CZ20003394A3 - Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu - Google Patents

Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu Download PDF

Info

Publication number
CZ20003394A3
CZ20003394A3 CZ20003394A CZ20003394A CZ20003394A3 CZ 20003394 A3 CZ20003394 A3 CZ 20003394A3 CZ 20003394 A CZ20003394 A CZ 20003394A CZ 20003394 A CZ20003394 A CZ 20003394A CZ 20003394 A3 CZ20003394 A3 CZ 20003394A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ala
gly
leu
asn
val
Prior art date
Application number
CZ20003394A
Other languages
English (en)
Inventor
Donn Nelton Rubingh
Elizabeth Ellen Sikorski
Paul Elliott Correa
Original Assignee
The Procter & Gamble Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by The Procter & Gamble Company filed Critical The Procter & Gamble Company
Priority to CZ20003394A priority Critical patent/CZ20003394A3/cs
Publication of CZ20003394A3 publication Critical patent/CZ20003394A3/cs

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Abstract

Řešení se týká variant setinových proteáz, které mají sníženou imunogenicitu ve srovnání sjejich odpovídajícími standardními serinovými proteázami. Zvláště se týká variant, které mají pozměněnou aminokyselinovou sekvenci oproti standardní aminokyselinové sekvenci, přičemž pozměněná aminokyselinová sekvence obsahuje deleci a případně substituci najedné ze specificky určených pozic, odpovídajících subtilizinu BPN'. Rovněž se týká mutovaných genů, které tyto varianty kódují, čistících prostředků a prostředků pro osobní hygienu, které tyto varianty obsahují.

Description

Oblast techniky τPředkládaný vynález se týká variant serinové proteázy a prostředků, obsahujících varianty, které mají sníženou imunogenitu ve srovnání s jim odpovídajícími standardními serinovými proteázami.
Dosavadní stav techniky
Enzymy tvoří největší třídu přirozeně se vyskytujících proteinů. Jedna třída enzymů zahrnuje proteázy, které katalyzují hydrolýzu jiných proteinů. Tato schopnost hydrolyzovat proteiny byla využita začleněním přirozeně se vyskytujících nebo upravených proteáz do čistících prostředků, zvláště těch, které jsou vhodné pro použití v prádelnách.
V oboru čistění se z těchto proteáz nejčastěji používají serinové proteázy. Většina serinových proteáz je produkována bakteriálními organizmy a některé jsou vytvářeny organizmy jinými, jako jsou houby. Viz Siezen, Roland J. a kol., „Homology Modelling and Protein Engeneering Stratégy of Subtilases, the Family of Subtilizin-Like Serine Proteases“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719 až 737 (1991). Bohužel účinnost standardních serinových proteáz v jejich přirozeném prostředí se často nepřenáší do nepřirozeného prostředí čistících prostředků. Zvláště charakteristické vlastnosti proteáz, jako jsou například tepelná stabilita, pH stabilita, stabilita vůči oxidaci a substrátová specificita často nejsou optimalizované pro použití mimo přirozené prostředí enzymu.
Bylo použito několik přístupů jak změnit standardní aminokyselinovou sekvenci serinových proteáz s cílem zvýšit účinnost proteázy v nepřirozeném prostředí při praní. Tyto přístupy zahrnují genetické přebudování proteáz tak, aby se zvýšila tepelná stabilita a zlepšila stabilita vůči oxidaci ve zcela odlišných podmínkách.
Protože však takové geneticky upravené proteázy jsou pro savce cizí, jsou pro ně potenciálními antigeny. Jakožto antigeny, tyto proteázy způsobují imunologické a alergické odpovědi (zde společně popisované jako imunologické odpovědi) u savců. Skutečně byla přecitlivělost na serinové proteázy pozorována v prostředích, kde jsou • · lidé proteázám pravidelně vystaveni. Taková prostředí jsou ve výrobních zařízeních, kde jsou zaměstnanci vystaveni proteázám prostřednictvím takových nosičů, jako je prach a aerosoly. Aerosoly mohou mit za následek zanesení proteázy do plic, což je takový způsob vystavení proteáze, který vyvolává nejnebezpečnější reakci. Přecitlivělost na proteázu může také nastat v obchodě, kde opakované používání proteázy obsahujících výrobků zákazníkem, mu může způsobit alergickou reakci.
Kromě toho, zatímco genetické úpravy byly nejvýznamnější při pokračujícím hledání ještě účinnějších proteáz použitelných pro praní, geneticky upravené proteázy > * byly minimálně použity v prostředcích určených přo osobní hygienu a slabé saponáty.
ts Primárním důvodem nepřítomnosti upravených proteáz ve výrobcích, jako jsou
-i*. .
například mýdla, gely, koupelnové prostředky a šampóny, je výše zmíněný problém lidské přecitlivělosti, vedoucí k nežádoucím imunologickým odpovědím. Bylo by tedy , v* ' vysoce výhodné poskytnout prostředek pro osobní hygienu, který využije čistící schopnosti upravených proteáz a přitom bude minimálně vyvolávat imunologické * odpovědi.
Jeden přístup, jak zmírnit imunologickou aktivitu proteázy, je přebudovat jeden nebo více jejích epitopů. Epitopy jsou takové aminokyselinové oblasti antigenu, které vyvolávají imunologickou odpověď vazbou protilátek nebo prezentací zpracovaných antigenů T buňkám prostřednictvím hlavního histokompatibilitního komplexu (MKC). Změny v epitopech mohou ovlivnit jejich účinnost jako antigenu. Viz Walsh, B. J. a M. Ε. H. Howden, „A Method for the Detection of IgE Binding Sequences of Allergens Based on a Modification of Epitope Mapping“, Journal of Immunological Methods, sv. 121, str. 275 až 280 (1989).
Nynější vynálezci zjistili, že ty serinové proteázy, obecně známé jako subtiliziny, včetně subtilizinu BPN', mají význačnou epitopovou oblast na aminokyselinových pozicích 70 až 84 odpovídající BPN'. Nynější vynálezci zde takové subtiliziny geneticky přebudovali, aby se zmírnily imunologické vlastnosti, připisované této epitopové oblasti.
Přitom tito vynálezci objevili subtiliziny, které vyvolávají sníženou imunologickou odpověď a přitom si podržují svou aktivitu jako účinná čistící proteáza. Proto jsou předkládané proteázy vhodné pro použití v několika typech prostředků, jako jsou mimo jiné prostředky na praní, mytí nádobí, znečistěné povrchy, prostředky péče o kůži, prostředky péče o vlasy, zkrášlovací prostředky, prostředky ústní hygieny a prostředky pro ošetřování kontaktních čoček.
. Podstata vynálezu • · ·· · · · ·· · ···· · · · · ·· ·
Předkládaný vynález se týká variant serinových proteáz, které mají imunogenicitu sníženou, vzhledem k odpovídajícím serinovým proteázám standardním. Zvláště se předkládaný vynález týká variant, které mají pozměněnou aminokyselinovou sekvenci r oproti standardní aminokyselinové sekvenci, přičemž pozměněná aminokyselinová sekvence obsahuje deleci a případně substituci na jedné nebo více z pozic 70 až 84, odpovídajících subtilizinu BPN'. Vynález se dále týká mutovaných genů, které tyto varianty kódují, a čistících prostředků a prostředků pro osobní hygienu, které tyto varianty obsahují.
Podstatné složky předkládaného vynálezu jsou popsány zde dále. Také jsou zahrnuty popisy různých možných a výhodných složek, užitečných při provedení předkládaného vynálezu.
Předkládaný vynález může obsahovat, sestávat z, nebo sestávat v podstatě z jakýchkoli požadovaných nebo volitelných složek a/nebo omezení zde popsaných.
Všechna procenta a poměry jsou počítána jako hmotnostní procenta, pokud není stanoveno jinak. Všechna procenta jsou vypočítána na základě celkového složení, pokud není stanoveno jinak.
Všechny složky nebo jejich úrovně se vztahují k aktivní úrovni dané složky nebo prostředku, a nejsou do nich započítávány nečistoty, například zbytky roztoků nebo vedlejších produktů, které mohou být přítomny v komerčně dostupných zdrojích.
Všechny dokumenty, na které je zde odkazováno, včetně všech patentů, patentových přihlášek a tištěných publikací, jsou zahrnuty jako odkaz ve své úplnosti.
Pro popis aminokyselin zde budou používány zkratky. Tabulka I podává seznam všech zde používaných zkratek:
• · ··
Tabulka I
Aminokyselina TříDísmenová zkratka JednoDísmenová zkratka
Alanin Ala A
Arginin Arg R
Asparagin Asn N
Kyší. asparagová Asp' D
Cystein Čys C
Glutamin Gin Q
Kysl. glutamová Glu E
Glycin Gly G
Histidin His H
Izoleucin ile 1
Leucin Leu L
Lyzin Lys K
Metionin Met M
Fenylalanin Phe F
Prolin Pro P
Serin Ser S
Treonin Thr T
Tryptofan Trp W
Tyrozin Tyr Y
Valin Val V
Definice v Zde používaný termín „mutace“ označuje změnu v genových sekvencích a v aminokyselinových sekvencích, produkovaných těmito genovými sekvencemi. Mutace mohou být delece, substituce nebo adice aminokyselinových zbytků v standardní sekvenci proteinu.
Zde používaný termín „standardní“ označuje protein, zde specificky proteázu, Λ. produkovanou nemutovaným organizmem.
’ Zde používaný termín „varianta* označuje protein, zde specificky proteázu, která i
* má aminokyselinovou sekvenci, lišící se od aminokyselinové sekvence standardní proteázy.
Jak je zde uvedeno, zatímco varianty v předkládaném vynálezu nejsou omezeny pouze na varianty subtilizinu BPN', veškeré číslování aminokyselin je provedeno s ohledem na aminokyselinovou sekvenci subtilizinu BPN', která je uvedena v SEQ ID NO: 1. Aminokyselinová sekvence subtilizinu BPN' je dále popsána v práci Wells, J.A., E. Ferrari, D.J. Henner, D.A. Estell a E.Y. Chen, Nudeic Acids Research, sv. II, str. 7911 až 7925 (1983), která je zde zahrnuta jako odkaz.
Varianty předkládaného vynálezu.
Předkladatelé vynálezu objevili epitopovou oblast v serinových proteázách, která odpovídá pozicím 70 až 84 v subtilizinu BPN'. Předkladatelé vynálezu dále objevili, že jedna nebo více . aminokyselinových delecí a/nebo substitucí v aminokyselinové <5 ' sekvenci standardní serinové proteázy poskytuje varianty, které vyvolávají sníženou % alergickou a/nebo imunitní odpověď ve srovnání s odpovídající standardní serinovou proteázou.
Varianty zde mohou být označeny uvedením pozic odstraněných aminokyselin, které charakterizují variantu. Například varianta serinové proteázy, která má delece na pozicích 70, 75, 76, 77, 78, 79,80, 81 a 82, může být označena Δ 70, 75 - 82. Podobně substituce mohou být označeny uvedením standardního aminokyselinového zbytku, po němž následuje číslo pozice a potom následuje substituovaný aminokyselinový zbytek, kterým byla substituce provedena. Tam, kde substituujícím aminokyselinovým zbytkem může být kterákoli přírodní aminokyselina, je uváděn symbol Mnohočetné substituce obsažené ve variantách jsou odděleny symbolem “+“. Pro ilustraci, substituce glycinu valinem v pozici 70 je označena buď Gly70Val nebo G70V. Varianta obsahující jak delece, tak substituce je označována kombinacemi výše uvedených označení. Například varianta, která má substituce na obou pozicích 70 a 72, a rovněž delece v pozicích 75 až 82, je označována jako Δ 75 - 82, G70V + V72A.
Varianty v předloženém vynálezu jsou varianty serinových proteáz. Zde používaný termín „serinové proteáza“ znamená proteázu, která má alespoň 50% a výhodně 80% aminokyselinovou sekvenční shodu se sekvencemi jedné nebo více serinových proteáz subtiiizinového typu. Diskuze týkající se subtiiizinového typu serinových proteáz a jejich homologii lze nalézt v Siezen a kol., „Homology Modelling and Protein Engineering Stratégy of Subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Proteases“, Protein Engineering, sv. 4, č. 7, str. 719 až 737 (1991). Výhodné serinové proteázy pro provádění mutací zahrnují subtilizin BPN', subtilizin Carlsberg, subtilizin DY, subtilizin 309, proteinázu K a thermitázu. Nejvýhodnější serinové proteáza pro provádění mutací je subtilizin BPN'.
• · · ·
Varianty představené v předloženém vynálezu jsou varianty serinových proteáz, které mají pozměněnou standardní aminokyselinovou sekvenci, kde pozměněná aminokyselinová sekvence obsahuje deleci na jedné nebo více z pozic 70, 71, 72, 73, nejsou součástí prostředků pro osobní hygienu, zde uvedené varianty nejsou Δ 75 - 83 neboÁ71.
Výhodněji obsahují varianty v předloženém vynálezu deleci jedné nebo více z pozic 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 a 83 (73 až 83), dokonce ještě výhodněji jedné nebo více z pozic 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 a 82 (75 až 82).
Výhodné varianty předloženého vynálezu zahrnují Δ 70, 75 - 82; Δ 75 - 82; Δ70,
78, 79; Δ 70; Δ 75; Δ 76; Δ 78; Δ 79; Δ 81 a Δ 82. Výhodnější varianty zahrnují Δ 70, 75
- 82; Δ 75 - 82; Δ70, 78, 79; Δ 70; Δ 78 a Δ 79.
Varianty předloženého vynálezu mohou případně, navíc k jedné nebo více deiecím, dále obsahovat substituci na jedné nebo více z pozic 70 až 84, odpovídajícím subtilizinu BPN'. Jestliže ovšem byla provedena na kterékoli uvedené pozici delece, nemůže být na této pozici substituce.
Substituce vepitopové oblasti se provádějí zaměněním standardního aminokyselinového zbytku jiným přirozeným aminokyselinovým zbytkem, jedním z těch, co jsou uvedeny v tabulce I.
Tabulky 2 až 10 uvedené dále, uvádějí příklady některých variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu. Pokud se týká těchto tabulek, při popisování specifických mutací je prvně uveden standardní aminokyselinový zbytek a jako druhé je udáno číslo odpovídající pozice. Tabulka 2 popisuje výhodné jednoduché deleční varianty. Tabulky až 10 popisují výhodné varianty, které mají jednu nebo více deleci a případně jednu nebo více substitucí. Pro ilustraci, první příklad v tabulce 3 se čte „LEU 82 GLY 83“. Tento příklad představuje tři rozdílné varianty: jednu, která má delece na pozicích 82 a 83 (Δ 82, 83), druhou, která má deleci na pozici 82 a substituci na pozici 83 (Δ 82, G83*) a třetí, která má substituci na pozici 82 a deleci na pozici 83 (Δ 83, L83*).
Tabulka 2 — - Jednoduché deleční varianty
VAL84 GLY 83 LEU 82
VAL 81 f GLY 80 * · '
ILE 79 SER 78 ASN 77 ASN 76 LEU 75 •ň·
ALA 74 ALA 73 VAL72 GLY 70
Tabulka 3
Dvojité mutační varianty LEU 82 GLY 83 VAL 81 GLY 83 VAL 81 LEU 82 •v· GLY 80 GLY 83
GLY 80LEU 82 GLY 80 VAL 81 ILE 79 GLY 83 ILE 79 LEU 82 ILE 79 VAL 81
Φ* ILE 79GLY 80
SER 78 GLY 83
Š SER 78LEU 82
SER 78VAL 81 SER 78 GLY 80 SER 78 ILE 79 · ' ·♦*» * ,ť jrk
Β;
ASN 77 GLY 83 ASN 77 LEU 82 ASN 77 VAL 81
-- - - · ·. ·; ' ....... ASN 77 GLY 80
- „ - z . ASN 77 ILE 79
ASN 77 SER 78 e ASN 76GLY 83
ASN 76 LEU 82 * ASN 76 VAL 81
ASN 76 GLY 80 ASN 76 ILE 79 ASN 76 SER 78 ASN 76 ASN 77 < * LEU 75 GLY 83
LEU 75 LEU . 82 LEU 75 VAL 81 LEU 75 GLY 80 LEU 75 ILE 79 LEU 75 SER 78 LEU 75 ASN 77 LEU 75 ASN 76 ALA 74 GLY 83 ALA 74 LEU 82 ALA 74 VAL 81
V- ALA 74 GLY 80
ALA 74 ILE 79 ALA 74 SER 78 ALA 74ASN 77 ALA 74 ASN 76 ALA 74 LEU 75 ALA 73 GLY 83 ALA 73 LEU 82 ALA 73 VAL 81 ALA 73 GLY 80 ALA 73 ILE 79 ALA 73 SER 78
ALA 73 ASN 77 ALA 73 ASN 76 ALA 73 LEU 75 ALA 73 ALA 74
Tabulka 4
Trojnásobné mutační varianty
VAL 81 LEU 82 GLY 83
GLY 80 LEU 82 GLY 83
GLY 80 VAL 81 GLY 83
GLY 80 VAL 81 LEU 82
ILE 79 LEU 82 GLY 83
ILE 79 VAL 81 GLY 83
ILE 79 VAL 81 LEU 82
ILE 79 GLY 80 GLY 83
ILE 79 GLY 80 LEU 82
ILE 79 GLY 80 VAL 81
SER 78 LEU 82 GLY 83
SER 78 VAL 81 GLY 83
SER 78 VAL 81 LEU 82
SER 78 GLY 80 GLY 83
SER 78 GLY 80 LEU 82
SER 78 GLY 80 VAL 81
SER 78 ILE 79 GLY 83
SER 78 ILE 79 LEU 82
SER 78 ILE 79 VAL 81
SER 78 ILE 79 GLY 80
ASN 77 LEU 82 GLY 83
ASN 77 VAL 81 GLY 83
ASN 77 VAL 81 LEU 82
ASN 77 GLY 80 GLY 83
ASN 77 GLY 80 LEU 82
ASN 77 GLY 80 VAL 81
ASN 77ILE 79 GLY 83 / ASN 77 ILE 79 LEU 82
ASN 77 ILE 79 VAL 81 * ί
ASN 77 ILE 79 GLY 80 ASN 77 SER 78 GLY 83 ASN 77 SER 78 LEU 82 ASN 77 SER 78 VAL 81 ASN 77 SER 78 GLY 80 ASN 77 SER 78 ILE 79
c ASN 76 LEU 82 GLY 83 ASN 76 VAL 81 GLY 83
*« ASN 76 VAL 81 LEU 82 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ASN 76 GLY 80 LEU 82
ASN 76 GLY 80 VAL 81 ASN 76 ILE 79 GLY 83
n ASN 76 ILE 79 LEU 82 ASN 76 ILE 79 VAL 81 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ASN 76 SER 78 GLY 83 ASN 76 SER 78 LEU 82 ASN 76 SER 78 VAL 81 ASN 76 SER 78 GLY 80 ASN 76 SER 78 ILE 79 ASN 76 ASN 77 GLY 83
ASN 76 ASN 77 LEU 82 ASN 76 ASN 77 VAL 81
ASN 76 ASN 77 GLY 80 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 75 LEU 82 GLY 83 LEU 75 VAL 81 GLY 83 LEU 75 VAL 81 LEU 82
&.· LEU 75 GLY 80 GLY 83
LEU 75 GLY 80 LEU 82
LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 75 DLE 79 GLY 83
LEU 75 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ILE 79 VAL 81
! 1, 3 :ř^^yís^3*
Β» ^Ί^ΒΙΟίΟββ^^^Μίβ^^β^^ΜΒίδΒο^ i • 3 ’* (f-- 4 ’. Ι'/'~ ?Λ . ,, 1¾ γ'( '' r ^_χΛ ί . ». , ,t - '0· yWM^Wwš^F ‘^W^síitJ/ífe · '·'
LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 75 SER 78 GLY 83 LEU 75 SER 78 LEU 82 LEŮ 75 SER 78 VAL 81 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 75 ASN 77 GLY 83 LEU 75 ASN 77 LEU 82 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 75 ASN 76 GLY 83 LEU 75 ASN 76 LEU 82 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ALA 74 LEU 82 GLY 83 ALA 74 VAL 81 GLY 83 ALA 74 VAL 81 LEU 82 ALA 74 GLY 80 GLY 83 ALA 74 GLY 80 LEU 82 ALA 74 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ILE 79 GLY 83 ALA 74 ILE 79 LEU 82 ALA 74 ILE 79 VAL 81 ALA 74 ILE 79 GLY 80 ALA 74 SER 78 GLY 83 ALA 74 SER 78 LEU 82 ALA 74 SER 78 VAL 81 ALA 74 SER 78 GLY 80 ALA 74 SER 78 ILE 79 ALA 74 ASN 77 GLY 83 ALA 74 ASN 77 LEU 82
ALA 74 ASN 77 VAL 81 ALA 74 ASN 77 GLY 80 ALA 74 ASN 77ILE 79 ALA 74 ASN 77 SER 78 ALA 74 ASN 76 GLY 83 ALA 74 ASN 76 LEU 82 ALA 74 ASN 76 VAL 81 ALA 74 ASN 76 GLY 80 ALA 74 ASN 76ILE 79 ALA 74 ASN 76 SER 78 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ALA 74 LEU 75 GLY 83 ALA 74 LEU 75 LEU 82 ALA 74 LEU 75 VAL 81 ALA 74 LEU 75 GLY 80 ALA 74 LEU 75ILE 79 ALA 74 LEU 75 SER 78 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ALA 73 LEU 82 GLY 83 ALA 73 VAL 81 GLY 83 ALA 73 VAL 81 LEU 82 ALA 73 GLY 80 GLY 83 ALA 73 GLY 80 LEU 82 ALA 73 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ILE 79 GLY 80 ALA 73 SER 78 GLY 83 ALA 73 SER 78 LEU 82 ALA 73 SER 78 VAL 81 ALA 73 SER 78 GLY 80 ALA 73 SER 78 ILE 79 ALA 73 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ASN 77 LEU 82
ALA 73 ASN 77 VAL 81 ALA 73 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ASN 77 ILE 79 ALA 73 ASN 77 SER 78 ALA 73 ASN 76 GLY 83
ALA 73 ASN 76 LEU 82
ALA 73 ASN 76 VAL 81
ALA 73 ASN 76 GLY 80
ς · ALA 73 ASN 76 ILE 79
ALA 73 ASN 76 SER 78 ALA 73 ASN 76 ASN 77
j ALA 73 LEU 75 GLY 83 ALA 73 LEU 75 LEU 82
ALA 73 LEU 75 VAL 81 ALA 73 LEU 75 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ILE 79 ALA 73 LEU 75 SER 78 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ALA 73 ALA 74 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 82 ALA 73 ALA 74 VAL 81
f>· ALA 73 ALA 74 GLY 80
ALA 73 ALA 74 ILE 79
ALA 73 ALA 74 SER 78 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ALA 73 ALA 74 LEU 75
r & Tabulka5
A Čtyřnásobné mutační varianty
GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
i: ... ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
iŽí)!
ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83 .· w^roW^ »· <' i ;. .-r··^·. ... ,·. „.;.. Ρ·\,^' C. ·. >7 ·.> '-.·','.4».*'4':'y·- rr'i.. x : τ ... tG-Jýp,'. í: ' f .·_ · - ,/· 5 •Jr ‘ *fjř s *4e0+ '(Á‘h
• ' . i Λ ' v ·« • /*· V « * ·; < · s · * t < · * » • ·, • 4- I
•í*' i' v * A,ř;. ».*58«
'· Ái»·!*- -· i, .‘. ^-'jA''3'»;’? '';-··. 'i-s.Sjf , » ' Jň i f «' .» - > V j t A - «3» *9*· *·*
ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 75 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ILE 79 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ILE 79 VAL 81LEU 82 LEU 75 ILE 79 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ILE 79GLY 80 VAL 81 LEU 75 SER 78 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 VAL 81 GLY 83 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 LEU 75 SER 78 GLY 80 GLY 83 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 75 ASN 77 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 77 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 77 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 83 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 75 ASN 76 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 83
-ř^Wrfe
Ml*í ·<Ζ*Μμ( ;>· ^‘ ’· ·-<'*’;'-#3 U tf.
->A£<
P&Čiňfí fc
LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 74 VAL 81 LÉU 82 GLY 83 ALA 74 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 74 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ··
I , 9'9 * · ►4£&· ;· 3»\·τ ‘I-1!'·' -«'v.*'r , ,, .ίυ··,-;»·υ '-írV^ > ,’·· ι»^'λ ' « yi'.' '''ι<· ·. ;*: *
A7 - . '; ./;, :#// ' Ií· / ΤΤΐ'^'ύ'-Λ · 'V‘?,U ÚAi.UŮ· ?. ,,../- .- í.‘ii: ^/58-/.5.¾.,jf.5-;,-./-:g3r.
ALA 74 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 74 ASN 76 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 76 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 76 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ILE 79 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 LEU 82 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 74 LEU 75 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 VAL 81 GLY 83
.^Sl.yií· řw4r-M7-·^· <
• i. t ^Λΐ *J>
ALA 74 LEU 75 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL. 81 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ALA 73 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ILE 79 GLY 80 VAL 81
>«· ií'4»’-*· Tk ~ T Λ ty
ť ίΛ'γ'4Μ.Ν fS , »-i#ř!Č· ' ' , &· sí^'\1 f .JlJÍl**.-*. * -« ϊ«· ·κ>Ϊ^Κ P LjSS- , č
hí··^
ALA 73 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ŠER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 ASN 76 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 76 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ASN 76 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ASN 76 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 83 gSIBH
it^i
ALA 73 ASN 76 SER 78 LEU 82 ALA 73 ASN 76 SER 78 VAL 81 ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 ALA 73 ASN 76 SER 78ILE 79 ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ASN 77 VAL 81 ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ASN 76 ASN 77ILE 79 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 73 LEU 75 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 83 ALA 73 LEU 75 SER 78 LEU 82 ALA 73 LEU 75 SER 78 VAL 81 ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 ····? Λ· ·· ··*
- 'XXíČsř.&&<
^'ýA'
*ř;jt ^'4k/iŠ!íÍífž.<IÍ!~!^í^á^<Ě·
i, í»^M-4ftď'?5-Aí^*^‘Í''i,‘ů ''^'•‘í ‘'^í-·'*·':1’^’·'“ “y>Sjř.~í'46Í:
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ALA 73 ALA 74 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ALA 73 ALA 74 ASN 76 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 i
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76
Tabulka 6
Pětinásobné mutační varianty ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
# . V ' í; irX'· ’ £ * *· ’ »-'Μ> J. 1« *’ „} ,, í».
r > í *· , <f-ižS=· »%s i ♦J^.tfíSíXř
ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VÁL 81
ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83
ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82
ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83
ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82
ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 SER' 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
A ři
LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83
’. /7^'^’.' ;Vw ~ ' * ‘/.' ?F· \- ' v í< ACftlř^'f ί'»1 / ‘ί'-^'-Χ’ι4^ ' ,„ 5¾ ^‘-r 1 V «^Λ»ίύΓ ' ?’« -#ní“i +i V C-» - , . ' - ...?>'. r Ιϊ'ΐν^ί“' 1·-' -< ;,* <<,.< :,? /.. ' ,š - . ” t'1;^·''*' Λ fc, Jjrjtjly'ί/Χ./ί·<?'-'ΐ/ ííyM-ή^ ι^ΐ,-Λ^ fc 1- ’^ϊ»». , & '·.
»>> ,ř V
LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 74 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 SÉR 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
'’ ' W/SWliBíalt ·χ^' ;&íg%Sř iwÁ£r.>;'!“ 3 yíjt 3,ΐ;
ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82
- · ------- ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 „ ALA 74 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83 » ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 i ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ŠER 78 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 74 LEU 75 VAL 81 LEU 82 GLY 83 $ ALA 74 LEU 75 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 74 LEU 75 SER 78 LEU 82 GLY 83 . ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 GLY 83
ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82,
ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 76 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 . ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 73 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73ÁSN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
„ Ϊ i
7··;. z . ; fa 1 * '!-V - -¾ 31 .o-ť'.' .. .·„ ‘ ;u- v. ·ίΛ »; ·-> * .· ί · ··.· .· i . ·&, , í ” 'ί «ί
ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
- «ř „ .. -
ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 73 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ŠER 78 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 73 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81
tš í>: ·
ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82
i Ji) v* i ,'-.t S; · . . . - .· s-, -*- •«'ilí *,.*» • -í > «ί * •—.-mV*.
<? V
- *jř\ *5
-«- <· M*'/·* v jf-V·»* .» · · · · ·· <«··*· ·* < · - · i · *5 · -Λχ*:ι ΐ'Ϋ’τ L &&/· ·Χ 1¼ ·&
·<
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 LEU 75 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA ALA 73 LEU 73 LEU 75 GLY 80 LEU 82 GLY 83
75 GLY 80 VAL 81 GLY 83
<» ALA 73 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ILE 79 LEU 82 GLY 83
- ALA 73 LEU 75 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 GLY 83
i ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 LEU 75 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81
ň ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 73 LEU 75 ASN 77 LEU 82 GLY 83
£ ALA 73 LEU 75 ASN 77 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81
ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER , 78 VAL 81
itr
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79
ALA 73 LEU 75 ASN 76 LEU 82 GLY 83 ALA 73* LEU 75 ASN 76 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 73 ALA 74 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 VAL 81 LEU 82
λ *£?? Ρτ-Ζ^ ι · ‘‘íS*' X * r “ ? 1 ·»<-$« * k * , , / '*/ ' ’ ‘ Ί?Α 4« ‘J'!:·!' — **” J ‘ - 1 ,í 3**> 1 „ .» > >u » . > * f * i*Š «. i \Lv> v *4 ^A*- 4 0TA , -V - * * *** .V· ř%‘
ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ŠEŘ 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79
ALA 73 ALA 74 ASN 76 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 VAL 81 GLY 83
0 ALA ALA 73 ALA 73 ALA 74 ASN 74 ASN 76 VAL 81 LEU 82 76 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 83
r ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81
• ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80
í \ft. ALA ALA 73 ALA 73 ALA 74 ASN 74 ASN 76 SER 78 GLY 83 76 SER 78 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80
Ά*/·
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 VÁL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ALA 73 ALA 74 LEU 75 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY' 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77
« »
Tabulka 7
Šestinásobné mutační varianty
SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILÉ 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
J . LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
£ LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
·. LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
- LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
i LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
£ LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 LEU'75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VÁL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
t , H
z' ,
V, , - .-.-1¾ ......_·.. .^^J. - — - - V~1S,- * -'......»
ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
' · .· .··' *' W'-£ !
>·>· J ít 4/ ·
-- —
I “IV*
U,03? -s Οΐο^ΟίΟΟίΟιρ ř-4 ,, 4 „ _ f , - . / ,--'·, ri t * r , t
Γίί'Λ*'·'·^^^ í .··;:>’. «.'řiíiifí· :.·. v;
ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ŠER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ' ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU- 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA
ALA > ALA
ALA . ALA
ALA ALA , ALA
ALA . ALA
ALA ALA ALA
ALA
ALA
ALA
ALA
ALA i ALA
ALA e ALA
ALA ALA ALA ALA ALA <· ALA
ALA '> ALA
ALA ALA ALA
ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 73 ASN 77 SER 78 ILE 79GLÝ 80 VAL 81 73 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 73 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ASN '77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 73 ASN 76ASŇ 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
· , ·· ··
Μ&?δΚ*·1 · · ·ι ·,$ «’,·ύ- ••-ν'λ-Λ :??ΜΒο a · λ·· «· · ·
,, ALA ALA ALA ALA ALA ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ί» ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83
- ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82
J ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
- ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 73 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
(5J1 ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
£ ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
f* ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ί» ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83
.·
ίΛ * Λ’ #* fct ,
Λ> L
ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA
ALA
ALA
ALA
ALA
ALA
ť. ALA
ALA ALA ALA ALA ALA ALA ALA ·* ALA
ALA ALA ALA
LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83
J>'e· V“' ''-‘i
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA
ALA
ALA
ALA 'r.....r 'ALA
ALA i* - ALA
ALA * ALA
ALA
ALA
ALA
ALA i ALA
ALA ALA ALA
ALA
ALA
ALA
ALA
ALA
S ALA
ALA
O ALA
ALA ALA ALA ALA ALA ·' ALA
ALA ·-’ ALA
ALA
ALA
ALA
ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 77 SÉR 78 VAL 81 GLY 83 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 73 ALA 74 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL’ 81 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 ASN. 77 VAL 81 GLY 83 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82
.·.·*&' I·/:-/ * _*b.'-·**&#*,$--\* <?> *.>» ·
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 GLY 83 '^V ÍW ξ. Λ »-., >* Ρ1 i , , feSS.á’' <-·5' Vá *$S >¥· ·„·'·> . ·.' ·· 4 4 · 4 · 4 i, ' φ . 4 · 4 · 4 . í ♦’ J ' '¥ * ^*' ‘4. * r ”
-.-V,
4.4 .
Γr^ 4*· í^ / i * -Λ- ** * ÍU
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN‘77 ILE'79 LEU'82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 ·
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78
Sedminásobné mutační varianty
ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
Tabulka 8
9Λ^> i ví U<% * Λ i U * i ř
Λ> * »Α.< <.í»t < JÍT ,r !írt« J,,
ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 > ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 * LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 « LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 « LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ’ LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 e LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
* ·Λ 5.·* ί «ϊ $ ·»* - τ^?- - ,7' ř-Cy'^ 4-^4. *·' - 4* i >V*k -«·*
ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 . 'ALA 74 ASN 77 ŠER 78ÍLE 79GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 • i
ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VÁL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
4' ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
,-, ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
Č*! ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 fa ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ú ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ' .>>*··< · :< ? ϊ
ί> . /XV „·, '' Ί ' ~ ^Íy£-Á fe^fefr·?^·'--5· '.* “}
ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
Ή·- *
C· '·»·> '‘·£ % ' /-*
V
W.
Ύ * ::.i τ M * * f -.·>.-ν : :-* p -9 ' . . ,? ··· • .·_Μ '* > &;·.«. · <ř> 11 yW * yíT.52
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 > ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 » ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 * ALA 73 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
- ALA 73 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 4 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 í· ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 • ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 λ ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 i ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 í ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
L ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
I
Λ ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 *· ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
P B ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
• a Λ v -W *\ “χ, -¼ fV’4 ^S,·’·»' 'Λ. 4 't \ ~ ' ^ζ.~·v< v -* Άί/ ? >ÍVX i ř * sá''·'^
¢.-/
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 · ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83, ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
·,· - .
<Í’S 'Ί y&Pip 7^-.^.{,Λίίβ/λ? ?' ;; íft(SS%ftO ·$>.<
*í; ‘
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALÁ '73 ÁLÁ 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82' ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 · ALA 73 ALA 74 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
-· ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83
v, ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82
4 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82
6' ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL r ’ , ?' 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82
i
• ·· ř
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ÁLÁ 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ELE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ELE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83. ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73ALA 74LEU 75ASN 77ILE 79GLY 80VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83
• ·»
, í
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82
' ......... ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
í* ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 LEU 82 GLY 83
- ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82
- ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81
.4 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 GLY 83
s*i ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81
Ift ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79VAL 81
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASŇ 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80
..!.:.·Λ«··
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79
Tabulka 9
Osminásobné mutační varianty ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY SOTÉU “82 GLY ’83“ ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
s. ALA 74 LEU 75 ASN, 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 . ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ŠER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 , 3 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 . ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ís ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
Jo ALA 73 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
60
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LE1J 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 , ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ζ ALA 73 ALA 74 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 , fs ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 : ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 , ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73ALA 74ASN 76ASN 77ILE 79GLY 80VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 £&& <
ά/Τρ^ϊ S*^·? ''> Z SJ t ’iJ-> . Vs·-’ ·:· '* ·· '·· f -i -
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 GLY 80 VAL. 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74LEU ”75 ASN 76 “ŠER 78ÍLE79VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 LEU 82 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 83 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80
Tabulka 10
Devítinásobné mutační varianty
LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ííí ti*:·?·.·· •4M* • v SAy Vj ϋ’ί-1 * 4'^ ťjř«
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ’ ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY'80 LEU 82 GLY 83 v - - ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 ·%
ALA 73 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83 ; ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 t ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
Γ, i,
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82 GLY 83 w .
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 GLY 80 VAL 81 LEU 82 GLY 83
- - - ..... ALA ALA ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 VAL 81 LEU 80 LEU 80 VAL 82 GLY 83 82 GLY 83
73 ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 77 ILE 79 GLY
74 LEU 75 ASN 76 ASN 81 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 ILE 79 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 VAL 81 LEU 82 GLY 83
- ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 GLY 83
* ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 GLY 80 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 LEU 82 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 GLY 83
'4, ' ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76ASN 77 SER 78 ILE 79 VAL 81 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 GLY 83
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 LEU 82
ALA 73 ALA 74 LEU 75 ASN 76 ASN 77 SER 78 ILE 79 GLY 80 VAL 81
Tabulka 11 představuje některé výhodné dvojité mutační varianty, které mají jednu nebo více deíecí a jednu nebo více substitucí
Tabulka 11
Δ 73, Leu75Iíe Δ 73, Leu75Met
Δ 73, Asn76His Δ 73, Ser78Asn
Δ 73, Ser78Thr Δ73, Ile79Leu
Δ 73, Ile79Met Δ73, Ile79Thr
Δ 73, Val81Thr Δ 73, Leu82Phe
Δ 73, Leu82His Δ74, Leu82His
Δ 74, Leu82Phe Δ74, Val81Thr
Δ 74, Val81Thr Δ 74, Iíe79Thr
Δ74, Ile79Met Δ74, Ile79Leu
Δ 74, Ser78Thr Δ74, Ser78Asn
Δ74, Asn76His Δ 74, Leu75Met
Δ 74, Leu75Ile Δ 74, Ser78Asp
Δ 75, Asn76His Δ75, Ser78Asn
Δ 75, Ser78Thr Δ 75, Ile79Leu
Δ 75, Ile79Met Δ 75, Ile79Thr
Δ75, Val81Thr ... Δ 75, Leu82Phe
_____ Δ 75, Leu82His.......... .............Δ 76, Leu75Ile
Δ 76, Leu75Met Δ 76, Ser78Asn
Δ 76, Leu75Thr Δ 76, Ile79Leu
Δ 76, Ile79Met Δ 76, Ile79Thr
Δ 76, Val81Thr Δ 76, Leu82Phe
Δ 76, Leu82His Δ 77, Leu75Ile
Δ 77, Leu75Met Δ77, Asn76His
Δ 77, Ser78Asn Δ 77, Ser78Thr
Δ 77, Ile79Leu Δ77, Ile79Met
Δ 77, Ile79Thr Δ77, Val81Thr
Δ 77, Leu82Phe Δ77, Leu82His
Δ 78, Leu82His Δ 78, Leu75Ile
Δ 78, Leu75Met Δ 78, Leu75Ile
Δ 78, Asn76His Δ78, Ile79Leu
Δ 78, Ile79Met Δ 78, Ile79Thr
Δ 78, Val81Thr Δ 78, Leu82Phe
Δ 79, Leu82His Δ 79, Leu75Ile
Δ 79, Leu75Met Δ 79, Asn76His
Δ 79, Ser78Asn Δ 79, Sér78Thr
Δ 79, Val81Thr Δ 79, Leu82Phe
Δ 80, Leu75Ile Δ 80, Leu75Met
Δ 80, Asn76His Δ 80, Ser78Asň
Δ 80, Ser78Thr Δ 80, Ile79Leu
A80,Ile79Met Δ 80, Ile79Thr
Δ80, Val81Thr Δ 80, Leu82Phe
Δ 80, Leu75Ile A81,Leu75Ile
..«S .4«!
Δ 81, Leu75Met A81,Asn76His
Δ 81, Ser78Asn A81,Ser78Thr
Á81,IIé79Leu ' A81,Ile79Met
‘ Δ 81, Ilé79Thr A81,Leu82Phe
A81,Leu82His Δ 82, Leu75Ile
Δ 82, Leu75Met Δ 82, Asn76His
Δ 82, Ser78Asn Δ 82, Ser78Thr
Δ 82, Ile79Leu Δ 82, Ile79Met
Δ82, Ile79Thr Á82,Val81Thr
A 83, Leu75IIe Δ 83, Leu75Met
Δ 83, Asn76His Δ 83, Ser78Asn
Δ 83, Ser78Thr Δ 83, Ile79Leu
A83,Ile79Met A83,Ile79Thr
Δ 83, Val81Thr Δ 83, Leu82Phe
Vně epitopové oblasti může být vytvořena jedna nebo více dalších substitučních mutací („stabilizující mutace“), aby se například proteáza znovu stabilizovala po mutacích, provedených v epitopové oblasti, nebo aby se zvýšila proteolytická aktivita varianty. Mnoho takových stabilizujících mutací je v oboru známo. Příklady takových stabilizujících mutací jsou uvedeny například vWO 95/10591, Baeck a kol., publikovaný 20. dubna 1995; patentu US č. 4 914 031, Zukowski a kol., vydaný 3. dubna 1990; patentu US č. 5 470 733, Bryan a kol., vydaný 22. října 1996; WO 89/07642, patentu US č. 5 707 848, Bryan a kol., vydaný 13. ledna 1998; Van Eekelen a kol., publikovaný 24. srpna 1989; WO 87/04461, Stabinski a kol., publikovaný 30. července 1987; patent US č. 4 760 025, Estell a kol., vydaný 26. července 1988; WO . 92/11348, Branner a kot, publikovaný 9. července 1992; EP 0 405 901, Casteleijn a kol., publikovaný 2. ledna 1991; WO 91/00345, Branner a kol., publikovaný 10. ledna 1991 a WO 94/10020, Brode a kol., publikovaný 23. března 1995.
Výhodnými stabilizujícími mutacemi jsou jedna nebo více z dále uvedených: I107V; K213R; Y217L; Y217K; N218S; G169A; M50F; Q19E; P5A; S9A; I31L; E156S;
·· ···· • · · ·· ··
• · · • · · • • * • •
• ··· • · • • · • •
•
• · • · • • · • •
• · · · · • · • ·
G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C a Q271E. Výhodnějšími stabilizujícími mutacemi jsou jedna nebo více z dále uvedených: P5A; S9A; I31L; E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C + Q206C; Q271E; Y217L a Y217K. Nejvýhodnějšími stabilizujícími mutacemi jsou Y217L a Y217K.
Výhodná varianta pro použití v prostředcích pro osobní hygienu je Δ 75 - 83, Y217L.
Způsoby přípravy.
Varianty jsou připraveny pomocí mutování nukleotidových sekvencí, které kódují standardní serinovou proteázu, čímž vznikají varianty s modifikovanými aminokyselinovými sekvencemi. Takové metody jsou v oboru dobře známé, jedna taková metoda je uvedena dále:
Fágemid (pSS-5), obsahující gen pro standardní subtilizin BPN' (Mitchison, C. a J.A. Wells, „Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtilisin BPN'“, Biochemistry, sv. 28, str. 4807 až 4815 (1989) je transformován do kmene CJ236 Escherichia coli dutung- a jednovláknová DNA matrice obsahující uráčil je vytvořena pomocí VCSM13 helper fága (Kunkel a kol., „Rapid and Efficient Site-Specific Mutagenesis Without Phenotypic Selection“, Methods in Enzymology, sv. 154, str. 367 až 82 (1987), postupem modifikovaným podle Yuckenberg a kol., „Site-Directed in vitro Mutagenesis Using Uracil-Containing DNA and Phagemid Vectors“, Directed Mutagenesis - A Practícal Approach, McPherson, M. J. ed., str. 27 až 48 (1991). Místně cílená mutageneze pomocí primerů, odvozená z metody Zoller a Smith (Zoller, M. J. a M. Smith, „Oligonucleotide - Directed Mutagenesis Using M13 - Derived Vectors: An Efficient and General Proceduře of Point Mutations in any Fragment of DNA“, Nucleic Acids Research, sv. 10, str. 6487 až 6500 (1982), je použita pro přípravu všech mutant (v podstatě jak je uvedeno v Yuckenberg a kol., „Site-Directed in vitro Mutagenesis Using Uracil-Containing DNA and Phagemid Vectors“, Directed Mutagenesis - A Practícal Approach, McPherson, M. J. ed., str. 27 až 48 (1991)).
Oligonukleotidy jsou připraveny pomocí DNA syntetizátoru 380B (Applied Biosystems lne.). Produkty mutačních reakcí jsou transformovány do Escherichia coli kmene MM294 (Americká sbírka typových kultur E. coli 33625). Všechny mutace jsou potvrzeny pomocí sekvenování DNA a izolovaná DNA je transformována do expresního kmene PG632 Bacillus subtilis (Saunders a kol., „Optimization of the Signal-Sequence Cleavage Site for Secretion from Bacillus subtilis of a 34-amino acid Fragment of
I ·· ···· · ·« ·· ·· • · · ···· · · · · • · ·· · · · · · · · • ·· ··«····* • · ······· (58
Human Parathyroid Hormone“, Gene, sv. 102, str. 277 až 282 (1991) a Yarig a kol., „Cloning of the Neutrál Protease Gene of Bacillus subtilis and the Use of the Cloned Gene to Create an in vitro - Derived Deletion Mutation“, Journal of Bacteríology, sv. 160, str. 15 až 21 (1984). Aktivita varianty je předběžně určována podle schopnosti buněk PG632, transformovaných mutantou plazmidu, hydrolysovat kasein.
Fermentace je následující. Buňky Bacillus subtilis (PG632), obsahující studovanou variantu rostou do střední logaritmické fáze v jednom litru LB bujónu, obsahujícího glukózu 10 g/litr, naočkovány do fermentoru Biostat C (Braun Biotech, lne., Allentown, PA) v celkovém objemu 9 litrů. Fermentační médium obsahuje kvasničný výtažek, kaseinový hydroiyzát, rozpustný - částečně hydrolyzovaný škrob (Maltrin M-250), činidla zamezující tvorbě pěny, pufry a stopové minerály (viz „Biology of Bacilli: Application to Industry“, Doi, R. H. a M. McGloughin, ed. (1992)). Bujón je udržován během fermentačního cyklu při konstantním pH 7,5. Pro antibiotikovou selekci mutovaných plazmidů je přidán kanamycin (50 pg/ml). Buňky jsou pěstovány po dobu 18 hodin při teplotě 37 °C do Aeoo asi 60 a výtěžek je potom odebrán.
Aby byla získána čistá varianta, je fermentační bujón je zpracován pomocí následujících kroků. Bujón je zbaven buněk Bacillus subtilis průchodem přes 0,16 pm membránu. Bezbuněčný bujón je potom koncentrován ultrafiltrací přes membránu, která zadržuje molekuly s molekulovou hmotností 8000. pH je upraveno na 5,5 pomocí koncentrovaného pufru MES (2-(N-morfoiin)ethanoisulfonová kyselina). Varianta je dále čištěna pomocí iontoměničové chromatografie (výměna kationtů) na S-sepharoze a elucí pomocí gradientů NaCl. (Viz Scopes, R. K., „Protein Purification Principles and Practice“, Springer-Verlag, New York (1984).
Pro určení koncentrace aktivní varianty ve frakcích sebraných v průběhu gradientově eluce je použit test pNA (DelMar a kol., Analytical Biochemistry, sv. 99, str. 316 až 320 (1979)). Tento test měří rychlost s jakou je uvolňován p-nitroanilin, když varianta hydrolyzuje rozpustný syntetický substrát, sukcinyl-alanin-alanin-prolinfenylalanin-p-nitroanilin (sAAPF-pNA). Rychlost s jakou hydrolyzační reakce vytváří žlutou barvu je měřena při 410 nm na spektrofotometru a je úměrná koncentraci aktivního enzymu. Dále je použito měření absorbance při 280 nm pro určení celkové koncentrace proteinů. Poměr aktivní enzym/celkový protein udává čistotu varianty a je používán pro určování frakcí, které budou spojeny pro přípravu zásobního roztoku.
• 4 »··· • · • ··· •4 44 4· · · · « ·
4 « 4 4 4 • · · · · · · • 4 ······· • 44 444 ··· ·· ·« ··
Aby bylo zabráněno autolýze varianty během skladování, je ke spojeným frakcím, získaným z chromatografického sloupce, přidána stejná hmotnost propylenglykolu. Po skončení purifikačního postupu je čistota zásobního roztoku varianty kontrolována SDS-PAGE (polyakrylamidová elektroforéza v přítomnosti sodium dodecylsulfátu) a absolutní koncentrace enzymu je určována pomocí metody titrace aktivního místa za použití trypsinového inhibitoru typu If-T: krocaní bílek (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO).
Při přípravě pro použití je zásobní roztok enzymu vyčištěn na sloupci SephadexG25 (Pharmacia, Piscataway, New Jersey), aby byl odstraněn propylenglykol a vyměněn pufr. Pufr MES, přítomný v zásobním roztoku enzymu je zaměněn za pufr 0,1 M tris (tris(hydroxymethylaminomethan)), obsahující 0,01 M CaCI2 a pH je upraveno na 8,6 pomocí HCI. Všechny pokusy jsou provedeny při pH 8,6 vtrisovém pufru, temperovaném na 25 °C.
Analytické metody.
U variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, může být pomocí následujících metod testována jejich enzymatická aktivita a imunitní a/nebo alergická odpověď, obě jsou známy osobám se zkušenostmi v oboru. Popřípadě mohou být použity jiné, v oboru dobře známé metody.
Aktivita varianty.
Proteázová aktivita varianty, která je předmětem tohoto vynálezu, může být testována pomocí metod, které jsou v oboru dobře známé. Dvě takové metody jsou představeny dále:
Aktivita měřená na šupinkách kůže.
Pomocí pásky Scotch® #3750, jsou opakovaně z nohou subjektu sloupávány šupinky kůže tak dlouho, dokud není páska od těchto šupinek dosti matná. Páska je potom rozstříhána na čtverce o rozměrech 1 palec na 1 palec a uložena. Do petriho misky o rozměrech 10 mm krát 35 mm je v pufru 0,01 M KH2PO4 pH 5,5 přidáno 0,75 mg/ml kontrolního enzymu (například subtilizin BPN') nebo varianta, která bude testována. K tomuto roztoku je přidán 1 ml 2,5% laurátu sodného pH 8,6. Roztok je mírně míchán na deskovém míchadle. Předem připravený čtverec pásky je ponechán nasát v tomto roztoku (stranou s šupinkami kůže nahoru) po dobu 10 min. za pokračujícího mírného míchání. Čtverec pásky je potom opláchnut vodovodní vodou po dobu 15 s. Do čisté petriho misky jsou napipetovány 3 ml modré barvy Stevenel Blue ··> 9999
9
999
99 99 99
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
999 999 999 99 99 99 (3ml, komerčně dostupná od Sigma Chemical Company, St. Louis, MO). Opláchnutý čtverec pásky je umístěn na tři minuty do barvy (stranou s šupinkami kůže nahoru) za mírného míchání. Čtverec pásky je z barvy vyjmut a postupně opláchnut ve dvou 300 ml kádinkách s destilovanou vadou, každé opláchnutí trvalo 15 sekund. Poté byl čtverec pásky ponechán na vzduchu uschnout. Intenzita barvy čtverce pásky, získaná v kontrolním enzymu a intenzita barvy čtverce pásky, získaná ve variantě, jsou porovnány vizuálně nebo pomocí chromometru. Čtverec pásky z varianty š menší intenzitou barvy vzhledem ke čtverci pásky z kontrolního enzymu, prokazuje variantu, která má vyšší aktivitu.
Aktivita měřená pomocí zbarvení kolagenu.
K 50 ml 0,1 M tris pufru (trís(hydroxymethylaminomethan)), obsahujícího 0,01 M
CaCÍ2 s pH 8,6 je přidáno 0,5 g azocoll (kolagen napuštěný azobarvivem, komerčně dostupný od Sigma Chemical Company, St. Louis, MO). Směs je inkubována při 25 °C za mírného míchání na deskové míchačce. Dva mililitry této směsi je přefiltrováno přes injekční filtr 0,2 mikronu a změřena jeho absorbance při 520 nm a na tuto hodnotu je nastavena nula spektrfotometru. Pak je ke zbývajícím 48 ml směsi tris/azocoll přidána 1 ppm kontrolního enzymu (například subtilizin BPN') nebo testované varianty. Každé 2 min. jsou přefiltrovány 2 ml roztoku, obsahujícího kontrolu či variantu, přes injekční filtr 0,2 mikronu. U každého filtrovaného vzorku je ihned změřena jeho absorbance při 520 nm a výsledky jsou vyneseny v závislosti na čase. Sklony křivek kontroly a testovaného konjugátu jsou známkou relativních aktivit vzorků. Vyšší sklon křivky je známkou vyšší aktivity. Test aktivity varianty (sklon) může být vyjádřen v procentech aktivity kontroly (sklonu).
Test množení T-buněk.
Imunologický a/nebo alergický potenciál variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, může být určen pomocí testu množení T-buněk, který je zde dále uvedený. Tento test je variantou testu popsaného v Bungy Poor Fard a kol., „T Cell Epitopes og the Major Fraction of Rye Grass Lolium perenne (Lol p I) Defined Usibg Overlpping Peptides in vitro and in vivo“, Clinical Experimental Immunology, sv. 94, str. 111 až 116 (1993).
V tomto testu jsou použity krve osoby alergické k subtilizinu BPN' (pozitivní kožní test) a osoby kontrolní (negativní kožní test). Od každé osoby je odebráno asi 60 ml krve, ze které jsou pomocí ficoll-hypaque (který může být získán od Pharmacia, • 9 9999 • · • 999 • 9 99
9 9 9
9 9 · • 9 9 ·
9
999 99
9 9 9
99
Piscataway, New Jersey), získány mononukleámí buňky. Buňky jsou promyty dvakrát v RPMI 1640 (které může být získáno od Gibco, Grand Island, New York) a potom resuspendovány v kompletním médiu RPM11640, doplněném 10 % lidského AB séra, 2 mM L-glutaminu a 25 pg/ml gentamycinu (který může být získán od Gibco, Grand Island, New York). Buňky jsou pěstovány při koncentraci 2x105 buněk na jamku v 0,2 ml kompletního média v 96jamkových mikrotitračních destičkách se dnem ve tvaru „U“. Potenciální antigen, který má být testován (buď inaktívovaný BPN' jako pozitivní kontrola nebo varianta, která je předmětem tohoto vynálezu) je přidán v konečné koncentraci 40 pg/ml. Kultury jsou inkubovány při 37 °G v atmosféře 5% CO2. Po pětidenní inkubaci je přidána 1 pCi/jamku methyl-3H-thymidinu a po 18 hodinách jsou buňky odebrány. Za míru množení T-buněk je považováno množství 3H-thymidinu zabudovaného buňkou, které je zjišťováno pomocí měření v kapalném scintilátoru. Prostředky, které jsou předmětem tohoto vynálezu.
Varianty mohou být použity v čistících prostředcích, mimo jiné v pracích prostředcích, prostředcích pro čistění pevných povrchů, prostředcích na mytí nádobí a detergentových prostředcích pro automatické myčky.
Zde uvedené čistící prostředky obsahují účinné množství jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, a nosič čistícího prostředku.
Zde používaný termín „účinné množství varianty“ nebo podobně, označuje množství varianty nezbytné pro dosažení proteolytické aktivity, potřebné v určitých druzích čistících prostředků. Taková účinná množství jsou snadno zjistitelná pro osoby s běžnou zkušeností v oboru a je to založeno na mnoha faktorech, jako je určitá použitá varianta, čistící aplikace, specifické složení čistícího prostředku a zda je požadován vlhký nebo suchý (např. ve formě granulí, tyčinky) prostředek a podobně. S výhodou obsahují čistící prostředky od 0,0001 % do 10 %, výhodněji od 0,001 % do 1 % a nejvýhodněji od 0,01 % do 0,1 % jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu. Několik příkladů různých čistících prostředků, kde mohou být varianty použity, je dále diskutováno detailně.
Navíc k variantám, které jsou předmětem tohoto vynálezu, předkládané čistící prostředky obsahují dále nosiče čistících prostředků, obsahující jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, které jsou s variantou slučitelné. Zde používaný termín „materiál čistícího prostředku“ znamená jakýkoli materiál, vybraný pro určitý typ požadovaného čistícího prostředku a formy tohoto výrobku (např. tekutina, granule, • · · · • · · ···· · • · · · · · · · • ·· ····· • · ··· ··· tyčinka, sprej, tyčka, pasta, gel), přičemž tyto materiály jsou také slučitelné s variantou, použitou v prostředku. Specifický výběr materiálů pro čistící prostředky je snadno proveditelný, když se vezme v úvahu materiál, který bude čištěn a požadovaná forma prostředku pro podmínky, za kterých bude čistění probíhat. Zde používaný termín „slučitelný“ znamená materiály v čisticím prostředku, které nesnižují proteolytickou aktivitu varianty v takovém rozsahu, že by varianta neměla při použití ža normální situace požadovanou účinnost. Specifické materiály čistících prostředků jsou zde dále detailně uvedeny.
Varianty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mohou být použity v různých detergentových prostředcích, kde je vyžadována vysoká pěnící a dobrá čistící aktivita. Varianty tedy mohou být použity spolu s různými běžnými složkami, aby bylo dosaženo přesně definovaných prostředků na čištění pevných povrchů, prostředků na mytí nádobí, prostředků na praní tkanin a podobně. Takové prostředky mohou být ve formě tekutin, granulí, tyčinek a podobně. Tyto prostředky mohou také být připraveny jako „koncentrované“ detergenty, které obsahují mezi 30 až 60 hmotnostními procenty smáčedel.
Zde uvedené čistící prostředky mohou volitelně a výhodně obsahovat různá smáčedla (např. aniontová, neiontová nebo smáčedia s oběma druhy iontových skupin). Taková smáčedia jsou typicky v prostředku přítomna v množství mezi 5 % až 35 %.
Jako příklady zde užitečných smáčedel lze mimo jiné uvést běžné Cn-Ci8 alkyl benzensulfonáty a primární a náhodné alkylsuffáty, Cio-C18 sekundární (2,3) alkyl sulfáty obecných vzorců CH3(CH2)x(CHOSO3)'M+)CH3 a CH3(CH2)y(CHOSO3'M+) CH2CH3, kde x a (y+1) jsou celá čísla o velikosti alespoň 7, výhodně alespoň 9 a M je ve vodě rozpustný kation, zvláště sodík, C10-Ci8 alkylalkoxysulfáty (zvláště EO 1-5 ethoxysulfáty), Ci0-Ci8 alkylaikoxykarboxyláty (zvláště EO 1-5 ethoxykarboxyláty), C10C18 alkylpolyglykozidy a jejich odpovídající sulfátované polyglykozidy, C12-C18 asulfonátované estery mastných kyselin, Ciz-Ci8 alkyl a alkylfenolaikoxyláty (zvláště ethoxyláty a smíšené ethoxy/propoxyláty), C12-C18 betainy a sulfobetainy („sultainy“), Cio-C18 aminoxidy a podobně. Zde je dávána přednost alkylalkoxysulfátům (AES) a alkylalkoxykarboxylátům (AEC). Použití takových smáčedel v kombinaci s aminoxidem a/nebo betainovými nebo sultainovými smáčediy je také výhodné, záleží však na požadavku toho, kdo prostředek sestavuje. Jiná běžně používaná smáčedia jsou • · · · • ·
.............. «· uvedena v běžných, textech z tohoto oboru. Obzvláště vhodná smáčedla zahrnují methylglukamidy, popsané v patentu US č. 5 194 639, Connor a kol., vydaný 16. března 1993.
V zde obsažených detergentových čistících prostředcích se může vyskytovat množství rozmanitých jiných příměsí, například jiné aktivní příměsi, nosiče, činidla udržující vlhkost, barvy nebo pigmenty a u tekutých přípravků rozpouštědla. Jestliže je požadován další zvýšení pěnivosti, mohou být do prostředku přidány zesilovače pěnivosti, jako jsou C10-Cie alkolamidy, typicky v množství 1 až 10 %. C10-C14 monoethanol a diethanolamidy jsou příkladem typické skupiny takových zesilovačů pěnivosti. Výhodné je také použití těchto zesilovačů pěnivosti spolu s vysoce pěnícími pomocnými smáčedly, jako jsou výše uvedené aminoxidy, betainy a sultainy. Pokud je to žádoucí, mohou být přidány rozpustné hořečnaté soli, jako jsou MgCI2, MgSO4 a podobně, v typických množstvích od 0,1 do 2 %, aby se dále podpořila pěnivost.
Tekuté detergentové prostředky, zde uvedené, mohou obsahovat jako nosiče vodu a jiná rozpouštědla. Vhodné jsou nízkomolekulární primární a sekundární alkoholy, jako jsou methanol, ethanol, propanol a izopropanol. Pro rozpouštění smáčedel jsou výhodné jednoduché alkoholy, ale mohou být také použity polyalkoholy, které obsahují 2 až 6 uhlíkových atomů a 2 až 6 hydroxylových skupin (např. 1,3propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Prostředky mohou obsahovat 5 až 90 %, typicky však ód 10 do 50 % takových nosičů.
S výhodou budou zde uvedené detergentové prostředky sestaveny tak, že během používání pro čištění ve vodném prostředí, bude mít mycí voda pH mezi 6,8 a 11. Leštící prostředky jsou typicky takto sestaveny. Techniky pro kontrolu pH při doporučených způsobech použití, zahrnují použití například pufrů, zásad a kyselin. Tyto techniky jsou dobře známé osobám se zkušenostmi v tomto oboru.
Při sestavování prostředků pro čištění pevných povrchů a prostředků pro čištění tkanin, které jsou předmětem tohoto vynálezu, si pracovník může přát použít různé komponenty ve váhovém množstvích od 5 do 50 %. Typické komponenty zahrnují 1 až 10 mikronové zeolity, polykarboxyláty jako je citronan a oxydisukcináty, vrstevnaté silikáty, fosfáty a podobně. Ostatní běžné komponenty jsou uvedeny v běžných receptech.
Pracovník si může rovněž přát použít v těchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulázy, lipázy a proteázy, typicky v množstvích od 0,001 do 1 %. Rozličné φφ
....... ..... '·· ·· čistící enzymy a enzymy vhodné pro péči o tkaniny jsou dobře známé v oboru pracích detergentů.
V těchto prostředcích mohou být použity rozličné bělící sloučeniny, jako jsou peroxouhličitany, peroxoboritany a podobně, typicky v množstvích 1 až 15 hmotnostních procent. Pokud je to žádoucí, tyto prostředky mohou také obsahovat aktivátory bělidel, jako jsou tetraacetylethylendiamin, nonanoyloxyběnzen sulfonát a podobně, které jsou také v oboru známě. Používají se typicky v množstvích od1 do~Í'0~ hmotnostních procent.
V těchto prostředcích mohou být také použita činidla pro uvolnění špíny, zvláště typu aniontových oligoesterů, chělatační činidla, zvláště aminofosfonáty a ethylen diaminodisukcináty, činidla pro uvolnění zeminy, zvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, díspergující činidla, zvláště polyakryláty a polyaspartáty, leštidla, zvláště aniontová leštidla, činidla potlačující pěnivost, zvláště silikony a sekundární alkoholy, změkčovače tkanin, zvláště vaichářské hlíny a podobné, všechny mohou být použity v těchto prostředcích v množstvích od 1 do 35 hmotnostních procent. Standardní popisy složení a publikované patenty obsahují mnohé podrobné popisy těchto běžných materiálů.
V čistících prostředcích mohou být také použity stabilizátory enzymů. Tyto enzymové stabilizátory zahrnují propylenglykol (výhodně v koncentraci od 1 do 10 %), mravenčan sodný (výhodně v koncentraci od 0,1 do 1,0 %)· a mravenčan vápenatý (výhodně v koncentraci od 0,1 do 1,0 %).
Varianty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou vhodné pro použití v čistících prostředcích na pevné povrchy. Zde používaný termín „čistící prostředky na pevné povrchy“ označuje tekuté a granulární detergentové prostředky pro čistění pevných povrchů, jako jsou podlahy, stěny, koupelnové kachlíky a podobně. Prostředky pro čistění pevných povrchů, které jsou předmětem tohoto vynálezu, obsahují účinné množství jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, s výhodou v koncentraci od 0,001 do 10 hmotnostních procent, výhodněji v koncentraci od 0,01 do 5 hmotnostních procent, ještě výhodněji v koncentraci od 0,05 do 1 hmotnostního procenta varianty v prostředku. Vedle toho, že obsahují jednu nebo více variant, typicky tyto čistící prostředky na pevné povrchy obsahují smáčedía a ve vodě rozpustné odlučovací komponenty. V určitých specializovaných produktech, jako jsou sprejové
čističe oken, však někdy nejsou smáčedla používána, protože mohou vytvářet filmy a/nebo zbytkové skvrny na skleněném povrchu.
Složka smáčidla, pokud je přítomna, může představovat pouze 0,1 % zde uvedených prostředků, ale typicky budou prostředky obsahovat od 0,25 do 10 %, výhodněji od 1 do 5 % smáčidla.
Prostředky budou typicky obsahovat od 0,5 do 50 % detergentóvých komponent, s výhodou od 1 do 10 % detergentóvých komponent. - - .
S výhodou by mělo být pH v oblasti od 7 do 12. Pokud je to nezbytné, je možno pro úpravu pH použít běžná činidla pro úpravu pH, jako jsou hydroxid sodný, uhličitan sodný nebo kyselina chlorovodíková.
V prostředcích mohou být obsažena rozpouštědla. Vhodná rozpouštědla zahrnují mimo jiné glykolové étery, jako jsou diethylenglykol monohexyl éter, diethylenglykol monobutyl éter, ethyienglykol monobutyl éter, ethyienglykol monohexyl éter, propylenglykol monobutyl éter, dipropylenglykol monobutyl éter a dioly, jako jsou
2,2,4-trimethyl-1,3-pentandiol a 2-ethyl-1,3-hexandiol. Pokud jsou použity, jsou tato rozpouštědla přítomná v množstvích od 0,5 do 15 %, s výhodou 3 do 11 %.
Dále mohou být použity v prostředcích, které jsou předmětem tohoto vynálezu, vysoce těkavá rozpouštědla, jako jsou izopropanol nebo ethanol, aby se urychlilo odpařování prostředku z povrchů, když povrchy nejsou po použití prostředku opláchnuty. Pokud jsou použity, jsou tato těkavá rozpouštědla přítomná v množstvích od 2 do 12 %.
Příklady provedení vynálezu
Prostředky pro čištění pevných povrchů, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou ukázány na následujících příkladech.
Příklady 1 až 6
Tekuté prostředky pro čištění pevných povrchů • · »·
Př. 1 Př. 2 Př. 3 Př. 4 Př. 5 Př. 6
Δ 75 - 82 0,05 % 0,50 % 0,02 % 0,03 % 0,30 % 0,05 %
EDTA - - 2,90 % 2,90 % - -
citronan sodný - - - - 2,90% 2,90%
NaCi2 alkylbenzensulfonát 1,95% 1,95% - 1,95% -
NaCi2 alkylsulfát - 2,20% - 2,20 % - 2,20 %
NaCi2 (ethoxy)sulfát - 2,20 % - 2,20 % - 2,20 %
C12 dimethylaminoxid - 0,50 % - 0,50% - 0,50 %
Na kumensulfonát 1,30 % - 1,30% - 1,30% -
hexylkarbitol 6,30 % 6,30 % 6,30% 6,30 % 6,30 % 6,30 %
voda 90,4% 88,3 % 87,53 % 85,87 % 87,25% 85,85%
Všechny předpisy jsou upraveny na pH 7.
V příkladech 1 až 6 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 75 - 82, v podstatě s podobnými výsledky.
V jiném provedení předloženého vynálezu, obsahují prostředky na mytí nádobí jednu nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu. Zde používaný výraz „prostředky pro mytí nádobí“ označuje všechny formy prostředků pro čištění nádobí, mimo jiné v granulované a tekuté formě. Prostředky pro mytí nádobí, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou ukázány na následujících příkladech.
.......
Příklady 7 až 10
Tekuté prostředky pro mytí nádobí
Př. 7 Př. 8 Př. 9 Př. 10
Δ79 0,05 % 0,50 % 0,02 % 0,40 %
C12 - Ci4 N-methylglukamid 0,90 % 0,90 % 0,90 % 0,90 %
C12 ethoxy (1) sulfát 12,0% 12,0 % 12,0% 12,0%
2-methy,undekanová kyselina 4,50 % 4,50% 4,50% 4,50%
C12 ethoxy (2) karboxylát 4,50 % 4,50 % 4,50 % 4,50 %
C12 alkohol ethoxylát (4) 3,00 % 3,00 % 3,00 % 3,00 %
Ci2 aminoxid 3,00 % 3,00 % 3,00 % 3,00 %
Na kumensulfonát 2,00 % 2,00% 2,00 % 2,00 %
ethanol 4,00 % 4,00 % 4,00 % 4,00 %
' Mg2*· (jako MgCI2) 0,20 % 0,20 % 0,20 % 0,20 %
Caz+ (jako CaCI2) 0,40 % 0,40 % 0,40 % 0,40 %
voda 65,45% 65% 65,48 % 65,1 %
Všechny předpisy jsou upraveny na pH 7.
V příkladech 7 až 10 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 79, v podstatě s podobnými výsledky.
Tekuté prostředky pro čištění tkanin, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou ukázány na následujících příkladech.
Příklady 11 až 13
Tekuté prostředky pro čištění tkanin
Př. 8 Př. 9 Př. 10
Δ 70, 75-82 0,05 % 0,03 % 0,30 %
C12 - Cu alkylsuifát sodný 20,0 % 20,0 % 20,0 %
2-butyl oktanová kyselina 5,0 % 5,0 % 5,0 %
citronan sodný 1,0% 1,0% 1,0%
C12 alkohol ethoxylát (3) 13,0% 13,0% 13,0%
monoethanolamin 2,50 % 2,50 % 2,50 %
voda/propylenglykol/ethanol (100:1:1) 58,45 % 58,47 % 58,20 %
V příkladech 11 až 13 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 70, 75 - 82, v podstatě s podobnými výsledky. Prostředky pro osobní hygienu.
• · · · • ·· «· ·· • 4 · · · * · · · • · · · · « ··« «· ··
Předložené varianty jsou obzvláště vhodné pro použití v prostředcích pro osobní hygienu, jako jsou například vlasové kondicionéry, šampóny, prostředky proti akné, pleťová mléka a kondicionéry, sprchové gely, mýdla, pěnivé a nepěnivé prostředky pro čištěni pleti, kosmetika, pleťová mléka a zvlhčovače na ruce, obličej a tělo, kosmetické a čistící kapesníky, prostředky ústní hygieny a prostředky pro péči o kontaktní čočky. Prostředky pro osobní hygienu, které jsou předmětem tohoto vynálezu, obsahují jednu nebo více předkládaných variant a nosič pro prostředky pro osobní hygienu.
Pro ilustraci, varianty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou vhodné pro zahrnutí do prostředků, popsaných v následujících odkazech: patent US č. 5 641 479, Linares a kol., vydaný 24. června 1997 (prostředky pro čištění pleti); patent US č. 5 599 549, Wivell a kol., vydaný 4. února 1997 (prostředky pro čištění pletí); patent US č. 5 585 104, Ha a kol., vydaný 7. prosince 1996 (prostředky pro čištění pleti); patent US č. 5 540 852, Kefauver a kol., vydaný 30. července 1996 (prostředky pro čištění pleti); patent US č. 5 510 050, Dunbar a kol., vydaný 23. dubna 1996 (prostředky pro čištění pleti); patent US č. 5 612 324, Guang Lín a kol., vydaný 18. března 1997 (prostředky proti akné); patent US č. 5 587 176, Warren a kol., vydaný 24. prosince 1996 (prostředky proti akné); patent US č. 5 549 888, Venkateswaran, vydaný 27. srpna
1996 (prostředky proti akné); patent US č. 5 470 884, Corless a kol., vydaný 28. listopadu 1995 (prostředky proti akné); patent US č. 5 650 384, Gordon a kol., vydaný 22. července 1997 (sprchové gely); patent US č. 5 607 678, Moore a kol., vydaný 4. března 1997 (sprchové gely); patent US č. 5 624 666, Coffindaffer a kol., vydaný 29. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. 5 618 524, Bolich a kol., vydaný 8. dubna 1997 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. 5 612 301, vydaný Inman, 18. března 1997 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. 5 573 709, Wells, vydaný 12. listopadu 1996 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. 5 482 703, Pings, vydaný 9. ledna 1996 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. Re. 34 584, Grota a kol., znovu vydaný 12. dubna 1994 (vlasové kondicionéry a/nebo šampóny); patent US č. 5 641 493, Dáte a kol., vydaný 24.června 1997 (kosmetika); patent US č. 5 605 894, Blank a kol., vydaný 25. února
1997 (kosmetika); patent US č. 5 585 090, Yoshioka a kol., vydaný 17. prosince 1996 (kosmetika); patent US č. 4 939 179, Cheney a kol., vydaný 3. července 1990 (pleťová mléka na ruce, obličej a/nebo tělo); patent US č. 5 607 980, McAtee a kol., vydaný 4.
• ·· · • 9 9 9 9
99 března 1997 (pleťová mléka na ruce, obličej a/nebo tělo); patent US č. 4 045 364, Richter a kol., vydaný 30. srpna 1977 (kosmetické a čistící kapesníky); žádost o evropský patent EP 0 619 074, Touchet a kol., publikovaný 12. října 1994 (kosmetické a čistící kapesníky); patent US č. 4 975 217, Brown-Skrobot a kol., vydaný 4. prosince 1990 (kosmetické a čistící kapesníky); patent US č. 5 096 700, Seibel, vydaný 17. března 1992 (prostředky ústní hygieny); patent US č. 5 028 414,' Sampathkumar, vydaný 2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); patent US Č75 028 4T5, Benedict a kol., vydaný 2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); patent US č. 5 028 415, Benedict a kol., vydaný 2. července 1991 (prostředky ústní hygieny); patent US č. 4 863 627, Davies a kol., 5. září 1989 (prostředky pro péči o kontaktní čočky); patent US č. Re. 32 672, Huth a kol., znovu vydaný 24. května 1988 (prostředky pro péči o kontaktní čočky) a patent US č. 4 609 794, Schafer, vydaný 2. září 1986 (prostředky pro péči o kontaktní čočky).
Pro další ilustraci prostředků ústní hygieny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, je farmaceuticky přijatelné množství jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, obsaženo v prostředcích vhodných pro odstraňování proteinových skvrn ze zubů nebo umělého chrupu. Zdě používaný termín „prostředky ústní hygieny“ označuje prostředky na čištění zubů, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkačky, zdravotní pastilky, ústní parfémy, tablety, biogely, pasty pro prevenci, zubní léčebné roztoky a podobně. S výhodou obsahují prostředky ústní hygieny od 0,0001 do 20 hmotnostních procent jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, výhodněji od 0,01 do 10 hmotnostních procent, ještě výhodněji od 0,01 do 5 hmotnostních procent prostředku a farmaceuticky přijatelný nosič. Zde používaný termín „farmaceuticky přijatelný“ znamená, že látky, léky nebo inertní složky, které termín popisuje, jsou vhodné použít ke styku s tkáněmi lidí a nižších živočichů bez nepřiměřené toxicity, nesiučivosti, nestability, podráždění, alergické odpovědi a podobně, přiměřeně s rozumným poměrem zisk/ríziko.
V typickém případě budou farmaceuticky přijatelné složky nosiče pro složky pro ústní čištění v prostředcích ústní hygieny tvořit od 50 do 99,99 hmotnostních procent, výhodněji od 65 do 99,99 hmotnostních procent a ještě výhodněji od 65 do 99 hmotnostních procent prostředku.
• ·
Farmaceuticky přijatelné složky nosiče a volitelné složky, které mohou být zahrnuty v prostředcích ústní hygieny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou dobře známé osobám se zkušeností v tomto oboru. Veiká rozmanitost typů prostředků, nosičových složek a volitelných složek, vhodných pro prostředky ústní hygieny, jsou popsány v odkazech, které zde byly výše citovány.
V jiném provedení předloženého vynálezu, prostředky pro čištění zubních protéz, používané pro čištění zubních protéz mimo dutinu ústní, obsahují jednu nebo více variant, které jsou předmětem tohoto výnálezu. Tyto prostředky pro čištění zubních protéz obsahují účinné množství jedné nebo více variant, s výhodou v množství od 0,0001 do 50 hmotnostních procent jedné nebo více variant, výhodněji od 0,001 do 35 hmotnostních procent, ještě výhodněji od 0,01 do 20 hmotnostních procent prostředku a nosič, vhodný pro čištění zubních protéz. Různé formáty prostředků pro čištění zubních protéz, jako jsou šumící tablety a podobně jsou v oboru dobře známé (viz např. patent US č. 5 055 305, Young) a obecně jsou vhodné pro zabudování jedné nebo více variant pro odstranění proteinových skvrn z umělého chrupu.
V jiném provedení předloženého vynálezu, prostředky pro čištění kontaktních čoček obsahují jednu nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu; Tyto prostředky pro čištění kontaktních čoček obsahují účinné množství jedné nebo více variant, s výhodou v množství od 0,01 do 50 hmotnostních procent jedné nebo více variant, výhodněji od 0,01 do 20 hmotnostních procent, ještě výhodněji od 1 do 5 hmotnostních procent prostředku a nosič, vhodný pro čištění kontaktních čoček. Různé formáty prostředků pro čištění kontaktních čoček, jako jsou tablety, kapaliny a podobně jsou rovněž v oboru dobře známé a obecně jsou vhodné pro zabudování jedné nebo více variant, které jsou předmětem tohoto vynálezu, pro odstranění proteinových skvrn z kontaktních čoček.
Provedení prostředků pro čištění kontaktních čoček, které jsou předmětem tohoto vynálezu, jsou ukázány na následujících příkladech 14 až 17.
• · «* fa
C» » ···· • · • · ··
Příklady 14 až 17
Roztoky pro čištění kontaktních čoček
Př. 14 Př. 15 Př. 16 Př. 17
Δ75-82 0,01 % 0,5% 0,1 % a 2,0%
glukóza 50,0 % 50,0% 50,0 % 50,0 %
neiontové smáčedlo (kopolymer polyoxyethylenu a polyoxypropylenu) 2,0% 2,0 % 2,0%' 2,0 %
aniontové smáčedlo (polyoxyethylen - Na alkylfenyléter sulfricester) 1,0 % 1,0% •4,0 % 1,0 %
chlorid sodný 1,0% 1,0% 1,0% 1,0%
borax 0,30% 0,30 % 0,30% 0,30 %
voda 45,69 % 45,20 % 45,60 % 43,70%
V příkladech 14 až 17 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 75 - 82, v podstatě s podobnými výsledky.
Příklady 18 až 21 představují použití předložených variant ve výrobcích, používaných pro mytí těla.
Příklady 18 až 21 Výrobky pro mytí těla
Př. 18 Př. 19 Př. 20 Př. 21
voda 62,62 % 65,75 % 57,72% 60,72 %
Na2 EDTA 0,2 % 0,2 % 0,2 % 0,2 %
glycerin 3,0 % 3,0 % 3,0 % 3,0 %
Polyquaternium 10 0,4 % 0,4 % 0,4 % 0,4 %
Na Iaureth sulfát 12,0 % 12,0% 12,0 % 12,0%
cocamide MEA 2,8 % 2,8 % 2,8 % 2,8 %
Na „lauraphoacetate“ 6,0 % 6,0 % 6,0 % 6,0 %
kyselina myristilová 1,6% 1,6% 1,6% 1,6%
MgSO4. 7H2O 0,3% 0,3 % 0,3 % 0,3 %
trihydroxystearin 0,5 % 0,5 % 0,5% 0,5 %
PEG-6 triglyceridy kyselin kaprylové/kaprové 3,0%
sacharózové polyestery 3,0% - - -
• · ··
„cottonate“ mastné kyseliny
sacharózové polyestery „behenate“ mastné kyseliny 3,0 % 4,0 %
vazelína z ropy - 4,0% 8,0 % -
_______minerální olej - - - 6,0 %
DMDM hydantoin 0,08% 0,08 % 0,08 % 0,08%
Δ75 - 83, Y217L 0,1 % 2,0 % 2,0% 5,0%
kyselina citrónová 1,40% 1,40% 1,40% 1,40%
V příkladech 18 až 21 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 75 - 83, Y217L, v podstatě s podobnými výsledky.
Příklady 22 až 25 představují použití předložených variant ve výrobcích, používaných pro ošetřování pleti na obličeji.
Příklady 22 až 25
Výrobky pro ošetřování pleti na obličeji
Př. 22 Př. 23 Př. 24 Př. 25
voda 66,52 % 65,15 % 68,47% 68,72 %
Na2 EDTA 0,1% 0,1 % 0,2 % 0,2 %
kyselina citrónová - 1,4% 1,4%
Na laureth-3 sulfát 3,0% 3,5 % - -
Na laureth-4 karboxylát 3,0 % 3,5 % - -
Polyquatemium 10 - - 0,4 % 0,4 %
Polyquatemium 25 0,3 % 0,3 % - -
glycerin 3,0 % 3,0 % 3,0 % 3,0 %
Na „lauraphoacetate“ - - 6,0 % 6,0 %
kyselina laurová 6,0 % 6,0 % 3,0 % 3,0 %
kyselina myristilová - - 3,0 % 3,0 %
MgSO4.7H2O 2,3 % 2,0 % 2,0 % 2,0 %
triethanolamin 4,0 % 4,0 % 4,0 % 4,0 %
trihydroxystearin 0,5 % 0,5 % 0,5 % 0,5 %
sacharózové polyestery „behenate“ mastné kyseliny 2,0 % 2,0 %
'9' · · · · · 9 * ·«« » · ·· 9 9 * 9 9 9 9 oo · · · * · · · ϊ ··· ··· ·· ·· ··
sacharózové polyestery „cottonate“ mastné kyseliny 3,0% 2,0 %
PEG-6 triglyceridy kyselin kaprylové/kaprové 2,0 %
vazelína z ropy - - 4,0 % -
minerální olej - - - 2,0%
kokamidopropyl betain 2,0 % 3,0 % 1,8% 1,8%
lauryldimethylaminoxid 1,0% 1,2% 1,2 % 1,2%
dex panthenol 1,0% 0,25 % 0,25 % -
DMDM hydantoin 0,08 % 0,08 % 0,08% 0,08%
Δ73,179M 1,0% 2,0 % 2,0 % 0,5 %
vůně 0,2% 0,2 % 0,2 % 0,2 %
V příkladech 22 až 25 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 73,179M, v podstatě s podobnými výsledky.
Příklady 26 až 27 představují použití předložených variant v prostředcích, používaných pro zvlhčování pleti:
Příklady 26 až 27 Výrobky pro zvlhčování pleti
příklad 26 příklad 27
glycerin 5,0 % -
kyselina stearová 3,0 % -
Cn-13 izoparafm 2,0 % -
gtykolstearát 1,5% -
propylenglykol - 3,0 %
minerální olej 1,0 % 10,0%
sezamový olej - 7,0 %
vazelína z ropy - 1,8%
triethanolamin 0,7 % -
cetyloctan 0,65 % -
glycerinstearát 0,48 % 2,0 %
TEA stearát - 2,5 %
cetylalkohol 0,47 % -
• φφφ • · φφ · · φφφφ • · · · · ♦ ·
lanolinalkohol - 1,8%
DEA cetylfosforečnan 0,25 % -
methyiparaben 0,2 % 0,2 %
propylparaben 0,12 % 0,1 %
carbomer934 0,11% -
Na2EDTA 0,1 % -
Δ75-83 0,1 % 0,5%
voda 84,32% 71,1 %
V příkladech 26 až 27 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 75 - 83, v podstatě s podobnými výsledky.
Příklad 28 představuje použití předložených variant v prostředcích, používaných v čistících kapesnících:
Příklad 28
Prostředek, používaný v čistících kapesnících
propylenglykol 1,0%
laurylsíran amonný 0,6 %
kyselina jantarová 0,4%
jantaran sodný 3,2%
Triclosan® 0,15%
Δ 72 - 82, G70V 0,05 %
voda 91,0%
Výše uvedeným prostředkem je napuštěn arch tkaniny, složený z celulózy a/nebo polyesteru v množství 250 % váhy absorbujícího archu.
V příkladu 28 jsou varianty uvedené v tabulkách 2 až 10 a výhodné varianty tam uvedené, zaměněny za Δ 72 - 82, G70V, v podstatě s podobnými výsledky.

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY irojX
    9 9 9 99« ► 9 9 • · 99
    9 99 9* ·· «99 9 9 9 9 .
    9 9 9 9 9 9 9
    1. Varianta serinové proteázy, vyznačující s e t í m, že má pozměněnou aminokyselinovou sekvenci standardní aminokyselinové sekvence, kdy pozměněná aminokyselinová sekvence obsahuje deleci jedné nebo více z pozic 70 až 84, odpovídajících subtilizinu BPN', přičemž variantou není Δ75 - 84 nebo Δ
    71........ ' ' ......’.....r ’ ............. .....
  2. 2. Varianta podle nároku 1, vyznačující se t í m, že serinová proteáza je vybrána ze skupiny, obsahující subtilizin BPN', subtilizin Carisberg, subtilizin DY, subtilizin 309, proteinázu K a thermitázu.
  3. 3. Varianta podle nároků 1a2, vyznačující s e t í m, že je deletována jedna nebo více z pozic 73 až 83, odpovídajících subtilizinu BPN'.
  4. 4. Varianta podle kteréhokoli z předchozích nároků, v y z n a č u j í c í se t í m, že je deletována jedna nebo více z pozic 70 a 75 až 83, odpovídajících subtilizinu BPN'.
  5. 5. Varianta podle kteréhokoli z předchozích nároků, v y z n a č u j í c í se tím, že je vybrána ze skupiny, obsahující:
    (a) Δ 70, 75-82;
    (b) Δ75-82;
    (c) Δ 70, 78, 79;
    (d) Δ70;
    (β) Δ 75;
    (f) Δ76;
    (9) Δ 78;
    (h) Δ79;
    (i) A81;a (j) Δ82.
    ··*·
  6. 6. Varianta podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje substituci na jedné nebo více z pozic 70 - 84, odpovídajících subtilizinu BPN'.
  7. 7. Varianta podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje jednu nebo více stabilizujících mutací. >
  8. 8. Mutovaný gen pro serinovou proteázu, vyznačující se tím, že kóduje variantu podle kteréhokoli z předchozích nároků.
  9. 9. Prostředek pro osobní hygienu, vyznačující se t í m, že:
    (a) varianta serinové proteázy, která má pozměněnou aminokyselinovou sekvenci standardní aminokyselinové sekvence, kdy pozměněná aminokyselinová sekvence obsahuje deleci jedné nebo více z pozic 70 až 84, odpovídajících subtilizinu BPN', a (b) nosič prostředku pro osobní hygienu. *
  10. 10. Prostředek podle nároku 9, vyznačující se t í m, že varianta je dále charakterizována substitucí na jedné nebo více z pozic 70 - 84, odpovídajících subtilizinu BPN'.
CZ20003394A 1999-03-25 1999-03-25 Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu CZ20003394A3 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20003394A CZ20003394A3 (cs) 1999-03-25 1999-03-25 Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20003394A CZ20003394A3 (cs) 1999-03-25 1999-03-25 Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20003394A3 true CZ20003394A3 (cs) 2001-03-14

Family

ID=5471952

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20003394A CZ20003394A3 (cs) 1999-03-25 1999-03-25 Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ20003394A3 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6569663B1 (en) Serine protease variants having amino acid substitutions
US6495136B1 (en) Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
US6586223B1 (en) Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions
US6586224B1 (en) Subtilisin protease variants having amino acid deletions and substitutions in defined epitope regions
AU750336B2 (en) Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
US20030170846A1 (en) Enzyme variants having one or more D-amino acid substitutions
US6908757B1 (en) Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
CZ20003394A3 (cs) Varianta serinové proteázy, mutovaný gen, prostředek pro osobní hygienu
CZ20003397A3 (cs) Varianta serinové proteázy; prostředek pro osobní hygienu, čistící prostředek, mutovaný gen
AU5928200A (en) Intramolecularly cross-linked subtilisin proteases having reduced immunogenicity
CZ20003396A3 (cs) Proteázový konjugát a prostředek osobní hygieny
MXPA00009442A (en) Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
MXPA00009434A (en) Serine protease variants having amino acid substitutions