2,30(2H,m), 3,30-3,70(2H,m), 4,12(lH,m),

4,47(lH,m), 5,00-5,40(4H,m), 6,45(lH,s), 7,50(4H,m), 8_z20(4H,m)

6)

AcS^

PNZ PNZ

Sloučenina uvedená v názvu ( 230 mg, výtěžek 80 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (260 mg, 0,503 mmol) stejným postupem jako v referenčních příkladech 6-7 a 6-8.

IČ(KBr)cm^_1: 3340,2970,1725,1695,1605,1520,1430,1400,1345,

1265,1210,1105,1095,855,740

NMR(CDC1₃) δ:

l,36(3H,s), l,37(3H,s), 1,60-1,90 ( 2H , m) ,. 2,1-7 (1H, m) ,

2,35(3H,s), 2,62(lH,m), 3,28(lH,m), 3,80-4,20(3H,m),

182

5,05-5,35(4H,m), 6,36(lH,s), 7,49(4H,m), 8,21(4H,m)

Referenční příklad 22 (2R,4S)-4-acetylthio-2-[2-methyl-2-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolídin 1)

BzlO>

Boc

Nlvle

I

Boc (2R,4R)-4-benzyloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2-[2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-2-methýljpropylpyrrolidin (880 λ výtěžek 95 %) se získá z (2R,4R)-4-benzyloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2- (2-terc.butoxykarbonylamino-2-methyl)propylpyrro lidinu připraveném v referenčním příkladu 21-3 (900 mg, 2,01 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 11-2. IČ(KBr)cm^-1: 3440,2970,1695,1455,1390,1365,1250,1160,1120 NMR(CDC.l₃) δ:

l,40(6H,s), l,46(9H,s), l,47(9H,s), 1,80-1,95(2H,m),

2,05-2,60(2H,m), 2,84(3H,s), 3,32(lH,m),

3,40-3,90(lH,m), 3,90-4,20(2H,m), 4,40-4,60( 2H,m) ,

7,25—7,40(5H,m)

2)

HO,,.

Boc Boc ( 2R, 4R.)-N-terc.butoxykarbony 1-2-[ 2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamíňo)-2-methyl]propyl-4-hydroxypyrrolidin (610 mg, výtěžek 86 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (880 mg,

2,36 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-4. IČ(KBr)cm^_1: 3450,2980,1695,1480,1455,1390,1365,1250,1170,

1120,865,770 „

NMR(CDC1₃) δ:

l,41(3H,s), l,42(3H,s), l,46(9H,s), l,47(9H,s),

1,65-2,20(4H,m), 2,35(lH,m), 2,85(3H,s), 3,35(lH,m), 3,48(lH,m), 4,04(lH,m), 4,37(lH,m)

3)

PNZ PNZ ( 2R,4R)-4-hydroxy-2-[2-(N-methy1-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (420 mg, výtěžek 48 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (610 mg, 1,64 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-5.

IČ(KBr)cm^-1: 3440,2940,1695,1605,1520,1400,1340,1190, 1110,855,735

NMR(CDC1₃) δ:

1,25-1,60(6H,m), 1,60-2,40(5H,m),

2,92 & 2,98(totál. 3H,každý s), 3,40(lH,m),

3,57(lH,m), 4,ll(lH,m), 4,34(1H,m), 5,10-5,30(4H,m),

7,51(4H,d,J=8,0Hz), 8,21(4H,d,J=8,OHz)

4)

PNZ PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (390 mg, výtěžek 78 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (450 mg, 0,348 mmol) stejným

184 způsobem jako v referenčním příkladu 21-6.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1695,1605,1520,1400,1345,1205,

1120,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

1.20- 1,70(2H,m), l,44(6H,s), 2,00-2,50(2H,m), 2,32(3H,s), 2,97(3H,s), 3,07(lH,m), 3,77(lH,m),

3,85-4,20(2H,m), 5,10-5,30(4H,m), 7,45-7,60(4H,m),

8.20- 8,30(4H,m)

Referenční příklad 23 (2R,4S)-4-acetylthio-2-[3-methyl-3-(p-nitrobenzyloxykarbonylamino)butyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin 1)

TBSO-,

Boc

COOEt

K ledem chlazenému roztoku ethyl diethylfosfonoacetátu (ϊ,1 ml, 5,34 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá pod atmosférou dusíku hydrid sodný (60%, v olejové suspenzi, 220 mg, 5,5 mmol) a směs se míchá 30 minut při téže teplotě. K ledem chlazené reakční směsi se přidá roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(formylmethyl)pyrrolidinu (1,72 g, 5,01 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Reakční směs se vlije do směsi ledové vody (200 ml) a 1 N vodného roztoku hydrogensíranu draselného (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se postupné promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou'chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykařbonyl-4-terc.butyldime- 185 thylsiloxy-2-[(E)-3-ethoxykarbonylallyllpyrrolidin (1,98 g, výtěžek 96 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3430,2930,1725,1700,1660,1475,1465,1395,

1365.1320.1260.1160.1115.840.775

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,29(3H,t,J=7,OHz), l,46(9H,s), l,72(lH,m), l,96(lH,m), 2,40(lH,m), 2,50-2,80(lH,m), 3,30-3,60(2H,m), 4,03(lH,m),

4,19(2H,q,J=7,OHz), 4,29(lH,m), 5,85(1H,d,J=16,OHz), 6,86(lH,m)

2)

TBSO,.

-^H \ Ui/^/COOEt I

Boc ( 2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-ethoxykarbonylpropyl)pyrrolidin (1,83 g, výtěžek 97 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,88 g, 4,55 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 6-1.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,1735,1695,1470,1460,1390,

1365.1250.1170.1110.1060.1030.835.775

NMR(CDC1₃) 5:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,25(3H,t,J=7,OHz),

1.30- 1,90(5H,m) l,45(9H,s), l,98(lH,m), 2,31(2H,m),

3.30- 3,60(2H,m), 3,87(lH,m), 4,12(2H,q,J=7,OHz),

4,31(lH,m)

3)

TBSO.,.

Boc (2R,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyIdimethylsi186 loxy-2-(3-éthoxykarbonyl)butylpyrrolidin (1,56 g, výtěžek 83 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,81 g, 4,35 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 6-2.

IČ(KBrJcm'¹: 3440,2930,1735,1695,1460,1390,1365,1255,1160,

1130,1110,1025,900,835,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,15(3H,d,J=7,OHz),

1,25(3H,t,J=7,OHz), 1,35-1,50(1H,m), l,45(9H,s),

1,55-1,90(4H,m), l,96(lH,m), 2,40(lH,m),

3,30—3,55(2H,m), 3,83(lH,m), 4,12(2H,q,J=7,0Hz), 4,30(lH,m)

(2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(3-ethoxykarbonyl-3-methyl)butyl-4-hydroxypyrrolidin (1,12 g, výtěžek 95 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,54 g, 3,58 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-1.

IČ(KBr)cm^-1: 3430,2970,1730,1695,1670,1480,1455,1395,1365,

1250,1165,860,770

NMR(CDC1₃) δ:

l,16(6H,s),

1,46(9H,S),

3,37(lH,m),

4,11(2H,q,J=7,0Hz), 4,38(lH,m)

5)

1,24(3H,t,J=7,0Hz), 1,30-1,60(2H,m), 1,65-2,00(4H,m), 2,00-2,20(1H,m), 3,54(lH,m), 3,87(lH,m

Boc

COOtt

187 ( 2R , 4R)-4-benzyloxy-Ň-terc.butoxykarbonyl-2-(3-ethoxykarbonyl-3-methylbutyl)pyrrolidin (870 g, výtěžek 63 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,09 g, 3,31 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-2.

IČ(KBrJcm'¹: 3430,2980,1730,1695,1475,1455,1395,1365,

1250,1170,740,700

NMR(CDC1₃) 5:

l,16(6H,s), 1,23(3H,t,J=7,OHz), 1,30-2,90(5H,m), l,46(9H,s), 2,15(lH,m), 3,34(lH,m), 3,50-3,95(2H,m), 4,00-4,20(lH,m), 4,10(2H,q,J=7,OHz),

4,40-4,60(2H,m) , 7,25-7,45(5H,m)

6)

(2R, 4R)-4-benzyloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2-( 3-terc.butoxykarbonylamino-3-methyl)butylpyrrolidin (730 mg, výtěžek 78 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (850 mg, 2,03 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3350,2970,1715,1695,1500,1455,1390,1365, 1250,1170,1110,1070,740,700

NMR(CDC1₃) δ:

l,23(3H,s), 1,25(3H,S), l,42(9H,s), l,46(9H,s), l,40-l,70(3H,m), 1,70-1,95(2H,m), 2,15(lH,m),

3,35(lH,m), 3,45-4,00{2H,m), 4,07(lH,m),

4,38(1H,br s), 4,40-4,60(2H,m), 7,25-7,45(5H,m)

Soc

188 (2R,4R)-N-terc.butoxykarbony1-2-(3-terč.butoxykarbony1amino-3-methyl)butyl-4-hydroxypyrrolidin' (210 mg, výtěžek 37 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (700 mg, 1,51 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-4. Výchozí látky se znovu získají (270 mg, 39 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3450,3350,2970,1695,1680,1500,1455,1400,1365,

1250,1170,1070,920,375,770,735

NMR(CDC1₃) δ:

l,24(3H,s), 1,25(3H,S), l,42(9H,s), l,47(9H,s),

1,50-1,70(4H,m) , 1,70-2,00(4H,m), 2,05(lH,m),

3,38(lH,m), 3,54(lH,m), 3,91(lH,m), 4,35-4,60(2H,m)

8)

(2R,4R)-4-hydroxy-2-[3-methyl-3- (p-nitrobenzyloxykarbonylamino )butyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin.-(290 mg, výtěžek 73 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (280 mg, 0,752 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-5.

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2940,1700,1605,1520,1430,1405,1345,

1260,1210,1105,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

l,29(6H,s), l,30-2,70(7H,m), 3,45(lH,m),

3,66(lH,m), 4,01(lH,m), 4,40(lH,m),

4,66 & 4,85(totál. 1H,každý br s), 5,00-5,40(4H,m),

7,50(4H,d,J=9,0Hz), 8,20(4H,d,J=9,0Hz)

9)

AcS« 'N

ΡΝΞ

NH

PNZ

189

Sloučenina uvedena“v~názvu~( 240 mg, výtěžek 80 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (270 mg, 0,509 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 21-6.

IČ(KBr jcm^-1: 3350,2970,1700,1605,1520,1400,1345 , 1260,1210,1105,850,735

NMR(CDCIt) δ:

l,29(6H,s), 1,30-2,30(5H,m), 2,32(3H,S), 2,49 (lH,m),

3,16(lH,m), 3,84(2H,m), 4,ll(lH,m),

4,66 & 4,79(totál. 1H,každý br s), 5,05-5,35(4H,m),

7,51(4H,d,J=9,0Hz), 8,21(4H,d,J=9,0Hz)

Referenční příklad 24

Diastereomer B (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) propyl J -N-p-ni trobenzyloxykarbony 1 pyrrolidinu

1)

Diastereomer B ( 2S ,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[(1-N-terc .butoxykarbonylaminomethyl-3-hydroxy )propyl ]-4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidinu (14,05 g, výtěžek 60 %) se získá z diastereomeru B (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(N-terc. butoxykarbonyl-2-pyrrolidon-4-yl) -4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidinu (23,22 g, 47,9 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 20-1.

IČ(KBr)cm^_1: 34 00,2930,2850,1690,1510,1390,1360,1250,117 0,

1100,1060,1000,920,830,770

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,88(9H,S), l,55(18H,s), l,75(2H,s), l,97(lH,m), 2,15(2H,m), 2,96(lH,m),

190

3,16(ΙΗ,dd,J=3,7, 13,6Hz), 3,40-3,80(4H,m), 3,95(lH,m), 4,30(1H,m), 5,80(lH,br s)

TBSO

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,95 g, 4 mmol) v methylenchloridu (8,0 ml) se po kapkách přidá pod atmosféou dusíku a za chlazení ledem kyselina trifluoroctová (40 ml). Směs se míchá při téže teplotě 1 hodinu. Tento reakční roztok se přidá po kapkách a při téže teplotě ke směsi dioxanu (52 ml) a 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného. K roztoku se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (2,55 g, 8 mmol) a reakční roztok se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu, přičemž se pH roztoku udržuje pomocí 1 N hydroxidu sodného na hodnotě 8 až 9. Reakční roztok se extrahuje methylenchloridem (50 ml). Organická vrstva se postupné promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (3% roztok methanolu v chloroformu) a získá se diastereomer B (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[3-hydroxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,56 g, výtěžek 60 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2930,2860,1700,1610,1525,1405,1350,1250,

1165,1110,1010,840,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s) 3,02(lH',m) 4,35(lH,m)

0,88(6H,s), 3,21.( lH,m.) , 5,20(4H,s), l,82(3H,m), 2,04(2H,m),

3,67(4H,m), 4 , O1.(.1H , m) ,

6,32 & 6,59(totál. 1H, každý br s),

191

-------7,51( 4H , m ) ,' 3,22 ( 4H’,d , J=8 ,2Hz )

3)

Η

Κ roztoku výše uvedené sloučeniny (1,56 g, 2,41 mmol) v pyridinu (15 ml) se po kapkách přidá anhydrid kyseliny octové (3 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny.

Reakční roztok se vlije do ledové vody a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Organická vrstva se postupně promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným vodným ✓ roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se olejovitý zbytek (1,64 g).

K roztoku tohoto olejovitého zbytku v tetrahydrofuranu (15 ml) se přidá za chlazení ledem 1 N tetrabutylamoniumfluorid v tetrahydrofuranu (2,5 ml, 2,5 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a zbytek se extrahuje ethylacetátem (50 ml). Organická vrstva se postupně promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a^; suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (methanol-chloroform) a získá se diastereomer B ( 2S , 4R)—2—[3-acetoxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) propyl ]-4-hydroxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,26 g, výtěžek 92 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2940,1720,1610,1520,1405,1350,1250, 1165,1110,1035,360,775,740

NMR(CDC1₃) δ:

l,85(3H,m), 2,03(3H,s), 2,07(1H,m), 3,05(1H,m),

3,34(3H,m),'3,72(1H,m), 47l2(3H,m), 4,39(lH,m),

5,18(4H,m), 5,98 & 6,21(totál. 1H, každý br s),

192

7,51(4H,d,J=8,3Hz), 8,21(4H,d,J=8,7Hz) 4)

MsO,.

Surový mesylprodukt se získá z výše uvedené sloučeniny (1,26 g, 2,19 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-5.

Tento surový mesylprodukt se rozpustí za použití methanolu (15 ml) a tetrahydřofuranu (5 ml). K tomuto roztoku se přidá methoxid sodný (58 mg, 0,5 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti a pod atmosférou dusíku 2 hodiny. K reakčnímu roztoku se přidá 1 N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 ml). Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (100 ml) a organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Poté se odpaří rozpouštědlo ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se diastereomer B (2S , 4R) — 2—[3-hydroxy-l-(p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (692 mg, výtěžek 55 %).

IČ(KBr)cm¹: 3400,2940,1700,1610,1520,1400,1350,1250, 1170,1110,1050,1010,960,900,840,740,525

NMR(CDC1₃) 5:

2,02(2H,m), 2,44(2H,m), 3,01(3H,s), 3,06(lH,m),

3,40-3,90(5H,m), 4,10-4,30(3H,m), 5,20(4H,m),

6,14(lH,br s), 7,51(4H,m), 8,20(2H,d,J=8,6Hz),

8,22(2H,d,J=8,6Hz)

5)

193

AcS

Sloučenina uvedená v názvu (374 mg, výtěžek 56 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (692 mg, 1,13 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-6.

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2920,1690,1600,1520,1400,1340,1250 , 1105,850,735,625

NMR(CDC1₃) δ:

l,61(2H,m), 2,03(lH,m), 2,34(3H,s), 3,03(2H,m), 3,61(ÍH,m), 3,80(3H,m), 4,31(lH,m), 5,19(2H,s), 5,24(2H,s), 7,52(4H,d,J=8,2Hz), 8,23(4H,m)

2,52(lH,m),

4,00(lH,m),

Referenční příklad 25

Diastereomer A a diastereomer B (2S,4S)-4-acetylthio-2-[3-hydroxy-1- ( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- ( 2-piperidon-4-yl )pyrrolidinu (7,96 g, 20 mmol) v methylenchloridu (120 ml) se přidá di-terc.butyldikarbonát (6,55 g, 30 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (1,22 g, 10 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Poté se postupné přidá 4-dimethylaminopyridin (1,22 g, 10 mmol) a di-terc.butyldikarbonát (6,55 g, 30 mmol) a směs se míchá přes noc. Reakční roztok se postupné promyje 10%.vodným

194 roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získaný zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se (2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(N-terc.butoxykarbonyl-2-piperidon-4-yl)-4-terč.butyldimethylsiloxypyrrolidin (10,0 g, výtěžek kvantitativní).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2930,2850,1770,1710,1690,1470,1390,1365,1290, 1250,1160,1110,1070,1010,935,905,835,775

NMR(CD£1₃) 5:

0,08(6H,s), l,52(9H,s),

2,52(lH,m),

4,31(lH,m)

2)

0,87(9H,s), l,48(9H,s), l,50(2H,m), 1,73(lH,m), l,88(2H,m), 2,19(lH,m), 3,20(lH,m), 3,46(2H,m), 3,86(2H,m),

TBSO

Diastereomer A (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[1-(2-terc.butoxykarbonylamino)ethyl-3-hydroxypropyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (2,97 g, výtěžek 29 %) a diastereomer B (2,70 g, výtěžek 27 %) se získají z výše uvedené sloučeniny (10,0 g, 20 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 20-1.

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3350,2930,2855,1695,1680,1515,1400,1365,1250,

1165,1115,1070,935,910,835,775

NMR(CDC1₃) S:

0,06(6H,s),

2,28(lH,m),

4,10(lH,m),

DiastereomerB:

IČ(KBr)cm^-1: 3370,2930,2855,1695,1515,1390,1365,1250,1165,

0,87(_9H,s), l,20-l,90(6H,m) , l,46(18H,s) 3,17(3H,m), 3,51(lH,m), 3,37(2H,m),

4,29(lH,m), 4,60 & 4,75(totál. 1H, každý br s)

195

1115,1065,1005,9 35,910,840,77 5

NMR(CDCl₃) δ:

0,06(6H,s), 2,29 ( ΙΗ,πι) , 4,29(lH,m), )

0,86(9H,s), 1,20-1,80(5H,m), l,86(lH,m), 3,2O(3H,m), 3,66(3H,m), 4,04(lH,m), 4,81(lH,br s)

TBSO

Diastereomer A (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[3-hydroxy-1- ( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethy1) propy 1 ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (2,08 g, výtěžek 64 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (2,47 g, 4,9 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 12-2.

Podobně se získá diastereomer B (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- [ 3-hydroxy-l-( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylaininoethyl Jpropyl ]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,14 g, výtěžek 51 %) z výše uvedeného diastereomeru B (1,70 g, 3,38 mmol) .

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2930,2850,1700,1605,1520,1400,1340,1250,

1105.1010.925.835.775.735

NMR(CDC1₃) δ:

0,03(3H,s), 0,06(3H,s), 0,84(9H,s), 1,20-1,90(5H,m), 2,16(lH,m), 2,42(lH,m), 3,10-3,40(3H,m), 3,60-3,80(3H,m), 4,17(lH,m), 4,33(lH,m), 5,15(5H,m), 7,47(4H,m),

8,19(4H,m)

Diastereomer B:

IČ(KBr JcirT¹ : 3430,294 0,2850,1700,1605,1520,1400,1345,1250 ,

1110.1010.840.775.735

NMR(CDČ1₃) δ:

0,04(3H,s), 0,06(3H,s), 0,84(9H,s), 1,30-1,30(5H,m),

196 l,88(lH,m), 3,20-3,4 O(3H,m), 3,64(3H,m), 4,14(lH,m), 4,34(lH,m), 5,10-5,30(5H,m), 7,50(4H,d,J=7,6Hz), 8,21(4H,d,J=S,6Hz)

4)

Diastereomer A (2S,4R)-2-[3-acetoxy-l-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl)propyl]-4-hydroxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,37 g, výtěžek 74 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (2,08 g, 3,14 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 24-3.

Podobně se získá diastereomer B (2S,4R)-2-[3-acetoxy-l-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoethyl)propyl]-4-hydroxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (0,68 g, výtěžek 67 %) z výše uvedeného diastereomeru B (1,14 g, 1,73 mmol).

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3410,2950,1730,1710,1690,1605,1520,1435,1400,

1340,1240,1105,1030,850,735

NMR(CDC1₃) δ:

1,20-1,90(5H,m), 2,02(lH,m),

3,10-3,30(2H,m), 3,43(lH,m), 4,30(3H,m), 4,43(lH,m), 4,81 brs), 5,16(2H,s), 5,26(2H,s)

2,04(3H,s), 2,44(lH,m), 3,77(lH,m), 4,10& 5,07(totál. 1H, každý , 7,48(4H,d,J=8,6Hz) ,

8,19(4H,d,J=8,6Hz)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^_1: 3410,2950,1730,1700,1605,1520,1430,1400,1345, 1240,1105,1030,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

l,30-l,90(5H,m), l,99(3H,s), 2,03(lH,m), 2,41(lH,m),

3,20-3,50(3H,n), 3,80(lH,m), 4,03(2H,m), 4,20(lH,m), 4,45(lH,m), 5,23(5H,m), 7,51(4H,d,J=8,9Hz),

197

3,21(2H,d , J=8, 9Hz ) , 3,2 2(2Η ,d , 5=3,9Ηζ ) 5)

...... . . - . MsO,/ - '-''',

Diastereomer A (2S,4R)-2-[3-hydroxy-l-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylaminoe thyl) propyl]-4-methansulf ony loxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (1,33 g, výtěžek 91 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (1,37 g, 2,33 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 24-4.

Podobně se získá diastereomer B (2S,4R)-2-[3-hydroxy-l-,( 2-p-nitrobenzyoxykarbonylaminoethyl)propyl ] -4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (0,50 g, výtěžek 69 %) z výše uvedeného dastereomeru B (0,68 g, 1,16 mmol). Diastereomer A:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2940,1700,1605,1520,1430,1405,1350,1250, 1170,1110,1050,1010,955,900,350,740,530

NMR(CDC1₃) δ:

1.10- l,70(4H,m), 2,04(lH,m), 2,30-2,50(2H,m),

3,03(3H,s), 3,20(2H,m), 3,55(lH,m), 3,73(2H,m),

4,14(lH,m), 4,24(lH,m), 5,16(6H,m),

7,48(4H,d,J=8,3Hz), 8,20(4H,d,J=8,6Hz)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2950,1700,1605,1520,1430,1405,1350,

1250,1170,1050,1015,1010,960,900,850,740,525

NMR(CDČ1₃) δ:

1,30-1,90(4H,m), 2,01(lH,m), 2,30-2,50(2H,m),

3,04(3H,s), 3,34(2H,m), 3,50-3,70(3H,m),

4.10- 4,30(2H,m), 5,10-5,40(6H,m), 7,51(4H,d,J=7,9Hz),

8,19(2H,d,J=8,9HZ), 8,22(2H,d,J=8,9HZ)

6)

- 198

Diastereomer A sloučeniny uvedené v názvu (1,13 g, výtěžek 88 %) se získá z výše uvedeného diastereomeru A (1,33 g, 2,13 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 24-5.

Podobně se získá diastereomer B sloučeniny uvedené v názvu (423 mg, výtěžek 87 %) z výše uvedeného diastereomeru B (0,50 g, 0,80 mmol).

Diastereomer A:

IČ(KBr)cm“¹: 3400,2840,1700,1605,1520,1400,1345,1250, 1110,850,735,625

NMR(CDC1₃) 5:

1.30- l,70(5H,m), 2,34(3H,s), 2,40(2H,m), 3,06(1H,m),

3,22(2H,m), 3,71(3H,m), 4,ll(lH,m), 4,23(lH,m), . 5,10 (1H, br s ) , 5,18 ( 4H, s ) , 7,48 ( 4H , d , J=8,3Hz ) .

8,20(2H,d,J=8,6Hz), 8,21(2H,d,J=8,9Hz)

Diastereomer B:

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2940,1700,1605,1520,1430,1400,1345, 1250,1110,850,740,630

NMR(CDC1₃) 5:

1.30- l,80(5H,m), 2,34(3H,s), 2,37(2H,m), 3,05(lH,m),

3,28(2H,m), 3,62(2H,m), 3,72(lH,m), 4,04(lH,m),

4,23(lH,m), 5,18(3H,s) , 5,20(2H,s),

7,52(4H,d,J=8,6Hz), 8,21(2H,d,J=8,6Hz),

8,22(2H,d,J=8,6Hz)

Referenční příklad 26

Diastereomer' B . (.2S , 4S ) -4-acetylthio-2-[ 3-hydroxy-l- (N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-N-p-nitroben199 zyloxykarbony1pyrrolidinu 1)

- -...... T3SO_Z>

K roztoku diastereomeru B (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2- (1-terc.butoxykarbonylaminomethyl-3-hydroxypropyl)-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 24-1 (1,01 g2 mmol) v methylenchloridu (20 ml) se přidá triethylamin (0,307 ml, 2,2 mmol) a trifenylmethy1chlorid (584 mg, 2,1 mmol). Smés se míchá 3 hodiny pod atmosférou dusíku při teplotě místnosti. Reakční roztok se postupné promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se diastereomer B (2S,4S)-N-terc. butoxykarbonyl-2-(1-terc. butoxykarbonylaminomethyl-3-trifenylmethoxypropyl) -4-terc .butyldimethylsiloxypyrrolidinu (1,48 g, výtěžek kvantitativní).

IČ(KBr)cm^-1: 3400,2930,1710,1695,1445,1390,1365,1250,1160, 1065,830,770,760,700,630

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s) l,72(lH,m), l,89(lH,m) 3,15(4H,m), 3,50(lH,m) 4,86 & 5,33(totál. 1H,

2) l,39(18H,s)

2,09(lH,m),

3,99(lH,m), každý br s),

1,20-1,50(2H,m), 2,85(lH,m), 4,22(lH,m),

7,2-7,5(15H,m)

3oc

200

K roztoku výše uvedené sloučeniny (731 mg, 1,0 mmol) v N,N-dimethylformamidu (7 ml) se přidá 60% hydrid sodný (80 mg, 2 mmol) v oleji a methyljodid (0,06 ml, 10 mmol). Směs se zahřívá 2 dny při teplotě 40 ’C. Reakčni roztok se extrahuje ethylacetátem (50 ml) a postupné se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se diastereomer B (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[1-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylaminomethyl)-3-trifenylmethoxypropyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (743 mg, výtěžek kvantitativní).

IČ(KBr)cm^-1: 2930,1690,1450,1400,13 65 ,1250,1160,1120, 1070,1025,835,775,705,635 i*

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 1,46(9H,S), 2,77(3H,s), 3,96(lH,m),

0,85(9H,s), l,72(lH,m), 3,ll(3H,m), 4,22(lH,m), l,20-l,60(3H,m), 1,41(9H,S), l,97(lH,m), 2,52(lH,m), 3,42(lH,m), 3,62(lH,m), 7,2-7,5(15H,m)

3)

TBSO

H

PNZ

K roztoku výše uvedené sloučeniny (743 mg, 1 mmol) v methylenchloridu (1,5 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (1,5 ml, 10 mmol) a triethyls.ilan (0,16 ml, 1,2 mmol) a směs se míchá pod atmosférou dusíku 2 hodiny při teplotě místnosti. Tento reakční roztok se po kapkách přidá ke směsi dioxanu (10 ml) a 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného k ' neutralizaci- K tomuto roztoku se přidá 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxýkarbonylthio)pyrimidin (0,67 g, 2,1 mmol).

201 /»

Sir.és se 'míchá 'T^_hbdinu při teplotě místnosti, přičemž se pH udržuje pomocí 1 N hydroxidu sodného na hodnotě 9 až 10.

Reakční roztok se extrahuje methylenchloridem (70 ml).

Organická vrstva se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform-methanol) a získá se: diastereomer B (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxy-1- (N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (332 mg, výtěžek 51 %). IČ(KBr)cm“¹: 3 4 60,293 0,1700,1605,1520,14 00,134 5,1150,

1110,840,775

NMR(CDC1₃) δ: 0,06(6H,s) l,81(2H,m) 3,26(lH,m) 4,34(lH,m) , 0,83(9H,s), , 2,07(lH,m), , 3,36(lH,m), , 5,20(4H,m), l,33(lH,m), l,53(lH,m) 2,84(lH,m), 3,05(3H,s) 3,65(3H,m), 4,10(lH,m) 7,56(4H,d,J=8,1Hz),

8,22(4H,d,J=8,2Hz)

4j

HC>

OAc

ΡΝΣ

Diastereomer B (2S,4R)-2-(3-acetoxy-l-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethy 1) propyl ] -4-hydroxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (266 mg, výtěžek 90 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (332 mg, 0,5 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 24-3.

IČ(KBr)cm^_1: 3450,2940,1730,1700,1605,1520,1400,1340,1240, 1150,1110,1050,855,760,735

NMR(CDC1₃) δ :

202

5) l,37(lH,m), l,56(lH,m), l,85(lH,m), 2,00(3H,s),

2,10(lH,m), 2,85(2H,m), 3,04(3H,s), 3,44(2H,m), 3,74(lH,m), 4,16(3H,m), 4,41(lH,m), 5,21(4H,s), 7,54(4H,d,J=8,1Hz), 8,23(2H,d,J=8,1Hz),

8,24(2H,d,J=8,1Hz)

MsO,

Diastereomer B (2S,4R)-2-[3-hydroxy-l-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)propyl]-4-methansulfonyloxy-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu (200 mg, výtěžek 64 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (266 mg, 0,45 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 24-4.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,1700,1610,1520,1400,1350,

1170,1110,1050,960,900,850,765,735,525

NMR(CDC1₃) δ :

l,31(2H,m), l,50(lH,m), 2,03(lH,m), 2,51(lH,m),

2,82(3H,br s), 3,01(lH,m), 3,02(3H,s), 3,17(lH,m),

3,3-3,7(4H,m), 4,18(2H,m), 5,22(4H,s),

7,52(4H,d,J=8,3Hz), 8,21(4H,d,J=3,5Hz)

6)

A :¾

Sloučenina uvedená v názvu (172 mg, výtěžek 89 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (200 mg, 0,32 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-6.

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2940,1700,1610,1520,1400,1345,

203

1200,1110,855

CDC1₃) δ: 1,33( ΙΗ,πι) , 2,33(2H,m), 3,40 (ΙΗ,πι) , 5,19(2H,s),

1,56(2H,m), 3,0l(3H,s), 3,65( 2Η,ΠΙ) , 5,20(2H,s),

765,735,630

2,34(3H,s) , 3,05(lH,m),

2,52( ΙΗ , πι) ., 3,16( ΙΗ,πι) , 4,23(2H,m),

3,96(2H,m.) ,

7,51(4Η,d,J=3,6Ηζ),

8,22(4Η,d,J=8,6Ηζ)

Referenční příklad 27

Dihydrochlorid (2S,4S)-4-merkapto-2-[(IR)-l-hydroxy-3-N-methylaminopropylJpyrrolidinu 1)

H<\

NHMe • 2HCI

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[ (IR)-1,3-dihydroxypropylJpyrrolidinu připraveném v referenčním příkladu 7-2 (76,1 g, 203 mmol) v methylenchloridu (860 ml) se přidá za chlazení ledem a pod atmosférou dusíku triethylamin (112,3 ml, 309 mmol), dimethylaminopyridin (2,19 g, 18,0 mmol) a p-toluensulfonylchlorid (61,2 g, 321 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se postupné promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v methanolu (400 ml) a přidá se 40% roztok methylaminu v methanolu (1 1). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a reakční roztok se zahustí ve vakuu. Ke zbytku se přidá methanolový roztok 3,3 N kyseliny chlorovodíkové. Směs

204 se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a získané krystaly se promyjí ethanolem a acetonem a získá se dihydrochlorid (2S,4R)-4-hydoxy-2-[(1R)-l-hydroxy-3-N-methylaminopropyl]pyrrolidinu (35,8 g, výtěžek 71 %) .

IČ(KBr)cm^-1: 3410,2980,2800,15S0,1420,1060,1010

NMR(D₂0) δ:

1,65-2,00(2H,m), 2,07(2H,dd,J=3,10Hz), 2,70(3H,s),

3,10-3,50(4H,m), 3,90-4,05(lH,m), 4,10-4,20(1H,m),

4,65(lH,m)

Boc ^ýše uvedená sloučenina (35,6 g, 144 mmol) se rozpustí ve vodě (150 ml) a dioxanu (400 ml) a 5 N vodným roztokem hydroxidu sodného se upraví pH na hodnotu 7. Poté se přidá -.......

di-terc.butyldikarbonát (63,0 g, 289 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Přidáním 5 N vodného roztoku hydroxidu sodného se upraví pH na hodnotu 10 a poté se přidá di-terc.butyldikarbonát (12,6 g, 57,8 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut. K reakční směsi se přidá voda a ethylacetát. Organická vrstva se oddělí, promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu (800 ml) a za chlazení ledem se přidá triethylamin (24 ml, 170 mmol) a methansulfonylchlorid (11,1 ml, 144 mmol). Směs se míchá 30 minut a přidá se ethylacetát. Směs se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Takto získaný zbytek se

205 rozpustí v Ν,N-dimethylformamidu a přidá se thioacetát draselný (24,7 g, 216 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě 70 ’C. K reakčnímu roztoku se přidá ethylacetát a směs se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4S)-4-acetylthio-2-[[(lR)-l-hydroxy-3-N-terc. butoxykarbony1-N-methylamino ] propyl ] -N-terc. butoxykarbonylpyrrolidin (37,3 g, výtěžek 60 %).

IČ(KBr)cm^-1: 3420,2975,1690,1400,1365,1160

NMR(CDC1₃) δ:

l,20-l,40(2H,m), l,45(18H,s), 1,50-1,75(4H,m)

2,33(3H,s), 2,84(3H,s), 3,03(lH,m), 3,70-4,00(4H,m)

3J

NHMe • 2HCI

K výše uvedené sloučenině (34,5 g, 79,7 mmol) se přidá methanolový roztok 3,3 N kyseliny chlorovodíkové a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a po přidání methanolu se zpracuje aktivním uhlím. Poté se aktivní uhlí odfiltruje a filtrát se zahustí do sucha. Zbytek se promyje směsi methanolu a tetrahydrofuranu a získá se dihydrochlorid (2S,4S)-4-merkapto-2-[(1R)-1-hydroxy-3-N-methylaminopropylJpyrrolidinu (17,0 g, výtěžek 81,1 %)

IČ(KBr)cm^_1: 3400,2950,1620,1580,1460,1400,1050

NMR(D₂0) δ:

1,60-2,00(3H,m), 2,48-2,65(lH,m) , 2,70(3H,s),

3,05-3,30(3H,m), 3,45-3,85(3H,m), 4,00-4,15(1H,m),

Referenční příklad 28

206

Diastereomer A a diastereomer B (2R,4S)-4-acetylthio-2-[ (2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl )pyrrolidinu

1)

Boc

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-formylpyrrolidinu (16,5 g, 50 mmol) a nitroethanu (14,2 ml, 200 mmol) v ethanolu (20 ml) se přidá n-butylamin (0,5 ml, 5 mmol). Reakční směs se refluxuje přes noc pod atmosférou dusíku a poté se odstraní ve vakuu rozpouštědlo. Takto získaný zbytek se extrahuje ethylacetátem (500 ml). Ethylacetátový roztok se postupné promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odstraní ve Vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se méně polární isomer (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-nitropropylenyl)pyrrolidinu (8,01 g, výtěžek 41 %)

IČ(KBr)cm

2950,1700,1520,1400,1250,1020,840,770

NMR(CDC1₃) δ:

0,08(6H,s), 0,89(9H,s), l,40(9H,s), l,79(lH,m), 2,10(lH,m), 2,22(3H,s), 3,49(2H,m), 4,39(lH,m), 4,55(lH,m), 6,97(lH,d,J=9,2Hz)

2)

TBSO„

Soc

207 _RO2tbk^-'vyše^ uvedené sloučeniny (7,30 g, 18,9 mmol) v diethyletheru (25 ml) se po kapkách přidává za chlazení ledem a pod atmosférou dusíku k suspenzi lithiumaluminiumhydridu (2,15 g, 56,7 mmol) v diethyletheru (50 ml) a smés se míchá při téže teplotě 3 hodiny. K reakčnímu roztoku se přidá po kapkách voda (5 ml), která rozloží přebytek reagentu a poté se přidá diethylether (200 ml). Nerozpustné látky se odfiltrují a extrahují se diethyletherem (200 ml). Diethyletherové extrakty se spojí a postupně se promyjí vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo· se odpaří ve vakuu a získá se surový amin. K roztoku tohoto surového aminu v dioxanu (70 ml) se přidá 4, 6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonyl,thio)pyrimidin (6,04 g, 18,9 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se extrahuje ethylacetátem (300 ml). Extrakt se postupně¹promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným vodným .roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (hexan-ethylacetát) a získá se směs isomerů (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propylpyrrolidinu (2,27 g, výtěžek 22 %).

IČ(KBr)cm^_1: 3320,2950,1700,1520,1400,1340,1250,1160,840,780 NMR(CDC1₃) δ :

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,24(3H,d,J=5,6Hz), l,45(9H,s), l,66(2H,m), 1,80-2,00(2H,m),

3,20-3,30(2H,m), 3,66(lH,m), 4,01(1H,br m), 4,31(lH,m), 5,17(2H,s), 5,51(lH,br), 7,49(2H,d,J=8,9Hz),

8,21(2H,d,J=8,6Hz)

3)

208

PNZ

K výše uvedené sloučenině (2,27 g, 4,22 mmol) se přidá

2,7 M roztok kyseliny chlorovodíkové v methanolu (20 ml) a směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se hydrochlorid surového aminu. Tento surový amin se znovu rozpustí v dioxanu (50 ml) a vodě (50 ml) a k roztoku se přidá - 4,6-dimethyl-2-(p-nitrobenzyloxykarbonylthio)pyrimidin (1,35 g, 4,22 mmol), přičemž se pH roztoku udržuje pomocí 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného na hodnotě 10. Reakční roztok se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a poté se zahustí ve vakuu. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (100 ml). Organická vrstva se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform-methanol) a získá se (2R,4R)-4-hydroxy-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl )-2-[(2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propylJpyrrolidin ve formě diastereomeru A (polární sloučenina, 1,40 g, výtěžek 66 %) a diastereomeru B (méně polární sloučenina,' 348 mg, výtěžek 16 %).

Diastereomer A i

IČ(KBr)cm^-1: 3400,1700,1600,1520,1430,1400,1350,1240,1110,850, 740

NMR(CDC1₃) δ :

l,24(3H,d,J=7,3Hz), l,69(lH,m), 1,70-2,10(3H,m),

3,45(lH,m), 3,70(2H,m), 4,08(lH,m), 4,45(lH,s),

5,21(5H,m), 7,48(4H,d,J=8,6Hz), 3,18(4H,d,J=8,6Hz) Diastereomer 3

IČ(K3r)cm^-1: 3400,1700,1600,1520,1350,850,740

NMR(CDC1₃) δ:

209

1,19(3H,d,J=6,6Hz), l,39(lH,m), 1,80-2,30(3Η,m),

3,40-3,70(3Η,m), 4,04(lH,m), 4,45(lH,m), 5,21(5H,m), 7,49 (4H,d, J=S , 6Hz ), 8,20(4H,d, J=8,6Hz ) _ .....

)

PNZ =

Mesylprodukt se získá z výše uvedené sloučeniny (diastereomer A, 1,51 g, 3,01 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-5 a sloučenina uvedená v názvu (1,33 g, výtěžek 79 %) se poté získá stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-6.

IČ(KBr)cm^-1: 3310,1700,1610,1523,1425,1350,1260,1110,850, 740,626

NMR(CDC1₃) δ:

1,23(3H,d,J=6,3Hz), l,75(2H,m), 2,15(lH,m),

2,33(3H,s), 2,55(lH,m), 3,18(lH,m), 3,71(lH,m), : 3,86(lH,m), 3,94(lH,m), 4,10(lH,m), 5,16(5H,m),

... 7,49 ( 4H, d , J==8,9Hz ) , 8,21 ( 4H, d , J=8,9Hz )

Referenční příklad 29

Diastereomer B (2R,4S)-4-acetylthio-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl ) -2- [ ( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]pyrrolidinu

AcS

-— H NHPNZ

PNZ

Mesylprodukt se získá z diastereomeru B' (2R, 4R)-4-hydroxy-’N- (p-nitrobenzyloxykarbonyl) -2- [ ( 2-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)propyl]pyrrolidinu připraveném v referenčním příkla210 du 28-3 (378 mg, 0,75 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-5 a sloučenina uvedená v názvu (250 mg, výtěžek 65 %) se poté získá stejným způsobem jako v referenčním příkladu 1-6.

IČ(KBrJcm¹: 3400,1700,1600,1520,1400,1350,1250,1100,850, 740,630

NMR(CDC1₃) δ:

1,19(3H,d,J=6,3Hz), l,64(lH,m), 1,70-2,20(2H,m) 2,34(3H,s), 2,55(lH,m), 3,23(lH,m),

3,67(lH,m), 3,92(2H,m), 4,08(lH,m), 5,16(5H,m),

7,5l(4H,d,J=8,6Hz), 8,22(4H,d,J=8,6Hz)

Referenční příklad 30

Směs diastereomerů (2R,4S)-4-acetylthio-2-[3-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino)butyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidinu

1)

TBSO,

L^H

Roztok methylenchloridu (80 ml) a dimethylsulfoxidu (2,98 ml, 40 mmol) se ochladí na teplotu -78 °C a po kapkách se přidá oxalylchlorid (1,85 ml, 21,2 mmol). Směs se míchá 15 minut při téže teplotě a poté se přidá po kapkách během 10 minut roztok'(2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldi- a methylsiloxy-2-(3-hydroxypropyl)pyrrolidinu (5 g, 13,9 mmol v methylenchloridu (70 ml). Směs se míchá 30 minut a poté se ♦ přidá triethylamin (9,'66 ml, 69,3 mmol). Směs se zahřeje na 'teplotu místnosti a míchá se 15 minut. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a přidá se ethylacetát (70 ml). Směs se promyje 2 x 10% vodným roztokem kyseliny citrónové (30 ml) a poté nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se

211 přes bezvodý síran horečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-formylethyl)pyrrolidin (5,5 g, výtěžek 100 %) jako surový produkt. Tato sloučenina se použije k následující reakci bez čištění.

Výše uvedená sloučenina se rozpustí v tetrahydrofuranu (70 ml) a roztok se ochladí na teplotu -78 °C. Poté se po kapkách přidá 1,6 M roztok methyllithia v diethyletheru (15,7 ml, 25,1 mmol). Směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě a poté še přidá ethylacetát (70 ml). Směs se promyje vodou a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxybutyl)pyrrolidin (4,21 g, výtěžek

8.1,1%).

IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,1695,1680

NMR(CDC1₃) 5:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), 1,18(3H,d,J=6,0Hz) , l,40(2H,m), l,45(9H,s), l,70(lH,m), l,90(2H,m), 3,37(2H,m), 3,80-4,00(2H,m), 4,85(lH,m)

2)

Výše uvedená sloučenina (4,21 g, 11,27 mmol) se rozpustí v tetrahydrofuranu (70 ml) a ochladí se na 0 °c. Poté se přidá trifenylfosfin (6,65 g, 25,4 mmol), ftalimid (2,49 g, 16,9 mmol) a dále po kapkách diethylazodikarboxylát (2,66 ml, 16,9 mmol). Reakční směs se míchá 17 hodin při teplotě místnosti. Reakční roztok se zahustí a zbytek se zpracuje, sloupcovou chromatografií na šilikagelu (ethylacetáť-heptan) a získá se (2R,4R)—N-terc.butoxykarbonyl—4-terc.butyl212 dimethylsiloxy-2-(3-ftalimido)butyl)pyrrolidin (4,73 g, výtěžek 83,3 %) .

IČ(KBr)cm'¹: 3400,2900,1720 NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s) 1,50(2H,m) 3,80(lH,m)

0,86(9H,s), l,35(3H,m), l,45(9H,s),

1,60-2,15(4H,m), 3,20-3,40(2H,m),

4,20-4,40( 2H,m), 7,63(2H,m), 7,80(2H,m)

Výše uvedená sloučenina (4,1 g, 8,16 mmol) se rozpustí ve směsi methylenchloridu (40 ml) a methanolu (4 ml) a po kapkách a za chlazení ledem se přidá monohydrát hydrazinu (1,14 ml, 22,8 mmol) a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě. Rakční roztok se postupně promyje 8% vodným roztokem amoniaku a vodou. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v dioxanu (40 ml). Poté se přidá 4,6-dimethy1-2-(terč.butoxykarbonylthio)pyrimidin (1,96 g, 8,16 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 17 hodin. K reakčnímu roztoku se přidá.ethylacetát (40 ml) a směs se postupné promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát-heptan) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[3-(terč.butoxykarbonylamino)butylJpyrrolidin (2,28 g, výtěžek 59,2 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2920,1695,1470

NMR(CDC1₃) δ:

0,Q6(6H,s), l,10(3H,d,J=6,6Hz), l,37(4H,m), l,60-2,00(2H,m), 3,30(2H,m), 3,60(1H,m), 3,80(1H,m),

213

4,23(lH,m) )

TSSO

Boc .

Surový olej (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[3-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino ) butyl ]-4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidinu se získá z výše uvedené sloučeniny (1,35 g, 2,86 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 26-2 a tato sloučenina se použije k další reakci bez čištění.

5)

AcS.^_

	-NMe 1
1 1	PNZ
PNZ
Sloučenina uvedená v názvu (1,23	g, výtěžek 94	%) se
získá z výše uvedené sloučeniny (1,2	g, 2,54 mmol)	stejným
způsobem jako v referenčních příkladech 6-6, 6-7 a	6-8.

IČ(KBr)cm^_1: 2950,1700,1600,1520

NMR(CDC1₃) δ: .

l,15(4H,m), l,50(2H,br s), l,63(2H,br s),

2,10-2,50(2H,m), 2,3(3H,s), 3,18(lH,m), 3,72(lH,m), 3,87(lH,m), 4,12(lH,m), 5,20(4H,m), 7,50(4H,m). 8,20(4H,m)

Referenční příklad 31 ( 2R, 4S)-4-acetylthio-2-r 2-fluor-3-(N-methyl-N-p-nitrobenzyloxykarbonylamino ) propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin

1)

214

TBSO..

Η COOEí

Boc

Roztok triethyl 2-fluor-2-fosfonoethanoátu (6,7 g, 27,3 mmol) a suchého tetrahydrofuranu (140 ml) se ochladí na teplotu 0 ’C a přidá se 60% hydrid sodný (1,11 g, 27,3 mmol) v oleji. Směs se míchá 1 hodinu a poté se přidá po kapkách smés (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-formylpyrrolidinu (7,3 g, 23,2 mmol) a tetrahydrofuranu (35 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 17 hodin. K reakčnímu roztoku se přidá ethylacetát (100 ml) a směs se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát-heptan) a získá se ethylester 3-[(2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin-2-yl]-2-fluorakrylové kyseliny (8,0 g, výtěžek

-8 2..,.8..%).................... · ............... -......................-.....--------------- IČ(KBr)cm^-1: 2950,1695,1470

NMR(CDC1₃) '5:

0,06(6H,s), Ó,85(9H,S), 1,35(3H,q,J=6,0Hz), l,40(9H,br s), 1,87-2,20(2H,m), 3,43(2H,m),

4,30(3H,m), 5,21(lH,m),.5,8(lH,m),

MS: [M+H]⁺ = 376

2) .

Výše uvedená sloučenina (6,4 g, 15,3 mmol) se rozpustí v ethanolu (120 ml) a roztok se míchá 2 hodiny v atmosféře

215 vodíku za použití katalyzátoru 10 % palladium-uhlík. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Ke zbytku se přidá suchý diethylether (-60 ml) a směs se ochladína 0 °C. Poté se přidá pozvolna lithiumaluminiumhydrid (1,73 g 45,6 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 1 hodinu. Po skončení reakce se přidá voda (1 ml) a 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (45,6 ml, 45,6 mmol). Organická vrstva se promyje 2 x vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté se suší přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surový olej ( 2R,4R)-N-terc.butoxykarbony1-2-(2-fluor-4-hydroxypropyl)-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu. Tento olej se rozpustí v tetrahydrofuranu (60 ml) a ochladí se na 0 °C. Poté se po kapkách přidá triethylamin (3,2 ml, 22,9 mmol) a methansulfonylchlorid (1,78 ml, 22,9 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 1 hodinu. K reakčnímu roztoku se přidá ethylacetát (60 ml) a směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté se suší přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Ν,Ν-dimethylformamidu (60 ml).

Poté se přidá azid sodný (3,98 g, 61,2 mmol) a smés se zahřívá na 80 ’C a míchá 17 hodin. Po skončení reakce se přidá ethylacetát (100 ml) a směs se promyje 3 x vodou (100 ml). Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát-heptan) a získá se (2R,4R)-2-(3-azido-2-fluorpropyl)-N-terc.butoxykarbonyl-4-(terc.butyldimethylsiloxy)pyrrolidin (5,14 g, výtěžek 83,3 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2960,2250,1695,1470

0,85(9H,s), l,40(9H,s), 1,42(2H,br S),

1,70-2,10(2H,m), 3,30-3,40(3H,m),

4,55-4,9(1H,m)

NMR(CDC1₃) 5:

0,06(6H,s), l,60(2H,s), 4,35(lH,m),

3)

216

Boc

Výše uvedená sloučenina (5,1 g, 12,7 mmol) se rozpustí v methanolu (75 ml) a roztok se míchá při teplotě 4Q °C pod atmosférou vodíku 1 hodinu za použití katalyzátoru 10 % palladium-uhlík (2 g). Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surový amin.

Surový amin se rozpustí v dioxanu (50 ml) a přidá se di-terc.butyldikarbonát (2,76 g, 12,7 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 17 hodin. Tento reakční roztok se zředí ethylacetátem a postupné se promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a vodou. Poté se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a a zbytek se zpracuje sloupcovou chomatografií na silikagelu (ethylacetát-heptan) a získá se (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-terc.butoxykarbonylamino-2-fluorbutyl)pyrrolidin (5,86 g, výtěžek 97 %). NMR(CDC1₃) δ: ,

0,06(6H,s), 0,85(9H,s), l,25(2H,br s), l,40(18H,s),

1,80-2,05(2H,s), 3,10-3,50(4H,m), 4,00(lH,m),

4,30(lH,m), 4,50-4,80(lH,m)

4)

Boc (2R,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[3-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-2-fluorpropyl]-4-terc.butyldimethylsilo•xypyrrolidin (1,45 g, výtěžek 98 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,43 g, 3 mmol) stejným způsobem jako v refererenčním příkladu 26-2.

217

NMR(CDC1₃) δ :-------------------------------------0,06(6H,s), 0,85(9H,s), 1,2G.( 2H, br s ) , l,40(18H,s), 1,80—2,05(2H,s), 2,94(3H,s), 3,10-3,50(4H,m),

4,00( lH,m) , 4,3.0(lH,m), 4,50-4,80(1H,m)

5)

PNZ

Sloučenina uvedená v názvu (850 mg, výtěžek 67 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (1,08 g, 226 mmol) stejným způsobem jako v referenčních příkladech 6-6, 6-7 a 6-8. IČ(KBr)cm^_1: 2950,1700,1600,1520

NMR(CDC1₃) δ:

1,60-1,80(4H,m) , 2,35(3H,s), 2,05-2,6(2H,m),

3,03(3H,br s), 3,20(lH,m), 3,15-3,70(2H,m),

3,85(lH,m), 4,10(lH,m), 4,60-5,00(lH,m), 5,20(4H,s),

7,50(4H,d,J=9,0Hz), 8,23(4H,d,J=9,OHz)

Referenční příklad 32 ( 2S ,,4R)-4-terc. butyldimethylsiloxy-N-terc. butoxykarbonyl-2-[ (lS)-2-methoxykarbonyl-l-hydroxyethyl]pyrrolidin a (2S, 4R) -4-terc. butyldimethylsiloxy-N-terc. butoxykarbonyl-2- [ (IR)-2-methoxykarbonyl-l-hydroxyethylJpyrrolidin

TBSO

•COOMe

K roztoku (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terc.butoxvkarbonyl-2- ( 2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl) pyrrolidinu (402 mg, 1,0 mmol) v- methanolu (2 ml) se přidá pod atmosférou

218 dusíku a za chlazeni ledem natriumborohydrid (19 mg, 0,5 mmol) a směs se míchá při téže teplotě 30 minut. K reakčnímu roztoku se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného (asi 2 ml) a směs se vlije do směsi ethylacetát-voda (50 ml - 50 ml) ke kapalné separaci. Organická vrstva se postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, a poté se suší přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu [Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát (3:1)] a získá se (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2-[(1S)-2-methoxykarbonyl-l-hydroxyethyl lpyrrolidin (113 mg, výtěžek 28 %, méně polární sloučenina) a (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2-[(lR)-2-methoxykarbonyl-l-hydroxyethyl]pyrrolidin (86 mg, výtěžek 21 %, polární sloučenina) a směs dvou forem (202 mg, výtěžek 50 %, (lS)-forma : (lR)-formě =4 : 6).

(2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2- [ (1S)-2-methoxykarbonyl-1-hydroxyethyllpyrrolidin IČ(KBr)cm^_1: 3450,2930,1740,1700,1670,1390,1360,1250,

1160,1110

NMR(CDC1₃) 5:

0,06(6H,s), l,95(lH,m), 3,55(lH,m),

O,86(9H,S), 2,47(2H,m), 3,71(3H,s),

1,46(9H,S), l,75(lH,m),

3,26(lH,dd,J=4,0, 12,6Hz), 4,05(2H,m), 4,35(lH,m) (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-terc.butoxykarbonyl-2- [(IR)-2-methoxykarbonyl-l-hydroxyethyl]pyrrolidin IČ(KBr)cm^-1: 3450,2930,1740,1700,1670,1400,1360,1250,

1160,1110

NMR(CDC1₃) 5:

0,07(6H,s), 2,39(2H,m), 3,72(3H,S),

0,88(9H,s), l,48(9H,s), l,90(2H,m) 3,28(lH,dd,J=3,8, 11,4Hz), 3,40(lH,m), 4,12(lH,m), 4,35(2H,m)

Referenční přiklad 33

2·....' ... .

219

Komplex boranu a f2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terč.butyldimethylsiloxy-2- [ (1-hydroxy-N-methylamino ) propyl ] pyrrolidinu

1)

TBSO,

íoc

OH

CONHMe (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- [ [ (IR) -2-ethoxykarbonyl-l-hydroxy Jethyl jpyrrolidin (4 g, 9,58 mmol) se rozpustí v 40% roztoku methylaminu v methanolu (40 ml) a roztok se uzavře a míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a získá se surová pěna (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.buty1dimethylsiloxy-2-[ [ (lR)-l-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl) ]ethyl]pyrrolidinu (3,83 g, výtěžek 99,3 %).

IČ(KBr)cm^_1: 2931,1676,1411,1165,1113,837,775

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,46(9H,s), 1,68-1,83(1H,m),

1.91- 2,05(lH,m), 2,19-2,69(2H,m), 2,31(3H,d,J=4,8Hz),

3,25(1H,dd,J=3,68, 11,5Hz), 3,49(1H,d,J=ll,5Hz),

3.92- 3,95(1H,m), 4,11-4,21(1H,m), 4,30(lH,m),

5,66(1H,d,J=8,OHZ), 7,24(lH,br)

2)

TBSO

NHMe

BH₃

K roztoku surové pěny výše uvedené sloučeniny (500 mg, 1,24 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) se pomalu po kapkách za míchání a při teplotě místnosti přidává komplex boranu a áiměthylsulfidu (0,372 ml, 3,92 mmol). Poté se se směs zahřívá a refluxuje za míchání 3 hodiny. Reakční směs se

220 ochladí na teplotu místnosti a po kapkách se přidá methanol (2 ml). Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá chloroform (15 ml) a organická vrstva se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Poté se odpaří rozpouštědlo ve vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu [Wakogel™ C-300, 75 ml, heptan : ethylacetát = 100 : 0-1 : 2] a získá se sloučenina uvedená v názvu (244 mg, výtěžek 48,8 %) jako smés diastereomeru.

MS[M+H]⁺ = 403 i

IČ(KBr)cm^-1: 3 4 52,3220,2954,2364,1672,1413,1167,1113,837,777

NMR data diastereomeru oddělených sloupcovou chromatografií jsou uvedeny dále NMR(CDC1₃) δ:

Polární sloučenina

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,47(9H,s), 1,62-1,83(2H,m),

1.89- 2,18(2H,m), 2,54(3H,d,J=6,0Hz), 2,81-2,90(2H,m),

3,24(1H,dd,J=3,2, 12,0Hz), 3,53(1H,d,J=12,0Hz),

3,82-3,91(lH,m) , 4,11-4,21( lH,m) , 4,2S(lH,m), 4,95(lH,m),. . ..

5,18(lH,m)

Méně polární sloučenina

0,05(6H,s), 0,85(9H,s), l,45(9H,s), 1,51-1,77(3H,m),

1.89- 2,03(lH,m), 2,48(3H,d,J=5,6Hz), 2,70-2,90(lH,m),

3,04-3,16(lH,m), 3,22(1H,dd,J=3,42, 11,6Hz),

3,52(1H,d,J=ll,6Hz), 3,86(lH,m), 4,14(lH,m),

4,26(lH,m), 4,82(lH,m), 5,22(lH,m) tj;

Referenční příklad 34 (2S,4S)-2-[(IR)-3-(Ν,N-dimethylamino) -1-hydroxypropyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonýl-4-tritylthiopyrrolidin 1)

221

HO.

NMe

COO^^

K 40% roztoku methylaminu v methanolu (240 ml) se přidá při teplotě místnosti roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[[(IR)-l-hydroxy-3-p-toluensulfonyloxyJpropylJpyrrolidinu (16,7 g, 0,03 mmol) připraveném v referenčním příkladu 15-1 v methanolu (64 ml) a směs se míchá přes noc. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a ke zbytku se přidá methylenchlorid (100 ml). Poté se za chlazení ledem pomalu po kapkách přidá triethylamin (6,3 ml, 0,05 mol) a allylchlorformiát (4,0 ml, 0,04 mmol) a reakční směs se míchá 30 minut. Reakční roztok se vlije do vody a extrahuje se 3 x ethylacetátem. Extrakt se postupně promyje 1 N vodným roztokem hydrogensÍránu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Poté se odpaří rozpouštědlo ve vakuu. Zbytek se zpracuje stejnou reakcí jako v referenčním příkladu 15-2 a získá se (2S,4R)-2- [ (IR)-3-(N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-1-hydroxypropy1J -4-hydroxy-N-(p-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (11,4 g, výtěžek 93 %).

IČ(CHC1₃)cm^-1: 3620,3610,3020,1690,1525,1215,780,755

NMR(CDC1₃) δ:

1,50-1,80(4H,m), l,95(lH,m), 2,21(lH,m),

2,80-2,90(3H,m), 3,12(lH,m), 3,40-3,90(3H,m),

4,00-4,50(2H,m), 4,50-4,60(3H,m) , 5,10-5,30(4H,m), 5,90(lH,m), 7,52(2H,d,J=8,5Hz), 8,22(2H,d,J=8,5Hz)

2)

222

AcS

NMe

I

COO^A (2S,4S)-4-acetylthio-2-[(IR)-3-(N-allyloxykarbony1-N-methylamino)-1-hydroxypropyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonylpyrrolidin (9,8 g, výtěžek 80 %) se získá z výše uvedené sloučeniny (11,4 g, 25,8 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 4-3.

IČ(KBr)cm

-1.

3790,3020,2400,1690,1520,1420,1215,775,670

NMR(CDC1₃) δ:

l,57(7H,s), 2,34(3H,s), 2,80-3,20(4H,m), 3,704,30(5H,m), 4,58(2H,d,J=5,1Hz), 5,10-5,40(4H,m), 5,93(lH,m), 7,25(2H,d,J=8,6Hz), 8,23(2H,d,J=8,9Hz)

3)

NMe l

COO^^AK roztoku výše uvedené sloučeniny (9,8 g, 19,6 mmol) v methanolu (980 ml) se přidá při teplotě místnosti a pod atmosférou dusíku 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (19,6 ml, 19,6 mmol) a směs se míchá po dobu 30 minut.

K reakčnímu roztoku se přidá 1 N kyselina chlorovodíková (22 ml, 21,6 mmol). Směs se zahustí ve vakuu a zředí se ethylacetátem a postupné se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Ke zbytku se přidá N,N-dimethylformamid (65 ml) a chlortrifenylmethan (645 mg, 2,3 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě 50 °C. Reakční směs se vlije do vody (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Organická vrstva se zahusti ve

223 vakuu a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát) a získá se (2S,4S)-2- [ (IR)-3-(N-allyloxykarbonyl-N-methylamino)-1-hydroxypropyl ]-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-4-tritylthiopyrrolidin (10,4 g, výtěžek 73 %) .

IČ(KBr)cm^-1: 3020,1690,1525,1215,760,670

NMR(CDC1₃) δ:

l,54(9H,s), 2,60-3,00(4H,m), 3,50-3,90( 2H,m) ,

4,50-4,60(2H,m), 5,00-5,40(4H,m), 5,80-6,00(1H,br),

7,10—7,50(17H,m), 8,10-8,30(2H,m)

Ί·

NHMe

PNZ

OH

K roztoku výše uvedené sloučeniny (10,4 g, 14,9 mmol) v methylenchloridu (50 ml) se přidá za chlazení ledem voda (0,7 t

ml, 37 mmol), chlorid bis(trifenylfosfin)palladnatý (209 mg, 0,3 mmol) a tributylcínhydrid (12 ml, 45 mmol). Směs se • * míchá při teplotě místnosti 30 minut. Reakční roztok se vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se methylenchloridem. Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (methanol-chloroform) a získá se (2S,4S)-2-[(lR)-l-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl ] -N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-4-tritylthiopyrrolidin (11,8 g, výtěžek kvantitativní).

IČ(KBr)cm^_1: 3435,3320,2925,1700,1525,1430,1345,1200,

1100, 745

NMR(CDC1₃) δ:

l,57(6H,s), 2,39(3H,s), 2,60-3,00(4H,m),

3,50-3,80(2H,m), 4,15(lH,m), 5,0 0-5,3 0(2H,m),

7,10-7,50(17H,m), 8,10-8,30(2H,m)

5)

TrS

224

NMe

PNZ

OH

Me

K roztoku výše uvedené sloučeniny (5,0 g, 7,9 mmol) v tetrahydrofuranu (32 ml) se přidá za chlazení ledem 37% formalin (0,6 ml, 7,9 mmol), kyselina octová (0,45 ml, 7,9 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (32,5 g, 11,9 mmol).

Směs se míchá při teplotě místnosti 6 hodin. Reakční roztok se zahustí ve vakuu a zředí se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Extrakce se provádí methylenchloridem a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (methanol-chloroform) a získá se (2S,4S)-2-[(lR)-3-(Ν,N-dimethylamino)-1-hydroxypropyl]-N-p-nitrobenzyloxykarbonyl-4-tritylthiopyrrolidin (3,7 g, výtěžek 72 %)

IČ (KBr) cm“³·: 3455,2950,1700,1520,1345,1105,855

NMR(CDC1₃) δ:

__________1,20-2,50(8H,m). 2,91(6H,d,J=21,7Hz), -------------- - ----------3,50,-3,70(2H,m), 4,15(lH,m), 5,00-5,20(2H,m),

7,10-7,60(17H,m), 8,24(2H,d,J=8,4Hz)

Referenční příklad 35

Dihydrochlorid (2S,4R)-4-hydroxy-2-[(R)-l-hydroxy-3-(N-methylaminojpropyljpyrrolldinu

1)

TBSO.

<k)

COOMe

Hexamethyldisilazan (11,0 ml,

52,1 mmol) se přidá po

225 kapkách béhem 20 minut při teplotě nepřevyšuj ící -6 0 °C a pod atmosférou dusíku k roztoku obsahujícím 1,6 M roztok n-butyllithiumhexanu (33,8 ml, 54,1 mmol) v tetrahydrofuranu (70 ml). K tomuto roztoku se přidá po kapkách během 15 minut a při teplotě -60 °C methylacetát (4,14 ml, 52,1 mmol) a roztok se míchá 30 minut. K reakčnímu roztoku se přidá po kapkách během 1,5 hodiny a při teplotě nepřevyšující -60 C roztok ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinalu (13,2 g, 40,1 mmol) v tetrahydrofuranu (23 ml) a reakční směs se míchá při teplotě nepřevyšující -60 °C po dobu 30 minut Reakční směs se přidá k vodnému roztoku (90 ml) kyseliny citrónové (9 g) a směs se míchá 30 minut a poté se extrahuje ethylacetátem (150 ml). Organická vrstva se promyje vodou (50 ml), a zahustí se ve vakuu při teplotě nepřevyšující 40 °C. Ke zbytku se přidá ethylacetát (15 ml) a směs se zahustí ve vakuu.

Poté se přidá ke zbytku n-heptan (30 ml). Proces se opakuje a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- [(R,S)-1-hydroxy-2-(methoxykarbony1)ethyl)pyrrolidin ((R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méné polární sloučenina) = 75,6 : 24,4].

²⁾ TBSO,,

Výše uvedený zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu (75 ml) a při téže teplotě se přidá natriumborohydrid (2,3 g,

60,8 mmol). Směs se míchá 30 minut a poté se přidá během 1 hodiny při teplotě 60 - 6 5 ’C methanol (15 ml) a směs se míchá 1 hodinu při téže teplotě. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a přidá se vodný roztok (134 ml) obsahující kyselinu citrónovou (3,4 g) a ethylacetát (150 ml). Organická vrstva se oddělí a promyje vodou (60 ml) a zahustí se ve vakuu při teplotě 40 °C. Poté se přidá ke krystalickému zbytku n-hep226 (30 ml) tan ^a směs se zahustí ve vakuu. K vysráženému pevnému zbytku se přidá n-heptan (50 ml) a voda (5 ml) a směs se ochladí na teplotu nepřevyšující 5 °C a míchá se 1 hodinu. Vysrážená krystaly se odfiltrují a promyjí n-heptanem (35 ml) a suší se na vzduchu a získá se bílý prásek monohydrátu (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(R,S)-1,3-dihydroxypropyl]pyrrolidinu [8,04 g, výtěžek 51 %\ (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 94,7 : 2,7). < »· teplota tání: 84,6 ’C

IČ(KBr)cm^-1: 3510,3400,3300,3230,2950,1660,1420,1360,1170, &

1065,770

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,46(9H,s), 1,70-1,80(1H,m),

1,90-2,00(lH,m), 3,O5(1H, br s),

3,25(1H,dd,J=4,0, 12,0Hz), 3,51(lH,d,J=12,0Hz),

3,85(2H,d,J=4,OHz), 4,00(lH,m), 4,13(lH,m),

4,30(lH,s), 4,82(lH,m)

3)

HO,, _ .....______ _____________ . .....................,.........

H

Výše uvedená sloučenina (12,35 g, 31,34 mmol) se rozpustí ve směsi methylenchlorídu (67 ml) a vody (13 ml). Organická vrstva se oddělí a zahustí ve vakuu. Ke zbytku se přidá ethylacetát (15 ml) a směs se zahustí. Zbytek se rozpustí v * methylenchlorídu (111 ml) a při 7 °c se přidá 4-dimethylaminopyridin (383 mg, 3,13 mmol). Směs se míchá 15 minut a poté se přidá při 5 °C triethylamin (13,1 ml, 93,9 mmol) a reakční směs se míchá 10 minut. K reakční směsi se poté přidá při 5 ’C tosylchlorid (7,18 g, 37,7 mmol) a směs se míchá při teplotě 10 až 20 ’C po dobu 4 hodin. K reakční směsi se přidá při teplotě nepřevyšující 10 ”C vodný roztok (75 ml) hydro227 genuhličitanu sodného (5 g) a směs^semichá 15 minut. Organická vrstva se oddělí a postupně se promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové (60 ml) a vodou (50 ml) a zahusti se.

Ke zbytku se přidá methylenchlorid (10 ml) a methanol (10 ml). Směs se zahustí ve vakuu a získá se tosylát ve formě olejového zbytku. Zbytek se rozpustí v methanolu (9 ml). Tato směs se přidá k roztoku methylaminu (26,3 g, 34,7 mmol) v methanolu (44 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Poté se reakční smés zahustí při teplotě 40 °C na objem 25 ml a ke zbytku se přid ethylacetát (60 ml). Smés se promyje vodným roztokem (50 ml) obsahujícím hydrogenuhličitan sodný (1,6 g) a vodu (30 ml) a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá ethylacetát (7 ml) a vlhkost se oddestiluje s organickým rozpouštědlem. Tato operace se opakuje 5 x.

Získaný zbytek se rozpustí při teplotě 10 °C ve směsi chlorovodíku (4,93 g) a methanolu (50 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin a poté 1 hodinu při teplotě 14 °C. Vysrážené krystaly se odfiltrují a promyjí směsí methanol-diisopropylether (1 : 2, 15 ml) a suší se ve vakuu při teplotě 40 'C po dobu 5,5 hodin a získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě bílých krystalů (6,41 g, výtěžek 83 %). Z matečného roztoku se získají druhotné krystaly (78 mg).

teplota tání: 194 °C

IČ(KBr)cm^_1: 3410,2980,2800,1580,1010

NMR(D₂O) δ:

l,75(lH,m), l,90(lH,m), 2,05(2H,m), 2,66(3H,s),

3,12(2H,m), 3,25(1H,d,J=12,5Hz) ,

3,50(1H,dd,J=3,6, 12,5Hz), 3,92(lH,m), 4,10(lH,m),

4,60(lH,br s)

Referenční příklad 36 ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2- [ ( S)-1-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl)ethyllpyrrolidin

28

CONHMe

40% roztok methylaminu v methanolu (50 ml) se přidá k (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(S)-l-hydroxyethyl-2-methoxykarbonyljpyrrolidinu (5,0 g, 12,4 mmol) připraveném v referenčním příkladu 32. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Poté se reakční roztok zahustí a přidá se ethylacetát (100 ml). Tato směs se postupně promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 1 : 1 - 1 : 3) a získá se sloučenina uvedená v názvu (3,5 g, výtěžek 70 %).

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 3,26(lH,m), 4,27(lH,m),

0,85(9H,s), 3,57(lH,m), 6,17(lH,m), l,46(9H,s), 2,79(3H,m) 3,80(lH,m), 3,97(lH,m), 6,92(lH,m)

Referenční příklad 37 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-[(R)-l-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl)ethyl]pyrrolidin

TBSO

H

3oc

CONHMe

229

Sloučenina uvedená v názvu (4,5 g, výtěžek 90 %) se získá z (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2(R)-l-hydroxyethyl-2-methoxykarbonyl jpyrrolidinu (5,0 g, 12,4 mmol) stejným způsobem jako v referenčním příkladu 36. NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), l,46(9H,s),

2,80(3H,d,J=4,9Hz), 3,25(1H,dd,J=3,9, 11,7Hz),

3,47(lH,m), 3,91(lH,m), 4,13(lH,m) 4,28(lH,m),

5,63(lH,m), 6,97 (lH,m)

Referenční příklad 38 ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-methansulfonyloxy-2-(2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl)pyrrolidin ^1} MsO ^CGOMe í

Boc

K roztoku methylesteru (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-hydroxyprolinu (30,2 g, 123 mmol) v methylenchloridú (300 ml) se při teplotě 0 “Ca pod atmosférou dusíku přidá po kapkách postupně triethylamin (41,2 ml, 0,295 mmol) a methansulfonylchlorid (17,1 ml, 0,221 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při teplotě 0 “Ca poté se přidá vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se zpracuje mžikovou sloupcovou chromatografii na silikagelu (heptan-ethylacetát = 5 : 5) a získá se methylester (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-methansulfonyloxyprolinu (35,9 g, výtěžek 99,1 %) .

NMR(CDC1₃) δ:

30

1,42 & l,47(totál. 9H, každý s), 2,21-2,31(1H,m), 2,532,71(lH,m), 3,06(3H,s), 3,75(.3H,s), 3,70-3,90(2H,m),

4,41 & 4,47(totál. 1H, každý dd,J=6,9, 6,9Hz),

5,24-5,30(1H,m)

MsO,

COOMe

Boc i-.

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,03 g, 3,19 mmol) v ^r*^J methanolu (6 ml) se přidá při teplotě místnosti 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (3 ml, 3,00 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při téže teplotě a poté se přidá 1 N kyselina chlorovodíková (10 ml). Směs se extrahuje ethylacetátem.

Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu (5 ml) a poté se přidá při teplotě 0 °C karbonyldiimidazol (672 mg, 4,15 mmol)..Získaný roztok se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny a získá se roztok imidazolidu. V odděleném reaktoru se rozpustí monomethylmalonát (1,40 g, 12,8 mmol) v tetrahydrofuranu a poté se postupně při teplotě 0 °C přidá chlorid hořečnatý (7,29 mg, 7,66 mmol) a triethylamin (1,97 ml, 14,0 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Tento reakční roztok se ochladí na 0 ’C a přidá se k němu po kapkách dříve připravený roztok imidazolidu. Reakční roztok se míchá 24 hodin při teplotě místnosti a k reakčnímu roztoku se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného.

Směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Zbytek.se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptán-ethyiacetát =2 : 3) a ziská se sloučenina uvedená v názvu (945 mg, výtěžek 81,2 %).

231

NMR(CDC1₃) δ: ~ l,46(9H,s), 2,20-2,39(lH,m), 2,48-2,7(1H,m),

3,05 & 3,06(totál. 3H, každý s), 3,4S-3,70(3H,m),. 3,73 & 3,75(totál. 3H, každý s) , 3,80-4,01(1H,m),

4,54(dd,J₁=7,8, 7,8Hz) & 4,62(dd,J₁=3,1, 8,1Hz) = (totál. 1H), 5,21-5,29(lH,m)

Referenční příklad 39 ( 2S , 4R) -N-terc . butoxykarbony 1-4 -terč. buty Idimethy lsi loxy-2- [ 2— (N-methylkarbamoyl) -1-oxoethy1 ] pyrrolidin 1)

T3SC\ .^H

Boc

Methylester (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinu (5,9 g, 16,5 mmol) se rozpustí v methanolu (45 ml) a vodě (11 ml). Poté se přidá 2,5 N vodný roztok hydroxidu sodného (6,6 ml, 16,5 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 6 hodin a organické rozpouštědlo se oddestiluje. Vodná vrstva se promyje ethylacetátem, pH roztoku se upraví pomocí 1 N kyseliny chlorovodíkové na hodnotu 2,5 a poté se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu a získá se surový (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxyprolin (5,1 g) .

TBSO

COOtBu

Boc

Výše uvedená sloučenina (5,1 g) se rozpustí v tetrahydro

232 furanu a poté se přidá roztok 1,1'-karbonyldiimidazolu (3,1 g, 19,1 mmol) v N,N-dimethylformamidu (16 ml). Tento roztok se míchá 40 minut a získá se roztok imidazolidu.

K suspenzi monoterc.butylmalonátu (6,4 g, 39,9 mmol) a chloridu hořečnatého (2,3 g, 24,1 mmol) v tetrahydrofuranu (90 ml) se po kapkách a za chlazení'ledem .přidá triethylamin (6,1 ml, 43,9 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 80 minut. K této suspenzi se přidá dříve připravený roztok imidazolidu a směs se míchá při teplotě místnosti 4 dny. Nerozpustný materiál se odfiltruje a k filtrátu se přidá methylenchlorid. Organická vrstva se postupně promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát =10 : 1) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxy karbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-terc.butoxykarbonyl-l-oxoethyl)pyrrolidin (5,6 g, výtěžek 79,2 %). IČ(KBr)cm^-1: 2977,2896,1747,1712,1473,1463,1456,1253,1162,

1116,837,777

NMR(CDC1₃) δ:

0,08(6H,s), 0,88(9H,s), 1,43-1,58(18H,m),

2,02-2,19(2H,m), 3,33-3,54(4H,m), 4,36-4,58(2H,m)

3)

TBSO,

H

CONHMe

Ó

Boc

11,8% roztok methylaminu v toluenu (8,9 ml) se přidá k roztoku výše uvedené sloučeniny (4,9 g, 11,0 mmol) v toluenu (40 ml). Tento roztok se míchá v uzavřené zkumavce 3 hodiny při,teplotě 100 ’C. K reakčnímu roztoku se přidá ethylacetát Organická vrstva se promyje postupné zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného

233 a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = : 2) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2 -[ 2- (N-methylkarbamoyl) -1-oxoethyl lpyrrolidin (4,1 g, výtěžek 92,9 %).

IČ(KBr)cm^-1: 2883,2 856,1695,1660,15 58,1473,1456,1253,1160, 1116,837,777

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,86(9H,s), 1,39 & l,45(totál. 9H,každý s),

1,82-2,17(3H,m), 2,80-2,85(3H,m), 3,36-3,57(4H,m),

4,38-4,51(2H,m), 7,11-7,14(1H,br s)

Referenční příklad 40 (2S, 4R) -N-terc. butoxykarbony 1-4 -terč. butyldimethylsiloxy-2- [ (R, S) -1-hydroxy- ( 2-methoxykarbonyl) ethyl ] pyrrolidin

COOMe

V atmosféře argonu se míchá v uzavřené zkumavce při teplotě 140 ’C po dobu 4 hodin polymer (1,5-cyklooktadien)ruthenium(II)chloridu (13 mg, 4,6 x 10“² mmol), (S)-(-)-bis(difenylfosfino)-l,l'-binaftyl (28 mg, 4,6 χ 10^-2 mmol), ' triethylamin (0,1 ml, 6,5 x 10^_1 mmol) a toluen (5 ml). Ze získaného červeného roztoku se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Ke zbytku se přidá roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2- ( 2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl) pyrrolidinu (2,0 g, 5 mmol) v roztoku tetrahydrofuranu (5 ml) a methanolu (3 ml). Uvnitř systému se 2 x vymění argon a směs se mičhá pod tlakem vodíku 4 kg/cm² a při teplotě 80 °C po dobu 2 dnů. Reakční roztok se zahustí a zbytek se zpracuje

234 sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát =7:1- 4 :.l) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl)pyrrolidin (670 mg, znovuzískání výchozích látek) a (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy[ (R,S)-l-hydroxy-2-(2-methoxykarbonyl)ethylJpyrrolidin [1,24 . g, výtěžek 62 %; HPLC, náplňová kolona YMC, A-001 S-5 120 A SIL, vývojka: hexan-2-propanol = 100 : 1, průtok 2 ml/min, detekce při 210 nm (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-iso- * meru (méně polární sloučenina) = 2,5 : 1].

NMR(CDC1₃) δ: ^ť

0,07(6H,s), 0,88(9H,s), 1,48(9H,s), 1,90(2H,m),

2,39(2H,m), 3,28(2H,dd,J=3,S, 11,4Hz), 3,72(3H,s),

4,12(lH,m), 4,35(2H,m)

Referenční příklad 41 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-[(R,S)-1-hydroxy-(2-methoxykarbonyl)ethyl]pyrrolidin

1) · ............................

HO.

COOMe • HC!

K (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-(2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl)pyrrolidinu (3,17 g, 7,9 mmol) se přidá roztok 3 N kyseliny chlorovodíkové v dioxanu (30 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny a poté se zahustí ve vakuu. Ke směsi se poté přidá chloroform (20 ml) a methanol (20 ml) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Tato operace se opakuje 2 x a přes noc se získá surový monohydrochlorid (2S,4R)-4-nydroxy-2-(2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl) pyrrolidinu (1,76 g).

235

NMR(D₂O) δ:

2,10-2,75(3H,m), 3,45(2H,s), 4,72(lH,m), 5,01(lH,m) 2) . T3SO,.. , ,- - . , -

V atmosféře argonu se míchá v uzavřené zkumavce při teplotě 140 °C po dobu 6 hodin polymer (1,5-cyklooktadien)ruthenium( II)chloridu (10 mg, 3,6 x 10^-2 mmol), (S)-(-)-bis-(difenylfosfino)-1,1'-binaftyl (24 mg, 3,6 x 10^-2 mmol), triethylamin (0,1 ml, 6,5 x 10¹ mmol) a toluen (5 ml). Ze? získaného červeného roztoku se odpaří ve vakuu rozpouštědlo. Ke zbytku se přidá monohydrochlorid (2S,4R)-4-hydroxy-2-(2-methoxykarbonyl-l-oxoethyl)pyrrolidinu (1,76 g) získaný výše uvedenou reakcí, v roztoku methanolu (8 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml). Směs se míchá pod tlakem vodíku 4 kg/cm² při teplotě 80 ‘C po dobu 22 hodin. K reakčnímu roztoku se poté přidá tetrahydrofuran (20 ml) a poté se při 0 °C přidá triethylamin (0,99 ml, 7,1 mmol) a diterc.butyldikarbonát (1,86 g, 8,5 mmol). Směs se míchá 1 hodinu. Vysrážená pevná látka se odfiltruje a organická vrstva se zahustí ve vakuu. Zbytek se extrahuje ethylacetátem a organická vrstva se postupně promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu.

K roztoku získaného oleje v N,N-dimethylformamidu (30 ml) se přidá při teplotě 0 °C chlorterc.butyldimethylsilan (1,20 g,

7,9 mmol) a imidazol (540 mg, 7,9 mmol). Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a poté se k reakční směsi přidá ethylacetát. Organická vrstva se promyje postupně zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve

236 vakuu. Získaný olej se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát) a získá se sloučenina uvedená v názvu [1,3 g, výtěžek 45 %; HPLC za stejných podmínek jako v referenčním příkladu 40 (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) 14,9 : 1].

NMR(CDC1₃) δ: 0,07(6H,s) 2,39(2H,m)

4,12(lH,m)

0,88(9H,s), l,48(9H,s), l,90(2H,m),

3,28(2H,dd,J=3,8 , 11,4Hz), 3,72(3H,s), 4,35(2H,m)

Referenční příklad 42 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-2-[(R,S)-2-terč.butoxykarbonyl-l-hydroxyethyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin

TBSO

COOtBu

V atmosféře argonu se míchá v uzavřené zkumavce při teplotě 140 ’C po dobu 4 hodin polymer (1,5-cyklooktadien)ruthenium(II)chloridu (11 mg, 3,6 x 10“² mmol), (R)-(-)-bis(difenylfosfino)-l,1’-binaftyl (27 mg, 4,5 x 10² mmol), triethylamin (0,1 ml, 6,5 x 10^-1 mmol) a toluen (5 ml). Ze získaného červeného roztoku se odpaří rozpouštědlo ve vakuu.

Ke zbytku se přidá roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(2-terc.butoxykarbonyl-l-oxoethyl)-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidinu (2,0 g, 5 mmol) v roztoku tetrahydrofuranu (5 ml) a terč.butanolu (10 ml). Směs se míchá pod tlakem vodíku 4 kg/cm² a při teplotě 80 ’C po dobu 22 hodin. Reakční roztok se zahustí a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 4 : l)-a získá se sloučenina uvedená v názvu [1,48 g, výtěžek 97 %;

HPLC, náplňová kolona YMC, A-001 S-5 120A SIL, vývojka:

237 hexan-2-propanól = 100 : 1, průtok 2 ml/min, detekce při' 210 nn (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina = 1 : 25].

NMR(CDC1₃) 5:

0,06(6H,s), 3,29(lH,m),

0,87(9H,s), l,47(9H,s), 2,33(2H,m), 3,56(lH,m), 4,33(lH,m)

Referenční příklad 43 (2S, 4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2- [ l-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl)ethyl]pyrrolidin

TBSO

CONHMe

V atmosféře argonu se míchá v uzavřené zkumavce při teplotě 140 ’C po dobu 6 hodin polymer (1,5-cyklooktadien)ruthenium(II)chloridu (10 mg, 3,6 x 10“² mmol), (S)-(-)-bis(difenylfosfino)-l,l'-binaftyl (24 mg, 3,6 x 10^-2 mmol), triethylamin (0,1 ml, 6,5 x 10^-1 mmol) a toluen (5 ml). Ze získaného červeného roztoku se odpaří rozpouštědlo ve vakuu.

Ke zbytku se přidá roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc. butyldimethylsiloxy-2-(2-(N-methylkarbamoyl)-l-oxoethyl]pyrrolidinu (1,5 g, 3,9 mmol) v roztoku tetrahydrofuranu (5 ml) a ethanolu (10 ml). Směs se míchá pod tlakem vodíku 4 kg/cm² a při teplotě 80 ’C po dobu 22 hodin. Reakční roztok se zahustí a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát =3 : 1-1 : 3) a získá se sloučenina uvedená v názvu [1,19 g, výtěžek 79 %; HPLC, náplňová kolona YMC, AQ-32 S-5 120A ODS, vývojka: acetonitril - voda 70 : 30, detekce při 210 nm (R)-isomer (polárňi sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 1,89 : 1] .

238

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87(9H,s), l,47(9H,s), l,75(lH,m), l,95(lH,m), 2,81(3H,d,J=3,6Hz),

3,26(1H,dd,J=3,6, 11,7Hz), 3,53(lH,m),

3,75-4,40(3H,m), 6,96(lH,m)

Referenční příklad 44 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-[l-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl)ethylJpyrrolidin 1)

HO.

CONHMe • HCl

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[2-(N-methylkarbamoyl)-l-oxoethylJpyrrolidinu (2,07 g, 5,3 mmol) v methanolu (10 ml) se přidá 5,5 N roztok chlorovodíku v methanolu (6 ml, 33 mmol) a směs se— míchá při teplotě místnosti 6 hodin. Reakční roztok se zahustí ve vakuu. K získanému zbytku se přidá tetrahydrofuran a ethanol a sraženina se odfiltruje a promyje ethanolem a získá se monohydrochlorid (2S,4R)-4-hydroxy-2-[2-(N-methylkarbamoyl) -l-oxoethyl]· pyrrolidinu (737 mg, výtěžek 62 %). NMR(D₂O) δ:

2,20-2,42(2H,m), 2,55-2,70(2H,m), 2,78(4H,s), 3,44(.2H,d,J=lHz) , 4,72(lH,m), 4,93(lH,m)

TBSO

CONHMe

2)

V atmosféře argonu se míchá v uzavřené zkumavce při

239 teplotě 14 0 ° C po dobu 6 hodin polymer (1,5-cyklooktadien)ruthenium(IIjchloridu (10 mg, 3,6 x 10^-2 mmol), (S)-(-)-bis(difenylfosfino)-l,1'-binaftyl (24 mg, 3,6 x 10^-2 mmol), triethylamin (0,1 ml, 6,5 x 10^-1 mmol) a toluen (5 ml). Ze získaného červeného roztoku se odpaří rozpouštědlo ve vakuu. Ke zbytku se přidá roztok monohydrochloridu (2S,4R)-4-hydroxy-2-[2-(N-methylkarbamoyl)-1-oxoethyl] pyrrolidinu (660 mg, 3,0 mmol) v methanolu (10 ml) á tetrahydrofuranu (5 ml).

Směs se míchá pod tlakem vodíku 4 kg/cra² a při teplotě 30 °C po dobu 6 hodin. Poté se reakční roztok zahustí ve vakuu. Ke zbytku se přidá dioxan (20 ml) a voda (10 ml) a poté při teplotě 0 °C 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml) a di-terc.butyldikarbonát (930 mg, 4,2 mmol) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční roztok se poté -zahustí a zbytek se extrahuje chloroformem (50 ml x 5). Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahusti se ve vakuu. Získaný olej (930 mg) se rozpustí v N,N-dimethylformamidu (10 ml) a při 0 ’C se přidá chlorterc.butyldimethylsilan (520 mg, 3,4 mmol) a imidazol (240 mg, 3, mmol). Směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti a k reakčnímu roztoku se přidá ethylacetát (100 ml). Směs se postupně promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Získaný olej se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát) a získá se sloučenina uvedená v názvu [602 mg, výtěžek 60 %; HPLC za stejných podmínek jako v referenčním příkladu 43 (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 149 : 1].

Referenční příklad 45 ( 2S , 4R) -N-terc. butoxykarbonyi-4-methansulf onyloxyprolinal 1)

240

MsO,_

Η

Boc

K roztoku methylesteru (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4methansulfonyloxyprolinu (10,0 g, 30,9 mmol) v roztoku tetrahydrofuranu a methanolu (1 : 1, 100 ml) se postupně přidá chlorid litný (3,93 g, 92,8 mmol) a natriumborohydrid (3,51 g, 92,8 mmol). Reakční roztok se míchá při teplotě místnosti 11 hodin.. Poté se přidá k reakčnímu roztoku kyselina octová (2 ml), ethylacetát a voda a směs še zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí ve vodě a ethylacetátu a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se zbytek (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-hydroxymethyl-4-methansulfonyloxyprolinu (9,41 g).

NMR(CDC1₃) δ:

l,48(9H,s), 1,84-1,97(1H,m), 2,33-2,45(lH,m),

3,05(3H,s), 3,55-3,65(2H,m), 3,74-3,93(2H,m),

4,05-4,22(1H,m), 4,43-4,60(1H,m), 5,17-5,26(1H, br)

2)

MsO,,

Boc

Roztok oxalylchloridu (1,71 g, 13,5 mmol) v methylenchloridu (50 ml) se ochladí na teplotu -78 C a poté se přidá roztok dimethylsulfoxidu (2,18 g, 27,1 mmol) v methylenchloridu (5 ml). Tento reakční roztok se míchá 10 minut. K tomuto roztoku se přidá roztok alkoholového surového produktu získaného výše uvedenou reakci v methylenchloridu (10 ml). Směs se míchá 10 minut a poté se po kapkách přidá při

241 stejné ~ teplotě tFiethy lamin (4,7 6 ml, 3 3,9 mmol). Reakční ' roztok se ohřeje během 2 hodin na teplotu 20 ’C. K reakční směsi se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát =1 : 4) a získá se sloučenina uvedená v názvu (829 mg, výtěžek 84,5 %).

NMR(CDC1₃) δ:

1,45 & l,49(totál. 9H, každý s), 2,04-2,32(lH,m), 2,36-2,61(lH,m), 3,05 & 3,07(totál. 3H, každý s),

3,51-4,02(2H,m), 4,23-4,49(lH,m), 5,18-5,30(1H,m),

9,47 & 9,59(totál. 1H, každý d,J=3,0Hz)

Referenční příklad 46 ( 2S , 4R) -N-terc. butoxykarbonyl-4-terc . butyldimethylsiloxy-2- [ l-hydroxy-2- (methoxykarbonyl)ethyl ]pyrrolidin

TBSO.

COOMe

Boc

OH

K tetrahydrofuranu (5 ml) se postupně po kapkách přidá při teplotě -78 °C 1,0 M roztok hexamethyldisilazidu sodného v tetrahydrofuranu (0,910 ml, 0,910 mmol) a methylacetát (72,O>«1). Smés se míchá 30 minut a poté se při téže teplotě přidá tetrahydrofuranový roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinalu (200 mg, 0,607 mmol). Tento roztok se míchá 30 minut. K reakčnimu roztoku se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a směs se extrahuje etriylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran

242 horečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát = : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu [232 mg, výtěžek 94,7 %; (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 6,27 : l].

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86 & 0,88(totál. 9H, každý s),

1,46 & l,45(totál, 9H, každý s), 1,78-2,06(2H,m),

2,3 4 - 2,4 9 ( 2H , m ) , 3,27 (dd , J=4,2 , 11,4Hz) & 3,23-3,30(m) ,_k =(totál. 1H), 3,4-3,65(lH,m), 3,696 & 3,704(totál. 3H, každý s), 3,8-4,26(2H,m), 4,23-4,39 ( 2H, br ) ‘č

Referenční příklad 47 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy-2-[l-hydroxy-2-(methoxykarbonyl)ethyl]pyrrolidin

TBSO,..

Ke smési tetrahydrofuranu (45 ml) a tetraethylethylendiaminu (1,5 ml.) se postupně po kapkách přidá při teplotě -78 °C 1,0 M roztok hexamethyldisilazidu sodného v tetrahydrof uranu (0,89 2 ml) a methylacetát (71,2/41). Směs se míehá 30 minut a poté se přidá tetrahydrofuranový roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-(terč.butyldimethylsiloxy)ptolinalu (196 mg). Tento roztok se míchá 30 minut. K reakčnímu roztoku se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. ' Zbytek se čistí sloupcovou-Chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát = 3 : 1) a získá se sloučenina uvedená v

243 názvu [ 209 mg, výtěžek 87 , T~% ; (R) -isomer ( polární“ sloučenina) (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 1,82 : 1].

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86 & 0,88(totál. 9H, každý s),

1,46 & l,45(totál. 9H, každý s), 1,78-2,06(2H,m),

2,34-2,49(2H,m), 3,27(dd,J=4,2, 11,4Hz) & 3,23-3,30(m) =(totál. 1H), 3,4-3,65(lH,m), 3,696 & 3,704(totál. 3H, každý s), 3,8-4,26(2H,m) , 4 , 23-4,39( 2H,br)

Referenční příklad 48 ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(2-terc.butoxykarbonyl-1-oxoethyl)-4-methansulfonyloxypyrrolidin

MsO,.

Boc

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(2-terc.butoxykarbonyl-l-oxoethyl) -4-terc. butyldimethylsiloxypyrrolidinu (3,39 g, 7,64 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) se přidá 1 M roztok tetrabutylamonium-fluoridu v tetrahydrofuranu (8,41 ml, 8,41 mmol). Tento roztok se míchá při teplotě místnosti 8 hodin a poté se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného. Směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se postupně promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v methylenchloridu (50 ml) a postupné se po kapkách přidá při teplotě 0 ’C triethylamin (3,22 ml, 22,9 mmol) a methansulfonylchlorid (1,18 ml, 15,3 mmol). Směs se míchá při téže teplotě 2 hodiny a poté se přidá nasycený vodný roztok čhlořidu amonného. Směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se postupně promyje 1 N kyselinou chlorovodíkovou,

244 nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát = 1 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (2,33 g, výtěžek 74,8 %).

NMR(CDCl₃) δ:

1,45 & l,47(totál. 18H, každý s), 2,22-2,41(1H,m),

2,48-2,72(lH,m), 3,05(3H,s), 3,40(d,J=16,2Hz) &

3,49(d,J=16,2Hz) & 3,54(d,J=15,8Hz) & 3,61(d,J=15,8Hz) = (totál. 2H), 3,62-3,69(lH,m), 3,81-4,00(1H,m),

4,52(dd,J=8,6, 8,6Hz) & 4,61(dd,J=8,0, 8,0Hz) = (totál. 1H), 5,20-5,28(lH,m)

Referenční příklad 49 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-methansulfonyloxy-2-[(1R)-1-hydroxy-2-(N-methylkarbamoyl)ethyl]pyrrolidin 1)

HO

Boc

OH

COOMe

K roztoku (2S,4R)-l-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(R)-l-hydroxy-2-(methoxykarbonyl)ethyl]pyrrolidinu (2,40 g, 5,95 mmol) v tetrahydrofuranu (24 ml) se po kapkách přidá při teplotě místnosti 1 M roztok tetrabutylamonium-fluoridu v tetrahydrofuranu (7,14 ml). Směs se míchá při téže teplotě 4 hodiny. Reakční roztok se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát =3 : 7) a. získá se diastereomer B (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-hydroxy-2-[(R)-l-hydroxy-2-(methoxyv.

245 karbonyl)ethyl]pyrrolidinu (1,22 -g-, výtěžek- 70,9 %) . 2)

MsO.

Boc

OH

Výše uvedená sloučenina (1,22 g, 4,22 mmol) se rozpustí v methylenchlorídu (12 ml) a postupně se po kapkách při teplotě 0 ’C přidá triethylamin (0,647 ml, 4,64 mmol) a methansulfonylchlorid (0,359 ml). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 .hodiny a poté se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného. Směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát = 2 : 3) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-methansulfonyloxy-2-[ (R) -l-hydroxy-2- (methoxykarbonyl)ethyl]pyrrolidin (947 mg, výtěžek 43,3 %).

NMR(CDC1₃) 5:

1,48(9H,S), 2,21-2,62(4H,m), 3,04(3H,s),

3,45-3,62(lH,m), 3,72(3H,s), 3,82-4,23(3H,m),

4,39-4,48(lH,m), 5,20-5,30(1H,m)

3)

MsO_z,_

Výše uvedená sloučenina (724 mg, 1,97 mmol) se rozpustí v 40% roztoku methylaminu v methanolu (4 ml) a roztok se míchá při teplotě místnosti 14 hodin. Reakční roztok se poté zahusti ve vakuu a zbytek se .rozpustí v ethylacetátu. Roztok se postupně promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, nasyceným vodným roztokem síranu měďnatého a

246 nasyceným vodným roztokem síranu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se surový produkt sloučeniny uvedené v názvu (400 mg, výtěžek 55,4 %) .

NMR(CDC1₃) δ:

l,47(9H,s), 2,10-2,36(4H,m), 2,81(3H,d,J=4,6Hz), 3,04(3H,s), 3,52(dd,J=4,1, 12,8Hz) & 3,48-3,59(m) = (totál. 1H), 3,85-3,99(1H,m), 4,06-4,16(2H,m),

5,03-5,16 & 5,18-5,29(totál. 2H, každý br),

6,51-6,53(lH,br)

Referenční příklad 50 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[(R,S)-2-ethoxykarbonyl-1-hydroxyethyl]pyrrolidin

TSSO,.

H

Roztok (2S,4R)—N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinalu (1,0 g, 3,04 mmol) a ethyltrimethylsilylacetátu (1,0 ml, 5,47 mmol) v tetrahydrofuranu (7,5 ml) se přidá pod atmosférou dusíku při teplotě -35 ’C k 0,1 M roztoku tetrabutylamonium-fluoridu v tetrahydrofuranu (45,6 ml). Směs se míchá při teplotě -25 až -35 °C 40 minut. K reakčnímu roztoku se přidá při téže teplotě roztok kyseliny d 1 kafrosulfonové (2,12 g, 9,13 mmol·) v tetrahydrofuranu (10 ml) a směs se míchá 15 minut. Reakční směs se extrahuje ethylacetátem (100 ml). Organická vrstva se postupné promyje vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší se přes bezvodý síran hořečnatý a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™

247 *----C-300, hexan-ethy láce tát = - -2- : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu [820 mg, výtěžek 64,7 %; (R)-isomer (polární sloučenina : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) - 9,56 :

] .

Referenční příklad 51 (2S, 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-(3-hydroxy-l-oxopropylJpyrrolidin 1) .

TBSO

OTBS

Boc

OH

K roztoku (2S,4R)-l-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2-[ (S )-l, 3-dihydroxypropyl lpyrrolidinu (16,95 g, 45,2 mmol) v methylenchloridu (200 ml) se postupně přidá pod atmosférou dusíku a za chlazení ledem a míchání terc.butyl čhlordimethylsilan (6,81 g, 45,2 mmol), 4-N,N-dimethylaminopyridin (0,55 g, 4,5 mmol) a imidazol (3,08 g, 45,2 mmol).

Směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu a poté se reakční roztok vlije do vody (200 ml). Organická vrstva se promyje vodou, suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 9:14 : 1) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxy-2- [ (S ) -3-terc. butyldimethylsiloxy-l-hydroxypropylJpyrrolidin (20,36 g, výtěžek 92,0 %).

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), 0,86(9H,s), l,47(9H,s), 1,91-2,03(2H,m),

3,24-3,31(lH,m) , 3', 43-3,86 ( 5H ,m) , 3,97-4,09 (1H ,m) ,

4,30(lH,br s )., - 4,96 (1H, br s )

2)

248

TBSO

Η

O

OTBS

Bcc

Roztok oxalylchloridu (3,06 ml) v methylenchloridu (100 ml) se ochladí pod atmosférou dusíku na teplotu nepřevyšující -70 °C a poté se po kapkách přidá roztok dimethylsulfoxidu (6,24 ml) v methylenchloridu (20 ml). Směs se míchá při téže teplotě 30 minut. Poté se po kapkách během 5 minut přidá roztok sloučeniny získané výše uvedenou reakcí (14,68 g, 30,0 Λ mmol) v methylenchloridu (100 ml). Směs se míchá při teplotě -70 ’C po dobu 30 minut a poté se po kapkách přidá triethylamin (19,61 ml) a smés se míchá při téže teplotě 1 hodinu. Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá ethylacetát (100 ml) a voda (100 ml). Organická vrstva se suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 1 : 1) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4- ........

-terč.butyldimethylsiloxy-2-(3-terc.butyldimethylsiloxy-1-oxopropyl)pyrrolidin (14,31 g, výtěžek 97,9 %) ve formě oleje.

NMR(CDC1₃) δ:

0,05(6H,s), O,86.(9H,S), l,40(9H,s), 1,93-2,07 ( 2H , m) ,

2,59-2,73(2H,m), 3,50-3,54(2H,m), 3,85-3,92(2H,m),

4,32-4,46(2H,m)

TBSO

N·

OH

Boc ((

3)

249

Κ·_roztoku výše uvedené sloučeniňy (4, 87 'g, 10 mmol) v tetrahydrofuranu (12,0 ml) se přidá při teplotě místnosti voda (28 ml) a kyselina octová (52 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 24 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 1 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu -(2,50 g, výtěžek 67,0 %). NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,87(9H,s), l,44(9H,s), 1,81-1,91(lH,m), .

2,04-2,16(lH,m), 2,63-2,88( 2H,m), 3,37-3,60( 2H,m),

3,84-3,95(2H,m), 4,33-4,60(2H,m)

Referenční příklad 52

Monohydrochlorid (2S,4R)-4-hydroxy-2-(3-hydroxy-l-oxopropyl)pyrrolidinu

H

( 2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy—2—(3—terč.butyldimethylsiloxy—1—oxopropyl)pyrrolidin (4,87 g, 10,0 mmol) se rozpustí v 3,3 N roztoku chlorovodíku v methanolu (16,5 ml).· Roztok se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se zahustí ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu (2,29 g).

NMR(D₂O) δ:

2,06-2,21(lH,m), 2,53-2,65(1H,m), 2,84-2,95(2H,m),

3,39-3,43( 2H,m), 3,72-3,91(2H,m), 4,66-4,76(1H,m),

4,82-4,88(lH,m)

Referenční příklad 53 ( 2S, 4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-(terč.butyldimethylsiloxy)250

-2-( (R,S ) -2-kyan-1-hydroxyethyl'] pyrrolidin T8S0„.

H

Pod, atmosférou dusíku se přidá po kapkách při teplotě -78 ’C acetonitril (87 ul, 1,67 mmol) k 2,0 M roztoku lithiumdiisopropylamidu v tetrahydřofuranu (835^m1, 1,67 mmol) a tetrahydroíuran (15 ml). Směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 10 minut a poté se přidá po kapkách roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimethylsiloxyprolinalu (500 mg, 1,52 mmol) v tetrahydřofuranu (1 ml). Reakčni směs se míchá 20 minut a poté se přidá k reakčni směsi kyselina octová. Reakčni směs se vlije do směsi ethylacetátu a vody. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bézvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Získaný olejovitý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát = 3 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu [467 mg,.výtěžek 83 %, (R)-isomer (polární sloučenina) : (S)-isomeru (méně polární sloučenina) = 2,99 : 1].

NMR(CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,85(9H,s), l,45(9H,s), 1,81-2,09(2H,m),

2,37-2,56(2H,m), 3,20-3,36(1H,m), 3,50-3,64(1H,m),

4,03-4,41(3H,m)

Referenční příklad 54 (2S,4R)-N-terc.butoxykarbony1-4-terč.butyldimethylsiloxy~2-[l-hydroxy-2-(N-methylkarbamoy1)ethyl]pyrrolidin

251

Pod atmosférou dusíku se přidá po kapkách a při teplotě -78 °C roztok N-methylacetamidu (116y\l, 1,52 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) a poté triamid kyseliny hexamethylfosforečné ( 5551, 3,19 mmol) k 2,0 M roztoku lithiumdiisopropylamidu v tetrahydrofuranu (1,6 ml, 3,19 mmol) a tetrahydrofuran (10 ml) a směs se míchá při teplotě -78 C po dobu 30 minut. Poté se přidá po kapkách roztok (2S,4R)N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimehylsiloxyprolinalu (500 mg, 1,52 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. K reakční směsi se přidá voda. Reakční směs se vlije do směsi ethylacetátu a vody. .Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a odpaří se ve vakuu. Získaný olejovitý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (chloroform-methanol =20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (158 mg, výtěžek 25,9 %). NMR(CDC1₃) S:

0,06(6H,s), O,87(9H,S), l,46(9H,s), 1,90-2,32(2H,m),

2,62 & 2,65(totál. 3H, každý s), 2,80(2H,m),

3,20-3,28(lH,m), 3,45-3,60(1H,m), 3,78-4,32(3H,m),

6,93(lH,m)

Referenční příklad 55 ( 2S , 4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylkarbamoyl)-1-hydroxyethyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolid.in

252

Pod atmosférou dusíku se přidá po kapkách a při teplotě -78 ’C roztok N-terc.butoxykarbony1-N-methylacetamidu ( 289 mg, 1,67 mmol) v tetrahydrofuranu (1 ml) a poté triamid _(i kyseliny hexamethylfosforečné (290^1, 1,67 mmol) k 2 M roztoku lithiumdiisopropylamidu v tetrahydrofuranu (835^»λ1, 1,67 * mmol) a tetrahydrofuran (10 ml) a směs se míchá při teplotě -78 C po dobu 20 minut. Poté se přidá po kapkách roztok (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-terc.butyldimehylsiloxyprolinalu (500 mg, 1,52 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) a reakční směs se míchá při téže teplotě 30 minut. K reakční směsi se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a reakční směs se vlije do směsi ethylacetátu a vody. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a odpaří se ve vakuu. Získaný olejovitý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát =1 : 2) a získá se sloučenina uvedená v názvu (288,8 mg, výtěžek 37,8 %).

NMR(.CDC1₃) δ:

0,06(6H,s), 0,84(9H,s), l,46(18H,s), 1,82-2,11(2H,m),

2,36-2,51(2H,m), 2,77 & 2,80(totál 3H, každý s),

3,27-3,50(2H,m), 3,97-4,44(2H,m), 5,32-5,46(1H,m) ifc

Referenční příklad 56 (2S,4R)-2-[2-(N-benzyl-N-methylkarbamoyl)-1-hyďroxyethyl]-4-terc.butyldimethylsiloxypyrrolidin

253

Pod· atmosférou dusíku se přidá po kapkách a při teplotě -78 °C roztok N-benzyl-N-methylacetamidu (280 mg, 1,67 mmol) v tetrahydrofuranu (1 ml) k roztoku obsahujícím 2,0 M roztok li.thiumdiisopropylamidu v tetrahydrof uranu ( 835 Ml, 1,67 mmol).a tetrahydrofuran (15 ml) a smés se míchá při teplotě -78 ’C po dobu 10 minut. Poté se přidá po kapkách roztok (2S,4R) -N-terc . butoxykaronyl-4-terc . butyldimeÉylsiloxyprolinalu ( 500 mg, 1,52 mmol) v tetrahydrof uranu (1 ml) a reakční směs se míchá při téže teplotě 10 minut. K reakční směsi se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a reakční směs se vlije do směsi ethylacetátu a vody. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se přes bezvodý síran sodný a odpaří se ve vakuu. Získaný olejovitý zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (heptan-ethylacetát =2 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (549 mg, výtěžek 73,6 %).).

NMR(CDC1₃) S:·

0,06(6H,s), 0,36(9H,s), l,41(9H,s), 1,79-2,21(2H,s),

2,34-2,61(2H,m), 2,91(3H,m), 3,23-3,51(2H,m),

3,98-4,86(3H,m)

Referenční příklad 57

Hydrochlorid (2S,4S)-2-[(R)-l-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl ]-4-merkaptopyrrolidinu 1)

254

K roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[(R)-3-(Ν-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-1-hydroxypropy1 ] -4-hydroxypyrrolidinu (1,0 g, 2,67 mmol, meziprodukt připravený v referenčním příkladu 27-2) v tetrahydrofuranu (10 ml) se postupné přidá pod atmosférou dusíku a za chlazeni ledem trifenylfosfin (842 mg, 3,21 mmol) a diethylazodikarboxylát (0,505 ml, 3,21 mmol). Směs se při téže teplotě míchá 10 minut a poté se přidá po kapkách kyselina thiooctová (0,25 ml, 0,35 mmol). Reakční smés se míchá při téže teplotě 2,5 hodiny a poté se zahustí ve vakuu. Ke zbytku se přidá směs (10 ml) hexan-ethylacetátu (5 : 1). Sraženina se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, hexan-ethylacetát = 5 : 1) a získá se (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-4-acetylthio-2-[(R)-3-(Ň-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-1-hydroxypropyl)pyrrolidin (1,03 g, výtěžek 89,2 %). Data této sloučeniny souhlasí s daty sloučeniny připravené v referenčním přikladu 27-2. -

A,:

K roztoku výše uvedené sloučeniny (1,03 g, 2,33 mmol) v methanolu (10 ml) se přidá 5,5 N roztok chlorovodíku v methanolu (2,.4 ml). Reakční roztok se ref luxuje 1 hodinu a zahustí se ve vakuu. Ke.zbytku se přidá roztok .tetrahydrofuranu a methanolu (3 : 1) a zárodečné krystaly a smés se nechá

255

-------stát přes noc za chlazení ledem. Vysrážené krystaly se -------------------* odfiltrují a suší, přičemž se získá sloučenina uvedená v názvu (486 mg, výtěžek 77,1 %).

Referenční příklad 58

Dihydrochlorid (2S,4S)-2-[(R)-1-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl]-4-merkaptopyrrolidinu

HS.

NHMe • 2HCI

Diisopropylazodikarboxylát (63,2 ml, 320,9 mmol) se přidá během 30 minut a pod atmosférou dusíku a za chlazení ledem a míchání k roztoku (2S,4R)-N-terc.butoxykarbonyl-2-[ (R)-3§* -(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-l-hydroxypropyl ]-4( -hydroxypyrrolidinu (100 g, 267,4 mmol) a poté se přidá trifenylfosfin (84,2 g, 320,9 mmol) v tetrahydrofuranu (1 1). fe Směs se míchá 10 minut za chlazení ledem a poté se po kapkách ř přidá během 30 minut kyselina thiooctová (22,9 ml, 320,9 mmol). Reakční roztok se míchá 1 hodinu a 15 minut a poté se zahustí ve vakuu a získaný olejovitý zbytek se rozpustí ve směsi heptan-ethylacetát (1 : 1, 200 ml). Směs se míchá 1 hodinu za chlazení ledem. Vysrážené krystaly se odfiltrují a filtrát se zahustí ve vakuu. K získanému zbytku se přidá 3,4 N roztok chlorovodíku v methanolu (600 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Tato směs se zahustí ve vakuu. K získanému o-lejovitému zbytku se přidá ethanol (350 ml) a smés * se nechá stát, přičemž se získají krystaly sloučeniny uvedené v názvu (43,07 g, výtěžek 61,2 %).

,NMR(D₂O) δ:

1,88-2,06(3H,m), 1,58-1,64(1H,m), 2,79(3H,s),

3,16—3,32(3H,m), 3,58-3,88(3H,mj, 4,09-4,18(lH,m)

256

Referenční příklad 59

Methylester ( 2S,4R)-N-formy1-4-methansulfonyloxyprolinu 1)

HO,.

' “i H ^'Ν'^^'ΌΟΟΜθ iCHO

K suspenzi hydrochloridu methylesteru (2S,4R)-4-hydroxyprolinu (9,08 g, 50,0 mmol) v methylformiátu (90 ml) se přidá triethylamin (11,85 ml, 85,0 mmol) a směs se refluxuje 5 hodin. Sraženina se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 4:1-3: 2) a získá se methylester (2S,4R)-N-formyl-4-hydroxyprolinu (6,70 g, výtěžek 77,4 %).

NMR(CDC1₃) 5:

2,05-2,45(2H,m), 3,43-3,72(5H,m), 4,56-4,64 ( 2H ,m) ,

8,25(lH,s) ^2} MsO,.

^H ^^N^^^COOMe

I

CHO

K roztoku výše uvedené sloučeniny (0,866 g, 5,0 mmol) v methylenchloridu (20 ml) se postupně přidá pod atmosférou dusíku a za chlazení ledem a mícháni methansulfonylchlorid (0,387. ml, 5,0 mmol) a triethylamin (0,697 ml, 5,0 mmol).

Směs se míchá při téže teplotě 1 hodinu. Poté se reakčni roztok promyje vodou, suší se přes bezvodý síran sodný a zahusti se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, ethylacetát)

257

---------_a_. ₂ £.á -se·-sloučen i na uved en á v - n á z vu- (-1,0 7 0 g , vý t ě ž e k 8-5 ,- 2 - %) .

NMR(CDC1₃) S:

2,23-2,74(3H,m), 3,06(3H,s), ’ 3,80(3H,s), 4,Í2(lH,m),

4,64(lH,m), 5,32(lH,m), 8,27(lH,s)

Referenční příklad 60

Methylester (2S,4R)-4-terc.butyldimethylsiloxy-N-formylprolinu

TBSO_Ó ' L^H

I

CHO

K roztoku methylesteru (2S,4R)-l-formyl-4-hydroxyprolinu (3,46 g, 20,0 mmol) v N,N-dimethylformamidu (10 ml) a methylenchloridu (20 ml) se postupné přidá za chlazení ledem a v atmosféře dusíku a za míchání terč.butylchlordimethylsilan (3,20 g, 21,2 mmol) a imidazol (1,47 g, 21,6 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 4 hodiny. Poté se reakční roztok promyje vodou, suší přes bezvodý síran sodný a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu (Wakogel™ C-300, heptan-ethylacetát = 1 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (5,54 g, výtěžek 96,3 %). NMR(CDC1₃) S:

0,06(6H,s), 0,85(9H,s), 2,03-2,26(2H,m),

3,43-3,76(5H,m), 4,42-4,59(2H,m), 8,23(lH,s)

258

PATENTOVÉ

1. Sloučenina vzorce

Claims

NÁROKY

HO

R (I) ve kterém znamená R¹ atom vodíku nebo methylskupinu, R²znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižši alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu -CON(R⁵)R^S (kde R⁵ a g

R , které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo R³ a R³ tvoři společně s atomem dusíku -ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu a morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R³(kde symboly R⁷ nebo R³, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰)R¹¹ (kde symboly R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu) , s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, neznamená R³ atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelná sůl nebo ester.

2. Sloučenina podle nároku 1 vzorce

259 ve kterém znamená R¹ atom vodíku nebo methylskupinu, R²znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R^3a znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu,

N-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylskupinu, A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu -N(R⁷)R⁸ (kde symboly R⁷ nebo R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹) (R¹⁰)R¹¹ (kde symboly R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, R^3a neznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelná sůl nebo ester.

3. Sloučenina podle nároku 1 vzorce znamená atom vodíku nebo negativní náboj , R⁸ⁱ³ znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu, aminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylovou skupinu, A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená

260 skupinu -N(R⁷)R⁸ (kde symboly R⁷ nebo R^s které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹(kde symboly R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže.A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, R^3bneznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelná sůl nebo ester.

ve kterém znamená R^ atom vodíku nebo methylskupinu,

R² znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R^3c znamená atom halogenu, nižší alkoxyskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu nebo nižší alkanoyloxyskupinu, A znamenálineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu -N(R⁷)R⁸ (kde symboly R⁷ nebo R⁸ které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰ÍR¹¹(kde symboly R⁹, R^b0 a R^bb, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu,

R neznamená atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelná sůl nebo ester.

r

5. Sloučenina podle nároku 1 ve která znamená A rozvětvenou alkylenovou skupíu.

'6. Sloučenina podle nároku 1 ve které znamená R³ hydroxylovou skupinu.

261

7*.’ Sloučenina podle nároku 1, ve které A“znamená rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, R³ znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo karbamoylovou skupinu.

3. Sloučenina podle nároku 1 ve které znamená A lineární nižší alkylenovou skupinu a R³ znamená atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonylJaminoskupinu, kyanoskupinu nebo karbamoylskupinu.

9. Sloučenina podle nároku 1 která má stérickou konfiguraci (5R,6S,8R) nebo (IR,5S,6S,8R).

10. Sloučenina podle nároku 1 ve které R¹ znamená methylskupinu.

11. Sloučenina podle nároku 1, kterou je:

( 5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-aminomethy1-2-karbamoylethy1)pyrro lidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-aminomethy1-2-karbamoylethy1)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-karbamoylethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethylJ-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-karbamoylethyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R, 6S ) -2- [ ( 2S, 4S) -2- (l-acetamido-2-aminoethyl) pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylové.kyselina, (lR,5S.,6S)-2-[ (2S, 4S)-2-(l-acetamido-2-aminoethyl)262 pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl)-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-(1-methansulf ony lamido- 2-aminoe thy 1 ) pyr rol idin-4 -ylthio ]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl}-l-methyl-2-[(2S,4S)-2-(1-methansulfonylamido-2-aminoethy1)pyrrolidin-4-ylthio ] -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[ ( 2S , 4S ) - 2- (1 -amino -1-kyanmethyl) pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-amino-1-kyanmethyl)pyrrolidin-4-ylthioj-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2-methyl)propyljpyrrolidin-4-ylthio] — 6— [(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2-methy1)propy1jpyrrolidin-4 -ylthioj -6- [(IR)-1-hydroxyethylj-1-methyl-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina,..........

(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3-amino-1-hydroxy)propyljpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethylj-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3-amino-1-hydroxy)propyljpyrrolidin-4-ylthioj-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1,3-diaminopropyl]pyrrolidin-4-ylthioj-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-ěm-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[ (2S,4S)-2-[ (1,3-diaminopropyl) pyrrolidin-4- *

-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S ) - 2-[(2S,4S)-2-[(2-amino-1-hydroxy)ethyl]pyrrolidin-4-ylthioj-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina,

263 (1Ř,5S76Š)-2-((2S,4S)-2-[(2-amino-1-hydroxy)ethyl]pyrrolidin-4 -ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2,2-dimethyl)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6 -[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(3-amino-2,2-dimethyl)propyl]pyrro1 idin-4-ylthio)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(2,2-dimethyl-3-rnethylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S, 6S)-2-[ (2R, 4S) -2-[ (2,2-dimethyl-3-methylamino.)propyl ]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R,6S)-2-( ( 2S ,4S )-2-( (l-aminomethyl-3-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio )-6-(( IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina, (IR, 5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(l-aminomethyl-3-hydroxy)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(IR) -l-methoxy-3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio)-6-((IR) -1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S,6S)-2-[(2S,4S )-2-((IR) -l-methoxy-3-(N-methylamino)propyl ]pyrrolidin-4-ylthio ]-6-((IR) -1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R, 6S)-2-[(2S,4S)-2-[(1S)-1-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio)-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((1S)-1-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl ]pyrrolidin-4-ylthio ]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R ,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(IR) -1-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio)-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen264

-2-em-3-karboxylové kyselina, (IR,5S,6S)-2 - [(2S,4S)-2-[(IR)-1-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (-5R ,6S)-2-[ ( 2S , 4S) - 2- [ (ÍS ) - l-hydroxy-2 - (N-methy lamino ) ethyl ] pyrrolidin-4-ylthio}-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(ÍS)-l-hydroxy-2-(N-methylamino)ethyljpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-((2S,4S)-2-[(IR)-1-hydroxy-2-(N-methylamino ) ethyl ] pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(IR)-l-hydroxy-2-(N-methylamino) ethyl ]pyrrolidin-4-ylthio)-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[ ( 2R, 4S)-2-[2-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2R,4S)-2-[2-(Nmethylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-[3-hydroxy-2-(N-methylamino)propyl ] pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S ) — 2—[(2R,4S)-2-[3-hydroxy-2- (N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, 0/ (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-amino-2-methylpropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylové ť’ kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2R,45)-2-(2-amino-2-methylpropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6- [(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-2-[ ( 2R, 4S)-2-[2-methyl-2-(N265

-me thy lamino) propy 1] pyrrol idin-4-ylthio ] -1-karbapen-2-ém-3-karboxylová kyselina;

(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethylJ-l-methyl-2-[ (2R,4S)-2-[2-methyl-2-(N-methylamino)propy1]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R, 6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-3-methylbutyl)pyrrolidin-4-ylthio ]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-3-methyIbuty1)pyrrolidin-4-ylthío]-6 —[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-aminomethy1-3-hydroxy)propy1]pyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ]-1-karbapen-2.-em-3-karboxylová kyselina, (IR, 5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(1-aminomethyl-3-hydroxy)propy1] joyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen-2em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-[[l-(2-aminoethyl)-3-hydroxy]propy1]pyrrolidin-4-ylthio ] -6- [ (IR) -1-hydroxyethyl ] -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[[l-(2-aminoethyl)-3-hydroxy]propy 1 ] pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R, 6S)-2-[(2R, 4S)-2-(3-amino-2-hydroxypropyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-2-hydroxypropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ( 5R, 6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-acetoxy-3-aminopropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-karbapen-2-em-3-karboxy lová kyselina, (IR, 5.S , 6S )-.2-[ ( 2R , 4S ) -2- ( 2-acetoxy-3-aminopropyl) pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbápén-2-em-3-karboxylová kyselina,

266 (5R,6Ξ)-2-[(2R,4S)-2-(2-aminopropyl) pyrro1idin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2R,4S)-2-(2-aminopropyl)pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)- 2-[(2R,4S)-2-[3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-( (2R,4S)-2-[3-( N-methy lamino) propyl lpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, ¢(5R,6S)-2-((2R,4S)-2-((2-fluor-3-(N-methylamino) ] propyl]pyrro. lidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2-((2R,4S)-2-([2-fluor-3-(N-methylamino)]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-[(l-methyl-3-(N-methylamino)]propyljpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina, _______ (IR,5S,6S)-2-((2R,4S)-2-((l-methyl-3 - (N-methylamino)]propyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-((2R,4S)-2-[(1-aminomethyl)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (IR,5S,6S)-2- ((2R,4S)-2-[(1-aminomethyl)ethyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, (5R,6S)-2-((2S,4S)-2- ((lR)-3-(N,N—dimethy1)amino-l-hydroxypropyl ]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[ (IR)-1-hydroxyethyl ]-l-karbapen-2-em- _l(-| -3-karboxylová kyselina nebo · (IR,5S,6S)-2-( ( 2S., 4S ) -2- [ (IR) -3- (Ν, N —dimethyl) amino-l-hydroxypropyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina.

12. Sloučenina podle nároku 1 kterou je (IR,5S,6S)-2-((2S,4S )267

-------- .----2-[(IR)-l-hydroxy-3-(N-methylamino)propyl]pyrrolidin-4---------ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina.

. ( 2S , 4‘S ) -4-mérkaptó-2- [ (IR) - l-hydroxy-3 - ( N-nethylamino ) propyl ]pyrrolidin.

14. Způsob přípravy sloučeniny vzorce

HO R¹ R³ [ ,)> f (I) 0 -NH i COOR² ve kterém znamená R¹ atom vodíku nebo methylskupinu, R²

znamená atom vodíku nebo negativní náboj, R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxyskupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu -CON(R°)R⁶ (kde R⁵ a R⁶, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylskupinu nebo R^ a R⁸ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu a morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸(kde R⁷ nebo R⁸, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo, skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ (kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou

263 skupinu, neznamená R³ atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelné soli nebo esteru_z vyznačující se tím, že se nechá reagovat sloučenina vzorce

OR¹² R’ ve kterém je R¹ definován výše, R¹² znamená atom vodíku nebo hydroxyl-chránící skupinu a Ρ²θ znamená atom vodíku nebo karboxyl-chránící skupinu nebo její reaktivní derivát se sloučeninou vzcrce

R³⁰ ve kterém R¹³ znamená atom vodíku nebo imin-chránící skupinu,

R znamena atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, která může být chráněna, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižši alkylaminoskupinu, které mohou být chráněny, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, které mohou být chráněny, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu -COOR⁴⁰ (kde R⁴⁰ znamená atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo karboxy1 chránící skupinu) nebo skupinu -CON(R⁵⁰)R⁶⁰ (kde R⁵⁰ a R⁶⁰, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo amin- nebo imin-chránící skupinu,nebo R^° a R°° tvoří'společné s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu.vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylc-vou skupinu, pyrro lid iriy269

------lovou skupinu , piperidy lovou skupinupipera z iny lovou-----------skupinu, které mohou být chráněny, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu a morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X¹ znamená skupinu vzorce -N(r⁷⁰)R⁸⁰ (kde R⁷⁰ nebo R⁸⁰, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylovou skupinu nebo amin- nebo imin-chráníci skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ (kde R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou být stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší“alkylenovou skupinu, neznamená R³⁰atom vodíku, přičemž se získá sloučenina vzorce ve kterém R¹, R¹², R²⁰' R³⁰, A a X¹ jsou definovány výše a je-li to nutné, odstraní se chránící skupiny sloučeniny vzorce (IV).

15. Antibakteriální činidlo, vyznačující se tím, že obsahuje antibakteriálně účinné množství sloučeniny vzorce atom vodíku nebo negativní náboj, R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, N,N-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylamino270 skupinu, aroylaminoskupinu, (nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu -CON(R⁵)R⁶ (kde R⁵ a R⁶, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo R⁵ a R^s tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu a morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R^S(kde symboly R⁷ nebo R², které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -N⁺(R⁹)(R¹⁰JR¹¹ (kde symboly R⁹, R¹⁰ a 1-, nižší

R , které mohou být stejné nebo různé znamenají/alkylskupinu) , s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, neznamená R² atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelnou sůl nebo ester a farmaceuticky použitelný nosič nebo ředidlo.

16. Antibakteriální činidlo podle nároku 15 které je účinné proti pseudomonads.

17. Antibakteriální činidlo podle nároku 15, které je účinné proti vůči methycilinu odolným Staphylococcus aureus.

18. Antibakteriální činidlo podle nároku 15, vyznačující se tím, že obsahuje antibakteriálně účinné množství sloučeniny podle nároku 11.

19. Způsob léčení nemsti způsobené infekcí bakteriemi, v y z n a č u γÍcí se tím, že se pacientovi poaá antibakteriálně účinné množství sloučeniny 'vzorce

271

z)

COOR ve kterém znamená R¹ atom vodíku,/methylskupinu, R² znamená atom vodíku nebo negativní náboj/, R³ znamená atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu, aminoskupinu, N-nižší alkylaminoskupinu, Ν,Ν-di-nižší alkylaminoskupinu, nižší alkanoylaminoskupinu, aroylaminoskupinu, /(nižší alkylsulfonyl)aminoskupinu, sulfamoylaminoskupinu, .Kyanoskupinu, nitroskupinu, skupinu -COOR⁴ (kde R⁴ znamená atom vodíku nebo nižší alkylskupinu) nebo skupinu -CON(R⁵)R⁶ (kde R⁵ a R⁶, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo R⁵ a R⁶ tvoří společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány heterocyklickou skupinu vybranou ze souboru který zahrnuje aziridinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, 4-nižší alkylpiperazinylovou skupinu a morfolinovou skupinu), A znamená lineární nebo rozvětvenou nižší alkylenovou skupinu, X znamená skupinu vzorce -N(R⁷)R⁸(kde R⁷ nebo R⁸, které mohou být stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu) nebo skupinu -Ny(R⁹) (R¹⁰ )R¹³- (kde symboly R⁹, R¹⁰ a R¹¹, které mohou býty stejné nebo různé znamenají nižší alkylskupinu), s podmínkou, že jestliže A znamená lineární nižší alkylenovou skupinu, neznamená R³ atom vodíku nebo její farmaceuticky použitelné soli nebo esteru.

20. Způsob podle/nároku 19, kde sloučenina je použita proti pseudomonadsý

21. Způsob podle nároku 19, kde sloučenina je použita proti vůči methyc/.linu odolným Staphylococcus aureus.

i £

272

22.

Způsob podle nároku 19, /vznačujicí se i ^m / že se pacierítovi podá antibakteriálné účinné množství sloučeniny pédle nároku ll.

Čaa (h)