CZ20002770A3 - Oční prostředky - Google Patents

Abstract

Oční prostředky pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo pro léčbu snížené citlivosti rohovky obsahují jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce I, kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen; a X , Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelnou sůl. Dále oční prostředky obsahujícíjako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy, použitelné pro léčbu nediabetických rohovkových lézí, pro léčbu syndromu suchého oka a/nebo pro léčbu hypolakrimace.

Description

Oční prostředky

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká očních prostředků, konkrétně prostředků určených pro léčbu lézí na rohovce, prostředků pro léčbu zhoršené citlivosti rohovky, prostředků pro léčbu syndromu suchého oka a prostředků pro léčbu hypolakrimace.

Dosavadní stav techniky

Léze na rohovce jsou způsobeny defekty ve tkáni rohovky. Defekty epitelu obvykle způsobují subjektivní příznaky, včetně pocitu cizího tělesa v oku, bolesti oka, fotofobie, sekrece slz atd.. Defekty ve tkáni rohovky se nazývají epithalaxie nebo erose, pokud jsou omezeny pouze na epitel, a rohovkové vředy, pokud přesahují přes Bowmanovu membránu do parenchymu.

Mnoho možných faktorů přispívá ke vzniku rohovkových lézí, včetně patologických faktorů, jako je diabetes, zánět, alergie, mikroorganismy (viry, bakterie, houby atd...) , chemických faktorů jako je cytotoxicita způsobená chemikáliemi, žíravý účinek kyselin nebo zásad, a fyzikálních faktorů jako je vysychání (syndrom suchého oka, atd...) a trauma způsobené cizím tělesem (kontaktními čočkami, atd...), spáleninami, atd... Nedávno bylo popsáno, že antiseptika obsažená v očních kapkách, jako je benzalkoniumchlorid a chlorbutanol, antibiotika aminoglykosidové řady, nesteroidní antiflogistika, IDU, pimaricin, atd., poškozují epitel rohovky.

Existují různé způsoby léčby, které se liší podle místa postižení a závažnosti rohovkových lézí. Kromě fyzikální • · • · • · · · • · léčby, jako je instilace mastí obsahujících antibiotika a aplikace tlakových očních obvazů, se v současné době používají terapeutické měkké oční čočky a superficiální punktura rohovky, instilace fibronektinu, kyseliny hyaluronové nebo vysoce osmotických činidel. Při léčbě komplikací diabetes mellitus bylo popsáno, že inhibitory aldosa-reduktasy jsou účinné v léčbě diabetických rohovkových lézí. Nicméně, například v případech, že příznaky se zhoršily tak, že došlo k odloučení keratoepitelu od parenchymu rohovky, není v současné době možno dosáhnout obnovení normálního stavu za použití terapeutických postupů popsaných výše. Proto jsou žádoucí takové způsoby léčby, které jsou účinné i u významně pokročilých rohovkových lézí, při kterých došlo k odloučení nebo defektům epitelu.

Rohovka je jednou z nejcitlivějších tkání na povrchu těla a zakončení sensitivních nervů jsou umístěna v celé rohovce. Proto pokud zůstává citlivost rohovky normální, pociťuje pacient bolest způsobenou patologickými stavy nebo lézemi na rohovce. Pokud je citlivost rohovky snížená, tak nejsou přítomny žádné subjektivní příznaky a to způsobuje další zhoršování rohovkových lézí.

Mezi faktory, o kterých je známo, že zhoršují citlivost rohovky, patří stárnutí, onemocnění (například herpes na rohovce, diabetes atd...) , používání kontaktních čoček a oční chirurgické zákroky (chirurgické zákroky při kataraktě, transplantacích rohovky, při odlučování sítnice atd...) . Proto jsou žádoucí nejen terapeutické postupy, ale také preventivní postupy bránící progresi patologických stavů, například činidla, která mohou zlepšovat sníženou citlivost rohovky způs-obenou různými chorobami.

• 4 4 4

4 • 444

Jedním z očních příznaků, který je v poslední době středem zájmu, je syndrom suchého oka. Syndrom suchého oka je definován jako stav, při kterém je sníženo množství slz nebo při kterém je kvalita slz abnormální, bez ohledu na to, zda je keratokonjunktivální léze přítomná nebo nepřítomná (Yamada, N. et al., Folia Opthalmol. Jpn. 43: 1289-1293 (1992)), včetně syndromu suchého oka, který se vyskytuje při onemocněních jako je hypolakrimace, alakrimie, xeropthalmie, Sjógrenův syndrom, suchá keratokonjunktivitida, Stevens-Johnsonův syndrom, oční pemphigoid, marginální blepharitis, diabetes atd.... K syndromu suchého oka dochází po chirurgických zákrocích při kataraktě, nebo je spojen s alergickou konjunktivitidou atd..., a syndrom suchého oka se vyskytuje při hypolakrimaci způsobené intenzivní práci s obrazovkami nebo suchým vzduchem v klimatizovaných místnostech.

Existují různé příčiny syndromu suchého oka, které zůstávají neidentifikované. Syndrom suchého oka je léčen pouze podáváním umělých slz pro zvýšení kvantity slz zadržovaných v konjunktiválním vaku, což zmírňuje subjektivní příznaky, nebo prevencí vysychání oka. Je žádoucí získání substancí, které umožní uspokojivou léčbu takových stavů, včetně zmírnění hypolakrimace.

Sekrece slz se dělí na bazální sekreci slz a na reflexní sekreci slz. Bazální sekrece slz je sekrece za normálního stavu, při kterém jsou oční víčka otevřená a předpokládá se, že je způsobena hlavně přídatnými slznými žlázami (Krauseho žlázou, Wolfringovou žlázou atd...) . Na druhé straně, reflexní sekrece slz je sekrece slz za přítomnosti určité stimulace na keratokonjunktiválním povrchu, nosní sliznici atd.,-nebo sekrece, která je spojena s mentálními změnami, jako je smutek a veselí. Předpokládá se, že je způsobena hlavními slznými • ·

4 · ·

4 4 4

4

žlázami. Proto je zejména významné zlepšení snížené bazální sekrece slz, tj. sekréce slz za normálního stavu, při kterém jsou oční víčka otevřená, protože tato bazální sekrece je odpovědná za příznaky syndromu suchého oka.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká vyřešení problému popsaného výše a jedním předmětem předkládaného vynálezu je oční prostředek účinný v léčbě alespoň jednoho onemocnění vybraného ze skupiny skládající se z rohovkových lézí, snížené citlivosti rohovky, syndromu suchého oka a hypolakrimace.

Vynálezci při svých výzkumech zjistili, že sloučeniny obecného vzorce (I) :

A-COOH

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen, a X, Y a Z jsou nezávisle halogen, jsou výborně účinné při léčbě diabetických rohovkových lézí a snížené citlivosti rohovky.

Vynálezci také zjistili, že sloučeniny, které mohou inhibovat aldosa-reduktasu, včetně sloučenin representovaných výše uvedeným obecným vzorcem (I), jsou vynikající v léčbě nejen diabetických rohovkových lézí, ale také nediabetických rohovkových lézí, a že tyto sloučeniny jsou vynikající ve zlepšení syndromu suchého oka, zejména hypolakrimace způsobené sníženou bazální sekrecí slz. Proto tyto sloučeniny dotvářejí předkládaný vynález.

Vynález je podrobně popsán dále.

(1) Oční prostředek pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo pro léčbu snížené citlivosti rohovky, který obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce (I):

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen a X, Y a Z jsou nezávisle halogen ( ^sloučenina/'?, nebo její farmakologicky přijatelnou sůl.

(2) Oční prostředek popsaný v (1), kde v obecném vzorci (I) jsou A a B nezávisle methylen, X je chlor, Y je brom a Z je fluor.

(3) Oční prostředek popsaný v (1) nebo (2), který je použit pro léčbu diabetických rohovkových lézí.

(4) Oční prostředek popsaný v (1) nebo (2), který je použit pro léčbu snížené citlivosti rohovky.

(5) Oční prostředek popsaný v jakémkoliv z bodů (1) až (4), který je ve formě určené pro lokální podání do oka.

(6) Oční prostředek pro léčbu nediabetických rohovkových hézí, který obsahuje jako aktivní slož-ku inhibitor aldosareduktasy.

♦ ·· «

(7) Oční prostředek pro léčbu syndromu suchého oka, který obsahuje jako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy.

(8) Oční prostředek pro léčbu hypolakrimace, který obsahuje jako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy.

(9) Oční prostředek popsaný v jakémkoliv z bodů (6) až (8), ve kterém je inhibitorem aldosa-reduktasy sloučenina obecného vzorce (I): A-COOH kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen a X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelná sůl.

(10) Oční prostředek popsaný v bodu (9), kde A a B jsou methylen, X je chlor, Y je brom a Z je fluor.

(11) Oční prostředek popsaný v jakémkoliv z bodů (6) až (10), který je ve formě určené pro lokální podání do oka.

(12) Způsob léčby diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky, který obsahuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I):

A-COOH

O (I)

9 ··« 9

9999 • 9 • 9 • 9

99 · * kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen a X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelné soli, jedinci, který potřebuje léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky.

(13) Způsob léčby nediabetických rohovkových lézí, který obsahuje podání účinného množství inhibitoru aldosa-reduktasy jedinci, který potřebuje léčbu nediabetické rohovkové léze.

(14) Způsob léčby syndromu suchého oka, který obsahuje podání účinného množství inhibitoru aldosa-reduktasy jedinci, který potřebuje léčbu syndromu suchého oka.

(15) Způsob léčby hypolakrimace, který obsahuje podání účinného množství inhibitoru aldosa-reduktasy jedinci, který potřebuje léčbu hypolakrimace.

(16) Použití sloučeniny obecného vzorce (I):

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen a X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelné soli, pro výrobu očního prostředku pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky.

(17) Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu nediabetických rohovkových lézí.

·· ··· · ·· ··· ·

··

9 9 ·

(18) Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu syndromu suchého oka.

(19) Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu hypolakrimace.

Významy substituentů v obecném vzorci (I) jsou v předkládaném vynálezu definovány následujícím způsobem:

A a B jsou nezávisle nižší alkylen. Termín nižší alkylen, jak je použit v předkládaném vynálezu, označuje přímou nebo rozvětvenou alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, výhodně 1 až 4 atomy uhlíku. Jmenovitě do této skupiny patří methylen, ethylen, trimethylen, propylen a podobně, kdy nejvýhodnějšími z těchto skupin jsou methylen a ethylen.

X, Y a Z jsou nezávisle halogen (chlor, brom, fluor a jod) a je výhodné, aby X byl chlor, Y brom a Z fluor.

V předkládaném vynálezu je zejména výhodná sloučenina vzorce (II):

N (II) ve které jsou A i B methylen, X je chlor, Y je brom a Z je fluor pro obecný vzorec (I), tj. [3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-2,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydrochinazolin-l-yl]acetat.

·♦ 9 99 9

9

9

99 9 9

Sloučenina a její farmakologicky přijatelné sole obsažené v předkládaném vynálezu jako aktivní složky jsou všeobecně známé sloučeniny, které mohou být připraveny například způsobem, který je popsán v japonské zveřejněné patentové přihlášce bez průzkumu č. Sho 62-96476 (Evropská patentová přihláška č. 0218999, U.S. patent č. 4734419), nebo způsobem založeným na tomto způsobu.

Farmakologicky přijatelné soli sloučenin podle předkládaného vynálezu zahrnují soli s bazickými sloučeninami, jako jsou anorganické baze (například soli sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, hliníku, amonné soli atd.) a organické baze (jako jsou například primární aminy jako je ethanolamin; sekundární aminy jako je diethylamin, diethanolamin, dicyklohexylamin, N,N'-dibenzylethylendiamin, atd.); terciární aminy jako je trimethylamin, triethylamin, pyridin, pikolin, triethanolamin atd.) a podobně.

Sloučeniny a jejich farmakologicky přijatelné soli jsou účinné v prevenci, léčbě, zpomalení/zastavení vývoje příznaků diabetických rohovkových lézí, a ve zlepšení snížené citlivosti rohovky u savců včetně lidí, skotu, koní, psů, myší, krys atd., když jsou aktivní složkou očního prostředku obsahujícího přípravky pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo přípravků pro léčbu snížené citlivosti rohovky u savců.

Předkládaný vynález-také poskytuje oční prostředky, ve kterých je aktivní složkou inhibitor aldosa-reduktasy. Skutečnost, že sloučeniny, které inhibují aldosa-reduktasu, jsou účinné při léčbě nediabetických rohovkových lézí, stejně jako příznaků syndromu suchého oka, zejména hypolakrimace způsobené sníženou bazální sekrecí slz, je novým objevem.

«<· 9999 99 9999 ·· 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

99999 99 · ·· ··

Inhibitory aldosa-reduktasy použité v předkládaném vynálezu jako aktivní složky nejsou specifikovány, pokud mohou inhibovat aldosa-reduktasu, a jsou uvedeny například jako sloučeniny obecného vzorce (I), zejména sloučeniny obecného vzorce (II), jmenovitě epalrestat, ponalrestat, tolrestat, sorbinil, methosorbinil, imirestat, kyselina 2,3-dihydro-2,8-bis(1-methylethyl)-3-thioxo-4H-l,4-benzoxazin-4-octová (AD5467), 6-fluor-2,3-dihydro-2',5'-dioxo(2S-cis)-spiro[4H-1benzpyran-4,4'-imidazolidin]-2-karboxyamid (SNK-860), 8-chlor2 ',3'-dihydrospiro[pyrolizin-3,6'(5H)-pyrolo[1,2,3-de] [1,4]benzoxazin]2,5,5 '-trion (ADN 138), a 5-(3-ethoxy-4pentyloxyfenyl)-2,4-thiazolidindion (CT-112), atd. Zejména výhodné jsou sloučeniny obecného vzorce (I), hlavně sloučeniny obecného vzorce (II).

Inhibitory aldosa-reduktasy jsou účinné v prevencí, léčbě, zpomalení/zastavení vývoje příznaků diabetických rohovkových lézí, a v léčbě příznaků syndromu suchého oka, zejména ve zlepšení hypolakrimace včetně snížení bazální sekrece slz u savců včetně lidí, skotu, koní, psů, myší, kryj· atd.... Jsou aktivní složkou očního prostředku pro savce obsahujícího přípravky pro léčbu nediabetických rohovkových lézí, pro léčbu syndromu suchého oka a/nebo pro léčbu hypolakrimace.

Jak je zde použit, označuje termín diabetické rohovkové léze různé léze na rohovce vznikající v důsledku diabetes mellitus, včetně diabetické superficiální keratoepiteliosy, diabetických recidivujících erosí keratoepitelu a pozdních poškození keratoepitelu při diabetů. Termín nediabetické rohovkové léze označuje léze způsobené patologickými stavy jinými než je diabetes mellitus, jako je zánět, alergie, mikroorganismy, chemické sloučeniny, leptavý účinek kyselin a ·· ·♦· · zásad, sucho, cizí tělesa, spáleniny a podobně. Termín snížená citlivost rohovky, jak je zde použit, označuje patologické stavy, při kterých je citlivost rohovky snížena v důsledku stárnutí, onemocnění jako je herpes na rohovce a diabetes a podobně, používání kontaktních čoček a oftalmologické chirurgické zákroky (například chirurgické zákroky při kataraktě, transplantaci rohovky, odlučování sítnice a podobně). Mezi onemocnění spojená se syndromem suchého oka patří, jak bylo uvedeno výše, hypolakrimace, alakrimie, xeropthalmie, Sjďgrenův syndrom, suchá keratokonjunktivitida, Steven-Johnsonův syndrom, oční pemphigoid, marginální blepharitis, diabetes a podobně, a syndrom suchého oka se vyskytuje také po chirurgickém výkonu prováděném pro kataraktu a při alergické konjunktivitidě a podobně. Syndrom suchého oka je pozorován při hypolakrimaci způsobené intenzivní prací s monitory nebo suchým vzduchem v klimatizovaných místnostech. Hypolakrimace označuje abnormální (sníženou nebo nepřítomnou) sekreci slz způsobenou stejnými příčinami, včetně abnormální bazální sekrece slz.

Léčba očním prostředkem zahrnuje všechny kontroly, včetně prevence, léčby, zmírnění, zatavení vývoje atd. Léčba rohovkových lézí je také účinná u úporných rohovkových lézí v pokročilém stadiu, tj. při pokročilých erosích nebo při odlučování.

Oční prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být podány orálně nebo parenterálně, ale zejména výhodné je použití prostředků pro lokální oční podání, protože takové podání neovlivňuje jiné oblasti kardiovaskulárního systému a má vyšší-účinnost.

• 9 9 99 9 9* «·«· 9«

9 9 9 9 99» •9 999 999

9

999 9 9

9 9

9

Mezi takové dávkové formy patří oční kapky, oční masti, prášky, granule, tablety, kapsle, injekce atd.; z těchto dávkových forem jsou nejvýhodnější oční kapky a oční masti. Příprava takových dávkových forem může být provedena běžnými prostředky.

Vodnými roztoky a ředidly pro suspenze použité v přípravě očních kapek jsou destilovaná voda, fyziologický salinický roztok a podobně, a nevodnými roztoky a ředidly pro suspenze jsou rostlinný olej, kapalný parafin, anorganické oleje, propylenglykol, p-oktyldodekanol atd.

Dále mohou být v očních kapkách obsaženy volitelná pomocná činidla, včetně pufrovacích činidel, činidel upravujících izotonicitu roztoku, konzervačních činidel, zahušťovacích činidel, stabilizačních činidel, antioxidačních činidel, činidel upravujících pH, chelačních činidel atd. Pufrovací činidla jsou přidávána pro udržení konstantního pH, například mezi 5,0 a 8,0, a patří mezi ně boritanový pufr, citratový pufr, vinanový pufr, fosfátový pufr, octanový pufr a podobně. Takový pufr je přidán v množství, které je vhodné pro pufrování, tj. které udrží hodnotu pH konstantní v rozmezí popsaném výše.

Činidla upravující izotonicitu jsou přidávána proto, aby byl prostředek izotonický se slzami, a patří mezi ně cukry jako je glukosa, manitol, sorbitol a podobně; polyfunkční alkoholy, jako je glycerol, polyethylenglykol, propylenglykol atd.; a soli jako je chlorid sodný, citrát sodný atd.. Takové činidlo upravující izotonicitu roztoku je přidáno v množství, které upraví osmotický tlak očních kapek tak, aby byl stejný jako osmotický tlak slz; Použitými konzervačními činidly jsou benzalkoniumchlorid, parabeny, chlorbutanol atd. Jak bylo ·· «·»·

9999

9

99 9 9

9 9

9

9 9

9 9

uvedeno výše, bylo popsáno, že některá konzervační činidla, jako je benzalkoniumchlorid, chlorbutanol atd., poškozují rohovku, ale tato konzervační činidla mohou být použita, protože prostředky podle předkládaného vynálezu zlepšují rohovkové léze.

Mezi zahušťovací činidla, která mohou být použita, patří glycerol, karboxymethylcelulosa, karboxyvinylpolymery atd.; mezi stabilizační činidla patří sirník sodný, propylenglykol a podobně; mezi antioxidační činidla patří kyselina askorbová, askorbat sodný, tokoferol, thiosulfat sodný a podobně; mezi činidla upravující pH patří kyselina chlorovodíková, kyselina citrónová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina vinná, hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, atd.; a mezi chelační činidla patří edetat sodný, citrát sodný, atd.

Oční kapky se připravují zpracováním za aseptických podmínek, nebo je v kterémkoliv vhodném stadiu přípravy provedena sterilizace.

Oční masti mohou být asepticky připraveny smísením aktivních složek v bázi, která je obvykle používána pro přípravu očních mastí, a potom zpracováním do formy farmaceutického prostředku za použití běžných postupů. Baze pro oční masti jsou například vazelína, jelene 50, plastibaze, makrogol, atd., a pro zvýšení hydrofilnosti mohou být přidány surfaktanty. Oční masti mohou také v případě potřeby obsahovat pomocná činidla, jako jsou například konzervační činidla.

Dále, složky s farmakologickou aktivitou jinou než mají složky podle předkládaného vynálezu mohou být v případě potřeby přidány k farmaceutickým prostředkům podle

994«

9« «···

9» »9 • · · 4 9

4 4 4 4 • 4 9 4 4 4

4 4 4 4

99 94 předkládaného vynálezu, pokud jsou kompatibilní s účelem předkládaného vynálezu.

Dávka a dávkování aktivní složky podle předkládaného vynálezu se liší podle příznaků léčeného onemocnění, podle věku a tělesné hmotnosti pacienta, podle dávkové formy, trvání léčby, požadovaného terapeutického účinku atd. Obecně, při lokálním podání do oka je dosaženo uspokojivého výsledku u dospělých v případě použití očních kapek obsahujících 0,001 až 10,0% (hmot./obj.), lépe 0,01 až 1,0% (hmot./obj.) sloučeniny podle předkládaného vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo inhibitoru aldosa-reduktasy, kde tento prostředek může být podán do oka několikrát, výhodně 1- až 6krát za den, obvykle 1 až 4 kapky na jedno podání, a v případě použití oční masti je uspokojivého výsledku dosaženo při použití prostředku obsahujícího 0,001 až 10,0% (hmot./obj.), lépe 0,01 až 1,0% (hmot./obj.) sloučeniny podle předkládaného vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo inhibitoru aldosa-reduktasy, kde tento prostředek může být podán do oka několikrát, výhodně 1- až 6-krát za den.

V předkládaném vynálezu může prostředek obsahovat jednu aktivní složku samostatně nebo kombinaci dvou a více aktivních složek. V prostředku obsahujícím dvě nebo více aktivních složek je množství každé složky stanoveno podle terapeutického účinku každé složky a podle bezpečnosti každé složky.

Příklady provedení vynálezu

Předkládaný vynález je dále popsán na příkladech uvedených dále, které nijak neomezují rozsah předkládaného vynálezu.

·* 9 · « • 9 9 ·

9 « « « • 9 · · •4*9 9 99 «9 ·9«9

9·99 »4 • » · · · • 9 · 9 9 • » 9 9 9 9

9 9 4 9

9 4 4 9

Příklad 1: Ovlivnění hojení defektu vzniklého odloučením keratoepitelu u králíků s diabetem indukovaným alloxanem

1. Testovaná zvířata a postupy pro indukci diabetů mg/kg monohydrátu alloxanu (šarže č. DLJ5619, mol. hmot. 160,09; Wako Pure Chemical Industries, LTD.) se rozpustí ve 2 ml· fyziologického roztoku a roztok se jednorázově intravenosně podá samcům japonských albinických králíků (Std: JW/CSK) (stáří 11 týdnů) pro indukci diabetů.

Hladina glukosy v krvi se určovala jednou týdně po podání monohydrátu alloxanu: průměrná koncentrace glukosy v krvi se zvýšila z 142,2 ± 4,7 mg/dl (průměr ± SE; stejné hodnoty jsou uvedeny dále) před podáním na 522,5 ± 13,7 mg/dl v prvním týdnu a tato zvýšená koncentrace přetrvávala. Zvířata s tímto diabetem indukovaným alloxanem byla použita v pokusu.

2. Odlučování keratoepitelu

Za anestesie nembutalem byl okrouhlý filtrační papír TOYO č. 2 o průměru 7,0 mm zvlhčený 7 μΐ n-heptanolu přiložen na dobu 1 minuty na centrální část rohovky a keratoepitel byl odloučen odstraněním filtračního papíru z rohovky. Potom byl povrch rány způsobené odloučením epitelu důkladně vypláchnut fyziologickým roztokem.

3. Měření plochy rány vzniklé odloučením keratoepitelu

Rohovka byla nabarvena fluoresceinem a byly provedeny fotografie předního očního segmentu za použití Medical Nifctor Lens se žlutým filtrem (Kodak WRATTEN č. 12) a blesku s modrým »4 4444 • · • · ··»« · ·« • · • <» • · ·

4

4« '444

444 ·· • 4 • 4 4

4 4 • 4 4

4 4 filtrem (Kodak WRATTEN č. 47). Na stejně zvětšených promítnutých fotografiích byla nabarvená plocha změřena planimetrem. Tato plocha byla považována za plochu rány způsobené odloučením keratoepitelu (nereparovaný region).

Testovaná substance byla aplikována každé 4 hodiny po odloučení keratoepitelu (první aplikace byla provedena bezprostředně po odloučení keratoepitelu).

Dvanáct hodin po odloučení keratoepitelu byla měřena plocha defektu. Potom byla vypočítána její relativní velikost vzhledem k ploše defektu bezprostředně po odloučení keratoepitelu, která byla považována za 100%. Tato relativní hodnota byla použita pro hodnocení rozsahu reparace.

4. Způsob podání

Sloučenina vzorce II, tj. [3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-2,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydrochinazolin-l-yl]acetat, aktivní sloučenina podle předkládaného vynálezu, byla použita pro přípravu 0,1% očních kapek a tyto oční kapky byly použity jako testovací substance. Kontrolními kapkami byly kapky obsahující vehikulum, pouze bez aktivní složky.

Každé 4 hodiny od odloučení keratoepitelu byla aplikována testovaná substance v dávce 30 μΐ/oko do jednoho oka králíka za použití pipety, zatímco kontrolní substance byla aplikována do kontralaterálního oka.

5. Statistická analýza

Plocha nereparované rány v oku ošetřeném testovanou substancí byla srovnávána se stejnou plochou v oku ošetřeném • · • · kontrolním roztokem za použití Student t-testu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.

Tabulka 1

	Relativní plocha defektu způsobeného odloučením keratoepitelu 12 hodin po odloučení keratoepitelu {%}	n
Testovaná skupina	89,0 ± 2,7*	5
Kontrolní skupina	96,5 ± 2,0	10

*p < 0,05

Rozdíl byl statisticky významný, protože hladina významnosti byla nižší než 5%.

Příklad 2: Ovlivnění hojení defektu vzniklého odloučením keratoepitelu u normálních králíků

V příkladu 1 bylo zkoumáno ovlivnění hojení u králíků s diabetem indukovaným alloxanem, zatímco v tomto příkladu bylo zkoumáno ovlivnění hojení u normálních (nediabetických) králíků.

1. Testovaná zvířata

10-týdnů staří samci králíků New Zealand White (o hmotnosti 2,07 ± 0,11 kg; průměrná hmotnost na počátku pokusu) se nechali aklimatizovat po dobu 7 dnů, během kterých byly sledovány různé příznaky, včetně průjmu a tělesné hmotnosti atd., a také byl pozorován přední oční segment. Pouze zvířata bez jakýchkoliv abnormalit byla použita v pokusu.

2. Odlučování keratoepitelu

99 9

9999 9 99

Defekty způsobené odlučováním keratoepitelu byly připraveny způsobem popsaným v příkladu 1.

3. Měření plochy rány vzniklé odloučením keratoepitelu

Testovaná substance byla aplikována každé 4 hodiny po odloučení keratoepitelu (první aplikace byla provedena bezprostředně po odloučení keratoepitelu).

Dvanáct hodin po odloučení keratoepitelu byla měřena plocha defektu. Potom byla vypočítána její relativní velikost vzhledem k ploše defektu bezprostředně po odloučení keratoepitelu, která byla považována za 100%. Tato relativní hodnota byla použita pro hodnocení rozsahu reparace. Plocha defektu vzniklého odloučením keratoepitelu byla měřena způsobem popsaným v příkladu 1.

4. Způsob podání [3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-2,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydrochinazolin-l-yl]acetat, aktivní sloučenina podle předkládaného vynálezu mající inhibiční účinek na aldosareduktasu, byl použit pro přípravu 0,2% očních kapek a tyto oční kapky byly použity jako testovací substance. Kontrolními kapkami byly kapky obsahující vehikulum, pouze bez aktivní složky.

Každé 4 hodiny od odloučení keratoepitelu byla aplikována testovaná substance v dávce 30 μΐ/oko do jednoho oka králíka za použití pipety, zatímco kontrolní substance byla aplikována do kontralaterálního oka.

5. Statistická analýza • · • · · · • · · ·

Plocha nereparované rány v oku ošetřeném testovanou substancí byla srovnávána se stejnou plochou v oku ošetřeném kontrolním roztokem za použití Student t-testu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.

Tabulka 2

	Relativní plocha defektu způsobeného odloučením keratoepitelu 12 hodin po odloučení keratoepitelu	n
Testovaná skupina	80,8 ± 2,0**	6
Kontrolní skupina	88,8 ± 1,0	6

**p < 0,01

Rozdíl byl statisticky významný, protože hladina významnosti byla nižší než 1%.

Příklad 3: Ovlivnění snížené citlivosti rohovky a hypolakrimace u králíků s diabetes mellitus indukovaným alloxanem

1. Testovaná zvířata a postupy pro indukci diabetů mg/kg monohydrátu alloxanu (šarže č. DLJ5619, mol. hmot.

160,09; Wako Pure Chemical Industries, LTD.) se rozpustil ve 2 ml fyziologického roztoku a roztok se jednorázově intravenosně podal samcům japonských albinických králíků (Std: JW/CSK) (stáří 11 týdnů) pro indukci diabetů.

Hladina glukosy v krvi se určovala jednou týdně, celkem 4krát, po podání monohydrátu alloxanu: zvířata s koncentrací glukosy v krvi vyšší než 300 mg/dl nebo více byla považována za zvířata s diabetes mellitus a byla použita v tomto pokusu.

• ·· ·

2. Způsob podání [3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-2,4-dioxo-l, 2,3,4-tetrahydrochinazolin-l-yl]acetat, aktivní sloučenina podle předkládaného vynálezu mající inhibiční účinek na aldosareduktasu, byl použit pro přípravu 0,3% očních kapek a tyto oční kapky byly použity jako testovací substance. Kontrolními kapkami byly kapky obsahující vehikulum, pouze bez aktivní složky.

V době intravenosního podání alloxanu bylo léčivo aplikováno do obou očí v dávce 30 μΐ/oko čtyřikrát během 4 po sobě jdoucích týdnů. Šestnáct očí od 8 zvířat v každé skupině ošetřené testovanou substancí a kontrolní substancí bylo testováno na citlivost rohovky a na sekreci slz následujícím způsobem.

3. Testování citlivosti rohovky

Jednu hodinu po druhé aplikaci v den vyšetření byla zvířata fixována ve fixačním zařízení z nerez oceli (SHIBATA GLASS WORKS). Centrální část rohovky, která je nejvíce citlivá, byla stimulována 10-krát rychlou sekvencí tlakových podnětů za použití kolmého doteku 30 mm nylonového vlákna (Toray Nylon Monofilament, Typ 100, č. 0.6, průměr 0,027 mm, průřez 0,0129) estesiometru Cochet-Bonnetova typu (Handaya Co., Ltd.) tak, že nylonové vlákno se ohýbalo pouze mírně (tlak 5,19 g/mm³, jak ' byl měřen Handaya) a počet reflexních mrknutí byl brán jako hodnota citlivosti rohovky. Vyšetření bylo provedeno před, 2 týdny po a 4 týdny po podání alloxanu.

4. Testování citlivosti slz (Schirmerův test) • · · · • ·

Jendu hodinu pó druhé aplikaci v den vyšetření byla zvířata fixována ve fixačním zařízení z nerez oceli a roh Schirmerova testovacího papíru (SHOWA YAKUHIN ΚΑΚΟ Co., Ltd., šarže č. 70080) byl přiložen na spojivkový vak tak, že překryl 1/3 dolního víčka na jeho laterální straně. O jednu minutu později byl papír odstraněn a délka zvlhčené části byla odečtena podle měřítka uvedeného na papíru. Vyšetření bylo provedeno před a 4 týdny po podání alloxanu v každé skupině.

5. Statistická analýza

V obou pokusech byly skupiny testované substance a kontrolního vehikula srovnávány za použití Williamsova testu.

Výsledky testu citlivosti rohovky jsou uvedeny v tabulce 3 a výsledky testu sekrece slz jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 3

	Hodnota citlivosti rohovky (počet mrknutí)	n
Před alloxanem	Po 2 týdnech	Po 4 týdnech
testovaná skupina	5,6 ± 0,3	5,3 ± 0,7**	5,1 ± 0,6**	16
kontrolní skupina	5,3 ± 0,5	3,5 ± 0,5	2,6 ± 0,4	16

: p < 0,01

Tabulka 4

	Sekrece slz (mm: Schirmerův test)	n
před alloxanem	po 4 týdnech
testovaná skupina	8,3 ± 0,6	7,1 ± 0,4**	16
Kontrolní skupina	8,2 ± 0,4	4,8 ± 0,4	16

**: p < 0,01 • « · · · · • · · · · · * ·

Rozdíl byl statisticky významný v obou tabulkách, protože hladina významnosti byla nižší než 1%.

Příklad 4: Ovlivnění snížené bazální sekrece slz a keratoepitelových lézí u králíků se syndromem suchého oka indukovaným denervací trigeminu

1. Testovaná zvířata

Bylo použito dvacet samců japonských albinických králíků (Std: JW/CSK).

2. Denervace trigeminu

a) Operační postup

Urethan (ADLRICH, šarže č. 069110Q) byl intraperitoneálně podán v dávce 1 g/kg králíkům, jejichž hlavy a krky byly po anestesií- oholeny.

Po desinfekci oholené oblasti byla provedena incise ve střední čáře od frontální kosti po úpon boltce a byl odpreparován periost a svalová tkáň okolo temporální kosti a mandibulární kloubní výběžek. Po preparaci byl v kosti vyvrtán otvor 2 x 1,5 cm vedoucí z parietálního mediálního regionu do temporálního regionu, za použití kostního vrtáku (URAWA KOGYO Co., Ltd., MINITOR.C-130), pod chirurgickým mikroskopem (KONÁN CAMERA R and I, lne., PMO-50). Potom byla od kraniální kosti odpreparována plena mozková a mezi temporální kost a plenu byl vložen tampon. Po odpreparován! k bázi lební pokračovala preparace _k mediální části skalní části temporální kosti v lebeční dutině, která byla prováděna pro lokalizaci nervus trigeminus v kosti skalní. Potom bylo provedeno naříznutí • · · · pleny v délce přibližně 1 až 2 mm na nasální straně semilunárního ganglia. Po incisi byly dvě větve nervového svazku, tj. první větev nervus trigeminus (nervus opthalmicus) a druhá větev (nervus maxillaris) laterálně a

přestřiženy korneosklerálními klíšťkami. Po potvrzení miosy ipsilaterálního oka vzniklé ihned po přestřižení byl odstraněn tampon a kůže v oblasti hlavy byla zašita. Pooperačně bylo podáváno antibiotikum (MYCILLIN SOL®, Meiji) intramuskulárně v dávce 0,1 ml/kg.

Denervace trigeminu byla provedena pouze na straně levého oka, zatímco inervace trigeminu na straně pravého oka nebo falešná operace nebyly provedeny.

b) Aklimatizační období

Po denervaci trigeminu následovalo 2-týdenní aklimatizační období.

V pokusu byla použita pouze zvířata, u kterých byla v tomto období prokázána snížená bazální sekrece slz a keratoepitelové léze.

3. Způsob podání [3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-2,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydrochinazolin-l-yl]acetat, aktivní sloučenina podle předkládaného vynálezu mající inhibiční účinek na aldosareduktasu, byl použit pro přípravu 0,03% očních kapek, 0,1% očních kapek a 0,3% očních kapek a tyto oční kapky byly použity jako testovací substance. Kontrolními kapkami byly kapky obsahující vehikulum, pouze bez aktivní složky.

94 4

949 9 49 99 • · · 4 · 4 9

9 9 4 4 9 4

Po dvou týdnech od denervace trigeminu byla zahájena aplikace jednoho z výše uvedených léků v objemu 30 μΐ/oko čtyřikrát denně po dobu 2 následujících týdnů. Pět očí ze skupiny testované substance a pět očí ze skupiny kontrolní substance bylo vyšetřováno na bazální sekreci slz a na keratoepitelové léze následujícím způsobem.

4. Testy

a) Bazální sekrece slz

Před zahájením aplikace (týden 0) a 1 týden a 2 týdny po aplikaci byla měřena bazální sekrece slz jednu hodinu po druhé aplikaci v den vyšetření.

Keratokonjunktiva byla anestetizována výplachem 4% lidocainem (Xylocaine® 4% pro oftalmolog<7? Fujisawa Pharmaceutical Co., Ldt.) a oční kapky a slzy okolo víček byly odsáty o 5 minut později. Pokud byla. ztráta citlivosti rohovky potvrzena estesiometrem Cochet-Bonnetova typu, tak byl roh Schirmerova papíru přiložen na spojivkový vak na dobu 5 minut a potom byla délka zvlhčeného papíru odečtena ze stupnice přítomné na papíru.

Bazální sekrece slz byla vyjádřena jako průměr za minutu, který byl vypočítaný ze 4-minutové hodnoty získané odečtením hodnoty pro první minutu od hodnoty pro 5 minut ve Schirmerově testu, takže mohl být vyloučen objem slz přítomných v době přiložení papíru ve spojivkovém vaku.

b) Keratoepitelové léze

4444 «4 44*4

4 44 4 4444

44 4 4444 · 4444 44444 • 4 444 4 4 4 ·

44444 44 * 4« 44

Před zahájením aplikace (týden 0), 1 týden a 2 týdny po zahájení aplikace byly léze měřeny jednu hodinu po první aplikaci v den vyšetření.

Každé zvíře bylo umístěno do fixačního zařízení z nerez oceli a bylo provedeno podání 50 μΐ směsi 1% bengálské červeně a 1% fluoresceinu, a potom bylo provedeno vitální barvení keratokonjunktiválního epitelu pro hodnocení rozsahu lézí, které byly hodnoceny podle systému uvedeného dále.

Tabulka 5

Skoré	Nabarvená oblast kerokonkunktiválního epitelu
0	žádná
0,5	část nabarvena slabě
1	méně než 1/4
2	více než 1/4 a méně než 1/2
3	více než 1/2 a méně než 3/4
4	více než 3/4

5. Výsledky

Výsledky testu bazální sekrece slz a vyšetření keratoepitelových lézí jsou uvedeny v tabulce 6 a v tabulce 7, v příslušném pořadí. V tabulkách jsou také uvedeny výsledky statistických analýz.

·* ·*·· ·· ·♦♦· ·* ·* • · * · » t ..»· * · ··· ·»·· . · ·«·* ···«· • · · · · · · · · 26 ···· * ·· » ·· ·*

Tabulka 6

	Počet očí	Doba (týdny)	Bazální sekrece slz (mm/min.)
Před operací	20	—	1,28 ± 0,16
Aklimatizačni období	20	1	0,39 ± 0,05 (**)
20	2	0,38 ± 0,06 (**)
Kontrolní skupina	5	před aplik.	0,40 ± 0,15 *
5	1	0,58 ± 0,21 (*)
5	2	0,54 ± 0,12 (**)
Testovaná skupina 0,03%	5	před aplik.	0,38 ± 0,09 (**)
5	1	0,92 ± 0,17 (+)
5	2	1,02 ± 0,09 ++o
Testovaná skupina 0,1%	5	před aplik.	0,38 ± 0,13 (**)
5	1	1,24 ± 0,14 (++o)
5	2	1,12 ± 0,11 ++oo
Testovaná skupina $,3%	5	před aplik.	0,34 ± 0,10 (**)
5	1	1,24 ± 0,16 (++o)
5	2	1,20 ± 0,15 ++oo

+ p < 0,05; ++ p < 0,01; srovnání s hodnotou před aplikací v každé skupině (Student t-test);

* p < 0,05; ** p < 0,01; srovnání s hodnotou před aplikací (Student t-test);

(*) p < 0,05; (**) p < 0,01; srovnání s hodnotou před aplikací (Aspin-Welchův test);

op <0,05; oo p < 0,01; srovnání s hodnotou získanou v daném čase pro kontrolní skupinu (Dunnettův test).

*000

0« 0000

0 0 0 0000 0 00

00

0 0 0 0

0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 00

Tabulka 7

	Počet očí	Doba (týdny)	Keratoepitelová léze (skoré)
Před operací	20	—	0,0 ± 0,0
Aklimatizačni období	20	1	2,4 ± 0,2 (**)
20	2	2,9 ± 0,2 (**)
Kontrolní skupina	5	před aplik.	2,8 + 0,6 (**)
5	1	1,4 ± 0,4 (*)
5	2	1,1 ± 0,2 +(*)
Testovaná skupina 0,03%	5	před aplik.	2,8+0,4 (**)
5	1	0,5 ± 0,4 (++)
5	2	0,2 ± 0,1 (++)oo
Testovaná skupina 0,1%	5	před aplik.	3,0 ± 0,6 (**)
5	1	0,4 ± 0,2 ++
5	2	0,4 ± 0,2 (++)o
Testovaná skupina > .(/)3%	5	před aplik.	3,0 ± 0,5 (**)
5	1	0,5 ± 0,4 ++
5	2	0,1 ± 0,1 ++oo

+ ρ < 0,05; ++ ρ < 0,01; srovnání s hodnotou před aplikací v každé skupině (Student t-test);

(+) p < 0,0 5; i	(++) p <	0,01;	srovnání	s hodnotou	před	aplikací
(Aspin-Welchův	test);
(*) p < 0,05; i	I**) p <	0,01;	srovnání	s hodnotou	před	aplikací
(Aspin-Welchův	test);		-
o p < 0,0 5; oo	p < 0,01	; srovnání s hodnotou získanou	v daném

čase pro kontrolní skupinu (Dunnettův test).

99··

9999

99

9 99 9 9999

999 9999

9 9999 9999 9

9 999 9999

99999 99 9 99 99

Průmyslové využití

Oční prostředky podle předkládaného vynálezu obsahující sloučeninu podle předkládaného vynálezu nebo její farmakologicky přijatelnou sůl jako aktivní složku jsou účinné v prevenci, léčbě, zmírnění příznaků atd., diabetických rohovkových lézí, zejména závažných diabetických rohovkových lézí (například jsou účinné při hojení defektů vzniklých odlučováním keratoepitelu) a dále jsou účinné ve zlepšení snížené citlivosti rohovky. Proto se předpokládá, že oční prostředky podle předkládaného vynálezu budou užitečné pro léčbu diabetických rohovkových lézí a pro léčbu snížené citlivosti rohovky.

Oční prostředky podle předkládaného vynálezu obsahující sloučeninu podle předkládaného vynálezu nebo její farmakologicky přijatelnou sůl nebo inhibitor aldosa-reduktasy jako aktivní složku jsou účinné také v prevenci, léčbě, zmírnění příznaků atd., nediabetických rohovkových lézí (například jsou účinné při hojení defektů vzniklých odlučováním keratoepitelu) a dále jsou účinné v léčbě syndromu suchého oka (například ve zlepšení hypolakrimace způsobené sníženou bazální sekrecí slz) . Proto se předpokládá, že oční prostředky podle předkládaného vynálezu budou užitečné pro léčbu nediabetických rohovkových lézí, pro léčbu syndromu suchého oka a pro léčbu hypolakrimace.

Claims (19)

1. Oční prostředek pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo pro léčbu snížené citlivosti rohovky vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce (I) :

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen; a

X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelnou sůl.

2. Oční prostředek podle nároku lvyznačující se tím, že A a B jsou nezávisle methylen, X je chlor, Y je brom a Z je fluor.

3. Oční prostředek podle nároku 1 nebo 2 pro použití pro léčbu diabetických rohovkových lézí.

4. Oční prostředek podle nároku 1 nebo 2 pro použití pro léčbu snížené citlivosti rohovky.

5. Oční prostředek podle jakéhokoliv z nároků 1 až 4 vyznačující se tím, že je ve formě vhodné pro lokální podání do oka.

6. Oční prostředek pro léčbu nediabetických rohovkových lézí ·· ·«·· ♦· ···· • · · ·· · · « · · • · · » · · · * · • · 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 · · · · 9 9 9 9

9999 9 99 9 99 99 vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy.

7. Oční prostředek pro léčbu syndromu suchého oka vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy.

8. Oční prostředek pro léčbu hypolakrimace vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku inhibitor aldosa-reduktasy.

9. Oční prostředek podle jakéhokoliv z nároků 6 až 8 vyznačující se tím, že uvedený inhibitor aldosa-reduktasy je sloučenina obecného vzorce (I):

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen; a

X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelná sůl.

10. Oční prostředek podle nároku 9vyznačující se tím, že A a B jsou nezávisle methylen, X je chlor, Y je brom a Z je fluor.

11. Oční prostředek podle jakéhokoliv z nároků 6 až 10 vyznačující se tím, že je ve formě vhodné pro lokální podání do oka.

• 9 9999 *9 999» 9« 99

99 9 99 9 9999

99 ··» 9999

9 9 9999 9999 9

9 9 999 9999 ₃₁ ..... ·· ♦ ·· ·'

12. Způsob léčby diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) :

kde A a B jsou nezávisle nižší alkylen; a X, Y a Z jsou nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelné soli, jedinci, který potřebuje léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky.

13. Způsob léčby nediabetických rohovkových lézí vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství inhibitoru aldosa-reduktasy jedinci, který potřebuje léčbu nediabetických rohovkových lézí.

14. Způsob léčby syndromu suchého oka vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje podání účinného množství inhibitoru aldosa-reduktasy jedinci, který potřebuje léčbu syndromu suchého oka.

15. Způsob léčby hypolakrimace vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství inhibitoru aldosareduktasy jedinci, který potřebuje léčbu hypolakrimace.

16. Použití sloučeniny obecného vzorce (I)

4» ·*4· • · · · • «

Ί SOU kde A a Β jsou nezávisle nižší alkylen; a X, Y a Z >

nezávisle halogen, nebo její farmakologicky přijatelné soli, pro výrobu očního prostředku pro léčbu diabetických rohovkových lézí a/nebo snížené citlivosti rohovky.

17. Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu nediabetických rohovkových lézí.

18. Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu syndromu suchého oka.

19. Použití inhibitoru aldosa-reduktasy pro výrobu očního prostředku pro léčbu hypolakrimace.