CZ20004051A3 - Ester jako inhibitor sPLA2 - Google Patents

Abstract

N-Morfolinoethylester [(3-(2-amino-1,2-dioxoethyl)-2- methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, je popsán spolu sjeho použitímjako vysoce biologicky dostupný indolový inhibitor aPLA2.

Description

Oblast techniky

Poskytnutý vynález se vztahuje ke sloučenině inhibující sPLA₂ s vysokou biologickou dostupností.

Dosavadní stav techniky

Struktura a fyzikální vlastnosti lidské nepankreatické sekreční fosfolipázy A₂ (dále označované sPLA₂) byly podrobně popsány ve dvou článcích, konkrétně Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A₂ Present in Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid od autorů Seilhamer, J.

J., Pruzanski, W., Vadas Ρ., Plant S., Miller J. A., Kloss J. a Johnson L. K., The Journal of Biological Chemistry,

264 (10) , 5335 až 5338 (1989) a Structure and Properties of a Human Non-pancreatic Phospholipase A₂ autorů Kramer R.

Μ. , Hession C., Johansen Β., Hayes G., McGray Ρ., Chow E.

Ρ., Tizard R. a Pepinsky R. Β., The Journal of Biological Chemistry, 264 (10), 5768 až 5775 (1989), jejichž poznatky jsou zde zahrnuty odkazy.

Má se za to, že sPLA₂ je enzym limitující rychlost přeměny v kaskádě arachidonové kyseliny, která hydrolyzuje membránové fosfolipidy. Z tohoto důvodu je důležité vyvinout sloučeniny, které inhibují uvolňování mastných kyselin (např. arachidonové kyseliny) zprostředkované sPLA₂ a mají vysokou biologickou dostupnost u savců, zejména u člověka. Takové sloučeniny mají hodnotu v celkové léčbě stavů indukovaných a/nebo udržovaných nadbytečnou tvorbou sPLA₂, jako jsou septický šok, syndrom respirační nedostatečnosti u dospělých, pankreatitida, trauma, průduškové astma,

alergická rhinitida, revmatoidní atrhritida atd.

Léčivé látky, které lze podat orálně, jsou všeobecně významně preferovány a mají zvýšené obchodní možnosti pro jejich velmi snadné použití.

US patent č. 5 654 326 popisuje určité inhibitory sPL&2 indolového typu a související esterové prekurzory. Zejména tento patent uvádí příklad methylesteru [(3(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny.

Je žádoucí vyvinout více vysoce dostupných inhibitorů sPLA₂, a to zejména těch, které jsou vhodné pro orální podání.

Podstata vynálezu

Tímto vynálezem je nová sloučenina, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, který má vysokou biolologickou dostupnost po orálním podání.

Tímto vynálezem je farmaceutický přípravek obsahující N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl -1-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny v kombinaci s nosičem nebo ředidlem.

Podrobný popis vynálezu lH-Indol-3-glyoxylamidová sloučenina podle tohoto vynálezu:

4 ·

444 4444

Sloučenina podle tohoto vynálezu, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny je představována strukturním vzorcem (I)

N-Morfolinoethylester vzorce (I) je esterová forma známého inhibitoru sPLA₂ [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2methy1-1-(fenylmethy1)-1H-indol-4-y1)oxy]octové kyseliny představované dále uvedeným strukturním vzorcem (II)

HO.

o

(II)

Sloučenina vzorce (II) je popsána v příkladu 1 US patentu 5 654 326 (jehož popis je zde zahrnut v odkazech) a European Patent Application č. 95302166.4, Publication No.

675 110 (publ., 4. října 1995).

Při tomto vynálezu bylo zjištěno, že sloučenina vzorce (I) má vysokou biologickou dostupnost po orálním podání ve srovnání s jinými inhibitory sPLA₂·

Syntéza sloučeniny podle vynálezu:

Syntéza N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy ] octové kyseliny (sloučenina vzorce I, viz výše) používá jako výchozí látku [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octovou kyselinu nebo její sůl (sloučenina vzorce II, viz výše). Tuto výchozí látku lze připravit podle reakčních schématu nebo způsobem podle příkladu 1 z US patentu č. 5 654 326 (jehož objev je zde zahrnut v odkazech). Podobné způsoby jsou ukázány v European Patent Application č. 95302166.4, Publication No. 0 675 110 (publ.,

4. října 1995). Jiné konvenční způsoby lze rovněž použít pro přípravu této výchozí látky. Způsoby použitelné pro syntézu sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou specifikovány v příkladu 1, který je vysvětlen dále:

Příklad 1

Příprava N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, sloučeniny představované vzorcem:

• · · ·

Část A. Příprava N-terc.-butoxykarbony1-3-methoxy-2-methylanilinu

Roztok 44,4 g (344 mmol) 3-methoxy-2-methylanilinu a 75 g (344 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu ve 400 ml tetrahydrofuranu (THF) se udržuje pod zpětným tokem po dobu 4 hodin. Po zahuštění za sníženého tlaku se odparek rozpustí v ethylacetátu, promyje IN roztokem kyseliny citrónové, vodou a vysuší síranem hořečnatým. Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku se odparek krystalizuje z hexanu, aby se dostalo 64,5 g (výtěžnost 84%)

N-terc.-butoxykarbonyl-3-methoxy-2-methylanilinu, teplota tání 56 až 57 °C.

Analýza ^C13^H19^NO3^:

Vypočteno: C 65,80; H 8,07; N 5,90.

Nalezeno: C 63,32; H 7,83; N 5,56.

Část B. Příprava 4-methoxy-2-methyl-1H-indolu

Roztok 280 ml (0,36 mol) 1,3M sek-butyllithia v cyklohexanu se pomalu přidá do 43 g (0,18 mol) N-terc.-butoxykarbonyl-3-methoxy-2-methylanilinu v 300 ml THF za udržování teploty pod -40 °C v lázni suchého ledu a ethanolu. Pak se lázeň odstraní, aby teplota vzrostla na

-20 °C a poté se lázeň nahradí novou lázní. Poté, co teplota poklesne na -60 °C, přidá se po kapkách 18,5 g (0,18 mol) N-methoxy-N-methylglyoxylamidu ve stejném objemu tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny, potom se odstraní chladící lázeň a směs se míchá po dobu další 1 hodiny. Potom se vylije do směsi 600 ml etheru a 600 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí, promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, aby se dostalo 39,5 g směsi l-[2-(terc.-butoxykarbonylamino)-6-methoxyfenyl]-2-propanonu a výchozího anilidu. Tato směs se rozpustí ve 100 ml methylenchloridu a 40 ml trifluoroctové kyseliny a míchá po celkovou dobu 26 hodin. Směs se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, krystaluje ze směsi dičhlormethanu a hexanu aby se dostalo 13,9 g 4-methoxy-2-methyl-lH-indolu, teplota tání 80 až 86 °C.

Analýza C₁₀H_llNO:

Vypočteno: C 74,51; H 6,88; N 8,69.

Nalezeno: C 74,41; H 7,08; N 8,47.

Část C. Příprava 4-methoxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu g (6,2 mmol) 4-methoxy-2-methyl-lH-indolu se přidá k 248 mg (6,2 mmol) 60% hydridu sodného v minerálním oleji (promyje se hexanem před přidáním DMF) v 15 ml DMF a po míchání po dobu 0,5 hodiny se přidá 0,74 ml (6,2 mmol) benzylbromidu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin, zředí vodou a extrahuje ethylacetátem.

Ethylacetátový roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku.

• · • ·

Odparek se čistí chromatografií na silikagelu, eluuje se směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 1,3 g (84% výtěžek) 4-methoxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu, tajícího při teplotě 96 až 116 °C.

Analýza C₁₇H₁₇NO:

Vypočteno: C 81,24; H 6,82; N 5,57.

Nalezeno: C 81,33; H 6,74; K 5,29.

Část D. Příprava 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu

Roztok 1,25 g (5 mmol) 4-methoxy-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indolu a 20 ml IM bromidu boritého v dichlormethanu v 50 ml methylenchloridu se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v ethylacetátu, promyje roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Po odpaření za sníženého tlaku se odparek čistí chromatografií na silikagelu, při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 577 mg (49% výtěžek) 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lHindolu, tajícího při teplotě 125 až 127 °C.

Analýza C₁₆H₁₅NO:

Vypočteno: C 80,98; H 6,37; N 5,90.

Nalezeno: C 80,76; H 6,26; N 5,80.

Část E. Příprava methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)-lHindol-4-yl)oxy]octové kyseliny

530 mg (2,2 mmol) 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl) -ΙΗ-indolu se přidá do 88 mg (2,2 mmol) 60% hydridu sodného v minerálním oleji ve 20 ml DMF a směs se míchá po dobu 0,67 hodiny. Potom se přidá 0,21 ml (2,2 mmol) methylbromacetátu a míchá se po dobu 17 hodin. Směs se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu, při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 597 mg (88% výtěžek) methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, teplota tání 140 až 143 °C.

Analýza ^C19^H19^NO3^:

Vypočteno: C 73,77; H 6,19; N 4,53.

Nalezeno: C 74,01; H 6,23; K 4,32.

Část F. Příprava methylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

0,16 ml (1,9 mmol) oxalylchloridu se přidá do 582 mg (1,9 mmol) methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny v 10 ml methylenchloridu a směs se míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se odpaří za sníženého tlaku a odparek se výjme do 10 ml methylenchloridu. Nechá se probublávat parami bezvodého amoniaku po dobu 0,25 hodiny, potom se směs míchá po dobu 1,5 hodiny a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se míchá s 20 ml ethylacetátu a směs se zfiltruje. Filtrát se odpaří, aby se dostalo 672 mg směsi methylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl )-lH-indol-4-yl) oxy] octové kyseliny a chloridu amonného, teplota tání 202 až 215 °C.

Část G. Příprava [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Směs 660 mg (1,7 mmol) methylesteru [ (3-( 2-amino-1,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl) oxy]octové kyseliny a 10 ml IN roztoku hydroxidu sodného ve ml methanolu se zahřívá pod zpětným tokem po dobu 1 ·

- 9 hodiny, ochladí na teplotu místnosti a míchá po dobu 0,5 hodiny. Směs se odpaří za sníženého tlaku a odparek se převede do směsi ethylacetátu a vody. Vodná vrstva se oddělí, okyselí na pH 2 až 3 pomocí IN kyseliny chlorovodíkové a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se odpaří a krystalizací se dostane 431 mg (69% výtěžek) [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, tající při teplotě 218 až 220 °C.

Analýza ^C20^H18^N2°5^:

Vypočteno: C 65,57; H 4,95; N 7,65.

Nalezeno: C 63,31; H 4,79; N 6,91.

Část F. Příprava N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-1,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Sloučeninu, podle tohoto vynálezu lze připravit reakcí hydrochloridu 4-(2-chlorethyl)morfolinu (dostupný od Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA, položka č. C4,220-3) a vhodné báze, výhodně uhličitanu cesnatého, a sodné soli [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny vhodném rozpouštědle, výhodně dimethylformamidu. Řídká suspenze se zahřívá na teplotu 60 °C nebo jinou vhodnou teplotu dokud nevznikne roztok. Směs se zahřívá až do ukončení reakce. Reakční směs se zpracuje za použití konvenčních laboratorních způsobů používaných v organické chemii, aby se izoloval produkt.

Zkouška I

Pro jednodávkovou farmakokinetickou studii se použij φ φ

9 φ · φ · • · φ • · · · · · · · opice Cynomolgus. Opicím (3 na dávku) se podá jedna perorální dávka 10 mg/kg jedné ze šesti sloučenin, které jsou prekurzory, mezi nimi je zahrnuta i sloučenina, podle tohoto vynálezu.

Serie krevních vzorků se odebírá až do 24 hodin po podání dávky. Plasma se analyzuje na příslušnou volnou kyselinu za použití LC/MS metody. Spočítají se rovněž hodnoty plochy po křivkou (AUC) 8. a 24. hodinu.

Účelem této zkoušky je hodnotit a srovnat dostupnost zvolených inhibitorů sPLA₂ po orálním podání.

Předmět zkoušky:

Druh: Opice Kmen: Cynomolgus

Příprava dávky:

Množství inhibitoru sPLA₂ bylo korigováno na ekvivalenty volné kyseliny.

Nosič:

Suspenze inhibitoru sPLA₂ v 10% Acacia, připravená těsně před podáním dávky.

Podání dávky:

Cesta podání : Častost opakování: Dávka:

Objem dávky:

Orální

Jediná dávka 10 mg/kg (jako 5 ml/kg základní kyseliny) • · • · • fe <

» · · • fe.

• fefefe • · · fe · fefefefe fe «

Výsledky

Studie farmakokinetiky u opic

Tabulka 1

Sloučenina	cmax	T max	AUC	AUC
esterového	(ng/ml)	hodiny	(0 až 8 h)	(0 až 24
typu			ng.h/ml	ng.h/ml
1	1604	2,0	5131	5425
2	200	2,0	1356	2038
3	213	2,0	1277	1761
4	245	2,0	1675	3404
5	3296	2,0	11919	13161
6	615	3,3	—	8730

= N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = methylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = Ν,Ν-diethylglykolamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxo- . ethyl)-1-[(1,1'-bifenyl)-2-ylmethyl]-2-methyl-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = ethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethy1-1-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = methylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Zkouška II

Biologická dostupnost sloučeniny, podle tohoto vynálezu, N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2• ·

- 12 -dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, se určí rovněž využitím farmakokinetické studie u krys po jedné orální dávce:

Účelem této zkoušky je hodnotit a srovnat dostupnost zvolených inhibitorů sPLA₂ po orálním podání.

Předmět zkoušky:

Druh: Krysa Kmen: Fischer 344

Příprava dávky:

Množství inhibitoru sPLA₂ bylo korigováno na ekvivalenty volné kyseliny.

Nosič:

Suspenze inhibitoru sPLA₂ v 10% Acacia, připravená těsně před podáním dávky.

Podání dávky:

Cesta podání : Orální

Častost opakování: Jediná dávka

Dávka: 10 mg/kg (jako zákldní kyseliny)

Objem dávky: 5 ml/kg

Krysy se nechají přes noc vyhladovět.

Sběr vzorků:

Vzorky krve (0,8 ml) se odeberou v těchto časech: 0,5, 1, 2, 4, 6 a 8 hodin (2 krysy na jeden čas).

Analýza dat:

• ·

Plasma se analyzuje pomocí HPLC, aby se změřily koncentrace různých inhibitorů sPLA₂ (jako volné kyseliny). Hodnoty C_max (maximální plasmatická koncentrace) a AUC se určí z průměrných hodnot závislosti koncentrace na času.

Tabulka 2

Sloučenina	c max	AUC
esterového	(ng/ml)	(0 až 8 h
typu
11	1094	2400
12	79	385
13	258	1229
14	1199	2604
15	612	1504
16	259	1031

= N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny (sloučenina podle tohoto vynálezu) = Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl )-2-methyl-l-(1-fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny = Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-[(1-naftalenyl)methyl]-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-[(1-naftalenyl)methyl]-lH-indol-4-yl )oxyloctové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-[(3-chlorfenyl)methyl]-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny

= Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-[(3-chlorfenyl)methyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Ačkoli byl poskytnutý vynález zobrazen výše určitými specifickými ztělesněními, není úmyslem, aby tyto specifické příklady omezily rozsah tohoto vynálezu, jak je popsán v přiložených patentových nárocích.

„TY/oc# /,οΜ

Claims (2)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1.Sloučenina, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny.
2. 2. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 v kombinaci s farmaceuticky vhodným nosičem nebo ředidlem.