CZ20004012A3

CZ20004012A3 - New microspheres based on poly (methylidene malonate), a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing these

Info

Publication number: CZ20004012A3
Application number: CZ20004012A
Authority: CZ
Inventors: Nicole Bru-Magniez; Visage Catherine Le; Elias Fattal; Patrick Couvreur; Pascal Breton
Original assignee: Virsol
Priority date: 1999-04-28
Filing date: 1999-04-28
Publication date: 2001-03-14

Abstract

Řešení se týká nových mikrosfér, které jsou zejména použitelné ve farmaceutické oblasti jako nosiče obzvláště určené pro transport biologicky účinných látek, zejména hydrofilních látek, při peronálním podání. Mikrosféry podle řešení jsou tvořené kontinuální sítí nosičového materiálu, ve kterémje případně dispergovaná látka, přičemž uvedený nosičový materiál obsahuje alespoň 70 % hmotn. homopolymerů tvořeného opakujícími se strukturními jednotkami obecného vzorce I, ve kterém R] znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů nebo skupinu (CH2)m-COOR3, ve kterém m znamená celé číslo od 1 do 5 a R3 znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, R2 znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů a n znamená celé číslo od 1 do 5.The invention relates to novel microspheres which are particularly useful in the pharmaceutical field as carriers particularly intended for the transport of biologically active substances, in particular hydrophilic substances, during peronal administration. The microspheres according to the invention are formed by a continuous network of a carrier material in which a substance is optionally dispersed, said carrier material comprising at least 70% by weight of homopolymers formed by repeating structural units of the general formula I, in which R1 represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms or a group (CH2)m-COOR3, in which m represents an integer from 1 to 5 and R3 represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms, R2 represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms and n represents an integer from 1 to 5.

Description

Oblast techniky *Technical field *

Vynález se týká nových mikrosfér, které jsou zejména použitelné ve farmaceutické oblasti jako částicové nosiče určené pro transport biologicky účinných látek, zejména hydrofilních látek (peptidy nebo proteiny), perorálním podáním.The invention relates to novel microspheres which are particularly useful in the pharmaceutical field as particulate carriers intended for the transport of biologically active substances, in particular hydrophilic substances (peptides or proteins), by oral administration.

Vynález se rovněž týká výroby těchto mikročástic a farmaceutických kompozic, které tyto mikrosféry obsahují.The invention also relates to the production of these microspheres and pharmaceutical compositions containing these microspheres.

V rámci popisu a definice vynálezu se výrazem mikrosféry rozumí v podstatě kulovité částice, jejichž střední průměr činí 1 až 100 pm, výhodně 5 až 100 pm, a které jsou tvořené více či méně hustou sítí nosičového materiálu.Within the scope of the description and definition of the invention, the term microspheres is understood to mean essentially spherical particles whose mean diameter is 1 to 100 pm, preferably 5 to 100 pm, and which are formed by a more or less dense network of carrier material.

Tyto mikrosféry se liší od mikrokapslí, které jsou tvořeny stěnou obklopující dutinu. Nicméně je třeba poznamenat, že mikrosféry připravené ve vícenásobné emulzi mohou obsahovat množinu kuliček dispergovaných vThese microspheres differ from microcapsules, which are formed by a wall surrounding a cavity. However, it should be noted that microspheres prepared in a multiple emulsion may contain a plurality of beads dispersed in

X, kontinuální síti, která uvedené mikrosféry tvoří.X, a continuous network that the said microspheres form.

V tomto posledně uvedeném případě představuje celkový objem takových kuliček obecně zlomek 1/20 až 1/2 z celkového objemu mikrosfér.In this latter case, the total volume of such beads generally represents a fraction of 1/20 to 1/2 of the total volume of the microspheres.

Dosavadní stav technikyState of the art

V průběhu posledních let prokázaly četné studie, že částicové systémy na bázi polymerů mohou být použity pro modifikování profilu uvolňování terapeuticky účinných látek.Over the past few years, numerous studies have demonstrated that polymer-based particulate systems can be used to modify the release profile of therapeutically active agents.

Takto byly různými technikami připraveny mikrosféry na bázi syntetických polymerů, jakými jsou například póly(kyselina mléčná), póly(kyselina mléčná-koglykolová), polystyren, polyepsilonkaprolakton, polymethylmethakrylát nebo mikrosféry na bázi methylcelulózy anebo ethylcelulózy.Thus, microspheres based on synthetic polymers, such as poly(lactic acid), poly(lactic-coglycolic acid), polystyrene, polyepsiloncaprolactone, polymethyl methacrylate, or microspheres based on methylcellulose or ethylcellulose, were prepared using various techniques.

Nicméně je třeba konstatovat, že takto připravené mikrosféry nejso obecně biodegradovatelné a v případě, že jsou biodegradovatelné, potom je jejich biologická degradace velmi pomalá.However, it should be noted that microspheres prepared in this way are not generally biodegradable and, if they are biodegradable, their biological degradation is very slow.

Takto například v případě mikrosfér na bázi kyseliny póly(mléčné) degradace neprobíhá postupně, nýbrž probíhá najednou a to až po velmi dlouhé době.For example, in the case of microspheres based on poly(lactic) acid, degradation does not occur gradually, but occurs all at once and only after a very long time.

Kromě toho tyto mléčné polymery při jejich degradaci uvolňují silně kyselé produkty, které nejen, že způsobují autokatalýzu degradace polymeru, ale jsou také původcem indukce nekompatibility se zapouzřenými látkami.Furthermore, these milk polymers release strongly acidic products during their degradation, which not only cause autocatalysis of polymer degradation, but are also the cause of incompatibility induction with encapsulated substances.

V případě ostatních použitých polymerů mají mikrosféry extrémně nízkou degradační rychlost anebo vůbec nedegraduj í.In the case of other polymers used, the microspheres have an extremely low degradation rate or do not degrade at all.

Doba setrvání takových částic v organismu může omezit opakovatelnou applikaci těchto mikročástic v lidském organismu.The residence time of such particles in the organism may limit the repeatable application of these microparticles in the human body.

Konečně lze uvést, že známé mikrosféry jsou většinou výrazně hydrofobní, což podporuje silné a mnohdy denaturující interakce s látkou určenou k zapouzdření, zejména v případě, kdy látka k zapouzdření má proteinový nebo peptidový charakter.Finally, it can be noted that known microspheres are mostly significantly hydrophobic, which promotes strong and often denaturing interactions with the substance intended for encapsulation, especially in the case where the substance to be encapsulated has a protein or peptide character.

Nyní bylo zjištěno, a toto zjištění tvoří podstatu vynálezu, že je možné získat nové mikrosféry, které nemají výše uvedené nedostatky mikročástic spadajících do dosavadního stavu techniky.It has now been found, and this finding forms the essence of the invention, that it is possible to obtain new microspheres which do not have the above-mentioned disadvantages of the microparticles belonging to the prior art.

Podstata vynálezuThe essence of the invention

Prvním předmětem vynálezu přihlášky vynálezu jsou mikrosféry tvořené kontinuální sítí nosičového materiálu, ve kterém je případně dispergovaná látka, jejichž podstata spočívá v tom, že uvedený nosičový materiál obsahuje alespoň 70 % hmotn. homopolymeru tvořeného opakujícími se strukturními jednotkami následujícího obecného vzorceThe first subject of the invention of the application are microspheres formed by a continuous network of carrier material in which a substance is optionally dispersed, the essence of which lies in the fact that said carrier material contains at least 70% by weight of a homopolymer formed by repeating structural units of the following general formula

COOF^ —CH₂-CCOOF^ —CH ₂ -C

300—(CH₂)_n—COOR₂ ve kterém300—(CH ₂ ) _n —COOR ₂ in which

R, znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů nebo skupinu (CH₂) _T-C00R,, ve které m znamená celé číslo 1 až 5 a R, znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů,R, represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms or the group (CH ₂ ) _T -C00R,, in which m represents an integer from 1 to 5 and R, represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms,

R₂ znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, a • · ·R ₂ represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms, and • · ·

• · n znamená celé číslo 1 až 5.• · n represents an integer from 1 to 5.

Bylo zjištěno, že vzhledem k chemické povaze polymerů tvořících matrici uvedených mikrosfér, tyto mikrosféry:It was found that due to the chemical nature of the polymers forming the matrix of said microspheres, these microspheres:

mají postupnou a modulovananou degradační kinetiku, a umožňují zapouzdřit s vysokou účinností hydrofilní látky, zejména biologického původu.They have gradual and modulated degradation kinetics, and allow for highly efficient encapsulation of hydrophilic substances, especially of biological origin.

Kromě toho bylo s překvapením a zcela neočekávatelně pozorováno, že tyto mikrosféry:Furthermore, it was surprisingly and completely unexpectedly observed that these microspheres:

mohou indukovat stimulaci imunitní odezvy v případě, že jsou sdruženy s antigenem, a umožňují v některých případech potlačení patologických hypersenzibilitních reakcí (indukce tolerance) v případě, že jsou podány perorálně.they can induce stimulation of the immune response when combined with an antigen and, in some cases, allow the suppression of pathological hypersensitivity reactions (induction of tolerance) when administered orally.

Je to tedy charakter polymemího materiálu tvořícího matrici mikrosfér, který způsobuje originálnost tohoto vynálezu.It is therefore the nature of the polymeric material forming the matrix of the microspheres that makes this invention original.

Tento polymerní materiál je v podstatě tvořen homopolymerem tvořeným opakujícími se strukturními jednotkami výše definovaného obecného vzorce I.This polymeric material is essentially a homopolymer formed by repeating structural units of the general formula I defined above.

Takové polymery mají pozoruhodnou biokompatibilitu a biodegradovatelnost, přičemž jsou schopné degradace chemickou nebo biologickou cestou mechanismem štěpení bočních substituentů.Such polymers have remarkable biocompatibility and biodegradability, being capable of degradation by chemical or biological means through the mechanism of cleavage of side substituents.

Rychlost eroze mikrosfér podle vynálezu je závislá na molekulové hmotnosti nosičového materiálu a může být tedy jednoduše modulována-použitím nosičového materiálu majícího molekulovou hmotnost přizpůsobenou požadované rychlosti eroze.The erosion rate of the microspheres according to the invention is dependent on the molecular weight of the carrier material and can therefore be easily modulated by using a carrier material having a molecular weight adapted to the desired erosion rate.

Mikrosféry podle vynálezu vykazují tedy modulovanou a postupnou erozi, která například umožňuje transport • · ·· · ···· ♦··· ·· · · · · · · · • · · ········ • · ······· •··· · ····· ·· · · biologicky účinné látky, dispergované v nosičovém materiálu, až do místa v organismu, ve kterém bude účinek biologicky účinné látky nejúčinnější.The microspheres according to the invention therefore exhibit modulated and gradual erosion, which, for example, allows the transport of a biologically active substance dispersed in a carrier material to the site in the organism where the effect of the biologically active substance will be most effective.

Bioeroze uvedených mikrosfér rovněž eliminuje akumulaci polymerního materiálu, ze kterého jsou mikrosféry vytvořeny, v organismu, v důsledku čehož není použití uvedených mikrosfér omezeno uvedenou akumulací.Bioerosion of said microspheres also eliminates the accumulation of the polymeric material from which the microspheres are formed in the organism, as a result of which the use of said microspheres is not limited by said accumulation.

V rámci specifické formy provedení vynálezu je výše uvedený homopolymer tvořen opakujícími se strukturními jednotkami výše uvedeného obecného vzorce I, ve kterémWithin a specific embodiment of the invention, the above-mentioned homopolymer is formed by repeating structural units of the above-mentioned general formula I, in which

R znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů,R represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms,

R₂ znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů a n znamená celé číslo rovné 1, přičemž výhodně Rj a R₂ znamenají skupinu CPL-CH.,.R ₂ represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms and n represents an integer equal to 1, preferably R 1 and R ₂ represent the group CPL-CH 2 .

Tyto různé typy polymerů skupiny póly(methylidenmalonát)u jsou zejména vhodné pro zapouzdření hydrofilních látek, zejména hydrofilních látek biologického původu, které jsou případně biologicky účinné.These various types of polymers of the poly(methylidenemalonate) group are particularly suitable for encapsulating hydrophilic substances, in particular hydrophilic substances of biological origin, which are optionally biologically active.

Pod pojmem biologicky aktivní molekula se zde neomezujícím způsobem rozumí každá molekula mající profylaktickou nebo kurativní biologickou účinnost in vitro nebo in vivo, zejména protiinfekční činidlo, obzvláště antiseptické, antibiotické, antivirální, antíparazitické nebo antimitotické a zejména protirakovinné činidlo.The term biologically active molecule is understood herein to mean, without limitation, any molecule having prophylactic or curative biological activity in vitro or in vivo, in particular an anti-infective agent, in particular an antiseptic, antibiotic, antiviral, antiparasitic or antimitotic agent, and in particular an anticancer agent.

Použitelnými antibiotickými nebo antiseptickými činidly mohou být například rifampicin a colistin.Useful antibiotic or antiseptic agents may include, for example, rifampicin and colistin.

Jakožto příklady antivirálních činidel lze uvést neomezujícím způsobem didanosin, ribavirin, zidovudin, ·· ♦·«« « ·· *· »· • 4 · · · · · ···· • · ··· *··· • · · ········ • · «······ ···· · ··· ·· ·· ·· βExamples of antiviral agents include, but are not limited to, didanosine, ribavirin, zidovudine, ·· ♦·«« « ·· *· »· • 4 · · · · · ··· • · ··· *··· • · · · ······· • · «····· ·

acyclovir, ganciclovir, foscarnet, vidarabin a zalcitabin.acyclovir, ganciclovir, foscarnet, vidarabine and zalcitabine.

Jakožto protirakovinná činidla mohou být například použity cis-plastin a taxol.For example, cis-plastin and taxol can be used as anticancer agents.

V rámci skutečně výhodné formy provedení vynálezu obsahuje nosičový materiál mikrosfér:In a particularly preferred embodiment of the invention, the microsphere carrier material comprises:

až 99,5 % hmotn. výše definovaného homopolymeru aup to 99.5% by weight of the homopolymer defined above and

0,5 až 10 % hmotn. kopolymeru obsahujícího alespoň jednu sekvenci mající hydrofilní charakter a alespoň jednu sekvenci mající hydrofobní charakter, přičemž uvedená sekvence s hydrofobním charakterem výhodně obsahuje alespoň jednu strukturní jednotku výše uvedeného obecného vzorce I.0.5 to 10% by weight of a copolymer comprising at least one sequence having a hydrophilic character and at least one sequence having a hydrophobic character, said sequence having a hydrophobic character preferably comprising at least one structural unit of the above-mentioned general formula I.

Výhodně je sekvence s hydrofilním charakterem uvedeného kopolymeru zvolena z množiny zahrnující póly(dxyethylen), póly(vinylalkohol), polyvinylpyrrolidon), póly(N-2-hydroxypropylmethakrylamid) , póly(hydroxyethylmethakrylát), hydrofilní póly(aminokyselinu), jakou je například polylysin, polysacharid, přičemž takovou sekvencí je obzvláště póly(oxyethylen).Preferably, the sequence with hydrophilic character of said copolymer is selected from the group comprising poly(dexyethylene), poly(vinyl alcohol), polyvinylpyrrolidone), poly(N-2-hydroxypropylmethacrylamide), poly(hydroxyethylmethacrylate), hydrophilic poly(amino acid), such as polylysine, polysaccharide, such sequence being in particular poly(oxyethylene).

Uvedený kopolymer může mít blokovou strukturu, výhodně dvoublokovou strukturu nebo tříblokovou strukturu, anebo může mít roubovanou strukturu.Said copolymer may have a block structure, preferably a diblock structure or a triblock structure, or may have a grafted structure.

Přidání takových kopolymerů do nosičového materiálu umožňuje získat homogenní disperzi látky určené k zapouzdření uvnitř každé z mikrosfér.The addition of such copolymers to the carrier material makes it possible to obtain a homogeneous dispersion of the substance to be encapsulated inside each of the microspheres.

Uvedené přidání rovněž umožňuje modulovat poměr hydrofilie/hydrofobie povrchu mikrosfér, což umožňuje vyloučit nebo alespoň omezit silné a mnohdy denaturující interakce s látkou určenou k zapouzdření.Said addition also makes it possible to modulate the hydrophilicity/hydrophobicity ratio of the microsphere surface, which makes it possible to eliminate or at least limit strong and often denaturing interactions with the substance intended to be encapsulated.

·* ···· • · · · · · • · · · • · · · · • · · · •··· · ··· ·· • · · • · · • · · • · ··* ···· • ·

Kromě toho tyto kopolymery, jejichž chemický charakter hydrofobní sekvence je identický s charakterem homopolymeru tvořícího podstatnou část mikrosfér, jsou obzvláště výhodné pro skutečně výhodnou formu provedení přípravy mikrosfér, která bude detailněji vysvětlena v následujícím popisu.Furthermore, these copolymers, the chemical character of which of the hydrophobic sequence is identical to that of the homopolymer constituting the essential part of the microspheres, are particularly advantageous for a truly advantageous embodiment of the preparation of microspheres, which will be explained in more detail in the following description.

Obecně mohou být mikrosféry podle vynálezu získány provedením způsobu, který zahrnuje:In general, the microspheres of the invention can be obtained by carrying out a process comprising:

přípravu vícenásobné emulze se třemi fázemi, přičemž mezilehlá fáze této emulze je tvořena roztokem polymeru nebo polymerů tvořících nosičový materiál v těkavém organickém rozpouštědle, a odpaření uvedeného organického rozpouštědla za podmínek umožňujících vyvolat srážení polymeru okolo kapiček tvořících vnitřní fázi.preparing a multiple emulsion with three phases, the intermediate phase of which is formed by a solution of the polymer or polymers forming the carrier material in a volatile organic solvent, and evaporating said organic solvent under conditions allowing precipitation of the polymer around the droplets forming the internal phase.

Uvedená vícenásobná emulze může být získána klasickým způsobem spočívajícím v tom, že se primární emulze typu voda-v-oleji disperguje ve druhé vodné fázi obsahující stabilizační činidlo.Said multiple emulsion can be obtained in a conventional manner by dispersing a primary water-in-oil emulsion in a second aqueous phase containing a stabilizing agent.

Taková vícenásobná emulze může být rovněž získána inverzním způsobem spočívajícím v tom, že se vodný roztok nalije do primární emulze typu voda-v-oleji. Tento inverzní způsob zcela neočekávatelně umožňuje získat zcela pozoruhodné výsledky, které jsou mnohdy lepší než výsledky získané výše uvedenou klasickou technikou.Such a multiple emulsion can also be obtained by an inverse method consisting in pouring an aqueous solution into a primary water-in-oil emulsion. This inverse method, quite unexpectedly, allows quite remarkable results to be obtained, which are often better than those obtained by the above-mentioned classical technique.

Takto se druhý předmět vynálezu týká způsobu získání výše popsaných mikrosfér, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuj e:Thus, the second subject of the invention relates to a method for obtaining the above-described microspheres, the essence of which consists in comprising:

a) přípravu prvního- roztoku výše uvedeného polymeru nebo polymerů tvořících nosičový materiál v těkavém organickém rozpouštědle obsahujícím případně povrchově aktivní činidlo,a) preparing a first solution of the above-mentioned polymer or polymers forming the carrier material in a volatile organic solvent optionally containing a surfactant,

b) přípravu druhého roztoku nemísitelného s roztokemb) preparation of a second solution immiscible with the solution

Φ· ···· • · ··· ···· • φ φ φφφφφφφφ • φ ······· •··· · ··· ·· ·· · · získaným ve stupni a), obsahujícího případně uvedenou látku určenou k dispergování a případně povrchově aktivní činidlo,Φ· ···· • · ··· ··· • φ φ φφφφφφφφ • φ ······ •··· · ··· · ·· · · · · obtained in step a), optionally containing said substance intended to be dispersed and optionally a surfactant,

c) přípravu primární emulze dispergováním uvedeného druhého roztoku v uvedeném prvním roztoku, přičemž kontinuální fáze je tvořena roztokem polymeru nebo polymerů,c) preparing a primary emulsion by dispersing said second solution in said first solution, the continuous phase being formed by a solution of the polymer or polymers,

d) přípravu sekundární emulze:d) preparation of the secondary emulsion:

buď dispergováním za míchání primární emulze získané ve stupni c) v dispergačním prostředí nemísitelném s uvedenou primární emulzí, přičemž uvedené dispergační prostředí obsahuje případně stabilizační činidlo, nebo nalitím za míchání do uvedené primární emulze roztoku tvořeného prostředím nemísitelným s uvedenou primární emulzí, přičemž uvedené prostředí případně obsahuje stabilizační činidlo, a odpaření uvedeného organického činidla za míchání.either by dispersing with stirring the primary emulsion obtained in step c) in a dispersion medium immiscible with said primary emulsion, said dispersion medium optionally containing a stabilizing agent, or by pouring with stirring into said primary emulsion a solution formed by a medium immiscible with said primary emulsion, said medium optionally containing a stabilizing agent, and evaporating said organic agent with stirring.

V rámci specifické formy provedení vynálezu zahrnuje výše popsaný způsob dále:In a specific embodiment of the invention, the method described above further comprises:

f) izolaci mikrosfér odstředěním,f) isolation of microspheres by centrifugation,

g) jedno nebo několik následných promytí uvedených mikrosfér ag) one or more subsequent washings of said microspheres and

h) lyofilizací uvedených mikrosfér.h) lyophilizing said microspheres.

První stupeň způsobu přípravy mikrosfér podle vynálezu zahrnuje tedy získání emulze typu voda-v-oleji, výhodně v přítomnosti vhodného povrchově aktivního činidla, přičemž olejová nebo organická fáze obsahuje polymer nebo polymery určené pro vytvoření nosičového materiálu uvedených mikrosfér.The first stage of the process for preparing microspheres according to the invention therefore involves obtaining a water-in-oil emulsion, preferably in the presence of a suitable surfactant, the oily or organic phase comprising the polymer or polymers intended to form the carrier material of said microspheres.

Nejdříve se připraví roztok polymeru nebo polymerů tvořících nosičový materiál pomocí vhodného těkavého organického rozpouštědla a to případně v přítomnosti povrchově aktivního činidla.First, a solution of the polymer or polymers forming the carrier material is prepared using a suitable volatile organic solvent, optionally in the presence of a surfactant.

9 9 9 9 9 • 99 99 999 9 9 9 9 • 99 99 99

999 9 9 99 9999 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9 •9 9*9 99 99 9 9 9 9 9 •9 9*9 99 9

9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9

999 99 9999999 99 9999

Výhodně se v tomto stupni použijí předběžně připravené polymery v případě, že homopolymery tvořící v podstatě nosičový materiál mikrosfér mohou být získané za podmínek umožňujících dobrou charakterizaci, pokud jde o molární hmotnost a hmotnostní disperzitu.Preferably, pre-prepared polymers are used in this step if the homopolymers constituting essentially the carrier material of the microspheres can be obtained under conditions allowing good characterization in terms of molar mass and mass dispersity.

Homopolymery tvořené opakujícími se strukturními jednotkami obecného vzorce I mohou být připraveny z monomerů například postupy popsanými v patentovém dokumentu EP 283346, který odpovídá patentovým dokumentům US 4 931 584 a US 5 142 098, přičemž uvedené monomery jsou obecně odplyněny za vakua dosaženého lopatkovým čerpadlem až do konstantní hmotnosti za účelem eliminace inhibitoru polymerace (SO₂) .Homopolymers formed by repeating structural units of general formula I can be prepared from monomers, for example, by the processes described in patent document EP 283346, which corresponds to patent documents US 4,931,584 and US 5,142,098, said monomers being generally degassed under vacuum achieved by a vane pump until constant weight in order to eliminate the polymerization inhibitor (SO ₂ ).

Tyto homopolymery budou nicméně výhodně připraveny aniontovou polymerací v aprotickém prostředí, například dispergováním monomeru v acetonu, následným přidáním hydroxidu sodného za míchání a následným odpařením acetonu a vysušením takto získaného polymeru.These homopolymers will, however, preferably be prepared by anionic polymerization in an aprotic medium, for example by dispersing the monomer in acetone, followed by the addition of sodium hydroxide with stirring, followed by evaporation of the acetone and drying of the polymer thus obtained.

Namísto acetonu mohou být použita i další organická aprotícká rozpouštědla, jako například acetonitril, dioxan nebo tetrahydrofuran.Instead of acetone, other organic aprotic solvents can be used, such as acetonitrile, dioxane or tetrahydrofuran.

Molekulová hmotnost homopolymeru, který může být získán provedením tohoto způsobu, může být dokonale regulována rozumnou volbou pracovních podmínek, zejména volbou koncentrace monomeru v organické fázi, hodnoty pH a molaritou polymeračního iniciátoru (hydroxid sodný).The molecular weight of the homopolymer which can be obtained by carrying out this process can be perfectly controlled by a judicious choice of the operating conditions, in particular by the choice of the monomer concentration in the organic phase, the pH value and the molarity of the polymerization initiator (sodium hydroxide).

Obecně se v rámci vynálezu používají homopolymery mající střední molární hmnotnost 1 000 až 100 000, výhodně homopolymery mající střední molární hmotnost 5 000 až 80 ·.' ·Generally, homopolymers having an average molecular weight of 1,000 to 100,000 are used in the invention, preferably homopolymers having an average molecular weight of 5,000 to 80.

000.000.

·· φφφφ * φφ φφ ·· • · · φ φ · φ φφφφ • · ··· · φ φ φ • · · ΦΦΦΦΦΦ·· φ φ φφφφφφφ φφφφ φ φφφ φφ φφ φφ·· φφφφ * φφ φφ ·· • · · φ φ · φ φφφφ • · ··· · φ φ φ • · · ΦΦΦΦΦΦ·· φ φ φφφφφφφ φφφφ φ φφφ φφ φφφφ

Těkavé organické rozpouštědlo, které může být použito pro přípravu prvního roztoku obsahujícího polymer nebo polymery tvořící nosičovým materiál, bude obecně zvoleno tak, aby jeho teplota varu byla nižší, než je teplota varu vody. Takové rozpouštědlo tedy bude moci být snadno odstraněno při finálním stupni odpaření rozpouštědla umožňujícím vysrážení polymeru.The volatile organic solvent which may be used to prepare the first solution containing the polymer or polymers forming the support material will generally be chosen so that its boiling point is lower than the boiling point of water. Such a solvent will therefore be readily removed during the final solvent evaporation step allowing the polymer to precipitate.

Ethylacetát představuje těkavé organické rozpouštědlo, které je obzvláště vhodné k tomuto účelu.Ethyl acetate is a volatile organic solvent that is particularly suitable for this purpose.

Povrchově aktivní činidla, která mohou být použita pro stabilizaci primární emulze mohou mít různou povahu a budou přidána k organické fázi obsahující polymer nebo polymery (první roztok) nebo/a k vodné fázi (druhý roztok) tvořící dispergovanou fázi.The surfactants that can be used to stabilize the primary emulsion can be of various nature and will be added to the organic phase containing the polymer or polymers (first solution) and/or to the aqueous phase (second solution) forming the dispersed phase.

Může se například jednat o poloxamer, jakým je produkt uvedený na trh pod označením Pluronic F68 nebo také o polyvinylalkohol, jakým je produkt uvedený na trh pod označením Mowiol 40-88, nebo také o polysorbat a nebo ještě o povrchově aktivní kopolymer, jehož hydrofobní sekvence má stejný chemický charakter jako je charakter homopolymeru tvořeného strukturními jednotkami obecného vzorce I.It may, for example, be a poloxamer, such as the product marketed under the name Pluronic F68, or a polyvinyl alcohol, such as the product marketed under the name Mowiol 40-88, or a polysorbate, or even a surface-active copolymer, the hydrophobic sequence of which has the same chemical character as the character of the homopolymer formed by the structural units of general formula I.

Bylo prokázáno, že takové povrchově aktivní kopolymery a zejména kopolymery póly(methylidenmalonát)u a polyoxyethylenu jsou obzvláště výhodné vzhledem k tomu, že jednak umožňují získat velmi stabilní primární emulzi a jednak umožňují dosáhnout dobrého ukotvení povrchově aktivního činidla v matrici po odpaření rozpouštědla.It has been shown that such surfactant copolymers, and in particular copolymers of poly(methylidenemalonate) and polyoxyethylene, are particularly advantageous in that they allow, on the one hand, to obtain a very stable primary emulsion and, on the other hand, to achieve good anchoring of the surfactant in the matrix after evaporation of the solvent.

Výše uvedené povrchově aktivní kopolymery mohou být připraveny o sobě známými klasickými polymeračními technikami.The above-mentioned surface-active copolymers can be prepared by conventional polymerization techniques known per se.

»*· 0»*· 0

00 «0 • 0 · · · » · »0·· • 0 0 0 0 000« · · <0 ··««««00 «0 • 0 · · · » · »0·· • 0 0 0 0 000« · · <0 ··««««

0 0000000 •••00 >00*0 0· 000 0000000 •••00 >00*0 0· 00

Z těchto technik se výhodně použije aniontová polymerace, radikálová polymerace nebo také technika kopulace prekurzorových sekvenci kopolymerů, přičemž tyto sekvence byly předběžně funkcionalizované na konci řetězce adekvátním způsobem.Of these techniques, anionic polymerization, radical polymerization or also the technique of coupling of precursor sequences of copolymers is preferably used, these sequences having been pre-functionalized at the chain end in an appropriate manner.

Aniontová polymerace je obzvláště vhodná pro přípravu blokových kopolymerů.Anionic polymerization is particularly suitable for the preparation of block copolymers.

Tento typ polymerace zahrnuje sekvenční přidávání monomerů a umožňuje získat dokonale definovanou strukturu, přičemž použitá množství iniciátorů a monomerů umožňují regulovat stupeň polymerace každé ze sekvencí.This type of polymerization involves the sequential addition of monomers and allows a perfectly defined structure to be obtained, with the amounts of initiators and monomers used allowing the degree of polymerization of each of the sequences to be controlled.

Blokový kopolymer může být takto získán:A block copolymer can be obtained as follows:

buď aniontovou polymerací prvního monomeru a reakcí na růstovém řetězci druhého monomeru, nebo aktivací prekurzorového polymeru, který bude sloužit jako iniciátor při polymeraci druhého monomeru.either by anionic polymerization of the first monomer and reaction on the growing chain of the second monomer, or by activation of a precursor polymer that will serve as an initiator in the polymerization of the second monomer.

Iniciačními činidly schopnými použití v rámci uvedených aniontových polymerací obecně budou:Initiating agents capable of use in the anionic polymerizations mentioned will generally be:

jednak organokovové deriváty, jako například butyllithium a zejména difenylhexyllithium, a jednak alkoxidy a zejména makromolekulární alkoxidy, jako například POE-alkoxid, které mohou být získány aktivací hydroxy-funkce pomocí kumyldraslíku, difenylmethyldraslíku nebo naftalendraslíku.on the one hand organometallic derivatives, such as butyllithium and in particular diphenylhexyllithium, and on the other hand alkoxides and in particular macromolecular alkoxides, such as POE-alkoxide, which can be obtained by activating the hydroxy function with cumyl potassium, diphenylmethyl potassium or naphthalene potassium.

Uvedená aniontová polymerace bude rovněž provedena v rozpouštědle, které je kompatibilní s různými sekvencemi kopolymerů.Said anionic polymerization will also be carried out in a solvent that is compatible with the various copolymer sequences.

V případě, kdy je sekvence s. hydrofilním charakterem tvořena póly(oxyethylen)em a sekvence s hydrofobním charakterem je tvořena póly(methylidenmalonát)em, budou ·In the case where the sequence with hydrophilic character is formed by poly(oxyethylene) and the sequence with hydrophobic character is formed by poly(methylidenemalonate), they will be

·· ·· • ♦ · · • · e>·· ·· • ♦ · · • · e>

blokové kopolymery podle vynálezu výhodně připraveny postupnou aniontovou polymeraci ethylenoxidu a potom methylidenmalonátu nebo aktivací komerčního monohydroxylovaného polyoxyethylenového prekurzoru a následnou aniontovou polymeraci póly(methylidenmalonát)ové sekvence.The block copolymers of the invention are preferably prepared by sequential anionic polymerization of ethylene oxide and then methylidene malonate or by activation of a commercial monohydroxylated polyoxyethylene precursor and subsequent anionic polymerization of the poly(methylidene malonate) sequence.

Obecne se jako polymerační rozpouštědlo výhodně použije tetrahydrofuran, přičemž toto rozpouštědlo umožňuje pracovat v homogenním prostředí, což příznivě ovlivňuje kinetiku polymerace.In general, tetrahydrofuran is preferably used as the polymerization solvent, this solvent allowing work in a homogeneous environment, which favorably affects the polymerization kinetics.

Monomery použité pro přípravu uvedených hydrofilních sekvencí jsou obecně komerčně dostupné produkty.The monomers used for the preparation of said hydrophilic sequences are generally commercially available products.

Technika kopulace je rovněž obzvláště vhodná pro přípravu blokových kopolymerů.The coupling technique is also particularly suitable for the preparation of block copolymers.

Tato reakce se obecně provádí za použití předběžně syntetizovaných a funkcionalizovaných homopolymerů v přítomnosti kopulačního činidla a případně aktivačního činidla a ve vhodném rozpouštědle.This reaction is generally carried out using pre-synthesized and functionalized homopolymers in the presence of a coupling agent and optionally an activating agent and in a suitable solvent.

V případě přípravy výhodných kopolymerů podle vynálezu, jejichž hydrofilní sekvence je tvořena póly(oxyethylen)em a jejich hydrofobní sekvence je tvořena póly(methylidenmalonát)em, se výhodně použije homopolymer póly(oxyethylen)u funkcionalizovaného α-karboxy-skupínou a homopolymer póly(methylidenmalonát)u funkcionalizovaného α-hydroxy-skupinou.In the case of preparing the preferred copolymers according to the invention, the hydrophilic sequence of which is formed by poly(oxyethylene) and the hydrophobic sequence of which is formed by poly(methylidenemalonate), a homopolymer of poly(oxyethylene) functionalized with an α-carboxy group and a homopolymer of poly(methylidenemalonate) functionalized with an α-hydroxy group are preferably used.

Homopolymer póly(oxyethylen) u funkcionalizovaného cc-karboxy-skupinou může být například získán převedením komerčního póly(oxyethylen)u funkcionalizovaného α-hydroxy-skupinou za použití anhydridu kyseliny jantarové.For example, a homopolymer of poly(oxyethylene) functionalized with an α-carboxy group can be obtained by converting a commercial poly(oxyethylene) functionalized with an α-hydroxy group using succinic anhydride.

Homopolymer póly(methylenmalonát)u funkcionalizovaného • · • · · α-hydroxy-skupinou může být získán přímo aniontovou syntézou ve vodném prostředí nebo aniontovou syntézou v rozpouštědle za použití vodného roztoku hydroxidu sodného jakožto polymeračního iniciátoru.Homopolymer of poly(methylenemalonate) functionalized with an α-hydroxy group can be obtained directly by anionic synthesis in aqueous medium or by anionic synthesis in a solvent using an aqueous solution of sodium hydroxide as a polymerization initiator.

Jako kopulační činidlo, které je obzvláště vhodné pro uvedenou polymeraci, lze výhodně použít dicyklohexylkarbodiimid (DCCI).As a coupling agent which is particularly suitable for said polymerization, dicyclohexylcarbodiimide (DCCI) can be advantageously used.

Uvedená kopulační reakce může být případně aktivována bázíckou katalýzou a obecně probíhá v rozpouštědle, které je kompatibilní s uvedenými homopolymery, a kterým je zejména dichlormethan ve specifickém případě výhodných kopolymerů podle vynálezu.Said coupling reaction may optionally be activated by base catalysis and generally takes place in a solvent which is compatible with said homopolymers, which is in particular dichloromethane in the specific case of the preferred copolymers according to the invention.

Pro přípravu roubovaných kopolymerů je obzvláště vhodná radikálová polymerace.Radical polymerization is particularly suitable for the preparation of graft copolymers.

Tato polymerace se obecně provádí za použití makromonomeru ve funkci výchozího produktu, t.j. oligomerů nesoucího na jednom ze svých konců ethylenickou skupinu, která je radikálově polymerovatelná a která je schopna reagovat s monomerem za vzniku kopolymeru s roubovanou strukturou.This polymerization is generally carried out using a macromonomer as the starting product, i.e. oligomers carrying at one of their ends an ethylenic group which is radically polymerizable and which is capable of reacting with the monomer to form a copolymer with a grafted structure.

Tato polymerace bude obecně provedena v přítomnosti iniciátoru a ve vhodném rozpouštědle.This polymerization will generally be carried out in the presence of an initiator and in a suitable solvent.

V případě přípravy roubovaných kopolymerů podle vynálezu, jejichž hydrofilní sekvence je tvořena póly(oxyethylen)em, mohou být použity různé funkcionalizované makromery.In the case of preparing graft copolymers according to the invention, the hydrophilic sequence of which is formed by poly(oxyethylene), various functionalized macromers can be used.

Obzvláště výhodné je použití makromonomeru funkcionalizovaného methakryloylovou skupinou.The use of a macromonomer functionalized with a methacryloyl group is particularly preferred.

Takový produkt může být komerčně dostupný (Aldrich) a bude tvořen například póly (oxyethylen)ovým řetězcem s molární molekulovou hmotností mezi 308 a 440 g/mol nebo bude připraven z . komerčně dostupného póly(ethylenglykol)monomethyletheru kopulací s kyselinou methakrylovou v dichlormethanu za účelem vytvoření terminální methoxy-funkce.Such a product may be commercially available (Aldrich) and will be formed, for example, by a poly(oxyethylene) chain with a molar molecular weight between 308 and 440 g/mol or will be prepared from commercially available poly(ethylene glycol) monomethyl ether by coupling with methacrylic acid in dichloromethane to form a terminal methoxy function.

Takový makromonomer může být rovněž připraven aktivací póly(oxyethylen) u a následnou reakcí s methakryloylehloridem.Such a macromonomer can also be prepared by activating poly(oxyethylene) and then reacting it with methacryloyl chloride.

Kopolymery s roubovanou strukturou být rovněž připraveny póly (oxyethylen)monomethyletheru v esterových řetězců předběžně póly(methylidenmalonát)u.Copolymers with a grafted structure can also be prepared by poly(oxyethylene)monomethyl ether in ester chains preliminarily poly(methylidenemalonate).

Tato alkoholu transesterifikace bude obecně , v přítomnosti katalyzátoru a podle vynálezu mohou transesterifíkácí úrovni bočních syntetizovaného provedena za použití při zvýšené teplotě.This alcohol transesterification will generally be carried out in the presence of a catalyst and according to the invention can be carried out using the transesterification level of the synthesized side chains at elevated temperature.

Kopolymery, jejichž celková molární hmotnost sekvencí s hydrofobním charakterem činí 1 000 až 80 000 g/mol, výhodně 1 000 až 50 000 g/mol, jsou obzvláště vhodné pro použití v rámci vynálezu.Copolymers whose total molar mass of the hydrophobic character sequences is 1,000 to 80,000 g/mol, preferably 1,000 to 50,000 g/mol, are particularly suitable for use in the context of the invention.

Obecně může být primární emulze sloužící pro přípravu mikrosfér tvořících podstatu vynálezu, získána pomocí homogenizátoru na bázi střihového napětí, kterým je například zařízení typu Uktraturrax (13 500 otáček za minutu, 5 minut)In general, the primary emulsion used for the preparation of the microspheres constituting the essence of the invention can be obtained using a shear-based homogenizer, such as an Uktraturrax type device (13,500 rpm, 5 minutes)

Látka, která má být zapouzdřena se obecně přidává do vodné fáze, která je dispergovaná v primární emulzi.The substance to be encapsulated is generally added to the aqueous phase, which is dispersed in the primary emulsion.

Druhý stupeň způsobu přípravy mikrosfér podle vynálezu • · • · * · ···· · ··· «· ·· ·· zahrnuje přípravu sekundární emulze:The second stage of the method for preparing microspheres according to the invention • · • · * · ··· · ··· «· ·· ·· comprises the preparation of a secondary emulsion:

buď dispergováním za míchání primární emulze získané ve stupni c) v dispergačním prostředí nemísitelném s uvedenou primární emzlzí, přičemž uvedené dispergační prostředí obsahuje případně stabilizační činidlo, nebo nalitím za míchání do uvedené primární emulze roztoku tvořeného prostředím nemísitelným s uvedenou primární emulzí, přičemž uvedené prostředí případně obsahuje stabilizační činidlo.either by dispersing with stirring the primary emulsion obtained in step c) in a dispersion medium immiscible with said primary emulsion, said dispersion medium optionally containing a stabilizing agent, or by pouring with stirring into said primary emulsion a solution formed by a medium immiscible with said primary emulsion, said medium optionally containing a stabilizing agent.

Obecně je dispergačním prostředím nemísitelným s primární emulzí vodná fáze, do které se primární emulze zavede výhodně po kapkách, přičemž rovněž tato emulze se připraví například za použití homogenizátoru typu Ultraturrax (8000 otáček za minutu, 5 minut).Generally, the dispersion medium immiscible with the primary emulsion is an aqueous phase into which the primary emulsion is preferably introduced dropwise, and this emulsion is also prepared, for example, using an Ultraturrax type homogenizer (8000 rpm, 5 minutes).

Polyvinylalkohol tvořící stabilizační činidlo je obzvláště vhodný pro přípravu sekundární emulze.Polyvinyl alcohol forming a stabilizing agent is particularly suitable for preparing a secondary emulsion.

Po tomto druhém stupni může případně náásledovat dodatečný stupeň vytěsnění organického rozpouštědla.This second stage may optionally be followed by an additional stage of organic solvent displacement.

Třetí podstatný stupeň způsobu přípravy mikrosfér podle vynálezu spočívá v tom, že že se odpaří těkavé organické rozpouědlo, které sloužilo pro přípravu roztoku polymeru nebo polymerů.The third essential step of the method for preparing microspheres according to the invention consists in evaporating the volatile organic solvent used to prepare the polymer or polymers solution.

Ve specifickém případě, kdy je tímto rozpouštědlem ethylacetát, se uvedené odpaření provádí po dobu asi 12 hodin při teplotě místnosti za mechanického míchání (1 400 otáček za minutu).In the specific case where the solvent is ethyl acetate, said evaporation is carried out for about 12 hours at room temperature with mechanical stirring (1400 rpm).

Odborník v daném oboru vhodným způsobem zvolí jednotlivé podmínky provedení těchto tří podstatných stupňů přípravy způsobu podle vynálezu a to v závislosti na požadovaných fyzikálně-chemických a morfologických • · · ·A person skilled in the art will appropriately select the individual conditions for carrying out these three essential stages of the preparation of the method according to the invention, depending on the required physicochemical and morphological properties.

· · · • ♦ · ♦ • · · · vlastnostech uvedených mikrosfér.· · · • ♦ · ♦ • · · · properties of the said microspheres.

Obecně mají tyto mikrosféry střední průměr 1 až 100 pm, výhodně 5 až 50 pm, v případě jejich použití jakožto nosiče účinných látek ve farmaceutické oblastí.Generally, these microspheres have a mean diameter of 1 to 100 µm, preferably 5 to 50 µm, in the case of their use as carriers of active substances in the pharmaceutical field.

Obecně budou mikrosféry získané na výstupu uvedeného třetího stupně izolovány odstředěním, promyty a případně lyofilizovány.Generally, the microspheres obtained at the output of said third stage will be isolated by centrifugation, washed and optionally lyophilized.

Třetí předmět vynálezu se týká farmaceutických kompozic obsahující mikrosféry, které byly právě popsané. Tyto kompozice budou obecně vhodné pro perorální podání a budou například ve formě tablet, želatinových tobolek, prášků nebo granulí.A third aspect of the invention relates to pharmaceutical compositions comprising the microspheres just described. These compositions will generally be suitable for oral administration and will be in the form of, for example, tablets, gelatin capsules, powders or granules.

V následující části popisu bude vynález popsán pomocí příkladů jeho konkrétního provedení, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu. Zkratky použité v těchto příkladech mají následující významy:In the following part of the description, the invention will be described by means of examples of its specific embodiment, these examples being merely illustrative and not limiting in any way the scope of the invention. The abbreviations used in these examples have the following meanings:

OE: ethylenoxid,OE: ethylene oxide,

POE: póly(oxyethylen),POE: poly(oxyethylene),

MM 2.1.2: methylidenmalonát obecného vzorce:MM 2.1.2: methylidene malonate of the general formula:

OO

II ^c—och₂ch₃ ^c—o—ch,—cII ^c—oh ₂ ch ₃ ^c—o—ch,—c

II oII about

^och₂ch₃ který má chemický název: 1-ethoxykarbonyl-l-ethoxykarbonylmethylenoxykarbonylethen,^och ₂ ch ₃ which has the chemical name: 1-ethoxycarbonyl-1-ethoxycarbonylmethyleneoxycarbonylethene,

PMM 2.1.2: polymer tvořený strukturními jednotkami vzorce:PMM 2.1.2: polymer formed by structural units of the formula:

• · · · · · • Φ Φ 1· ··• · · · · · • Φ Φ 1· ··

Φ ® · · · «· * •Φ Φ Φ · ·«·· • · · **Φ*«··· • · · · Φ Φ··· ·*· * * * *· *· ·· cooch₂ch₃ Φ ® · · · «· * •Φ Φ Φ · ·«·· • · · **Φ*«··· • · · · Φ Φ··· ·*· * * * *· *· ·· cooch ₂ ch ₃

-^CH2 -<?CO—ο—ch₂—cooch₂ch₃ - ^CH 2 -<?CO—ο—ch ₂ —cooch ₂ ch ₃

Jinak v uvedených příkladech:Otherwise, in the examples given:

velikost mikrosfér byla měřena technikou Coulterova počítače a zkoumání morfologie bylo provedeno skanovacím elektronovým mikroskopem a to buď za použití surových mikrosfér nebo po kryogenní destrukci, a molekulová hmotnost polymerů byla stanovena permeační gelovou chromatografií (CPG).The size of the microspheres was measured by the Coulter counter technique and the morphology was examined by scanning electron microscopy either using raw microspheres or after cryogenic destruction, and the molecular weight of the polymers was determined by gel permeation chromatography (GPC).

Příklady provedení vynálezuExamples of embodiments of the invention

Příkl-ad 1Example 1

100 mg methylidenmalonátu 2.1.2 se rozpustí v 10 ml acetonu za míchání magnetickým míchadlem. K získanému roztoku se potom postupně stále za míchání magnetickým míchadlem přidá 100 mikrolitrů 0,lN hydroxidu sodného. Polymerace se ponechá probíhat po dobu 5 minut, načež se přidá 100 mikrolitrů 0,1 N kyseliny chlorovodíkové, přičemž se směs stále míchá magnetickým míchadlem. Získaný polymer se potom promyje pomocí asi 100 ml destilované vody, načež se vysuší za vakua. Molekulová hmotnost tohoto polymeru činí 30 000.100 mg of methylidenemalonate 2.1.2 is dissolved in 10 ml of acetone while stirring with a magnetic stirrer. 100 microliters of 0.1N sodium hydroxide are then gradually added to the solution obtained while still stirring with a magnetic stirrer. The polymerization is allowed to proceed for 5 minutes, after which 100 microliters of 0.1N hydrochloric acid are added, the mixture being still stirred with a magnetic stirrer. The polymer obtained is then washed with about 100 ml of distilled water and then dried under vacuum. The molecular weight of this polymer is 30,000.

280 mg polymethylidenmalonátu se rozpustí v 10 ml • · · ·280 mg of polymethylidenemalonate is dissolved in 10 ml • · · ·

·· 99 · · *·· 99 · · *

9 9 9 • · · 9 99 9 9 • · · 9 9

9 9 99 9 9

9 9 9 ethylacetátu. 1 ml vodné fáze obsahující 60 mg vaječného albuminu se emulguje v organické fázi za míchání pomocí zařízení Ultraturrax při rychlosti otáčení míchadla 13 500 otáček za minutu a při době míchání 5 minut. Tato emulze se potom přidá ke 100 ml 2% vodného roztoku polyvinylalkoholu, přičemž se směs míchá v zařízení Ultraturrex po dobu 5 minut při rychlosti otáčení míchadla 8 000 otáček za minutu. Odpaření ethylacetátu se provede v průběhu noci při teplotě místnosti za mechanického míchání lopatkovým míchadlem při rychlosti otáčení míchadla 1 400 otáček za minutu. Získané mikrosféry se izolují odstředěním při 4 000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut, načež se šestkrát promyjí destilovanou vodou a po každém z těchto promytí se podrobí odstředění. Po posledním odstředění se mikrosféry znovu suspendují ve 3 ml destilované vody a potom lyofilizuj i.9 9 9 ethyl acetate. 1 ml of the aqueous phase containing 60 mg of egg albumin is emulsified in the organic phase under stirring with an Ultraturrax at a stirrer speed of 13,500 rpm and a stirring time of 5 minutes. This emulsion is then added to 100 ml of a 2% aqueous solution of polyvinyl alcohol, the mixture being stirred in an Ultraturrex for 5 minutes at a stirrer speed of 8,000 rpm. Evaporation of the ethyl acetate is carried out overnight at room temperature under mechanical stirring with a paddle stirrer at a stirrer speed of 1,400 rpm. The microspheres obtained are isolated by centrifugation at 4,000 rpm for 10 minutes, then washed six times with distilled water and subjected to centrifugation after each of these washings. After the final centrifugation, the microspheres are resuspended in 3 ml of distilled water and then lyophilized.

Takto získané mikrosféry mají střední průměr 6 mikrometrů, přičemž v těchto mikrosférách tvořených PMMThe microspheres thus obtained have an average diameter of 6 micrometers, and in these microspheres formed by PMM

2.1.2 je zapouzdřeno 14,2 % vaječného albuminu použitého při této přípravě, což odpovídá zapouzření 2,5 % hmostností.2.1.2 encapsulates 14.2% of the egg albumin used in this preparation, which corresponds to an encapsulation of 2.5% by weight.

Takto získaný přípravek se podává perorálně myším C3H v dávce 100 mikrogramů zapozdřeného vaječného albuminu (na myš a den) po dobu pěti po sobě jdoucích dnů. Poslední dávka je podána 7 dní před senzibilací pokusných zvířat na vaječný albumin, která se provede subkutánní injekcí volného vaječného albuminu (100 mikrogramů/myš) ve dnech DO a D14. 90 % myší přežije druhou injekci vaječného albuminu, zatímco přežije méně než 30 % myší, kterým byly podány mikrosféry bez vaječného albuminu nebo kterým byla podána stejná dávka nezapouzdřeného vaječného albuminu.The preparation thus obtained is administered orally to C3H mice at a dose of 100 micrograms of encapsulated ovalbumin (per mouse per day) for five consecutive days. The last dose is administered 7 days before sensitization of the experimental animals to ovalbumin, which is carried out by subcutaneous injection of free ovalbumin (100 micrograms/mouse) on days DO and D14. 90% of the mice survive the second injection of ovalbumin, while less than 30% of the mice given microspheres without ovalbumin or given the same dose of unencapsulated ovalbumin survive.

Příklad 2 ·· ···· •·♦* · «· · ·· Φ t φ φExample 2 ·· ···· •·♦* · «· · ·· Φ t φ φ

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se do vodné fáze obsahující vaječný albumin přidá Pluronic F 68 v koncentrací 2 %.The procedure is the same as in Example 1, except that Pluronic F 68 is added to the aqueous phase containing egg albumin at a concentration of 2%.

Příklad 3Example 3

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se do organické fáze obsahující polymer přidá 20 mg kopolymeru POE-PMM.The procedure is the same as in Example 1, except that 20 mg of POE-PMM copolymer is added to the organic phase containing the polymer.

V tomto příkladu byl použit blokový kopolymer POE-PMMIn this example, the block copolymer POE-PMM was used

2.1.2. Tento kopolymer byl získán následnou polymerací obou monomerů, přičemž byl nejdříve připravem blok POE za použití následujícího postupu.2.1.2. This copolymer was obtained by sequential polymerization of both monomers, with the POE block first being prepared using the following procedure.

Reaktor, ve kterém se provádí polymerace (250 ml) je spojen s vakuovým čerpadlem umožňujícím pracovat za hlubokého vakua a zbavit se tak protických nečistot.The reactor in which the polymerization is carried out (250 ml) is connected to a vacuum pump allowing operation under deep vacuum and thus getting rid of protic impurities.

Rozpouštědlo (tetrahydrofuran, 150 ml) , které je přečištěním zbaveno všech stop vlhkosti, se zavede do reaktoru mechanismem kryogenní destilace pří teplotě -70.The solvent (tetrahydrofuran, 150 ml), which is purified to remove all traces of moisture, is introduced into the reactor by cryogenic distillation at a temperature of -70.

Pomocí injekční stříkačky se potom skrze přestupní komůrku reaktoru do reaktoru zavede polymerační iniciátor (terč.butoxid draselný (O,1N/THF), 10 ml).Using a syringe, the polymerization initiator (potassium tert-butoxide (0.1N/THF), 10 ml) is then introduced into the reactor through the reactor transfer chamber.

Mechanismem kryogenní destilace se potom do reaktoru zavede ethylenoxid (5 g).Ethylene oxide (5 g) is then introduced into the reactor via cryogenic distillation.

Polymerace se provádí při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Po uplynutí této doby se odebráním vzorku a jeho analýzou pomocí permeační gelové chromatografie stanoví molární hmotnost (4000 g/mol) a index polymolekularity * · φ · • ·The polymerization is carried out at room temperature for 48 hours. After this time, a sample is taken and analyzed by gel permeation chromatography to determine the molar mass (4000 g/mol) and the polymolecularity index * φ •

Jako inhibitor polymerace se použije MM 2.1.2 (0,5 ml), (1,13) získané první sekvence který byl za vakua čerstvě odplyněn oxidu siřičitého; tento inhibitor najednou při teplotě místnosti.As a polymerization inhibitor, MM 2.1.2 (0.5 ml), (1.13) of the first sequence obtained which was freshly degassed under vacuum from sulfur dioxide, is used; this inhibitor is added at once at room temperature.

za účelem odstranění se přidá rychle afor the purpose of removal, it is added quickly and

Po 5 hodinách se kopolymer deaktivuje přidáním methanolu a vysráží v diethyletheru.After 5 hours, the copolymer is deactivated by adding methanol and precipitated in diethyl ether.

Na POE je zachyceno 5 strukturních jednotek MM 2.1.2, což odpovídá molární hmotnosti pro PMM 2.1.2 1 150 g/mol.5 structural units of MM 2.1.2 are captured on POE, which corresponds to a molar mass for PMM 2.1.2 of 1,150 g/mol.

Pomocí termické analýzy kopolymeru bylo zjištěna teplota přechodu do skelného stavu -16 °C a pík teploty tání při 45 °C (ΔΗ = 117 J/G).Thermal analysis of the copolymer revealed a glass transition temperature of -16 °C and a melting point peak at 45 °C (ΔΗ = 117 J/G).

Příklad 4Example 4

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se vaječný albumin (60 mg) nahradí 2 mg peptidu V3 2 8 smyčky V3 BRU, gp 12 0, HIV (sekvence NNTRKSIHIGPGRAFYATGDIIGDIRQA). Získané mikrosféry mají průměrnou velikost 5,8 mikrometrů a 70 % použitého peptidu V3 28 je zapouzdřeno v uvedených mikrosférách, což odpovídá zapozdření 0,48 % hmotnosti. Studie provedená pod skanovacím mikroskopem ukazuje, že částice jsou hladké a mají kulovitý tvar.The procedure is the same as in Example 1, except that the egg albumin (60 mg) is replaced by 2 mg of peptide V3 2 8 of the V3 loop BRU, gp 12 0, HIV (sequence NNTRKSIHIGPGRAFYATGDIIGDIRQA). The microspheres obtained have an average size of 5.8 microns and 70% of the V3 28 peptide used is encapsulated in said microspheres, which corresponds to an encapsulation of 0.48% by weight. A study carried out under a scanning microscope shows that the particles are smooth and have a spherical shape.

Příklad 5Example 5

Postupuje se stejně jako v příkladu 4, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se do vodné fáze obsahující peptid v koncentraci 2 % přidá Pluronic F 68. Získané mikrosféry φφ φφφφ ···· · φφφ ·φ φ» φφ mají velikost 7,0 mikrometrů a 70 % použitého peptidu je zapouzdřeno v získaných mikrosférách.The procedure is the same as in Example 4, except that Pluronic F 68 is added to the aqueous phase containing the peptide at a concentration of 2%. The obtained microspheres φφ φφφφ ···· · φφφ ·φ φ» φφ have a size of 7.0 micrometers and 70% of the peptide used is encapsulated in the obtained microspheres.

Příklad 6Example 6

Postupuje se stejně jako v příkladu 4, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se do vodné fáze obsahující peptid přidá 20 mg kopolymeru POE-PMM.The procedure is the same as in Example 4, except that 20 mg of POE-PMM copolymer is added to the aqueous phase containing the peptide.

Příklad 7Example 7

Postupuje se stejně jako v příkladu 4, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se k organické fázi obsahující polymer přidá 20 mg kopolymeru POE-PMM.The procedure is the same as in Example 4, except that 20 mg of POE-PMM copolymer is added to the organic phase containing the polymer.

Příklad 8Example 8

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou, spočívající v tom, že vnitřní fáze je tvořena 1 ml 0,5M kyseliny octové obsahující 3 mg kolagenu typu II. Takto získané mikrosféry mají střední průměr 6 mikrometrů aThe procedure is the same as in Example 1, except that the internal phase is made up of 1 ml of 0.5M acetic acid containing 3 mg of type II collagen. The microspheres thus obtained have a mean diameter of 6 micrometers and

66,6 % použitého kolagenu je zapouzdřeno v mikrosférách PMM66.6% of the collagen used is encapsulated in PMM microspheres

2.1.2, což odpovídá zapouzdření %,7 % hmotnosti.2.1.2, which corresponds to an encapsulation of %.7% by weight.

Příklad 9Example 9

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou spočívající v tom, že vnitřní vodná fáze je tvořena 1 ml destilované vody. Takto získané mikrosféry neobsahujíThe procedure is the same as in Example 1, except that the internal aqueous phase is made up of 1 ml of distilled water. The microspheres thus obtained do not contain

M 1 • · • 4 M 1 • · • 4 »444 4 44 44 • 444 4 4 *4 « 4 4 4 4 4 4 * Λ 9 9 9 9 λ. 9 »444 4 44 44 • 444 4 4 *4 « 4 4 4 4 4 4 * Λ 9 9 9 9 λ. 9 • · • 4 • · • 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 ⁹ 4 «4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 44444 44 ⁹ 4 «4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4 44444 44 4 4 4 4 22 22 biologicky účinnou mikrometrů. biologically effective micrometers. látku. substance. Jej ích Her health střední průměr average diameter činí 7,0 is 7.0 Příklad 10 Example 10 Postupuje se Progressing stejně the same j ako v j as in příkladu 1, example 1, avšak s but with

výjimkou, že vaječný albumin (60 mg) je nahrazen plasmidem pCDNA3 (5 mg). Takto získané mikrosféry mají střední velikost 7 μιη a 9,8 % použitého plasmidu je zapouzdřeno v uvedených mikrosférách, což odpovídá zapouzdření 0,17 % hmotnosti. Studie pod skanovacím elektronovým mikroskopem ukázala, že získané částice jsou hladké a mají kulovitý tvar.except that the egg albumin (60 mg) is replaced by the plasmid pCDNA3 (5 mg). The microspheres thus obtained have a mean size of 7 μιη and 9.8% of the plasmid used is encapsulated in said microspheres, which corresponds to an encapsulation of 0.17% by weight. A study under a scanning electron microscope showed that the particles obtained are smooth and have a spherical shape.

Příklad 11Example 11

Postupuje se stejně jako v příkladu 10, avšak s výjimkou spočívají v tom, že se k vodné fázi obsahující plasmid přidá Pluronic v koncentraci 2 %. Takto získané mikrosféry mají střední průměr 7 pim a 12 % použitého plasmidu je zapouzdřeno do mikrosfér, což odpovídá zapouzdření 0,22 % hmotnosti.The procedure is the same as in Example 10, except that Pluronic is added to the aqueous phase containing the plasmid at a concentration of 2%. The microspheres thus obtained have a mean diameter of 7 µm and 12% of the plasmid used is encapsulated in the microspheres, which corresponds to an encapsulation of 0.22% by weight.

Příklad 12Example 12

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak s výjimkou spočívající v tom, že vaječný albumin (60 mg) je nahrazen oligonukleotidem (pdT16) (2 mg). Získané mikročástice mají střední velikost 4,8 pm a 20,6 % použitého oligonukleotidu •9 9999 • 9The procedure is the same as in Example 1, except that the egg albumin (60 mg) is replaced by the oligonucleotide (pdT16) (2 mg). The microparticles obtained have a mean size of 4.8 pm and 20.6% of the oligonucleotide used •9 9999 • 9

9999

999 9 9 je zapouzdřeno v uvedených zapouzdření 0,19 % hmotnosti.999 9 9 is encapsulated in the listed encapsulations at 0.19% by weight.

mikrosférách, což odpovídámicrospheres, which corresponds to

Příklad 13Example 13

Postupuje se stejně jako v příkladu 12, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se k vodné fázi obsahující oligonukleotid přidá Pluronic v koncentraci 2 %. Získané mikrosféry mají střední průměr 5,7 pm a 23 % použitého oligonukleotidu je zapouzdřeno v uvedených mikrosférách, což odpovídá zapouzdření 0,21 0 hmotnosti.The procedure is the same as in Example 12, except that Pluronic is added to the aqueous phase containing the oligonucleotide at a concentration of 2%. The microspheres obtained have a mean diameter of 5.7 pm and 23% of the oligonucleotide used is encapsulated in said microspheres, which corresponds to an encapsulation of 0.21% by weight.

Claims

PATENTOVÉ

Claims

1. Microspheres formed by a continuous network of carrier material in which the substance is optionally dispersed, characterized in that said carrier material comprises at least 70 wt. homopolymers consisting of repeating structural units of the following general formula

COOR, —CH ₂ C

COO- (CH ₂ ) _n -COOR ₂ in which

R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or a (CH 2) n -COOR group in which m is an integer of 1 to 5 and R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms,

R. represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and n represents an integer of 1 to 5.

Microspheres according to claim 1, characterized in that said homopolymer consists of repeating structural units of the general formula I, in which:

R. represents an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms,

R ₂ represents an alkyl group containing 1-6 carbon atoms and n is an integer of the first

Microspheres according to claim 1, characterized in that said homopolymer consists of repeating structural units of the general formula I, in which R ₁ and R ₂ are CH ₃ -CH ₃ .

Microspheres according to any one of claims 1 to 3, characterized in that said carrier comprises:

90 to 99.5 wt. a homopolymer as defined in claim 1, 2 or 3, and

0.5 to 10 wt. a copolymer comprising at least one sequence having a hydrophilic character and at least one sequence having a hydrophobic character, said sequence having a hydrophobic character comprising at least one structural unit of formula I.

Microspheres according to claim 4, characterized in that the sequence with the hydrophilic character of said copolymer is selected from the group consisting of poles (oxyethylene), poles (vinyl alcohol), poles (vinylpyrrolidone), poles (N-2-hydroxypropyl methacrylamide), poles (hydroxyethyl methacrylate). , hydrophilic poles (amino acids), especially polylysine, and a polysaccharide.

····

Microspheres according to claim 4 or 5, characterized in that said copolymer has a block structure, preferably a double or triple block structure or a graft structure.

♦ 0 * 0 · 0 • 0 0 0 ·· • 0 · 0 0 0 · * · 0 · 00

Microspheres according to one of Claims 1 to 6, characterized in that the carrier material is effectively dispersed, and optionally is a biologically active substance.

Microspheres according to any one of claims 1 to 7, characterized in that said dispersed substance is a peptide.

Microspheres according to any one of claims 1 to 8, characterized in that said dispersed substance is a protein.

Process for preparing microspheres according to any one of claims 1 to 9, characterized in that it comprises:

a) preparing a first solution of the aforementioned polymer or polymers forming the carrier material in a volatile organic solvent, optionally containing a surfactant,

b) preparing a second solution immiscible with the solution obtained in step a), optionally containing said substance

9999 to be dispersed and optionally a surfactant,

c) preparing a primary emulsion by dispersing said second solution in said first solution, wherein the continuous phase consists of a polymer solution or polymers,

(d) preparation of the secondary emulsion:

either by dispersing with stirring the primary emulsion obtained in step c) in a dispersing medium immiscible with said primary emulsion, said dispersing medium optionally comprising a stabilizing agent, or pouring under stirring into said primary emulsion a solution consisting of an immiscible medium with said primary emulsion, comprising a stabilizing agent, and evaporating said organic agent with stirring.

11. The process of claim 10, further comprising the step of displacing said organic solvent, wherein step e) is carried out between step d) and step e).

The method of claim 10 or 11, further comprising:

f) isolation of microspheres by centrifugation,

g) one or more subsequent washes of said microspheres; and

h) lyophilizing said microspheres.

····································· 99 99

A process according to any one of claims 10 to 12 wherein the surfactant used to prepare the primary emulsion is selected from the group consisting of poloxamers, polysorbates, polyvinyl alcohols and copolymers as defined in any one of claims 4 to 6.

14. A process according to any one of claims 10 to 13 wherein said stabilizing agent used to prepare the secondary emulsion is polyvinyl alcohol.

Pharmaceutical compositions for oral administration comprising microspheres as defined in any one of claims 1 to 9 or obtained by a process according to any one of claims 10 to 14.