CZ20003538A3 - Použití smilageninu a anzurogeninu D pro léčbu Alzheimerovy nemoci - Google Patents

Abstract

Použití smilageninu a anzurogeninu D při léčbě kognitivní dysfunkce a podobných stavů. Také jsou popsány farmaceutické prostředky.

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká smilageninu a anzurogeninu D a jejich použití pro léčbu kognitivní dysfunkce a příbuzných stavů a prostředků pro použití v takové léčbě. Přesněji se předkládaný vynález týká léčby stavů, které jsou charakterizované deficitem počtu nebo funkce receptorů vázaných na membrány. V následujícím popisu bude vynález popsán v souvislosti s léčbou Alzheimerovi nemoci (AD) a senilní demence Alzheimerova typu (SDAT), při kterých byl prokázán deficit mnoha typů receptorů. Nicméně, je třeba si uvědomit, že předkládaný vynález se týká obecně léčby stavů způsobených vnitřními patologickými stavy a/nebo nežádoucími vnějšími vlivy, které jsou charakterizovány deficitem počtu nebo funkce receptorů vázaných na membrány nebo deficitem v přenosu signálu ve spojeních mezi neurony nebo ve spojeních mezi neurony a efektorovými buňkami.

Dosavadní stav techniky

Mezi stavy uvedené výše patří Parkinsonova nemoc, demence spojená s výskytem Lewyho tělísek, posturální hypotenze, autismus, chronický únavový syndrom, myastenia gravis, * Lambert-Eatonova nemoc, onemocnění a potíže spojené se syndromem války v zálivu, expozice organofosfatům a problémy spojené se stárnutím.

Alzheimerova nemoc (AD) a senilní demence Alzheimerova typu (SDAT) jsou závažnými a narůstajícími problémy ve všech společnostech, ve kterých dochází z důvodů zvýšení • · předpokládané doby života a kontroly získaných nemocí k posunu demografickému profilu směrem ke starší populaci. Existuje potřeba činidel, která budou léčit nebo zlepšovat léčbu AD/SDAT.

Zhoršení paměti spojené se stárnutím (AAMI) je charakteristické pro staré pacienty, kteří mají ztrátu paměti za normálního psychologického a fyzického stavu. Jedná se o špatně definovaný syndrom, ale činidla účinná v léčbě AD/SDAT mohou být přínosem také pro tyto pacienty.

Výzkumy AD/SDAT jsou prováděny tradičními a běžnými způsoby lékařského výzkumu. V běžné medicíně existuje několik přístupů pro léčbu AD/SDAT. Je známo, že biochemické procesy paměti v mozkové kůře jsou (alespoň částečně) zprostředkovány cholinergně. Odborníkům v oboru je znám, že cholinergně zprostředkované mechanismy jsou přímo způsobeny působením acetylcholinu na receptory a tyto se označují jako přímé účinky. Jiné klinicky použitelné efekty mohou být způsobeny také modulací uvolňování acetylcholinu z presynaptických nervových zakončení nebo inhibici enzymů degradujících acetylcholin. Tyto modulační faktory mohou působit prostřednictvím neuronů, ve kterých je mediátor noncholinergní; tyto efekty jsou označovány jako nepřímé efekty. Několik léčebných pokusů bylo zaměřeno na úlohu jiných mediátorů, jako je 5-hydroxytryptamin, který je mediátorem v jiných oblastech mozku, jako jsou například jádra středního mozku. Nicméně, protože nervová vlákna z těchto oblastí vedou směrem k mozkové kůře, ve které je primárním neuropřenašečem acetylcholin, byla pozornost zaměřena na ovlivnění tohoto mediátorů a na vyhledávání činidel ovlivňujících tento mediátor.

···· • · • · · · · · · ···· • · ······· • · · ········ o ·· ······· ^J ··· · ····· · · · ·

Cholinergní strategie pro léčbu AD/SDAT byla zaměřena na několik míst dráhy pro výrobu, synaptické uvolňování a odstraňování uvolněného acetylcholinu.

Jeden přístup obsahuje léčbu vysokými dávkami lecitinu a jiných prekursorů acetylcholinu. Tento postup má omezené použití pro dosažení dlouhodobého zlepšení kognitivní výkonnosti.

Jiný přístup obsahuje použití rostlinných léků jako je extrakt z kořenu Polygalae, u kterého bylo prokázáno, že zvyšuje aktivitu cholin-acetylcholin transferasy (CAT) a sekreci nervového růstového faktoru (NGF) v mozku. Orální podání NGF nemá žádný vliv na neurony centrálního nervového systému z důvodů vysoké molekulové hmotnosti proteinu, který neprochází hematoencephalickou barierou. Nicméně, činidla procházející hematoencephalickou barierou, která mohou stimulovat syntézu NGF v centrálním nervovém systému, byla navržena pro zlepšení chování souvisejícího s pamětí.

Výsledky třetí klinické strategie, která využívá inhibitory cholinesterasy, jako je tacrinhydrochlorid, byly o něco lepší než výsledky předchozích dvou strategií. Bylo prokázáno, že substance získané z rostlin používaných v čínské a západní medicíně, jako je například huperzin, galanthamin a physostigmin, mají všechna určitý - ačkoliv omezený - příznivý účinek při léčbě AD/SDAT v klinických studiích a v laboratorních modelech. Všechny tyto substance jsou inhibitory acetylcholin esterasy (AChE). U pacientů s AD/SDAT může být přítomná snížená syntéza acetylcholinu (Ach), snížená účinnost uvolňování Ach z presynaptických vesikul a snížený počet nebo snížená funkčnost postsynpatických (Mi) receptorů. Také bylo pozorováno snížení počtu presynaptických M₂ receptorů. Příznivý • · · ·

účinek inhibitorů AChE se přičítá zvýšení koncentrace acetylcholinu v synapsích v mozku, které je způsobeno zpomalením degradace uvolněného přenašeče.

Je známo, že prostředky ovlivňující cholinergní funkce ovlivňují paměť a vybavovací schopnosti. Například, nikotin stimuluje nikotinové acetylcholinové receptory a předpokládá se, že krátkodobé zlepšení paměti při kouření cigaret je způsobeno efektem nikotinu. Skopolamin, antagonista acetylcholinu, vyvolává amnesii a narušení kognitivních funkcí projevující se v psychomotorických testech jako prodloužení jednoduché reakční doby, pravděpodobně v důsledku snížené pozornosti, a je používán pro tento účel jako pomocný lék při analgetické terapii. Amnestický efekt skopolaminu může být antagonizován nikotinem.

Existují dvě podrodiny nikotinových receptoru (a a β), které každá obsahují čtyři podtypy lišící se ve specificitě pro ligand. Úloha nikotinových receptorů v CNS není na molekulové úrovni dobře prozkoumána. Je možné, že činidla vážící se na nikotinové receptory mohou modifikovat rychlost obratu na muskarinových receptorem v mozku. Nikotinové receptory jsou iontové kanály otevírané po navázání ligandu a jejich aktivace způsobuje rychlé (v řádu milisekund) zvýšení buněčné permeability pro Na⁺ a Ca⁺⁺, depolarizaci a excitaci.

Jiná třída cholinergních receptorů může být stimulována muskarinem. Takové muskarinové (M) receptory jsou receptory spřaženými s G-proteinem. Odpověď muskarinových receptorů je pomalejší a může se jednat o excitační nebo inhibiční odpověď. Nejsou nutně vázány na změny propustnosti pro ionty.

Klonováním cholinergních receptorů bylo zjištěno pět typů muskarinových receptorů, které byly označeny mi-ms.

• · · φ

·· φφ φφ • · φ ♦ · · • · ΦΦΦΦ • · φ φ φ φ φ • · ΦΦΦΦ ·· φφ φφ

Farmakologické účinky jsou spojeny se čtyřmi klonovanými receptory, které jsou označeny M1-M4 podle farmakologické specificity.

Díky použití specifických receptorových proteinů a monoklonálních protilátek bylo možné dále lokalizovat muskarinové receptory v mozku jako mi (postsynaptické) a m₂ (presynaptické). V srdci jsou M2 receptory postsynaptické. Předpokládá se, že presynaptické muskarinové receptory jsou inhibiční, protože vazba Ach na tyto receptory inhibuje uvolňování dalšího Ach, což způsobuje negativní zpětnou vazbu pro uvolňování Ach. Selektivní antagonisté M₂ receptoru, které jsou přednostně distribuovány do mozku, mohou být proto použitelné pro léčbu Alzheimerovi nemoci.

Je známo, že při onemocněních jako je AD/SDAT, je přítomné všeobecné snížení počtu neuronů a deficit funkce cholinergních nervů. Předpokládá se, že vysoce-afinitní nikotinová vazebná místa na zbývajících neuronech mohou být při léčbě takových onemocnění přeměněna na nízkoafinitní vazebná místa, což zpomalí uvolňování neuropřenašeče. Snížení afinity nikotinových vazebných míst zabraňuje rychlé desenzibilizaci.

Aktivace nikotinových receptorů v mozku agonisty má rychlý nástup účinku a rychlé odeznění účinku. Snížená afinita nikotinových receptorů snižuje desenzibilizaci. Schwarz, R.D. et al. (J. Neuro. Chem. 42 (1984), 1495-8) prokázali, že na cholinergních (a také 5-hydroxytryptaminergních a katecholaminergních) axonálních zakončeních jsou nikotinová vazebná místa lokalizována presynapticky. Změny ve vysoceafinitních vazebných místech při AD/SDAT mohou také indukovat změnu v modulačním účinku nikotinových vazebných míst na jiné systémy přenašečů.

···· ·· ·· ·· • · · · * · • · ·»··♦·* , ···»······· ο ·· ··*··«· ··· · ··· ·· ·> ··

Presynaptické cholinergní mechanismy jsou také pod inhibiční kontrolou zprostředkovanou GABA-ergními neurony a předpokládá se, že tato inhibice je zesílena při AD/SDAT. Odstranění nebo snížení této inhibice zesiluje presynaptickou korovou cholinergní aktivitu a zlepšuje kognitivní funkce.

Interakce mezineuronových výběžků inervovaných nikotinem (snížení vazebné afinity) a odstranění inhibice GABA-ergních vláken jsou ovlivňovány presynaptickým lokusem.

Toto je zjednodušený model působení přenašečů v centrálním nervovém systému, ale poskytuje rámec pro porozumění pokusům, které byly provedeny pro zvýšení účinné koncentrace acetylcholinu v centrálních synapsích. Dále ilustruje koncept přímého a nepřímého působení. Existují nevýhody spojené s třemi běžnými terapeutickými přístupy pro léčbu AD/SDAT, které byly uvedeny výše: dodávání prekursorů Ach, podávání agonistů a inhibice acetylcholinesterasy. Tyto způsoby léčby mohou vést ke krátkodobému zvýšení dostupnosti Ach, které může aktivovat zpětnovazebně mechanismy, které mohou vést k desenzibilizaci postsynaptických receptorů. Teoreticky nemůže být dosaženo dlouhodobého zlepšení a při přerušení léčby jakýkoliv přínos léčby AD/SDAT a AAMI odezní a stav se může ještě zhoršit.

Bylo prokázáno, že sloučeniny s Mi agonistickou a M2/M3 antagonistickou aktivitou zlepšují kognitivní výkonost u 'pacientů se SDAT (Sramak et al., Life Sciences, svazek 2, č.

3, 195-202, 1997). Nicméně, tyto sloučeniny mají nepřijatelné cholinergní vedlejší účinky, jako je únava, průjem a nevolnost.

Radikálnější přístup pro léčbu AD/SDAT a AAMI má za cíl zvýšení počtu postsynaptických (Mi) receptorů v mozku. Z • tftftf

Ί ·········«» ·· ·····«· ··· · ··· ·· >· *« čínského patentu č. CN1096031A je známo, že sarsapogenin (SaG) může zvyšovat počet Mi cholinergních receptorů v mozku a také snižovat počet (t.j. směrem k normální úrovni) β-adrenergních receptorů, jejichž počet může být při AD/SDAT patologicky zvýšen.

Byly publikovány patentové přihlášky chránící použití mnoha steroidních sapogeninů obsahujících spirostanové, furospirostanové, spirosolanové nebo solanidinové struktury, pro léčbu různých onemocnění včetně SDAT. Dvě patentové přihlášky jsou zejména významné z hlediska předkládaného vynálezu:

Čínská patentová přihláška č. CN1096031A popisuje použití spirostanového sapogeninů, sarsapogeninu, pro léčbu SDAT.

Nicméně, popis uvedený v této přihlášce je stručný. Dalším patentem významným z hlediska předkládaného vynálezu je patentová přihláška DE 4303241A1, která popisuje použití velkého množství saponinů a sapogeninů pro léčbu široké škály onemocnění, které vynálezci považují za onemocnění virového původu. Tento vynález má nicméně pochybnou hodnotu v tom, že je známo, že při mnoha stavech charakterizovaných deficity v synaptickém přenosu není identifikován žádný infekční element, čímž je narušen základní předpoklad tohoto vynálezu.

Kromě toho neuvádí tento patent žádná data jakéhokoliv typu, která by umožňovala odborníků vybrat výhodnou sloučeninu z velkého množství sloučenin, které jsou v tomto vynálezu chráněny.

Podstata vynálezu

Vynálezci zjistili, že smilagenin (SMI) a anzurogenin-D (AZD) mají schopnost regulovat receptory. Přesněji bylo zjištěno, že tyto sloučeniny - a zejména SMI - zvyšují počet

M2 receptorů v mozku. Proto v jednom aspektu vynález obsahuje •·· · ·· ·· ·· • ···· · · · · • · · · ···« • · ··»····· použití smilageninu a/nebo anzurogeninu D pro výrobu léku pro léčbu stavů charakterizovaných deficitem počtu nebo funkce postsynaptických receptorů vázaných na membránu.

Odborníkům v oboru bude znám vztah mezi saponiny a jejich sapogeniny a bude jim jasné, že požadovaný účinek sapogeninů může být dosažen u pacientů po podání příslušných saponinů nebo jejich směsi. Hydrolýza alespoň části saponinů probíhá v gastrointestinálním traktu. Odborníkům v oboru bude také známá epimerizace některých sapogeninů za podmínek kyselé hydrolýzy.

Sapogeniny podle předkládaného vynálezu mají následující obecný vzorec:

S odkazem na tento obecný vzorec je struktura AMI a AZD uvedena v následující tabulce:

Sloučenina	A/B kruh cis/trans/nena sycený stav	Stereochemické uspořádání C25 methylu (R nebo S)	Hydroxylová skupina na spirostanovém kruhu
Smilagenin	cis	R	3β-ΟΗ
Anzurogenin D	trans	R	3B-OH, 5α-0Η, 6β-ΟΗ

Saponiny a sapogeniny podle předkládaného vynálezu se vyskytují v mnoha druzích rostlin, zejména z čeledi Smilax,

ΦΦΦ ► · · · ·

I · · · · > φφφ φ φ » φ φφφ ♦ · Φ · 4

Asparagus, Anemarrhena, Yucca a Agáve. Nejvýznamnějšími druhy jsou Smilax regelii Kilip and Morton - běžně známý jako Honduraský přestup; Smilax aristolochiaefolia Miller - běžně známý jako Mexický přestup; Smilax ornata Hooker - běžně známý jako Jamajský přestup; Smilax aspera - běžně známý jako Španělský přestup; Smilax glabra Roxburgh; Smilax febrifuga Kunth - běžně známý jako Ekvádorský nebo Peruánský přestup; Anemarrhena asphodeloides Binge; Yucca schidigera Roezl ex Ortigies; a Yucca brevifolia Engelm.

V dalším aspektu předkládaný vynález obsahuje farmaceutický prostředek zlepšující kognitivní funkce, který obsahuje účinné množství smilageninu a/nebo anzurogeninu D.

V dalším aspektu předkládaný vynález obsahuje farmaceutický prostředek zlepšující kognitivní funkce, který obsahuje účinné množství smilageninu a/nebo anzurogeninu D ve formě extraktu získaného z rostlin rodu Smilax, Asparagus, Anemarrhena, Yucca nebo Agáve.

Je třeba si uvědomit, že vynález zahrnuje ve svém rozsahu použití prostředků uvedených výše. Proto obsahuje vynález v pátém aspektu způsob pro zlepšení kognitivních funkcí, který obsahuje podání účinné dávky prostředku podle předkládaného vynálezu člověku nebo zvířeti.

Vynález také obsahuje způsob pro zlepšení kognitivních funkcí u člověka nebo zvířete, který obsahuje podání účinná dávky smilageninu a/nebo anzurogeninu D.

Termín kognitivní funkce, jak je zde použit, označuje funkce jako je myšlení, odvozování, pamatování, představivost a učení.

• · · · ·· · · · · · · » * · • · · · · ···· ···········

Ιθ · · · · · ···· ···« «· · »· ·· ··

Při identifikaci sloučenin, které by mohly být použity pro léčbu SDAT a jiných onemocnění charakterizovaných snížením počtu receptorů nebo synaptického přenosu brali vynálezci v úvahu to, že je potřeba identifikovat ty sloučeniny, které budou mít požadovaný účinek bez jakýchkoliv estrogenních účinků, protože tyto účinky jsou nepřijatelné, zejména u mužů. Mnoho sloučenin chráněných v patentové přihlášce DE 4303214A1 má značnou estrogenní aktivitu a jsou proto nepřijatelné.

Nicméně, smilagenin a anzurogenin D nevykazují estrogenní aktivitu. Dále byly tyto sloučeniny testovány na působení na další steroidní receptory a bylo zjištěno, že nemají žádnou aktivitu na jakémkoliv z následujících receptorů:

Pregesteronový receptor;

Glukokortikoidní receptor;

Testosteronový receptor.

Vybrané sloučeniny byly také testovány na svou aktivitu v mnoha testech in vitro. Následující testy/pokusy byly považovány za klíčové pro stanovení možné aktivity pro zvýšení počtu receptorů vázaných na membránu:

1. Ovariální buňky čínského křečka (CHO) byly transfektované DNA fragmentem kódujícím muskarinový receptor. Buněčná linie použitá pro většinu pokusů byla buněčná linie exprimující m2 receptor.

2. Výzkum vlivu exprese muskarinových receptorů v kultivované 'buněčné linii neuronálního původu.

3. Byly kultivovány buňky srdečního svalu získané od neonatálních Spraque-Dawley krys. Buňky srdečního svalu exprimují muskarinové receptory, obvykle m2. Koncentrace těchto receptorů klesá při dlouhodobé kultivaci a byl testován vliv vybraných sloučenin zabránění poklesu počtu receptorů.

• · · ·

Způsoby provedení a výsledky těchto pokusů jsou podrobněji uvedeny dále.

1. Pokusy provedené s CHO buněčnou linií

Byl zkoumán vliv různých sloučenin na expresi m2 receptorů na CHO buňkách transfektovaných DNA pro m2 receptor. Počet receptorů byl testován pomoci vazby tritiovaného QNB a odečteni nespecifické vazby. Sloučeniny byly rozpuštěny v DMSO a DMSO byl použit jako kontrola. Sloučeniny byly testovány v různých konečných koncentracích. Sloučeniny byly také testovány za přítomnosti a nepřítomnosti tamoxifenu pro odlišení mechanismu zprostředkovaného estrogenovým receptorem. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2, ve které jsou sloučeniny použité v předkládaném vynálezu uvedeny tučným písmem a data získaná pro jiné sapogeniny jsou uvedena pro srovnání.

Tabulka 2: Vliv sloučenin na expresi M2 receptorů na CHO buňkách

Sloučenina	Molární koncentrace sloučeniny	Vliv na expresi receptorů - uvedený jako % zvýšení vzhledem ke kontrole (negativní hodnoty jsou
uvedeny	v závorkách)
Sarsapogenin	10 b	34
	10‘6	(14)
Anzurogenin D	105	22
	10-6	(26)
Sisalgenin	10'5	NS
	106	NS
Smilagenin	10*S	57
	10'6	18
Diosgenin	10~b	NS
	106	NS

• fe fefe

Ruscogenin	105	(22)
	10’6	NS
Tigogenin	105	NS
	1O'Ď	NS

NS = statisticky nevýznamný vliv

Pokusy ukázaly, že smilagenin a anzurogenin D zvyšuji počet muskarinových receptorů exprimovaných na povrchu CHO buněk kultivovaných in vitro. Tento účinek nebyl antagonizován tamoxifenem, což naznačuje, že mechanismu působeni se neúčastnil estrogenový receptor.

2. Vliv sloučenin na přežíváni buněk

Další testy in vitro byly použity pro stanovení účinku smilageninu a anzurogeninu D. Přesněji, různé neuroblastomové buněčné linie, včetně SKN-SN a SH-SY5Y buněk, a feochromocytomové buněčné linie, byly kultivovány in vitro za přítomnosti fragmentů β-amyloidu nebo při sérové depleci. Pro demonstrování účinnosti sloučenin pro chránění kultivovaných buněk bylo použito mnoha technik. Mezi tyto techniky patří vylučování trypanové modři, chemiluminiscence a uvolňování laktatdehydrogenasy. Nejdůležitější bylo pozorování, že inkubace buněk, konkrétně PC12 buněk, s β-amyloidem snižuje počet muskarinových receptorů, jak je měřen pomocí vazby radioaktivně značeného ligandu. Bylo zjištěno, že toto snížení počtu receptorů je zmírněno při použití smilageninu a anzurogeninu D.

3. Vliv sloučenin na kultivované buňky srdečního svalu

Buňky srdečního svalu byly izolovány ze svalu srdeční komory novorozených Sprague-Dawley krys za použití • · • ···· · ·· ·· ·· · ·· » · »··· • · · ♦ · ···· • * · ········ ·· · · ♦ ···· • · · · · · · «· · · ·· standardních technik. Buňky byly kultivovány in vitro a za použití specifické vazby tritiovaného QNB byl hodnocen počet muskarinových receptorů exprimovaných na fragmentech buněčné membrány získaných po homogenizaci buněk odebíraných v různých časových intervalech. Předběžné pokusy ukázaly, že počet exprimovaných receptorů se začal snižovat po 10 dnech kultivace. Byly proto navrženy pokusy pro zkoumání vlivu různých sloučenin na inhibici tohoto snížení počtu receptorů. Výsledky tohoto pokusu jsou shrnuty v tabulce 3, ve které jsou sloučeniny použité v předkládaném vynálezu uvedeny tučným písmem a data získaná pro jiné sapogeniny jsou uvedena pro srovnání.

Tabulka 3: Vliv různých sloučenin na expresi muskarinových receptorů na kultivovaných buňkách srdečního svalu

Sloučenina	Koncentrace sloučeniny způsobující statisticky významné zvýšení počtu receptorů exprimovaných na neonatálním srdečním svalu po 10 dnech kultivace in vitro
Diosgenin	NS
Anzurogenin D	iQ e m
Ruscogenin	NS
Sarsapogenin	1O'S M
Tigogenin	NS
Astragalosid	io 5 m
Smilagenin	105 M

NS = statisticky nevýznamný vliv

Předpokládá se, že aktivní sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou působit prostřednictvím G-proteinu a že jejich vlivy na počty receptorů jsou sekundární vzhledem k vlivu na G-protein. Po stimulaci membránového G-proteinu jsou iniciovány dvě základní sady dějů: efektorová odpověď; a internalizace receptoru. Následující zpracování receptoru na stav, ve kterém je opět na přítomen buněčném povrchu nebo na jiné membráně a může interagovat s jinými ligandy pro receptor, je ovlivněno mnoha faktory. Zdá se, že mnoho z těchto faktorů nebo mechanismů je spojeno s G-proteinem. Existují důkazy, že aktivace m₃ receptorů může ovlivňovat expresi nebo koncentraci G-proteinů. Předpokládá se, že mechanismem působení sloučenin podle předkládaného vynálezu může být interakce s procesy regenerace receptoru, vazby Gproteinu nebo homeostasou G-proteinu.

Alternativní hypotesou je hypotesa, že sloučeniny zvyšují syntézu nebo uvolňování nebo snižují rychlost degradace neurotropních faktorů jako je mozkový růstový faktor a/nebo nervový růstový faktor. Tyto vlivy na růstové faktory mohou být zprostředkovány působením sloučenin na cytosolový nebo jaderný receptor nebo vazbou sloučeniny na promotorový region, s následným přímým ovlivněním rychlosti produkce mRNA pro růstový faktor nebo mohou být zprostředkovány zvýšenou produkcí jiného faktoru, jako je G-protein, nebo mohou být tyto efekty sekundární k ovlivnění receptoru nebo zpracování G-proteinu.

Claims (7)

1. Patentové nár

   1. Použití smilageninu pro výrobu léku pro léčbu stavů spojených s deficitem počtu nebo funkce receptorů vázaných na membrány.
2. 2. Použití anzurogeninu D pro výrobu léku pro léčbu stavů spojených s deficitem počtu nebo funkce receptorů vázaných na membrány.
3. 3. Farmaceutický prostředek zlepšující kognitivní funkce vyznačující se tím, že obsahuje farmakologicky aktivní účinné množství smilageninu a/nebo anzurogeninu D.
4. 4. Farmaceutický prostředek zlepšující kognitivní funkce vyznačující se tím, že obsahuje farmakologicky aktivní účinné množství smilageninu a/nebo anzurogeninu D ve formě extraktu získaného z rostliny rodu Smilax, Asparagus, Anemarrhena, Yucca nebo Agáve.
5. 5. Použití účinné dávky prostředku podle nároků 3 nebo 4 pro přípravu léku pro zlepšení kognitivních funkcí u člověka nebo u zvířete.
6. 6. Neterapeutický způsob pro zlepšení kognitivních funkcí u člověka nebo u zvířete vyznačující se tím, že obsahuje podání účinné dávky smilageninu a/nebo anzurogeninu D.

   Změněné nároky
7. 7. Použití farmakologicky účinné dávky smilageninu a/nebo anzurogeninu D pro přípravu léku pro zlepšení kognitivních funkcí u pacienta trpícího kognitivní dysfunkcí spojenou se stárnutím.