CZ20003986A3 - Antipicornavirální součeniny a kompozice, jejich farmaceutické použití a materiály pro jejich syntézu - Google Patents

Abstract

Peptidové a peptidomimetické sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterých jednotlivé symboly v obecném vzorci mají specifický význam a které výhodně inhibují nebo blokují biologickou aktivitu picomavirální 3C proteázy. Tyto sloučeniny, stejně takjako farmaceutické kompozice, obsahující tyto sloučeniny, jsou použitelné pro léčení pacientů nebo hostitelů infikovaných jedním nebo více druhy piconavirů, jako je RVP. Meziprodukty a způsoby přípravy takových sloučenin.

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká peptidovitých a peptidomimetických sloučenin, které výhodně inhibují enzymatickou aktivitu picornavirálních 3C proteáz, obzvláště proteáz rhinoviru 3C (RVP) a tím zpomalují růst viru v buněčné kultuře. Předložený vynález se také týká použití takových sloučenin ve farmaceutických kompozicích a terapeutického léčení rhinovirálních infekcí. Předložený vynález se dále týká způsobů syntézy takových sloučenin a sloučenin použitelných pří takových syntézách.

Dosavadní stav techniky

Picornaviry jsou skupina malých neobalených virů s vláknem pozitivní polarity obsahujících RNA, které infikují člověka a další živočichy. Tyto viry zahrnují lidské rhinoviry, lidské polioviry, lidské coxsackie viry, lidské echoviry, lidské a hovězí enteroviry, viry encefalomyokarditidy, viry meningitidy, viry z noh a úst, virus hepatitidy a další. Lidské rhinoviry jsou hlavní • · · · · · · • · · to to · to to · • · · · · to · ··· tototo ··«· ·· ·· příčinou nachlazení. V současné době není na trhu známa žádná účinná terapie pro léčení nachlazení, pouze léčení pro úlevu symptomů.

Picornavirální infekce mohou být léčeny inhibicí proteolytických 3C enzymů. Tyto enzymy jsou nutné pro přirozené zrání picornavirů. Ty jsou zodpovědné za autokatalytické štěpení velkých genomických polyproteinů na esenciální virální proteiny. Členy skupiny 3C proteáz jsou cysteinové proteázy, kde sulfhydrylová skupina nej častěji štěpí glutamin-glycinovou amidovou vazbu. Předpokládá se, že inhibice 3C proteáz blokuje proteolytické štěpení polyproteinů, což dále může zpozdit maturaci a replikaci virů interferencí s tvorbou virálních částic. Proto inhibice zpracování těchto cysteinových proteáz selektivními malými molekulami, které jsou specificky rozpoznávány, by mělo představovat důležitý a užitečný přístup k léčení virálních infekcí tohoto typu a speciálně nachlazení.

V nedávné době byly objeveny některé inhibitory enzymatické aktivity picornavirálních 3C proteáz (neboli antipicornavirální sloučeniny) s malými molekulami. Viz například U.S. patentová přihláška č. 08/850,398, podaná 2. května 1997, Webber a kol.; U.S. patentová přihláška č. 08/991,282, podaná 16. prosince 1997, Dragovich a kol.; a U.S. patentová přihláška č. 08/991,739, podaná 16. prosince 1997, Webber a kol. Tyto U.S. patentové přihlášky, které jsou zde zahrnuty jako reference, popisují jisté antipicornavirální sloučeniny. Přesto však stále existuje požadavek nalézt další sloučeniny s malými molekulami, které jsou obzvláště silná antipicornavirální činidla.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin s malými molekulami, které jsou obzvláště silná antipicornavirální činidla. Předložený vynález se dále týká získání meziproduktů, použitelných pro syntézu uvedených sloučenin inhibujících proteázu a syntetických metod, použitelných pro takové syntézy. Předložený vynález se dále týká farmaceutických kompozic, které jsou vysoce účinné pro léčení onemocnění mediovaných inhibici picornavirálních 3C proteáz, jako je nachlazení.

aktivitu. Bylo peptidomimetické heterocyklickou

Cílů vynálezu bylo dosaženo objevem sloučenin podle předloženého vynálezu, které jsou inhibitory picornavirální 3C proteázy a vykazují obzvláště silnou antivirální překvapivě zjištěno, že peptidové a sloučeniny obsahující pětičlennou skupinu mají vysokou aktivitu inhibice rhinovirální proteázy. Dále bylo překvapivě zjištěno, že aktivita inhibice rhinovirální proteázy u peptidových a peptidomimetických sloučenin může být významně zvýšena nahrazením skupiny glutaminového typu, která se nachází u některých sloučenin inhibujícich rhinovirální proteázu s bočním řetězcem zahrnujícím gama nebo delta laktam.

Inhibitory podle předloženého vynálezu jsou látky následujícího obecného vzorce (I):

ve kterém

Y představuje -N(R_y) -C(R_y) (R_y) - nebo -0-, kde každé R_y představuje nezávisle -H nebo nižší alkyl;

Ri představuje -H, -F, -alkyl, -OH, -SH nebo 0-alkylovou skupinu;

R₂ a R₃ představují nezávisle na sobě H;

o.

a₄ \

(A₃)n /

a₂ < (R41XR4· nebo ^r (R41XR41) , kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 5, Αχ představuje CH nebo N, A₂ a každé A₃ je nezávisle zvoleno ze souboru, zahrnujícího C(R₄i)(R₄x), N(R₄₁), S, S (O) , S(0)₂ a 0 a A₄ představuje NH nebo NR₄₁, kde každé R₄₁ představuje nezávisle H nebo nižší alkyl, za předpokladu, že nejvýše dva heteroatomy se vyskytují za sebou ve výše uvedeném kruhu tvořeném Αχ, A₂, (A₃)_n, A₄ a C=0 a alespoň jedno z R₂ a R₃ představuje o.

NH, nebo

A4 \

(A₃)n (Ř41XR41)

R₅ a Rg představují nezávisle na sobě H, F, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu;

R7 a Rg představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, —0R₁₇, — SRx7, — NRx₇Rx8, — NRi₉NRi7Rx8 nebo —NRX7ORX8, kde

R17, R₁₈ a Rxg představují nezávisle na sobě H, • · alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu nebo acylovou skupinu, za předpokladu že alespoň jedno z R₇ a R₈ představuje alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu,

heteroarylovou skupinu,	-0Ri7,	-SRx7,	-NRx7Rx8,
-NR19NR17R18 nebo —NR17OR18;
• R9 představuje vhodnou	organickou	skupinu;	a
• Z a Ζχ představují	nezávisle	na sobě	H, F,
alkylovou skupinu,	cykloalkylovou	skupinu,

heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, -C(O)R₂₁, ^-CO₂R₂₁, ^-CN,

C(O)NR₂₁R₂₂, -C(O)NR₂iOR₂₂, -C(S)R₂₁, -C(S)NR₂iR₂₂, -no₂,

-SOR₂i, “SO₂R₂i, -SO₂NR₂iR₂₂, -SO(NR₂i) (OR₂₂) , -SONR21, SO₃R₂1, -PO(OR₂₁)₂, -PO(R₂₁) (R₂₂) , -PO(NR₂iR₂₂) (OR₂₃) , PO(NR₂iR₂₂) (NR23R24) , “C (0) NR₂iNR₂₂R₂₃ nebo C (S) NR_2:lNR₂₂R₂₃, kde R₂i, R₂₂, R₂₃ a R₂₄ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo kde kterékoli dva ze substituentů R₂i, R₂₂, R23 a R₂₄, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Zi nepředstavují oba současně H;

nebo Zi a Rx, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu, kde Ζχ a Rx mají výše uvedený význam s výjimkou skupin, které nemohou vytvářet cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

• nebo Z a Zi, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu, kde Z a Zi mají výše uvedený význam s výjimkou skupin, které nemohou vytvářet cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu.

Předložený vynález se také týká prekurzoru, farmaceuticky přijatelných solí, farmaceuticky aktivních metabolitů a farmaceuticky přijatelných solvátů sloučenin obecného vzorce

I.

Ve výhodných provedeních sloučenin obecného vzorce I

O představují R₂ a R₃ nezávisle na sobě H;

NH, nebo

kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 5, každé R₄i představuje nezávisle H nebo nižší alkyl a stereochemie na uhlíkovém atomu, označeném hvězdičkou, může být R nebo S; za předpokladu že alespoň jedno z R₂ a R₃

(C(R₄₁)(R₄₁))_n představuj e ^nh2 nebo (Ř41XR41) ^(R41)(R^

Výhodně, R_g • 0 představuje pětičlenný heterocyklus který má jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího 0, N a S.

V dalších výhodných provedeních mají proměnné obecného vzorce I následující významy: Z a Z_x jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, nižší alkyl, -CO2R21 a -C (0) NR₂iR22z za předpokladu že Z a Zi nepředstavují oba současně H, kde R_2i a R₂₂ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R_2i a R₂₂, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu.

H ,N,

Alespoň jedno z R₂ nebo R₃ představuje

O ‘NH nebo ² a další představuje H. R₅ a R₆ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu a heteroarylovou skupinu, výhodněji jedno z R₅ a R6 představuje H a druhé je alkyl nebo aryl (například nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl). R₇ a R_s představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupina, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu; a výhodněji jedno z R₇ a R₈ představuje H a druhé je alkyl (například 2-propyl, 2methyl-2-propyl nebo 2-methyl-l-propyl) nebo arylmethyl (například nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl nebo naftylmethyl). Rg představuje pětičlenný heterocyklus, který má od jednoho do tří heteroatomů, zvolených ze ·· ·· ·· • · a 4 * *

4 4 4 4

4 4 4 4 4 • · 4 4 4

4444 44 44 souboru, zahrnujícího 0, N a S, výhodněji pětičlenný heterocyklus, který obsahuje alespoň jeden dusíkový heteroatom a alespoň jeden kyslíkový heteroatom (například nesubstituovaný nebo substituovaný 1,2-oxazolyl (t.j. isoxazolyl), 1,3-oxazolyl (t.j. oxazolyl) nebo oxazolyl (1,2,3-oxazolyl, 1,2,4-oxazolyl nebo 1,2,5-oxazolyl). Pokud R₉ představuje oxazolyl, nesubstituovaný a monomethylsubstituovaný 1,2,4-oxazolyl jsou výhodné. V obzvláště výhodných provedeních Rg představuje 3-isoxazolyl nebo 5isoxazolyl, buď nesubstituovaný nebo substituovaný jednou nebo dvěma methylovými skupinami a/nebo atomy halogenu, přičemž chlor a fluor jsou výhodné halogenové substituenty.

Ve výhodném provedení sloučeniny, prekurzory, farmaceuticky přijatelné soli, farmaceuticky aktivní metabolity a solváty mají antipicornavirální aktivitu s EC₅₀ menší nebo rovnou 100 μΜ v testu buněčné kultury Hl-HeLa a výhodněji antirhinovirální aktivitu s EC₅₀ menší nebo rovnou 10 μΜ v testu buněčné kultury Hl-HeLa.

Předložený vynález se také týká meziproduktů obecného vzorce II, výhodně obecného vzorce II', které jsou použitelné pro syntézu jistých sloučenin:

kde :

• p je celé číslo v rozmezí od 0 do 5;

• Au představuje CH nebo N, A_i2 a každé A_i3 je nezávisle zvoleno ze souboru, zahrnujícího C(R_ei)(R₆i), N(R₆i), S, S(O), S(0)₂ a 0 a A_X4 představuje NH nebo NR_6X, kde každé R₆i představuje nezávisle H, alkyl, acyl nebo aryl, za předpokladu, že nejvýše dva heteroatomy se vyskytují za sebou ve výše uvedeném kruhu v obecném vzorci II tvořeném Au, A_X2, (A_X3)_n, A_X4 a C=0;

• každé R_i4i představuje nezávisle H nebo nižší alkyl;

• R₅i představuje H, alkyl, acyl nebo aryl;

• R52, R53 a R54 jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, hydroxy, alkyl, acyl a aryl; nebo kterékoli dva ze substituentu R₅₂, R₅₃ a R₅₄ spolu představují =0 nebo =C (R₅₇) (R₅₈) , kde R₅₇ a R₅₈ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, alkyl, CO₂ (C_x-C₆) alkyl, C0₂N (C_x-C₆) alkyl a C0₂(aryl); a • R55 a R₅₆ představují nezávisle na sobě H nebo vhodnou ochrannou skupinu dusíkového atomu.

Předložený vynález se také týká farmaceuticky přijatelných solí sloučenin obecných vzorců II a II'.

Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic, obsahujících terapeuticky účinné množství alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I nebo jejího prekurzoru, farmaceuticky přijatelné soli, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo solvátu. Kromě toho se předložený vynález týká způsobů inhibice picornavirální 3C proteázy podáváním terapeuticky účinného množství alespoň jedné sloučenina obecného vzorce I nebo jejího prekurzoru, farmaceuticky přijatelné soli, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo solvátu.

Detailní popis a výhodná provedení • 44

4 4 • 4 _4 · * • · ♦♦ 4* *» «4 «494

4 4 4 4

4 4 4

4 4 4 4

4444 44 44

Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce I:

ve kterém Y, Ri, R₂, R₃, R5, Rg, R₇, R₈, Rg, Z a Ζχ mají výše uvedený význam a jejich farmaceuticky přijatelných solí, prekurzorů, aktivních metabolitů a solvátů. Výhodně mají takové sloučeniny, farmaceuticky přijatelné soli, prekurzory, aktivní metabolity a solváty antipicornavirální aktivitu, výhodněji antirhinovirální aktivitu, odpovídající hodnotě EC₅₀ menší nebo rovné 100 μΜ v testu buněčné kultury Hl-HeLa, výhodněji odpovídající hodnotě μΜ v testu buněčné kultury Hl-HeLa.

Předložený vynález se dále týká obecných vzorců I-A, I-B a I-C:

EC₅₀ menši nebo rovné výhodných sloučenin

(I-A) (I-B)

ve kterých R_y (v obecném vzorci I-A) představuje H nebo nižší alkyl a R_lř R₂, R₃, R₅, Rg, R₇, Rs, R9, Z a Ζχ mají výše • 4

4 4 • ·

-· 4 4 • 4

44 *· *4 »4 4 4 » 44 4

4 4 · 4 ·

4* 4 4 4 4

4 4 4 4 4

444 4444 4« 44 uvedený význam a jejich farmaceuticky přijatelných solí, prekurzorů, aktivních metabolitů a solvátů.

Sloučeniny podle vynálezu obecných vzorců I-A, které jsou dále označovány jako peptidovité sloučeniny, I-B, které jsou dále označovány jako sloučeniny ketomethylenového typu a I-C, které jsou dále označovány jako depsipeptidové sloučeniny, se odlišují svým páteřním řetězcem, který může ovlivnit specifickou biodistribuci nebo další fyzikální vlastnosti; nicméně všechny vykazují silnou aktivitu inhibice rhinovirální proteázy.

Ve výhodných provedeních sloučenin obecných vzorců I-A, I-B a I-C uvedených výše:

Ri představuje H, F nebo alkylovou skupinu;

R_y (v obecném vzorci I-A) představuje H nebo methyl;

R₃, R₅ a Rg představují všechny H;

R₂ je zvolen ze souboru, obsahujícího následující skupiny:

yA?

H

CŮ.N.

nh₉ jednoho do zahrnuj ícího heteroatomů

R₆ představuje alkylovou skupinu, která nese výhodně jako případný substituent arylovou skupinu;

R₇ představuje alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu;

R₉ představuje pětičlenný heterocyklus, která má od tří heteroatomů zvolených ze souboru, 0, N a S, výhodně kde alespoň jeden z je dusík, který je nesubstituovaný nebo substituovaný, kde případné substituenty jsou výhodně atom halogenu nebo nižší alkyl a výhodněji mono-chlor nebo -fluor nebo methylová skupina; a

Z a Z_x představují nezávisle na sobě H, F, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, -C(O)R₂₁, -CO2R21, -CN, -C(O)NR₂iR₂₂, -C(O)NR₂iOR₂₂, -C(S)R₂i, -C (S) NR₂₁R₂₂,

-N0₂, -SOR21, -SO2R21, SO2NR21R22, -SO(NR₂i) (OR₂₂) , -SONR21,

SO3R21, -PO(OR₂₁)₂, -PO (R₂i) (R₂₂) , -PO(NR₂iR₂₂) (OR23) ,

PO(NR₂iR₂₂) (NR₂₃R₂₄) , -C (0) NR21NR22R23 nebo ^-C (S) ŇR21NR22R23, kde Z a Zi nepředstavují oba současně H a kde R_2X, R₂₂, R₂₃ a R₂₄ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo kde kterékoli dva ze substituentů R_2i, R₂₂, R₂₃ a R₂₄, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, nebo Z a Zi (oba jak je definováno výše) , společně s atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu.

Ve výhodných provedeních sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou obecných vzorců I-A', I-B' a I-C':

·· · ·· ·· to· • · · · to ····

ve kterých:

Ri, Z a Zi mají výše uvedený význam; n j e 1 nebo 2;

R_y (v obecném vzorci I-A') představuje H nebo nižší alkyl;

R₆ představuje alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl;

R₇ představuje alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, -0R₁₇, -SR₁₇, NR₁₇R₁₈, -NRi₉NR₁₇R₁₈ nebo NRi₇OR₁₈, kde R_X7, R₁₈ a R_X9 představují nezávisle na sobě H, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo acyl;

R_g představuje pětičlenný heterocyklus který má jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího 0, N a S, který nesubstituovaný nebo substituovaný, kde případné substituenty jsou výhodně jedna nebo dvě nižší alkylové skupiny a/nebo atomy halogenu.

• · · • · · • · · · • · · • · <

Předložený vynález se také týká prekurzorů, farmaceuticky přijatelných solí, farmaceuticky aktivních metabolitů a solvátů takových sloučenin.

Ve výhodných provedeních RVP-inhibující činidla podle předloženého vynálezu jsou sloučeniny s libovolným stereospecifickým obecným vzorcem I-A, I-B a I-C:

O R₇ Ry O R₂ Z

H O Rr H (I-A)

R₇

Λ o R₂ z Rf

H O R₆ H R₁ (I-B'

O R,

H O R₆ H R₁ :i-C) ve kterých R_y, Ri, R₂, Rg, R7, R9, Z a Zi mají výše uvedený význam a jejich farmaceuticky přijatelné soli, prekurzory, aktivní metabolity a solváty.

Ve výhodných provedeních sloučenin obecného vzorce ΙΑ, I-B nebo I-C:

Ri představuje H, F nebo methyl;

R_y (v obecném vzorci I-A') představuje H nebo methyl;

R₂ je zvolen ze souboru, obsahujícího následující skupiny:

H

CK^N.

η H -N ,x>

A^nh₂ O , v

R₆ představuje arylmethyl nebo arylthiomethyl, kde aryl je výhodně případně substituovaná fenylová skupina;

R₇ představuje alkylovou skupinu, výhodněji zvolenou ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl1-propyl a arylmethyl, kde arylová skupina je výhodně fenyl nebo naftyl;

R₉ představuje isoxazolyl, oxazolyl nebo oxazolyl, případně substituovaný jednou nebo dvěma nižšími alkylovými skupinami a/nebo atomy halogenu; a

Z představuje H a Z_x představuje -CO2R21, -CN nebo C(O)NR₂iR₂2, kde R₂i a R22 mají výše uvedený význam nebo Z a Zi spolu představují cyklický ester nebo amid.

Ještě výhodněji RVP-inhibující činidla podle předloženého vynálezu jsou sloučeniny libovolného z obecných vzorců I-A', I-B''' a I-C ' :

O • · • ·

ve kterých n, R_y, Ri, R₂₀, Rěz R7/· R9r Z a Zi mají výše uvedený význam a jejich farmaceuticky přijatelné soli, prekurzory, aktivní metabolity a solváty.

Ve výhodných sloučeninách obecného vzorce (I-A'''), (IB' ) nebo (I-C' ) :

Ri představuje H, F nebo methyl;

R_y (v obecném vzorci I-A') představuje H nebo methyl;

R20 představuje atom vodíku;

R₆ představuje arylmethyl nebo arylthiomethyl, kde aryl je výhodně fenyl nesubstituovaný nebo substituovaný atomem halogenu, nižší alkyl a/nebo nižší alkoxy;

R₇ představuje alkylovou skupinu a výhodněji je zvolen ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2methyl-l-propyl a arylmethyl, kde arylová skupina je výhodně fenyl nebo naftyl;

R₉ představuje isoxazolyl, oxazolyl nebo oxazolyl, každý z nich případně substituovaný jednou nebo dvěma nižšími alkylovými skupinami a/nebo atomy halogenu; a

Z představuje H a Ζχ představuje -CO₂R2iz -CN nebo C(O)NR₂iR₂₂, kde R₂i a R₂₂ mají výše uvedený význam nebo Z a Zi spolu představují cyklický ester nebo amid.

V obzvláště výhodných sloučeninách podle předloženého vynálezu generického obecného vzorce I (a odvozených obecných vzorcích) Ri představuje H nebo F.

• ·

Předložený vynález se také sloučenin obecných vzorců II a II' :

týká meziproduktových

(II) ^R56

(11') ve kterých proměnné (p, An, An, A₁₃, A_i4, R51, R52, R53, R₅₄,

R55, R56 a R141) mají výše uvedený význam. Tyto sloučeniny jsou použitelné pro syntézu farmaceuticky užitečných sloučenin obecného vzorce I.

Výhodné R₅₅ a R₅₆ skupiny jsou H a vhodné ochranné skupiny pro dusík, například BOC (terč.-butyloxykarbonyl), CBZ (benzyloxykarbonyl), FMOC (fluoren-9-methyloxykarbonyl), další alkyloxykarbonyly (například methyloxykarbonyl) a trityl (trifenylmethyl). Další vhodné dusíkové ochranné skupiny mohou být snadno vybrány odborníkem (viz například Greene a Wutz, Protecting groups in Chemical Synthesis (2^nd ed.), John Wiley & Sons, NY (1991)). Výhodné skupiny R₅₂, R₅₃ a R₅₄ jsou H, alkoxy, hydroxy a karbonyl.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce II zahrnují následující, kde P_N je vhodná ochranná skupina dusíkového

HOOC

HOOC

EtO₂C

• · · · · • · · · · • · · · · * • · · · ·· ·· ··

MeO

Další výhodné meziprodukty zahrnují následující sloučeniny, kde BOC je terč.-butyloxykarbonyl:

• ·

Obzvláště výhodné meziprodukty zahrnují následující sloučeniny:

BOC

V souladu s konvencemi běžně používanými v oboru, ^z se zde ve strukturálních obecných vzorcích používá pro označení vazby, která je místem připojení skupiny nebo substituentu k jádru nebo páteřní struktuře.

Pokud jsou v chemických strukturách zahrnuty chirální atomy uhlíku, pak pokud není uvedena konkrétní orientace, zahrnuje obecný vzorec obě možné stereoizomerní formy.

Jak je zde používán, výraz alkylová skupina je používán tak, že znamená jednovazný nasycený a/nebo nenasycený zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, skládající se z atomů uhlíku a atomů vodíku, jako je methyl (Me), ethyl (Et), propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terc.butyl, ethenyl, pentenyl, butenyl, propenyl, ethinyl, butinyl, propinyl, pentinyl, hexinyl a podobně, které mohou být nesubstituované (t.j. obsahující pouze atomy uhlíku a atomy vodíku) nebo substituovaný jedním nebo více vhodnými substituenty, jak je definovány dále (například jedním nebo více atomy halogenu, jako je F, Cl, Br nebo I, přičemž výhodné jsou F a Cl) . Výraz nižší alkylová skupina je používán tak, že znamená alkylovou skupinu která má v řetězci 1 až 4 atomy uhlíku.

Výraz cykloalkylová skupina je používán tak, že znamená nearomatický jednovazný monocyklický, bicyklický nebo tricyklický zbytek, obsahující 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 nebo 14 atomů uhlíku v kruhu, přičemž každý z kruhů může být nasycený nebo nenasycený a může být nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo více vhodnými substituenty, jak je definováno dále a ke každému z nich může být kondenzována jedna nebo více heterocykloalkylových skupin, arylových skupin nebo heteroarylových skupin, které samy mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více substituenty. Ilustrativní příklady cykloalkylových skupin zahrnují následující:

• » • 9 • 9 •

• • 99··

Výraz heterocykloalkylová skupina je používán tak, že znamená nearomatický jednovazný monocyklický, bicyklický nebo tricyklický zbytek, který je nasycený nebo nenasycený, obsahující 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 nebo 18 atomů v kruhu, který obsahuje 1, 2, 3, 4 nebo 5 heteroatomů, zvolených ze souboru, zahrnujícího dusík, kyslík a síru, kde zbytek je nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo více vhodnými substituenty, jak je definován dále a ke kterému může být kondenzována jedna nebo více cykloalkylových skupin, arylových skupin nebo heteroarylových skupin, které samy mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více vhodnými substituenty. Ilustrativní příklady heterocykloalkylových skupin zahrnují následuj ící:

Výraz arylová skupina je používán tak, že znamená aromatický jednovazný monocyklický, bicyklický nebo tricyklický zbytek, obsahující 6, 10, 14 nebo 18 atomů

• ·4 ·* »· ·· * « · · » * • « · · · · • **···· • · · · * · «·» *··« ·· ·· uhlíku v kruhu, který může být nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo více vhodnými substituenty, jak je definováno dále a ke kterému může být kondenzována jedna nebo více cykloalkylových skupin, heterocykloalkylových skupin nebo heteroarylových skupin, které samy mohou být nebo více vhodnými arylových skupin nesubstituované nebo substituované jedním substituenty. Ilustrativní příklady zahrnují následující:

Výraz heteroarylová skupina je používán tak, že znamená aromatický jednovazný monocyklický, bicyklický nebo tricyklický zbytek, obsahující 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 nebo 18 atomů v kruhu, v to počítaje 1, 2, 3, 4 nebo 5 heteroatomy zvolené ze souboru, zahrnujícího dusík, kyslík a síru, který může být nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo více vhodnými substituenty jak je definováno dále a ke kterému může být kondenzována jedna nebo více cykloalkylových skupin, heterocykloalkylových skupin nebo arylových skupin, které samy mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více vhodnými substituenty. Ilustrativní příklady heteroarylových skupin zahrnují následující:

• ·· · ·· **» <4* ·»·· ·« * · « · · · • · · ····· • · · · ·*·*·· ·· ·· ···· ··· ··*· *·· ···· «« ··

Výraz heterocyklus je používán tak, že znamená heteroarylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu (přičemž každá z nich, jak je definováno výše, je případně substituovaná).

Výraz acylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -C(O)-R, kde R představuje substituent jak je definován dále.

Výraz thioacylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -C(S)-R, kde R představuje substituent jak je definován dále.

Výraz sulfonylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -SO₂R, kde R představuje substituent jak je definován dále.

Výraz hydroxy skupina je používán tak, že znamená zbytek -OH.

Výraz amino skupina je používán tak, že znamená zbytek -NH₂.

Výraz alkylamino skupina je používán tak, že znamená zbytek -NHR_a, kde R_a představuje alkylovou skupinu.

Výraz dialkylamíno skupina je používán tak, že znamená zbytek -NR_aR_b, kde R_a a R_b představují nezávisle na sobě alkylové skupiny.

Výraz alkoxy skupina je používán tak, že znamená zbytek -OR_a, kde R_a představuje alkylovou skupinu. Příklady alkoxy skupin zahrnují methoxy, ethoxy, propoxy a podobně.

Výraz alkoxykarbonylové skupina je používán tak, že znamená zbytek -C(O)OR_a, kde R_a představuje alkylovou skupinu.

Výraz alkylsulfonylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -SO₂R_a, kde R_a představuje alkylovou skupinu.

Výraz alkylaminokarbonylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -C(O)NHR_a, kde R_a představuje alkylovou skupinu.

Výraz dialkylaminokarbonylová skupina je používán

tak, že znamená zbytek -C(O)NRaRb, kde Ra	a Rb	představují
nezávisle na sobě alkylovou skupinu. Výraz merkapto skupina je používán	tak,	že znamená
zbytek -SH. Výraz alkylthio skupina je používán	tak,	že znamená
zbytek -SRa, kde Ra představuje alkylovou skupinu. Výraz karboxy skupina je používán tak,	že znamená

zbytek -C(O)OH.

• ·

Výraz karbamoylová skupina je používán tak, že znamená zbytek -C(O)NH₂.

Výraz aryloxy skupina je používán tak, že znamená zbytek -OR_C, kde R_c představuje arylovou skupinu.

Výraz heteroaryloxy skupina je používán tak, že znamená zbytek -OR_d, kde R_d představuje heteroarylovou skupinu.

Výraz arylthio skupina je používán tak, že znamená zbytek -SR_C, kde R_c představuje arylovou skupinu.

Výraz heteroarylthio skupina je používán tak, že znamená zbytek -SR_d, kde R_d představuje heteroarylovou skupinu.

Výraz vhodná organická skupina je používán tak, že znamená libovolnou organickou skupinu, o které odborník v oboru může ověřit, například rutinně prováděnými testy, že neovlivňuje nepříznivým způsobem inhibiční aktivitu sloučenin podle vynálezu. Ilustrativní příklady vhodných organických skupin zahrnují neomezujícím způsobem hydroxy skupiny, alkylové skupiny, oxo skupiny, cykloalkylová skupiny, heterocykloalkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, acylové skupiny, sulfonylové skupiny, merkapto skupiny, alkylthio skupiny, alkoxy skupiny, karboxy skupiny, amino skupiny, alkylamino skupiny, dialkylamino skupiny, karbamoylové skupiny, arylthio skupiny, heteroarylthio skupiny a podobně.

Výraz substituent nebo vhodný substituent je používán tak, že znamená libovolný vhodný substituent, který může být uznán nebo zvolen odborníkem v oboru, například na základě rutinně prováděných testů. Ilustrativní příklady vhodných substituentů zahrnují hydroxy skupiny, atomy halogenu, oxo skupiny, alkylové skupiny, acylové skupiny, sulfonylové skupiny, merkapto skupiny, alkylthio skupiny,

alkoxy skupiny, cykloalkylové skupiny, heterocykloalkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, karboxy skupiny, amino skupiny, alkylamino skupiny, dialkylamino skupiny, karbamoylové skupiny, aryloxy skupiny, heteroaryloxy skupiny, arylthio skupiny, heteroarylthio skupiny a podobně.

Výraz případně substituovaný je zamýšlen tak, že výslovně uvádí, že specifikovaná skupina je nesubstituované nebo substituovaná jedním nebo více vhodnými substituenty, pokud nejsou případné substituenty výslovně uvedeny; v takovém případě výraz znamená, že skupina je nesubstituované nebo substituovaná specifikovanými substituenty. Jak je definován výše, různé skupiny mohou být nesubstituované nebo substituované (t.j. jsou případně substituované) pokud zde není výslovně uvedeno jinak (například uvedením, že specifikovaná skupina je nesubstituované).

Výraz prekurzor je používán tak, že znamená sloučeninu, která se přemění za fyziologických podmínek nebo solvolýzou nebo metabolicky na specifikovanou sloučenina, která je farmaceuticky aktivní.

Výraz farmaceuticky aktivní metabolit je používán tak, že znamená farmakologicky aktivní produkt specifikované sloučeniny, produkovaný metabolismem v těle.

Výraz solvát je používán tak, že znamená farmaceuticky přijatelnou solvátovou formu specifikované sloučeniny, která si uchovává biologickou účinnost takové sloučeniny. Příklady solvátů zahrnují sloučeniny podle předloženého vynálezu v kombinaci s vodou, isopropanolem, ethanolem, methanolem, DMSO, ethylacetátem, kyselinou octovou nebo ethanolaminem.

Výraz farmaceuticky přijatelná sůl je používán tak, že znamená sůl, která si uchovává biologickou účinnost • · volných kyselin a bází specifikované sloučeniny a která není

Příklady farmaceuticky sírany, pyrosírany, hydrogensiřičitany, monohydrogenfosforečnany, kaproáty, j antarany, biologicky nebo jinak nežádoucí přijatelných solí zahrnují hydrogensírany, siřičitany, fosforečnany, dihydrogenfosforečnany, metafosforečnany, pyrofosforečnany, chloridy, bromidy, jodidy, octany, propionáty, dekanoáty, kapryláty, akryláty, mravenčany, isobutyráty, heptanoáty, propioláty, šťavelany, malonany, korkany, sebakany, fumarany, maleinany, butin-1,4-dioáty, hexin-1,6-dioáty, benzoáty, chlorbenzoáty, methylbenzoáty, dinitrobenzoáty, hydroxybenzoáty, methoxybenzoáty, ftaláty, sulfonáty, xylensulfonáty, fenylacetáty, fenylpropionáty, fenylbutyráty, citronany, mléčnany, γ-hydroxybutyráty, glykoláty, vínany, methansulfonáty, propansulfonáty, naftalen-l-sulfonáty, naftalen-2-sulfonáty a mandlany.

Jestliže sloučenina podle vynálezu je báze, požadovaná sůl může být připravena libovolným vhodným způsobem, známým ze stavu techniky, v to počítaje zpracování volné báze anorganickou kyselinou jako je kyselina chlorovodíková; kyselina bromovodíková; kyselina sírová; kyselina dusičná; kyselina fosforečná a podobně nebo organickou kyselinou, jako je kyselina octová; kyselina maleinová; kyselina jantarová; kyselina mandlová; kyselina fumarová; kyselina malonová; kyselina hroznová; kyselina šťavelová; kyselina glykolová; kyselina salicylová; pyranosidylová kyselina jako je kyselina glukuronová nebo kyselina galakturonová; alfahydroxy kyselina jako je kyselina citrónová nebo kyselina vinná; aminokyselina jako je kyselina aspartová nebo kyselina glutamová; aromatická kyselina jako je kyselina benzoová nebo kyselina skořicová; sulfonová kyselina jako je

Jestliže sloučenina požadovaná sůl může být kyselina p-toluensulfonová nebo kyselina ethansulfonová a podobně.

podle vynálezu je kyselina, připravena libovolným vhodným způsobem, známým ze stavu techniky, v to počítaje zpracování volné kyseliny anorganickou nebo organickou bází, jako je amin (primární, sekundární nebo terciární); hydroxidem alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy a podobně. Ilustrativní příklady vhodných solí zahrnují organické soli odvozené od aminokyselin jako je glycin a arginin; amonium; primární, sekundární nebo terciární a cyklické aminy, jako je piperidin, morfolin a piperazin; stejně tak jako anorganické soli odvozené od sodíku, vápníku, draslíku, hořčíku, manganu, železa, mědi, zinku, hliníku a lithia.

V případě sloučenin, solí nebo solvátů, které jsou pevnými látkami, je odborníkům zřejmé, že sloučeniny, soli a solváty podle vynálezu mohou existovat v různých krystalických formách, které všechny spadají do rozsahu předloženého vynálezu a specifikovaných obecných vzorců.

Sloučeniny podle vynálezu mohou existovat jako jednoduché stereoizomery, racemáty a/nebo směsi enantiomerů a/nebo diastereomerů.

Všechny takové j ednoduché stereoizomery, racemáty a jejich směsi spadají do rozsahu předmětu předloženého vynálezu. Výhodně, však jsou sloučeniny podle vynálezu používány v opticky čisté formě.

Odborníkům v oboru je obecně zřejmé, že opticky čistá sloučenina je taková sloučenina, která je enantiomericky čistá. Jak je zde používán, výraz opticky čistá je používán tak, že znamená sloučeninu zahrnující alespoň dostatečné množství aktivní látky. Výhodně optické množství jednoduchého enantiomerů, které dává sloučeninu, která je farmakologicky čistá sloučenina předloženého vynálezu, • · • ·

29; -.· obsahuje alespoň 90% jednoduchého izomerů (80% enantiomerický přebytek (e.e. - enantiomeric excess)), výhodněji alespoň 95% (90% e.e.), ještě výhodněji alespoň 97,5% (95% e.e.) a nejvýhodněji alespoň 99% (98% e.e.).

Výhodně ve sloučeninách obecného vzorce I (nebo v libovolném z něho odvozeném obecném vzorci) Ri představuje H nebo F.

Ve sloučeninách obecného vzorce I R₉ výhodně představuje nesubstituovanou nebo substituovanou isoxazolylovou skupinu, u které případné substituenty jsou výhodně jedna nebo dvě methylové skupiny a/nebo atomy halogenu.

Obzvláště výhodná provedení předloženého vynálezu jsou uvedena dále s odvoláním na následující obecný vzorec I-A'':

O R₇ Ry O R₂ Z

Wř/b

H O Rg H R-| j )

Výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují peptidovité sloučeniny (A-l) - (A-8) obecného vzorce I-A'' uvedeného výše, kde R_x představuje H, Z představuje H, R_y představuje H a R₂, R₆, R₇, Z_x a R₉ jsou jako je definováno dále:

(A-l) R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje

CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a

R₉ představuje ^H3^C (A-2) R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje

CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a

R₉ představuje

·· ·♦ ·· » · · · · · • · · 4 · • · 4 · · * • · · 4 · h₃c‘ (A 3) R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, Rg představuje χΎ'·' , R₇ představuje C(CH₃)₃, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ n- ·’ aX představuje ^Η3θ (A-4) R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, Rg představuje představuje C(CH₃)₃, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^H3^C aX η H

Xn

XU (A-5) R₂ představuje r₆ představuje F^z

R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉

-,-N

AX představuje ^H3C (A-6) R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, Rg představuje

V , R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^H3° _n-N

AX η π vX>

_Fx (A-7) R₂ představuje , R₆ představuje

R₇ představuje C(CH₃)₃, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉

-,-N představuje ^H3^C

AX (A-8)

R₂ představuje •p , R₆ představuje

R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉

-,-N.

představuje ^H3^C

AX

• ·· to • «to to • ·· · • · to · ·· to·

Výhodné peptidovité sloučeniny obecného vzorce I-A dále zahrnují sloučeniny (A-9) - (A-13) uvedené dále, kde R_x představuje H, Z představuje H, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃, R_y představuje CH₃ a R₂, Rg, R₇ a R₉ mají význam uvedený dále:

(A-9) R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, R₆ představuje o-n . , . V &Ϊ, R₇ představuje h a R₉ představuje ^Hs^c (A-10) R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, Rg představuje n-N

CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂ a R₉ představuje ^H®c (A-ll) R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, Rg představuje , R₇ představuje xr n-N

Xha R₉ představuje ^Ha^c (A-12)

V·

R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, R₆ představuje αχ ^F , í<7 představuje CH₂CH(CH₃)₂ a R₉ představuje ^Ha^c (A-13) R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, R₆ představuje

Λ ί-Ν.

_R,

-,-N představuje 'Ό'ο' _{a Rg} představuje h₃c'

Další výhodné peptidovité sloučeniny zahrnují následuj ící:

(A-14)

00 0 00 00 00 0000 00 00 0 0 0 0

0 0 00000 0 00 0 000000 0~~0 00 0000

000 0000 000 0000 00 00

(Α-15) (Α-16)

0^νη₂

CO₂CH₂CH₃

Ξ. Η

(Α-17)

ΝΗ₂

(Α-18) ck.nh₂

CO₂CH₂CH₃ (Α-19) °^νη₂

CO₂CH₂CH₃ (Α-20)

»· ·· ♦ · · ♦ • · · · • · · · « · · · ·· ··

(Α-21) (Α-22) (Α-23)

Η

CW^NA ο

'CO₂CH₂CH₃ (Α-24)

(Α-25) (Α-26) ·· 99

9 Β · • 9 Β 9 • 9 9 ·

9 9 9

9 9 9

Η ^0;=/^να ° λ °Ύ

Ν y ^Ν Ν ^^CO₂CH₂CH₃ (Α-27)

(Α-28)

Výhodné sloučeniny ketomethylenového typu (B-l) - (B-4) podle předloženého vynálezu jsou uvedeny dále s odvoláním na následující obecný vzorec I-B'':

o r₂ z o r₇ χ

Rg N

N

H O R₆ H R_x (I-B'') (B-l) /CT

R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, R₆ představuje , R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z představuje H, Z_x

->-N predstavuje CO₂CH₂CH₃ a R_g představuje ^Η3θ η H (B-2) R₂ představuje R₆ představuje

R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z představuje H, Z_x představuje

CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje vA

XX » » 4

F 4 4 «

Β 4 4 4

Β ♦ 4 I

Β 4 4 4 «4 «4 (Β-3) η Η

R₂ představuje γΆ*^, r₆ představuje _Fxr,

K₃C

R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z' a Ζχ spolu vytvářejí , kde karbonylová skupina je v poloze cis vzhledem k vodíku, odpovídajícímu Rx v obecném vzorci I a R9 představuje

Λ>ί_Fxr ^r a r (B-4) R₂ představuje , r₆ představuje

R7 představuje CH(CH₃)₂, Z představuje H, Ζχ představuje o-n

CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje ^H3°

Výhodný sloučeniny depsipeptidového typu (C-l) a (C-2) podle předloženého vynálezu jsou uvedeny dále s odvoláním na následující obecný vzorec I-C'', kde Rx představuje H:

d-c'')

Z představuje H, R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂,

R6 představuje , r_? představuje CH(CH₃)₂, Ζχ _n-N

A^ představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje (C-2) představuje

Z představuje H, R₂ představuje _f r₆

XA ^v > ^r7 představuje CH(CH₃)₂, Ζχ představuje

AX

CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje ^Η3θ'

•	99
··	9 9
•	9
9	9
9	— 9

·· « 9 9 * * • 4 9 · * 9 9 ·9

9 9 9

9999 99 · ··

Další sloučeniny mohou být připraveny s odvoláním na obecný 'vzorec I volbou proměnných z následujících substituentů:

R_y = H nebo CH₃;

Ri - H nebo CH₃;

H

R₂ nebo

// o

//

R₆ = nebo fenylmethyl (t.j. benzyl), kde arylová skupina je případně substituována jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru, zahrnujícího atomy halogenu, methoxy a methyl;

R₇ = 2-methyl-l-propyl, 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, benzyl nebo

n-R. ?'V ϋ- Λ-Λ ₌ nzh SC* qr>

A

IN

Předložený vynález aktivity picornavirální 3C proteázy, který zahrnuje uvedení proteázy do kontaktu s účinným množstvím sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, prekurzoru, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo solvátu. Například může být aktivita picornavirální 3C proteázy

inhibována v savčí tkáni podáváním sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, prekurzoru, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo solvátu. Výhodněji je způsob podle předloženého vynálezu zaměřen na inhibici aktivity rhinovirální proteázy.

Výraz léčení nebo ošetření je používán tak, že znamená alespoň zmírnění chorobného stavu u savce jako je člověk, který je zmírněn inhibici aktivity jedné nebo více picornavirálních 3C proteáz, například u lidských rhinovirů, lidských poliovirů, lidských coxsackie virů, virů encefalomyokarditidy, virů meningitidy a virů hepatitidy a zahrnuje: (a) profylaktické ošetření savce, obzvláště pokud je zjištěno, že savec má predispozici na získání chorobného stavu, ale tento ještě u něho nebyl diagnostikován; (b) inhibici chorobného stavu; a/nebo (c) úlevu, úplnou nebo částečnou, chorobného stavu.

Aktivita sloučenin podle vynálezu jako inhibitorů aktivity picornavirální 3C proteázy může být měřena libovolným vhodným způsobem, známým odborníkům v oboru, v to počítaje in vivo a in vitro testy. Příklad vhodného testu pro měření aktivity je test antivirální aktivity v buněčné kultuře Hl-HeLa, který bude popsán dále.

Podávání sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky metabolitů a přijatelných solvátů může přijatých způsobů podávání, prekurzoru, solí, aktivních být prováděno libovolným z které jsou známy ze stavu techniky. Ilustrativní příklady vhodných způsobů podávání zahrnují podávání cestou orální, nasální, parenterální, topickou, transdermální a rektální. Intranasální podávání je obzvláště výhodné.

Sloučenina podle vynálezu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, prekurzor, aktivní metabolit formě farmaceutické formě, která bude farmaceutické formy nebo lyofilizované nebo solvát mohou být podávány ve kompozice v libovolné farmaceutické odborníkem uznána za vhodnou. Vhodné zahrnují pevné, polotuhé, kapalné přípravky jako jsou tablety, prášky, kapsle, čípky, suspenze, liposomy a aerosoly. Farmaceutické kompozice podle předloženého vynálezu mohou také obsahovat vhodné a nosiče, stejně tak jako činidla, v závislosti na výhodných provedeních se

Například mohou být postupem používajícím excipienty, ředidla, vehikula další farmaceuticky aktivní předpokládaném použití. Ve farmaceutické kompozice podle vynálezu podávají intranasálně ve formě suspenzí.

Přijatelné způsoby přípravy vhodných farmaceutických forem farmaceutických kompozic jsou známy nebo mohou být rutinně určeny odborníkem v oboru farmaceutické přípravky připraveny obvyklé techniky farmaceutické chemie, které zahrnují kroky míšení, granulace a lisování, pokud je připravována tabletová forma nebo míšení, plnění a rozpouštění složek podle potřeby pro získání požadovaných produktů pro orální, parenterální, topické, íntravaginální, intranasální, intrabronchiální, intraokulální, intraaurální a/nebo rektální podávání.

Ve farmaceutických kompozicích mohou být použity pevné nebo kapalné farmaceuticky přijatelné nosiče, ředidla, vehikula nebo excipienty. Ilustrativní pevné nosiče zahrnují škrob, laktózu, dihydrát síranu vápenatého, terra alba, sacharózu, talek, želatinu, pektin, arabskou gumu, stearan hořečnatý a kyselinu stearovou. Ilustrativní kapalné nosiče zahrnují sirupy, podzemnicový olej, olivový olej, slané roztoky a vodu. Nosič nebo ředidlo mohou obsahovat vhodný materiál umožňující prodloužené uvolňování, jako je glyceryl • · ····

monostearát nebo glyceryl distearát, samostatně nebo spolu s voskem. Pokud je použit kapalný nosič, přípravek může být ve formě sirupu, elixíru, emulze, měkké želatinové kapsle, sterilní injektovatelné kapaliny (například roztoku) nebo bezvodé nebo vodné kapalné suspenze.

Dávka farmaceutické kompozice obsahuje alespoň terapeuticky účinné množství aktivní sloučeniny (t.j. sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky, přijatelné soli, prekurzoru, aktivního metabolitů nebo solvátu) a výhodně je tvořena jednou nebo více farmaceutickými dávkovými jednotkami. Zvolená dávka může být podávána savci, například, lidskému pacientovi, který má potřebu léčení inhibicí aktivity picornavirální 3C proteázy, libovolným známým nebo vhodným způsobem podávání dávky, včetně podávání topického, například jako mast nebo krém; orálního; rektálního, například jako čípek; parenterálního injekcí; nebo kontinuálního pomocí intravaginální, intranasální, intrabronchiální, intraaurální nebo intraokulální infúze.

Výraz terapeuticky účinné množství je používán tak, že znamená množství sloučeniny podle vynálezu která, pokud je podávána savci, který má její potřebu, je dostatečné pro léčení chorobných stavů dosažením úlevy inhibicí aktivity jedné nebo více picornavirálních 3C proteáz, jako v případě lidských rhinovirů, lidských poliovirů, lidských coxsackie virů, virů encefalomyokardítidy, menigovirů a virů hepatitidy A. Množství podané sloučeniny podle předloženého vynálezu, které je terapeuticky účinné, se mění v závislosti na faktorech jako je zvolená sloučenina, chorobný stav a jeho závažnost, identita savce, který má potřebu léčení a toto množství může být rutinně stanoveno odborníkem.

• ·

Jako ilustraci je možno uvést, že přípravky pro nasální podávání sloučenin podle vynálezu pro léčení rhinovirálních infekcí mohou být připraveny následujícím způsobem, kde všechna procenta jsou uvedena vzhledem k hmotnosti a suspenze se připravuje v purifikované vodě. Sloučenina obecného vzorce I se mikronizuje pro snížení velikosti částic tak, aby bylo dosaženo D₉₀ < 10 pm. Suspenze se připraví tak, aby obsahovala výslednou koncentraci od přibližně 0,01% do přibližně 2% účinné sloučeniny, výhodně přibližně od 0,2% do 2%. Může být přidáno vhodné konzervační činidlo, zvolené ze souboru, zahrnujícího činidla známá ze stavu techniky, například benzalkonium chlorid/EDTA, ve vhodném rozmezí výsledných koncentrací například přibližně 0,02%/0,01%. Může být přidáno vhodné suspenzní činidlo jako je směs mikrokrystalické celulózy (výsledná koncentrace přibližně 1% - 1,5%, výhodně přibližně 1,2%) a sodná sůl karboxymethylcelulózy (výsledná koncentrace přibližně 0,1% 0,2%, výhodně přibližně 0,13%). Může být přidáno vhodné povrchově aktivní činidlo jako je polysorbát 80 ve výsledné koncentrace přibližně od 0,05% do 0,2%, výhodně přibližně 0,1%. Může být přidáno činidlo pro modifikaci tonicity jako je dextróza pro získání výsledné koncentrace přibližně od 4% do 6%, výhodně přibližně 5%. pH výsledného roztoku se upraví odpovídajícím způsobem do fyziologického rozmezí, například 4-6, použitím netoxické kyseliny a/nebo báze jako je HCI a/nebo NaOH.

Příklady přípravků pro nasální podávání sloučeniny podle vynálezu z Příkladu 17 má následující složení, kde všechna procenta jsou uvedena vzhledem k hmotnosti a suspenze se připraví v purifikované vodě:

Účinná sloučenina	(B-2)	0,2 - 2 %
Konzervační	Benzalkonium chlorid/EDTA	0,02 % /
činidlo		0,01 %
Suspenzní	Mikrokrystalická celulóza/	1,2 % /
činidlo	Na-karboxymethylcelulóza	0,13 %
Povrchově aktivní činidlo	Polysorbát 80	0,1 %
Modifikátor tonicity	Dextróza	5%
Úprava pH	NaOH/HCl	pH 4 - 6

Obecné způsoby syntézy

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce (I) mohou být výhodně připraveny způsoby podle předloženého vynálezu, v to počítaje obecné způsoby popsané dále. V každém z těchto obecných způsobů mají R]_, R2, R3, R5, R6, R7, Rs, R9/· Ry, Z a Ζχ výše uvedený význam a R4 je použito (ve zkráceném označení) jako:

O R₇

kde R7, Rs a R9 mají výše uvedený význam.

• ·

I, použitelném pro syntézu obecného vzorce I-A, se je vhodná ochranná skupina amidotovorné reakci s

V obecném způsobu peptidovitých sloučenin aminokyselina A, kde Ρχ dusíkového atomu, podrobí aminoalkoholem (nebo jeho soli) B pro vytvoření amidu C. Sloučenina C se potom zbaví ochrany pro získání volného aminu (nebo jeho soli) D. Amin D a aminokyselina E, která může obsahovat buď skupinu R₄ nebo ochrannou skupinu dusíkového atomu (P₂) , se podrobí vazbu vytvářející reakce, kterou vznikne sloučenina F. Sloučenina F se oxiduje na meziprodukt G, který se potom přemění na nenasycený produkt H. Pokud byly použity ochranné skupiny na aminokyselině E nebo na libovolné skupině R (R1-R9) a/nebo na R_y a/nebo na Z a/nebo Ζχ, produkt H se zbaví ochrany a/nebo dále modifikuje pro získání ochrany zbaveného nebo modifikovaného H.

G

H deprotected or modified

H • ·

Alternativní způsob přípravy meziproduktu F je následující. Aminokyselina E a aminokyselina (nebo její sůl)

I, kde P3 je vhodná ochranná skupina atomu kyslíku, se podrobí vazbu vytvářející reakci pro vytvoření meziproduktu

J. Molekula J se zbaví ochrany pro získání volné karboxylové kyseliny K, která se následně podrobí amid vyvářející reakci s aminoalkoholem (nebo jeho solí) B pro vytvoření meziproduktu F.

V obecném způsobu II, který je také použitelný pro syntézu peptidovitých sloučenin obecného vzorce I-A, se aminokyselina L, kde Ρχ je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu, přemění na karbonylový derivát M, kde Lv je odštěpitelná skupina. Sloučenina M se podrobí reakci, kdy Lv se nahradí pomocí Rx pro získání derivátu N. Derivát N se potom přemění na nenasycený produkt O. Nenasycená sloučenina O se zbaví ochrany pro získání volného aminu (nebo jeho soli) P nebo modifikuje v Z nebo Ζχ nejprve pro získání O' a potom se zbaví ochrany na P. Meziprodukt P se následně podrobí amid vytvářející reakci s karboxylovou kyselinou K pro získání výsledného produktu H. Jestliže byly ochranné skupiny použity na libovolné skupině R (R1-R9) a/nebo na R_y a/nebo na Z a/nebo Ζχ, produkt H se zbaví ochrany a/nebo se dále modifikuje pro získání ochrany zbaveného nebo modifikovaného H.

• ·

Pí

OH

R₂

L

H

N

Lv r₂

M

- 44 -:

*« ···

♦ · ··

r₂

N

Alternativní způsob přípravy meziproduktu N je následující. Sloučenina M se podrobí reakci, kde se Lv redukuje na chráněný aminoalkohol Q. Meziprodukt Q se následně oxiduje na derivát N.

R₂

Q

V obecném způsobu III, použitelném pro syntézu peptidovitých sloučenin obecného vzorce I-A, se aminokyselina L, kde Pj je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu, přemění na karbonylový derivát M, kde Lv je odštěpitelná skupina. Sloučenina M se zbaví ochrany pro získání volného aminu (nebo jeho soli) R, který se následně podrobí amid vytvářející reakci s karboxylovou kyselinou K pro získání meziproduktu S. Sloučenina S se potom buď přímo přemění na karbonylový meziprodukt G nebo se postupně redukuje nejprve na alkohol F, který se oxiduje na G. Sloučenina G se podrobí reakci pro získání nenasyceného

9 · » »*

999« výsledného produktu H. Pokud ochranné skupiny byly použity na libovolné skupině R (R1-R9) a/nebo na R_y a/nebo na Z a/nebo Zi, produkt H se zbaví ochrany a/nebo dále modifikuje pro získání ochrany zbaveného nebo modifikovaného H.

r₂

_____deprotected or modified

H

F

V obecném způsobu IV, použitelném pro syntézu peptidovitých sloučenin obecného vzorce I-A, se volný amin (nebo jeho sůl) P, připravený z meziproduktu O jak je popsán v obecném způsobu II, přemění na amid T reakcí s aminokyselinou A, kde Pi je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu. Sloučenina T se dále zbaví ochrany na volný amin (nebo jeho sůl) U, který se následně přemění na H působením aminokyselinou E. Pokud ochranné skupiny byly použity na libovolné skupině R (R1-R9) a/nebo na R_y a/nebo na Z a/nebo Zq, produkt H se zbaví ochrany a/nebo dále modifikuje pro získání ochrany zbaveného nebo modifikovaného

O

P

A • · φ φφ·· ► · »φ φφ··

__|_| ______deprotected or modified

Η

V obecném způsobu V, použitelném pro syntézu ketomethylenových sloučenin obecného vzorce I-B, se opticky aktivní lakton AA, kde P4 je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu a R5 a Rs představují H (které mohou být připraveny způsobem popsaným dále a různými způsoby známými z literatury, v to počítaje: (a) Herold a kol., J. Org.

Chem. 1989, 54, 1178; (b) Bradbury a kol., Tetrahedron Lett.

1989, 30, 3845; (c) Bradbury a kol., J. Med. Chem. 1990, 33,

2335; (d) Wuts a kol., J. Org. Chem. 1992, 57, 6696; (e)

Jones a kol., J. Org. Chem. 1993, 58, 2286; (f) Pégorier a kol., Tetrahedron Lett. 1995, 36, 2753; a (g) Dondoni a kol., J. Org. Chem. 1995, 60, 7927) se přemění v proceduře o dvou krocích (bázická hydrolýza a následná oxidace) na karboxylovou kyselinu BB. Tento materiál se neizoluje, ale podrobí se amid vytvářející reakci s aminem (nebo jeho solí) P pro získání výsledného produktu CC. Ochranná skupina P₄, spolu s libovolnými ochrannými skupinami, které byly použity na libovolné skupině R (Ri, R2, R3, R6 a/nebo R7) a/nebo na Z a/nebo na Zi, se následně odstraní a/nebo se produkt dále modifikuje pro získání ochrany zbaveného nebo modifikovaného CC.

·: · :

• 0

0

0 0

0 0

Lakton AA může být připraven v opticky aktivní formě následujícím obecným způsobem VI (viz: Herold a kol., J.

Org. Chem.

1989, 54, 1178; Bradbury a kol.,

Lett. 1989, 30, 3845; a Bradbury a kol., J. Med. Chem. 1990, 33, 2335) . γ,δ-nenasycená karboxylová kyselina DD, která obsahuje R7, se přemění na odpovídající chlorid kyseliny (není znázorněn). Tento chlorid kyseliny se podrobí amidvytvářející reakci s chirálním aminem nebo chirální oxazolidonem pro získání derivátu EE (ve kterém Χχ je chirální amin nebo chirální oxazolidon). Sloučenina EE se následně deprotonuje a výsledný enolát diastereoselektivně alkyluje elektrofilem substituentu R6 pro získání sloučeniny představuje H. Tento materiál se halolaktonizační reakci pro získání halolaktonu kterém R5 a Rs jsou H a hal je Br nebo I. Halolakton GG se následně přemění na azid HH a tento materiál se potom

Tetrahedron se odpovídáj ícím

FF, potom kde R5 podrobí

GG, ve přemění na lakton AA, kde P4 dusíkového atomu.

je vhodná ochranná skupina

AA HH GG γ,δ-nenasycená karboxylová kyselina DD může být připraven následujícím obecným způsobem VII (viz Herold a kol., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178). Aldehyd II, který obsahuje R7, se kopuluje s vinylmagnesiumbromidem pro získání alkoholu JJ. Alkohol JJ se potom přemění na γ,δnenasycenou karboxylovou kyselinu DD v následující proceduře o třech krocích: (i) zpracování diethylmalonátem a katalytickým Ti(OEt)4 při teplotě 160°C po dobu 1 hodiny, (ii) zahřívání při teplotě 190°C po dobu 4 hodin a (iii) hydrolýza ethanolickým KOH při teplotě zpětného toku.

Karboxylová obecným způsobem 1997, 53, 7119) .

kyselina BB může také být připravena Vlil (viz Hoffman a kol., Tetrahedron, Aminokyselina KK, která obsahuje R7 a ve

999 Μ·· • 1·1·

9

9 ·

9 · «9 ·

9 ·

9 které Ρ4 je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu, se přemění na β-ketoester LL. Sloučenina LL se deprotonuje a výsledný aniont se kondenzuje s triflátem MM, který obsahuje R6. Kopulační produkt, získaný tímto způsobem, se zpracovává kyselinou trifluoroctovou pro získání ketoesterů NN a tento materiál se následně hydrolyzuje pro získání karboxylové kyseliny BB. Jestliže bázická hydrolýza vede na epimerizaci, ketoester NN může být transesterifikován (allylalkohol, Ti(Oi-Pr)4) a následně zbaven ochrany za neutrálních podmínek (Pd(PPh3)4, morfolin) pro získání karboxylové kyseliny BB. Triflát MM, může být připraven z odpovídajícího alkoholu zpracováním anhydridem kyseliny trifluormethansulfonové a 2,6-lutidinem.

Lakton AA může být připraven obecným způsobem IX (viz Askin a kol., J. Org. Chem. 1992, 57, 2771; a McWilliams a kol., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11970). Aminokyselina KK, která obsahuje R7 a ve které P4 je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu, se přemění na epoxid 00 (jednoduchý diastereomer) způsobem, který popsali Luly a kol., J. Org. Chem. 1987, 52, 1487. Epoxid 00 se kondenzuje s aniontem odvozeným ze sloučeniny PP, která obsahuje R6 a ve které X2 je chirální pomocné činidlo (obsahující acetonid (1S,2R)-1τ· »· » » · • · · • · a » · < <

aminoindan-2-olu) pro získání kopulačního produktu QQ. Tento materiál se následně cyklizuje za kyselých podmínek pro získání laktonu AA. Sloučenina PP může být připravena z odpovídající karboxylové kyseliny způsobem, který popsali Askin a kol., (není J. Org.

znázorněná)

Chem. 1992,

57, 2771.

Ry

P4x

P₄.

o

KK

Ry 'o

Re x₂ oo

PP

• H»Rg r₇ o

OH R₆

AA QQ

Obecný způsob X, použitelný pro přípravu depsipeptidových sloučenin obecného vzorce I-C, ilustruje způsob přípravy meziproduktu TT. Aminokyselina E a alkohol RR, kde P5 je vhodná ochranná skupina kyslíkového atomu, se podrobí reakci vytvářející esterovou vazbu pro vytvoření meziproduktu SS. Molekula SS se zbaví ochrany pro získání volné karboxylové kyseliny TT, namísto karboxylové kyseliny K způsobů popsaných výše.

která může být v libovolném z použita obecných ^R5N

HO^X Rr

OP_B (P₂)R₉·

Ry

N

H R₈

O.

Rr

OP₅ (P₂)R₉N

H R_g

R ⁰ °,h

OH

RR

SS

TT

4* • 4 ··· ···· ·« • · • ·«·· • · • 4 • · • 4 ·· ·· »·

Specifické syntézy

Následující specifické způsoby mohou být také použity pro přípravu různých sloučenin podle předloženého vynálezu.

Specifický způsob I popisuje přípravu specifického meziproduktu Ol, který může být použit jako meziprodukt O v obecných způsobech popsaných výše. Tak ester Al (připravený jak je popsáno v Chida a kol., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1992, 1064) se hydrolyzuje pro získání kyseliny Bl, která se sama přemění na oxazolidinon Cl. Sloučenina Cl se následně deprotonuje a výsledný enolát se diastereoselektivně alkyluje pro získání' allylového meziproduktu Dl. Tato sloučenina se oxiduje ozonolýzou a výsledný aldehyd (není znázorněn) se podrobí redukční aminační reakci, což vytvoří laktam El. Kyselinou katalyzovaná methanolýza El potom dává alkohol Fl. Teto meziprodukt se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) na výsledný aldehyd (není znázorněn), který se následně podrobí reakci vytvářející olefin pro získání specifického meziproduktu Ol.

• ·

Specifický meziproduktu 02, způsob II popisuje přípravu specifického který může být použit jako meziprodukt O v obecných způsobech popsaných výše. Allylový meziprodukt Dl se podrobí posloupnosti hydroborace a oxidace pro získání primárního alkoholu (není znázorněn). Tato sloučenina se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) a výsledný aldehyd (není znázorněn) se podrobí redukční aminační reakcí, což vytvoří laktam Gl. Kyselinou katalyzovaná methanolýza G1 potom dává alkohol Hl. Tento meziprodukt se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) na výsledný aldehyd

(není znázorněn), olefin pro získání který se následně podrobí reakci specifického meziproduktu 02.

vytvářející

Následující meziprodukty Pl, P2 a P3 mohou být použity ve výše uvedených obecných způsobech namísto meziproduktu O pro obměnu substituentové skupiny v poloze R₂.

P3 • 9

9

9 ·

9 9

9 9

9 9 9

9 9

9

Syntéza meziproduktu PÍ je popsána dále. Meziprodukt Cl (popsaný výše) se deprotonuje a výsledný enolát se zachytí vhodným disulfidem (symetrický nebo smíšený) pro získání sulfidu pl (P je vhodná ochranná skupina kyslíkového atomu). Ochranná skupina kyslíkového atomu se potom odstranění pro získání alkoholu p2. Tento meziprodukt se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) a výsledný aminační aldehyd reakci (není pro znázorněn) se podrobí redukční získání laktamu p3. katalyzovaná methanolýza p3 potom dává alkohol p4. Tento meziprodukt se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) na výsledný aldehyd (také není znázorněn), který se následně podrobí reakci vytvářející olefin pro získání meziproduktu p5. Tato sloučenina může být použit namísto meziproduktu O ve výše uvedených způsobech syntézy; alternativně může být laktamová ochranná skupina odstraněna pro získání meziproduktu Pl.

Kyselinou

p5

p4

elektrofilního kyslíku alkoholu p6. Tento funkcionalizovaným získání etheru P7 atomu). Dusíková výsledný amin podmínkám pro

Pro syntézu meziproduktu P2 se meziprodukt Cl deprotonuje a výsledný enolát se zachytává vhodným zdrojem (například oxaziridin) pro získání meziprodukt se alkyluje vhodně alkylhalogenidem nebo triflátem pro (P je vhodná ochranná skupina dusíkového ochranná skupina se potom odstraní a (není znázorněn) se vystaví cyklizačním získání laktamu p8. Kyselinou katalyzovaná methanolýza p8 potom dává alkohol p9.

oxiduje Swernovou metodou (nebo oxidačních podmínek) na výsledný znázorněn), který se následně podrobí reakci vytvářející olefin pro získání meziproduktu P2.

Tento meziprodukt se za jiných vhodných aldehyd (také není

P2

BoCx

p9

Nyní bude popsána syntéza specifického meziproduktu P3. Meziprodukt Dl (popsaný výše ) se ozonizuje a výsledný aldehyd (není znázorněn) se redukuje na odpovídající alkohol • · (také není znázorněn). Tento meziprodukt se potom chrání pro získání sloučeniny plO (Ρχ je vhodná ochranná skupina kyslíkového atomu). Imidová funkční skupina přítomná na plO se hydrolyzuje na karboxylovou kyselinu pil a tento meziprodukt se kopuluje s vhodně chráněným hydroxyaminovým derivátem pro získání .amidu pl2 (P2 je vhodná ochranná skupina kyslíkového atomu, která je stabilní za podmínek, při nichž je odstraňována Ρχ). Ochranná skupina Ρχ se potom odstraní a výsledný alkohol (pl3) se přemění na vhodnou odštěpitelnou skupinu (halogenid nebo triflát, není znázorněn). Ochranná skupina P2 se potom odstraní a výsledná hydroxamová kyselina se cyklizuje pro získání meziproduktu pl4. Kyselinou katalyzovaná methanolýza pl4 potom dává alkohol pl5. Tento meziprodukt se oxiduje Swernovou metodou (nebo za jiných vhodných oxidačních podmínek) na výsledný aldehyd (není znázorněn), který se následně podrobí reakci vytvářející olefin pro získání meziproduktu P3.

• · · · · ♦ • · · · ♦ • · · · · 9 • 9 9 9 9 • 999 99 99

(Ikuta a kol Nezávisle se ester silyletheru p15 p3

Specifický způsob III popisuje přípravu meziproduktů Ql, Q2 a Q3, které mohou být použity v obecných způsobech popsaných výše. Známá sloučenina II se přemění na molekulu JI známou z literatury modifikací publikované procedury J. Med. Chem. 1987, sv. 30, str. 1995). K1 aminokyseliny chrání pro získání Ether se redukuje pomocí DIBAL (nebo použitím jiných vhodných redukčních podmínek) a výsledný aldehyd (není znázorněn) se podrobí reakci vytvářející olefin s meziproduktem JI, což vytvoří Ml. Silylová deprotekce Ml potom dává alkohol Nl. Tento meziprodukt se vystaví řadě různých hydrogenačních podmínek pro získání meziproduktů Ql, Q2 a Q3. Tyto meziprodukty mohou být

LI.

přeměněny na meziprodukty analogické meziproduktu Ol (viz

• * · ♦ • · · · • · fe · • · · ·

Specifický olefinací.

způsob I uvedený výše) oxidací a následnou

Boc

NH₂

Ph₃P

OH

J1

Q3

Odborníkovi je zřejmé, že různé sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být vytvořeny postupem podle výše uvedených obecných a specifických způsobů stejně tak jako postupy podle stavu techniky, v to počítaje výše uvedené reference, které jsou zde zahrnuty jako reference. Kromě toho může odborník připravit různé sloučeniny podle předloženého vynálezu postupem podle příkladů uvedených dále nebo pomocí rutinních modifikací zde popsaných způsobů syntézy.

Příklady provedení vynálezu

Příklady různých výhodných sloučenin obecného vzorce I jsou uvedeny dále. Struktura sloučenin z následujících příkladů byla potvrzena jednou nebo více z následujících metod: protonová magnetická resonanční spektroskopie, ·· to ·· ·* ·· ♦<· · ·♦ · · f ·· to < to to 9 9 9 9 9 to ·· · tototo··· _·· ·· ···· infračervená spektroskopie, elementární mikroanalýza, hmotová spektrometrie, chromatografie na tenké vrstvě, určování teploty tání a určování teploty varu. Pokud dochází k nesouladu mezi daným strukturálním obecným vzorcem ukázaným pro sloučeninu a jejím uvedeným chemickým jménem, má platnost strukturální obecný vzorec.

Protonová magnetická resonanční (^H NMR) spektra byla určována pomocí spektrometru Varian UNITYplus 300 pracujícím s polem o frekvenci 300 megahertz (MHz). Chemické posuny jsou uvedeny v částech na milion (ppm, δ) vzhledem k vnitřnímu tetramethylsilanovému standardu. Alternativně byla 1h NMR spektra vztahována k signálům reziduálního protického rozpouštědla následujícím způsobem: CHCI3 = 7,26 ppm; DMSO =

2,49 ppm; CgHDs = 7,15 ppm. Multiplicity píků jsou označeny následujícím způsobem: s = singlet; d = dublet; dd = dublet dubletů; t = triplet; q = kvartet; br = široká rezonance; a m = multiplet. Kopulační konstanty jsou uvedeny v Hertz. Infračervená absorpční (IR) spektra byla získána použitím FTIR spektrometru Perkin-Elmer řady 1600. Elementární mikroanalýzy provedla Atlantic Microlab lne. (Norcross, GA) a byly získány výsledky uvedených prvků v rozmezí ±0,4% teoretických hodnot. Mžiková sloupcová chromatografie byla prováděna na Silica gel 60 (Merck Art 9385). Analytická chromatografie na tenké vrstvě (TLC) byla prováděna na listech Silica 60 F254 (Merck Art 5719). Teploty tání byly určovány na přístroji Mel-Temp jsou nekorigované. Všechny reakce byly prováděny v uzavřených lahvích za malého přetlaku argonu, pokud není uvedeno jinak. Všechna komerční reagenty byly použity tak, jak byly získány od výrobce s následujícími výjimkami: tetrahydrofuran (THF) byl destilován z benzofenonketylu sodného před použitím;

·· fefe • · · 1 • · · 1 • · · · ι • fe · ι • fe fefe dichlormethan (CH2CI2) byl destilován z hydridu vápenatého před použitím; bezvodý chlorid lithný byl připraven zahříváním při teplotě 110°C za vakua přes noc.

Jsou použity následující zkratky: Et2O označuje diethylether; DMF označuje Ν,Λί-dimethylformamid; DMSO označuje dimethylsulfoxid; a MTBE označuje terč.-butylmethylether. Další zkratky zahrnují: CH3OH (methanol), EtOH (ethylenglykol Ph (fenyl), Tr (ethanol), EtOAc (ethylacetát), DME dimethylether), Ac (acetyl), Me (methyl), (trifenylmethyl), Cbz (benzyloxykarbonyl), Boc (terč.butoxykarbonyl), TFA (trifluoroctová kyselina), DIEA (N,Ndiisopropylethylamin), DBU (1,8-diazabicyklo[5,4.0]undec-7en) , HOBt (hydrát 1-hydroxybenzotriazolu), PyBOP (hexafluorfosfát benzotriazol-l-yl-oxy-tris-pyrrolidinofosfonia), HATU (hexafluorfosfát O-(7-azabenzotriazol-l-yl)Ν,Ν,Ν',W'-tetramethyluronia), EDC (hydrochlorid l—(3— dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbarbodiimidu), DCC (dicyklohexylkarbodiimid), DDQ (2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4benzochinon), DMAP (4-dimethylaminopyridin), Gin (glutamin), Leu (leucin), Phe (fenylalanin), Val (valin), His (histidin), 1-naft (1-naftylalanin), 2-naft (2naftylalanin), a-terč.-butyl-Gly (terč.-butyl glycin), (S)pyrrol-Ala (kyselina (2S, 3'S)-2-amino-3-(2'-oxopyrrolidin3'-yl)-propionová) a (S)-piper-Ala (kyselina (2S,3'S)-2amino-3-(2'-oxo-piperidin-3'-yl)-propionová). Kromě toho L představuje přirozeně se vyskytující aminokyseliny.

Zjednodušený nomenklaturní systém používající zkratky aminokyselin je používán pro označení některých meziproduktů a výsledných produktů. Při pojmenovávání sloučenin zkratka aminokyseliny uvedená kurzívou označuje modifikaci na Ckonci toho zbytku, pro který platí následující: (1) estery ·· 99

9 9

9 9

9 9

9 9

99

kyseliny akrylové jsou označovány jako E (trans) propenoáty; (2) substituované 3-methylene-dihydrofuran-2-ony jsou označovány jako E (trans) 2-(a-vinyl-γbutyrolaktony); a (3) 5-vinylisoxazoly jsou označovány jako E (trans) propenisoxazoly. Kromě toho, terminologie

ΑΑΐΨ [COCH2]-AA2 označuje, sekvenci dvě aminokyseliny amidovou vazbou, jsou že pro libovolnou peptidovou (AAi a AA2), obvykle vázané nahrazeny ketomethylenovou dipeptidovou isosterovou skupinou. Terminologie AA1-NCH3AA2 označuje, že pro libovolnou peptidovou sekvenci amidová vazba, která obvykle spojuje dvě aminokyseliny (AAi a AA2) je nahrazena N-methylamidovou vazbou. Terminologie ΑΑχ-ΟAA2 označuje, že pro libovolnou peptidovou sekvenci amidová vazba, která obvykle spojuje dvě aminokyseliny (AAi a AA2) je nahrazena esterovou vazbou.

Příklady provedení podle předloženého vynálezu jsou uvedeny dále.

Příklad 1 - Příprava srovnávací sloučeniny #1: 5-(3'-(Cbz-LLeu-L-Phe-L-Gln)-E-propen)-isoxazol

(Srovnávací sloučenina

Příprava meziproduktu Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe

Cbz-L-(Tr-Gln) (0,26 g, 0,50 mmol, 1 ekvivalentů) byl přidán do roztoku acetylchloridu (0,25 ml, 3,52 mmol, 7,0 ekvivalentů) v CH3OH (5 ml) a míchání pokračovalo při

Φ ··

Φ· ♦ φ • φ • ♦ • · ·· • · · · • · · φ φ φ φ φ φ · · · ·· ·Φ teplotě 23°C po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (100 ml) a promýván vodou (100 ml), nasycený NaHCO3 (100 ml) a solankou (100 ml). Organická vrstva byla sušena Na2SO4 a byla koncentrována. Reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (20% EtOAc v hexanech) pro získání Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe (0,23 g, 84% výtěžek) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 139-140°C; IR (cm^-1) 1742, 1207; 1h

NMR (DMSO-dg) δ 1,16 (t, IH, J = 7,0), 1,77 (m, IH) , 1,97 (m, IH), 3,61 (s, 3H), 4,99 (m, IH), 5,03 (s, 2H), 7,02-7,55 (m, 20H), 7,69 (d, IH, J = 7,7), 8,59 (s, IH) ; Anal. (C33H32N2O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu Cbz-L-(Tr-glutaminol)

Chlorid lithný (0,24 g, 5,66 mmol, 2,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe (1,50 g, 2,79 mmol, 1 ekvivalentů) ve směsi 2:1 THF: EtOH (30 ml) a směs byla míchána při teplotě 23°C do rozpuštění všech pevných látek (10 minut). Borhydrid sodný (0,21 g, 5,55 mmol, 2,0 ekvivalentů) byl přidán a reakční směs byla míchána přes noc při teplotě 23°C. Rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku, reziduum bylo vyjmuto vodou (50 ml) a pH bylo upraveno na hodnotu 2-3 pomocí 10% HCI. Produkt byl extrahován EtOAc (50 ml) a organická vrstva byla promývána vodou (50 ml) a solankou (50 ml) před sušením nad MgSO4. Organická vrstva byla koncentrována a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 20->50% EtOAc v benzenu) pro získání Cbz-L-(Tr-glutaminolu) (1,02 g, 72% výtěžek) ve formě bílé sklovité látky: Teplota tání = 66-70°C; IR (cm^-1) 3318, 1699, 1510, 1240; !h NMR (DMS0-d6) δ 1,40 (m, IH) , 1,72 (m, IH), 2,26 (m, 2H) , 3,173,50 (m, 3H), 4,64 (t, IH, J= 5,0), 5,00 (s, 2H), 7,00-7,40 (m, 20H) , 6,96 (d, IH, J = 8,5), 8,54 (s, IH) ; Anal.

(C32H32N2O4) C, Η, N.

• ···· • ···· » 9 9 4 ‘ · · I » 9 9 4 * 9 9 I

99

Příprava meziproduktu L-(Tr-glutaminolu)

Suspenze Cbz-L-(Tr-glutaminolu) (1,93 g, 3,79 mmol) v

CH3OH (25 ml) a Pd/C (10% vodíkovou atmosférou (balón) filtrována přes vrstvu Celitu. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku pro získání L-(Tr-glutaminolu) ve formě bílé amorfní látky (1,38 g, 98% výtěžek): Teplota tání = 191193°C; IR (cm^-1) 3255 (br) , 1642, 1527; 1h NMR (DMSO-CÍ6) δ

1,29 (m, IH), 1,53 (m, IH), 2,29 (m, 2H), 3,08 (m, IH), 3,18 (m, 2H), 3,38 (s, br, 2H) , 4,43 (s, br, IH) , 7,14-7,28 (m, 15H) , 8,62 (s, IH) .

0,19 g) byla míchána pod po 4 hodiny, potom byla

Příprava meziproduktu Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolu)

Karbonyldiimidazol (0,17 g, 1,05 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,41 g, 1,0 mmol, 0,95 ekvivalentů) v THF (10 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po jednu hodinu. Potom byl přidán L-(Trglutaminol) (0,39 g, 1,05 mmol, 1 ekvivalentů) a výsledný roztok byl míchán přes noc. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 2->4% CH3OH v CHCI3) pro získání Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolu) (0,47 g, 62% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: Teplota tání = 9295°C; IR (cm¹) 3302, 1657, 1520, 1238; !h NMR (DMSO-c/6) δ 0,79 (t, 6H, J = 7,0), 1,30 (m, 2H) , 1,44 (m, 2H) , 1,75 (m, · * · · * ·

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 · · · • 9 9·· 9999 99 99

1H), 2,22 (m, 2H), 2,82 (m, 1H) , 2,97 (m, 1H), 3,14 (m, 1H) ,

3,25 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,65 (t, 1H, J= 5,0), 4,96 (d, 1H, J= 13,0), 5,02 (d, 1H, J = 13,0), 7,07-7,33 (m, 25H), 7,42 (d, 1H, J= 8,0), 7,66 (d, 1H, J = 8,5), 7,86 (d, 1H, J = 8,0), 8,52 (s, 1H) ; Anal.

(C47H52N4O6Ό,5H2O) C, Η, N.

Příprava meziproduktu Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H o-Jodxybenzoová kyselina (0,63 g, 2,25 mmol, 3,0 ekvivalentů) byla přidána do roztoku Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Trglutaminolu) (0,58 g, 0,75 mmol, 1 ekvivalentů) v DMSO (7,5 ml) při teplotě 23°C. Po míchání po dobu 2 hodin byl DMSO odstraněn za sníženého tlaku. Reziduum bylo dvakrát zředěno pomocí CH2CI2 a rozpouštědlo odpařeno pro odstranění veškerého zbývajícího DMSO. Reziduum bylo zředěno pomocí EtOAc (30 ml) a filtrováno a filtrát byl promýván roztokem 5% Na2S2O3/5% NaHCO3 (30 ml), vodou (30 ml) a solankou (30 ml) a potom sušen nad Na2SO4. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku pro získání Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H (0,53 g, 92% výtěžek) ve formě bílé sklovité látky, která byla okamžitě použita bez dalšího čištění: NMR (DMSO-cřg)

0,79 (m, 6H) , .1,00-1,98 (m, 5H) , 2,27 (m, 2H) , 2,84 (m,

1H), 3,02 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 4,58 (m, 1H) , 4,99 (s, 2H) , 7,14-7,32 (m, 25H), 7,39 (d, 1H, J= 8,1), 7,97 (d, 1H, J= 8,5), 8,38 (d, 1H, J= 8,0), 8,60 (s, 1H), 9,20 (s, 1H).

Příprava meziproduktu 5-{3'-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-Epropen}-isoxazolu

Roztok KN((CH3)3S1)2 (0,95 ml 0,5 M roztoku v THF,

0,477 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do suspenze ·· • 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0

00 isoxazol-5-ylmethyl-trifenylfosfoniumbromidu (0,222 g, 0,525 mmol, 1,1 ekvivalentů) v THF (20 ml) při teplotě 0°C a reakčni směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 30 minut. Byl přidán roztok Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H (0,366 g, 0,477 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (10 ml) a reakčni směs byla potom míchána přes noc při teplotě 23°C. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo zředěno pomocí EtOAc (30 ml), promýváno vodou (30 ml) a potom sušeno nad MgSOz}. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou silikagelovou chromatografií (gradientově vymývání, 0-»l% CH3OH v CHCI3) pro získání 5{3'-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propen}-isoxazolu (0,307 g, 70% výtěžek) ve formě amorfní pevné látky: IR (cm“l)

3423,	1678, 1568, 1265,	1043,	, 711; 3-H NMR (DMSO-	cř6) δ 0,77-
0,81	(m,	6H) , 1,21-1,36	(m,	2H) , 1,40-1,55	(m,	1H) , 1,60-
1,80	(m,	2H) , 2,34-2,45	(m,	2H) , 2,82-2,87	(m,	1H) , 2,91-
3,04	(m,	1H) , 3,95-4,00	(m,	1H), 4,41-4,50	(m,	1H), 4,53-
4,60	(m,	1H), 4,99 (q, 2H, J	= 6,0), 6,19 (d,	1H,	J = 15,0),
6,36	(dd,	1H, J = 15,0,	6,0	), 6,46 (s, 1H),	7,	15-7,33 (m,
20H) ,	7,42 (d, 1H, J = 9,	, 0) ,	7,56-7,63 (m, 5H)	, 7	,96 (d, 1H,
J = 9	,0) ,	8,08 (d, 1H, J	= 9,	0), 8,51 (s, 1H),	8,	58 (s, 1H);

HRMS vypočteno pro C51H53N5O6+CS 964,3050 (M+Cs), nalezeno 964,3018.

Příprava produktu 5-(3(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-propen)isoxazolu

Trifluoroctová kyselina (1 ml) byla přidána do roztoku 5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propen}-isoxazolu (0,214 g, 0,257 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a reakčni směs byla míchána při teplotě 23°C přes noc. Rozpouštědlo bylo • ···· odstraněno in vacuo a reziduum bylo čištěno mžikovou silikagelovou chromatografií (gradientově vymývání, 0->l% CH3OH v CHCI3) pro získání 5-(3'-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-Epropen)-isoxazolu ve formě bílé pevné látky (0,054 g, 36% výtěžek): l-H NMR (DMSO-d6) δ 0,77-0,83 (m, 6H) , 1,26-1,46

(m,	2H), 1,47-1,62	(m,	1H), 1,69-1,	79 (m, 2H), 2,04-2,29	(m,
2H) ,	2,83-2,88 (m,	1H)	, 2,97-3,10	(m, 1H), 3,99-4,12	(m,
1H) ,	4,37-4,43 (m,	1H) ,	4,48-4,57 (	:m, 1H), 5,01 (q, 2H,	J =
6,0)	, 6,20 (d, 1H,	J =	15,0), 6,36	(dd, 1H, J = 15,0, 6	,0) ,
6,45	(d, 1H, J =	3,0)	, 6,75 (s,	1H), 7,14-7,29 (m,	6H) ,
7,31	-7,40 (m, 5H),	7, 45	(d, 1H, J	= 9,0), 8,04 (d, 1H,	J =
9,0)	, 8,07 (d, 1H,	J =	9,0), 8,51	(d, 1H, J = 3,0) ; A:	nal.

(C32H39N5O6) C, Η, N.

Příklad 2 - Příprava sloučeniny A-l: Ethyl-3-((5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-propenoát

(A-l)

44 44 • 4 · » 4 • · · · ·

I »4 4 · 4 • · 4 4

H 44 «·

Příprava meziproduktu Boc-L-(Tr-Gln)-N (OMe)Me

Isobutyl chlormravenčan (4,77 ml, 36,8 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku Boc-L-(Tr-Gln)-OH (18,7 g, 36,7 mmol, 1 ekvivalentů) a 4-methylmorfolinu (8,08 ml, 73,5 mmol, 2,0 ekvivalentů) v CH2CI2 (250 ml) při teplotě 0°C. Reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 20 minut, potom byl přidán hydrochlorid N,Odimethylhydroxyaminu (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekvivalentů). Výsledný roztok byl míchán při teplotě 0°C po dobu 20 minut a při teplotě 23°C po dobu 2 hodin a potom byl rozdělen mezi vodu (150 ml) a CH2CI2 (2 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány. Čištění chromatografií (gradientově rezidua mžikovou sloupcovou vymývání, 4 0—>2 0% hexany v

EtOAc;

dalo Boc-L-(Tr-Gln)N(OMe)Me (16,1 g, 82% výtěžek) ve formě bílé pěny: IR (cm“l) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; 1h NMR (CDCI3) δ 1,42 (s, 9H) , 1,63-1,77 (m, 1H) , 2,06-2,17 (m, 1H) , 2,29-2,43 (m, 2H) ,

3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, br, 1H), 5,38-5,41 (m,

1H), 7,20-7,31 (m, 15H); Anal. (C31H37N3O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu Boc-L-(Tr-Gln)-H

Diisobutylaluminumhydrid (50,5 ml 1,5 M roztoku v toluenu, 75,8 mmol, 2,5 ekvivalentů) byl přidán do roztoku Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me (16,1 g, 30,3 mmol, 1 ekvivalentů) v THF při teplotě -78°C a reakční směs byla míchána při teplotě -78°C po dobu 4 hodin. Postupně byly přidány ethanol (4 ml) a 1,0 M HCI (10 ml) a směs byla zahřáta na teplotu 23°C. Výsledná suspenze byla zředěna Et2O (150 ml) a byla promývána 1,0 M HCI (3 x 100 ml), polonasyceným NaHCO3 (100 ml) a vodou (100 ml). Organická vrstva byla sušena MgSO4, • · * 9 t · • · filtrována a koncentrována pro získání surového Boc-L-(TrGln)-H ( 13,8 g, 97% výtěžek) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 114-116°C; IR (cm^-1) 3313, 1697, 1494; 1h NMR (CDC1₃) δ 1,44 (s, 9H), 1, 65-1,75 (m, IH) , 2,17-2,23 (m,

IH), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, br, IH), 5,38-5,40 (m, IH),

7,11 (s, IH), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, IH).

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu

Bis(trimethylsilyl)amid sodný (22,9 ml 1,0 M roztoku v THF, 22,9 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku triethylfosfonoacetátu (5,59 g, 22,9 mmol, 1,0 ekvivalentů) v THF (200 ml) při teplotě -78°C a výsledný roztok byl míchán po dobu 20 minut při této teplotě. Surový Boc-L-(TrGln) -H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (50 ml) byl přidán kanylou a reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin při teplotě -78°C, zahřáta na teplotu 0°C po dobu 10 minut a potom rozdělena mezi 0,5 M HCI (150 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (40% EtOAc v hexanech) dalo ethyl3-[Boc-L-(Tr-Gln)]-E-propenoát (10,9 g, 88% výtěžek) ve formě bílé pěny: IR (cm^-1) 3321, 1710; !h NMR (CDCI3) δ 1,27 (t, 3H, J= 7,2), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m, IH), 1,80-1,96 (m, IH) , 2,35 (t, 2H, J= 7,0), 4,18 (q, 2H, J= 7,2), 4,29 (s, br, IH) , 4,82-4,84 (m, IH) , 5,88 (dd, IH, J = 15,7,

1,6), 6,79 (dd, IH, J= 15,7, 5,3), 6,92 (s, IH), 7,19-7,34 (m, 15H); Anal. (C33H38N2O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln) )-Epropenoátu • ·· ·· · · • · • · · • · • ·· ·· · · • · • 9 • · • · · • · · • · · · • · · »· ·*

Roztok HCl v 1,4-dioxanu (4,0 M, 15 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (3,26 g, 6,01 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (15 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 2 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku pro získání ethyl-3-(H2N-L(Tr-Gln))-E-propenoátu«HCl. Tento materiál byl rozpuštěn v CH2CI2 (60 ml) a postupně byly přidány Boc-L-Phe-OH (1,59 g, 6,01 mmol, 1,0 ekvivalentů), HOBt (1,22 g, 9,02 mmol, 1,5 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (1,98 ml, 18,03 mmol, 3 ekvivalentů) a EDC (1,73 g, 9,02 mmol, 1,5 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C přes noc a potom byla rozdělena mezi vodu (100 ml) a CH2CI2 (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4, koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (40% EtOAc v hexanu) pro získání ethyl-3(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (3,55 g, 85%) ve formě bílé pěny: IR (cm“¹) 3306, 1706, 1661; !h NMR (CDCI3) δ 1,29 (t, 3H, J= 7,2), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,76 (m, 1H), 1,87-1,99 (m, 1H), 2,25-2,27 (m, 2H) , 2,94-3,01 (m, 2H), 4,14-4,26 (m,

3H), 4,48-4,53 (m, 1H) , 4,95 (s, br, 1H) , 5,64 (d, 1H, J =

15,8), 6,29 (d, 1H, J = 8,1), 6,64 (dd, 1H, J= 15,8, 5,4),

6,80 (s, br, 1H), 7,14-7,32 (m, 20H); Anal. (C42H47N3O6) C,

Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))E-propenoátu

Roztok HCl v 1,4-dioxanu (4,0 M, 15 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (6,40 g, 9,28 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (15 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 2 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (100 ml) a postupně byly přidány Boc-L-Leu-OH (2,58 g, 11,1 mmol, 1,2 ekvivalentů), HOBt (1,88 g, 13,9 mmol, 1,5 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (3,06 ml, 27,8 mmol, 3 ekvivalentů) a EDC (2,67 g, 13,92 mmol, 1,5 ekvivalentů). Reakčni směs byla míchána při teplotě 23°C přes noc a potom byla rozdělena mezi vodu (100 ml) a CH2CI2 (2 x 100 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (2% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-(BocL-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (6,46 g, 87% výtěžek) ve formě bílé pěny: IR (cm^-1) 3284, 1651, 1515; A NMR

(CDC	13)	δ	0,86	(d,	3H, J =	6,0), 0,89 (d,	3H,	J = 6,0) , 1,29
(t,	3H,	J	= 7,	2) ,	1,34 (s,	9H), 1,38-1,60	(m,	3H), 1,62-1,89
(m,	IH)	, 1	.,95-	1, 97	(m, IH)	, 2,28-2,30 (m,	2H)	, 3,06-3,08 (m,
2H) ,	3,	92-	3, 94	(m,	IH), 4,	17 (q, 2H, J = 7	,2)	, 4,48-4,51 (m,
2H) ,	4,	67	(m,	ΪΗ)	, 5, 66	(d, IH, J = 15,	9),	6,51-6,57 (m,
2H) ,	6,	69	(dd,	IH,	J = 15,	6, 5,1), 7,10-7,	33	(m, 21H); Anal.

(C48H58N4O7*0,33H2O) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 3 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (0,216 g, 0,27 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (3 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 2 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (15 ml), ochlazeno na teplotu 0°C a postupně byly přidány triethylamin (0,112 ml, 0,81 mmol, 3,0 ekvivalentů) a 5-methylisoxazol-3-karbonylchlorid (0,058 g, 0,40 mmol, • · · • · · ·

1,5 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 30 minut a potom byla rozdělena mezi vodu (50 ml) a CH2CI2 (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (2% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(TrGln) )-E-propenoátu (0,199 g, 91% výtěžek) ve formě bílé

pěny: IR	(cm'	Ί) 3286, 1650, 1541; 1	h nm:	R (CDCI3) δ	0, 8	6 (d
3H, J = 5	,4),	0,89 (d, 3H, J = 5,7 )	, 1,	28 (t, 3H,	J =	7,2)
1,43-1,59	(m	, 2H), 1,67-1,75 (m,	IH) ,	1,95-1,99	(m,	2H)
2,28 (t,	2H,	J = 7,2 ) , 2,41 (s,	3H) ,	2,97-3,04	(m,	IH)
3,06-3,13	(m,	IH), 4,17 (q, 2H, J =	7,2)	, 4,31-4,33	(m,	IH)
4,48-4,52	(m,	, 2H), 5,72 (d, IH, J	= 1	5,9), 6,19	(s,	IH)
6,41 (d,	IH,	J = 7,5), 6,59 (d, IH,	J =	8,1), 6,71	(dd	, IH
J = 15,3,	6,	0) , 6, 95 (d, IH, J = 6	,6) ,	7,09-7,21	(m,	21H)

Anal. (C48H53N5O7-H2O) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Leu-L-Phe-L-Gin)-E-propenoátu

Triisopropylsilan (0,077 ml, 0,376 mmol, 1,8 ekvivalentů) a trifluoroctová kyselina (3 ml) byly postupně přidány do roztoku ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (0,185 g, 0,21 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (3 ml) při teplotě 23°C, což vytvořilo jasně žlutý roztok. Reakční směs byla míchána po dobu 30 minut při teplotě 23°C a během této doby se stala bezbarvou. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku a výsledná bílá pevná látka byla rozetřena s Et2O (10 ml), filtrována a sušena na vzduchu pro získání ethyl-3-((5'-methylisoxazol3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-propenoátu (0,87 g, 81%

• · · ·

vytezek) ve formě bíle pevné látky: Teplota tání = 223

225°C; IR (cm“l) 3298, 1662, 1544, 1457, 1278; 3-H NMR (DMSO-

cř6)	δ 0,81 (d, 3H, J =	6,0 ),
(t,	3H, J = 6,9), 1,38-1	,42 (m,
(t,	2H, J = 7,2), 2,46 (	s, 3H),
(m,	IH) , 4,11 (q, 2H, J	= 7,2),
IH,	J = 15,6), 6,56 (s,	IH), 6,
6,76	(s, br, IH), 7,19 (	m, 6H) ,
(d,	IH, J = 7,8), 8,58 1	(d, IH,

C, Η, N.

0,85 (d, 3H, J = 6,3), 1,23

IH), 1,48-1,77 (m, 4H), 2,04 2,78-2,86 (m, IH), 2,93-3,00 4,36-4,54 (m, 3H), 5,63 (d, 68 (dd, IH, J = 15, 9, 5,4) , 8,09 (d, IH, J = 8,1), 8,14 J = 7,5); Anal. (C29H39N5O7)

Příklad 3 - Příprava sloučeniny A-2: ethyl-3-((isoxazol-5'karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-propenoát

co₂ch₂ch₃

(A-2)

Příprava meziproduktu ethyl-3-((isoxazol-5'-karbonyl)-L-LeuL-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-(Boc-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu a isoxazol-5-karbonylchloridu použitím výše popsané procedury (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(TrGln) ) -E-propenoátu: IR (cm 3-) 3282, 1643, 1530; 3.p nmr (CDCI3) δ 0,87 (t, 6H, J = 6,6), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,49-1, 64 (m, 3H) , 1, 69-1,80 (m, IH) , 1, 90-1, 96 (m, IH) ,

2,30 (t, 2H, J= 7,2), 2,92-2,96 (m, IH), 3,02-3,09 (m, IH) ,

4,17 (q, 2H, J= 7,2), 4,42-4,48 (m, 3H) , 5,69 (d, IH, J =

15,3), 6,65 (s, br, IH), 6,66 (dd, IH, J = 15,9, 5,4), 6,76• *

Β· ΒΒ • · « · · Β • · · · W

Β Β Β Β Β Β Β Β Β Β Β • ΒΒΒ · · ΒΒ

6,79 (m, 2Η), 7,00-7,31 (m, 22Η) , 8,24 (s, ÍH); Anal.

(C47H51N5O7·0,75 H2O) C, Η, Ν.

Příprava ethyl-3- ((isoxazol-5' -karbonyl) -L-Leu-L-Phe-L-GIn) E-propenoátu

Sloučenina z názvu byla připravena z ethyl-3((isoxazol-5'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu použitím procedury analogické proceduře popsané výše (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-propenoátu: Teplota tání = 217-220°C; IR (cm¹) 3302, 1655, 1541; NMR (DMSO-d6) δ

0,81 (d, 3H, J= 6,0), 0,86 (d, 3H, J= 6,0), 1,21 (t, 3H, J = 7,2), 1,42-1,75 (m, 5H) , 2,04 (t, 2H, J = 7,2), 2,78-2,87 (m, ÍH), 2,94-3,01 (m, ÍH) , 4,11 (q, 2H, J = 7,2), 4,37 (m, ÍH) , 4,41-4,52 (m, 2H) , 5,64 (d, ÍH, J = 15,6), 6,68 (dd, ÍH, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, br, ÍH) , 7,12-7,19 (m, 7H) , 8,02 (d, ÍH, J = 8,1), 8,20 (d, ÍH, J= 8,1), 8,74 (d, ÍH, J = 1,8), 8,94 (d, ÍH, J= 7,8); Anal. (C28H37N5O7) C, Η, N. Příklad 4 - Příprava sloučeniny A-3: ethyl-3-((5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-MePhe)-L-Gln)-E-propenoát

(A-3)

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))E-propenoátu

Ethyl-3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-propenoát»HC1 (připraven jak je popsáno v Příkladu 2 uvedeném výše, 1,37 g, 3,10 mmol) • to • · • to • to

9· ·· byl rozpuštěn v DMF (10 ml) při teplotě 23°C. Byl přidán diisopropylethylamin (1,08 ml, 6,20 mmol), následovaný BocL-(4-Me-Phe)-OH (0,87 g 3,10 mmol). Reakční směs byla ochlazena na teplotu 0°C. Bylo přidáno HATU (1,18 g, 3,10 mmol) a reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí. DMF byl odstraněn in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno v EtOAc (30 ml) a organická fáze byla promývána postupně 10% HCl roztokem (25 ml), nasyceným NaHCO3 roztokem (25 ml), H2O (25 ml) a solankou (25 ml). Rozpouštědlo bylo vysušeno (MgSO4) a filtrováno a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 0—>0,75% CH3OH v CHCI3) pro získání ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(TrGln) )-E-propenoátu (1,48 g, 68% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1713, 1655, 1491, 1175; ^H NMR (DMSO-d6) δ 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,30 (s, 9H), 1,62-1,66 (m, 2H), 2,23 (s, 3H) , 2,32 (m, 2H) , 2,72 (m, 1H) , 2,84 (m,

1H), 4,07-4,09 (m, 1H), 4,10 (q, 2H, J= 7,0), 4,38 (m, lH), 5,64 (d, 1H, J = 15,5), 6,72 (dd, 1H, J = 15,5, 5,5), 6,88 (d, 1H, J = 8,0), 7,04 (d, 2H, J = 7,7), 7,10 (d, 2H, J = Ί,Ί), 7,14-7,28 (m, 15H) , 8,02 (d, 1H, J = 8,0), 8,53 (s,

1H); Anal. (C43H49N3O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu

Ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoát (1,45 g, 2,06 mmol) byl rozpuštěn v 1,4-dioxanu (27 ml) a byl přidán roztok HCl v 1,4-dioxanu (4,0 M, 14 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením a reziduum bylo vyjmuto v EtOAc (50 ml). Organická fáze byla promývána nasyceným NaHCO3 roztokem (50 ml) a potom solankou (50 ml) , sušena (MgSOzj) a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku pro získání

1,23 g bělavé amorfní pevné látky. Tento materiál byl kopulován s Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-OH použitím procedury popsané pro syntézu ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu a uvedené výše pro získání ethyl-3-(Boc-L-a(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (49% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1655, 1507,

1248, 1171; ΤΗ NMR (DMSO-d6) δ 0,81	(s,	9H), 1,21 (t, 3H, J
= 7,0), 1,37 (s, 9H), 1,52-1,70 (m,	2H) ,	2,22 (s, 3H), 2,26-
2,28 (m, 2H) , 2,73-2,91 (m, 2H) ,	3,86	(d, IH, J = 9,6),
4,05-4,14 (m, 2H) , 4,31-4,36 (m,	IH) ,	4,47-4,55 (m, IH),
5,54 (d, IH, J= 15,4), 6,37 (d, IH,	J =	9,6), 6,65 (dd, IH,
J = 15,8, 5,5), 7,01 (d, 2H, J =	8,1)	, 7,07 (d, 2H, J =
7,7), 7,11-7,32 (m, 15H), 8,03 (d,	IH,	J = 8,1), 8,10 (d,

IH, J = 7,7), 8,49 (s, IH); Anal. (C49H6ON4O7·0,4H2O) C, H,

N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu

Ethyl-3-(Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(TrGln))-E-propenoát byl zbaven ochrany použitím procedury popsané pro deprotekcí ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(TrGln) ) -E-propenoátu a uvedené výše a výsledný amin (0,22 g, 0,30 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (3 ml). Byl přidán pyridin (0,025 ml, 0,32 mmol) a reakční směs byla ochlazena na teplotu 0°C. Byl přidán 5-methylísoxazol-3-karbonylchlorid (0,046 g, 0,32 mmol). Reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí a byla míchána po jednu hodinu.

• ·

Rozpouštědlo bylo odstraměno in vacuo a reziduum bylo podrobeno mžikové sloupcové chromatografií (gradientově vymývání, 0->l% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-((5'methylisoxazol-3' -karbonyl) -L-α- (terč. -butyl-Gly) -L- (4-MePhe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoátu (0,19 g, 77% výtěžek) ve formě

bílé amorfní látky:	IR (	cm 1)	1651, 1518; !h NMR (DMSO-CÍ6) δ
0,88 (s, 9H), 1,20	(t, 3H, J	= 7,0), 1,55-1,67 (m, 2H), 2,14
(s, 3H), 2,18-2,28	(m, 2H) , 2	,45 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 1H),
2,86-2,93 (m, 1H),	4,07-4,14	(m, 2H) , 4,46 (d, 1H, J = 9,6),
4,50-4,55 (m, lH) ,	5,54	(d,	1H, J = 15,8), 6,59 (s, 1H) ,
6, 65 (dd, 1H, J =	15,8,	5,5,	15,8), 6,95 (d, 2H, J = 8,1) ,

7,05 (d, 2H, 8,1), 7,13-7,28 (m, 15H), 7,60 (d, 1H, J =

9,6), 8,13 (d, 1H, J= 8,1), 8,41 (d, 1H, J= 8,1), 8,51 (s, 1H); Anal. (C49H55N5O7) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-propenoátu

Ethyl-3-( (5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terc.butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoát (0,17 g, 0,20 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (4 ml) při teplotě 23°C. Byla přidána kyselina trifluoroctová (0,4 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě okolí po šest hodin. Rozpouštědla byla odstraněn in vacuo a reziduum bylo podrobeno mžikové sloupcové chromatografií (gradientově vymývání, 0->2% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-Epropenoátu (0,085 g, 73% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1661, 1541, 1206; !h NMR (DMSO-c/6) δ 0,88 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J= 7,0), 1,60-1,73 (m, 2H), 2,01-2,06 • · · (m, 2H), 2,14 (s, 3H) , 2,50 (s, 3H) , 2,70-2,77 (m, 1H) ,

2,86-2,93 (m, 1H) , 4,07-4,14 (m, 2H) , 4,34-4,37 (m, 1H) ,

4,45 (d, 1H, J= 9, 6), 4,50-4,55 (m, 1H) , 5,57 (d, 1H, J =

15,8), 6,60 (s, 1H) , 6,66 (dd, 1H, J = 15,8, 5,5), 6,75 (s, br, 1H), 6,96 (d, 2H, J= 8,1), 7,06 (d, 2H, J= 7,7), 7,17 (s, br, 1H) , 7,65 (d, 1H, J = 9,6), 8,14 (d, 1H, J = 8,1),

8,40 (d, 1H, J = 7,7); Anal. (C30H4iN5O7*0,5TFA*0,5H2O) C, H, N.

Příklad 5

Příprava sloučeniny A-4: ethyl-3-((5'methylisoxazol-3' -karbonyl) -L-ct

Phe)-L-Gln)-E-propenoát

-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-

Rozpouštědlo bylo podrobeno mžikové (A-4)

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))E-propenoátu

Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,41 g, 5,0 mmol) byl rozpuštěn v THF (50 ml). Byl přidán ethyl-3-(H2N-L-(Tr-Gln))-Epropenoát*HC1 (připraven jak je popsán v Příkladu 2 uvedeném výše, 1,0 g, 5,0 mmol), následován Et3N (0,70 ml, 5,0 mmol). Byl přidán karbonyldiimidazol (0,81 g, 5,0 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 20 hodin.

odstraněno in vacuo a reziduum bylo sloupcové chromatografií (gradientově vymývání, 0—»1% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-(Boc-L(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (1,13 g, 32% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^_7) 1712, 1666, 1510, 1169;

• ·

1h NMR (DMSO-d6) δ 1,20 (t,	3H,	J = 7,0), 1,29	(s,	9H) ,
1,61-1,70	(m, 2H), 2,27-2,34	(m,	2H), 2,74-2,78	(m,	1H) ,
2,86-2,90	(m, 1H), 4,06-4,13	(m,	3H), 4,36-4,40	(m,	1H) ,
5,58 (d,	1H, J = 15,6), 6,71	(dd,	1H, J = 15,6, 5,	5),	6, 98
(d, 1H,	J = 8,1), 7,03-7,09	(m,	2H), 7,14-7,28 (m,	17H) ,
8,06 (d,	1H, J = 8,1), 8,53 (s,	1H)	; LRMS (M+Na) 730	•
Příprava	meziproduktu ethyl-3	-(Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-

(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu

Ethyl-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoát byl zbaven ochrany a kopulován s Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-OH použitím procedur popsaných výše pro přípravu ethyl-3-(BocL-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu pro získání ethyl-3-(Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)L-(Tr-Gln))-E-propenoátu (54% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1720, 1651, 1506, 1168; ^H NMR (DMSO-c?6) δ

0,80 (s, 9H), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,36 (s, 9H), 1,53-1,67 (m, 2H), 2,23-2,28 (m, 2H), 2,79-2,94 (m, 2H), 3,85 (d, 1H, J= 9,9), 4,09 (q, 2H, J= 7,0), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,534,55 (m, 1H), 5,46 (d, 1H, J = 15,8), 6,36 (d, 1H, J = 9,2), 6,64 (dd, 1H, J= 15,8, 5,5), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,13-7,28 (m, 17H), 8,08 (d, 1H, J= 8,1), 8,14 (d, 1H, J= 8,1), 8,49 (s, 1H); Anal. (C48H57N4O7F) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu

Ethyl-3-(Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(TrGln))-E-propenoát byl zbaven ochrany a kopulován s 5methylisoxazol-3-karbonylchloridem použitím procedur popsaných výše pro přípravu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu pro získání ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu (74% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1659, 1535, 1510; NMR (DMSO-d6) δ 0,88 (s, 9H) ,

1,20	(t,	3H,	J = 7,4), 1,52-1,67 (m,	2H), 2,23-2,28 (m, 2H),
2,45	(s,	3H) ,	2,75-2,82 (m, IH) , 2,89-2,96 (m, IH), 4,09 (q,
2H,	J =	7,0)	, 4,32-4,36 (m, IH) ,	4,45 (d, IH, J = 9,6),
4,50·	-4,55	(m,	IH) , 5,44 (d, IH, J	= 15,6), 6,58 (s, IH) ,
6, 63	(dd,	ÍH,	J = 15,6, 5,5, 15,6),	6,93-6,99 (m, 2H), 7,13-
7,28	(m,	17H)	, 7, 64 (d, IH, J = 9,6)	, 8,16 (d, IH, J = 8,5),
8,46	(d,	!H,	J = 8,1), 8,51 (s, IH)	; Anal. (C48H52N5O7F) C,

Η, N.

Příprava ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-a(terc.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-propenoátu

Ethyl-3-[(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terc.butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)]-E-propenoát byl zbaven ochrany použitím procedury analogické proceduře popsané výše pro přípravu ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-a(terč.-butyl-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-propenoátu pro získání ethyl-3-((5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terč.butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-propenoátu (80% výtěžek) ve formě bílé amorfní látky: IR (cm^-1) 1653, 1543, 1223; !h NMR (DMSO-c?6) δ 0,88 (s, 9H) , 1,21 (t, 3H, J= 7,0), 1,59-1,75 (m, 2H), 2,01-2,06 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,75-2,82 (m, IH) , 2,89-2,96 (m, IH), 4,09 (q, 2H, J = 7,0), 4,33-4,36 (m, IH),

0

4,44 (d, ÍH, J= 9,6), 4,50-4,58 (m, ÍH) , 5,47 (d, ÍH, J =

15,8), 6,59 (s, ÍH), 6,64 (dd, ÍH, J= 15,8, 5,5), 6,75 (s, br, ÍH), 6,94-7,00 (m, 2H), 7,16 (s, br, ÍH), 7,18-7,23 (m, 2H), 7,69 (d, ÍH, J = 9,6), 8,16 (d, ÍH, J= 8,1), 8,44 (d, ÍH, J= 8,1); Anal. (C29H38N5O7F) C, Η, N.

Příklad 6 - Příprava sloučeniny A-5: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S) -pyrrolAla)}-E-propenoát

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (4S)-4(2'-karboxyethyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové

Hydroxid sodný (27 ml4,0 M roztoku v H2O, 108 mmol, 3,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku terč.-butyl esteru kyseliny (4S) -4-(2-methoxykarbonylethyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové (připraven jak je popsán v Chida a kol., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1992, 1064) (10,5 g, 36,5 mmol, 1 ekvivalentů) v CH3OH (150 ml) a výsledná kalná reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 3,5 hodin. Směs byla koncentrována za sníženého tlaku na objem přibližně 30 ml a potom byla rozdělena mezi 0,5 M HCI (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4 a byly gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo sušeno za vakua pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (4S)-4-(2'~ karboxyethyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové (10,0 g, 100% surový výtěžek). Tento materiál byl použit bez dalšího čištění: NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ 1,49 (s), 1,57 (s),

1,60 (s), 1,84-2, 05 (m) , 2,39-2,41 (m) , 3,71-3,74 (m) , 3,914,05 (m).

Příprava meziproduktu (4S,4'' S)-4-{3'-(4'’-benzyl-2''-oxooxazolidin-3' '-yl)-3'-oxopropyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové terč.-butyl ester kyseliny

Triethylamin (8,87 ml, 63,6 mmol, 3,0 ekvivalentů) a pivaloylchlorid (2,61 ml, 21,2 mmol, 1,0 ekvivalentů) byly postupně přidány do roztoku terč.-butyl esteru kyseliny (4Sj-4-(2'-karboxyethyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (5,80 g, 21,2 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (450 ml) při teplotě 0°C. Kalná reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 3,5 hodin, potom postupně byly přidány chlorid lithný (0,988 g, 23,3 mmol, 1,1 ekvivalentů) a (S)(-)-4-benzyl-2-oxazolidinon (3,57 g, 20,1 mmol, 0,95 ekvivalentů) . Po zahřátí na teplotu 23°C a míchání po dobu 19 hodin byla reakční směs rozdělena mezi 0,5 M HC1 (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly promýván polonasyceným Na2CO3 (150 ml), sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (30% EtOAc v hexanech) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (4S, 4''S)-4-{3'-(4''-benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3' 'yl) - 3' -oxopropyl}— 2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové (7,17 g, 83%) ve formě bezbarvého oleje: IR (cm“l) 2978, 1783,

1694; 1-H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ 1,49 (s) , 1,59 (s),

1,63 (s), 2,01-2,10 (m), 2,76 (dd, J = 13,5, 9,8), 2,82-3,13 (m), 3,30-3,41 (m), 3,76-3,82 (m), 3,90 (s, br), 3,97 (dd, J

= 9,0, 5,6), 4,10-4,19 (m) , 4,63-4,71 (m) , 7,22-7,36 (m) ;

Anal. (C23H32N2O6) C, Η, N.

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (2'S,4S,4'' S)-4-{2'-(4''-benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3'’karbonyl)-pent-4'-enyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové

Roztok terč.-butyl esteru kyseliny (4S,4''S)-4-{3' (4'’-benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3''-yl)-3'-oxopropyl}-2,2dimethyloxazolidin-3-karboxylové (7,17 g, 16,6 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (50 ml) byl přidán do roztoku bis(trimethylsilyl)amidu sodného (16,6 ml 1,0 M roztoku v THF, 16,6 mmol, 1,0 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (150 ml) při teplotě -78°C. Reakční směs byla míchána po dobu 20 minut při teplotě -78°C a potom byl přidán allyljodid (4,55 ml, 49,8 mmol, 3,0 ekvivalentů). Po míchání po další 3 hodiny při teplotě -78°C byla reakční směs udržována při teplotě -45°C po dobu 2 hodin a potom byla rozdělena mezi 2:1 směs polonasyceného NH4CI a 5% Na2S2C>3 (300 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 200 ml) . Spojené organické vrstvy byly promývány H2O (200 ml) , sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (15% EtOAc v hexanech) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (2' S,4S,4''S)-4-{2'-(4''-benzyl-2''-oxo-oxazolidin3' ' -karbonyl)-pent-4'-enyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3-

karboxylové (4,29 g, 55%)	ve	formě bezbarvého oleje: IR	(cm
1) 2978, 1780, 1695; :H	NMR	(CDCI3, směs rotamerů) δ	1,45
(s), 1,49 (s), 1,68-1,80	(m)	, 2,13-2,47 (m), 2,49-2,67	(m) ,
3,32 (dd, J = 13,4, 3,	1) ,	3, 69-3, 97 (m) , 4,11-4,21	(m),

• · fe fe * · • fefe fefe fefe « fefe fe • fefe · fe fefe · • · · · • fe fefe

4,66-4,74 (m) , 5,06-5,13 (m) , 5,74-5,88 (m) , 7,20-7,36 (m) i

Anal. (C26^H36N2C>6) C, Η, N.

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (1S,3S){3-(1'-(2'',4''-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1hydroxymethylpropyl}-karbamové

Ozon byl probubláván roztokem terč.-butyl esteru kyseliny (2' S, 4S, 4''S)-4-(2'-(4''-benzyl-2’’-oxo-oxazolidin3''-karbonyl)-pent-4'-enyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (4,29 g, 9,08 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (200 ml) a CH3OH (0,735 ml, 18,1 mmol, 2,0 ekvivalentů) při teplotě -78°C dokud přetrvávala modrá barva. Reakční směs byla potom proplachována argonem, dokud se nestala bezbarvou. Byl přidán methylsulfid (6,67 ml, 90,8 mmol, 10 ekvivalentů), směs byla míchána při teplotě -78°C po dobu 3,5 hodin a byla udržována při teplotě 0°C po další 1 hodinu. Po rozdělení reakční směsi mezi H2O (200 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 200 ml) byly spojené organické vrstvy sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo okamžitě použito bez dalšího čištění.

Výše uvedené reziduum bylo rozpuštěno v 2:1 směsi THF a EtOH (240 ml) při teplotě 23°C a postupně byly přidány hydrochlorid 2,4-dimethoxybenzylaminu (7,40 g, 36,3 mmol, 4,0 ekvivalentů), octan sodný (2,98 g, 36,2 mmol, 4,0 ekvivalentů) a kyanoborhydrid sodný (1,14 g, 18,1 mmol, 2,0 ekvivalentů). Výsledná suspenze byla míchána po dobu 18 hodin při teplotě 23°C a potom byla rozdělena mezi 0,5 M HCI (400 ml) a EtOAc (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promývány polonasyceným NaHCO3 (300 ml), sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány za sníženého tlaku. Reziduum bylo ponecháno • to • » • toto · toto ·· ·· · · ·· * · « • to · · ·

-· ·· to · · · • · «to ···· • toto ···· ··· ···· ·* ·· procházet krátkou silikagelovou kolonou (vymývání pomocí 50% EtOAc v hexanech) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (3'S,4S)-4-{1' -(2'' , 4' '-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin3'-ylmethyl}-2,2-dimethyl-oxazolidin-3-karboxylové, kontaminované (S)-(-)-4-benzyl-2-oxazolidinonem.

Tento materiál byl rozpuštěn v CH3OH (100 ml) a bylo přidáno TsOH»H2O (0,345 g, 1,81 mmol, 0,20 ekvivalentů). Reakční směs byla zahřívána na teplotu 50°C a byla udržována při této teplotě po dobu 2,5 hodin. Po ochlazení na teplotu 23°C byla reakční směs koncentrována za sníženého tlaku na objem přibližně 20 ml a byla rozdělena mezi polonasycený NaHCO3 (150 ml) a 9:1 směs CH2CI2 a CH3OH (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány za sníženého tlaku. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (3% CH3OH v CH2CI2) poskytlo terč.-butyl ester kyseliny(1S,3'S)-{2-(1'-(2'',4''dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-S'-yl)-1-

hydroxymethylethyl}-karbamové	(1,62 g, 44%)	ve	formě	pěny:
IR (cm-1) 3328, 1669; ^-H NMR	(CDCI3) δ 1,44	(s,	9H) ,	1,50-
1,75 (m, 2H) , 1,90-2,00 (m,	1H) , 2,17-2,27	(m,	1H) ,	2,52-
2,62 (m, 1H), 3,14-3,24 (m,	2H) , 3,51-3,65	(m,	3H) ,	3,70-
3,78 (m, 1H), 3,80 (s, 6H), 4	, 35 (d, 1H, J =	14,3	), 4,	48 (d,
1H, J = 14,3), 5,51-5,54 (m,	1H), 6,42-6,46	(m,	2H) ,	7,09-

7,12 (m, 1H); Anal. (C21H32N2O6) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala]) -E-propenoátu

DMSO (0,270 ml, 3,80 mmol, 3 ekvivalentů byl přidán po kapkách do roztoku oxalylchloridu (0,166 ml, 1,90 mmol, 1,5 ekvivalentů) v CH2CI2 (14 ml), ochlazeného na teplotu -78°C.

·· ·· • · 9 9

9 9 9

9 9 9 • ·* 9 9

99

Reakční směs byla míchána 20 minut, potom byl přidán kanylou roztok terč.-butyl esteru kyseliny (IS, 3'S)-{2-(1'- (2'' , 4''dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1hydroxymethylethyl}-karbamové (0,518 g, 1,27 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (13 ml) po straně reakční nádoby. Po míchání 20 minut byl přidán po kapkách triethylamin (1,06 ml, 7,60 mmol, 6 ekvivalentů) a reakční směs byla míchána po dobu 1,5 hodin. Byla přidána kyselina octová (0,479 ml, 8,37 mmol, 6,6 ekvivalentů) a reakční směs byla zahřáta na teplotu 0°C po dobu 5 minut, potom byla zředěna MTBE (200 ml) a promývána vodou, nasyceným NaHCC>3 a solankou (25 ml každá). Organická fáze byla sušena nad Na2SO4 a koncentrována pro získání surového aldehydu ve formě pěny (0,516 g, kvant.), která byla používána bez dalšího čištění.

Bis(trimethylsilyl)amid sodný (1,23 ml 1,0 M roztoku v THF, 1,23 mmol, 1 ekvivalentů) byl přidán do roztoku triethylfosfonoacetátu (0,244 ml, 1,23 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (15 ml) při teplotě -78°C a výsledný roztok byl míchán po dobu 20 minut při této teplotě. Surový aldehyd (připraven výše, 0,500 g, 1,23 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (13 ml) byl přidán kanylou po straně reakční nádoby a reakční směs byla míchána po dobu 45 minut při teplotě -78°C, zahřáta na teplotu 0°C po dobu 7 minut a rozdělena mezi 0,5 M HCI (20 ml) a MTBE (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (60% EtOAc v hexanech) dala ethyl3-{Boc-L-({N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-

propenoát (0,356 g, 61%)	ve formě bílé pěny:	Rf = 0,43	(60%
EtOAc v hexanech); IR	(cm1) 3307, 1708,	1678; !h	NMR
(CDCI3) δ 1,28 (t, 3H, J	= 7,2), 1,43 (s, 9H)	, 1,52-1,70	(m,
2H) , 1, 98-2,09 (m, 1H) ,	2,21-2,34 (m, 1H),	2,48-2,59	(m,

«4

IH), 3,16-3,24 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 4,18 (q, 2H, J= 7,2), 4,27-4,40 (m, IH), 4,41 (s, 2H), 5,40 (d, IH, J = 8,1), 5,95 (dd, IH, J = 15,6, 1,6), 6,41-6,48 (m, 2H) , 6,86 (dd, IH, J = 15,6, 5,3), 7,08-7,13 (m, IH) ; Anal. (C25H36N2O7·0,25H2O)

C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát

Tento materiál byl připraven z ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu a Boc-L-(4-FPhe)-OH použitím procedury podobné proceduře, která byla popsána pro přípravu ethyl-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G2n))E-propenoátu (Příklad 4) uvedeného výše: Rf = 0,34 (60%

EtOAc v hexanech) ; IR (cm^-1) 3258, 1705, 1666; 3-H NMR (CDCI3) δ 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,51-1,66 (m,

2H), 1,78-1,90 (m, IH), 2,06-2,23 (m, 2H), 2,99 (dd, IH, J =

13,7, 6,2), 3,11 (dd, IH, J= 13,7, 5,3), 3,17-3,23 (m, 2H),

3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H) , 4,18 (q, 2H, J= 7,2), 4,35 (s,

2H), 4,38-4,51 (m, 2H) , 5,29-5,37 (m, IH) , 5,76 (d, IH, J =

15, 8), 6, 43-6, 47 (m, 2H) , 6,72 (dd, IH, J = 15,8, 5,3),

6,83-6,91 (m, 2H) , 7,09-7,17 (m, 3H) , 7,92 (br, IH) ; Anal. (C34H44FN3O8) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala] }-E-propenoát

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{Boc-L-(4-FPhe) -L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala) }-Epropenoátu a Boc-L-Val-OH použitím procedury, podobné proceduře popsané výše pro přípravu ethyl-3-(Boc-L-Phe-L(Tr-Gln))-E-propenoátu (Příklad 2): Rf = 0,24 (60% EtOAc v • ·» ·· «

4 ·· • »44· • ♦ · · * • · · · ϊ

44·· ··· ···· • · ¹ ·· ··

hexanech); IR (cm“	Ί)	3284	, 1713, 1678	br,	1643; lH
(CDCI3) δ 0,91 (d,	3H,	J =	6,8), 0,97 (d,	3H,	J = 6,8) ,
(t, 3H, J = 7,2), 1	,45	(s,	9H), 1,50-1,62	(m,	2H), 1,66-
(m, IH), 1,90-2,02	(m,	IH) ,	2,08-2,21 (m,	2H) ,	2,94 (dd,

J = 13,5, 5,8), 3,17-3,27 (m, 3Η) , 3,80 (s, 3Η) , 3,82 (s,

3Η), 3, 97-4,05 (m, 1Η) , 4,17 (q, 2Η, J= 7,2), 4,27 (d, IH,

J= 14,3), 4,29-4,38 (m, IH), 4,40 (d, IH, J= 14,3), 4,864,93 (m, IH), 5,10 (d, IH, J= 8,7), 5,76 (dd, IH, J = 15,6,

1,2), 6,45-6,52 (m, 2H), 6,70 (dd, IH, J= 15,6, 5,4), 6,796,88 (m, 3H), 7,12-7,22 (m, 3H) , 8,30 (d, IH, J = 5,9);

Anal. (C39H53FN4O9) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)pyrrol-Ala)}-E-propenoát

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{Boc-L-Val-L(4-F-Phe)-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala)}-Epropenoátu a isoxazol-5-karbonylchloridu použitím výše popsané procedury (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-( (5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-Epropenoátu: Rf = 0,36 (5% CH3OH v CH2CI2); IR (cm^-1) 3284,

1717, 1650; A	NMR	(CDCI3) δ 0,97 (d, 3H, J= 6,8),	1,01	(d,
3H, J =	6,8) ,	1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,64	(m,	2H) ,
1,72-1,84	(m,	ÍH) ,	1,95-2,05 (m, IH) , 2,11-2,33	(m,	2H) ,
2,48 (s,	3H) ,	2,98	(dd, IH, J = 13,7, 5, 6) , 3,16-	-3,24	(m,
3H), 3,80	(s,	3H) ,	3,81 (s, 3H), 4,17 (q, 2H, J = 7	,2) ,	4,23
(d, IH,	J =	14,3)	, 4,31-4,42 (m, IH) , 4,40 (d,	!H,	J =

14.3) , 4,44-4,50 (m, IH), 4,88-4,96 (m, IH), 5,79 (dd, IH, J = 15,6, 1,4), 6, 43-6, 49 (m, 3H) , 6,71 (dd, IH, J = 15,6,

5.3) , 6, 80-6,88 (m, 2H) , 6,94 (d, IH, J = 9,3), 7,11-7,17

(m, 3H), 7,29 (d, 1H, J= 8,7), 8,33 (d, 1H, J = 6,2); Anal. (C39H48FN5O9O, 5H2O) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Val-L-(4-F-Phe)-L-( (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu

Suspenze ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-LVal-L-(4-F-Phe)-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}E-propenoátu (0,263 g, 0,351 mmol, 1 ekvivalentů), vody (2 kapky) a DDQ (0,104 g, 0,458 mmol, 1,3 ekvivalentů) byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu 9 hodin a potom ponechána ochladit se na teplotu okolí během 8 hodin. Reakčni směs byla zředěna CH2CI2 (200 ml) a promývána 2:1 směsí nasyceného NaHCO3 a 1 N NaOH (20 ml) . Organická fáze byla sušena nad MgSO4 a odpařena. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 2—>3% CH3OH v CH2CI2) dala ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-ValL-(4-F-Phe)-L-( (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát (0,117 g, 56%) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 219-220°C; Rf = 0,23 (5% CH3OH v CH2CI2); IR (cm¹) 3401 br, 3295, 1655 br; ¹H NMR (CDCI3) δ 0,94 (d, 3H, J = 6,8), 0,97 (d, 3H, J =

6,5), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,54-1, 65 (m, 1H) , 1,72-1,91 (m, 2H), 2,07-2,26 (m, 2H), 2,28-2,39 (m, 1H), 2,49 (d, 3H, J= 0,9), 3,01 (dd, 1H, J = 13,8, 6,1), 3,12 (dd, 1H, J =

13,8, 6,4), 3,26-3,38 (m, 2H), 4,18 (q, 2H, J= 7,2), 4,34 (dd, 1H, J = 8,7, 7,2), 4,43-4,54 (m, 1H) , 4,90 (dt, 1H, J = 9,0, 6,2), 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,6), 6,00 (s, 1H), 6,42 (q, 1H, J = 0,9), 6,72 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,86-6,94 (m, 2H), 7,01 (d, 1H, J= 9,0), 7,11-7,18 (m, 2H), 7,21 (d, 1H, J = 8,7), 7,76 (d, 1H, J = 7,2); Anal. (C30H38FN5O7) C,

Η, N.

.4

Příklad 7 - Příprava sloučeniny A-6: ethyl-3-[(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-Gln]-Epropenoátu

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}E-propenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-(Boc-L-(TrGln))-E-propenoátu a Boc-L-(4-F)-Phe-OH použitím procedury, podobné proceduře popsané výše (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G_Zn) )-E-propenoátu: IR (cm^-1) 3328,

1707, 1506, 1168; !h NMR (CDCI3) δ 1,29 (t, 3H, J = 7,2),

1,37	(s, 9H), 1,66-	1,78	(m,	IH), 1,88-1,98	(m, IH), 2,32 (t,
2H, J	= 6,6), 2,85-	2,92	(m,	IH), 2,97-3,04	(m, IH), 4,18 (q,
2H, J	= 7,2), 4,52	(m,	IH) ,	4,96 (m, IH),	5,60 (d, IH, J =
Í5,6) ,	6,56 (d, IH,	J =	8,1	), 6,66 (dd, IH	, J = 15,6, 5,1),
6, 80	(s, br, IH),	6, 92	-6,98 (m, 2H) , 7,	08-7,12 (m, 2H),

7,17-7,23 (m, 6H), 7,24-7,33 (m, 10H); Anal. (C42H45FN3O6)

C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-(Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L- (TrGln) }-E-propenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{Boc-L-(4-F)Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu a Boc-L-Val-OH způsobem popsaným výše (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-{Boc-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu: IR (cm^-1) 3319, 1657, 1511,

1172; !h NMR (CDCI3) δ 0,78 (d, 3H, J= 6,9), 0,87 (d, 3H, J

= 6,	9), 1,29 (t, 3H, J	= 7,	2), 1,37 (s, 9H),	1,69-1,79 (m,
1H) ,	1,93-2,06 (m, 2H),	2,33	(t, 2H, J = 7,2),	2,97-3,04 (m,
1H) ,	3,73-3,77 (m, 1H),	4,18	(q, 2H, J = 7,2),	4,42-4,54 (m,
2H) ,	4,80 (d, 1H, J =	6,9) ,	5,61 (dd, 1H, J	= 15,6, 1,5),
6,44	(d, 1H, J = 7,8) ,	6, 69	(dd, 1H, J = 15,	9, 5,4), 6,71

(s, br, 1H), 6, 92-6, 98 (m, 2H) , 7,07-7,13 (m, 2H), 7,18-7,31 (m, 16H), 8,02 (s, 1H); Anal. (C47H55FN4O7) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{Boc-L-Val-L(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln) }-E-propenoátu a 5-methylisoxazol-3karbonylchloridu způsobem popsaným výše (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu: IR (cm~l) 3319, 1657, 1511,

1172; !h NMR (CDCI3) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,9), 0,89 (d, 3H, J = 6,9), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,95-2,06

(m,	1H), 2,08-2	,17	(m,	1H), 2,34	(t, 2H, J = 7,2	), 2,44 (s,
3H) ,	2,87-2,94	(m,	1H) ,	3,01-3,08	(m, 1H), 4,18	(q, 2H, J =
7,2)	, 4,48-4,56	(m,	2H)	, 5,68 (dd	, 1H, J = 15,6,	1,8), 6,23
(s,	1H) , 6,39	(d,	1H,	J = 7,8),	6,70 (dd, 1H,	J = 15,9,

5,4), 6,84-6, 90 (m, 3H) , 7,04-7,08 (m, 4H) , 7,17-7,30 (m,

16H); Anal. (C47H50N5O7) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Val-L-(4-F)-Phe-L-Gln}-E-propenoátu

Ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F)Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoát byl zbaven ochrany použitím výše popsané procedury (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-{(5' - 92

methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-propenoátu: IR (cm^-1) 3284, 1652, 1542; !h NMR (DMSO-d6) δ 0,76 (d, 3H,

J = 6,9), 0,79 (d, 3H, J = 6,9), 1,20 (t, 3H, J = 7,2),

1,57-1,76 (m, 2H), 1,96-2,06 (3H), 2,46 (s, 3H) , 2,75-2,83 (m, 1H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (q, 2H, J= 7,2), 4,13-4,25 (m, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 4,49-4,56 (m, 1H) , 5,53 (d, 1H, J = 15,6), 6,57 (s, 1H) , 6,66 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,75 (s, br, 1H), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,17-7,24 (m, 3H), 8,15 (d, 1H, J = 7,8), 8,24 (d, 1H, J = 8,7), 8,32 (d, 1H, J = 8,1);

Anal. (C28H36N5O7) C, Η, N.

Příklad 8 - Příprava sloučeniny A-7: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-FPhe) -L-((S) -pyrrol-Ala)}-E-propenoát

Příprava meziproduktu Boc-L-(4-F-Phe)-Obn

DCC (0,765 g, 3,71 mmol, 1,05 ekvivalentů), benzylalkohol (0,347 ml, 3,35 mmol, 0,95 ekvivalentů) a DMAP (0,022 g, 0,18 mmol, 0,05 ekvivalentů) postupně byly přidány do roztoku Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,0 g, 3,53 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (15 ml) . Po míchání 18 hodin byl precipitát odstraněn filtrací a filtrát byl zředěn MTBE (75 ml), promýván 10% KHSO4 a solankou (10 ml každý), sušen nad Na2SO4 a odpařen. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (12% EtOAc v hexanech) dalo Boc-L-(4-F-Phe)OBn (0,992 g, 79%) ve formě bílé pevné látky. !h NMR

• · spektrální data odpovídají literatuře (viz Jackson a kol., J. Org. Chem. 1992, vol. 57, 3397).

Příprava meziproduktu Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)OBn

Boc-L-(4-F-Phe)-OBn (2,0 g, 5,36 mmol, 1 ekvivalentů) byl míchán po dobu 1 hodin ve směsi CH2CI2 (20 ml) a TFA (10 ml), potom bylo přidáno více TFA (10 ml) a reakční roztok byl míchán po další hodinu. Těkavé látky byly odpařeny a reziduum bylo rozpuštěno v DMF (30 ml) . Byl přidán Boc-L-a(terč.-butyl-Gly)-OH (1,24 g, 5,36 mmol, 1 ekvivalentů) a roztok byl ochlazen na teplotu 0°C. Postupně byly přidány N,N-diisopropylethylamin (2,80 ml, 16,1 mmol, 3 ekvivalentů) a HATU (2,04 g, 5,37 mmol, 1 ekvivalentů) . Po míchání 20 minut, reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí během 1 hodiny, potom byla zředěna MTBE (500 ml) a promývána 5% KHSO4 (100 ml), nasyceným NaHCO3 (50 ml) a solankou (50 ml) . Organická fáze byla sušena a odpařena. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (20% EtOAc v hexanech) dalo Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-

Phe)-OBn (2,04 g, 78%) ve formě bílé pěl	-íy	: Rf	= 0,49	(25%
EtOAc v hexanech); IR (cm“l) 3307, 1737	r	1655	br;	1h	NMR
(CDCI3) δ 0,94 (s, 9H) , 1,45 (s, 9H) ,	3,	04 (dd,	ÍH,	J =
14,2, 5,8), 3,11 (dd, ÍH, J= 14,2, 6,1)	r	3,79	(d,	ÍH,	J =
9,3), 4,88 (dt, ÍH, J = 7,8, 5,8), 5,08	(d	., ÍH,	J	= 12	,0) ,
5,16-5,23 (m, ÍH) , 5,19 (d, ÍH, J= 12,0)	r	6,08	(d,	1H,	J =
7,8), 6,83-6,97 (m, 4H), 7,28-7,40 (C27H35FN2O5) C, Η, N.		(m,	5H) ;	Anal.

• ·· · ·· ··· · ·· · · · • · · · · • · · · · · · “* · · · ·

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L(4-F-Phe)-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala)}-Epropenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 8 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrolAla )}-E-propenoátu (0,309 g, 0,648 mmol, 1 ekvivalentů) v 1,4-dioxanu (8 ml). Po míchání po dobu 1,5 hodiny byly těkavé látky odpařeny pro získání surové aminové soli ve formě pěny.

Paládium na uhlí (10%, 200 mg) bylo přidáno do roztoku Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn (2,04 g, 4,19 mmol) v EtOAc (200 ml). Atmosféra byl nahrazena vodíkem pomocí balónu. Po míchání 3 hodiny byla atmosféra nahrazena argonem a reakční směs byla filtrována přes filtrační papíry #3 a #5 Whatman. Filtrát byl odpařen pro získání bílé pěny.

Tato pěna byla kombinována se surovou aminovou solí (připravena výše) v DMF (5 ml) a ochlazena na teplotu 0°C. Postupně byly přidány W,N-diisopropylethylamin (0,339 ml,

1,95 mmol, 3 ekvivalentů) a HATU (0,247 g, 0,650 mmol, 1 ekvivalentů). Po míchání 20 minut byla reakční směs ponechána zahřát se na teplotu okolí během 1 hodiny, potom zředěna MTBE (100 ml) a promývána 5% KHSO4, nasyceným NaHCO3 a solankou (15 ml každá). Organická fáze byla sušena a odpařena. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (60% EtOAc v hexanech) dalo ethyl-3-{Boc-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-FPhe)-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

(0,364 g, 74%)	ve	formě bílé pěny: Ry =	0,34	(60%	EtOAc	v
hexanech); IR	(cm-	!) 3284, 1713, 1655; !h	NMR	(CDCI3)	δ 1,	01
(s, 9H) , 1,28	(t,	3H, J = 7,2), 1,46 (s,	9H) ,	1,50-1	,63 (	m,
2H), 1,68-1,81	(m,	1H), 1,85-1,99 (m, 1H),	2,09	-2,20 (	m, 1H	) ,

fe · fe · • « fe « • ♦ fe ·

2,94	(dd, ÍH, J =	13,5, 5,4),	3,15-3,26	(m, 3H) , 3,80	(s,
3H) ,	3,82 (s, 3H) ,	3,97 (d, ÍH,	J = 9,3)	, 4,17 (q, 2H,	J =
7,2) ,	4,27-4,38 (m,	ÍH), 4,29 (d	, 1H, J =	14,3), 4,42 (d,	ÍH,
J =	14,3), 4,84-4,	92 (m, ÍH) ,	5,22 (d,	ÍH, J = 9,6),	5,74
(dd,	ÍH, J = 15, 6,	1,6), 6,45-6,	53 (m, 2H)	, 6,69 (dd, ÍH,	J =
15,6,	5,4), 6,76-6	,87 (m, 3H) ,	7,10-7,28	(m, 3H) , 8,26	(d,

ÍH, J = 5,9); Anal. (C40H55FN4O9) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{Boc-L-a(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)(S) -pyrrol-Ala)}-E-propenoátu a isoxazol-5-karbonylchloridu použitím výše popsané procedury (Příklad 2) pro přípravu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-(TrGln)}-E-propenoátu: Rf = 0,60 (10% CH3OH v CHCI3); IR (cm^_l) 3295, 1713, 1666, 1643; NMR (CDCI3) δ 1,07 (s, 9H) , 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,64 (m, 2H) , 1,71-1,83 (m, ÍH) ,

1,96-2,07 (m, ÍH) , 2,11-2,21 (m, ÍH) , 2,49 (s, 3H) , 2,99 (dd, ÍH, J = 13,7, 5,9), 3,13-3,26 (m, 3H) , 3,80 (s, 3H) ,

3,81 (s, 3H) , 4,18 (q, 2H, J = 7,2), 4,23-4,48 (m, 4H) ,

4,85-4,93 (m, ÍH) , 5,76 (dd, ÍH, J = 15,6, 1,4), 6,40-6,52 (m, 3H) , 6,71 (dd, ÍH, J = 15, 6, 5,3), 6, 79-6, 88 (m, 2H) ,

6,92 (d, ÍH, J= 9,0), 7,09-7,22 (m, 3H) , 7,37 (d, ÍH, J =

9,0), 8,27 (d, ÍH, J = 6,2); Anal. (C40H50FN5O9·0,25H2O) C,

Η, N.

• ·« ο ••to · ··

·· ·· ·« • · · to · · • · · · >

• · · · · · • · · · · ···· ·· ··

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((S) -pyrrol-Ala) }-Epropenoátu

Tato sloučenina byla připravena z ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-α-(terč.-butyl-Gly)-L-(4 — F—

Phe)-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala) }-E-propenoátu použitím procedury popsané výše (Příklad 6) pro přípravu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L((S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu: Rf = 0,30 (5% CH3OH v

CH2CI2); IR (cm^-1) 3307 br, 1684, 1660; l-H NMR (CDCI3) δ 1,02 (s, 9H) , 1,29 (t, 3H, J= 7,2), 1,51-1,61 (m, 1H), 1,75-1,97 (m, 2H), 2,14-2,25 (m, 1H) , 2,28-2,40 (m, 1H), 2,50 (s, 3H),

3,03 (d, 2H, J = 6,5), 3,27-3,42 (m, 2H) , 4,18 (q, 2H, J =

7,2), 4,36 (d, 1H, J = 9, 8), 4,52-4,63 (m, 1H) , 4,86-4,95 (m, 1H) , 5,71 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,44 (s, 1H) , 6,57-6,64 (m, 1H) , 6,73 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,83-6,91 (m, 2H) , 7,09-7,15 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 2H) , 7,59 (d, 1H, J= 8,1);

Anal. (C31H40FN5O7) C, Η, N.

Příklad 9 - Příprava sloučeniny A-8: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S) -piperAla)}-E-propenoát

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (2'S,4S,4'' S) 4-(2' -(4'' -benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3''-karbonyl)-5'hydroxypentyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové • ·

Roztok komplexu boran-tetrahydrofuran (0,96 ml 1,0 M roztoku v THF, 0,96 mmol, 1 ekvivalentů) byl přidán do roztoku terč.-butyl esteru kyseliny(2'S,4S,4'' S)-4-{2'-(4' ' benzy1-2''-oxo-oxazolidin-3''-karbonyl)-pent-4' -enyl}-2,2dimethyloxazolidin-3-karboxylové (připraven jak je popsán v Příkladu 6, 0,455 g, 0,963 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (3 ml) o teplotě 0°C. Po míchání 30 minut byly přidán voda (3 ml) a perborát tetrahydrát sodný (0,148 g, 0,962 mmol, 1 ekvivalentů) a ledová lázeň byla odstraněna. Po další hodině byla reakční směs zředěna MTBE (125 ml), promývána vodou (15 ml) a solankou (2 x 15 ml), sušena nad Na2SC>4 a koncentrována. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (50% EtOAc v hexanech) dalo terč.-butyl ester kyseliny {2' S, 4S, 4' ' S) -4 - {2' - {4' '-benzyl-2''-oxo-oxazolidin3''-karbonyl)-5'-hydroxypentyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (0,339 g, 72%) ve formě bezbarvého plynu: Rf = 0,41 (50% EtOAc v hexanech); IR (cm^_l) 3486, 1780, 1693; ^H NMR (CDCI3) δ 1,42-1,85 (m, 21H) , 2,13-2,24 (m, 1H) , 2,70 (dd, 1H, J= 13,1, 10,0), 3,29-3,38 (m, 1H) , 3,61-4,22 (m,

8H), 4,63-4,76 (m, 1H), 7,19-7,38 (m,, 5H); Anal.

(C26H38N2O7’0,5H₂O) C, Η, N.

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (1S,3'S){2-(1'-(2'' ,4''-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-piperidin-3'-yl)-1hydroxymethylethyl}-karbamové

Terč.-butyl ester kyseliny (2'S,4S,4''S)-4-{2'-(4''benzyl-2'’-oxo-oxazolidin-3^ř’-karbonyl)-5'-hydroxypentyl}2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové (3,88 g, 7,92 mmol, 1 ekvivalentů) byl rozpuštěn v Et3N (3,97 ml, 28,51 mmol, 3,6 ekvivalentů). Směs byla ochlazena na teplotu -12°C a roztok • · • · komplexu oxid sírový-pyridin (5,04 g, 31,67 mmol, 4 ekvivalentů) v DMSO (150 ml) byl přidán při rychlosti, při které byla teplota udržována mezi 8-17°C. Roztok byl míchán při teplotě 23°C po dobu 3 hodin. Reakční směs byla ochlazena v ledové lázni a reakce byla ukončena přidáním H2O (150 ml). Výsledný roztok byl extrahován EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly promývány 5% kyselinou citrónovou (100 ml), solankou (100 ml), sušeny nad Na2SO4 a filtrovány. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a reziduum bylo sušeno za vakua pro získání bílé pěny (3,53

g) ·

Do roztoku tohoto materiálu (3,53 g, 7,22 mmol, 1 ekvivalentů) v 2:1 směsi THF a EtOH (120 ml) byl přidán hydrochlorid 2,4-dimethoxybenzylaminu (5,88 g, 28,89 mmol, 4 ekvivalentů), NaOAc (2,37 g, 28,89 mmol, 4 ekvivalentů) a NaBH3CN (0,908 g, 14,45 mmol, 2 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána přes noc (20 hodin) a potom zředěna MTBE (200 ml) . Organická vrstva byla promývána 10% KHSO4 (100 ml), nasyceným NaHCO3 (100 ml) a solankou (100 ml) a sušena nad Na2SO4 a koncentrována pro získání bledě žluté pěny.

Do roztoku této pěny (3,34 g, 7,22 mmol, 1 ekvivalentů) v CH3OH (50 ml) byla přidána kyselina p-toluensulfonová (0,275 g, 1,44 mmol, 0,2 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 50°C po dobu 2,5 hodin a potom byla zředěna CH2CI2 (100 ml). Organická vrstva byla promývána nasyceným NaHCO3 (100 ml), sušena nad Na2SO4 a koncentrována. Reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (3% CH3OH v CH2CI2) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (1S, 3'S) ~{2-(1'-(24''-dimethoxybenzyl)2'-oxo-piperidin-3'-yl)-1-hydroxymethyl-ethyl}-karbamové ve • ·

- 99 formě bílé pěny (1,33 g, 44% pro tři kroky): NMR (CDCI3):

δ 1,44 (s, 9H) , 1,71-1,85 (m, 2H), 1, 92-1, 98 (m, 2H), 2,402,48 (m, IH) , 2,71-2,78 (m, IH) , 3,19-3,32 (m, 2H) , 3,453,69 (m, 4H), 4,11-4,20 (m, 2H), 4,68 (m, IH), 5,47 (m, IH), 6,44 (s, IH), 7,20-7,33 (m, 2H).

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-piper-Ala)}-E-propenoátu

Terč.-butyl ester kyseliny (1S,3'S)-{2-(1'-(2'',4''dimethoxybenzyl)-2'-oxo-piperidin-3'-yl)-1-hydroxymethylethyl}-karbamové byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-( (S) -piperAla)}-E-propenoátu způsobem analogickým přeměně terč.-butyl esteru kyseliny (1S,3'S)-{2-(1'-(2'',4''-dimethoxybenzyl)2'-oxo-piperidin-3'-yl]-1-hydroxymethylethyl)-karbamové na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4F-Phe)-L-((S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát popsané v Příkladu 6 uvedeném výše: Rf = 0,24 (5% CH3OH v CH2CI2); IR (cm^-1) 3284 br, 1713, 1655, 1637 br; ^ΧΗ NMR (CDCI3) δ 0,94 (d, 3H, J =

6,8)	, 0,	98 (d, 3H,	J = 6,8) , 1,29	(t, 3H, J	= 7,2), 1	,43-
1,56	(m,	2H), 1,66-	-1,78 (m, IH) ,	1,83-2,05	(m, 4H), 2	,16-
2,28	(m,	1H), 2,49	(s, 3H) , 3,00	(dd, IH, J	= 13,7, 6	,2) ,
3,13	(dd	, IH, J =	13,7, 5,9), 3,21-3,37 (m,	2H), 4,18	(q,
2H,	J =	7,2), 4,36	-4,45 (m, 2H) ,	4,80-4,88	(m, IH) ,	5,76
(dd,	IH,	J = 15,6,	1,6), 5,96 (s,	IH), 6,43	(s, IH),	6,70
(dd,	IH,	J = 15,6,	5,3), 6,81 (d,	IH, J = 8	,7), 6,86-	6, 98
(m,	2H) ,	7,09-7,19	(m, 2H), 7,22-7,	,29 (m, IH)	, 8,07 (d,	IH,
J =	6,5)

·· 99 ► · · 4 • 9 9 4

100

Příklad 10

Příprava sloučeniny B-l: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3' -karbonyl) -L-ValT(COCH2) -L- (4-F-Phe) -LGln}-E-propenoát

(B-l)

Příprava meziproduktu kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové.

Roztok ekvivalentů) isobutyraldehydu (9,59 g, 133 mmol, 1 v THF (50 ml) byl přidán po kapkách adiční nálevkou do roztoku vinylmagnesiumbromidu (133 ml 1,0 M roztoku v THF, 133 mmol, 1,0 ekvivalentů) v THF (300 ml) při teplotě 0°C. Po dokončení přidávání byla reakční směs míchána po dobu 30 minut při teplotě 0°C a potom byl přidán ethylmalonylchlorid (17,0 ml, 133 mmol, 1,0 ekvivalentů). Po míchání po dobu 1 hodin při teplotě 0°C byla reakční směs rozdělena mezi nasycený NH4CI (150 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 200 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua filtrací přes silikagel (vymývání pomocí 5% EtOAc v hexanech) přineslo meziprodukt malonátový ester (11,5 g, 40% výtěžek). Tento materiál nebyl určován, ale byl kombinován (bez rozpouštědla) s Ti(OEt)4 (1,13 ml, 5,39 mmol, 0,10 ekvivalentů) a byl zahříván na teplotu 190°C po dobu 4 hodin a potom byl ochlazen na teplotu 60°C. Postupně byly přidány EtOH (50 ml) a 6,0 M KOH (50 ml) a hnědá reakční směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu 4 hodin. Po ochlazení na teplotu 23°C byla reakční směs filtrována přes střední fritu a filtrát byl rozdělen mezi vodu (150 ml) a Et2O (2 x 150 ml). Vodná vrstva byla potom okyselena na pH = • ·

101

(jak bylo zjištěno pH papírem) koncentrovánou HCI a byl extrahován 1:1 směsí EtOAc a hexanů (2 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4, koncentrovány a reziduum bylo destilován za sníženého tlaku pro získání kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové (3,58 g, 47%) ve formě bezbarvé kapaliny: teplota varu = 107-112°C (1 Torr); IR (cm^-1) 2960, 1711; !h NMR (CDCI3) δ 0,96 (d, 6H, J = 6,5), 2,18-2,45 (m, 5H), 5,31-5,50 (m, 2H); Anal. (C8H14O2) C, H.

Příprava meziproduktu (2R-hydroxy-lR-methyl-2-fenyl-ethyl)methylamidu kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové.

Oxalylchlorid (2,25 ml, 25,8 mmol, 1,05 ekvivalentů) byl přidán do roztoku kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové (3,50 g, 24,6 mmol, 1 ekvivalentů) a N, N-dimethylf ormamidu (0,03 ml, 0,39 mmol, 0,016 ekvivalentů) v benzenu (60 ml) při teplotě 23°C. Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 2 hodin a potom byla koncentrována za sníženého tlaku. Výsledný olej byl rozpuštěn v THF (20 ml) a byl přidán kanylou do roztoku (IR,2R)-(-)-pseudoefedrinu (3,87 g, 23,4 mmol, 1 ekvivalentů) a triethylaminu (3,92 ml, 28,1 mmol, 1,2 ekvivalentů) v THF (150 ml) při teplotě 0°C. Reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 30 minut, potom byla rozdělena mezi polonasycený NH4CI (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4, koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 40^50% EtOAc v hexanech) pro získání (2R-hydroxy-lR-methyl-2-fenylethyl)-methylamidu kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové (6,31 g, 93%) ve formě viskózního oleje: R_f = 0,35 (50%

EtOAc v hexanech); IR (cm !) 3382, 1622; !h NMR (CDCI3, směs • · • · • · • ·

102 • ····

rotamerů) δ 0,96 (d, J = 6,8), 0,97 (d, J = 6,5), 1,11 (d, J = 6,9), 2,18-2,59 (m) , 2,82 (s), 2,92 (s) , 3,99-4,04 (m) ,

4,32-4,42 (m) , 4, 44-4,49 (m) , 4,55-4,62 (m) , 5,32-5, 49 (m),

7,24-7,42 (m); Anal. (C18H27NO2) C, Η, N.

Příprava meziproduktu

(2E-hydroxy-lB-methyl-2trans-6-methyl-2S-(4fluorbenzyl)-hept-4-enové.

n-Butyllithium (32,5 ml 1,6 M roztoku v hexanech, 52,0 mmol, 3,1 ekvivalentů) byl přidán do suspenze bezvodého chloridu lithného (7,18 g, 169 mmol, 10 ekvivalentů) a diisopropylaminu (7,80 ml, 55,7 mmol, 3,3 ekvivalentů) v THF (250 ml) při teplotě -78°C. Reakční směs byla míchána po dobu 30 minut při teplotě -78°C, byla udržován při teplotě 0°C po dobu 5 minut a následně znovu ochlazena na teplotu 78 °C. (2R-hydroxy-lR-methyl-2-fenyl-ethyl)-methylamid kyseliny trans-6-methyl-hept-4-enové (4,91 g, 17,0 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (50 ml) byl přidán kanylou a výsledný roztok byl míchán při teplotě -78°C po dobu 1,75 hodin, udržován při teplotě 0°C po dobu 20 minut, míchán při teplotě 23°C po dobu 5 minut a potom byl znovu ochlazen na teplotu 0°C. Byl přidán roztok 4-fluorbenzylbromidu (6,34 ml, 50,9 mmol, 3 ekvivalentů) v THF (15 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 30 minut, potom byla rozdělena mezi polonasycený NH4CI (230 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (200 ml, 2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 20-»40% EtOAc v hexanech) dalo (2R-hydroxy-lR-methyl-2fenylethyl)methylamid kyseliny trans-6-methyl-2S-(4fluorbenzyl)-hept-4-enové (6,33 g, 94%) ve formě viskózního • · • · • ·

103 oleje: Rf = 0,38 (40% EtOAc v hexanech); IR (cm 1) 3378,

1614; 1h NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ 0,85-0,95 (m) , 0,96 (d, J = 6,8), 2,10-2,32 (m) , 2,34-2,46 (m) , 2,58 (s), 2,672,79 (m) , 2,82-2,94 (m) , 3,00-3,18 (m), 3,94 (br), 4,37-4,52 (m), 5,24-5, 42 (m) , 5, 44-5,56 (m), 6,89-7,01 (m), 7,08-7,14 (m) , 7,19-7,38 (m) ; Anal. (C25H32FNO2) C, Η, N.

Příprava meziproduktu 5S-(lR-brom-2-methylpropyl)-3R-(4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-onu.

W-bromsukcinimid (2,93 g, 16,5 mmol, 1,05 ekvivalentů) byl přidán v malých dávkách během 10 minut do roztoku (2Rhydroxy-lí?-methyl-2-f enylethyl) methylamidu kyseliny trans-6methyl-2S-(4-fluorbenzyl)-hept-4-enové (6,24 g, 15,7 mmol, 1 ekvivalentů) a ledové kyseliny octové (4,49 ml, 78,4 mmol, 5 ekvivalentů) v 4:1 směsi THF a H2O (165 ml) při teplotě 0°C. Výsledný žlutý roztok byl míchán po dobu 15 minut při teplotě 0°C a potom byl zahřát na teplotu 23°C a následně zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 45 minut Po ochlazení na teplotu 23°C byla reakční směs rozdělena mezi polonasycený NaHCO3 (200 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x

200 ml, 100 ml) Na2SO4 čištění a byly rezidua

Spojené organické vrstvy byly sušeny nad koncentrovány. Mžikové chromatografické (gradientově vymývání 4—»10% EtOAc v hexanech) dalo 5S-(lR-brom-2-methylpropyl)-3H-(4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-on (4,14 g, 80%) ve formě bledě žlutého oleje (obsahujícího přibližně 5-10% neidentifikovaných nečistot na základě ^H NMR): Rf = 0,56 (25% EtOAc v hexanech); IR (cm’¹) 1772; !h NMR (CDCI3, hlavní izomer) δ 0,94 (d, 3H, J = 6,5), 1,00 (d, 3H, J = 6,8), 2,05-2,35 (m, 3H), 2,83 (dd, 1H, J = 13,6, 8,4), 2,92- 104 • ·

6, 4,7), 3,90 (dd, 1H, J

-7,06 (m, 2H), 7,14-7,20 • ····

3,03 (m, 1H) , 3,11 (dd, 1H, J = 13, = 9,0, 3,7), 4,33-4,40 (m, 1H), 6,98 (m, 2H); Anal. (Ci5HisBrFO2) C, H.

Příprava meziproduktu 5S-(lS-azido-2-methylpropyl)-3R- (4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-onu.

Suspenze azidu sodného (1,90 g, 29,2 mmol, 2,5 ekvivalentů) a 5S-(lR-brom-2-methylpropyl)-3R-(4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-onu (3,85 g, 11,7 mmol, 1 ekvivalentů) v N,Á-dimethylformamidu (40 ml) byla zahřívána při teplotě 50°C po dobu 67 hodin. Reakční směs byla ochlazena na teplotu 23°C a byla rozdělena mezi polonasycený NaCl (200 ml) a 1:1:1 směs EtOAc, hexanů a acetonu (2 x 200 ml, 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4, koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 9—>17% EtOAc v hexanech) pro získání 5S-(lS-azido-2-methylpropyl)-3R-(4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-onu (2,10 g, 62%) ve formě bílé pevné látky (obsahující přibližně 5-10% neidentifikovaných nečistot na základě NMR): teplota tání 91-96°C; Rf = 0,44 (25% EtOAc v hexanech); IR (cm^-1) 2097, 1772; !h NMR (CDCI3, hlavní izomer) δ 0,99 (d, 3H, J = 6,5), 1,02 (d, 3H, J = 6,8), 1,95-2,20 (m, 3H), 2,78-2,88 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H, J = 7,0, 4,2), 3,03-3,17 (m, 2H), 4,37-4,43 (m, 1H), 6,97-7,09 (m, 2H), 7,14-7/21 (m, 2H).

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny {2-methyl1S-(4R-(4-fluorbenzyl)-5-oxotetrahydrofuran-2S-yl)propyl}karbamové.

9 · • · 4

4 4

105

Suspenze 5S-(lS-azido-2-methylpropyl)-3R-(4fluorbenzyl)dihydrofuran-2-onu (2,02 g, 6,93 mmol, 1 ekvivalentů), di-terč.-butyldikarbonátu (2,12 g, 9,71 mmol, 1,4 ekvivalentů) a Pd/C (10%, 0,20 g) v CH3OH (100 ml) byla míchána pod vodíkovou atmosférou (balón) po dobu 16 hodin. Reakční směs byl vakuově filtrována přes papír Whatman #3 a koncentrována. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (15% EtOAc v hexanech) poskytlo terč.-butyl ester kyseliny {2-methyl-lS-(4R-(4-fluorbenzyl)-5oxotetrahydrofuran-2S-yl)propyl}-karbamové (1,58 g, 62%) ve formě bílé pěny: Rf = 0,80 (5% MeOH v CH2CI2); IR (cm^_l) 3331, 1766, 1702; A NMR (CDCI3) δ 0,93 (d, 3H, J = 6,8),

0,95 (d,	3H, J = 6,5), 1,41	(s, 9H) , 1,71-1,83 (m,	IH) ,
1,95-2,06	(m, IH), 2,16-2,27	(m, IH) , 2,80 (dd, IH,	J =
13,5, 8,6)	, 2,88-2,99 (m, IH),	3,09 (dd, IH, J = 13,5,	4,4) ,
3,32-3,40	(m, IH), 4,42-4,48	(m, 2H) , 6, 95-7,03 (m,	2H) ,
7,11-7,18	(m, 2H); Anal. (C20H28FNO4) C, Η, N.
Příprava	meziproduktu ethyl	-3-{Boc-L-VaUF (COCH2) -L-	(4-F-
Phe)-L-(Tr	-Gin)}-E-propenoátu.

Hydroxid lithný (9,62 ml 1 M vodného roztoku, 9,62 mmol, 5 ekvivalentů) byl přidán do roztoku terč.-butyl esteru kyseliny {2-methyl-lS-(4R-(4-fluorbenzyl)-5oxotetrahydrofuran-2S-yl)propyl}-karbamové (0,703 g, 1,92 mmol, 1 ekvivalentů) v DME (25 ml) při teplotě 23°C. Výsledná suspenze byla míchána při teplotě 23°C po dobu 30 minut a potom byla rozdělena mezi 10% KHSO4 (50 ml) a CH2CI2 (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SC>4, koncentrovány a reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (30 ml) . Postupně byly přidány prášková 4L molekulární síta

106 (0,70 g) , 4-methylmorfolin N-oxid (0,451 g, 3,85 mmol, 2 ekvivalentů) a tetrapropylamonium perruthenát (0,068 g, 0,19 mmol, 0,10 ekvivalentů). Výsledná tmavá reakční směs byla míchána po dobu 1,33 hodin při teplotě 23°C, potom byla vakuově filtrována přes papír Whatman #3 a potom přes papír Whatman #5. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku pro získání tmavého rezidua, které bylo rozpuštěno v CH2CI2 (30 ml). Postupně byly přidány surový ethyl-3-(H2N-L-(Tr-Gln) ) E-propenoát*HC1 (2,30 mmol, 1,2 ekvivalentů, připraven jak je popsáno v Příkladu 2 pro přípravu ethyl-3-{ (5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-Epropenoátu), 4-methylmorfolin (0,846 ml, 7,69 mmol, 4 ekvivalentů), HOBt (0,390 g, 2,89 mmol, 1,5 ekvivalentů) a EDC (0,553 g, 2,88 mmol, 1,5 ekvivalentů) a reakční směs byla míchána po dobu 19 hodin při teplotě 23°C a potom byla rozdělena mezi solanku (100 ml) a CH2CI2 (3 x 100 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SC>4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 35—>40% EtOAc v hexanech) poskytlo ethyl-3-{Boc-L-ValT (COCH2)-L-(4-F-Phe)-L(Tr-Gln)}-E-propenoát (0,820 g, 53%)ve formě snědé pěny: Rf = 0,50 (50% EtOAc v hexanech); IR (cm“A) 3307, 1708, 1666;

!h NMR (CDCI3)	δ 0,67 (d, 3H, J =	6,8), 0,92 (d, 3H,	J =
6,8), 1,28 (t,	3H, J = 7,2), 1,40	(s, 9H), 1,53-1,67	(m,
1H), 1,91-2,04	(m, 2H), 2,32-2,41	(m, 2H), 2,46-2,55	(m,
1H) , 2,63 (dd,	1H, J = 12,1, 5,9),	2,69-2,80 (m, 1H),	2,83
(dd, 1H, J =	12,1, 8,2), 3,03 (dd	1H, J = 17,7, 10	, 0) ,
4,05-4,11 (m, 1H), 4,17 (q, 2H, J =	7,2), 4,40-4,50 (m,	1H) ,
4,84 (d, 1H, J	= 8,4), 5,38 (d, 1H,	J = 15,7), 6,01 (d,	1H,
J = 8,4), 6,60	(dd, 1H, J = 15,7,	5,0), 6, 92-6, 99 (m,	2H) ,

107 • ·· · ·· ·· ·· ··«· ···♦ · » « · • · · »···· • · · · *····· “·· ·· · · · ·

7,03-7,12 (m, 3H), 7,17-7,30 (m, 15H); Anal. (C48H56FN3O7)

C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-ValT (COCH2) -L- (4-F-Phe) -L-Gln)-E-propenoátu

Ethyl-3-{Boc-L-ValT (COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln) }-Epropenoát byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-ValT (COCH2)-L-(4-F-Phe)-LGln}-É-propenoát způsobem podobným způsobu, který byl popsán v Příkladu 2 uvedeném výše pro přeměnu ethyl-3-{Boc-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gin}-E-propenoát: Teplota tání = 220°C (dekompozice); Rf = 0,35 (10% CH3OH v

CH2CI2); IR (cm^-1) 3277, 1715, 1643; !h NMR (DMSO-d6) δ 0,81 (d, 3H, J = 6,2), 0,87 (d, 3H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J =

6, 5), 1,59-1, 67 (m, 2H) , 2,03 (s, br, 2H) , 2,21-2,24 (m,

ÍH) , 2,46 (s, 3H) , 2,57-2,68 (m, 3H) , 2,80-2,95 (m, 2H) , 4,09 (q, 2H, J= 6,5), 4,30-4,34 (m, 2H) , 5,41 (d, ÍH, J =

15,5), 6,55 (s, ÍH), 6,61 (dd, ÍH, J = 15,5, 5,5), 6,73 (s, ÍH), 6,99-7,16 (m, 5H), 8,01 (d, ÍH, J = 7,8), 8,69 (d, ÍH,

J= 8,7); Anal. (C29H37FN4O7) C, Η, N.

108

ΦΦ • φ • φ φ • φ φφ· φφφφ φφ • φ φ φ φ φ φφφφ • Φ φφ • φ · · • φ φ φ • * φ φ • φ φ φ φφ φφ

Příklad 11 - Příprava sloučeniny Α-10: ethyl-3-((5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-NCH3~L-Phe-L-Gln}-Epropenoát

(A-10)

Příprava meziproduktu Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3

NCH3-L-Phe-OCH3«HC1 (1,4 g) byl rozpuštěn v CH2CI2 (50 ml) a vlit do kombinace vodného 1 N NaOH (7 ml) a nasyceného vodného NaHCO3 (25 ml). Po míchání byla organická fáze separována a vodná fáze byla promývána CH2CI2 (3 x 50 ml) . Spojené organické fáze byly sušeny nad Na2SO4 a odpařeny pro získání volného aminu ve formě čirého bezbarvého oleje (1,14 g, 5,90 mmol). Roztok tohoto aminu a (iPr)2NEt (1,13 ml,

6,49 mmol) v DMF (10 ml) byl přidán po kapkách do roztoku Boc-L-Leu-OH (1,50 g, 6,49 mmol) o teplotě 0°C a HOBt (0,877 g, 6,49 mmol) v DMF (10 ml). Byl přidán DCC (1,47 g, 7,12 mmol) . Reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 1 hodiny a potom byla míchána při teplotě 23°C po dobu 48 hodin. Směs byla filtrována pro odstranění precipitátu (ppt) a filtrát byl odpařen. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (200 ml), promýváno nasyceným vodným NaHCC>3 (40 ml), sušeno nad Na2SC>4 a odpařeno. Reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (25% EtOAc v hexanech) pro získání Boc-L-Leu-NCH3~L-Phe-OCH3 ve formě bílé pevné látky (2,04 g, 85%) : Teplota tání = 126-127°C; IR (cm’¹) 3401, 3319, 1743, 1708, 1649; NMR (CDCI3) (hlavní izomer) δ 0,92 (d, 3H, J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J= 6,5), 1,32-1,48 (m, 2H), 1,41 (s,

109

00 ·· « · • 0 0 0 0 0 •00 0000 ·· ·0 0· > 0 0 0 0 1 * 0 0 0 « • 0 0 0 0 «

3,04	(dd,	1H,	J
5,5) ,	3,72	(s,	3H)
5,20	(dd,	1H,	J

9H) , 1,61-1,77 (m, 1H) , 2,90 (s, 3H) ,

14.5, 10,5), 3,37 (dd, 1H, J = 14,5,

4,48-4,57 (m, 1H) , 4,98-5,04 (m, 1H) ,

10.5, 5,5), 7,16-7,32 (m 5H); Anal. (C22H34N2O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu Boc-L-Leu-NCH3~L-Phe-OH

Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3 (0,625 g, 1,54 mmol) byl rozpuštěn v CH3OH (20 ml) a ochlazen na teplotu 0°C. Po kapkách byl přidán vodný NaOH (6,15 ml 2N roztoku, 12,3 mmol). Reakčni směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě 23°C a potom vlita do 10% vodného KHSO4 (150 ml) . Tato směs byla extrahována CH2CI2 (3 x 100 ml) a spojené organické fáze byly sušeny nad Na2SO4 a odpařeny pro získání Boc-LLeu-NCH3-L-Phe-OH ve formě bílé pěny (0,617 g, kvant.), který byl používán bez čištění.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-Leu-NCH3~L-Phe-L-(TrGln) }-E-propenoátu

Tento meziprodukt byl připraven z Boc-L-Leu-NCH3~L-PheOH a ethyl-3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu»HCl (připraven jak je popsán v Příkladu 2) způsobem podobným způsobu, který byl popsán pro přípravu ethyl-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(TrGln) } -E-propenoátu v Příkladu 2 uvedeném výše: IR (cm^-!) 3295, 1713, 1672, 1649; 3-H NMR (CDCI3) (směs izomerů) δ 0,65

(d, J = 6,	2), 0	,66 (d, J = 6,5) , 0,84 (d	, J =	6,5) ,	0,88	(d,
J = 6,5),	1,02-	•1,22 (m) , 1,23-1,38 (m) ,	1,33	(s) ,	1,41	(s) ,
1,55-1,82	(m) ,	1,89-2,07 (m), 2,23-2,30	(m),	2,90	(s) ,	2,94
(s), 3,01	(dd,	J = 14,6, 10,9), 3,03-	3,13	(m) ,	3,26-	3,37
(m), 3,27	(dd,	J = 14,6, 3,4), 3,42-3,54	(m) ,	4,00-	•4,22	(m) ,
4,37-4,73	(m) ,	4,82-4,89 (m), 5,63-5,70	(m) ,	5, 95	(dd,	J =

*4

15,9, 1,2), 6,23-6,28 (m) , 6, 66-6, 75 (m) , 6, 79-6, 89 (m) ,

7,09-7,34 (m) , 8,14 (d, J = 8,7); Anal. (C49H60N4O7) C, H,

N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Leu-NCH3~L-Phe-L-Gln}-E-propenoátu

Ethyl-3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoát byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-G2n}-E-propenoát způsobem podobným způsobu, který byl popsán v Příkladu 2 uvedeném výše pro přeměnu ethyl-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-Epropenoátu na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-propenoát: Rf = 0,23 (5%

CH3OH v CH2CI2); IR (cm^-1) 3295, 1713, 1666, 1637; !h NMR (CDCI3) (směs izomerů) δ 0,65 (d, J = 6,5), 0,71 (d, J 6,5), 0,93 (d, J = 6,5), 0,94 (d, J = 6,5), 1,30 (t, J = 7,2), 1,24-1,73 (m) , 1,81-2,22 (m) , 2,45 (s), 2,48 (s),

2,86-2,93 (m), 2,96 (s), 2,97 (s), 3,03-3,14 (m) , 3,21-3,31 (m), 3,48 (dd, J= 14,0, 5,9), 4,19 (q, J = 7,2), 4,20 (q, J = 7,2), 4,38-4,45 (m) , 4,52-4,70 (m) , 4,74-4,81 (m) , 5,625,67 (m) , 5,73-5,79 (m), 5,81 (dd, J = 15,6, 1,6), 5,99 (dd, J = 15,6, 1, 6), 6, 03-6,09 (m) , 6,35 (s), 6,39 (s) , 6,40-6,45 (m) , 6,77-6, 94 (m), 7,42 (d, J= 7,2), 8,13 (d, J = 7,8).

Příklad 12 - Příprava sloučeniny C-l: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-Epropenoát

- 111 ·« ·« «* » * · · a Φ • · · · · • · · · · · • · · · >

>*·· 99 99

(C-l)

Příprava meziproduktu allyl-(S)-l-hydroxy-3-(4fluorfenyl)propionátu

V láhvi opatřené teploměrem a refluxním kondenzátorem byl rozpuštěn methyl (S)-l-hydroxy-3-(4-fluorfenyl)propionát (připraven z L-H2N-(4-F-Phe)-OCH3 způsobem, který popsali Hoffman a kol., Tetrahedron 1992, vol. 48, 3007) (0,99 g,

5,0 mmol;

allylalkoholu (50 mi). Byl přidán tetraisopropoxid titaničitý (1,53 ml, 5,0 mmol) a reakční směs byla zahřívána na teplotu 90°C po dobu 3,5 hodin. Reakční směs byla ochlazena na teplotu okolí a vlita do 250 ml směsi 1:1 EtOAc/nasycený NH4CI roztok. Organická fáze byla separována a promývána vodou (100 ml), solankou (100 ml), sušena (MgSO4) a rozpouštědlo bylo odstraněno. Reziduum bylo podrobeno mžikové sloupcové chromatografií vymýváním pomocí gradientu směsi 5-10% EtOAc/hexany pro získání 0,77 g (68%) allyl-(S)-l-hydroxy-3-(4-fluorfenyl)propionátu ve formě čiré kapaliny: Ry = 0,21 (15% EtOAc/hexany); IR (bez rozpouštědla) 3470 (široký), 1734, 1510, 1221 cm^-l; NMR (DMSO-c/6) δ 1,24-1,27 (m, 1H) , 2, 92-2,99 (m, 1H) , 3,09-3,15 (m, 1H), 4,43-4,47 (m, 1H), 4,65 (d, 2H, J = 5,9), 5,28-5,37 (m, 2H) , 5,86-5,95 (m, 1H) , 6,95-7,01 (m, 2H) , 7,16-7,21 (m, 2H) .

112 »· • · ···* t« »· • · Β • · Β • · · • · ·

Β· *·

Příprava meziproduktu Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2

Allyl-(S)-l-hydroxy-3-(4-fluorfenyl)propionát (0,070 g, 0,31 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (20 ml). Byl přidán Boc-LVal-OH (0,068 g, 0,31 mmol), následovaný DMAP (0,004 g, 0,03 mmol) a DCC (0,067 g, 0,33 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě okolí přes noc a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Reziduum bylo podroben mžikové sloupcové chromatografií vymývání pomocí gradientu směsi 3-5% EtOAc/hexany. Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 produkt byl

získán ve formě 0,12 g (90%) čirého	olej e:	Rf =	0,18	(10%
EtOAc/hexany); IR (bez rozpouštědla)	1752,	1717	1510	cm- 7 ;
!h NMR (DMSO-c/6) δ 0,80-0,85 (m, 6H	), 1,36	(s,	9H) ,	1,97-
2,04 (m, ÍH) , 3,07-3,15 (m, 2H) , 3,	89-3,94	(m,	ÍH) ,	4,51-
4,55 (m, 2H) , 5,17-5,30 (m, 3H) , 5,	75-5,84	(m,	ÍH) ,	7,06-
7,17 (m, 3H), 7,27-7,32 (m, 2H); Anal	• (C22H30NO6F) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L(Tr-Gln)}-E-propenoátu

Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 (0,65 g, 1,52 mmol) byl rozpuštěn v THF (15 ml). Bylo přidáno tetrakis(trifenylfosfine)paládium (0) (0,035 g, 0,03 mmol) a reakční směs byla míchána 5 minut při teplotě 23°C. Byl přidán po kapkách morfolin (0,16 ml, 1,83 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo vyjmuto v 50 ml směsi 4:1 hexany/Et2O. Produkt byl extrahován v nasyceném NaHCO3 roztoku (50 ml) a organická fáze byla odstraněna. Vodná fáze byla okyselena na pH = 1-2 pevným KHSO4 a produkt byl reextrahován v EtOAc (50 ml). Organická fáze byla promývána solankou (50 ml), sušena

113 (MgSC>4) a koncentrována pro získání 0,50 g (86%) volné kyseliny ve formě čirého oleje. Tento materiál byl rozpuštěn v DMF (6 ml). Byl přidán diisopropylethylamin (0,43 ml, 2,50 mmol), následovaný ethyl-3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-Epropenoátem«HCl (připraven jak je popsán v Příkladu 2 uvedeném výše, 0,55 g, 1,25 mmol). Reakční směs byla ochlazen na teplotu 0°C. Byl přidán HATU (0,48 g, 1,25 mmol) a reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí. DMF byl odstraněn in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno EtOAc (30 ml) a organická fáze byla promývána postupně 10% HCI roztokem (25 ml), nasyceným NaHCO3 roztokem (25 ml), H2O (25 ml) a solankou (25 ml). Organická vrstva byla sušena (MgSO4), filtrována a koncentrována a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (0—»1,0% MeOH/CH2Cl2) pro získání 0,40 g (39%) ethyl-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(TrGln) }-E-propenoátu ve formě bílé amorfní látky: Rf = 0,25 (3% MeOH/CHCl3); IR(KBr) 1691, 1512, 1159 cm^-1; 1h NMR (DMSO-d6) δ 0,78-0,83 (m, 6H) , 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,35

(s, 9H), 1,58-1,66	(m, 2H), 1,96-2,02	(m, IH), 2	,19-2,33	(m,
2H), 2,99-3,02 (m,	2H), 3,82-3,87 (m,	IH) , 4,09	(q, 2H,	J =
7,0), 4,33-4,37 (m,	IH), 5,03-5,08 (m,	IH), 5,60	(d, IH,	J =
15,8), 6,67 (dd,	IH, J = 15,8, 5,5)	, 7,02-7,	08 (m,	2H) ,
7,14-7,28 (m, 18H)	, 8,12 (d, IH, J =	= 8,1), 8,	59 (s,	IH) ;

Anal. (C47H54N3O8F) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoátu

Ethyl-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-Epropenoát byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E114 propenoát způsobem podobným způsobu, který byl popsán v Příkladu 2 uvedeném výše pro přeměnu ethyl-3-{Boc-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gin}-E-propenoát:

Rf = 0,05 (3% MeOH/CHCl3); IR (KBr) 1746, 1719, 1661, 1549 cm“¹; 3-H NMR (DMSO-dg) 8 0,87 (d, 3H, J= 6,6), 0,92 (d, 3H,

J = 6,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,61-1,74 (m, 2H) , 1,962,01 (m, 2H), 2,15-2,22 (m, IH), 2,46 (s, 3H), 3,00-3,03 (m, 2H), 4,10 (q, 2H, J= 7,0), 4,27-4,32 (m, IH), 4,33-4,38 (m,

IH) , 5,06-5,11 (m, IH) , 5,63 (d, IH, J = 15,6), 6,54 (s,

IH) , 6,68 (dd, IH, J = 15,6, 5,5), 6,78 (s, br, IH) , 6,957,00 (m, 2H), 7,20-7,24 (m, 3H), 8,06 (d, IH, J= 8,1), 8,87 (d, IH, J= 7,7); Anal. (C28H35N4O8F) C, Η, N.

Příklad 13 - Příprava sloučeniny A-ll: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(2-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-LGln}-E-propenoát

Příprava meziproduktu ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(TrGln) }-E-propenoátu

Boc-(4-F-Phe)-OH (4,46 g, 15,75 mmol, 1 ekvivalentů) a CH3I (7,84 ml, 126 mmol, 8 ekvivalentů) byly rozpuštěny v bezvodém THF (100 ml) a ochlazeny na teplotu 0°C. NaH (1,89 g, 47,25 mmol, 3 ekvivalentů) bylo přidáno do tohoto roztoku

115 za intenzivního míchání. Po míchání při teplotě 23°C po dobu 24 hodin byly do směsi opatrně přidán EtOAc (3 ml) a H2O (3 ml) a výsledná suspenze byla odpařena do sucha. Po rozpuštění v H2O (100 ml) byla reakční směs promývána Et2O (2 x 100 ml) . Vodná vrstva byla okyselena na pH = 3 pomocí 10% roztoku kyseliny citrónové a potom extrahována EtOAc (2 x 100 ml). Spojené EtOAc extrakty byly promývány postupně polonasyceným NaHCO3 (150 ml), 5% Na2S2O3 (150 ml) a H2O (150 ml), sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány pro získání BocNCH3-(4-F-Phe)-OH ve formě bledě žluté pěny (4,37 g, 80%), která byla použita bez dalšího čištění: ^H NMR (CDCI3, směs izomerů) δ 1,35 (s), 1,40 (s), 2,69 (s) , 2,75 (s), 2,96-3,13 (m), 3,23-3,33 (m) , 4,54-4,58 (m) , 4,76-4,81 (m) , 6,96-7,01 (m), 7,15-7,17 (m).

Roztok HCl v 1,4-dioxanu (4,0 M, 15 ml) roztoku ethyl-3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-propenoátu je popsán v Příkladu 2 uvedeném výše, 3,57 g, 6,73 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (15 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 2 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (50 ml) a postupně byly přidány B0C-NCH3-(4-F-Phe)-OH (připraven stejně jako v předchozím odstavci, 2,0 g, 6,73 mmol, 1,0 ekvivalentů), HOBt (1,23 g, 9,09 mmol, 1,5 ekvivalentů), 4methylmorfolin (2,0 ml, 18,19 mmol, 3 ekvivalentů) a EDC (1,74 g, 9,09 mmol, 1,5 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C přes noc a potom byla rozdělena mezi vodu (100 ml) a CH2CI2 (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4, koncentrovány a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (30% EtOAc v hexanu) pro získání ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Trbyl přidán do ^připraven jak

- 116 :Gln)}-E-propenoátu (4,07 g, 84%) ve formě bílé pěny: IR (cm !) 1666, 1510, 1167; A NMR (CDCI3, směs izomerů) 8 1,29 (t,

J =	7,2), 1,37	(s), 1,65-1,75 (m), 1,95-	2,06 (m) , 2	,29-2,33
(m) ,	2,66 (s),	2,91-2,99 (m) , 3,22-3,29	(m), 4,18	(q, J =
7,2)	, 4,52-4,58	(m) , 5,68 (d, J = 15,9) ,	6,45 (d, J	= 8,4),
6, 74	(dd, J =	15,6, 5,4), 6,91-6,99 (	:m) , 7,11-7,	33 (m);
Anal	. (C43H48FN3O6) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-(2-naft)-NCH3-L-(4-FPhe) -L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 3 ml), byl přidán do roztoku ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-Epropenoátu (0,388 g, 0,54 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (3 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 2 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v DMF (10 ml), ochlazeno na teplotu 0°C a

1,08 mmol, 2 0,54 mmol, 1,0 ekvivalentů).

postupně byly přidány DIEA (0,188 ml, ekvivalentů), Boc-L-(2-naft)-OH (0,170 g, ekvivalentů) a HATU (0,205 g, 0,54 mmol,

Reakčni směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 1 hodiny. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku a výsledné reziduum bylo vyjmuto do EtOAc (50 ml) a promýváno 0,5 N HCI (50 ml), nasyceným NaHCO3 (50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva byla sušena Na2SO4, koncentrována a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (40% EtOAc v hexanu) pro získání ethyl-3-{Boc-L-(2-naft)NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (0,437 g, 88%) ve

formě bílé pěny: IR	(cm	!) 1656, 1509,	1162; A	NMR 1
směs izomerů) δ 0,88	(t,	J = 7,2), 1,27	(s), 1,30	(s) ,
1,58 (m) , 1,64-1,67	(m) ,	1,97-2,11 (m),	2,23-2,28	(m) ,

··

- 117 ·· ··

2,50	(m) ,	2,62-2, 69 (m) , 2,80	(s), 2,90 (s) ,	3,00-	-3,07 (m),
3,15-	3,20	(m) , 3,25-3, 32 (m) ,	4,18 (q, J =	7,2) ,	4,42-4,46
(m) ,	4,53-	4,56 (m) , 4,61-4,66	(m), 4,72-4,82	(m),	5,94-5,00
(m) ,	5, 63	(d, J = 15,6), 6,12	(d, J = 15,6),	, 6, 60	(dd, J =
15,6,	5,4)	, 6, 75-6, 89 (m) , 6	,70-7,08 (m),	7,19-	7,30 (m),
7,41-	7,50	(m), 7,70-7,82 (m),	8,80 (d, J	= 8,	4) ; Anal.

(C₅6H59FN₄O7) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-(2-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-G2n}-E-propenoátu

Ethyl-3-{Boc-L-(2-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-Epropenoát byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(2-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-LGln}-E-propenoát způsobem podobným způsobu, který byl popsán v Příkladu 2 uvedeném výše pro přeměnu ethyl-3-{Boc-L-Leu-LPhe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu na produkt ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-propenoát

IR (	cm 1)	3296,	1654, 151	.0; 1h NMR (DMSO	-d.6,	směs	izomer	•ů) δ
1,17	-1,24	(m) ,	1,62-1,78	(m), 2,04-2,15	(m) ,	2,38	(s) ,	2,42
(s) ,	2,71-	2,79	(m), 2,84	(s), 2,87-2,92	(m) ,	3,03	(s) ,	3,15
(d,	J = 7	,5) ,	3,98-4,06	(m), 4,08-4,12	(m) ,	4,38	-4,42	(m) ,
4,94	(m) ,	5, 03-	-5,07 (m),	5,09-5,18 (m),	5, 66	-5,82	(m) ,	6, 42
(s) ,	6, 43	(s) ,	6,66-6,81	(m) , 6,88-6,94	(m) ,	7,01	-7,06	(m) ,
7,13	-7,17	(m) ,	7,24-7,34	(m), 7,43-7,46	(m) ,	7,56	(s), 7	,76-
7,84	(m) ,	8,08	(d, J = 7,	8) , 8,60 (d, J	= 8,4	), 9,	01 (d,	J =

7,2); Anal. (C37H40FN5O7·0,75H2O) C, Η, N.

118

Příklad 14 - Příprava sloučeniny A-9: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-HÍS-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-Epropenoát

Ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-GIn)}-E-propenoát (popsaný v Příkladu 13 uvedeném výše) byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-His-NCH3~ L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoát způsobem analogickým přípravě produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(2naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-propenoátu popsaném v Příkladu 13 uvedeném výše (používajíce Boc-L-(Tr-His)-OH

namísto Boc-L-(2-naft)-OH) : IR (cm 1) 3302,	1665,	1202; !h
NMR (DMSO-d6< směs izomerů) δ 1,21 (t, J =	7,2) ,	1,70-1,78
(m) , 2,05-2,09 (m) , 2,41 (s) , 2,44 (s) , 2,69·	-3, 26	(m), 4,11
(q, J= 7,2), 4,38-4,53 (m) , 5,07-5,19 (m),	6, 51-	-5,84 (m) ,
6,44 (s), 6,48 (s), 6, 63-6, 86 (m) , 6,89-7,01	(m),	7,09-7,19
(m) , 7,23-7,42 (m) , 8,02 (d, J = 8,7), 8,15	(d,	J = 8,1),
8,59 (d, J= 8,7), 8,94 (s) , 9,04 (s), 9,14	(d,	J = 6,9) ;
Anal. (C30H36FN7O7’TFA*H2O) C, Η, N.

- 119 ·· *·

Přiklad 15 - Příprava sloučeniny A-12: ethyl-3-{ (5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-NCH3~L-(4-F-Phe)-L-Gln}-Epropenoát

(A-12)

Ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (popsaný v Příkladu 13 uvedeném výše) byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Leu-NCH3L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoát způsobem analogickým přípravě produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(2naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoátu popsané v

Příkladu 13 uvedeném výše (používajíce Boc-L-Leu-OH namísto !h NMR

Boc-L-(2-naft)-OH):	IR	(cm !) 3325,	1663, 1171
(DMSO-c/6, směs izomerů)	δ 0,64-0,67	(m), 0,86-
1,17-1,23 (m), 1,32	-1,40	(m), 1,59-1,75	(m), 1,98-
2,42 (s), 2,45 (s),	2,08	(s), 2,86-2,93	(m), 2,99
3,20 (m), 4,05-4,15	(m) ,	4,41-4,50 (m),	4,82-5,07
(d, J = 15, 9) , 5,86	(d, J = 15,9), 6,51	(s), 6,53
6,73 (m) , 6,93-6,99	(m) ,	7,09-7,21 (m),	7,26-7,31
(d, J = 7,8), 8,08	(d, J	= 7,8) , 8,41 (d, J = 8,1) ,

J = 7,2); Anal. (C30H40FN5O7·1,25CH2C12) C, Η, N.

• 9 * «

- 120

Příklad 16 - Příprava sloučeniny A-13: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(1-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-LGln}-E-propenoát

(A-13)

Ethyl-3-{B0C-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-propenoát (popsaný v Příkladu 13 uvedeném výše) byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-(1-naft)NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoát způsobem analogickým přípravě produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-(2-naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-propenoátu popsaný v

Příkladu 13 uvedeném výše, ale namísto Boc-L-(2-naft)-OH: IR NMR (DMSO-d6, směs izomerů) δ používáj íce Boc-L-(1-naft)-OH (cm^-1) 3308, 1659, 1169; Ifí

1,16-1,23 (m) , 1,61-1,78 (m) ,

1,98-2,02 (m) , 2,07-2,12 (m) ,
2,78	(s), 2,84-2,87	(m), 2,93-
3,38	(m), 4,00-4,15	(m), 4,27-
4,64	(m), 5,07-5,17	(m), 5,57-
(m) ,	6,71-6,88 (m),	6,89-6,91
(m) ,	7,50-7,58 (m),	7,73-7,78
= 8,	1), 8,13 (d, J	= 8,7), 8,

8,1); Anal. (C37H40FN5O7) C, H

2,41	(s), 2,43	(s) ,	2,77 (s),
3,03	(m) , 3,08-	3,14	(m), 3,Šl-
4,32	(m), 4,40-	4,46	ím), 4,58-
5,73	(m), 6,45	(s) ,	6,57-6,61
(m) ,	7,11-7,19	(m) ,	7,31-7,38
(m) ,	7,83-7,94	(m) ,	8,08 (d, J
62 (d	, J = 8,i;	9,	14 (d, J =
, N.

121

Příklad 17 - Příprava sloučeniny B-2: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3' -karbonyl) -L-ValT (COCH2) -L- (4-F-Phe) -L((S) -pyrrol-Ala)}-E-propenoát

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-ValT (COCH2) -L- (4-FPhe) -L-{ (N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala}-E-propenoátu

Tento meziprodukt byl připraven z terč.-butyl esteru kyseliny {2-methyl-1S-(4R-(4-fluorbenzyl)-5oxotetrahydrofuran-2S-yl)propyl}-karbamové (popsané v

Příkladu 10) a ethyl-3-{Boc-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)-(SJ pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (popsaný v Příkladu 6) způsobem analogickým přípravě ethyl-3-{Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln)}E-propenoátu (Příklad 4) uvedené výše: Rf = 0,24 (60% EtOAc v hexanech); IR (cm^-1) 3293, 1717, 1668; 1h NMR (CDCI3) δ 0,82 (d, 3H, J= 6,8), 1,01 (d, 3H, J= 6,8), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,65 (m, 2H) , 1,84-1, 96 (m, 1H) , 2,16-2,37 (m,

2H) , 2,47 (s, 3H) , 2,49-2,55 (m, 3H) , 2,85-3,01 (m, 2H) ,

3,12-3,25 (m, 3H) , 3,77 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,18 (q, 2H,

J = 7,2), 4,31-4,49 (m, 3H) , 4,65-4,70 (m, 1H) , 5,53 (dd,

1H, J = 15,7, 1, 4), 6, 39-6, 44 (m, 3H) , 6,63 (dd, 1H, J =

15,7, 5,4), 6,93-7,01 (m, 2H), 7,05-7,10 (m, 1H), 7,12-7,18 (m, 2H), 7,24 (d, 1H, J= 8,7), 7,47 (d, 1H, J= 6,5); Anal. (C40H49FN4O9·0,5H2O) C, Η, N.

122 • ····

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-ValT(C0CH2)-L-(4-F-Phe)-L-( (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu

Ethyl-3-{Boc-L-ValT(C0CH2)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát byl přeměněn na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-Lν3ΐΨ(00<3Η2)-L-(4-F-Phe)-L-( (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát způsobem analogickým přeměně ethyl-3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu na produkt ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4F-Phe)-L-( (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát popsaný v Příkladu 6 uvedeném výše: Teplota tání = 178-181°C; Rf = 0,49 (10%

CH3OH v CHCI3); IR (cm^-1) 3295, 1678 br; NMR (CDCI3) δ

0,85 (d, 3H, J= 6,8), 1,03 (d, 3H, J= 6,5), 1,30 (t, 3H, J

= 7,2), 1,51-1,62 (	m, ÍH), 1,71-1,93 (m,	2H) ,	2,27-2,40 (m,
2H), 2,47 (s, 3H) ,	2,51-2,75 (m, 3H) ,	2,82-	•2,98 (m, 2H) ,
3,11-3,24 (m, 1H),	3,26-3,42 (m, 2H), 4,18 (q,	2H, J = 7,2),
4,41-4,53 (m, ÍH),	4,63-4,72 (m, ÍH),	5,50	(d, ÍH, J =
15,4), 5,88 (s, 1H)	, 6,39 (s, ÍH) , 6,63	(dd,	ÍH, J = 15,4,
5,3), 6,92-7,03	(m, 2H), 7,08-7,31	(m,	4H); Anal.

(C31H39FN4O7) C, Η, N.

Příklad 18

Příprava sloučeniny C-2: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)pyrrol-Ala)}-E-propenoát

F (C-2)

123

Příprava meziproduktu (5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val0-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2

Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 (připraven jak je popsán v Příkladu 12 uvedeném výše, 0,91 g, 2,15 mmol) byl rozpuštěn v 1,4-dioxanu (28 ml) a byl přidán roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 14 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 14 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením a reziduum bylo vyjmuto v EtOAc (50 ml). Organická fáze byla promývána nasyceným NaHCO3 roztokem (50 ml) a

potom solankou (50 ml)	1 ,	sušena (MgSO4	) a rozpouštědlo	bylo
odstraněno pro získání	0,	66 g (kvant.)	čirého oleje.
Tento materiál byl	rozpuštěn v	CH2CI2 (20 ml) .	Byl
přidán pyridin (0,17	ml	, 2,08 mmol)	a reakční směs	byla

ochlazena na teplotu 0°C. Byl přidán 5-methylisoxazol-3karbonylchlorid (0,33 g, 2,27 mmol), rozpuštěný v 2 ml CH2CI2 a reakční směs byla zahřáta na teplotu okolí během 1 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií vymýváním pomocí gradientu směsi 5—>10% EtOAc/hexany. (5' — methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2 produkt byl získán ve formě 0,70 g (82%) bílé krystalické pevné látky: Rf = 0,20 (30% EtOAc/hexany); IR (KBr) 1745, 1661, 1553, 1186 cm’¹; Ifí NMR (DMSO-d6) δ 0,85-0,92 (m, 6H) , 2,14-2,21 (m, 1H) , 2,46 (s, 3H) , 3,05-3,19 (m, 2H) , 4,324,37 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 2H) , 5,16-5,28 (m, 3H) , 5,745,85 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 7,01-7,07 (m, 2H), 7,26-7,29 (m, 2H), 8,76 (d, 1H, J= 8,1); Anal. (C22H25N2O6F) C, Η, N.

124 » 4 <1

Příprava meziproduktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)OCH2CH=CH2 (0,67 g, 1,55 mmol) byl rozpuštěn v THF (15 ml). Bylo přidáno tetrakis(trifenylfosfin)paládium(0) (0,036 g,

0,03 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Morfolin (0,16 ml, 1,86 mmol) byl přidán po kapkách a reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo vyjmuto v 50 ml Et2O. Produkt byl extrahován dvakrát v nasyceném NaHCC>3 roztoku (50 ml) a organická fáze byla odstraněna. Vodný fáze byla okyselena na pH = 1-2 pomocí10% HCI a produkt byl extrahován dvakrát EtOAc (40 ml) . Organická fáze byla promývána solankou (50 ml), sušena (MgSO4) a koncentrována pro získání 0,57 g (95%) oleje, který v klidu krystalizoval.

Část tohoto materiálu (0,19 g, 0,50 mmol) byla rozpuštěna v DMF (3 ml). Byl přidán diisopropylethylamin (0,34 ml, 1,0 mmol), následovaný ethyl-3-{H2N-L-((17-2,4dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala) }-E-propenoátem*HCl (připraven jak je popsáno v Příkladech 4 a 6 uvedených výše, 0,19 g, 0,50 mmol). Reakční směs byla ochlazena na teplotu 0 °C. Byl přidán HATU (0,19 g, 0,50 mmol) a reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí. DMF byl odstraněn in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno EtOAc (30 ml) a organická fáze byla promývána postupně 10% HCI roztokem (25 ml), nasyceným NaHCO3 roztokem (25 ml), (25 ml) . Rozpouštědlo bylo sušeno

H2O (25 ml) a solankou (MgSO4) a filtrováno a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií

125 • ·· «· ♦ * • * • · · • ♦ ♦ ·· ·· · · • · ·♦ #· • · · • · · • 9 9

9 9 (O—>1,0% MeOH/CH2Cl2) pro získání ethyl-3-{(5' methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (0,27 g, 72%) ve formě bílé amorfní látky: Rf = 0,18 (3% MeOH/CHCl3);

IR(KBr) 1671, 1547, 1510, 1209 cm~3-; 3-H NMR (DMSO-CÍ6) δ 0,88 (d, 3H, J = 7,0), 0,93 (d, 3H, J = 7,0), 1,20 (t, 3H, J =

7,0), 1,41-1,58 (m, 2H) , 1, 79-1,98 (m, 2H) , 2,07-2,24 (m,

2H), 2,44 (s, 3H), 3,01-3,13 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,09 (q, 2H, J = 7,0), 4,24 (s, 2H), 4,30 (t, IH, J = 7,4), 4,45-4,48 (m, IH), 5,12 (t, IH, J= 6,3), 5,59 (d, IH, J= 15,8), 6,45 (dd, IH, J = 8,5, 2,2), 6, 54-6, 56 (m, 2H) ,

6,73 (dd, IH, J = 15,5, 4,8), 6, 89-6, 95 (m, 3H) , 7,20 (d, IH, J= 8,5), 7,22 (d, IH, J= 8,5), 8,08 (d, IH, J= 8,8),

8,89 (d, IH, J = 7,4) .

Příprava produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

Ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4F-Phe)-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)-pyrrol-Ala) }-Epropenoát (0,25 g, 0,33 mmol) byl rozpuštěn v CHCI3 (6 ml). Byly přidány dvě kapky vody, následované DDQ (0,10 g, 0,43 mmol) . Reakční směs byla zahřívána na teplotu 50-55°C po dobu 8 hodin. Po ochlazení byla reakční směs vlita do EtOAc (30 ml). Organická fáze byla promývána 30 ml roztoku 2:1 NaHCO3/lN NaOH a potom solankou (30 ml), sušena (MgSOzj) a koncentrována. Reziduum bylo podrobeno mžikové sloupcové chromatografií vymýváním pomocí 0->2% MeOH/CH2Cl2. Ethyl-3{ (5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-( (S)pyrrol-Ala)}-E-propenoátový produkt byl získán ve formě 0,18 g (90%) bílé amorfní pevné látky: Rf = 0,09 (3% MeOH/CHCl3);

126

IR(KBr) 1680, 1549 cm-1; NMR (DMSO-Ó6)	δ 0,	91 (d, 3H,	J =
6,6)	, 0,95 (d, 3H, J = 6,6), 1,20 (t, 3H	h J	= 7,0), 1	, 36-
1, 44	(m, 1H), 1,56-1,61 (m, 1H) , 1,74-1,	82	(m, 1H) , 1	, 94-
1, 99	(m, 2H), 2,18-2,25 (m, 1H), 2,45 (s,	3H) ,	2,98-3,18	(m,
4H) ,	4,09 (q, 2H, J= 7,0), 4,28-4,32 (m,	1H) ,	4,43-4,46	(m,
1H) ,	5,12 (m, 1H) , 5,58 (d, 1H, J = 15,	8) ,	6,56 (s,	1H) ,
6, 72	(dd, 1H, J = 15,8, 4,8), 6,91-6,97	(m,	2H), 7,21	(d,
1H,	J= 5,9), 7,23 (d, 1H, J = 5,9), 7,59	(s,	1H) , 8,06	(d,
1H,	J = 8,8), 8,92 (d, 1H, J = 7,4); Anal	- (C30H37N4O8F	) c,

Η, Ν.

Příklad 19 - Příprava sloučeniny B-3: 2-{(5'-methylisoxazol3' -karbonyl) -L-Val*ť(COCHg) -L- (4-F-Phe) -L- ( (SJ -pyrrol-Ala) ΙΕ- (g-vinyl-y-butyrolakton)

Příprava meziproduktu Boc-L-{ (N-2,4-dimethoxybenzyl)- (S)pyrrol-Ala} -E- (a-vinyl-y-butyrolaktonu)

Terč.-butyl ester kyseliny(15,3'S)-{2-(1'-(2'',4'’dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1hydroxymethylethyl}-karbamové (0,360 g, 0,881 mmol, 1 ekvivalentů) byl oxidován na odpovídající aldehyd způsobem popsaným v přípravě ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (Příklad 6). Tento aldehyd byl kombinován s 3-(trifenyl-X^-fosfanyliden)-dihydrofuran-2onem (připraven způsobem podobným způsobu, který byl popsán

127

Φ φ φφ φ φφ ·· φφφ φ φφφ φ φ φφ φ φ φ φφφφ —φ φφ φ φφφφφ φφ φφ φφφφ φφφφφφφ φφφ φφφφ φφ φφ v Baldwin a kol., J. Org. Chem. 1971, sv. 36, 1441) (0,320 g, 0,924 mmol, 1,05 ekvivalentů) ve směsi ethylenglykol dimethyl etheru (10 ml) a DMF (2 ml) . Reakční směs byla zahřívána na 100°C v olejové lázni po dobu 1,5 hodin, ponechán ochladit se na teplotu 23°C přes noc a potom zředěna MTBE (200 ml) , promývána vodou (20 ml) a solankou (20 ml), sušena nad Na2SO4 a odpařena. Reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (2,5% CH3OH v CH2CI2, potom 67% EtOAc v CH2CI2) pro získání Boc-L-{(N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala} -E- (a-vinyl-y-butyrolaktonu) ve formě oleje (0,250 g, 60%) : Rf = 0,50 (67% EtOAc v

CH2CI2); IR (cm^-1) 3307, 1754, 1678; ^-H NMR (CDCI3) δ 1,42 (s, 9H), 1,46-1,68 (m, 2H), 2,02-2,13 (m, 1H), 2,18-2,30 (m, 1H), 2,44-2,56 (m, 1H) , 2,91-3,04 (m, 1H) , 3,15-3,27 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 4,34-4,43 (m, 5H) , 5, 63-5, 69 (m, 1H) , 6,42-6,47 (m, 2H), 6,48-6,53 (m, 1H), 7,09-7,13 (m, 1H).

Příprava produktu 2-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-LValT(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-( (S)-pyrrol-Ala)}-E-(a-vinyl-ybutyrolaktonu)

Boc-L-{ (N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala}-Ε-(avinyl-y-butyrolakton) byl přeměněn na produkt 2-{ (5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-ValT(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L( (S) -pyrrol-Ala)}-E-(α-vinyl-y-butyrolakton) způsobem podobným způsobu, který byl popsán výše pro přípravu produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-LValT(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S) -pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (Příklad 17): Rf = 0,28 (5% CH3OH v CH2CI2); IR (cm^-1) 3378 br, 1749, 1678 br; !h NMR (CDCI3) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,8),

- 128 • ·· ·· · » • ·

-9 9 9

9 • 99

9 9

9 • 9 9 ·

• 9 9 · • 9 9 9

9 9 9

9 9 9

99

1,03 (d, 3H, J= 6,8), 1,45-1,55 (m, IH), 1,75-2,00 (m, 2H), 2,25-2,43 (m, 2H) , 2,46-2,59 (m, 2H) , 2,48 (s, 3H) , 2,632,72 (m, IH), 2,77-2,90 (m, 3H) , 3,06-3,26 (m, 2H) , 3,293,44 (m, 2H), 4,32-4,46 (m, 3H), 4,65-4,71 (m, IH), 5,72 (s, IH) , 6,14-6,20 (m, IH) , 6,40 (s, IH) , 6, 94-7,02 (m, 2H) ,

7,03-7,11 (m, 2H) , 7,24 (d, IH, J = 9,0), 7,60 (d, IH, J = 6,2); Anal. (C31H37FN4O7) C, Η, N.

Příklad 20 - Příprava sloučeniny B-4: ethyl-3-{(5'methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-ValT(COCH2)~^L~(4-F-Phe)-L((S) -piper-Ala)}-E-propenoát

ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-Val-L-(4-F-Phe)L-( (S) -piper-Ala) }-E-propenoátu (Příklad 9) a produktu ethyl-3-{(5'-methylisoxazol-3'-karbonyl)-L-ValT(COCH2)-L-(4F-Phe)-L-Gln}-E-propenoátu (Příklad 10) popsaným výše: Teplota tání = 161-162°C; Rf = 0,30 (5% CH3OH v CH2CI2) ; IR (cm^-1) 3295, 1713, 1649; A NMR (CDCI3) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J= 6,8), 1,30 (t, 3H, J= 7,2), 1,431,55 (m, 2H), 1,77-1,90 (m, 2H) , 1,95-2,12 (m, 2H) , 2,272,38 (m, IH), 2,44-2,58 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,66-2,76 (m, IH), 2,80-2,93 (m, 2H), 3,12-3,42 (m, 3H), 4,18 (q, 2H, J = 7,2), 4,39-4,49 (m, IH), 4,65-4,72 (m, IH), 5,50 (dd, IH, J

1H, •

to·· to

129 —· toto • to to*· MM • to* ·· · · to to • to to · ·»· »··· ·· ·* « toto « • · · · • to· · • ·· « ·« *· = 15,9, 1,6), J = 15,9, 5,3)

5,80 (s, 1H), 6,38-6,41 (m, 1H), 6,62 (dd, , 6,94-7,02 (m, 2H), 7,08-7,28 (m, 4H).

Příklady 21 až 30

V příkladech 21-30 byly připraveny následující sloučeniny (A-14) až (A-23) použitím způsobů syntézy analogickým způsobům popsaným výše pro sloučeniny obecného vzorce I-A:

(A-14) (A-15)

NH, (A-16)

N

H

CO₂CH₂CH₃ (A-17)

130 ♦ «9 9 ·

9 «99«

9 9 9 9

9 9 9 9 ·

9 9 9 9 *999 99 99

(A-18) (A-19)

(A-20)

(A-21) (A-22)

131 1 • 00 0

0 ··

CO2CH2CH3 (A-23)

Příklad 31 - Příprava srovnávací sloučeniny #2: ethyl-3(Cbz-L-Leu-L-Phe-Ii-Gln) -E-propenoát

•CO2CH2CH3 (Srovnávací sloučenina #2)

Příprava meziproduktu [Boc-L-(Tr-Gln)]-N(OMe)Me

Isobutyl chlormravenčan (4,77 ml, 36,8 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku N-a-Boc-y-trityl-Lglutaminu (18,7 g, 36,7 mmol, 1 ekvivalentů) a 4methylmorfolinu (8,08 ml, 73,5 mmol, 2,0 ekvivalentů) v CH2CI2 (250 ml) při teplotě 0°C. Reakčni směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 20 minut a potom byl přidán hydrochlorid N, O-dimethylhydroxyaminu (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekvivalentů). Výsledný roztok byl míchán při teplotě 0°C po dobu 20 minut a při teplotě 23°C po dobu 2 hodiny a potom byl rozdělen mezi vodu (150 ml) a CH2CI2 (2 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SC>4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání 40—>20% hexany v EtOAc) dalo {Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me (16,1 g, 82%) ve formě bílé pěny: IR (cm^-1) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; 3-H NMR (CDCI3) δ 1,42 (s, 9H), 1,63-1,77 (m, 1H), 2,06-2,17 (m, 1H), 2,29- 132 ί • · • · 99 99

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

999 9999 99 9 9

2,43 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, br, ÍH) ,

5,38-5,41 (m, ÍH), 7,20-7,31 (m, 15H) ; Anal. (C31H37N3O5) C,

Η, N.

Příprava meziproduktu {Boc-L-(Tr-GIn)}-H

Diisobutylaluminumhydrid (50,5 ml 1,5 M roztoku v toluenu, 75,8 mmol, 2,5 ekvivalentů) byl přidán do roztoku {Boc-L-(Tr-GIn)}-N(OMe)Me (16,1 g, 30,3 mmol, 1 ekvivalentů) v THF při teplotě -78 °C a reakční směs byla míchána při teplotě -78°C po dobu 4 hodin. Postupně byly přidány methanol (4 ml) a 1,0 M HCI (10 ml) a směs byla zahřáta na teplotu 23°C. Výsledná suspenze byla zředěna Et2O (150 ml) a byla promývána 1,0 M HCI (3 x 100 ml), polonasyceným NaHCC>3 (100 ml) a vodou (100 ml) . Organická vrstva byla sušena nad MgSOzj, filtrována a byla koncentrována pro získání surového {Boc-L-(Tr-GIn)}-H (13,8 g, 97%) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 114-116°C; IR (cm^-1) 3313, 1697, 1494; !h NMR (CDCI3) δ 1,44 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, ÍH) , 2,17-2,23 (m, ÍH), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, br, ÍH), 5,38-5,40 (m, ÍH),

7,11 (s, ÍH), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, ÍH).

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-(Tr-GIn)}-E-propenoátu

Bis(trimethylsilyl)amid sodný (22,9 ml 1,0 M roztoku v THF, 22,9 mmol, 1,0 ekvivalentů) byl přidán do roztoku triethylfosfonoacetátu (5,59 g, 22,9 mmol, 1,0 ekvivalentů) v THF (200 ml) při teplotě -78°C a výsledný roztok byl míchán po dobu 20 minut při této teplotě. Surový {Boc-L-(TrGln)}-H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (50 ml) byl přidán kanylou a reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin při teplotě -78°C, zahřívána na teplotu 0°C po dobu 10 minut a rozdělena mezi 0,5 M HCI (150 ml) a 1:1 směs EtOAc a

133

• ♦ to	• to • to	• • ·	• to ·· • · ·	•	•
to	•	to	• ·	•	•
—-·	• ·	•	« ··	•	to
to	*	•	• ·	•	•

• to • to hexanů (2 χ 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SC>4 a byly koncentrovány. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (40% EtOAc v hexanech) poskytlo ethyl-3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-propenoát (10,9 g, 88%) ve formě

bílé	pěny: IR (cm-1) 3321, 1710; !h NMR	(CDCI3) δ 1,27	(t,
3H,	7,2), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m,	1H), 1,80-1,96	(m,
1H) ,	2,35 (t, 2H, J= 7,0), 4,18 (q, 2H,	J = 7,2), 4,29	(s,
br,	1H) , 4,82-4,84 (m, 1H) , 5,88 (dd, 1H, J = 15,7, 1,	β) ,
6,79	(dd, 1H, J = 15,7, 5,3), 6,92 (s,	1H), 7,19-7,34	(m,

15H); Anal. (C33H38N2O5) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}E-propenoátu

Roztok HCl v 1,4-dioxanu (4,0 M, 20 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (1,00 g, 1,84 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (20 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 3 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (50 ml) a postupně byly přidány Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,759 g, 1,84 mmol, 1,0 ekvivalentů), HOBt (0,373 g, 2,76 mmol, 1,5 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (0,809 ml, 7,36 mmol, 4,0 ekvivalentů) a EDC (0,529 g, 2,76 mmol, 1,5 ekvivalentů) . Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 18 hodin a potom byla rozdělena mezi vodu (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a byly koncentrovány. Mžikové chromatografické čištění rezidua (5% CH3OH v CH2CI2) dalo ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoát (1,25 g, 83%) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 192-194°C; IR (cm^-1) 3295, 1696, 1678, 1655, 1519; ^XH NMR (CDCI3) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,5), *· • © • © ···©

- 134 ·· • · ·_ · · • © ··· ··©· ·· · ·· ·· « · · · • · · © • © · · • © · · ·· ·©

0,86 (d, 3H, J = 6, 5), 1,24-1,32 (m, 1H) , 1,28 (t, 3H, J =

7,2), 1,43-1, 75 (m, 3H) , 1,91-2,06 (m, 1H) , 2,20-2,38 (m, 2H) , 2,93-3,02 (m, 1H) , 3,07-3,18 (m, 1H) , 3, 95-4,02 (m, 1H), 4,17 (q, 2H, J= 7,2), 4,43-4,55 (m, 2H), 4,82-4,95 (m,

2H), 5,69 (d, 1H, J = 15,7), 6,46 (d, 1H, J= 7,5), 6,60 (d,

1H, J = 8,1), 6,69 (dd, 1H, J = 15,7, 5,1), 7,09-7,38 (xn,

27H); Anal. (C51H56N4O7) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G2n)-Epropenoátu

Trifluoroctová kyselina (20 ml) byla přidána do roztoku ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (1,25 g,

1,49 mmol, 1 ekvivalentů) a triisopropylsilanu (1,53 ml, 7,47 mmol, 5,0 ekvivalentů) v CH2CI2 (20 ml) při teplotě 23°C, což vytvořilo jasně žlutý roztok. Reakční směs byla míchána po dobu 20 minut při teplotě 23°C a během této doby se stala bezbarvou. Byl přidán tetrachlormethan (20 ml) a těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozetřeno s Et2O (20 ml) a výsledná bílá pevná látka byl shromážděna vakuovou filtrací, promývána Et2O (3 x 50 ml) a sušena na vzduchu pro získání ethyl-3-(Cbz-L-Leu-LPhe-L-G-Zn)-E-propenoátu (0,717 g, 81%) : Teplota tání = 219221°C; IR (cm^-1) 3300, 1672, 1535; ¹H NMR (DMSO-d6) δ 0,78 (d, 3H, J = 6,8), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,25-1,37 (m, 2H) , 1,42-1,54 (m, 1H) , 1,58-1, 80 (m,

2H) , 2, 02-2,09 (m, 2H) , 2,84 (dd, 1H, J= 13,2, 8,9), 2,97 (dd, 1H, J = 13,2,' 5,8), 3,93-4,01 (m, 1H), 4,11 (q, 2H, J= 7,0), 4,33-4,52 (m, 2H) , 4,97 (d, 1H, J = 12,3), 5,04 (d, 1H, J = 12,3), 5,64 (d, 1H, J = 15,9), 6,69 (dd, 1H, J =

15,9, 5,4), 6,76 (s, 1H), 7,13-7,37 (m, 11H), 7,43 (d, 1H, J • *

- 135 _ · · = 7,8), 7,99 (d, IH, J= 8,1), 8,04 (d, IH, J= 8,1); Anal. (C32H42N4O7) C, Η, N.

Příklad 32 - Příprava srovnávací sloučeniny #3: ethyl-3(Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln)-E-propenoát

sloučenina #3)

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-Epropenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 10 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (připraven jak je popsáno v Příkladu 31, 3,05 g, 5,62 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (20 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 3 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (50 ml) a postupně byly přidány Boc-L-Phe-OH (1,49 g, 5,62 mmol, 1,0 ekvivalentů), HOBt (0,911 g, 6,74 mmol, 1,2 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (1,85 ml, 16,8 mmol, 3,0 ekvivalentů) a EDC (1,29 g, 6,73 mmol, 1,2 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 18 hodin a byla potom rozdělena mezi vodu (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a byly koncentrovány. Mžikové chromatografické čištění rezidua (gradientově vymývání, 40—»50% EtOAc v hexanech) poskytlo ethyl-3-{Boc-L-Phe-L-(TrGln) }-E-propenoát (2,77 g, 71%) ve formě bílé pěny: IR (cm

!) 3306, 1706, 1661; !h NMR (CDCI3) δ 1,29 (t, 3H, J= 7,2),

1,38	(s, 9H) , 1,65-1,76 (m, IH) , 1,87-1,99	(m, IH) , 2,25-
2,27	(m, 2H), 2,94-3,01 (m, 2H) , 4,14-4,26	(m, 3H) , 4,48-
4,53	(m, IH), 4,95 (s, br, IH), 5,64 (d, IH,	J = 15,8) , 6,29
(d,	IH, J= 8,1), 6,64 (dd, IH, J = 15,8, 5,4	), 6,80 (s, br,

1H), 7,14-7,32 (m, 20H); Anal. (C42H47N3O6) C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 8 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (0,296 g, 0,429 mmol, 1 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (10 ml) při teplotě 23°C. Po uplynutí 3 hodin byly těkavé látky odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v CH2CI2 (10 ml) a potom postupně byly přidány Cbz-L-Val-OH (0,108 g, 0,430 mmol, 1,0 ekvivalentů), HOBt (0,070 g, 0,518 mmol, 1,2 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (0,142 ml, 1,29 mmol, 3,0 ekvivalentů) a EDC (0, 099 g, 0,516 mmol, 1,2 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 4 hodin a potom byla rozdělena mezi vodu (100 ml) a EtOAc (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a byly koncentrovány. Mžikové chromatografické čištění rezidua (3% CH3OH v CH2CI2) poskytlo ethyl-3-{Cbz-LVal-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoát (0,220 g, 62%) ve formě bílé pevné látky: Teplota tání = 195-198°C; IR 3284,

1689, 1646; A NMR (CDCI3) δ 0,69 (d, 3H, J= 6,9), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,63-1,74 (m, IH) , 1, 96-2,02 (m, 2H) , 2,22-2,35 (m, 2H) , 2,93 (dd, IH, J = 14,0, 7,6), 3,10 (dd, IH, G= 14,0, 6,7), 3,81-3,85 (m, IH),

4,17 (q, 2H, J= 7,2), 4,48-4,58 (m, 2H) , 4,87 (d, IH, J =

12,0), 4,94 (d, IH, J = 12,0), 5,06 (d, IH, J= 6,9), 5,67

(d, IH, J= 15,6), 6,43 (d, IH, J= 7,5), 6, 63-6, 72 (m, 2H) ,

7,10-7,40 (m, 26H); Anal. (C50H54N4O7) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln)-Epropenoátu

Trifluoroctová kyselina (5 ml) byla přidána do roztoku ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu (0,188 g, 0,229 mmol, 1 ekvivalentů) a triisopropylsilanu (0,300 ml,

1,46 mmol, 6,4 ekvivalentů) v CH2CI2 (10 ml) při teplotě 23°C, což vytvořilo jasně žlutý roztok. Reakční směs byla míchána po dobu 20 minut při teplotě 23°C a během této doby se stala bezbarvou. Byl přidán tetrachlormethan (10 ml) a těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozetřeno s Et2O (20 ml) a výsledná bílá pevná látka byla shromážděna vakuovou filtrací, promývána Et2O (3 x 50 ml) a sušena na vzduchu pro získání ethyl-3-(Cbz-L-Val-LPhe-L-Gln)-E-propenoátu (0,094 g, 71%): Teplota tání = 240°C (dekompozice); IR (cm^-1) 3263, 1686, 1640; !h NMR (DMSO-CÍ6) δ 0,73 (d, 6H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J = 7,2), 1,60-1,75 (m, 2H), 1,83-1,90 (m, IH) , 2,03-2,08 (m, 2H), 2,83 (dd, IH, J= 13,6, 8,6), 2,96 (dd, IH, J = 13, 6, 6,2), 3,79-3,84 (m, IH), 4,10 (q, 2H, J= 7,2), 4,37-4,49 (m, IH), 4,51-4,56 (m, IH) , 4,99 (d, IH, J = 12,5), 5,06 (d, IH, J = 12,5), 5,61 (d, IH, J = 15,5), 6,67 (dd, IH, J = 15,5, 5,5), 6,76 (s,

IH) , 7,13-7,36 (m, 12H) , 8,06 (d, 2H, J = 8,1); Anal.

(C31H40N4O7) C, Η, N.

Příklad 33 - Příprava sloučeniny (A-24): ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- ( (S) -pyrrol-Ala.) )-E-propenoát

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 4 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrolAla) }-E-propenoátu (připraven jak je popsáno v Příkladu 6) (0,139 g, 0,292 mmol, 1 ekvivalentů) v 1,4-dioxanu (4 ml). Po míchání po dobu 1,5 hodin byly těkavé látky odpařeny pro získání surové aminové soli, která byla používána bez čištění.

Tato aminová sůl byla rozpuštěna v CH2CI2 (7 ml) a potom postupně byly přidány Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,156 g, 0,378 mmol, 1,3 ekvivalentů), 4-methylmorfolin (0,128 ml, 1,16 mmol, 4 ekvivalentů), HOBt (0,067 g, 0,50 mmol, 1,7 ekvivalentů) a EDC (0,095 g, 0,50 mmol, 1,7 ekvivalentů). Po míchání 20 hodin byla reakční směs vlita do solanky (15 ml) a extrahována 10% CH3OH v CH2CI2 (3 x 25 ml) . Spojené organické fáze byly sušeny nad Na2SO4 a odpařeny. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (60% EtOAc v hexanech) poskytlo ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (N-2,4dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát (0,158 g, 70%) ve formě pěny: NMR (CDCI3) δ 0, 87-0, 92 (m, 6H) , 1,28 (t,

3H, J = 7,2), 1,46-1,68 (m, 5H) , 1,74-1,86 (m, 1H) , 1,972,19 (m, 2H) , 3,02 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,11-3,24 (m,

3H) , 3,78 (s, 3H) , 3,79 (s, 3H) , 4,17 (q, 2H, J = 7,2),

139

4,20-4,30 (m, 2H) , 4,35-4,45 (m, 2H) , 4,82-4,90 (m, ÍH) ,

5,07 (d, ÍH, J= 12,3), 5,13 (d, ÍH, J= 12,3), 5,36 (d, ÍH, J= 7,8), 5,82 (dd, ÍH, J= 15, 6, 1,2), 6, 42-6, 46 (m, 2H) ,

6,72 (dd, ÍH, J = 15,6, 5,3), 6,88 (d, ÍH, J = 8,7), 7,09 (d, ÍH, J= 9,0), 7,13-7,20 (m, 5H), 7,29-7,37 (m, 5H), 8,09 (d, ÍH, J = 6,5) .

Příprava produktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S)-pyrrolAla)}-E-propenoátu

Ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (N-2,4-dimethoxybenzyl)(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát (0,156 g, 0,202 mmol, 1 ekvivalentů) a dusičnan amonno ceričitý (0,277 g, 0,505 mmol, 2,5 ekvivalentů) byly kombinovány ve směsi THF/voda 2:1 (3 ml) a míchány 2 hodin. Reakční směs byla vlita do solanky (15 ml) a extrahována 10% CH3OH v CH2CI2 (3 x 25 ml). Spojené organické fáze byly sušeny nad Na2SO4 a odpařeny. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 2—>5% CH3OH v CH2CI2) poskytlo ethyl3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S)-pyrrol-Ala) }-E-propenoát (0,059 g, 47%) ve formě bělavé pevné látky: NMR (CDCI3) δ 0,85-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J= 7,2), 1,39-1,65 (m, 4H), 1,68-1,93 (m, 2H), 2,08-2,20 (m, ÍH), 2,27-2,38 (m, ÍH), 3,02-3,13 (m, 2H), 3,24-3, 32 (m, 2H) , 4,11-4,20 (m, ÍH), 4,18 (q, 2H, J = 7,2), 4,47-4,58 (m, ÍH), 4,81-4,89 (m, ÍH), 5,05 (d, ÍH, J = 12,1), 5,12 (d, ÍH, J= 12,1), 5,26 (d, ÍH, J = 8,1), 5,78 (dd, ÍH, J = 15,7, 1,2), 6,23 (s, 1H) , 6,72 (dd, ÍH, J = 15,7, 5,3), 7,13-7,25 (m, 6H) , 7,30-7,37 (m, 5H) , 7,54 (d,

ÍH, J = 7,2).

Příklad 34 - Příprava sloučeniny (A-25): ethyl-3-{Cbz-L-ValL-Phe-l·- ( (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L- ( (N-2_r4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

Způsobem analogickým způsobu použitému pro přeměnu ethyl-3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-propenoátu na ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoát , popsanému v Příkladu 31, byl ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-Epropenoát (připravený jako v Příkladu 33) kopulován s Cbz-LVal-L-Phe-OH pro získání ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu: IR (cm”¹)

3288, 1699, 1652; 3-H NMR (CDCI3) δ 0,87 (d, 3H, J = 6,8),

0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J= 7,2), 1,48-1,60 (m, 2H), 1,70-1,84 (m, IH), 1,95-2,20 (m, 3H), 3,01 (dd, IH, J =13,4, 5,6), 3,09-3,25 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,80 (s, 3H),

4,03-4,10	(m, IH), 4,17	(q, 2H, J	= 7,2), 4,24	(d,	IH, J =
14,2), 4,	33-4,44 (m, IH)	4,38 (d,	IH, J = 14,2)	>, 4,	. 85-4,94
(m, IH) ,	5,08 (d, IH,	J = 12,1),	5,14 (d, IH,	J =	Í2,l) ,
5,39 (d,	IH, J = 8,1) ,	5,80 (dd,	IH, J = 15,6,	í,2)	, 6,42-
6,47 (m,	2H), 6,70 (dd,	IH, J = 15	,6, 5,3), 6,81	(d,	1H, J =
9,0), 7,1	1-7,20 (m, 6H),	7,31-7,39	(m, 5H), 8,11	(d,	IH, J =

6,2); Anal. (C42H52N4O9) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-pyrrolAla) }-E-propenoátu

- ui-:.

Suspenze ethyl-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-( {N-2,4dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (0,215 g, 0,284 mmol, 1 ekvivalentů), DDQ (0,071 g. 0,31 mmol, 1,1 ekvivalentů) a vody (3 kapky) v CHCI3 (4 ml) byla míchána 1 hodinu při teplotě 23°C a byla potom zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu 6 hodin. Po ochlazení přes noc byl přidán další DDQ (0,019 g, 0,084 mmol, 0,3 ekvivalentů) a směs byla zahřívána na teplotu 67°C po dobu 1 hodiny a potom odpařena. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 2—»5% CH3OH v CH2CI2) poskytlo mírně nečistý materiál, který byl rozpuštěn v CH2CI2 (70 ml) a promýván nasyceným NaHCC>3 (2 x 30 ml) a solankou (30 ml) a potom sušen nad Na2SO4 a odpařen. Reziduum bylo mícháno v Et2O (10 ml) po dobu 20 minut a pevná látka byla shromážděna filtrací a sušena za vakua pro získání ethyl-3-{Cbz-L-Val-LPhe-L-((S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu (0,060 g, 35%) ve formě bělavé pevné látky: Teplota tání = 215-217°C; IR (cm^-!)

3413, 3295, 1696, 1649; 3-H NMR (CDCI3) δ 0,83 (d, 3H, J =

6,5), 0,91 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,501,59 (m, 1H) , 1,70-1,91 (m, 2H) , 2,03-2,17 (m, 2H) , 2,262,38 (m, 1H) , 3,03 (dd, 1H, J = 13,5, 6,4), 3,12 (dd, 1H, J = 13,5, 6,4), 3,21-3,34 (m, 2H) , 3,96 (dd, 1H, J = 8,3, 6,4), 4,17 (q, 2H, J = 7,2), 4,45-4,56 (m, 1H) , 4,83-4,92 (m, 1H) , 5,07 (d, 1H, J = 12,1), 5,13 (d, 1H, J = 12,1),

5,29 (d, 1H, J = 8,3), 5,77 (dd, 1H, J = 15,8, 1,2), 5,94 (s, 1H), 6,71 (dd, 1H, J = 15,8, 5,3), 6,95 (d, 1H, J = 9,0), 7,14-7,27 (m, 5H), 7,31-7,38 (m, 5H), 7,57 (d, 1H, J = 7,2); Anal. (C33H42N4O7) C, Η, N.

a * ·· *·

Příklad 35 - Příprava sloučeniny (A-26): ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- ((S)-piper-Ala)}-E-propenoát

HN—v, i 0=/ \

A

CO₂CH2CH₃

A

H

(A-26)

Příprava produktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-piperAla) }-E-propenoátu

Terč.-butyl ester kyseliny(1S,3'S)-{2-(1'-(2'',4'' dimethoxybenzyl)-2'-oxo-piperidin-3'-yl)-1-hydroxymethylethyl}-karbamové (připraven jak je popsán v Příkladu 8) byl přeměněn na produkt ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S)piper-Ala)}-E-propenoát způsobem analogickým přeměně terc.butyl esteru kyseliny (1S,3'S)-{2-(1'-(2'' , 4' ' dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1-hydroxymethylethyl}-karbamové na produkt ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S)pyrrol-Ala)}-E-propenoát, jak je popsáno v Příkladu 34: IR (cm^-1) 3422, 3307, 1713, 1649; A NMR (CDCI3) δ 0,86-0,92

(m,	6H) ,	A	28 (t	, 3H,	J =	7,2)	Z	1,38	-1,75 (m, 6H) ,	1,77-1,89
(m,	ÍH) ,	1,	96-2,	11 (m,	2H)	, 3,	07	(d,	2H, J = 6,2),	3,20-3,27
(m,	2H) ,	4,	13-4,	24 (m,	ÍH)	, 4,	18	(q,	2H, J = 7,2),	4,41-4,53
(m,	ÍH) ,	4,	76-4,	85 (m,	ÍH)	, 5,	06	(d,	ÍH, J = 12,1),	5,12 (d,
ÍH,	J =	12	,D,	5,34	(d,	ÍH,	J	= 7	,8), 5,78 (dd,	ÍH, J =
15, f	P 5,	4),	6,17	(s, 1	Η) ,	6,70	(	dd,	ÍH, J = 15,6, 5	,4), 7,00
(d,	ÍH,	J =	8,4)	, 7,13	7,2	7 (m	z	6H) ,	7,30-7,37 (m,	5H), 7,83

(d, ÍH, J = 6,8); Anal. (C35H46N4O7·0,5H2O) C, Η, N.

* «

143 • ·

Příklad 36 - Příprava sloučeniny (A-27): ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- ( (R) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát

(A-27)

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (4S,4'^rR)4-{3'-(4''-benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3'’-yl)-3'-oxopropyl}2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové

Triethylamin (6,43 ml, 46,1 mmol, 3,0 ekvivalentů) a pivaloylchlorid (1,89 ml, 15,3 mmol, 1,0 ekvivalentů) postupně byly přidány do roztoku terč.-butyl esteru kyseliny (45)-4-(2'-karboxyethyl)-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (4,20 g, 15,3 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (300 ml) při teplotě 0°C. Kalná reakčni směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 3,5 hodin a potom postupně byly přidány chlorid lithný (0,716 g, 16,9 mmol, 1,1 ekvivalentů) a (R)(+)-4-benzyl-2-oxazolidinon (2,59 g, 14,6 mmol, 0,95 ekvivalentů). Po zahřátí na teplotu 23°C a míchání po dobu 19 hodin byla reakčni směs rozdělena mezi 0,5 M HCI (150 ml) a EtOAc (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly promývány polonasyceným Na2CO3 (150 ml), sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (30% EtOAc v hexanech) pro získání fcerc.butyl esteru kyseliny (4S,4'' R)-4-{3'-(4''-benzyl-2''-oxooxazolidin-3' '-yl)-3'-oxopropyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (6,15 g, 97%) ve formě bezbarvého oleje: IR (cm

1) 2978, 1783, 1694; A NMR (CDCI3, směs izomerů) δ 1,46

144 • to ·* « r · ·♦<» to · · · • · · · ♦ • * ♦ *

(s) ,	1,58	(s) , 1,63	(s), 2,01-2,05	(m), 2,72-3,13	(m),	3,29
3,33	(m),	3,74-3,79	(m), 3,82-4,09	(m), 4,11-4,25	(m) ,	4,67
4,70	(m) ,	7,20-7,37	(m); Anal. (C23H32N2O6) C, H,	N.

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (2'JR,4S,4^ř 'R)-4-{2'-(4-benzyl-2-oxo-oxazolidin-3 karbonyl)-pent-4'-enyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3-karboxylové

Roztok terč.-butyl esteru kyseliny (4S, 4'' R)-4-{ 3'(4 -benzyl-2''-oxo-oxazolidin-3''-yl)-3'-oxopropyl}-2,2dimethyloxazolidin-3-karboxylové (6,15 g, 14,2 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (25 ml) byl přidán do roztoku bis(trimethylsilyl)amidu sodného (14,2 ml 1,0 M roztoku v THF, 14,2 mmol, 1,0 ekvivalentů) v témže rozpouštědle (50 ml) při teplotě -78°C. Reakční směs byla míchána po dobu 15 minut při teplotě -78°C a potom byl přidán allyljodid (3,90 ml, 42,6 mmol, 3,0 ekvivalentů). Po míchání po další 2 hodiny při teplotě -78°C byla reakční směs udržována při teplotě -45°C po dobu 2 hodin a potom byla rozdělena mezi 2:1 směs polonasyceného NH4CI a 5% Na2S2O3 (200 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 150 ml) . Spojené organické vrstvy byly promývány H2O (100 ml), sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (15% EtOAc v hexanech) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (2' R, 4S, 4R)-4-{2'-(4 -benzyl-2' ' -oxo-oxazolidin3''-karbonyl)-pent-4'-enyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (3,12 g, 46%) ve formě viskózní pěny: IR (cm^-1) 2978, 1782, 1685; ^H NMR (CDCÍ3, směs izomerů) δ 1,42 (s) , 1,45 (s), 1,49 (s), 1,52 (s), 1, 62-1,78 (m) , 1,80-2,01 (m) , 2,23-2,49 (m), 2,51-2,56 (m), 2,76 (dd, J = 13,3, 9,7), 3,26 (dd, J= 13,3, 3,6), 3,58-3,64 (m), 3,67 (d, J= 8,7), 3,903,98 (m) , 4,02-4,15 (m) , 4,16-4,30 (m) , 4,75-4,82 (m) , 5,065,11 (m), 5,74-5,88 (m), 7,22-7,36 (m); Anal. (C26H36N2O6) C, H,

N.

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny (1S,3'R){2-(1'-(2'',4''-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1hydroxymethylethyl}-karbamové

Ozon byl probubláván roztokem terč.-butyl esteru kyseliny (2'R,4S,4''R)-4-{2'-(4''-benzyl-2''-oxo-oxazolidin3''-karbonyl)-pent-4'-enyl}-2,2-dimethyloxazolidin-3karboxylové (3,12 g, 6,60 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (200 ml) a CH3OH (0,535 ml, 13,2 mmol, 2,0 ekvivalentů) při teplotě -78°C, dokud přetrvávala modrá barva. Reakční směs byla potom proplachována argonem, dokud se nestala bezbarvou. Byl přidán methylsulfid (4,85 ml, 66,0 mmol, 10 ekvivalentů) a směs byla míchána při teplotě -78°C po dobu 3,5 hodin a potom byla udržována při teplotě 0°C po další 1 hodinu. Po rozdělení reakční směsi mezi H2O (150 ml) a 1:1 směs EtOAc a hexanů (2 x 150 ml) byly spojené organické vrstvy sušeny nad MgSO4 a gravitačně filtrovány. Filtrát byl koncentrován za sníženého tlaku a reziduum bylo okamžitě použito bez dalšího čištění.

Výše uvedené reziduum bylo rozpuštěno v 2:1 směsi THF a potom EtOH (180 ml) při teplotě 23°C a postupně byly přidány hydrochlorid 2,4-dimethoxybenzylaminu (5,38 g, 26,4 mmol, 4,0 ekvivalentů), octan sodný (2,17 g, 26,4 mmol, 4,0 ekvivalentů) a kyanoborhydrid sodný (0,829 g, 13,2 mmol, 2,0 ekvivalentů). Výsledná suspenze byla míchána po dobu 19 hodin při teplotě 23°C a potom byla rozdělena mezi 0,5 M HCI (150 ml) a EtOAc (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promývány polonasyceným NaHCO3 (100 ml), sušeny nad Na2SO4 a • *

•
·*
•	•
•	•
•	•

koncentrovány za sníženého tlaku. Reziduum bylo ponecháno procházet krátkou silikagelovou kolonu (vymývání pomocí 50% EtOAc v hexanech) pro získání terč.-butyl esteru kyseliny (3' R,4S)—4 — {1'- (2' ' ,4' '-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin3'-ylmethyl}-2, 2-dimethyl-oxazolidin-3-karboxylové, kontaminovaného (R)-(+)-4-benzyl-2-oxazolidinonem.

Tento materiál byl rozpuštěn v CH3OH (80 ml) a byl přidán TsOH«H2O (0,251 g, 1,32 mmol, 0,20 ekvivalentů). Reakční směs byla zahřívána na teplotu 50°C a byla udržována při této teplotě po dobu 4 hodin. Po ochlazení na teplotu 23 °C byla reakční směs koncentrována za sníženého tlaku na objem přibližně 20 ml a byla rozdělena mezi polonasycený NaHCC>3 (150 ml) a 9:1 směs CH2CI2 a CH3OH (2 x 150 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad Na2SC>4 a koncentrovány za sníženého tlaku. Čištění rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (3% CH3OH v CH2CI2) poskytlo terč.-butyl ester kyseliny (1S,3^ZR)-{2-(1'-(2'’,4'’dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'-yl)-1hydroxymethylethyl}-karbamové (0,92 g, 34%) ve formě pěny:

IR	(cm-1) 3347	(br)	, 2937, 1669; !h	NMR	(CDCI3) δ 1,44	(s,
9H)	, 1,62-1,77	(m,	2H), 1,94-2,04	(m,	IH) ,	2,15-2,26	(m,
IH)	, 2,40-2,50	(m,	IH) , 3,13-3,24	(m,	2H) ,	3,56-3,77	(m,
3H)	, 3,80 (s,	6H),	3,82-4,16 (m,	IH) ,	4,37	(d, IH,	J =
14,	3), 4,45 (d,	IH,	J = 14,3), 5,49	(d,	IH, J	= 7,8), 6	,42-

6,45 (m, 2H), 7,08-7,11 (m, IH) ; Anal. (C21H32N2O6·0,25H2O)

C, Η, N.

Příprava meziproduktu ethyl-3- {Boc-L- ((řř-2,4dimethoxybenzyl) - (R) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

- 147 • 0« « ♦ · _ ♦ · • · *«« 0000

Způsobem analogickým přeměně terč.-butyl esteru kyseliny (1S,3' S)-{2-(1'-(2'', 4''-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3'yl)-l-hydroxymethylethyl}-karbamové na ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4dimethoxybenzyl) - (S) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát, popsané v

Příkladu 33, byl přeměněn terč.-butyl ester kyseliny (1S,3'R){2- (1' - (2 , 4-dimethoxybenzyl)-2'-oxo-pyrrolidin-3' -yl)-1hydroxymethylethylj-karbamové na ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)- (R)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát: IR (cm^-!) 3307,

1713, 1674; 3-H NMR	(CDCI3) δ 1,28	(t,	3H, J = 7,2), 1,45 (s	, 9H),
1,57-1,82 (m, 2H),	2,02-2,19 (m,	2H)	, 2,42-2,55 (m, ÍH),	3,11-
3,25 (m, 2H) , 3,79	(s, 3H), 3,80	(s,	3H), 4,19 (q, 2H, J =	7,2),
4,32-4,50 (m, 3H),	5,97 (dd, ÍH,	J =	15,7, 1,4), 6,38 (d,	ÍH, J
- 7,8), 6,42-6,47	(m, 2H), 6,86	(dd,	ÍH, J = 15,7, 5,1) ,	7,08-
7,13 (m, ÍH); Anal.	(C25H36N2O7)	C, H,	N.

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-({N-2,4dimethoxybenzyl) - (R) -pyrrol-Ala) }-E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 6 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Boc-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)-(R)-pyrrolAla) }-E-propenoátu (0,233 g, 0,489 mmol, 1 ekvivalentů) v 1,4-dioxanu (6 ml). Po míchání 1,5 hodiny byly těkavé látky odpařeny pro získání surové aminové soli, která byla používána bez čištění.

Tato aminová sůl byla rozpuštěna v DMF (4 ml) a ochlazena na teplotu 0°C. Postupně byly přidány Cbz-L-Leu-LPhe-OH (0,202 g, 0,490 mmol, 1 ekvivalentů), DIEA (0,255 ml,

1,46 mmol, 3 ekvivalentů) a HATU (0,186 g, 0,489 mmol, 1 ekvivalentů). Po míchání 1,5 hodiny byla reakční směs zředěna MTBE (100 ml), promývána 5% KHSO4, nasyceným NaHCC>3 a solankou (10 ml), sušena nad MgSO4 a odpařena. Čištění

9*

9·

• 9 • · 9 «999 •

• 9 9 9 9 9 9 9 rezidua mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 60-»75% EtOAc v hexanech) poskytlo ethyl-3-{Cbz-LLeu-L-Phe-L- ( (N-2,4-dimethoxybenzyl)- (R)-pyrrol-Ala)}-Epropenoát (0,208 g, 55%) ve formě bílé pevné látky (po odpaření z Et2<0): Teplota tání = 174-176°C; IR (cm^-1) 3287, 1713, 1649; 1h NMR (CDCI3) δ 0,84-0,91 (m, 6H) , 1,29 (t, 3H,

J = 7,2), 1, 42-1, 66 (m, 4H) , 1, 67-1,77 (m, 1H) , 1,84-1,95 (m, 1H), 2,20-2,12 (m, 1H) , 2,33-2,45 (m, 1H), 3,04-3,23 (m,

4H)	, 3	,78 (s, 3H), 3,	79 (s, 3H), 4,15-4,29 (m, 1H),	4,17	(q,
2H,	J	= 7,2), 4,31	(d, 1H, J = 14,5) , 4,40 (d,	1H,	j =
14,	5) ,	4,67-4,84 (m,	2H) , 5,05 (d, 1H, J = 12,1) ,	5,11	(d,
1H,	J	= 12,1), 5,35	(d, 1H, J = 8,1) , 5,76 (dd,	1H,	J =
15,	6,	1,6), 6,42-6,46	(m, 2H) , 6,74-6,81 (m, 1H),	6, 75	(dd,
1H,	J	= 15,6, 5,0),	7,06-7,10 (m, 1H) , 7,15-7,24	(m,	5H),

7,29-7,36 (m, 5H), 8,79 (d, 1H, J = 5,9); Anal. (C43H54N4O9) C,

Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R) -pyrrolAla) }-E-propenoátu

Ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-dimethoxybenzyl)(R) -pyrrol-Ala)}-E-propenoát byl přeměněn na produkt ethyl3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (R) -pyrrol-Ala) }-E-propenoát způsobem analogickým přeměně ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4dimethoxybenzyl)-(S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoátu na produkt ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-pyrrol-Ala)}-E-propenoát

popsané v	Příkladu 34:	IR	(cm 1)	3290, 1702, 1642;	!h NMR
(CDCI3) δ	0,85-0,92 (m,	6H)	, 1,30	(t, 3H, J = 7,2) ,	1,35-
1,49 (m,	1H) , 1,52-1,71	(m,	3H) ,	1,73-1,94 (m, 2H) ,	2,15-
2,26 (m,	1H) , 2,32-2,43	(m,	1H) ,	3,02-3,18 (m, 2H) ,	3,19-
3,29 (m,	2H), 4,15-4,27	(m	, 1H) ,	4,18 (q, 2H, J =	7,2) ,

• 9

- 149

9999 ·9 · · « 9

9 «

9

9·· 9999 •

· 9 9 9 9 9 9

4,65-4,74 (m, IH) , 4,76-4,85 (m, IH) , 5,07 (d, IH, J =

12,3), 5,12 (d, IH, J= 12,3), 5,18-5,25 (m, IH), 5,76-5,84 (m, 2H) , 6, 64-6,78 (m, 2H) , 7,15-7,40 (m, 10H), 7,91-7,98 (m, IH) ; Anal. (C34H44N4O7) C, Η, N.

Příklad 37 - Příprava sloučeniny (A-28): ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L-1- (2-imidazolidozi) Ala} -E-propenoát

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-BocamínoAla)-E-propenoátu (Karbethoxymethylen)trifenylfosforan (1,20 g, 3,28 mmol, 1,2 ekvivalentů) byl přidán do roztoku Cbz-L-Leu-LPhe-L-N-Boc-aminoalaninalu (připraven jak je popsáno ve Webber a kol., J. Med. Chem. 1998, vol. 41, 2786) (1, 60 g,

2,73 mmol, 1 ekvivalentů) v THF (55 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě okolí přes noc. Těkavé látky byly potom odstraněny in vacuo a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií vymývajíce (gradientově vymývání, 0-»l,5% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-PheL-N-Boc-aminoAla}-E-propenoátu (0,968 g, kontaminovaný trifenylfosfinoxidem). Tento materiál byl používán bez dalšího čištění.

- 150 • *9 *: · :

• · » — · • ♦ · 9 · * <

1« «* ·♦ » · · · · • * * · · * ,· · · · ’ ·♦ ·· roztoku propenoátu rozpouštědle

Příprava meziproduktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (2-Boc-2azainoethyl) aminoAla} -E-propenoátu

Roztok HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 10 ml) byl přidán do ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Boc-aminoAla}-E(0,95 g, 1,46 mmol, 1 ekvivalentů) v témže (20 ml) při teplotě 23°C. Reakční směs byla míchána při této teplotě po dobu 1,5 hodin a potom byl přidán další HCI v 1,4-dioxanu (4,0 M, 10 ml). Po míchání přes noc byly těkavé látky odstraněny in vacuo a reziduum bylo rozetřeno s Et2O (20 ml) . Výsledné pevné látky byly filtrovány a byly promýván Et2O (3 x 10 ml) pro získání surové aminové soli (0,63 g 73%, 1,05 mmol) ve formě bílé pevné látky.

Tento materiál byl rozpuštěn v CH3OH (10 ml) a potom postupně byly přidány N-Boc-2-aminoethanal (připraven jak je popsáno v Bischofberger a kol., J. Org. Chem. 1988, vol. 53, 3457) (0,19 g, 1,16 mmol, 1,1 ekvivalentů) a NaBH3CN (0,069 g, 1,05 mmol, 1,0 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána při teplotě 23°C přes noc a potom těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Reziduum bylo rozpuštěno v EtOAc (25 ml) a organická vrstva byla promývána vodou (25 ml) a solankou (25 ml) a potom sušena nad MgSO4 a koncentrována. Reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 0->3% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2aminoethyl)aminoAla}-E-propenoátu (0,32 g, 44%) ve formě bílé amorfní látky: Rf = 0,20 (5% CH3OH v CHCI3) ; IR (cm^-1) 1712, 1649, 1537, 1252, 1175; !h NMR (DMSO-dg) δ 0,79 (d,

3H, J= 6,6), 0,82 (d, 3H, J= 6,6), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,26-1,37 (m, 13H), 1,46-1,54 (m, 1H) , 2,56-2,60 (m, 2H),

• « • ·

8,1), 7,97 (d, IH, J = 7,0), 8,07 (d, IH, J = 7,0); Anal.

(C37H53N5O8* 0,50H2O) C, Η, N.

Příprava produktu ethyl-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-l- (2izaidazolídon) Ala} -E-propenoátu

TFA (0,8 ml) byl přidán do roztoku ethyl-3-{Cbz-L-LeuL-Phe-L- (2-Boc-2-aminoethyl)aminoAla}-E-propenoátu (0,29 g, 0,42 mmol, 1 ekvivalentů) v CH2CI2 (8 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 2 hodin. Těkavé látky byly odstraněny in vacuo a reziduum bylo rozpuštěno v EtOAc (25 ml) a promýváno nasyceným NaHCO3 roztokem (25 ml), vodou (25 ml) a solankou (25 ml) . Organická vrstva byla sušena MgSO4 a byla koncentrována pro získání surového diaminu (0,23 g, 92%, 0,39 mmol) ve formě snědé amorfní pevné látky.

Tento materiál byl rozpuštěn v THF (4 ml) , byl přidán karbonyldiimidazol (0,06 g, 0,36 mmol, 0,92 ekvivalentů) a reakční směs byla míchána při teplotě 23°C po dobu 3,5 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo čištěno mžikovou sloupcovou chromatografií (gradientově vymývání, 0->2% CH3OH v CH2CI2) pro získání ethyl-3-{Cbz-LLeu-L-Phe-L-2-(2-imidazolidon)Ala}-E-propenoátu (0,12 g, 54%) ve formě bílé amorfní látky: Teplota tání = 161-164°C; Rf = 0,21 (5% CH3OH v CHCI3) ; IR (cm^-1) 1701, 1647, 1535, 1277; lH NMR (DMSO-d6) δ 0,79 (d, 3H, J= 6,6), 0,82 (d, 3H,

J = 6,6), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,27-1,35 (m, 2H) , 1,481,52 (m, IH), 2,79-2,86 (m, IH) , 2,92-3,05 (m, 3H) , 3,14-

- 152

9

9

9999 • 9 9 · 9

9 9

9 9

3,19	(m,	2H), 3,25-3,30	(m, 2H), 3,98-4,03 (m, 1H)	, 4,	10 (q,
2H,	J =	7,0), 4,47-4,49	(m, 1H) , 4,59-4,63 (m,	1H) ,	4,97-
5, 02	(m,	2H), 5,72 (d,	1H, J = 15,8) , 6,37 (s,	1H)	, 6,71
(dd,	1H,	J = 15, 8, 5,5),	7,15-7,39 (m, 10H), 7,42	(d,	1H, J
= 8,	1) ,	8,00 (d, 1H, J =	: 8,1), 8,18 (d, 1H, J = 8	,D ;	Anal.

(C33H43N5O7) c, Η, Ν.

Příklad 38 - Syntéza meziproduktů ¢1, Q2 a Q3

Q1 Q2 Q3

Příprava meziproduktu l-acetyl-3-(trifenylfosfanylidin)pyrrolidin-2-onu

2,4-dibrombutyrid (připraven postupem podle Ikuta a kol., J. Med. Chem, 1987, sv. 30, 1995) (46,1 g, 188,2 mmol) v THF (1L) byl ochlazen na teplotu 0°C a zpracován roztokem lithium bis(trimethylsilylamidu) (40,9 g, 244,6 mmol) v THF (200 ml). Roztok byl udržován při teplotě 0°C po dobu 2,5 hodin a potom vlit do solanky (800 ml) , extrahován ethylacetátem (2 L) a sušen (MgSO4). Odpaření dalo 25,5 g 3brom-pyrrolidin-2-onu ve formě hnědého oleje. Tento materiál byl zpracován Ac20 (76 ml) a zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 5 hodin. Odpaření následované čištěním (silikagelová filtrace, vymývací rozpouštědlo EtOAc) dalo 28 g l-acetyl-3-brom-pyrrolidin-2-onu ve formě tmavého oleje. Byly přidán THF (272 ml) a trifenylfosfin (42,8 g, 163,3 mmol) a výsledný roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 8 hodin. Po ochlazení na teplotu 23°C se vytvořil precipitát l-acetyl-3-(trifenylfosfanyl)*

- 153 ·♦· ·· ·· * · • · « • · · • · · * • · · • ♦ pyrrolidin-2-on bromidu a byl shromážděn filtrací (27,1 g) . Koncentrace matečné tekutiny, následovaná ochlazením na teplotu 0°C dala dalších 6,6 g. Spojené materiály v CH2CI2 (1 L) byly promývány IN NaOH (100 ml) a potom solankou (2 x 100 ml). Odpaření organické vrstvy dalo 26,9 g (37% celkově) l-acetyl-3-(trifenylfosfanylidine)-pyrrolidin-2-onu ve formě snědého oleje. A NMR (CDCI3) δ 7,76-7,32 (15H, m) , 3,903,85 (2H, m), 2,50 (3H, s), 2,56-2,30 (2H, m).

Příprava meziproduktu methylesteru kyseliny 2-tbutoxykarbonyl-3-(terč.-butyldimethylsilanoxy)-propionové

Methylester Boc-D-serinu (20,0 g, 91,2 mmol) v DMF (300 ml) byl zpracován imidazolem (18,6 g, 273,7 mmol) a potom ' TBSC1 (13,0 g, 86,7 mmol) . Roztok byl udržován při teplotě okolí po dobu 8 hodin a potom promýván nasyceným vodným chloridem amonným (300 ml) a extrahován ethylacetátem (800 ml) . Organická vrstva byla promývána solankou (300 ml) a potom sušena (MgSOzj), což dalo 30,2 g (100%) methylesteru kyseliny 2-t-butoxykarbonyl-3-(terč.-butyldimethylsilanoxy)propionové ve formě bezbarvého oleje. A NMR (CDCI3) δ 5,32 (IH, d, J = 8,3), 4,33 (IH, dt, J= 8,8, 2,7), 4,02 (IH, dd, J = 10,1, 2,6), 3,80 (IH, dd, J= 9,8, 3,1), 3,72 (3H, s), 1,43 (9H, s), 0,85 (9H, s), 0,0 (6H, s).

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny {1-(1acetyl-2-oxo-pyrrolidin-3-ylidenmethyl)-2-(terč.butyldimethylsilanyloxy)-ethyl}-karbamové

Methylester kyseliny 2-t-butoxykarbonyl-3-(terč.butyldimethylsilanoxy)-propionové (12,7 g, 38,0 mmol) v toluenu (190 ml) byl ochlazen na teplotu -78°C a zpracován

- 154 y ·*>· • * ·· «· • * roztokem diisobutylaluminumhydridu (15,6 ml, 87,4 mmol) v toluenu (175 ml) . Vnitřní teplota byla udržována pod -70°C. Roztok byl udržován při teplotě -78°C po dalších 90 minut a potom byl přidán methanol (7,7 ml, 190 mmol). l-Acetyl-3(trifenylfosfanylidin)-pyrrolidin-2-on (11,1 g, 28,6 mmol) v CH2CI2 (50 ml) byl přidán při teplotě -78°C a výsledný roztok byl ponechán zahřát se na teplotu okolí a udržován po dobu 30 minut. Roztok vínanu sodno-draselného (150 g) ve vodě (600 ml) byl přidán a míchán intenzívně po dobu 30 minut. Směs byla extrahována ethylacetátem (4 x 250 ml), sušena (MgSC>4) a odpařena. Čištění silikagelovou chromatografií dalo 7,04 g (60%) terč.-butyl esteru kyseliny {1-(l-acetyl-2-oxo-pyrrolidin-3-ylidenmethyl)-2-(terč.butyldimethylsilanyloxy)-ethyl}-karbamové ve formě bezbarvého oleje. A NMR (CDCI3) δ 6,59 (IH, dt, J = 8,7, 2,9), 4,98 (IH, d, J = 6,8), 4,37-4,25 (IH, m), 3,77 (2H, t, J = 7,3), 3, 70-3,58 (2H, m) , 2,90-2,80 (IH, m) , 2,75-2,60 (IH, m), 5,53 (3H, s), 1,41 (9H, s), 0,87 (9H, s), 0,04 (6H, s) .

Příprava meziproduktu terč.-butyl ester kyseliny {2hydroxy-1-(2-oxo-pyrrolidin-3-ylidenmethyl)-ethyl}-karbamové

Terč.-butyl ester kyseliny {1-(l-acetyl-2-oxopyrrolidin-3-ylidenmethyl)-2-(terč.butyldimethylsilanyloxy)-ethyl}-karbamové (9,18 g, 22,2 mmol) v THF (150 ml) byl zpracován TBAF (22,2 ml 1M roztoku v THF, 22,2 mmol) při teplotě 0°C a udržován po dobu 1 hodiny. Byl přidán nasycený vodný roztok chloridu amonného a míchán po dobu 10 minut a potom roztok byl extrahován ethylacetátem (2 x 200 ml) . Organická vrstva byla sušena (MgSO4) a potom byla odpařena. Čištění silikagelovou

- 153 to <· · • to •

to · r

to to ·· *·_λ • ·· · • · · * • ·· * • »· ♦ ·· ·* chromatografií dalo 4,82 g (73%) bezbarvého oleje. Tento materiál byl vyjmut v methanolu (160 ml), zpracován uhličitanem draselným (223 mg, 1,62 mmol) a udržován po dobu 1 hodin při teplotě zpětného toku. Směs byla potom zpracována pevnou kyselinou citrónovou (311 mg, 1,62 mmol) a byl přidán ethylacetát (800 ml) . Roztok byl filtrován přes silikagel. Odpaření dalo 4,30 g (73% celkově) terč.-butyl esteru kyseliny {2-hydroxy-l-(2-oxo-pyrrolidin-3ylidenmethyl)-ethyl}-karbamové ve formě bezbarvého oleje. 3-H NMR (CDCI3) δ 7,03 (1H, br s) , 6,35 (1H, dt, J= 8,6, 2,6), 5,37 (1H, d, J = 6, 5), 4,40-4,20 (1H, m) , 3,66 (br s, 3H) ,

3,4 (2H, t, J = 6,7), 3,10-2,80 (1H, m), 2,80-2,70 (1H, m),

1,41 (9H, s).

Příprava meziproduktu terč.-butyl esteru kyseliny {2hydroxy-1-(2-oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)-ethyl}-karbamové (směs diastereomerů) (Ql)

Terč.-butyl ester kyseliny {2-hydroxy-l-(2-oxopyrrolidin-3-ylidenmethyl)-ethyl}-karbamové (4,30 g, 16,8 mmol) v ethylacetátu (168 ml) byl zpracován 5% paládiem na uhlí (1,78 g) a hydrogenován při okolním tlaku po dobu 1 hodiny. Směs byla filtrována a potom odpařena pro získání

3,92 g (91 %) terč.-butyl esteru kyseliny{2-hydroxy-l-(2oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)-ethyl}-karbamové ve formě bezbarvého oleje (1,5:1 směs diastereomerů): 3-H NMR (CDCI3) δ 6,99 (1H, s), 5,49 (1H, d, J = 8,4), 3,70-3, 50 (3H, m) , 3, 38-3,20 (2H, m) , 2,60-2,20 (2H, m) , 2,00-1,70 (2H, m) ,

1,65-1,45 (1H, m), 1,37 (9H, s).

156

*'3	• ·«	··
• ·		• · «		•	a	*
•	•	• ·		•	•	•
• ·	•	» * ·			•	•
•	«	• ·		•	•	•
			··		«·

Příprava meziproduktu terč.-butyl ester kyseliny {2-hydroxy1-(R-2-oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)-ethyl}-karbamové (Q2)

Terč.-butyl ester kyseliny {2-hydroxy-l-(2-oxopyrrolidin-3-ylidenmethyl)-ethyl·}-karbamové (98 mg, 0,39 mmol) v methanolu (5 ml) byl zpracován (R)-BINAP-RuCl (19 mg, 0,02 mmol) a potom vložen pod vodíkovou atmosférou (1200 psi) při teplotě 50°C po dobu 48 hodin. Roztok byl odpařen a potom filtrován přes silikagel (10% MeOH-EtOAc vymývací rozpouštědlo). Odpaření dalo 75 mg (75%) terč.-butyl ester kyseliny { 2-hydroxy-l-(R-2-oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)ethyl}-karbamové ve formě bezbarvého oleje (9:1 směs diastereomerů) : ^-H NMR (CDCI3) δ 6,32 (1H, br s) , 5,4O(1H, d, J = 1,5), 3,82 (1H, br s) , 3,71-3,63 (2H, m) , 3,34-3,31 (2H, m) , 2,45-2,30 (2H, m) , 2,09-1, 86 (2H, m) , 1,70-1,63 (1H, m), 1,42 (9H, s).

Příprava meziproduktu terč.-butyl ester kyseliny {2-hydroxy1-(S-2-oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)-ethyl}-karbamové (Q3)

Terč.-butyl ester kyseliny {2-hydroxy-l-(2-oxopyrrolidin-3-ylidenmethyl)-ethyl}-karbamové (0,10 g, 0,39 mmol) v methanolu (5 ml) byl zpracován (S)-BINAP-RuCl (19 mg, 0,02 mmol) a potom vložen pod vodíkovou atmosféru (1200 psi) při teplotě 50°C po dobu 48 hodin. Roztok byl odpařen a potom filtrován přes silikagel (10% MeOH-EtOAc vymývací rozpouštědlo). Odpaření dalo 74 mg (74%) terč.-butyl esteru kyseliny {2-hydroxy-l-(S-2-oxy-pyrrolidin-3-ylmethyl)ethyl}-karbamové ve formě bezbarvého oleje (9:1 směs diastereomerů): 1h NMR (CDCI3) δ 6,66 (1H, br s), 5,51 (1H, d, J = 8,2), 3,72-3, 57 (3H, m) , 3,34-3,31 (2H, m) , 2,52-2,33

157 (1H, m),

1,62-1,50 (1H, ·· ·· ·· ®· • · * · · · « · · · · • · · · · · a · · · · ··· ···· ···· ·* (2H, m) , 2,20-1,86 (1H, m),

m), 1,40 (9H, s).

1,86-1,70

Výsledky biochemických a biologických testů prováděných za použití různých sloučenin podle předloženého vynálezu jsou popsány dále.

Biochemické a biologické hodnocení

Inhibice 3C proteázy rhinovirů

Byly připraveny zásobní roztoky (50 mM, v DMSO) různých sloučenin; zředění byly provedeny v témže rozpouštědle. Byly připraveny rekombinantní 3C proteázy rhinovirů (viz Birch a kol., Purification of recombinant human rhinovirus 14 3C protease expressed in Escherichia coli, Protein Expr. Pur. 1995, 6(5), 609-618) ze serotypů 14, 16 a 2 postupem podle následujících standardních chromatografických procedur: (1) iontová výměna použitím Q Sepharose Fast Flow od společnosti Pharmacia; (2) afinitní chromatografie použitím Affi-Gel Blue od společnosti Biorad; a (3) rozdělení podle velikosti použitím Sephadex G-100 od společnosti Pharmacia. Každý testovací vzorek obsahoval 2% DMSO, 50 mM tris pH 7,6, 1 mM EDTA, testovanou sloučeninu v uvedené koncentraci, přibližně ΙμΜ substrátu a 50-100 nM proteázy. Hodnoty k_obs/I byly získány z reakcí iniciovaných spíše přidáním enzymu než substrátu. RVP aktivita byla měřena ve fluorescenčním testu přenosu resonanční energie. Substrát byl (N-terminální) DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly) -EDANS . V nerozštěpeném peptidu byla EDANS fluorescence zhášena proximální DABCYL skupinou. Pokud byl peptid rozštěpen, zhášení bylo omezeno a aktivita byla měřena jako vzrůst

158 fluorescenčního signálu. Data byla analyzována použitím standardních nelineárních programů (Enzfit) a jsou ukázána v Tabulkách 1 a 2 uvedených dále. V Tabulce 1 jsou všechna data pro 3C proteázu rhinovirů HRV serotypu-14 (vytvořen z infekčního cDNA klonu, který zkonstruoval Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin). Tabulka 2 ukazuje aktivitu inhibice proteázy sloučenin proti proteázám několika rhinovirů jiných serotypů než je RVP serotyp-14. Data v sloupci označeném k_obs/[I] byla měřena z křivek postupu v enzymových výchozích experimentech.

Antirhinovirální test v buněčné kultuře Hl-HeLa

V tomto testu ochrany buněk byla měřena schopnost sloučenin ochránit buňky proti HRV infekci pomocí metody XTT redukce barviva, kterou popsali Weislow a kol., J. Nati. Cancer Inst. 1989, sv. 81, 577-586.

Buňky Hl-HeLa byly infikovány HRV-14 s multiplicitou infekce (m.o.i.) 0,13 (počet částic viru/počet buněk) nebo byla infekce pouze imitována médiem. Infikované buňky nebo buňky s imitací infekce byly resuspendovány na 8 x 10^ buněk na ml a inkubovány s vhodnými koncentracemi sloučenin určených k testování. O dva dny později byl do testovacích destiček přidán XTT/PMS a množství vytvořeného formazanu byl určováno spektrofotometricky při vlnových délkách 450/650 nm. Hodnota EC50 byla vypočtena jako koncentrace sloučenin, která zvýšila procento vytváření formazanu u buněk ošetřených sloučeninou a infikovaných virem na 50% hodnoty vytváření formazanu u buněk bez sloučeniny a s imitací infekce. 50% cytotoxická dávka (CC50) byla vypočtena jako koncentrace sloučeniny, která snížila procento vytvořeného

9 formazanu u buněk ošetřených sloučeninou a s imitací infekce na 50% hodnoty vytváření formazanu u buněk bez sloučeniny a s imitací infekce. Terapeutický index (TI) byl vypočten dělením hodnoty CC50 hodnotou EC50·

Všechny kmeny lidského rhinoviru (human rhinovirus HRV) pro použití v tomto testu byly zakoupeny od American Type Culture Collection (ATCC) s výjimkou HRV serotyp-14 (vytvořen z infekčního cDNA klonu, který zkonstruoval Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin). Zásobní HRV byly rozmnoženy a virální testy byly prováděny s buňkami HlHeLa (ATCC). Buňky byly pěstovány v minimálním esenciálním médiu s 10% fetálním hovězím sérem, dodávaném společností Life Technologies (Gaithersburg, MD).

Sloučeniny byly testovány proti kontrolním sloučeninám WIN 51711, WIN 52084 a WIN 54954 (získané od společnosti Sterling-Winthrop Pharmaceuticals), Pirodavir (získané od společnosti Janssen Pharmaceuticals) a Pleconaril (připravené způsobem popsaným v Diana a kol., J. Med. Chem 1995, vol. 38, 1355). Antivirální data získaná pro testované sloučeniny jsou ukázány v Tabulkách 1 a 3, kde jsou všechna data pro HRV serotyp-14 pokud není v závorkách uvedeno jinak. Označení ND ukazuje, že hodnota nebyla pro danou sloučeninu určena.

• ·

• · • ·

- 160

Tabulka 1. Aktivita vůči. HRV Serotyp-14
Sloučenina	Inhibice proteázy kobs/ ti]	Ochrana buněk EC50
Příklad 31 (Srovnávací sloučenina #2)	25,000	0, 610
Příklad 35 (A-26)	239,000	0, 030
Příklad 33 (A-24)	257,000	0,100
Příklad 36 (A-27)	18,000	1, 600
Příklad 32 (Srovnávací sloučenina #3)	62,500	0, 380
Příklad 34 (A-25)	500,000	0,030
Příklad 5 (A-4)	270,000	0,100
Příklad 8 (A-7)	980,000	0,004
Příklad 7 (A-6)	248,000	0, 420
Příklad 9 (A-8)	900,000	ND
Příklad 6 (A-5)	1,500,00	0, 005
Příklad 12 (C-l)	68,400	0,100
Příklad 18 (C-2)	270,000	0,002
Příklad 10 (B-l)	240,000	0,100
Příklad 20 (B-4)	500,000	<0,030
Příklad 17 (B-2)	1,090,00	0,005
Příklad 1 (Srovnávací sloučenina #1)	573	>320,000
Příklad 2 (A-l)	260,000	0,250
Příklad 3 (A-2)	46,900	1,600
Příklad 4 (A-3)	310,000	0,050
Příklad 11 (A-10)	108,000	0,14
Příklad 13 (A-ll)	108,000	0,03

- 161

Tabulka 1. Aktivita vůči. HRV Šerotyp-14
Sloučenina	Inhibice proteázy kobs/ [I]	Ochrana buněk EC50
Příklad 14 (A-9)	66,000	1,80
Příklad 15 (A-12)	59,300	0,40
Příklad 16 (A-13)	95,800	0,20
Příklad 19 (B-3)	465,000	0,18
Příklad 21 (A-14)	54,500	0,48
Příklad 22 (A-15)	237,100	0,22
Příklad 23 (A-16)	172,800	0,45
Příklad 24 (A-17)	167,000	0,06
Přiklad 25 (A-18)	292,000	1,50
Příklad 26 (A-19)	27,750	25,10
Příklad 27 (A-20)	1,020	12,60
Příklad 28 (A-21)	17,800	2,50
Příklad 29 (A-22)	2,400	ND
Příklad 30 (A-23)	26,000	ND

- 162

Tabulka 2. Aktivita vůči dalším serotypům HRV
Sloučenina	Serotyp rhinoviru	kobs/I (M-lsec-1)
Srovnávací	(16)	6,500
v	(89)	3,400
v	(2)	2,000
Srovnávací	(2)	8,000
\\	(16)	16,900
(A-24)	(2)	31,000

Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo	HRV	EC50 (PM)	CC50 (pM)	TI
Srovnávací		>320,000	>320	-
(A-1)		0,250	>100	>400
V	(2)	0,410	ND	>243
	(IA)	1,000	ND	>100
	(89)	0,220	ND	>450
(A-2)		1,600	>100	>63
(A-3)		0,050	>10	>200
(A-4)		0,100	>100	>1000
(A-5)		0,005	>10	>2000
n	(2)	0,010	ND	>1000
v	(16)	0,020	ND	>500
v	(39)	0,020	ND	>500
\λ	(89)	0,020	ND	>500
	(10)	0,050	ND	>200

• 9

- 163

Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo	HRV	EC50 (PM)	CC50 (pM)	TI
V	(IA)	0, 030	ND	>333
	(3)	0,050	ND	>200
	(9)	0, 040	ND	>250
V	(12)	0, 060	ND	>166
	(13)	0,020	ND	>500
\\	(17)	0,020	ND	>500
V	(25)	0,180	ND	>55
\\	(30)	0,060	ND	>166
\\	(38)	0,130	ND	>76
\\	(87)	0,210	ND	>47
(A-6)		0,420	>100	>237
(A-7)		0,004	>10	>2500
\\	(2)	0, 020	ND	>500
w	(16)	0,040	ND	>250
w	(39)	0,020	ND	>500
u	(89)	0,020	ND	>500
5¾	(10)	0,060	ND	>166
	(IA)	0,030	ND	>333
	(3)	0,020	ND	>500
U	(9)	0,040	ND	>250
U	(12)	0,070	ND	>143
V	(13)	0,030	ND	>333
>>	(17)	0,020	ND	>500
V	(25)	0,200	ND	>50

• · • · • ·

164 ··

1 Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo	HRV	EC50 (pM)	CC50 (pM)	TI
	(30)	0,090	ND	>111
w	(38)	0,170	ND	>58
w	(87)	0,590	ND	>16
(A-8)		ND	ND	ND
(B-l)		0,100	>100	>1000
u	(IA)	0, 300	ND	>333
u	(10)	0,400	ND	>250
(A-10)		0,140	>100	>714
(C-l)		0,100	>10	>100
(A-ll)		0,030	50	1667
(A-9)		1,800	>100	>55
(A-12)		0, 400	>100	>250
(A-13)		0,200	>10	>50
(B-2)		0,005	>100	>20000
	(2)	0,020	ND	>5000
VI	(16)	0,010	ND	>10000
	(39)	0,050	ND	>2000
W	(89)	0,009	ND	>11111
ΛΛ	(10)	0, 020	ND	>5000
V	(IA)	0,020	ND	>5000
\X	(3)	0, 020	ND	>5000
U	(9)	0,006	ND	>16666
V	(12)	0,050	ND	>2000
	(13)	0,010	ND	>10000

165 fe fefefe· • fefe · • fe ··

Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo	HRV	EC50 (μΜ)	CC50 (μΜ)	TI
V	(17)	0,010	ND	>10000
v	(25)	0,030	ND	>3333
u	(30)	0,040	ND	>2500
w	(38)	0,070	ND	>1428
u	(87)	0,060	ND	>1666
(C-2)		0,002	>10	>5000
W	(2)	0,004	ND	>2500
V	(16)	0,010	ND	>1000
W	(39)	0,010	ND	>1000
V	(89)	0,004	ND	>2500
U	(10)	0,020	ND	>500
W	(IA)	0,010	ND	>1000
M	(3)	0,020	ND	>500
W	(9)	0,010	ND	>1000
V	(12)	0,040	ND	>250
V	(13)	0, 007	ND	>1428
W	(17)	0,007	ND	>1428
W	(25)	0,070	ND	>142
\\	(30)	0,030	ND	>333
w	(38)	0,050	ND	>200
\x	(87)	0,020	ND	>500
(B-3)		0,180	>100	>543
(B-4)		<0,030	>100	>3333
(A-14)		0,480	>100	>208

- 166 • · • *«·♦

Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo		EC50 (pM)	CC50 (pM)	TI
(A-15)		0,220	>100	>454
V	(IA)	7,100	ND	>14
v	(10)	2,700	ND	>37
(A-16)		0,45	>100	>222
	(IA)	4,80	ND	>21
	(10)	4,50	ND	>22
(A-17)		0,06	>100	>1786
	(IA)	1,80	ND	>56
W	(10)	3,30	ND	>30
(A-18)		1,50	>100	>67
(A-19)		25,10	>100	>4
(A-20)		12,60	>100	>8
(A-21)		2,50	>100	>40
(A-22)		ND	ND	ND
(A-2 3)		ND	ND	ND
Srovnávací		0, 61	>320	>524
	(16)	2,30	>320	>139
	(89)	6,30	>320	>50
V	(10)	0,60	>320	>533
Srovnávací		0,38	>320	>842
(A-24)		0,10	>100	>1000
(A-25)		0,03	>100	>3333
(A-2 6)		0,03	>100	>3333
(A-2 7)		1,60	>100	>62

167

• · » » ι» · Φ · » · « · * * · · • · ♦ · ♦ · ··

I Tabulka 3. Aktivita proti rhinovirům
Číslo	HRV	EC50 (μΜ)	CC50 (μΜ)	TI
WIN 51711		0,78	>60	>77
WIN 52084		0,07	>10	>143
WIN 54954		2,13	>63	>30
Pirodavir		0,03	>10	>300
Pleconaril		0,01	>10	>1000

Test proti coxsackie virům v buněčné kultuře

Coxsackie viry typů A-21 (CAV-21) a B3 (CVB-3) byly zakoupeny od American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD). Zásoby virů byly rozmnoženy a byly prováděny antivirální testy s buňkami Hl-HeLa (ATCC). Buňky byly pěstovány v minimálním esenciálním médiu s 10% fetálním hovězím séru (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

Schopnost sloučenin chránit buňky proti CAV-21 nebo CVB-3 infekci byla měřena metodou redukce barviva XTT. Tuto metodu popsali Weislow a kol., J. Nati. Cancer Inst. 1989, sv. 81, 577-586. Buňky Hl-HeLa byly infikovány CAV-21 nebo CVB-3 s multiplicitou infekce (m.o.i.) 0,025 respektive 0,075 nebo byla infekce pouze imitována médiem. Buňky HlHeLa byly umístěny v množství 4 x 10^ buněk na jamku v 96jamkových destičkách a inkubovány s vhodnými koncentracemi testované sloučeniny. Jeden den (CVB-3) nebo dva dny (CAV21) později bylo do testovaných destiček přidáno XTT /PMS a množství vytvořeného formazanu bylo měřeno spektrofotometricky na vlnových délkách 450/650 nm. Hodnota EC50 byla vypočtena jako koncentrace sloučeniny, která zvýšila vytváření formazanu u buněk ošetřených sloučeninou a infikovaných virem na 50% hodnoty produkované u buněk bez

0«

0

168 » 0 0 « » 0 0 1 » 0 0 «

00 sloučeniny a neinfikovaných. 50% cytotoxická dávka (CC50) byla vypočtena jako koncentrace sloučeniny, která snížila vytváření formazanu v buňkách neinfikovaných na 50% hodnoty, sloučeniny a neinfikovaných. Terapeutický index vypočten vydělením CC50 hodnotou EC50.

Sloučeniny byly testovány proti kontrolním sloučeninám WIN 54954 (získané od společnosti Sterling-Winthrop Pharmaceuticals), Pirodavir (získané od společnosti Janssen Pharmaceuticals) a Pleconaril (připraven postupem, který popsali Diana a kol., J. Med. Chem. 1995, 38, 1355). Antivirální data získaná u testovaných sloučenin proti CAV21 a CVB-3 jsou uvedena v Tabulce 4.

ošetřených sloučeninou a vytvořené v buňkách bez (TI) byl

Tabulka 4. Aktivita proti coxsackie virům
Sloučenina	Kmen	EC50 (pM)	CC50 (pM)
(A-5)	CAV-21	0,23	>10	>43
\\	CVB-3	1,00	ND	>10
(B-2)	CAV-21	0,16	>100	>625
	CVB-3	0,18	ND	>555
WIN 54954	CAV-21	>100,00	>100	ND
V	CVB-3	>100,00	ND	ND
Pirodavir	CAV-21	>100,00	>100	ND
V	CVB-3	>100,00	ND	ND
Pleconaril	CAV-21	0,09	>10	>107
VI	CVB-3	>10,00	ND	ND

Testy v buněčné kultuře proti echovirům a enterovirům • ·

- 169

81, 577-586). MRC-5 s multiplicitou byla infekce pouze

Echovirus typu 11 (EV 11) a enterovirus typu 70 (EV 70) byly zakoupeny od ATCC (Rockville, MD) . Virové zásoby byly rozmnoženy a antivirální testy byly prováděny na buňkách MRC-5 (ATCC).Buňky byly pěstovány v minimálním esenciálním médiu s 10% fetálním hovězím sérem (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

Schopnost sloučenin chránit buňky proti EV 11 nebo EV 70 infekci byla měřena metodou redukce barviva XTT (Weislow a kol., J. Nati. Cancer Inst. 1989, vol.

buňky byly infikovány EV 11 nebo EV infekce 0,003 respektive 0,004 nebo imitována médiem. Infikované nebo neinfikované buňky byly vloženy v množství 1 x 10^ buněk na jamku na destičky a inkubovány s vhodnými koncentracemi sloučeniny. O čtyři dny později bylo XTT/PMS přidáno na testovací destičky a množství vytvořeného formazanu bylo měřeno spektrofotometricky na vlnových délkách 450/650 nm. Hodnota EC50 byla vypočtena jako koncentrace sloučeniny, která zvýšila vytváření formazanu u buněk ošetřených sloučeninou a infikovaných virem na 50% hodnoty produkované u buněk bez sloučeniny a neinfíkovaných. 50% cytotoxická dávka (CC50) byla vypočtena jako koncentrace sloučeniny, která snížila vytváření formazanu v buňkách neinfikovaných na 50% hodnoty, sloučeniny a neinfikovaných. Terapeutický index vypočten vydělením CC50 hodnotou EC50.

Sloučeniny byly testovány proti kontrolním sloučeninám Pirodavir (získané od společnosti Janssen Pharmaceuticals) a Pleconaril (připraven postupem, který popsali Diana a kol., J. Med. Chem. 1995, sv. 38, 1355). Antivirální data získaná ošetřených sloučeninou a vytvořené v buňkách bez (TI) byl • ·

- 170 • ·

u testovaných sloučenin proti kmenům EV 11 a EV 70 jsou uvedena dále v Tabulce 5.

Tabulka 5. Aktivita proti echovirům a enterovirům
	Kmen	EC50 (pM)	CC50 (pM)
(A-5)	EV-11	0,080	>10	>125
V	EV-70	0,040	ND	>250
(B-2)	EV-11	0,010	>100	>10000
w	EV-70	0,003	ND	>33333
Pirodavir	EV-11	3, 700	>10	>3
U	EV-70	0,060	ND	>167
Pleconaril	EV-11	0,160	>10	>62
V	EV-70	ND	ND	ND

I když předložený vynález byl popsán pomocí výhodných provedení a specifických příkladů, odborníkovi je zřejmé, že je možno provést různé změny a modifikace, aniž by došlo k odchýlení se od ducha a rozsahu předloženého vynálezu. Předložený vynález tedy není omezen výše uvedeným detailním popisem, ale je definován přiloženými patentovými nároky a jejich ekvivalenty.

Zastupuje:

dr. O. Švorčík

171 fV yoo - 3W£

Claims (77)

1. PATENTOVÉ

   NÁROKY

   JUDr. Otakar Švorčík advokát

   Hálkova 2, 120 00 Praha 2 • · • · • ···· » · · · · • · · · · • · · · ·

   I · · · · · ♦ · · · ·· ·· ··

   1. Sloučenina obecného vzorce I:

   O R₇

   O (I), ve kterém:

   Y představuje -N(R_y)-, -C(R_y)(R_y)- nebo -0-, kde každé

   R_y představuje nezávisle H nebo nižší alkyl;

   Ri představuje H, F, alkylovou skupinu, OH, SH nebo 0alkylovou skupinu;

   R₂ a R₃ představují nezávisle na sobě H;

   o>

   NH, \

   ^A2 (^R4l)(^R4l) (A₃)n nebo ' (^R4i)(^R4i) _r kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 5,

   Ai představuje CH nebo N, A₂ a každé A₃ je nezávisle zvoleno ze souboru, zahrnujícího C(R₄i) (R₄₁) , N(R_4Í), S, S (O) , S(O)₂ a

   0 a A₄ představuje NH nebo NR_4i, kde každé R_4Í představuje nezávisle H nebo nižší alkyl, za předpokladu že nejvýše 2 heteroatomy se vyskytují za sebou v kruhu tvořeném A_x, A₂, (A₃)nz A₄ a C=O; a za předpokladu že alespoň jedno z R₂ a R₃ (A₃)n ,^A1^ /

   A2

   NH₂ nebo (^R4i)(^R4i) _r

   Rs a R₆ představují nezávisle na sobě H, F, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu;

   představuj e

   7' • ·

   - 172 R₇ a Rs představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, -OR17, SR17, -NR17R18, -NR₁₉NR₁₇Ri8 nebo -NR^ORis, kde Rn, Ris a R19 představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu nebo acylovou skupinu;

   Rg představuje pětičlenný heterocyklus, která má od jednoho do tří heteroatomů zvolených ze souboru, zahrnujícího 0, N a S; a

   Z a Zi představují nezávisle na sobě H, F, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, -C(O)R₂₁, -CO₂R₂i, -CN, -C(O)NR₂i R₂₂, -C(O)NR₂₁OR₂₂, -C(S)R₂₁,

   C(S)NR₂iR₂₂, -N0₂, -SOR₂₁, -SO2R21, ~SO₂NR₂iR₂₂, -S0 (NR₂i) (OR₂₂) ,

   -SONR21, -SO₃R₂x, -PO(OR₂i)₂, -PO(R₂₁) (R₂₂) , PO (NR21R22) (OR23) ,

   PO(NR₂iR₂₂) (NR₂3R₂₄) , -C (0) NR₂xNR₂₂R₂3 nebo -C (S) NR₂xNR₂₂R₂3, kde R21, R₂₂z R23 a R₂₄ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo kterékoli dva ze substituentů R₂i, R₂₂r R23 a R₂₄, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Ζχ nepředstavují oba současně H;

   nebo Ζχ a Rx, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

   nebo Z a Ζχ, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

   • ·

   - 173· metabolit, nebo její prekurzor, farmaceuticky aktivní farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
2. 2. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1, kde R₂ a R₃ představují nezávisle na sobě H;

   NH, (C(R4i)(R₄l))n (R₄l)(R₄l) (^R4l)(^R4l) ¹²; nebo (R₄i)(R₄i) ' , _n j_{e ce}j_£ číslo v rozmezí od 0 do 5, každé R₄₁ představuje nezávisle H nebo nižší alkyl a stereochemie na atomu uhlíku, označeném hvězdičkou (*) může být R nebo S; za předpokladu že alespoň

   O

   X,

   R₃ představuje

   NH, nebo jedno

   R₂
3. 3. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1, kde Y představuje -N(R_y)-, kde R_y představuje H nebo nižší alkyl.
4. 4. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, kde Z a Ζχ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, nižší alkyl, -CO₂R_2X a -C (0) NR_2X R₂₂, kde • ·

   - 174 R21 a R22 představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R_2X a R₂₂, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Z_x nepředstavují oba současně H;

   nebo Zi a R_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

   nebo Z a Z_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu.
5. 5. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém R_x představuje H, F nebo methyl.
6. 6. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém alespoň jedno z R₂ nebo R₃ představuje η Η ~ H ^0<!r'^N\ °^<5ί^χΝ'Ί ⁰ yd-j, qdd _nebo λ>Λ_ΝΗ2
7. 7. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 7, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
8. 8. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém jedno z R5 a R₆ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.

   • ·
9. 9. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl.
10. 10. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém R₇ a R₈ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu.
11. 11. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém jedno z R₇ a Rg představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
12. 12. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém jedno z R₇ a Rg představuje H a další představuje 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-l-propyl, fenylmethyl nebo naftylmethyl.
13. 13. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém R9 představuje pětičlenný heterocyklus obsahující alespoň jeden dusíkový heteroatom a jeden kyslíkový heteroatom.
14. 14. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle • · • ♦ • ·

    176 nároku 3, ve kterém Rg je zvolen ze souboru, zahrnujícího substituovaný a nesubstituovaný 1,2-oxazolyl, 1,3-oxazolyl a 1,2,4-oxazolyl..
15. 15. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 3, ve kterém R₉ představuje 3-isoxazolyl nebo 5isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu.
16. 16. Sloučenina podle nároku 3 obecného vzorce I-A'' :

    O R₇ Ry O R₂ Z

    AVyVA

    H O Rg H R-j (I—A' ' ) ve kterém R_x, R₂, R6, R₇a R^ R_y, Z a Z₃ mají stejný význam jako v nároku 3, nebo její prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
17. 17. Sloučenina, prekurzor, metabolit, farmaceuticky přijatelná nároku 16, ve kterém R₂ představuje farmaceuticky aktivní sůl nebo solvát podle

    NH,
18. 18. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 16, ve kterém:

    « · • · • · ··· ····

    - 177

    4444

    R_y představuje H nebo methyl;

    Ri představuje H, F nebo methyl;

    Z a Ζχ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, -CO₂R₂₁, -CN a ~C (0) NR₂₁ R₂₂, kde R₂₁ a R₂₂ představují nezávisle na cykloalkylovou skupinu, sobě H, alkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R₂₁ a R₂₂, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Ζχ nepředstavují oba současně H;

    nebo Ζχ a Rx, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    nebo Z a Ζχ, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    .NH, o , nesubstituovaný

    R₂ představuje R₆ představuje fenylmethyl;

    R₇ představuje alkyl nebo aryl; a R₉ představuje 3-isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný substituenty, zvolenými ze souboru, atomy halogenu.

    nebo nebo ůó.

    r substituovaný nebo jedním

    5-isoxazolyl nebo dvěma zahrnujícího methyl a
19. 19. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 18, ve kterém R₇ je zvolen ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-1-propyl, fenylmethyl a naftylmethyl.

    • ·

    0 · • ·

    178 • · 0 0

    0 0 ·

    0 0 · ·' · · ·· · • · · · » • ·«·» ·’ ··
20. 20. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 16, ve kterém R_y, R_x a Z představují všechny H a:

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R_{9 n}-N představuje ^H3°

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuj e

    N'°\ .

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje h₃c , _R? představuje C(CH₃)₃, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje n-N h₃c'

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje C , r₇ představuje C(CH₃)₃, Zi představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje h₃c' _n-N

    A>*’

    R₂ představuje y·^^ , r₆ představuje f , R₇ představuje

    -.-N

    CH(CH₃)₂, Zi představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^Η3θ'

    An

    VHpředstavuje ^H3° n-^N

    A?*'

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje < , R₇ představuje CH(CH₃)₂, Z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ « * # ♦ • · • · » t · « • » · · · · • · · · · • ···· ♦♦ ··

    179

    R7 π Η °^Ν νκ·

    R2 představuje ΗRe představuje f představuje C(CH₃)₃, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje

    -i-N.

    H₃C aMH °n

    R₂ představuje 'W, r₆ představuje , _R? představuje CH(CH₃)₂, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^HsC vy

    R₂ představuje _f r₅ představuje r₇ představuje C(CH₃)₃, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje

    Λ-Ν

    H₃C

    A/^

    R₂ představuje

    -ř, R6 představuje CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a Rg

    CA ^Λ představuje ;

    n h

    R₂ představuje A, R₆ představuje CH₂Ph, R₇ představuje CH₂CH(CH₃)₂, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje o'

    NH představuje CH₂CH(CH₃)₂, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ 'ο'Χ představuje ; nebo

    R₂ představuje

    ÁA

    R6 představuje CH₂Ph, R₇

    99 ·· ··

    9 9 9 9 9 9

    9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9

    9 »999

    9999 ·* **

    9 9

    9 9

    - 180 -,

    R₂ představuje představuje CH(CH₃)₂,

    Qp-X představuje

    R6 představuje CH₂Ph, R₇ představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉
21. 21. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 16, ve kterém R_y představuje CH₃, R_x a Z představují všechny H a:

    VR₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje f představuje η , z_x představuje CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje

    H,C

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje CH₂Ph, R₇

    ... x>ípředstavuje CH₂CH(CH₃)₂ a R₉ představuje ^Ha^c ;

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje f ar·¹ představuje a r₉ představuje ^H3° r₇

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje f^^ r₇

    -i-N ; nebo představuje CH₂CH(CH₃)₂ a R₉ představuje ^H3^C' ·♦ ·· ·· « « · · * * • · · · · • « · · · ·

    181 — ··· ···

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje f představuj e

    ->-N.

    a R₉ představuje ^Hs^c'

    AX
22. 22. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 16 zvolená ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny o^nh₂ °γ^ΝΗ₂ y

    X . ^s - co₂ch₂ch₃

    CO₂CH₂CH₃ y °^nh₂

    CO₂CH₂CH₃

    ΟγΝΗ;

    Αχ

    OJ

    F °<sxNH₂ co₂ch₂ch₃ • 4

    4 4 4 to · · *

    182 • to

    4 · «

    * «··· co₂ch₂ch· ; a 'co₂ch₂ch_;
23. 23. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1, ve kterém Y představuje -CH₂-.
24. 24. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém Z a Z_x jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, nižší alkyl, -CO₂R_2X a C(O)NR_2XR₂2/ kde R21 a R22 představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R_2X a R₂2, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Z_x nepředstavují oba současně H;

    nebo Z_x a R_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    nebo Z a Z_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu.

    • ·

    183 • · ·

    99 99
25. 25. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém Ri představuje H, F nebo methyl.
26. 26. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém alespoň jedno z R₂ a R₃ představuje nebo

    O
27. 27. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 26, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
28. 28. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
29. 29. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém jedno z R₅ a R6 představuje H a další představuje nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl.
30. 30. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém R₇ a R₈ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu.

    • · · • · ♦

    184 • · • · · · * ··
31. 31. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém jedno z R₇ a R₈ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
32. 32. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém jedno z R₇ a R_s představuje H a další představuje 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-l-propyl, fenylmethyl nebo naftylmethyl.
33. 33. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 23, ve kterém Rg představuje pětičlenný heterocyklus obsahující alespoň jeden dusíkový heteroatom a jeden kyslíkový heteroatom.
34. 34. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 33, ve kterém Rg představuje nesubstituovaný nebo substituovaný 1,2-oxazolyl, 1,3-oxazolyl nebo 1,2,4oxazolyl.
35. 35. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 34, ve kterém Rg představuje 3-isoxazolyl nebo 5isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu.
36. 36. Sloučenina podle nároku 23 obecného vzorce I-B'':

    185

    O Ry O R₂ Z n N z₁

    H O Rg H R-| (I-B'') ve kterém Rx, R₂, Rg, R7, R9, Z a Ζχ mají stejný význam jako v nároku 23, nebo její prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
37. 37.

    metabolit

    Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky přijatelná farmaceuticky aktivní sůl nebo solvát podle nároku 36, ve kterém R₂ představuje
38. 38. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 36, ve kterém:

    Rx představuje H, F nebo methyl;

    Z a Ζχ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, -CO2R21, -CN a ~C (0) NR₂₁, R₂₂, kde R₂₁ a R₂₂ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R₂₁ a R₂₂, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Ζχ nepředstavují oba současně H;

    186 nebo Zi a Ri, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    nebo Z a Ζχ, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    O

    R₂ je zvolen ze souboru, zahrnujícího

    R₆ představuje nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl;

    R₇ představuje alkyl nebo aryl; a

    Rg představuje 3-isoxazolyl nebo 5-isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu.
39. 39. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 38, ve kterém R₇ je zvolen ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2-methyl-2-propyi, 2-methyl-l-propyl, fenylmethyl a naftylmethyl.
40. 40. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 36, ve kterém Rx představuje H a:

    R₂ představuje CH₂CH₂C (O) NH₂, R₆ představuje představuje CH(CH₃)₂, Z představuje H,

    Ζχ představuje

    CO₂CH₂CH₃ a Rg představuje ^Η3θ • ·· ·« · · • · • · ♦ ·»· ···· • · • 9

    187 ν· « ·· • · « · φ · • * • · • ·· ···· π Η °^Ν

    Jů

    R₂ představuje , r₆ představuje f^z , r₇ představuje CH(CH₃)₂, Z představuje Η, Ζχ představuje ι-N.

    CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^Η3θ η H °V-N xX>

    R₂ představuje 'E'

    Ré představuje , r₇ představuje CH(CH₃)₂, Z a Ζχ společně vytvářejí kde karbonylové skupina je v poloze cis vzhledem k vodíku R_x a R₉ vN.

    X>L představuje ^H3^C ; nebo „ H CU ,N

    R₂ představuje _f r₆ představuje , r₇ představuje CH(CH₃)₂, Z představuje Η, Z_x představuje

    Λ Π

    CO₂CH₂CH₃ a R₉ představuje ^Η3θ
41. 41. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce:

    nebo její prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
42. 42. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1, ve kterém Y představuje -0-.

    188

    • • fe • fe • · • • • • • •

    • ·· ·· fefe • fe • · fe fefe • • • • fefe • • • • · · · • • fe fe fefe • fe fe • fe
43. 43. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém Z a Ζχ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, nižší alkyl, -CO₂R2x a C (0) NR₂₁, R₂₂, kde R_2i a R₂₂ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R₂x a R₂₂, společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Ζχ nepředstavují oba současně H;

    nebo Ζχ a Rx, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    nebo Z a Ζχ, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu.
44. 44. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém Rx představuje H, F nebo methyl.
45. 45. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém alespoň jedno z R₂ a R₃ představuje

    Η H ^N Ί ⁰ gJA _nsbo λΑΑ.
46. 46. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 45, ve kterém jedno z R₅ a R6 představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.

    • ·

    189
47. 47. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
48. 48. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém jedno z R₅ a R₆ představuje H a další představuje nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl.
49. 49. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém R₇ a R₈ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo heteroarylovou skupinu.
50. 50. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém jedno z R₇ a R₈ představuje H a další představuje alkyl nebo aryl.
51. 51. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém jedno z R₇ a R₈ představuje H a další představuje 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-l-propyl, fenylmethyl nebo naftylmethyl.
52. 52. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém R_g představuje pětičlenný heterocyklus • · • ·

    190 obsahující alespoň jeden dusíkový heteroatom a jeden kyslíkový heteroatom.
53. 53. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém Rg je zvolen ze souboru, zahrnujícího substituovaný a nesubstituovaný 1,2-oxazolyl, 1,3-oxazolyl a 1,2,4-oxazolyl.
54. 54. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 42, ve kterém Rg představuje 3-isoxazolyl nebo 5isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu.
55. 55. Sloučenina podle nároku 42, obecného vzorce I-C'':

    Rg N H

    O R<3 H Rj ve kterém R_lř R₂, R6, R7, R₉, Z a Z_x mají stejný význam jako v nároku 42, nebo její prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
56. 56. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle

    191 nároku 55, ve kterém R2 představuje nebo
57. 57. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 55, ve kterém:

    Ri představuje H, F nebo methyl;

    Z a Zi jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, F, -CO2R21, -CN a “C (0) NR_2X R₂₂, kde R_2X a R₂₂ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R_2X a R22_ř společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány, vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu, za předpokladu že Z a Z_x nepředstavují oba současně H;

    nebo Z_x a R_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu, nebo Z a Z_x, společně s atomy, se kterými jsou vázány, vytvářejí cykloalkylovou nebo heterocykloalkylovou skupinu;

    O je zvolen ze souboru, zahrnujícího

    H

    Οχ. .N.

    R₆ představuje nesubstituovaný nebo substituovaný fenylmethyl;

    • ·

    192 • · • · · • · · • · · • ·

    R₇ představuje alkyl nebo aryl; a

    R₉ představuje 3-isoxazolyl nebo 5-isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu.
58. 58. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 57, ve kterém R₇ je zvolen ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2-methyl-l-propyl, fenylmethyl a naftylmethyl.
59. 59. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 55, ve kterém Rx představuje H, Z představuje H a:

    R₂ představuje CH₂CH₂C (0) NH₂, R₆ představuje představuje CH(CH₃)₂, Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ a r₇

    Rg r»- in představuje ^H3c' nebo

    R₂ představuje představuje CH(CH₃)₂, r₆ představuje f Ζχ představuje CO₂CH₂CH₃ r₇

    Rg představuje ^Hs^c' n-^N

    XXX
60. 60. Sloučenina, farmaceuticky přijatelná sůl, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát podle nároku 1, která má antipicornavirální aktivitu odpovídající hodnotě EC₅₀ menší nebo rovné 100 μΜ v testu na buněčné kultuře Hl-HeLa.

    • ·

    - 193
61. 61. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1, která má antirhinovirální aktivitu odpovídající hodnotě EC₅₀ menší nebo rovné 10 μΜ v testu na buněčné kultuře Hl-HeLa.
62. 62. Sloučenina, která má obecný vzorec zvolený ze ve kterém:

    Ri, R₂, Z a Zi mají stejný význam jako v nároku 1, n je rovno 1 nebo 2;

    R_y představuje H nebo nižší alkyl,

    R₆ představuje alkyl, cykíoalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl;

    R₇ představuje alkyl, cykíoalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, -0R_i7, -SR_X7, “NRi₇Ri₈, -NRi₉NR_i7R₁₈ nebo NRi₇ORi₈, kde R_X7, Ri₈ a R_X9 představují nezávisle na sobě H,

    194 alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo acyl; a

    R₉ představuje pětičlenný heterocyklus který má jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího 0, N a S;

    nebo její prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát.
63. 63. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát podle nároku 62, ve kterém:

    Ri představuje H, F nebo alkyl;

    R_y představuje H nebo methyl;

    R6 představuje alkylovou skupinu případně substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými ze souboru, zahrnujícího alkyl a aryl;

    R₇ představuje alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl;

    Rg představuje pětičlenný heterocyklus, která má od jednoho do tří heteroatomů zvolených ze souboru, zahrnujícího 0, N a S, kde alespoň jeden z heteroatomů je dusík, který je nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího nižší alkylové skupiny a atomy halogenu;

    nebo její prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát.
64. 64. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát podle nároku 62, ve kterém:

    Ré představuje arylmethyl nebo arylthiomethyl;

    R₇ představuje alkylovou skupinu;

    195 • ·

    Rg představuje 3-isoxazolyl nebo 5-isoxazolyl nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo dvěma substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího methyl a atomy halogenu; a

    Z představuje H a Ζχ představuje -CO₂R₂i, -CN nebo C(O)NR₂iR₂₂, kde R₂i a R₂₂ představují nezávisle na sobě H, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, heterocykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, acylovou skupinu nebo thioacylovou skupinu nebo R₂₁ a R₂₂ společně s atomem nebo atomy, ke kterým jsou vázány vytvářejí heterocykloalkylovou skupinu nebo Z a Zi spolu představují cyklický ester nebo amid.
65. 65. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát podle nároku 64, ve kterém:

    Ri představuje H nebo F;

    R₆ představuje arylmethyl nebo arylthiomethyl; a

    R₇ je zvolen ze souboru, zahrnujícího 2-propyl, 2methyl-2-propyl, 2-methyl-l-propyl a arylmethyl.
66. 66. Sloučenina, prekurzor, farmaceuticky přijatelná sůl, farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát podle nároku 65, ve kterém R₆ představuje fenylmethyl, kde fenylová skupina má případně jeden až tři substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom halogenu, nižší alkyl a nižší alkoxy.
67. 67. Sloučenina podle nároku 62, zahrnujícího následující sloučeniny zvolená ze souboru,

    196

    HN

    OsV

    V% ⁰ Va co₂ch₂ch₃ o

    ,A

    o.

    nebo její farmaceuticky aktivní metabolit nebo solvát.

    sůl
68. 68. Farmaceutická kompozice zahrnující:

    to · • ·

    197 • to (a) terapeuticky účinné množství alespoň jednoho antipicornavirálního činidla, kterým je sloučenina, prekurzor, farmaceuticky aktivní metabolit, farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1; a (b) farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo, vehikulum nebo excipient.
69. 69. Způsob léčení chorobného stavu savce, mediovaný aktivitou picornavirální proteázy, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání savci, který má jeho potřebu, terapeuticky účinného množství alespoň jedné sloučeniny, prekurzoru, farmaceuticky aktivního metabolitů, farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátů podle nároku 1.
70. 70. Způsob inhibice aktivity picornavirální 3C proteázy, vyznačující se tím, že zahrnuje kontakt picornavirální 3C proteázy s účinným množstvím alespoň jedné sloučeniny, prekurzoru, farmaceuticky aktivního metabolitů, farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátů podle nároku 1.
71. 71. Způsob podle nároku 70, ve kterém picornavirální 3C proteáza je rhinovirální proteáza.
72. 72. Sloučenina obecného vzorce:

    o.

    (Al3)p

    N C(R₅₂)(R₅₃)(R₅₄) ve kterém:

    p je celé číslo v rozmezí od 0 do 5;

    • · φ φ φ ·

    198 • φ

    An představuje CH nebo Ν, A_i2 a každé A_i3 je nezávisle zvoleno ze souboru, zahrnujícího C (Rďi) (Rďi) r N (Réi) , S, S (O) , S(O)₂ a O a A₁₄ představuje NH nebo NR₆i, kde každé R₆₁ představuje nezávisle H, alkyl, acyl nebo aryl, za předpokladu, že nejvýše dva heteroatomy se vyskytují za sebou v kruhu tvořeném Au, Αχ₂, (Ai₃)_n, A₁₄ a C=0;

    každé Ri4i představuje nezávisle H nebo nižší alkyl;

    R₅₁ představuje H, alkyl, acyl nebo aryl;

    R₅₂, R53 a R54 jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, hydroxy, alkyl, acyl a aryl nebo kterékoli dva ze substituentů R₅₂, R53 a R₅₄ spolu představují =0 nebo =C(R₅t) (Rss) r kde R57 a R58 jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, alkyl, C0₂ (Cx~Cg) alkyl,

    CO₂N (Ci~Cg) alkyl a C0₂(aryl); a

    R55 a R₅₆ představují nezávisle na sobě H nebo vhodnou ochrannou skupinu dusíkového atomu;

    nebo farmaceuticky přijatelná sůl uvedené sloučeniny.
73. 73. Sloučenina obecného vzorce:

    ve kterém:

    p je celé číslo v rozmezí od 0 do 5;

    R51 představuje H, alkyl, acyl nebo aryl;

    R₅₂, R53 a R5₄ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, hydroxy, alkyl, acyl a aryl nebo kterékoli dva ze substituentů R₅₂, R53 a Rs₄ spolu představují =0 nebo • φ • · • φ

    - 199 =C(R₅₇) (Rss) , kde R57 a R₅₈ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, alkyl, C0₂ (Ci-C₆) alkyl, CO₂N (C_xΟβ) alkyl a CO₂(aryl); a

    R₅₅ a R₅₆ představují nezávisle na sobě H nebo vhodnou ochrannou skupinu dusíkového atomu;

    nebo farmaceuticky přijatelná sůl uvedené sloučeniny.
74. 74. Sloučenina nebo farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 73, ve kterém n je rovno 1 nebo 2.
75. 75. Sloučenina nebo farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 74, ve kterém R₅₂, R53 a R₅₄ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru, zahrnujícího H, alkoxy, hydroxy a karbonyl.
76. 76. Sloučenina podle nároku 73, zahrnujícího následující sloučeniny zvolená ze souboru, ^PN

    HO.

    200 ·· «· • 9 9 · • * « ·

    MeO ve kterém:

    Pn je vhodná ochranná skupina dusíkového atomu a q je rovno 1 nebo 2;

    nebo farmaceuticky přijatelná sůl uvedené sloučeniny.
77. 77. Sloučenina podle nároku 73, zahrnujícího následující sloučeniny zvolená ze souboru, • · • · • ·

    201 kde BOC je terč.-butyloxykarbonyl; nebo farmaceuticky přijatelná sůl uvedené sloučeniny.